JP5734340B2 - 腫瘍増殖制御のための新規組成物 - Google Patents
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Description
細胞株および培養条件
ヒト膵臓カルチノイドBON細胞をTownsend博士(The University of Texas Medical Branch、米国テキサス州ガルベストン)から得た。5%CO2を含有する、37℃の加湿インキュベーター中で、細胞を培養した。培地は、10%FCS、ペニシリン(1x105U/l)、ファンギゾン(0.5mg/l)およびl−グルタミン(2mmol/l)を補充した、ダルベッコの修飾イーグル培地(DMEM)およびF12K培地の1:1混合物からなった。定期的に、細胞がマイコプラズマ不含であることを確認した。トリプシンEDTA10%で細胞を採取し、そして培地中に再懸濁した。プレーティング前に、標準的血球計算板を用いて、細胞を顕微鏡的に計数した。トリパンブルー染色を用いて、細胞生存度を評価し、これは常に95%を超えていた。培地および補充物を、GIBCO Bio−cult Europe(Invtrogen、オランダ・ブレダ)から得た。
トリプシン処理後、細胞を1mlの培地中、0.4〜2x104細胞/ウェルの密度で、24ウェルプレートにプレーティングした。次いで、プレートを37℃、5%CO2インキュベーター中に入れた。3日後、用量曲線反応実験において、異なる濃度の5−アザ−2’−デオキシシチジン(0、10−5M、10−6M、10−7M、10−8Mおよび10−9M)を含有するか、あるいはソマトスタチン類似体、オクトレオチド(10−8M)またはドーパミン・アゴニスト、カベルゴリン(10−8M)を含むまたは含まない、5−アザ−2’−デオキシシチジン(5x10−8M)を含有する1ml/ウェル培地で、細胞培地を交換した。5−アザ−2’−デオキシシチジンおよびオクトレオチドまたはカベルゴリンの併用を評価する実験においては、5−アザ−2’−デオキシシチジン(5x10−8M)での前処理を24時間行った。
トリプシン処理後、1.5〜2x104細胞/ウェルの密度で、BON細胞を24ウェルプレートにプレーティングした。これらのプレートを37℃、5%CO2インキュベーター中に入れた。3日後、用量曲線反応実験における、異なる濃度の5−アザ−2’−デオキシシチジン(10−5M、10−6M、10−7M、10−8Mおよび10−9M)、あるいはソマトスタチン類似体、オクトレオチド(10−8M)またはドーパミン・アゴニスト、カベルゴリン(10−8M)を含むまたは含まない、5−アザ−2’−デオキシシチジン(5x10−8M)の存在下または非存在下(対照群)で、細胞培地を新しくした。5−アザ−2’−デオキシシチジンおよびオクトレオチド、カベルゴリンまたは新規ソマトスタチン類似体BIM−23206、BIM−23926、およびソマトスタチン−ドーパミン・キメラBIM−23A765の併用を評価する実験においては、5−アザ−2’−デオキシシチジン(5x10−8M)での前処理を24時間行った。
細胞増殖に対するオクトレオチドおよびカベルゴリンの効果
オクトレオチド(10−8M)またはカベルゴリン(10−8M)との3日間または6日間のインキュベーション中、細胞数を反映するDNA含有量として測定すると、BONカルチノイド細胞増殖に対する両薬剤の統計的に有意な効果はなかった。各々、2回の独立の実験の平均±SEMを表す、図1Aおよび2Aは、インキュベーション6日後のオクトレオチドまたはカベルゴリンの効果を示す。
5−アザ−2’−デオキシシチジンとの3日間または6日間のインキュベーション中、時間および用量依存方式で、BONカルチノイド細胞増殖は、有意に阻害された(データ未提示)。6日間のインキュベーション後、5−アザ−2’−デオキシシチジンの腫瘍細胞増殖阻害効果のIC25値は、およそ5x10−8Mであった。図1Aおよび2Aは、低用量の5−アザ−2’−デオキシシチジン(5x10−8M)が、BONカルチノイド細胞増殖を有意に阻害したことを示す(対照に対して、p<0.001)。
インキュベーション6日後、5−アザ−2’−デオキシシチジンおよびオクトレオチド(10−8M)またはカベルゴリン(10−8M)の併用処理によって、5−アザ−2’−デオキシシチジン単独の効果と比較して、細胞増殖に対して、BONカルチノイド細胞成長の、統計的に有意なより高い阻害が誘導された(それぞれp<0.05およびp<0.01)。
