JP5738285B2 - 再使用可能なクロマトグラフィー装置の特徴決定方法 - Google Patents
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Description
今日、薬剤において使用されるほぼすべてのポリペプチドは組み換えで調製される。厳しい規制指針および要求のため、副産物は治療用ポリペプチド調製物からできる限り除去されなければならない。従って、組み換え生産後の大量の未処理ポリペプチドの下流の加工において、少なくとも1つのクロマトグラフィー段階が使用される。発酵工程の収量に対するクロマトグラフィー装置の大きさ、特にクロマトグラフィーカラムの分離能力が限定されるため、必要量の精製された治療用ポリペプチドを提供することができるように多数のバッチが加工処理されなければならない。
a)該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを同定および測定する段階、
b)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階、
e)段階d)において算出された差の絶対値が0.1より大きい時、該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物の低下した分離効力を判定する段階、
ここで、式Iの関数は
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴う。
a)該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを同定および測定する段階、
b)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階、
ここで、式Iの関数は
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴い、かつ
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05もしくはそれより小さい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物をさらに使用する段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05より大きいが0.2より小さい時、精製されたポリペプチドの追加的な特徴決定を行う段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.2もしくはそれより大きい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を交換する段階。
[本発明1001]
ポリペプチドの精製の精製段階において少なくとも2度目に使用される再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物が、該ポリペプチドの該精製の該精製段階において低下した分離効力を有するか否かを判定するための方法であって、
a)少なくとも2度目の使用の該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを同定および測定する段階、
b)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階、
e)段階d)において算出された差の絶対値が0.1より大きい時、該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物の低下した分離効力を判定する段階
を含むことを特徴し、
ここで、式Iの関数が
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、かつ
を伴う、方法。
[本発明1002]
再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を用いる少なくとも1つのクロマトグラフィー段階が含有される、ポリペプチドのクロマトグラフィー精製のための方法であって、
a)少なくとも2度目の使用の該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを同定および測定する段階、
b)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階
を含むことを特徴とし、
ここで、式Iの関数が
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴い、ならびに
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05もしくはそれより小さい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物をさらに使用する段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05より大きいが0.2より小さい時、精製されたポリペプチドの追加的な特徴決定および/もしくは評価を行う段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.2もしくはそれより大きい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を交換する段階
を含む、方法。
[本発明1003]
再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化が、再使用可能なカラム充填物と相互作用しない移動相における物質の濃度の変化によりもたらされる変化であることを特徴とする、本発明1001または1002の方法。
[本発明1004]
不活性な変化が、伝導率または280 nmでの吸収における変化であることを特徴とする、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1005]
再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化が、100%の変性剤を含有する溶液から100%の該変性剤を含有しない溶液への変化、またはその逆であることを特徴とする、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1006]
変性剤が、水酸化ナトリウム、塩化グアニジウム、尿素、または有機溶媒から選択されることを特徴とする、本発明1005の方法。
[本発明1007]
不活性な変化がS字形変化であることを特徴とする、前記本発明のいずれかの方法。
[本発明1008]
不活性な変化が経時的な変化であることを特徴とする、前記本発明のいずれかの方法。
本明細書において報告する第1の局面は、ポリペプチドの精製の精製段階において少なくとも2度目に使用される再使用可能なカラムクロマトグラフィーカラム充填物が、同一のポリペプチドの同一の精製の同一の精製段階において1度目に使用された時の分離効力と比較して、低下した分離効力を有するか否かを判定するための方法であって、以下の段階を含む方法である:
a)不活性な変化を同定する段階、および、クロマトグラフィーカラム充填物の少なくとも1度目の使用の後に、該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の、100%の変性剤を含有する溶液から100%の該変性剤を含有しない溶液への不活性な変化、またはその逆の物理化学的パラメータの実験データを経時的に測定する段階、
b)a)において取得された少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階、
e)段階d)において算出された差の絶対値が0.05より大きい時、該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物の低下した分離効力を判定する段階、
ここで、式Iの関数は
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴う。
振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴う。
a)該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の少なくとも1つの物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを同定および測定する段階、
b)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)少なくとも2度目の使用の物理化学的パラメータの不活性な変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階、
ここで、式Iの関数は
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴い、ならびに
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05もしくはそれより小さい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物をさらに使用する段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05もしくはそれより大きいが0.2より小さい時、精製されたポリペプチドの追加的な評価および/もしくは特徴決定を行う段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.2もしくはそれより大きい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を交換する段階。
エリスロポエチンの発酵および精製
エリスロポエチンは、例えば国際公開公報第01/87329号に従って生産および精製することができる。
カラム特性における変化
本明細書において報告する方法を用いて、工程に渡って継続的にカラムをモニターすることができる。他の工程パラメータの変化とは独立して微妙な変化が検出可能になる。図7において、分離特性における変化をもたらすカラム充填物における変化を示す。変化はサイクル40の後に起きた。
Claims (6)
- ポリペプチドの精製の精製段階において少なくとも2度目に使用される再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物が、該ポリペプチドの該精製の該精製段階において低下した分離効力を有するか否かを判定するための方法であって、
a)移動相に含有される、再使用可能なカラム充填物と相互作用しない物質の濃度の変化によりもたらされるシグナル変化であることを特徴とする、少なくとも2度目の使用の該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の変化を同定する段階、および
該シグナル変化の実験データを経時的に測定する段階、
b)段階a)において得られた経時的なシグナル変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)段階a)において得られた経時的なシグナル変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階、
e)段階d)において算出された差の絶対値が0.1より大きい時、該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物の低下した分離効力を判定する段階
を含むことを特徴し、
ここで、式Iの関数が
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、かつ
を伴う、方法。 - 再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を用いる少なくとも1つのクロマトグラフィー段階が含有される、ポリペプチドのクロマトグラフィー精製のための方法であって、
a)移動相に含有される、再使用可能なカラム充填物と相互作用しない物質の濃度の変化によりもたらされるシグナル変化であることを特徴とする、少なくとも2度目の使用の該再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を通過する移動相の変化を同定する段階、および
該シグナル変化の実験データを経時的に測定する段階、
b)段階a)において得られた経時的なシグナル変化の実験データを適合させることにより、式Iの関数のパラメータを測定する段階、
c)段階a)において得られた経時的なシグナル変化の実験データと、段階b)において測定されたパラメータを伴う式Iの関数との間の差を測定する段階、
d)段階c)において測定された差の最大値と最小値との間の差を算出し、かつ該差を正規化する段階
を含むことを特徴とし、
ここで、式Iの関数が
であり、振幅P1、開始値A0、平均値m、標準偏差sを伴い、および
を伴い、ならびに
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05もしくはそれより小さい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物をさらに使用する段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.05より大きいが0.2より小さい時、精製されたポリペプチドの追加的な特徴決定および/もしくは評価を行う段階、または
−段階d)において算出された差の絶対値が0.2もしくはそれより大きい時、再使用可能なクロマトグラフィーカラム充填物を交換する段階
を含む、方法。 - シグナル変化が、伝導率または280 nmでの吸収における変化であることを特徴とする、請求項1または2記載の方法。
- 移動相の変化が、100%の変性剤を含有する溶液から100%の該変性剤を含有しない溶液への変化、またはその逆であることを特徴とする、請求項1〜3のいずれか一項記載の方法。
- 変性剤が、水酸化ナトリウム、塩化グアニジウム、尿素、または有機溶媒から選択されることを特徴とする、請求項4記載の方法。
- 経時的なシグナル変化がS字形変化であることを特徴とする、請求項1〜5のいずれか一項記載の方法。
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