JP5907076B2 - リジン/アルギニン/オルニチントランスポーターをコードする遺伝子の弱化された発現を有する腸内細菌科の細菌を使用するl−アミノ酸の製造方法 - Google Patents
リジン/アルギニン/オルニチントランスポーターをコードする遺伝子の弱化された発現を有する腸内細菌科の細菌を使用するl−アミノ酸の製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5907076B2 JP5907076B2 JP2012554137A JP2012554137A JP5907076B2 JP 5907076 B2 JP5907076 B2 JP 5907076B2 JP 2012554137 A JP2012554137 A JP 2012554137A JP 2012554137 A JP2012554137 A JP 2012554137A JP 5907076 B2 JP5907076 B2 JP 5907076B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gene
- arginine
- lysine
- strain
- producing
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims description 71
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 title claims description 39
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 22
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 title claims description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title description 119
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 title description 37
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 title description 30
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 title description 25
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 25
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title description 20
- 108010024073 ornithine transporter Proteins 0.000 title description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 claims description 48
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 30
- RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N L-citrulline Chemical compound NC(=O)NCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O RHGKLRLOHDJJDR-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 26
- 229960002173 citrulline Drugs 0.000 claims description 23
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 22
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 claims description 20
- 229930064664 L-arginine Natural products 0.000 claims description 20
- 235000014852 L-arginine Nutrition 0.000 claims description 20
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 claims description 20
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 15
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 claims description 13
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims description 7
- 241000520272 Pantoea Species 0.000 claims description 6
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 54
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 24
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 24
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N Ndelta-carbamoyl-DL-ornithine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=O RHGKLRLOHDJJDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- 235000013477 citrulline Nutrition 0.000 description 20
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 19
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 18
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 14
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 14
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 13
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 13
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 13
- 101150118463 argG gene Proteins 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 10
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 10
- 101150100338 hisJ gene Proteins 0.000 description 10
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 10
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 10
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 9
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 8
- 101150064934 argT gene Proteins 0.000 description 8
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 8
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 8
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 7