オクトレオチド(10−8M)またはカベルゴリン(10−8M)との3日間のインキュベーション中、BONカルチノイド細胞において、DNA断片化として測定すると、アポトーシスに対する両薬剤の統計的に有意な効果はなかった。2回の独立の実験の平均±SEMを表す、図1Bおよび2Bは、DNA断片化の誘導に対する、オクトレオチドまたはカベルゴリンの効果を示す。ソマトスタチン類似体BIM−23926およびBIM−23206、ならびにソマトスタチン−ドーパミン・キメラBIM−23A765単独での処理に関して、同様の結果を得た。
5−アザ−2’−デオキシシチジンとの3日間のインキュベーションによって、用量依存方式で、BONカルチノイド細胞におけるDNA断片化が有意に誘導された(データ未提示)。3日間のインキュベーション後、5−アザ−2’−デオキシシチジンのアポトーシス誘導効果のEC25値は、およそ5x10−8Mであった。図1Bおよび2Bは、低用量の5−アザ−2’−デオキシシチジン(5x10−8M)が、BONカルチノイド細胞において、ほぼ100%のDNA断片化を有意に誘導したことを示す(対照に対して、p<0.001)。
図1Bおよび2Bは、5−アザ−2’−デオキシシチジンおよびオクトレオチド(10−8M)またはカベルゴリン(10−8M)の併用処理が、3日後、5−アザ−2’−デオキシシチジン単独の効果と比較して、BONカルチノイド細胞におけるDNA断片化の、統計的に有意なより高い誘導を誘導したことを示す(それぞれp<0.05およびp<0.001)。
図3は、ソマトスタチン類似体を単独で投与すると、ヒトBONカルチノイド細胞のアポトーシス(DNA断片化)にはまったく効果がないことを示す。しかし、新規類似体のいずれかと一緒にAZAを投与すると、AZA単独の中程度の効果から、劇的な増加が観察された。
図4は、ソマトスタチン−ドーパミン・キメラを単独で投与すると、ヒトBONカルチノイド細胞のアポトーシス(DNA断片化)にはまったく効果がないことを示す。しかし、BIM−23A765と一緒にAZAを投与すると、AZA単独の中程度の効果から、劇的な増加が観察された。
Claims (10)
- 少なくとも1つの脱メチル化剤と少なくとも1つの1つのソマトスタチン類似体またはドーパミン・アゴニストを含む薬学的組成物であって、
少なくとも1つの脱メチル化剤が5−アザ−2’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容される塩であり、
少なくとも1つのソマトスタチン類似体がBIM−23206、BIM−23926、BIM−23A765、オクトレオチドおよびその薬学的に許容される塩からなる群より選択され、
少なくとも1つのドーパミン・アゴニストがBIM−23A765、カベルゴリンおよびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される、
腫瘍を治療するための薬学的組成物。 - 少なくとも1つの脱メチル化剤、少なくとも1つの1つのソマトスタチン類似体および少なくとも1つのドーパミン・アゴニストを含む薬学的組成物であって、
少なくとも1つの脱メチル化剤が5−アザ−2’−デオキシシチジンまたはその薬学的に許容される塩であり、
少なくとも1つのマトスタチン類似体がBIM−23206、BIM−23926、BIM−23A765、オクトレオチドおよびその薬学的に許容される塩からなる群より選択され、
少なくとも1つのドーパミン・アゴニストがBIM−23A765、カベルゴリンおよびその薬学的に許容される塩からなる群より選択される、
請求項1記載の薬学的組成物。 - 少なくとも1つのマトスタチン類似体および少なくとも1つのドーパミン・アゴニストがそれぞれBIM−23A765またはその薬学的に許容される塩である、請求項2記載の薬学的組成物。
- ソマトスタチンおよび/またはドーパミン受容体を表面上に発現する腫瘍の治療のために用いられる、請求項1〜3のいずれか記載の薬学的組成物。
- 前記腫瘍が、神経内分泌腫瘍、腺癌、脳腫瘍、血液学的悪性病変または肝細胞癌である請求項4記載の薬学的組成物。
- 神経内分泌腫瘍が、下垂体腺腫、膵島腫瘍、インスリノーマ、カルチノイド、褐色細胞腫、傍神経節腫(paragaglioma)および甲状腺髄様癌からなる群から選択される請求項5記載の薬学的組成物。
- 腺癌が、乳房、腎臓、結腸、膵臓、前立腺および卵巣腫瘍からなる群から選択される請求項5記載の薬学的組成物。
- 脳腫瘍が、髄膜腫である請求項5記載の薬学的組成物。
- 血液学的悪性病変が、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫ならびに急性および慢性白血病からなる群から選択される請求項5記載の薬学的組成物。
- 腫瘍が、肝細胞癌である請求項5記載の薬学的組成物。
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