JP5768252B2 - 抗脂血及び内臓脂肪予防食品 - Google Patents
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Description
ジャポニカ米である金南風の受精卵細胞をN−メチル−N−ニトロソウレア(MNU)で処理して変異させたwx米EM21(GBSSI欠損株:Satoh and Omura (1979)らの方法による)と、ae米EM16(BEIIb欠損株)を交配して、ダブルミュータントwx/ae株であるAMF18株を得た。この株を大阪府立大学内にて栽培し、開花後30日後に収穫した。また、コントロールとして、野生種(WT米)の金南風、wx米であるEM21を用いた。これらの米を脱穀し玄米とし、その後試験用精米器にて精米し、重量精米歩合90%以下でぬかを取り去って精白米を得た。その後粉砕して米粉末を得た。
アミロペクチン側鎖のグルコース重合度を次の方法にて測定した(非特許文献1参照)。O'Shea とMorellの方法(1996)に順じ、上記で得た精製デンプンをシュードモナス属の菌から得られたイソアミラーゼによってアミロペクチンを分解し、それを8−アミノ1,3,6−ピレントリスルホン酸(8-amino-1,3,6-pyrentrisulfonic acid:APTS)でラベルした。次に、ABI PRISM 310 Genetic Analyzer(Applied Biosystems社製)によるキャピラリー電気泳動を行った。電気泳動は、POP-4ポリマーカラム(36cm長)を用いGenetic Analyzer Buffer(Applied Biosystems社製)を用いて、15kV60分間行った。Gene Scan ソフトウェア(Applied Biosystems社製)を用いてデータを解析して、各アミロペクチン側鎖のグルコース重合度(DP)を算出した。各アミロペクチン側鎖のグルコース重合度(DP)のピーク値を重合度3〜35の総面積に対するピーク面積比(%)として表した。その結果を図1(a)に示す。また、図1(b)に、変異体米(wx/ae変異体米とwx変異体米)のピーク面積比と野生種のピーク面積比の差をグルコース重合度(DP)ごとに示した。
デンプン粒の結晶様構造を調べた。精製デンプンをヨウ素染色し、偏光顕微鏡及び光学顕微鏡による観察を行った。その顕微鏡画像を図2に示す。
精白米を粉砕し、Laemli(1970)の方法に準じて精白米から抽出したタンパク質をSDS-PAGE法で分離した後、ウエスタンブロット解析を行った。抗体には、抗イネGBSSI抗体及び抗イネBEIIb抗体(両抗体とも秋田県立大学・中村保典教授より供与)を用いた。ホースラディッシュ・パーオキシダーゼ検出試薬(Biorad社製)を用いて検出を行った。その結果を図3に示す。
精白米、玄米粉、精製デンプンを用いて糊化特性を調べた。精白米は3粒を1.2倍量(容積比)の水で膨潤させたものを試料とした。また、玄米粉及び精製デンプンは各40mgをそれぞれ水0.16mLに懸濁したものを試料とした。これらの試料について示差走査熱量測定器(Micro DSC VII、Setaram社製)にて測定を行った。測定条件は、20℃(30分保持)→105℃(20分保持)→20℃(10分保持)、昇温/降温速度0.5℃/分である。その結果を図4に示す。
得られた精製デンプンを用いて老化特性を調べた。40mgの精製デンプンを水0.16mLに懸濁して試料とした。試料を示差走査熱量測定器(Micro DSC VII、Setaram社製)にて測定を行った。測定条件は、20℃(30分保持)→105℃(20分保持)→5℃(24時間又は72時間保持)、昇温/降温速度0.5℃/分である。その結果を図5に示す。
各精製デンプンを用いて粘度測定器(RVA Super3、Newport Scientific社製)による粘度測定を行った。10w/w%の精製デンプン溶液を試料として用いた。RVAとは、デンプンのスラリーを任意の温度条件で加熱、あるいは冷却、あるいは保持させて、測定容器内の羽根に加わるデンプン糊液の抵抗を測定する装置である。測定条件は、35℃(1分保持)→95℃(10分保持)→50℃(1分保持)、昇温/降温速度5℃/分、回転速度160rpmである。その結果を図6に示す。
米デンプン添加食による中性脂肪抑制効果について調べた。試験には、ヒトの高脂血症・動脈硬化症の機序、予防及び治療法に関する研究に広く用いられている、これら病態モデル動物であるApoE欠損マウスを用いた。ApoE欠損マウスは、血漿リポタンパクの主要な構成要素であり、脂質およびリポタンパク代謝に重要な役割を果たすApoE遺伝子が全く発現しないことから、ヒト家族性III型高リポ蛋白血症と特に似た自然発生性高脂血症を発症する。
米粉添加食による中性脂肪抑制効果について調べた。試験は、上記米デンプンに変えて精白米の粉砕物を用いた他は、米デンプン添加食による場合と同じ条件で行った。この試験においては、血中脂肪の濃度推移の測定に変えて、肝臓の細胞切片の顕微鏡観察による画像を図14に示した。
米粉添加食による中性脂肪抑制効果について調べた。試験は、上記米デンプンに変えてwx/ae米玄米、wx/ae米精白米、WT米玄米の各粉砕物を用いた他は、米デンプン添加食による場合と同じ条件で行い、血中脂肪濃度の変化を調べた。飼育期間は42日間とし、7日、42日経過後に血液中の脂肪濃度を測定した。玄米粉添加食で飼育したApoE-/-マウスの血中中性脂肪濃度の推移を図15に示す。WT米玄米を摂取させた場合には血中中性脂肪濃度には変化が見られなかったが、wx/ae米玄米やwx/ae米精白米を投与した場合にはそれぞれ血中中性脂肪濃度の減少が観察された。wx/ae米の玄米も、高脂肪食の摂取による血中脂肪量の増加を抑制する効果及び脂肪蓄積を防止する効果があると言える。
Claims (6)
- アミロースを含まず、アミロペクチン側鎖のグルコース重合度の分布ピークが13〜15に位置するアミロペクチンを含む米及び/又はアミロペクチン側鎖のグルコース重合度の分布ピークが13〜15に位置するアミロペクチンからなるデンプンの、脂肪蓄積抑制用組成物の製造のための使用。
- 前記脂肪蓄積抑制用組成物は、高脂肪食の摂取に際して摂取される請求項1に記載の使用。
- アミロースを含まず、アミロペクチン側鎖のグルコース重合度の分布ピークが13〜15に位置するアミロペクチンを含む米及び/又はアミロペクチン側鎖のグルコース重合度の分布ピークが13〜15に位置するアミロペクチンからなるデンプンの、血液中の中性脂肪抑制用組成物の製造のための使用。
- 前記血液中の中性脂肪抑制用組成物は、高脂肪食の摂取に際して摂取される請求項3に記載の使用。
- グルコース重合度が12以上であるアミロペクチン側鎖が、全アミロペクチン側鎖の65%以上である請求項1〜4の何れか1項に記載の使用。
- 前記米は野生種のうるち米からアミロース合成酵素I(GBSSI)及びアミロペクチン枝作り酵素IIb(BEIIb)を欠損したwx/ae米又は前記デンプンは当該米から得られるデンプンである請求項1〜5の何れか1項に記載の使用。
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