- 101150074994 hisM gene Proteins 0.000 description 7
- 101150023777 hisP gene Proteins 0.000 description 7
- 101150063579 hisQ gene Proteins 0.000 description 7
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 7
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 7
- 108010006533 ATP-Binding Cassette Transporters Proteins 0.000 description 6
- 102000005416 ATP-Binding Cassette Transporters Human genes 0.000 description 6
- KDZOASGQNOPSCU-WDSKDSINSA-N Argininosuccinic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC\N=C(/N)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O KDZOASGQNOPSCU-WDSKDSINSA-N 0.000 description 6
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101150055766 cat gene Proteins 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 6
- 101100339280 Bacillus subtilis (strain 168) hisK gene Proteins 0.000 description 5
- 101100231135 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) hisI gene Proteins 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 5
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 5
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 5
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 5
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 5
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 5
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 5
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004485 Nonsense Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 4
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 4
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 4
- 101150056313 argF gene Proteins 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 4
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000037434 nonsense mutation Effects 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 4
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 4
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 102000007610 Amino-acid N-acetyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 108010032178 Amino-acid N-acetyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 101100096227 Bacteroides fragilis (strain 638R) argF' gene Proteins 0.000 description 3
- 241001646716 Escherichia coli K-12 Species 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010064711 Homoserine dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- 150000008545 L-lysines Chemical class 0.000 description 3
- 108090000301 Membrane transport proteins Proteins 0.000 description 3
- 102000003939 Membrane transport proteins Human genes 0.000 description 3
- 101100354186 Mycoplasma capricolum subsp. capricolum (strain California kid / ATCC 27343 / NCTC 10154) ptcA gene Proteins 0.000 description 3
- 102000007981 Ornithine carbamoyltransferase Human genes 0.000 description 3
- 101710113020 Ornithine transcarbamylase, mitochondrial Proteins 0.000 description 3
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 3
- 101150094408 argI gene Proteins 0.000 description 3
- 210000003578 bacterial chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 3
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 3
- 230000004907 flux Effects 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 101150035025 lysC gene Proteins 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N ninhydrin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C(O)(O)C(=O)C2=C1 FEMOMIGRRWSMCU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004816 paper chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 2
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 2
- 108010055400 Aspartate kinase Proteins 0.000 description 2
- 108010019485 Bacteria histidine permease Proteins 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000660147 Escherichia coli str. K-12 substr. MG1655 Species 0.000 description 2
- 241000701959 Escherichia virus Lambda Species 0.000 description 2
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930182844 L-isoleucine Natural products 0.000 description 2
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 2
- VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine Chemical compound O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O VZUNGTLZRAYYDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 102100034574 P protein Human genes 0.000 description 2
- 101710181008 P protein Proteins 0.000 description 2
- 241000588912 Pantoea agglomerans Species 0.000 description 2
- 241000588696 Pantoea ananatis Species 0.000 description 2
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 2
- 101710104378 Putative malate oxidoreductase [NAD] Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 2
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 2
- 230000001851 biosynthetic effect Effects 0.000 description 2
- 101150093586 clpA gene Proteins 0.000 description 2
- 101150074451 clpP gene Proteins 0.000 description 2
- 101150043719 clpP1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150102296 clpP2 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150096566 clpX gene Proteins 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 2
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 101150031239 xis gene Proteins 0.000 description 2
- -1 γ-methyllysine Chemical compound 0.000 description 2
- NZWPVDFOIUKVSJ-YFKPBYRVSA-N (2s)-2,6-diamino-n-hydroxyhexanamide Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)NO NZWPVDFOIUKVSJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OJJHFKVRJCQKLN-YFKPBYRVSA-N (4s)-4-acetamido-5-oxo-5-phosphonooxypentanoic acid Chemical compound OC(=O)CC[C@H](NC(=O)C)C(=O)OP(O)(O)=O OJJHFKVRJCQKLN-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- IJROUPFSQHMOBK-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-3-nitro-1-nitrosoguanidine 2-nitrosoguanidine Chemical compound NC(=N)NN=O.O=NN(C)C(=N)N[N+]([O-])=O IJROUPFSQHMOBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 1
- AKSIYNOQZYMJED-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4-(aminomethoxy)butanoic acid Chemical compound NCOCCC(N)C(O)=O AKSIYNOQZYMJED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NDXGCVGKTPQXFA-UHFFFAOYSA-N 3-chloroazepan-2-one Chemical compound ClC1CCCCNC1=O NDXGCVGKTPQXFA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091000044 4-hydroxy-tetrahydrodipicolinate synthase Proteins 0.000 description 1
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700021045 Acetylglutamate kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010049445 Acetylornithine transaminase Proteins 0.000 description 1
- 108700016171 Aspartate ammonia-lyases Proteins 0.000 description 1
- 108020004652 Aspartate-Semialdehyde Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 101000779368 Bacillus subtilis (strain 168) Aspartokinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101100462570 Bacillus subtilis (strain 168) bsdB gene Proteins 0.000 description 1
- JKMNNBOUBZALSD-UHFFFAOYSA-N CN(C(=N)N[N+](=O)[O-])N=O.NC(=N)N Chemical compound CN(C(=N)N[N+](=O)[O-])N=O.NC(=N)N JKMNNBOUBZALSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 241000131329 Carabidae Species 0.000 description 1
- 101710113083 Carbamoyl-phosphate synthase Proteins 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108030003594 Diaminopimelate decarboxylases Proteins 0.000 description 1
- 101100465553 Dictyostelium discoideum psmB6 gene Proteins 0.000 description 1
- 108010014468 Dihydrodipicolinate Reductase Proteins 0.000 description 1
- 241000588914 Enterobacter Species 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 101100400218 Escherichia coli (strain K12) lysO gene Proteins 0.000 description 1
- 101100529045 Escherichia coli (strain K12) rpnB gene Proteins 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 101100295959 Halobacterium salinarum (strain ATCC 700922 / JCM 11081 / NRC-1) arcB gene Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 108010061833 Integrases Proteins 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N L-arabinopyranose Chemical compound O[C@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-HWQSCIPKSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N L-thialysine Chemical compound NCCSC[C@H](N)C(O)=O GHSJKUNUIHUPDF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 description 1
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 description 1
- 108010048581 Lysine decarboxylase Proteins 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000588771 Morganella <proteobacterium> Species 0.000 description 1
- 102000000818 NADP Transhydrogenases Human genes 0.000 description 1
- 108010001609 NADP Transhydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000932831 Pantoea stewartii Species 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010090127 Periplasmic Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010092494 Periplasmic binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091000041 Phosphoenolpyruvate Carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 241001148062 Photorhabdus Species 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000588768 Providencia Species 0.000 description 1
- 101100217185 Pseudomonas aeruginosa (strain ATCC 15692 / DSM 22644 / CIP 104116 / JCM 14847 / LMG 12228 / 1C / PRS 101 / PAO1) aruC gene Proteins 0.000 description 1
- 101100169519 Pyrococcus abyssi (strain GE5 / Orsay) dapAL gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108020005091 Replication Origin Proteins 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000607720 Serratia Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 101100022072 Sulfolobus acidocaldarius (strain ATCC 33909 / DSM 639 / JCM 8929 / NBRC 15157 / NCIMB 11770) lysJ gene Proteins 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 239000000362 adenosine triphosphatase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N aldehydo-D-glucose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 101150072344 argA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150008194 argB gene Proteins 0.000 description 1
- 101150070427 argC gene Proteins 0.000 description 1
- 101150089042 argC2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150050866 argD gene Proteins 0.000 description 1
- 101150029940 argJ gene Proteins 0.000 description 1
- 230000037429 base substitution Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 101150011371 dapA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150073654 dapB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 108010056578 diaminopimelate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 108010055246 excisionase Proteins 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037433 frameshift Effects 0.000 description 1
- 108010050322 glutamate acetyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 108010047800 histidine-binding protein Proteins 0.000 description 1
- 235000003642 hunger Nutrition 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 101150095957 ilvA gene Proteins 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 101150062334 int gene Proteins 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 101150033534 lysA gene Proteins 0.000 description 1
- 101150094164 lysY gene Proteins 0.000 description 1
- 101150039489 lysZ gene Proteins 0.000 description 1
- 229940099596 manganese sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000011702 manganese sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000007079 manganese sulphate Nutrition 0.000 description 1
- SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate Chemical compound [Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O SQQMAOCOWKFBNP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000005374 membrane filtration Methods 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 125000000018 nitroso group Chemical group N(=O)* 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000001322 periplasm Anatomy 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 101150000475 pntAB gene Proteins 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000004853 protein function Effects 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 238000000575 proteomic method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000002741 site-directed mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000037351 starvation Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 101150003433 ubiX gene Proteins 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/10—Citrulline; Arginine; Ornithine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/245—Escherichia (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
Pにより構成されている。この複合体は、可溶性受容体及びペリプラズムに局在するヒスチジン結合タンパク質であるHisJによる活性の誘導の際にATPを加水分解する。ヌクレオチド結合成分は、内在性膜成分であるHisQ及びHisMから解離し得ることが明らかとなっている。この複合体は、HisPを欠失させたHisQ及びHisMを含む膜、及び純粋な可溶性のHisPを用いて再構成することができる。HisPは、HisPを欠失させた複合体、すなわちHisQMに対して高い親和性を有することが明らかとなっており、2つのHisP分子は互いに独立に各HisQMユニットに補給される。in vitroで再会合された複合体は、完全に正常な性質を有し、可溶性のHisPの特性とは異なり、本来の複合体と同一の特性でHisJ及びATPアーゼ阻害剤に応答する。これらの結果は、HisPはATPの加水分解に絶対的に必要であり、HisQMはATPを加水分解することができず、HisPはHisQMに依存して可溶性受容体HisJからの誘導シグナルを中継し、HisQMはHisPのATPアーゼ活性を調節することを示す。また、HisPは、リン脂質に曝露された際に構造(conformation)を変化させることも示されている(非特許文献3)。
ここに開示する主題に基づく細菌は、ジアミノモノカルボン酸等のL-アミノ酸を生産することのできる腸内細菌科の細菌であって、リジン/アルギニン/オルニチントランスポーターをコードする1またはそれ以上の遺伝子の発現が弱化されるように改変された細菌である。
g/L以上の量で、培地中への標的L-アミノ酸の蓄積を引き起こすことができることを意味してもよい。
。
coli株K-12の染色体上でhisJと同一の方向に配向している)。hisJ遺伝子の塩基配列及びhisJ遺伝子によってコードされるHisJのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号3及び配列番号4に示す。
る(両遺伝子は、E. coli株K-12の染色体上でhisPと同一の方向に配向している)。hisP遺伝子の塩基配列及びhisP遺伝子によってコードされるHisPのアミノ酸配列を、それぞれ配列番号9及び配列番号10に示す。
J. Antimicrob. Chemother., 46, 793-796 (2000))。argT-hisJQMPクラスターの遺伝子の発現は、各遺伝子の、プロモーターやシャイン-ダルガルノ(SD)配列等の発現調節配列を改変することによっても弱化させることができる(WO95/34672; Carrier, T. A. and
Keasling, J. D., Biotechnol Prog 15, 58-64 (1999))。
A Laboratory Manual, Second Edition", Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)に記載されている。
リジン/アルギニン/オルニチントランスポーターをコードする1またはそれ以上の遺伝子の発現が弱化された細菌は、ジアミノモノカルボン酸等のL-アミノ酸を生産することのできる細菌であってよく、ここに開示する主題に基づく方法において使用することができる。
Escherichia属に属するL-リジン生産細菌又は親株としては、L-リジンアナログに対する耐性を有する変異体が挙げられる。L-リジンアナログは、Escherichia属に属する細菌の生育を阻害するが、培地中にL-リジンが存在する場合、この阻害は完全に又は部分的に脱感作される。L-リジンアナログとしては、限定されるものではないが、オキサリジン、リジンハイドロキサメート、S-(2-アミノエチル)-L-システイン(AEC)、γ‐メチルリジン、α‐クロロカプロラクタム等が挙げられる。これらのリジンアナログに対する耐性を有する変異体は、Escherichia属に属する細菌を従来の人工的な変異誘発処理に供することによって得ることができる。L-リジンを製造するのに有用な細菌株としては、特に、Escherichia coli AJ11442 (FERM BP-1543, NRRL B-12185;米国特許第4,346,170号参照)及びEscherichia coli VL611が挙げられる。これらの微生物においては、L-リジンによるアスパルトキナーゼのフィードバック阻害が脱感作されている。
L-アルギニンを生産することができる細菌を誘導するのに使用することができる親株としては、限定されるものではないが、E. coli 237株 (VKPM B-7925)(米国特許出願第2002/058315A1号)及び変異型N-アセチルグルタミン酸合成酵素を保有するその誘導体株(ロシア連邦特許出願第2001112869号)、E. coli 382株 (VKPM B-7926)(EP1170358A1)、ならびにN-アセチルグルタミン酸合成酵素をコードするargA遺伝子が導入されたアルギニン
生産株(EP1170361A1)等のEscherichia属に属する株が挙げられる。
L-シトルリン生産細菌、又はシトルリンを生産することのできる細菌を誘導するのに使用することのできる親株としては、限定されるものではないが、E. coliの変異型N-アセチルグルタミン酸合成酵素株である237/pMADS11、237/pMADS12及び237pMADS13(RU2215783, EP1170361B1, US6790647B2)等のEscherichia属に属する株が挙げられる。
g 15, 58-64 (1999))。
オルニチンを生産することのできる細菌は、いずれかのアルギニン生産細菌、例えば、E. coli 382株(VKPM B-7296)から、argF及びargIの両遺伝子によりコードされるオルニチンカルバモイルトランスフェラーゼを不活化させることにより容易に取得することができる。オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼの不活化は、上記と同様の手法で行うことができる。
ここに開示した主題に基づく例示的な方法には、細菌を培地中で培養して、L-アミノ酸を生産して培地中に分泌させ、培地からL-アミノ酸を回収することによるL-アミノ酸の製造が含まれる。
1.argT-hisJQMPクラスターの欠失
argT-hisJQMPクラスターを欠失した株は、Datsenko, K. A.とWanner, B. L. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97(12), 6640-6645)によって最初に開発された「Redドリブンインテグレーション(Red-driven integration)」と呼ばれる方法により構築した。プライマーP1(配列番号11)及びP2(配列番号12)、並びにテンプレートとしてプラスミドpMW118-attL-Cm-attR(WO05/010175)を使用し、cat遺伝子によりコードされるCmRマーカーを含むDNA断片をPCRにより取得した。プライマーP1は、argT遺伝子の5'末端に位置する領域に相補的な領域及びattR領域に相補的な領域の両方を含む。プライマーP2は、hisP遺伝子の3'末端に位置する領域に相補的な領域及びattL領域に相補的な領域の両方を含む。PCRの条件は次の通りである:95℃で3分の変性工程;2回の第1のサイクルのプロフィール:95℃で1分、50℃で30秒、72℃で40秒;最後の25サイクルのプロフィール:95℃で30秒、54℃で30秒、72℃で40秒;最後の工程:72℃で5分。
argT-hisJQMPクラスターを欠失しCm耐性遺伝子で標識された組換え体を、PCRによって検証した。部位特異的(locus-specific)プライマーP3(配列番号13)及びP4(配列番
号14)を検証のためのPCRで使用した。PCRによる検証の条件は次の通りである:94℃で3分の変性工程;30サイクルのプロフィール:94℃で30秒、54℃で30秒、72℃で1分;最後の工程:72℃で7分。組換え株の細胞をテンプレートとして用いた反応で取得したPCR産物は、1650bpの長さであった。組換え株を、MG1655ΔargT-hisJQMP::catと命名した。
L-アルギニン生産におけるargT-hisJQMPクラスターの不活化の効果を試験するために、上記のE. coli MG1655ΔargT-hisP::catの染色体由来のDNA断片を、E. coliアルギニン生産株382にP1トランスダクション(Miller, J. H. Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1972, Plainview, NY)によって導入し、382ΔargT-hisP株を得た。382株は、Russian National Collection of Industrial Microorganisms (VKPM) (Russia, 117545 Moscow, 1 Dorozhny proezd, 1)に2000年4月10日に受託番号VKPM B-7926の下で寄託され、その後、2001年5月18日にブダペスト条約に基づく寄託に移管された。
グルコース 48.0
(NH4)2SO4 35.0
KH2PO4 2.0
MgSO4・7H2O 1.0
チアミンHCl 0.0002
酵母エキス 1.0
L-イソロイシン 0.1
CaCO3 5.0
グルコース及び硫酸マグネシウムは別々に滅菌した。CaCO3は、180℃で2時間乾熱滅菌した。pHは7.0に調整した。
リジン生産におけるargT-hisJQMPクラスターの不活化の効果を試験するために、上記のE. coli MG1655ΔargT-hisP::cat株の染色体由来のDNA断片を、E. coliリジン生産株AJ11442にP1トランスダクション(Miller, J. H. Experiments in Molecular Genetics, Cold
Spring Harbor Lab. Press, 1972, Plainview, NY)によって導入し、AJ11442ΔargT-hisP株を得ることができる。AJ11442株は、工業技術院生命工学工業技術研究所(現、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター、日本国茨城県つくば市東1丁目1番地1 中央第6 (郵便番号305-8566))に1981年5月1日に寄託され、FERM P-5084の受託番号が付与された。その後、同株は、1987年10月29日に、ブダペスト条約に基づく国際寄託に移管され、FERM BP-1543の受託番号が付与された。
グルコース 40
(NH4)2SO4 24
K2HPO4 1.0
MgSO4・7H2O 1.0
FeSO4・7H2O 0.01
MnSO4・5H2O 0.01
酵母エキス 2.0
pHをKOHにより7.0に調整し、115℃で10分間培地をオートクレーブする。グルコース及びMgSO4・7H2Oは別々に滅菌する。CaCO3は、180℃で2時間乾熱滅菌し、終濃度30g/lで培地に添加する。
シトルリン生産におけるargT-hisJQMPクラスターの不活化の効果を試験するために、シトルリン生産株382ilvA+ΔargGを以下のように構築した。
の両方を含む。PCRの条件は次の通りである:95℃で3分の変性工程;2回の第1のサイクルのプロフィール:95℃で1分、50℃で30秒、72℃で40秒;最後の25サイクルのプロフィール:95℃で30秒、54℃で30秒、72℃で40秒;最後の工程:72℃で5分。
Genetics, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1972, Plainview, NY)によって導入し、382ilvA+ΔargGΔargT-hisP株を得た。
多い量のLシトルリンを生産した。
グルコース 48.0
(NH4)2SO4 35.0
KH2PO4 2.0
MgSO4・7H2O 1.0
チアミンHCl 0.0002
酵母エキス 1.0
L-アルギニン 0.1
CaCO3 5.0
グルコース及び硫酸マグネシウムは別々に滅菌する。CaCO3は、180℃で2時間乾熱滅菌する。pHは7.0に調整する。
オルニチン生産におけるargT-hisJQMPクラスターの不活化の効果を試験するために、上記のE. coli株MG1655ΔargT-hisP::catの染色体由来のDNA断片を、E. coliのオルニチン生産株382ΔargFΔargIにP1トランスダクション(Miller, J. H. Experiments in Molecular Genetics, Cold Spring Harbor Lab. Press, 1972, Plainview, NY)によって導入し、382ΔargFΔargIΔargT-hisP株を得ることができる。382ΔargFΔargI株は、Datsenko,
K. A.とWanner, B. L. (Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2000, 97(12), 6640-6645)によって最初に開発された「Redドリブンインテグレーション(Red-driven integration)」と呼ばれる方法によって、382株(VKPM B-7926)の染色体上のargF及びargI遺伝子を順次欠損させることにより取得することができる。この手順に従い、argF又はargI遺伝子に隣接する領域及びテンプレートプラスミド内の抗生物質耐性を与える遺伝子の両者に相同な2対のPCRプライマーを構築することができる。プラスミドpMW118-attL-Cm-attR(WO05/010175)をPCR反応におけるテンプレートとして使用することができる。
グルコース 48.0
(NH4)2SO4 35.0
KH2PO4 2.0
MgSO4・7H2O 1.0
チアミンHCl 0.0002
酵母エキス 1.0
L-イソロイシン 0.1
L-アルギニン 0.1
CaCO3 5.0
グルコース及び硫酸マグネシウムは別々に滅菌する。CaCO3は、180℃で2時間乾熱滅菌する。pHは7.0に調整する。
Claims (6)
- L-アミノ酸を製造する方法であって、
腸内細菌科のL-アミノ酸生産細菌を培地中で培養すること、および
前記L-アミノ酸を培地から回収すること、
を含み、
前記細菌が、argT-hisJQMPクラスターを欠失している、方法。 - 前記細菌が、エシェリヒア(Escherichia)属に属する、請求項1に記載の方法。
- 前記細菌が、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli)である、請求項2に記載の方法。
- 前記細菌が、パントエア(Pantoea)属に属する、請求項1に記載の方法。
- 前記L-アミノ酸が、ジアミノモノカルボン酸である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の方法。
- 前記ジアミノモノカルボン酸が、L-リジン、L-アルギニン、L-オルニチン、及びL-シトルリンからなる群より選択される、請求項5に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU2010122646 | 2010-06-03 | ||
RU2010122646/10A RU2010122646A (ru) | 2010-06-03 | 2010-06-03 | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина |
PCT/JP2011/063304 WO2011152568A1 (en) | 2010-06-03 | 2011-06-03 | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the enterobacteriaceae family, having attenuated expression of genes encoding a lysine/arginine/ornithine transporter |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2013529890A JP2013529890A (ja) | 2013-07-25 |
JP5907076B2 true JP5907076B2 (ja) | 2016-04-20 |
Family
ID=44584713
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012554137A Active JP5907076B2 (ja) | 2010-06-03 | 2011-06-03 | リジン/アルギニン/オルニチントランスポーターをコードする遺伝子の弱化された発現を有する腸内細菌科の細菌を使用するl−アミノ酸の製造方法 |
Country Status (6)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20130078681A1 (ja) |
EP (1) | EP2576601B1 (ja) |
JP (1) | JP5907076B2 (ja) |
BR (1) | BR112012030551B1 (ja) |
RU (1) | RU2010122646A (ja) |
WO (1) | WO2011152568A1 (ja) |
Families Citing this family (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2013154182A1 (ja) * | 2012-04-13 | 2013-10-17 | 協和発酵バイオ株式会社 | アミノ酸の製造法 |
RU2013118637A (ru) * | 2013-04-23 | 2014-10-27 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK |
RU2013147882A (ru) | 2013-10-28 | 2015-05-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕН ПУТЬ ДЕГРАДАЦИИ ПУТРЕСЦИНА |
WO2020138178A1 (en) * | 2018-12-27 | 2020-07-02 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing basic l-amino acids or salts thereof by fermentation of an enterobacteriaceae bacterium |
CN112280728B (zh) * | 2020-11-16 | 2022-04-08 | 天津科技大学 | 一种生产l-瓜氨酸的基因工程菌株及其应用 |
Family Cites Families (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US1058315A (en) | 1910-04-28 | 1913-04-08 | Ralph R Mabie | Machine for waterproofing roofs, floors, &c. |
SU875663A1 (ru) | 1978-06-30 | 1982-09-15 | Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов | Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени |
JPS5618596A (en) | 1979-07-23 | 1981-02-21 | Ajinomoto Co Inc | Production of l-lysine through fermentation process |
JPH03501682A (ja) | 1988-10-25 | 1991-04-18 | 味の素株式会社 | L‐トレオニン生産者としてのエシェリキア・コリbkiim b‐3996菌株 |
JPH07108228B2 (ja) | 1990-10-15 | 1995-11-22 | 味の素株式会社 | 温度感受性プラスミド |
US5661012A (en) | 1992-11-10 | 1997-08-26 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for the production of L-threonine by fermentation, using mutated DNA encoding aspartokinase III |
US5830716A (en) | 1993-10-28 | 1998-11-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Increased amounts of substances by modifying a microorganism to increase production of NADPH from NADH |
JPH07155184A (ja) | 1993-12-08 | 1995-06-20 | Ajinomoto Co Inc | 発酵法によるl−リジンの製造法 |
BR9508022A (pt) | 1994-06-14 | 2002-05-21 | Ajinomoto Kk | Bactéria corineforme produtora de ácido l-glutâmico, processo para produzir ácido l-glutâmico, gene codificando para uma enzima, dna recombinante, bactéria corineforme, e, processo para produzir l-lisina |
SK283478B6 (sk) | 1994-12-09 | 2003-08-05 | Ajinomoto Co., Inc. | Gén, ktorý kóduje lyzínovú dekarboxylázu, mikroorganizmus a spôsob výroby L-lyzínu |
JP2000262288A (ja) | 1999-03-16 | 2000-09-26 | Ajinomoto Co Inc | コリネ型細菌の温度感受性プラスミド |
MXPA02007154A (es) | 2000-01-21 | 2004-09-06 | Ajinomoto Kk | Procedimiento para producir l-lisina. |
RU2215783C2 (ru) | 2001-05-15 | 2003-11-10 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото - Генетика" | МУТАНТНАЯ N-АЦЕТИЛГЛУТАМАТ СИНТАЗА (ВАРИАНТЫ), ФРАГМЕНТ ДНК, ШТАММ БАКТЕРИИ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ АРГИНИНА (ВАРИАНТЫ) И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА |
JP4682454B2 (ja) | 2000-06-28 | 2011-05-11 | 味の素株式会社 | 新規変異型n−アセチルグルタミン酸合成酵素及びl−アルギニンの製造法 |
JP4380029B2 (ja) | 2000-07-05 | 2009-12-09 | 味の素株式会社 | 微生物を利用した物質の製造法 |
RU2208640C2 (ru) | 2000-07-06 | 2003-07-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА, ШТАММ Escherichia coli - ПРОДУЦЕНТ L-АРГИНИНА |
WO2005010175A1 (en) | 2003-07-29 | 2005-02-03 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing l-lysine or l-threonine using escherichia bacteria having attnuated malic enzyme activity |
ES2331956T3 (es) | 2004-01-30 | 2010-01-21 | Ajinomoto Co., Inc. | Microorganismo que produce l-aminoacidos y procedimiento para producir l-aminoacidos. |
RU2008148283A (ru) * | 2008-12-09 | 2010-06-20 | Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА artI |
-
2010
- 2010-06-03 RU RU2010122646/10A patent/RU2010122646A/ru not_active Application Discontinuation
-
2011
- 2011-06-03 EP EP11727557.8A patent/EP2576601B1/en active Active
- 2011-06-03 JP JP2012554137A patent/JP5907076B2/ja active Active
- 2011-06-03 WO PCT/JP2011/063304 patent/WO2011152568A1/en active Application Filing
- 2011-06-03 BR BR112012030551-4A patent/BR112012030551B1/pt active IP Right Grant
-
2012
- 2012-11-28 US US13/687,353 patent/US20130078681A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
BR112012030551A2 (pt) | 2016-11-01 |
WO2011152568A8 (en) | 2012-11-01 |
RU2010122646A (ru) | 2011-12-10 |
JP2013529890A (ja) | 2013-07-25 |
EP2576601A1 (en) | 2013-04-10 |
EP2576601B1 (en) | 2016-11-23 |
US20130078681A1 (en) | 2013-03-28 |
BR112012030551B1 (pt) | 2020-12-08 |
WO2011152568A1 (en) | 2011-12-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US9051591B2 (en) | Bacterium of enterobacteriaceae family producing L-aspartic acid or L-aspartic acid-derived metabolites and a method for producing L-aspartic acid or L-aspartic acid-derived metabolites | |
EP1963486B1 (en) | L-amino acid producing bacterium and method of producing l-amino acid | |
WO2006078039A1 (en) | L-amino acid producing microorganism and a method for producing l-amino acid | |
JP6011545B2 (ja) | コリネ型細菌を使用する、グルタミン酸族に属するl−アミノ酸の製造方法 | |
WO2008075483A1 (ja) | L-アミノ酸の製造法 | |
US8647838B2 (en) | Method for producing L-arginine using a bacterium of enterobacteriaceae family, having attenuated expression of a gene encoding an L-arginine transporter | |
EP2089528B1 (en) | A method for producing an l-amino acid using a bacterium of the genus escherichia with attenuated expression of any of the cynt, cyns, cynx or cynr genes or a combination thereof | |
JP5907076B2 (ja) | リジン/アルギニン/オルニチントランスポーターをコードする遺伝子の弱化された発現を有する腸内細菌科の細菌を使用するl−アミノ酸の製造方法 | |
CN106191146B (zh) | 使用具有减弱的gshA基因表达的肠肝菌科细菌生产L-氨基酸的方法 | |
JP5846128B2 (ja) | ペプチダーゼをコードする遺伝子の弱化された発現を有する腸内細菌科の細菌を使用するl−アミノ酸の製造方法 | |
CN109121422B (zh) | 使用过表达编码铁输出蛋白基因的肠杆菌科的细菌生产l-氨基酸的方法 | |
JP2020115860A (ja) | L−アミノ酸の製造法 | |
WO2007037459A1 (en) | An l-amino acid-producing bacterium and a method for producing l-amino acids | |
JP7491314B2 (ja) | ydiJ遺伝子を過剰発現する腸内細菌科に属する細菌を用いたL-アミノ酸の製造方法 | |
RU2468083C1 (ru) | Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина | |
JP6210162B2 (ja) | プトレシン分解経路が破壊された腸内細菌科の細菌を使用するl−アミノ酸の製造方法 | |
US11999983B2 (en) | Method for producing basic L-amino acids or salts thereof by fermentation of an Enterobacteriaceae bacterium | |
JP4483213B2 (ja) | 発酵法による目的物質の製造法 | |
RU2418064C2 (ru) | СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ СЕМЕЙСТВА ГЛУТАМАТА ИЛИ L-ВАЛИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20140325 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20150526 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20150722 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20151104 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20160128 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20160205 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20160223 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20160307 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5907076 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |