JP5731385B2 - ポリマーベンジルカルボネート誘導体 - Google Patents

Description

（関連出願への相互参照）
本出願は、２００８年８月２２日に出願された米国仮特許出願第６１／１８９，７５１号の利益を主張し、この出願はその全体が本明細書中に参考として援用される。

（発明の分野）
本発明は、アミノ含有薬物と結合して薬物のインビボ特性を向上させることができるポリマー誘導体を提供する。本ポリマー誘導体は、後で放出されて本来の形の薬物を生じさせることができる。これらのポリマー誘導体および薬物結合体を調製する方法および用いる方法が記載される。

（背景）
ポリ（エチレングリコール）による薬物の修飾は、薬物の薬理学的特性および生物学的特性を向上させる定評あるプロセスである。

タンパク質およびペプチド薬物はインビボで多くの場合に循環半減期が短く、免疫原性が高いことがあり、タンパク質分解されることがあり、溶解度が低いことがある。また、循環系内における治療活性薬物の持続する維持は、明らかに臨床上重要な望ましい特徴である。

タンパク質薬物またはペプチド薬物の臨床上の特性を改善するための魅力ある戦略が、親水性ポリマー例えばポリアルキレンオキシド（非特許文献１）、あるいはポリシアル酸（非特許文献２）、デキストランまたはヒドロキシアルキルデンプンのような多糖による薬物の修飾である。タンパク質薬物およびペプチド薬物をポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）によって修飾すると、タンパク質またはペプチドの安定性および溶解性が向上するが、多くの場合に活性の低下につながる。しかし、ＰＥＧ化したタンパク質またはペプチドからＰＥＧ部分が後でインビボ放出されるとタンパク質またはペプチドの活性が元に戻る。従って、放出可能なＰＥＧによってタンパク質およびペプチドを誘導体化すると、タンパク質は向上した循環寿命を有する徐放性プロドラッグに変換され得る。例えばインターフェロンα−２（非特許文献３）、エキセンジン−４（非特許文献４）およびインターフェロン−β−１ｂ（非特許文献５）の場合に、これらの向上した生物的特性が示されている。

タンパク質およびペプチド以外の薬物分子も、ＰＥＧ化すると有利である。薬物分子をＰＥＧ化すると分子の見かけのサイズが増加し、従って腎臓ろ過が減り、体内分布が変化する。さらに、疎水性リガンドをＰＥＧ化するとインビボでのリガンドの溶解性が増加する。最後に、タンパク質およびペプチド以外の薬物分子を放出可能なＰＥＧで誘導体化すると薬物を徐放性プロドラッグに変換する方法が得られる。

ＰＥＧ部分を含んでいるいくつかの放出可能なリンカーが提案されている。特許文献１は、弱い、加水分解に対して不安定な、タンパク質またはペプチドとの結合を有するＰＥＧおよび関連ポリマー誘導体を記載している。しかし、タンパク質またはペプチドからＰＥＧを放出する不安定な結合の加水分解は、本来の形のタンパク質またはペプチドを提供することができない。代わりに、タンパク質またはペプチドは余分な短い分子断片またはタグを含む。

特許文献２は、タンパク質またはペプチドのアルコール基またはチオール基と結合して加水分解の反応性が減少したエステルまたはチオエステル結合を生じる立体障害となる結合を有するＰＥＧ誘導体を記載している。この減少した加水分解活性は、エステルまたはチオエステル結合のカルボニル炭素の隣の炭素とのアルキルまたはアリール基の結合の結果である。この特許は、ＰＥＧの末端の酸素と、結合したカルボン酸またはカルボン酸誘導体のカルボニル基との間のスペーサ中にある結合メチレン基の数を制御することによって、ＰＥＧエステルからの薬物の加水分解による送達を制御することができることも開示している。この特許のＰＥＧリンカーは、アミノ含有タンパク質の場合には、得られるアミドが加水分解に対してより安定であり、タンパク質からＰＥＧを放出する能力が低いので、最適ではない。

特許文献３および特許文献４は、加水分解により分解可能なポリ（エチレングリコール）のカルバメート誘導体を記載している。ＰＥＧ部分は、カルバメートを介してタンパク質と結合しているアリール基に取り付けられた加水分解可能でないリンカーを介してタンパク質と結合している。

特許文献５および特許文献６は、加水分解可能なフルオレンベースのＰＥＧ構築物を記載している。

非特許文献６は、アミノ含有化合物のＰＥＧプロドラッグを合成するための一般的な方法論の概要を示している。最初にＰＥＧの酵素的分離、続いて急速な１，４−または１，６−ベンジル脱離反応に依拠し、カルバメートの形で結合した結合アミノ含有薬物を放出する、二重プロドラッグ戦略に従うＰＥＧ結合体が記載されている。

米国特許第６，５１５，１００号明細書 米国特許第７，２０５，３８０号明細書 米国特許第６，４１３，５０７号明細書 米国特許第６，８９９，８６７号明細書 国際公開第０４／０８９２８０号 国際公開第０６／１３８５７２号

Ｒｏｂｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．， Ａｄｖ． Ｄｒｕｇ Ｒｅｖ． ５４， ４５９−４７６ （２００２） Ｆｅｒｎａｎｄｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， １３４１， ２６−３４ （１９９７） Ｐｅｌｅｇ−Ｓｈｕｌｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ． ４７， ４８９７−４９０４ （２００４） Ｔｓｕｂｅｒｙ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ． ３７， ３８１１８−３８１２４ （２００４） Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｉｏ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍ． １７， ３４１−３５１ （２００６） Ｇｒｅｅｎｗａｌｄら（Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ． ４２， ３６５７−３６６７ （１９９９））

（要旨）
本発明は、薬物と結合して薬物のインビボ特性、例えば半減期、溶解性および／または循環、を向上させることができるポリマー誘導体を提供する。ポリマー誘導体は、後で放出されて本来の形の薬物を生じさせることができる。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、薬物からのポリマー誘導体の放出は、多段階放出機構に従う。

一様相において、本発明は、一般式Ｉ

式中、
Ｙは、薬物のアミノ基によって容易に置換されてカルバメート結合を形成することができる活性化基であり、
ｎは、≧１であり、
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ^３からなる群から選ばれ、ここでＲ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれ、
ＰＯＬＹＭＥＲは、水溶性の非ペプチドポリマーであり、
Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれる
のポリマー誘導体を提供する。

別の様相において、本発明は、式ＩＩ

式中、
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ^３からなる群から選ばれ、ｎは、≧１であり、ＰＯＬＹＭＥＲは、水溶性の非ペプチドポリマーであり、Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、Ｒ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれ、ＤＲＵＧは、アミノ含有分子、ペプチドまたはタンパク質である
の薬物結合体、あるいは薬物結合体の塩、エステルまたは溶媒和物を提供する。薬物は、血漿タンパク質または血液凝固因子であってよい。特定の実施態様において、薬物は、エリスロポイエチン、Ｈ因子、第ＶＩＩＩ因子、フォン・ヴィレブランド（ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ）因子、第ＶＩＩａ因子または第ＩＸ因子であってよい。

また別の様相において、本発明は、本明細書に開示される薬物結合体と薬学的に許容される賦形剤との薬学的製剤を提供する。いくつかの実施態様において、製剤は、微粒子中にカプセル化された薬物結合体を含む。

さらに別の様相において、本発明は、患者における疾患を治療する方法を提供し、この方法は、本明細書に開示されている薬学的製剤を患者に投与することを含む。いくつかの場合に、疾患は血液凝固病であり、薬物結合体の薬物は血漿タンパク質または血液凝固因子である。

別の様相において、本発明は、構造式Ａ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
Ｈａｌｏｇｅｎは、Ｂｒ、ＣｌまたはＩである
の化合物であって、前提条件として、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも１つは水素と異なる、化合物を提供する。

特定の実施態様において、構造式Ａの化合物は、

からなる群から選ばれる。

別の態様において、本発明は、構造式Ｂ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれる
の化合物であって、前提条件として、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも１つは水素と異なる、化合物を提供する。

特定の実施態様において、構造式Ｂの化合物は、

からなる群から選ばれる。

別の態様において、本発明は、構造式Ｃ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
ｍ−ＰＥＧ−は、約２００から約５００，０００の分子量を有するモノメトキシポリ（エチレングリコール）である
の化合物であって、前提条件として、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも１つは水素と異なる、化合物を提供する。

特定の実施態様において、構造式Ｃの化合物は、

からなる群から選ばれる。

別の様相において、本発明は、式Ｆの化合物を調製する方法を提供する。この方法は、下記に示されるように、式Ａの化合物、ジエチレングリコールおよび塩基を混合して式Ｂの化合物を形成させ、次に式Ｂの化合物を塩基およびモノメトキシポリ（エチレングリコール）スルホン酸エステル、例えばｍＰＥＧメシレート（ｍＰＥＧ−ＯＭｓ）またはフルオロフェニルスルホネート（ｍＰＥＧ−ＯＴｓ（Ｆ））と反応させて式Ｆ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、Ｒは、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルである
の化合物を形成することを含む。

別の様相において、本発明は、一般式ＩＩ

式中、
ＰＯＬＹＭＥＲ、Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２およびｎは、式Ｉにおけるように定義される
を有する薬物結合体をさらに提供する。ＤＲＵＧは、生物学的応答を誘発することができるアミノ含有分子、ペプチドまたはタンパク質であるか、あるいはアミノ基を含むように修飾される、生物学的応答を誘発することができる分子、ペプチドまたはタンパク質である。

別の様相において、本発明は、薬物からのポリマー誘導体の放出の速度を調節する方法を提供する。
例えば、本発明は以下を提供する。
（項目１）
式Ｉ

式中、
Ｙは、活性化基であり、
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ ^３ からなる群から選ばれ、
ｎは、≧１であり、
ＰＯＬＹＭＥＲは、水溶性の非ペプチドポリマーであり、
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
Ｒ ^３ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれる
の化合物。
（項目２）
ＰＯＬＹＭＥＲは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリビニルピロリドン、ポロキサマー、多糖、ポリシアル酸、ヒドロキシエチルデンプン、イコデキストリン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、キトサン、ヒアルロン酸、デキストラン、デキストラン硫酸およびペントサンポリ硫酸からなる群から選ばれる、項目１に記載の化合物。
（項目３）
ＰＯＬＹＭＥＲは、ポリ（アルキレングリコール）を含む、項目１に記載の化合物。
（項目４）
前記ポリ（アルキレングリコール）は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）を含む、項目３に記載の化合物。
（項目５）
前記ＰＥＧは、約２００から約５００，０００の分子量を有する、項目４に記載の化合物。
（項目６）
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルおよびｎ−ブチルからなる群から独立に選ばれる、項目１に記載の化合物。
（項目７）
Ｒ ^１ は水素であり、Ｒ ^２ はメチルである、項目６に記載の化合物。
（項目８）
Ｙは、ハロゲン化物、−Ｎ _３ 、−ＣＮ、ＲＯ−、ＮＨ _２ Ｏ−、ＮＨＲＯ−、ＮＲ _２ Ｏ−、ＲＣＯ _２ −、ＲＯＣＯ _２ −、ＲＮＣＯ _２ −、ＲＳ−、ＲＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＣＳ _２ −、ＲＳＣ（Ｏ）Ｓ−、ＲＳＣＳ _２ −、ＲＳＣＯ _２ −、ＲＯＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＯＣＳ _２ −、ＲＳＯ _２ −、ＲＳＯ _３ −、ＲＯＳＯ _２ −、ＲＯＳＯ _３ −、ＲＰＯ _３ −、ＲＯＰＯ _３ −、イミダゾリル、Ｎ−トリアゾリル、Ｎ−ベンゾトリアゾリル、ベンゾトリアゾリルオキシ、イミダゾリルオキシ、Ｎ−イミダゾリノン、Ｎ−イミダゾロン、Ｎ−イミダゾリンチオン、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、２−チオキソチアゾリジン−３−イル、−ＯＮ＝Ｃ（ＣＮ）Ｒ、２−ピリジルオキシ、フェノキシ、ｐ−クロロフェノキシ、ｐ−ニトロフェノキシ、トリクロロフェノキシおよびペンタクロロフェノキシからなる群から選ばれ、
Ｒは、アルキル基またはアリール基である
項目１に記載の化合物。
（項目９）
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、ｐ−ニトロフェノキシ、２−チオキソチアゾリジン−３−イルおよびイミダゾリルからなる群から選ばれる、項目８に記載の化合物。
（項目１０）
Ｙは、Ｎ−スクシンイミジルオキシである、項目９に記載の化合物。
（項目１１）
Ｘは、ＯおよびＮＨからなる群から選ばれる、項目１に記載の化合物。
（項目１２）
Ｘは、Ｏである、項目１１に記載の化合物。
（項目１３）
ｎは、１、２、３、４および５からなる群から選ばれる、項目１に記載の化合物。
（項目１４）
ｎは、１および２からなる群から選ばれる、項目１３に記載の化合物。
（項目１５）
前記化合物は、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルブタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル５−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルペンタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル６−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルヘキサノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−エチル−５−（２−メトキシポリエトキシ）ペンタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル５−（２−メトキシポリエトキシ）−２−プロピルペンタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）ヘキサノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル３−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルプロパノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−２−メチルブタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−エチル−２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）ブタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−２−メチルペンタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−２−プロピルペンタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−３−メチルブタノエート、
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）ヘキサノエート、および
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル３−（２−メトキシエトキシ）−２−メチルプロパノエート
からなる群から選ばれる、項目１に記載の化合物。
（項目１６）
式ＩＩ

式中、
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ ^３ からなる群から選ばれ、
ｎは、≧１であり、
ＰＯＬＹＭＥＲは、水溶性の非ペプチドポリマーであり、
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
Ｒ ^３ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれ、
ＤＲＵＧは、アミノ含有分子、ペプチドまたはタンパク質である
薬物結合体、あるいはそれらの薬学的に許容される塩、エステルまたは溶媒和物。
（項目１７）
ＤＲＵＧは、血漿タンパク質または血液凝固因子である、項目１６に記載の薬物結合体。
（項目１８）
ＤＲＵＧは、エリスロポイエチン、Ｈ因子、第ＶＩＩＩ因子、フォン・ヴィレブランド因子、第ＶＩＩａ因子および第ＩＸ因子からなる群から選ばれる、項目１７に記載の薬物結合体。
（項目１９）
ＤＲＵＧは、第ＶＩＩＩ因子である、項目１７に記載の薬物結合体。
（項目２０）
項目１６から１９のいずれか１項に記載の薬物結合体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的製剤。
（項目２１）
前記製剤は、微粒子中にカプセル化されている、項目２０に記載の薬学的製剤。
（項目２２）
項目２０または２１に記載の薬学的製剤を患者に投与することを含む、前記患者の疾患を治療するための方法。
（項目２３）
前記疾患は血液凝固病であり、ＤＲＵＧは血漿タンパク質または血液凝固因子である、項目２２に記載の方法。
（項目２４）
構造式Ａ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンア
リールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
Ｈａｌｏｇｅｎは、Ｂｒ、ＣｌまたはＩである
を有し、前提条件として、Ｒ ^１ およびＲ ^２ の少なくとも１つは水素と異なる、化合物。
（項目２５）

からなる群から選ばれる、項目２４に記載の化合物。
（項目２６）
構造式Ｂ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれる
を有し、前提条件として、Ｒ ^１ およびＲ ^２ の少なくとも１つは水素と異なる、化合物。
（項目２７）

からなる群から選ばれる、項目２６に記載の化合物。
（項目２８）
構造式Ｃ

式中、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
ｍ−ＰＥＧ−は、約２００から約５００，０００の分子量を有するモノメトキシポリ（エチレングリコール）である
を有し、前提条件として、Ｒ ^１ およびＲ ^２ の少なくとも１つは水素と異なる、化合物。
（項目２９）

からなる群から選ばれる、項目２８に記載の化合物。
（項目３０）
式Ｆ

の化合物を合成する方法であって、
式Ａの化合物、ジエチレングリコールおよび塩基を混合して式Ｂの化合物を形成させるステップ、ならびに

前記式Ｂの化合物をモノメトキシポリ（エチレングリコール）スルホン酸エステルおよび塩基と混合して前記式Ｆの化合物を形成させるステップ
を含み、
ｎは、１、２、３または４であり、
Ｒ ^１ およびＲ ^２ は、水素、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキル、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
Ｒは、（Ｃ _１ 〜Ｃ _６ ）−アルキルであり、
前記モノメトキシポリ（エチレングリコール）は、約２００から約５００，０００の分子量を有する
方法。
（項目３１）
前記塩基は、水素化ナトリウムである、項目３０に記載の方法。
（項目３２）
前記モノメトキシポリ（エチレングリコール）スルホン酸エステルは、モノメトキシポリ（エチレングリコール）メシレートまたはモノメトキシポリ（エチレングリコール）フルオロフェニルスルホネートである、項目３０または３１に記載の方法。

（詳細な説明）
本発明は、アミノ含有薬物と結合して薬物のインビボ特性、例えば半減期、溶解性および／またはインビボ循環、を向上させることができるポリマー誘導体を提供する。ポリマー誘導体は、後で薬物からインビボ放出されて本来の形の薬物を生じさせることができる。薬物からのポリマー誘導体の放出は、多段階放出機構に従うと理論付けられている。

本発明は、薬物のアミノ基への放出可能なポリマー誘導体の、カルバメート結合を形成する結合を記載する。本発明のポリマー誘導体が薬物と結合すると、薬物の水溶性が増加し、例えば腎臓クリアランスの低下および分解酵素に対する保護を通じて血漿半減期を長くし、凝集、免疫原性および抗原性を妨げるかまたは低下させる。ポリマー誘導体は、インビボで放出されて本来の形の薬物を発生させ、薬物の効力を維持することができると有利である。いかなる特定の理論にも束縛されるものではないが、本開示のポリマー誘導体の放出機構が多段階プロセスによって起こり、カルバメート結合の加水分解がこのプロセスの律速段階でない場合も有利である。代わって、反応の律速段階はエステル部分の加水分解であり、エステルのカルボニル炭素の近くの立体障害効果および／または電子効果を操作することによって速くなるかまたは遅くなる加水分解を実現するように調整することができる。従って、薬物の放出の速度は、特定の治療設計に合わせて調整することができる。

本明細書において開示されるのは、一般式Ｉ

式中、
Ｙは、薬物のアミノ基によって容易に置換されてカルバメート結合を形成することができる活性化基であり、
ｎは、≧１であり、
Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ^３からなる群から選ばれ、ここでＲ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれ、
ＰＯＬＹＭＥＲは、水溶性の非ペプチドポリマーであり、
Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれる
のポリマー誘導体である。

ポリマー誘導体を用いて一般式ＩＩ

式中、
ＰＯＬＹＭＥＲ、Ｘ、Ｒ^１、Ｒ^２およびｎは、式Ｉにおけるように定義される
の薬物結合体を調製することができる。ＤＲＵＧは、生物学的応答を誘発することができるアミノ含有分子、ペプチドまたはタンパク質、あるいはアミノ基を含むように修飾される、生物学的応答を誘発することができる分子、ペプチドまたはタンパク質である。ＤＲＵＧは、反応のための１つ以上のアミノ基を含み、従って１つ以上の基がポリマー誘導体と反応することができる。

「薬物」は、生物学的応答を誘発するアミノ含有分子、ペプチドまたはタンパク質、あるいは生物学的応答を誘発し、アミノ基を含むように修飾される分子、ペプチドまたはタンパク質を指す。

「（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル」は、１から６の炭素原子を有する１価アルキル基を指す。この用語の例は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ヘキシルおよび類似物などの基によって示される。直鎖アルキルおよび分岐アルキルが含まれる。アルキル基は、任意選択として例えば、ヒドロキシ（ＯＨ）、ハロ、アリールおよびアミノで置換することができる。

本明細書で用いるとき、用語「アルキレン」は、置換基を有するアルキル基を指す。例えば、用語「アルキレンアリール」は、アリール基で置換されたアルキル基を指す。

本明細書中で用いるとき、用語「アリール」は、単環または多環の芳香族基、好ましくは単環または２環の芳香族基、例えばフェニルまたはナフチルを指す。特に明記しない限り、アリール基は、置換されていなくてもよく、あるいは、例えばハロ、アルキル、アルケニル、ＯＣＦ_３、ＮＯ_２、ＣＮ、ＮＣ、ＯＨ、アルコキシ、アミノ、ＣＯ_２Ｈ、ＣＯ_２アルキル、アリールおよびヘテロアリールから独立に選ばれた１つ以上の基、特に１から４の基で置換されていてもよい。例となるアリール基は、フェニル、ナフチル、テトラヒドロナフチル、クロロフェニル、メチルフェニル、メトキシフェニル、トリフルオロメチルフェニル、ニトロフェニル、２，４−メトキシクロロフェニルおよび類似物を含むがそれらに限定されない。

「活性化基」（Ｙ）は、アシル置換反応の結果としてカルボニルから置換される部分を指す。例えば、薬物のアミノ基は、下図

に示されるように、カルボニルに結合していた活性化基を置換してカルバメート結合を形成することができる。

意図される特定の活性化基は、ハロゲン化物、−Ｎ_３、−ＣＮ、ＲＯ−、ＮＨ_２Ｏ−、ＮＨＲＯ−、ＮＲ_２Ｏ−、ＲＣＯ_２−、ＲＯＣＯ_２−、ＲＮＣＯ_２−、ＲＳ−、ＲＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＣＳ_２−、ＲＳＣ（Ｏ）Ｓ−、ＲＳＣＳ_２−、ＲＳＣＯ_２−、ＲＯＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＯＣＳ_２−、ＲＳＯ_２−、ＲＳＯ_３−、ＲＯＳＯ_２−、ＲＯＳＯ_３−、ＲＰＯ_３−、ＲＯＰＯ_３−、イミダゾリル、Ｎ−トリアゾリル、Ｎ−ベンゾトリアゾリル、ベンゾトリアゾリルオキシ、イミダゾリルオキシ、Ｎ−イミダゾリノン、Ｎ−イミダゾロン、Ｎ−イミダゾリンチオン、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、２−チオキソチアゾリジン−３−イル、−ＯＮ＝Ｃ（ＣＮ）Ｒ、２−ピリジルオキシ、フェノキシ、または置換フェノキシ（例えばｐ−クロロフェノキシ、ｐ−ニトロフェノキシ、トリクロロフェノキシ、ペンタクロロフェノキシ）を含むがそれらに限定されない。Ｒは、アルキル基（非置換もしくは置換）またはアリール基（非置換もしくは置換）、または当業者に自明の他の適当な活性化基である。好ましい実施態様において、活性化基は、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、ｐ−ニトロフェノキシ、２−チオキソチアゾリジン−３−イルおよびイミダゾリルからなる群から選ばれる。

「水溶性ポリマー」は、親水性の非ペプチドホモポリマーまたはコポリマーを指す。用語「水溶性ポリマー」は、直鎖または枝分かれのポリマー、例えばポリ（アルキレングリコール）、水溶性ポリホスファゼンまたは炭水化物系ポリマー、例えば多糖、を含む。水溶性ポリマーは、末端をキャップされていてもよい。意図される水溶性ポリマーの非限定的な例は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、枝分かれＰＥＧ、ポリシアル酸（ＰＳＡ）、多糖、プルラン、キトサン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、デンプン、デキストラン、カルボキシメチル−デキストラン、ポリアルキレンオキシド（ＰＡＯ）、ポリアルキレンオキシドのコポリマー、ポリオキサマー（例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標））、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ）、ポリプロピレングリコール（ＰＰＧ）、ポリオキサゾリン、ポリアクリロイルモルホリン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリカルボキシレート、ポリビニルピロリドン、ポリホスファゼン、ポリエチレン−ｃｏ−無水マレイン酸、ポリスチレン−ｃｏ−無水マレイン酸、ポリ（１−ヒドロキシメチルエチレンヒドロキシメチルホルマール）（ＰＨＦ）および２−メタクリロイルオキシ−２’−エチルトリメチルアンモニウムホスフェート（ＭＰＣ）を含む。水溶性ポリマーは、約２００から約５００，０００の分子量を有してよい。いくつかの実施態様において、水溶性ポリマーは、約１，０００から約２５，０００、または約４０，０００から約６０，０００の分子量を有する。特定の実施態様において、水溶性ポリマーは、約２，０００から約１０，０００の分子量を有する。

いくつかの実施態様において、水溶性ポリマーはＰＥＧであり、ＰＥＧは直鎖であっても枝分かれしていてもよい。ＰＥＧは、約２００から約５００，０００、例えば約１０００から約２５，０００、約２０００から約１０，０００、または約４０，０００から約６０，０００の分子量を有してよい。特定の実施態様において、ＰＥＧは約２０００の分子量を有してよい。意図される特定のＰＥＧポリマーは、ＰＥＧ２００、ＰＥＧ３００、ＰＥＧ２０００、ＰＥＧ３３５０、ＰＥＧ８０００、ＰＥＧ１０，０００およびＰＥＧ２０，０００を含む。

いくつかの実施態様において、水溶性ポリマーは、ＰＥＧと他のポリ（アルキレングリコール）とのブロックポリマー、例えばＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ１２７またはＰＬＵＲＯＮＩＣ（登録商標）Ｆ６８である。

さまざまな実施態様において、水溶性ポリマーは、多糖、例えばＰＳＡ誘導体である。多糖は、２から２００の間の単糖単位、例えば１０から１００単糖単位、および／または少なくとも３つの単糖単位を含んでよい。
「放出可能な」ポリマー誘導体は、アミノ含有薬物と結合して結合体を形成するポリマー誘導体を指す。ポリマー誘導体は、インビボで放出され、本来の形の薬物を生じさせる。放出可能の同義語は、「分解可能」または「加水分解可能」である。

変数ｎは、≧１である。一実施態様において、ｎは、１から１０の間およびそのすべての部分範囲の間の整数である。特定の実施態様において、ｎは、１、２、３、４および５からなる群から選ばれる。

変数Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ^３からなる群から選ばれる。ここで、Ｒ^３は、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールである。一実施態様において、ＸはＯである。別の実施態様において、ＸはＮＨである。

Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれる。Ｒ^１およびＲ^２は、独立に、水素または（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルのどちらかであってよい。詳しくは、意図されるＲ^１およびＲ^２は、水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルおよびｎ−ブチルを含む。特定の実施態様において、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^２は（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキルである。例えば、Ｒ^１は水素であり、Ｒ^２はメチルである。

意図されるＤＲＵＧの例は、天然酵素、天然源から誘導されるタンパク質、組換えタンパク質、天然ペプチド、合成ペプチド、環状ペプチド、抗体、受容体作動薬、細胞毒性薬、免疫グロビン、ベータ−アドレナリン遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、冠状血管拡張薬、強心配糖体、不整脈治療薬、心臓交感神経作動薬、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害薬、利尿薬、強心薬、コレステロールおよびトリグリセリド低下薬、胆汁酸排出促進薬（ｂｉｌｅ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｓｔｒａｎｔ）、フィブラート、３−ヒドロキシ−３−メチルグルテリル（ＨＭＧ）−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬、ナイアシン誘導体、抗アドレナリン作動薬、アルファ−アドレナリン遮断薬、中枢作用抗アドレナリン作動薬、血管拡張薬、カリウム保持性利尿薬、チアジドおよび関連の剤、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬、末梢血管拡張薬、抗男性ホルモン薬、エストロゲン、抗生物質、レチノイド、インスリンおよび類縁体、アルファ−グルコシダーゼ阻害薬、ビグアニド、メグリチニド、スルホニルウレア、チザオリジンジオン、アンドロゲン、プロゲストゲン、骨代謝調節薬、下垂体前葉ホルモン、視床下部ホルモン、下垂体後葉ホルモン、ゴナドトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン拮抗薬、排卵刺激薬、選択的エストロゲン受容体調節薬、抗甲状腺薬、甲状腺ホルモン、膨張性薬剤、緩下剤、逆蠕動薬、菌叢調節薬、腸内吸着剤、腸内抗感染薬、坑食欲減退薬、坑悪液質薬、坑過食症薬、食欲抑制薬、坑肥満薬、制酸薬、上部消化管薬、抗コリン作用薬、アミノサリチル酸誘導体、生物反応修飾薬、副腎皮質ステロイド、鎮痙薬、５−ＨＴ_４部分的作動薬、抗ヒスタミン薬、カンナビノイド、ドーパミン拮抗薬、セロトニン拮抗薬、細胞保護薬、ヒスタミンＨ２受容体拮抗薬、粘膜保護薬、プロトンポンプ阻害薬、ピロリ菌根絶治療薬、赤血球生成促進薬、造血薬、貧血症薬、ヘパリン、抗線維素溶解薬、止血薬、血液凝固因子、アデノシン二リン酸阻害薬、糖タンパク質受容体阻害薬、フィブリノーゲン−血小板結合阻害薬、トロンボキサンＡ_２阻害薬、プラスミノーゲン活性化因子、抗血栓薬、グルココルチコイド、鉱質コルチコイド、副腎皮質ステロイド、選択的免疫抑制薬、抗真菌薬、予防的治療に関与する薬物、エイズ関連感染症、サイトメガロウイルス、非ヌクレオシド系逆転写酵素阻害薬、ヌクレオシド類縁体逆転写酵素阻害薬、プロテアーゼ阻害薬、貧血症、カポジ肉腫、アミノグリコシド、カルバペネム、セファロスポリン、糖ペプチド、リンコサミド、マクロライド、オキサゾリジノン、ペニシリン、ストレプトグラミン、スルホンアミド、トリメトプリムおよび誘導体、テトラサイクリン、駆虫薬、坑アメーバ薬、ビグアニド、キナアルカロイド、葉酸拮抗薬、キノリン誘導体、カリニ肺炎治療薬、ヒドラジド、イミダゾール、トリアゾール、ニトロイミダゾール、環状アミン、ノイラミニダーゼ阻害薬、ヌクレオシド、リン酸吸着薬、コリンエステラーゼ阻害薬、補助治療薬、バルビツール酸および誘導体、ベンゾジアゼピン、ガンマアミノ酪酸誘導体、ヒダントイン誘導体、イミノスチルベン誘導体、スクシンイミド誘導体、抗けいれん薬、麦角アルカロイド、片頭痛治療製剤、生物反応修飾薬、カルバミン酸エステル、三環系誘導体、脱分極薬、非脱分極薬、神経筋麻痺薬、ＣＮＳ刺激薬、ドーパミン作動薬、モノアミンオキシダーゼ阻害薬、ＣＯＭＴ阻害薬、アルキルスルホネート、エチレンイミン、イミダゾテトラジン、ナイトロジェンマスタード類縁体、ニトロソウレア、白金含有化合物、抗代謝薬、プリン類縁体、ピリミジン類縁体、尿素誘導体、アントラサイクリン、アクチノマイシンド、カンプトテシン誘導体、エピポドフィロトキシン、タキサン、ビンカアルカロイドおよび類縁体、抗アンドロゲン薬、抗エストロゲン薬、非ステロイドアロマターゼ阻害薬、プロテインキナーゼ阻害薬、抗新生物薬、アザスピロデカンジオン誘導体、坑不安薬、興奮薬、モノアミンド再摂取阻害薬、選択的セロトニン再摂取阻害薬、抗うつ薬、ベンゾイソオキサゾール誘導体、ブチロフェノン誘導体、ジベンゾジアゼピン誘導体、ジベンゾチアゼピン誘導体、ジフェニルブチルピペリジン誘導体、フェノチアジン、チエノベンゾジアゼピン誘導体、チオキサンテン誘導体、アレルギー誘発性抽出物、非ステロイド薬、ロイコトリエン受容体拮抗薬、キサンチン、エンドセリン受容体拮抗薬、プロスタグランジン、肺界面活性剤、粘液溶解薬、坑有糸分裂薬、尿酸排泄薬、キサンチンオキシダーゼ阻害薬、ホスホジエステラーゼ阻害薬、メテアミン塩、ニトロフラン誘導体、キノロン、平滑筋弛緩薬、副交感神経作動薬、ハロゲン化炭化水素、アミノ安息香酸のエステル、アミド（例えばリドカイン、塩酸アルチカイン、塩酸ブピバカイン）、解熱薬、睡眠薬および鎮静薬、シクロピロロン、ピラゾロピリミジン、非ステロイド系抗炎症薬、オピオイド、パラ−アミノフェノール誘導体、アルコールデヒドロゲナーゼ阻害薬、ヘパリン拮抗薬、吸着剤、催吐薬、オピオイド拮抗薬、コリンエステラーゼ再活性化因子、ニコチン代替治療薬、ビタミンＡ類縁体および拮抗薬、ビタミンＢ類縁体および拮抗薬、ビタミンＣ類縁体および拮抗薬、ビタミンＤ類縁体および拮抗薬、ビタミンＥ類縁体および拮抗薬、ビタミンＫ類縁体および拮抗薬を含むがそれらに限定されない。

いくつかの実施態様において、ＤＲＵＧは、タンパク質、抗体または分子である。いくつかの特定の実施態様において、ＤＲＵＧは、ネオカルジノスタチン、ジノスタチン、アデノシンデアミナーゼ、アスパラギナーゼ、インターフェロンα２ｂ、インターフェロンα２ａ、成長ホルモンレセプター作動薬、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、坑血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）アプタマー、坑腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）Ｆａｂ、ジＦａｂ抗体、ドキソルビシン、ドキソルビシン−ガラクトサミン、カンプトセシン、パクリタキセル、白金酸塩、エリスロポイエチン、Ｈ因子、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）または第ＩＸ因子（ＦＩＸ）である（例えば、参照によって本明細書に全体が組み込まれるＰａｓｕｔ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｇｒ． Ｉｎ Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ ２００７， ３２， ９３３−９６１参照）。特定の実施態様において、ＤＲＵＧは、例えばエリスロポイエチン、Ｈ因子、第ＶＩＩＩ因子（ＦＶＩＩＩ）、フォン・ヴィレブランド因子（ｖＷＦ）、第ＶＩＩａ因子（ＦＶＩＩａ）、第ＩＸ因子（ＦＩＸ）および類似物などの血漿タンパク質または血液凝固因子である。

一般式ＩＡのポリマー誘導体は、表１に列挙されているものであってよい。

表２に、本明細書および請求項において用いられる略号が定義されている。本明細書全体にわたってその他の略号が見いだされる。

別の態様において、本発明は、式Ｉのポリマー誘導体の調製に関する。スキーム１に、これらの誘導体の調製のための合成プロトコルが示される。「Ｈａｌｏｇｅｎ」は、Ｉ、ＢｒおよびＣｌからなる群から選ばれ、変数ｎ、Ｒ^１、Ｒ^２およびＰＯＬＹＭＥＲ−ＸＨは、本明細書に記載されている通りである。

合成の第１ステップにおいて、塩基の存在下で化合物１をＰＯＬＹＭＥＲ−ＸＨと反応させて化合物２を形成させる。適当な塩基は、無機塩基（例えば炭酸セシウムおよび類似物）、アルカリ金属水素化物（例えば水素化ナトリウムおよび類似物）、アルコキシド（例えばカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド）および類似物を含む。

合成の第２ステップにおいて、酸の存在下で化合物２を脱保護して化合物３を形成させる。適当な酸は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸（ＨＣｌ）および類似物を含む。合成の第３ステップにおいて、カルボン酸化合物３を、活性化基（Ｙ）を有する化合物と反応させて化合物４を形成させる。活性化基を有する適当な化合物は、チオキソチアゾリジンおよびスクシンイミジルエステル、ならびに下記に定義される「活性化基」を有するその他の化合物を含む。合成の第４ステップにおいてＹ活性化基を４−ヒドロキシベンジルアルコールで置換して化合物５を形成させる。合成の最終ステップにおいて、化合物５を塩基性条件下で二重活性化カルボニル化合物とのカップリング反応に付してポリマー誘導体Ｉを生じさせる。

二重活性化カルボニル化合物の活性化基Ｙ、ＺおよびＹは、ハロゲン化物、−Ｎ_３、−ＣＮ、ＲＯ−、ＮＨ_２Ｏ−、ＮＨＲＯ−、ＮＲ_２Ｏ−、ＲＣＯ_２−、ＲＯＣＯ_２−、ＲＮＣＯ_２−、ＲＳ−、ＲＣ（Ｓ）Ｏ、−ＲＣＳ_２−、ＲＳＣ（Ｏ）Ｓ−、ＲＳＣＳ_２−、ＲＳＣＯ_２−、ＲＯＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＯＣＳ_２−、ＲＳＯ_２−、ＲＳＯ_３−、ＲＯＳＯ_２−、ＲＯＳＯ_３−、ＲＰＯ_３−、ＲＯＰＯ_３−、イミダゾリル、Ｎ−トリアゾリル、Ｎ−ベンゾトリアゾリル、ベンゾトリアゾリルオキシ、イミダゾリルオキシ、Ｎ−イミダゾリノン、Ｎ−イミダゾロン、Ｎ−イミダゾリンチオン、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、２−チオキソチアゾリジン−３−イル、−ＯＮ＝Ｃ（ＣＮ）Ｒ、２−ピリジルオキシ、フェノキシまたは置換フェノキシ（例えばｐ−クロロフェノキシ、ｐ−ニトロフェノキシ、トリクロロフェノキシ、ペンタクロロフェノキシ）からなる群から独立に選ばれた活性化基、または当業者に自明の他の適当な活性基であり、Ｒは、アルキル基（非置換もしくは置換）またはアリール基（非置換または置換）である。

合成の最終ステップにおける塩基は、反応を触媒することができる任意の塩基である。好ましくは、塩基は有機塩基である。有機塩基の非限定的な例は、例えばトリアルキルアミンおよび選ばれた窒素複素環化合物を含む。意図される特定の有機塩基は、トリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）である。

いくつかの実施態様において、ＺおよびＹは表３に記載されている通りである。

いくつかの実施態様において、スキーム２に従って式Ｉのポリマー誘導体を調製することができる。「Ｈａｌｏｇｅｎ」は、Ｉ、ＢｒおよびＣｌからなる群から選ばれ、変数ｎ、Ｒ^１、Ｒ^２、ＹおよびＺは、本明細書に定義されている通りである。

合成の第１ステップにおいて、塩基の存在下で化合物１をジエチレングリコールと反応させて化合物６を形成させる。適当な塩基は、アルカリ金属水素化物（例えば水素化ナトリウム、水素化カリウムおよび類似物）、かさ高いアミド（例えばリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）および類似物）、トリアルキルアミン（例えばＤＩＰＥＡ、ＴＥＡおよび類似物）、アルコキシド（例えばカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドおよび類似物）ならびに無機塩基（例えば水酸化セシウム、炭酸セシウムおよび類似物）を含む。

合成の第２ステップにおいて、化合物６のジエチレングリコール部分をスルホン酸エステル活性化モノメトキシポリ（エチレングリコール）との求核置換反応によって延長して化合物７を形成させる（例えば国際公開第２００６／０９９７９４号参照）。適当なスルホン酸エステル活性化基は、例えばメチルスルホネート（ｍＰＥＧ−ＯＭｓ）、フルオロフェニルスルホネート（ｍＰＥＧ−ＯＴｓ）、トリフレート、トシレートおよび類似物である。合成の第３ステップにおいて、酸の存在下で化合物７を脱保護してカルボン酸化合物８を形成させる。適当な酸は、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、塩酸（ＨＣｌ）および類似物を含む。合成の第４ステップにおいて、化合物８を、活性化基（Ｙ）を有する化合物と反応させて化合物９を形成させる。適当な化合物は、本明細書に記載されている活性化基を有するもの、例えば、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、１−ベンゾトリアゾリルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、ｐ−ニトロフェノキシ、２−チオキソチアゾリジン−３−イルおよびイミダゾリル）である。合成の第５ステップにおいて、化合物９の活性化基Ｙを４−ヒドロキシベンジルアルコールで置換して化合物１０を形成させる。合成の最終ステップにおいて、化合物１０を二重活性化カルボニル、例えば本明細書に記載されているかまたは表３に列挙されている任意の二重活性化カルボニル化合物（例えば炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、表３の化合物ｂ、ｃおよびｄ）および塩基とのカップリング反応に付してポリマー誘導体ＩＡを生じさせる。適当な塩基は、この反応を触媒することができる任意の塩基、例えばトリアルキルアミンおよび選ばれた窒素複素環化合物（例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）および類似物を含む。

表４に、スキーム２の化合物１およびＩＡの例を示す。

スキーム３に、特定の実施態様における表４からのポリマー誘導体ＩＡｖｉｉの形成のための合成プロトコルを示す。

合成の第１ステップにおいて、メトキシＰＥＧをメタンスルホニルクロリドで活性化してモノメトキシポリ（エチレングリコール）メタンスルホネート（ｍＰＥＧ−ＯＭｓ）を形成させる。合成の第２ステップにおいて、ｍＰＥＧ−ＯＭｓをジエチルブチルマロネートおよび塩基で処理する。化合物１１を形成する適当な塩基は、アルカリ金属水素化物（例えば水素化ナトリウム、水素化カリウムおよび類似物）、かさ高いアミド（例えばリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）および類似物）、トリアルキルアミン（例えばＤＩＰＥＡ、ＴＥＡおよび類似物）、アルコキシド（例えばカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドおよび類似物）、ならびに無機塩基（例えば水酸化セシウム、炭酸セシウムおよび類似物）を含む。ステップ３において、アルカリ金属水酸化物（例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウム）などの塩基の存在下で化合物１１を加水分解して化合物１２を形成させる。ステップ４において還流条件下で化合物１２を脱炭酸して化合物８ｖｉｉを形成させる。ステップ５において、化合物８ｖｉｉを２−チオキソチアゾリジン−３−イル部分で活性化して９ｖｉｉを形成させる。合成の第６ステップにおいて、９ｖｉｉのチアゾリジン部分を４−ヒドロキシベンジルアルコールで置換して化合物１０ｖｉｉを形成させる。合成の最終ステップにおいて、化合物１０ｖｉｉを二重活性化カルボニル、例えば炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、または表３に挙げられている化合物（例えばｂ、ｃおよびｄ）との塩基存在下のカップリング反応に付してポリマー誘導体ＩＡｖｉｉを提供する。適当な塩基は、この反応を触媒することができる任意の塩基、例えばトリアルキルアミンおよび選ばれた窒素複素環化合物（例えばトリエチルアミン（ＴＥＡ）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）、ピリジン、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（ＤＢＵ）および類似物）、例えばトリアルキルアミン（例えばＤＩＰＥＡ、ＴＥＡまたは類似物を含む。

スキ−ム４に、別の特定の実施態様における表４からのポリマー誘導体ＩＡｉの調製のための合成プロトコルを示す。

スキーム４において、ｍはモノマー単位の数として定義され、分子量分布と整合する範囲の値（例えば４から１１，０００、または２０から５００の整数）を有する。

１つのポリマー誘導体（ＩＡｉ）は、約４０のｍを有し、スキーム４に従って以下のように合成される。塩基性条件下でＮ−スクシンイミジルエステル（１３）が４−ヒドロキシベンジルアルコールでエステル交換されて４−ヒドロキシメチルフェニルエステル１０ｉを生じさせる。Ｇｈｏｓｈら（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ３３， ２７８１−２７８４ （１９９２））の方法に従って塩基性条件下で化合物１０ｉを炭酸Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）で処理する。重炭酸塩水溶液で後処理し、続いてクロロホルム／エーテルから２回再結晶し、ＩＡｉを白色の固体として得る。実施例５において、化合物の合成手順の詳細およびキャラクタリゼーションをさらに記載する。

本発明の別の様相において、式ＩＩの化合物の調製のための方法が開示される。式Ｉの化合物を薬物と反応させることによって式ＩＩの化合物を調製することができる。

式ＩＩに示される、ポリマー誘導体と結合した薬物は、顕著に増加した半減期、向上した溶解性、減少したタンパク質分解酵素による分解を有する。後で薬物結合体からポリマー誘導体を放出させれば、本来の形の薬物を生じさせ、薬物の活性を回復させることが可能である。薬物結合体からのポリマー誘導体の放出は、スキーム５に示される多段階放出機構に従うと理論付けられる。式中、変数Ｒ^１、Ｒ^２、ＰＯＬＹＭＥＲ、ＸおよびＤＲＵＧは、式ＩＩにおいて定義されている通りである。

スキーム５の最初の加水分解ステップが反応の律速段階である。従って、薬物結合体からのポリマー誘導体の開裂の速度は、エステルの求電子炭素の近くの電子効果および立体障害を操作することによって調整することができる。

誘導効果を通してエステルのカルボニル炭素の電子密度を減少させることによって、薬物結合体からのポリマー誘導体の開裂速度を増加させることができる。エステルのカルボニル炭素に近い方に電気陰性原子Ｘを配置することによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度を減少させることができる。例えば、ｎ＝２のときよりｎ＝１のときの方が速い加水分解反応が起こる。原子Ｘの電気陰性度を増加させることによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに減少させることができる。例えば、Ｘが窒素のときよりＸが酸素のときの方が速い加水分解反応が起こる。

Ｒ^１および／またはＲ^２の電気陰性度を増加させることによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに減少させることができる。例えば、Ｒ^１がアルキルのときよりＲ^１がアリールのときの方が速い加水分解反応が起こる。Ｒ^１および／またはＲ^２を１つ以上の電子吸引部分で置換すると、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに減少させることができる。例えば、Ｒ^１が−ＣＨ_３のときよりＲ^１が−ＣＨ_２Ｆのときの方が速い加水分解反応が起こる。加水分解速度を増加させることができるＲ^１および／またはＲ^２上の置換基のいくつかの例は、フルオロ、クロロ、ブロモ、ヒドロキシル、アルコキシル、アミノ、アルケニル、アルキニル、ニトロ、シアノ、カルボニルおよびアリールを含む。Ｒ^１および／またはＲ^２上の電子吸引置換基の数を増加させることによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに減少させることができる。例えば、Ｒ^１が−ＣＨＦ_２のときよりＲ^１が−ＣＦ_３のときの方が速い加水分解反応が起こる。Ｒ^１および／またはＲ^２上の電子吸引部分をエステルのカルボニル炭素に近い方へ動かすことによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらにまたは代わりに、減少させることができる。例えば、Ｒ^１が２−フルオロエチルのときよりＲ^１が１−フルオロエチルのときの方が速い加水分解反応が起こる。

誘導効果を通じてエステルのカルボニル炭素の電子密度を増加させることによって、薬物結合体からのポリマー誘導体の開裂速度を減少させることができる。電気陰性原子Ｘをエステルのカルボニル炭素から遠い方へ配置することによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度を減少させることができる。例えば、ｎ＝１のときよりｎ＝２のときの方が遅い加水分解反応が起こる。原子Ｘの電気陰性度を減少させることによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに増加させることができる。例えば、Ｘが酸素のときよりＸが窒素のときの方が遅い加水分解反応が起こる。

Ｒ^１および／またはＲ^２の電子供与能力を増加させることによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに増加させることができる。例えば、Ｒ^１が−ＨのときよりＲ^１が−ＣＨ_３のときの方が遅い加水分解反応が起こる。Ｒ^１および／またはＲ^２を１つ以上の電子供与性部分で置換すると、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに増加させることができる。例えば、Ｒ^１が−ＣＦ_３より−ＣＨ_３で置換されているとき、Ｒ^１が−Ｈより−ＣＨ_３で置換されているときの方が遅い加水分解反応が起こる。アルキル基（例えばエチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチルおよびｔ−ブチル）は、水素と比較して加水分解速度を減少させることができるＲ^１および／またはＲ^２上の置換基の種類の１つの例である。Ｒ^１および／またはＲ^２上の電子供与置換基の数を増加させると、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに増加させることができる。例えば、Ｒ^１が１つのメチル基で置換されているときよりＲ^１が２つのメチル基で置換されているときの方が遅い加水分解反応が起こる。Ｒ^１および／またはＲ^２上の電子吸引性部分をエステルのカルボニル炭素から遠い方へ動かすことによって、エステルのカルボニル炭素の電子密度をさらに、または代わりに増加させることができる。例えば、Ｒ^１が１−フルオロエチルのときよりＲ^１が２−フルオロエチルのときの方が遅い加水分解反応が起こる。

エステルに対してアルファの炭素上のＲ^１および／またはＲ^２のかさ高さを増加させることを通じてエステルのカルボニル炭素における立体障害を増加させることによって、薬物結合体からのポリマー誘導体の開裂の速度を減少させることができる。例えば、Ｒ^１＝Ｒ^２＝ＨのときよりＲ^１が−ＣＨ_３、Ｒ^２がＨのときの方が遅い加水分解反応が起こる。同様に、Ｒ^１がｎ−プロピル、Ｒ^２がＨのときよりＲ^１がｎ−ブチル、Ｒ^２がＨのときの方が遅い加水分解が起こる。エステルに対してアルファの炭素上の置換基の数を増加させることによって、エステルのカルボニル炭素における立体障害をさらに、または代わりに増加させることができる。例えば、エステルに対してアルファの炭素が１つのメチル基（Ｒ^１＝ＣＨ_３、Ｒ^２＝Ｈ）より２つのメチル基（例えばＲ^１＝Ｒ^２＝ＣＨ_３）で置換されているときの方が遅い加水分解反応が起こる。

エステルに対してアルファの炭素上のＲ^１および／またはＲ^２のかさ高さを減少させることを通じてエステルのカルボニル炭素における立体障害を減少させることによって、薬物結合体からのポリマー誘導体の開裂速度を増加させることができる。例えば、Ｒ^１が−ＣＨ_３、Ｒ^２がＨのときよりＲ^１＝Ｒ^２＝Ｈのときの方が速い加水分解反応が起こる。Ｒ^１がｎ−ブチル、Ｒ^２がＨのときより、Ｒ^１がｎ−プロピル、Ｒ^２がＨのときの方が速い加水分解が起こる。エステルに対してアルファの炭素上の置換基の数を減少させることによって、エステルのカルボニル炭素における立体障害をさらに、または代わりに減少させることができる。例えば、エステルに対してアルファの炭素が２つのメチル基（例えばＲ^１＝Ｒ^２＝ＣＨ_３）より１つのメチル基（Ｒ^１＝ＣＨ_３、Ｒ^２＝Ｈ）で置換されているときの方が速い加水分解反応が起こる。

開裂溶液のｐＨを調節することによっても、薬物結合体からのポリマー誘導体の放出をさらに、または代わりに調整することができる。例えば、薬物結合体からのポリマー誘導体の加水分解の速度は、７．５のｐＨにおけるより８．５のｐＨにおける方が速い。

本発明のさらに別の様相は、本発明の薬物結合体を薬学的に許容される賦形剤、例えば希釈剤またはキャリヤーと共に含む医薬品組成物を目的とする。本発明において用いるのに適している医薬品組成物は、意図する目的を実現するのに有効な量の薬物結合体を投与することができるものを含む。薬物結合体の投与は、任意の経路、例えば経口、注射、吸入および皮下を通してであってよい。製剤は、液体、懸濁液、錠剤、カプセル、マイクロカプセルおよび類似物であってよい。

適当な薬学的製剤処方は、投与経路および所望の投薬量に応じて当業者によって決定されてよい。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， １４３５−７１２ （１８ｔｈ ｅｄ．， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ， Ｅａｓｔｏｎ， Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ， １９９０）参照。製剤は、投与された剤の物理状態、安定性、インビボ放出の速度およびインビボクリアランスの速度に影響を及ぼすことがある。投与の経路に応じ、体重、体表面積または器官サイズによって適当な投与量を計算してよい。適切な治療投与量を決定するのに必要なさらに精密な計算が、特に動物またはヒトの治験を通して入手可能な薬物動態学的データを考慮して不必要な実験をせずに当業者によって日常業務として行われる。

本明細書に開示されている薬物結合体は、カプセル化してコアと、微粒子コアに結合したコーティングとを含む微粒子の形にすることができる。コアは薬物結合体で構成され、コーティングは界面活性剤、抗体および／または当業者に知られている任意の他の適当なコーティング材料で構成されている。粒子は、適当な分析法、例えば示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）またはＸ線回折によって測定して非晶質、半結晶、結晶、またはそれらの組み合わせであってよい。粒子は、投与前に、均質化プロセスおよび／またはマイクロ沈殿／均質化プロセスによって均質化してよい。

コーティングした微粒子は、動的光散乱法（例えば光相関分光法、レーザー回折法、低角レーザー光散乱法（ＬＡＬＬＳ）、媒質−角度レーザー光散乱法（ＭＡＬＬＳ））、光暗黒化法（例えばＣｏｕｌｔｅｒ法）、レオロジーまたは顕微鏡法（光または電子）によって測定して約１ｎｍから約２μｍの平均有効粒子サイズを有してよい。好ましい平均有効粒子サイズは、意図される化合物の投与経路、調合、溶解性、毒性および生物利用可能性などの要因に依存する。他の適当な粒子サイズは、約１０ｎｍから約１μｍ、約５０ｎｍから約５００ｎｍ、および／または約１００ｎｍから約２５０ｎｍを含むがそれらに限定されない。

コーティングした微粒子は、本明細書に開示されている薬物結合体を含んでいる固体粒子または半固体粒子であってよい。一般に、コーティングした粒子は、少なくとも５％（重量／重量）の薬物結合体、例えば、少なくとも１０％（重量／重量）、少なくとも２５％（重量／重量）、少なくとも５０％（重量／重量）および／または少なくとも７５％（重量／重量）以上の薬物結合体からなる。

本明細書に記載されている微粒子の薬物結合体コアを調製するためのプロセスは、多数の技法によって実現することができる。代表的な、しかし非包括的な、微粒子の薬物結合体コアを調製するための技法を列挙すると、エネルギー添加技法（例えばキャビテーション、剪断、衝撃力）、沈殿法（例えばマイクロ沈殿法、乳濁液沈殿法、溶媒−反溶媒沈殿法、相反転沈殿法、ｐＨシフト沈殿法、注入沈殿法、温度シフト沈殿法、溶媒蒸発沈殿法、反応沈殿法、圧縮流体沈殿法、低温流体への噴霧法、タンパク質ナノスフェア／マイクロスフェア沈殿法）、ならびに医薬品組成物の粒子分散液を調製するための別の方法を含み、これらのすべては、２００９年３月５日および２００９年５月１５日にそれぞれ出願の米国特許出願第１２／３９８，８９４号および同第１２／４６７，２３０号に記載され、参照によって本明細書に組み込まれる。

本発明のこの実施態様の微粒子にコーティングを施すためのプロセスは、当業者に知られているさまざまな技法によって実現することができる。コーティングは、共有結合および／または非共有結合（例えば共有結合、イオン相互作用、静電相互作用、双極子−双極子相互作用、水素結合、ファンデルワールス力、疎水性／疎水性分域相互作用、架橋および／または任意の他の相互作用）を含むさまざまな結合によって粒子と結合させてよい。

コーティングは、単一の界面活性剤を含んでもよく、界面活性剤の組み合わせを含んでもよい。界面活性剤は、さまざまな既知の陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤、双性イオン界面活性剤、非イオン界面活性剤および表面活性生物改質剤から選んでよい。適当な界面活性剤は、ポロキサマー、リン脂質、ポリエチレングリコール結合リン脂質およびポリソルベートを含むがそれらに限定されない。あるいは、コーティングは、実質的に界面活性剤を含んでいなくてもよい（例えば２重量パーセント未満の界面活性剤、１重量パーセント未満の界面活性剤または０．５重量パーセント未満の界面活性剤）。

語句「薬学的に許容される」および「薬理学的に許容される」は、動物またはヒトに投与したとき、薬害反応、アレルギー反応または他の厄介な反応を生じさせない化合物および組成物を指す。本明細書で用いるとき、「薬学的に許容されるキャリヤー」は、ありとあらゆる溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤および類似物を含む。薬学的に活性な物質のためのそのような賦形剤の使用は、当分野で周知である。治療用組成物と相溶性でない場合を除いて、治療用組成物中における任意の従来の媒質または薬剤の使用が包含される。補助活性成分も組成物に組み込んでよい。

本明細書において用いるとき、「薬学的に許容される塩」は、例えば塩基付加塩および酸付加塩を含む。

薬学的に許容される塩基付加塩は、金属またはアミン、例えばアルカリ金属およびアルカリ土類金属または有機アミンによって形成してよい。化合物の薬学的に許容される塩は、薬学的に許容されるカチオンによって調製してもよい。適当な薬学的に許容されるカチオンは当業者に周知であり、アルカリ、アルカリ土類、アンモニウムおよび第４級アンモニウムカチオンを含む。炭酸塩または炭酸水素塩も可能である。

薬学的に許容される酸添加塩は、無機酸または有機酸の塩を含む。適当な酸塩の例は、塩酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、サリチル酸塩、硝酸塩、リン酸塩を含む。

本発明は、以下の実施例によって例示されるがそれらに限定されない。

一般実験手順
スキーム４の化合物１３、１０ｉおよびＩＡｉのための展開溶媒としてクロロホルム：メタノール（７：１）を用いて２．５×７．５ｃｍ×２５０μｍ（層）のシリカゲル６０Ｆ_２５４プレート（ＥＭＤ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）上で薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）を行った。スポットを紫外線およびヨウ素によって可視化した。陽イオンモードで動作するＶｏｙａｇｅｒ ＤＥＳＴＲ ＴＯＦ質量分析計中で２，５−ジヒドロキシ安息香酸マトリックスを用いるＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳによって質量スペクトルを得た。ＩＡｉの後処理に重炭酸ナトリウム希薄水溶液（ｐＨ８．２６）を用い、重炭酸ナトリウム（１．１ｇ）を水に溶解し、２５０ｍＬの最終体積に希釈することによって調製した。すべての他の化合物については個々に示すようにＴＬＣを行った。ｍＰＥＧ含有化合物の質量スペクトルは、Ｖｏｙａｇｅｒ ＤＥ ＳＴＲ ＴＯＦ質量分析計またはＢｒｕｋｅｒ Ｕｌｔｒａｆｌｅｘ ＩＩＩ ＴＯＦ／ＴＯＦ質量分析計の中の２，５−ジヒドロキシ安息香酸および０．１Ｍ ＫＣｌマトリックスを用いるＭＡＬＤＩ ＴＯＦ ＭＳによって得た。１ｉｉを除く低分子量化合物の質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑ−ＴＯＦマイクロ質量分析計またはＷａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑ−ＴＯＦ ＡＰＩ ＵＳ質量分析計中、０．１％ギ酸を用いるＥＳＩ−ＭＳによって得た。１ｉｉに関する質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ／Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑ−ＴＯＦ ＡＰＩ ＵＳ質量分析計から、メタノール中で得た。^１Ｈ−ＮＭＲは、Ｂｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ Ｉ ４００またはＢｒｕｋｅｒ Ａｖａｎｃｅ ＩＩＩ ６００スペクトロメータを用いて得た。すべてのｐｐｍ値は、残留ＣＨＣｌ_３またはＤＭＳＯに対するものである。

（実施例１）
化合物１ｉ、１ｉｉ、１ｖｉｉおよび１ｘｉｖの合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−２−メチルブタノエート（１ｉ）の合成

α−メチルブチロ−γ−ラクトン（８６．５ｇ、０．８６４モル）と三臭化リン（ＰＢｒ_３）（８６ｍＬ、０．９１２モル）との混合物をアルゴン下１５０℃から１６０℃で３時間撹拌した。混合物を周囲温度に冷却し、無水ベンゼン（４００ｍＬ）を加えた。得られた混合物を加熱して５分間還流させ、周囲温度に冷却した。追加の無水ベンゼン（４０ｍＬ）の助けを借りて混合物の上澄みを乾いた滴下ロートへ注意深く移した。ｔｅｒｔ−ブタノール（ｔ−ＢｕＯＨ）（３２０ｇ、４．３２モル）を急速に撹拌しながら滴下ロートの溶液を素早く加え、室温の水浴を用いて内温を１５℃から３０℃に保った。溶液をｔ−ＢｕＯＨにすべて加えた後、得られた混合物を周囲温度で３０分間撹拌してから、水、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）および氷の混合物に注いだ。有機層を分離し、氷冷水で洗浄してから、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で、水層のｐＨが８から９になるまで複数回洗浄した。次に、有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。残留物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサン中の酢酸エチル（０から５％）で溶離した。適切な画分を合わせ、濃縮して１ｉを透明な油（５８ｇ、２８％収率）として得た。

ＭＳ （ＴＯＦ） ＥＳＩ＋： ［Ｍ＋Ｎａ］^＋， ２５９．０１， ２６１．０２ Ｄａ。

ｔｅｒｔ−ブチル４−ブロモ−２，２−ジメチルブタノエート（１ｉｉ）の合成

−７８℃のα，α−ジメチルブチロ−γ−ラクトン（５０．６７ｇ、０．４４４モル）を入れたフラスコにＨＢｒ（３８ｇ、０．４６９モル）を加えて撹拌した。ＨＢｒを加えた後、反応混合物を周囲温度に戻した。反応溶液は紫色の固体に変化し、ジクロロメタンに溶解させた。得られた溶液を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固して粗製１４を若干黒っぽい固体（９０．８ｇ）として得た。化合物１４を、それ以上精製しないで反応の次のステップに用いた。

ステンレス鋼圧力容器の中に置いた凍結乾燥用容器中で、１４（５０．８ｇ、０．２６０モル）と９５％硫酸（５．０ｇ、０．０５モル）との混合物を撹拌した。凍結乾燥用容器は、ガラスライナーの役を務めた。この仕掛けを約−５０℃に保持した。イソブテン（５０ｇ、０．８９３モル）を加え、圧力容器を密閉し、周囲温度に戻した。周囲温度で３日間撹拌を続けた。その後、注意深く圧力を放出させ、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（ＴＢＭＥ）で残留物を希釈した。有機層を分離し、氷冷した重炭酸ナトリウム水溶液で、水層のｐＨが８から９になるまで複数回洗浄した。次に、有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。残留物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサン中のジクロロメタン（０から２５％）で溶離した。適切な画分を合わせ、濃縮して１ｉｉを透明な油（２９．５ｇ、２つのステップで４５％の総合収率）として得た。このプロセスにおいて、１７ｇの出発原料α，α−ジメチルブチロ−γ−ラクトンも回収した。１ｉｉのスペクトルデータを下記に挙げる。質量スペクトルは、作りたてのメタノール溶液から得た。

ＭＳ （ＴＯＦ） ＥＳＩ＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋，２７３．０４， ２７５．０３ Ｄａ。

ｔｅｒｔ−ブチル２−（２−ブロモエチル）ヘキサノエート（１ｖｉｉ）の合成

アルゴン下、室温で撹拌しながら、ｔ−ブタノール（６２６ｇ、８．４４モル）にヘキサノイルクロリド（１６０ｍＬ、１．１６モル）を速やかに加えた。反応温度は、最初は低下したが、ヘキサノイルクロリドの添加が進むにつれて上昇し始めた。次に、反応容器を室温の水浴上に置いて温度を約２５から３５℃に維持した。添加が完了したら、水浴を取り外し、反応混合物を周囲温度でさらに２時間撹拌した。次に、反応混合物をヘキサンと氷水との混合物に注いだ。有機層を分離し、１０％Ｎａ_２ＣＯ_３および１０％ＮａＯＨ（１：１）を含む水溶液で洗浄し、塩水で２回洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濃縮乾固して１５を透明な油（１７３ｇ、８６．５％収率）として得た。これを精製しないでそのまま用いた。

−７８℃、アルゴン下でＴＨＦ（０．８Ｌ）中のジイソプロピルアミン（３７ｍＬ、２６４ミリモル）の溶液にｎ−ブチルリチウム（ヘキサン中２．５Ｍ、１０６ｍＬ、２６５ミリモル）を３０分間かけて滴下して加えた。混合物を−７８℃でさらに２０分間撹拌し、化合物１５（３９ｇ、２２６ミリモル）を加えた。３０分間かけて混合物を−２０℃に温まらせ、混合物に１，２−ジブロモエタン（４７ｍＬ、５４５ミリモル）を１度に加えた。１，２−ジブロモエタンを加えた後、１．５時間かけて反応混合物を０℃に温まらせ、次にｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（２Ｌ）と氷冷ＮａＨＳＯ_４（１Ｍ、４００ｍＬ）水溶液との混合物に注いだ。有機層を分離し、ＮａＨＳＯ_４水溶液（１Ｍ、１００ｍＬ）および水（３００ｍＬ）で洗浄し、次に飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液で、水層のｐＨが８から９になるまで複数回洗浄した。次に、有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固して粗製の１ｖｉｉを得た。粗生成物を高真空（１ｍｍＨｇ）下で蒸留し、約８８℃から１０５℃の画分を集めた。生成物（１３．５ｇ）をジクロロメタン／ヘキサン１：１を溶離液として用いるフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）によってさらに精製した。適切な画分を合わせ、濃縮して純化合物１ｖｉｉを透明な油（８．２ｇ、１３％収率）として得た。

ＭＳ （ＴＯＦ） ＥＳＩ＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋，３０１．１２， ３０３．１２ Ｄａ。

ｔｅｒｔ−ブチル２−（ブロモメチル）ヘキサノエート（１ｘｉｖ）の合成

メタノール（１５０ｍＬ）中のジエチルブチルマロネートの溶液を撹拌しながら、メタノール（１５０ｍＬ）中の水酸化バリウム（３２．８ｇ、１９１ミリモル）を加えた。１０分後、反応混合物は高粘度の懸濁液となり、撹拌は停止した。反応混合物を室温で３時間放置し、次に、減圧下で濃縮して小さな体積にした。得られた残留物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル中に懸濁させ、ろ過によって固体を集めた。集めた固形をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（４００ｍＬ）と１Ｍ ＨＣｌ（４００ｍＬ）との混合物に懸濁させ、３時間撹拌した。有機層を分離し、水層をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで抽出した。ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル層を集め、合わせた層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固して１６を白色固体（１８ｇ、７８％収率）として得た。これを精製しないでそのまま用いた。

１６（１５５ｇ、０．９６９モル）、３７％ホルムアルデヒド（３００ｍＬ、４．０３モル）およびジエチルアミン（１９０ｍＬ、１．８３モル）の混合物を周囲温度で約１０分間撹拌し、２時間還流させ、次に周囲温度に冷却した。減圧下で反応混合物を小さな体積に濃縮した。残留物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルと１Ｍ ＨＣｌとの間で分配した。有機層を分離し、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固して１７を透明な油（１０３．４ｇ、８３％収率）として得た。

１７（１０３．４ｇ、０．８１５モル）とＨＢｒ（酢酸中３１％、０．４Ｌ、２．１４モル）との混合物を周囲温度で一夜撹拌した。反応混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルと氷水との混合物に注いだ。有機層を分離し、１Ｍ ＨＣｌで洗浄し、塩水で洗浄してから硫酸ナトリウム上で乾燥した。乾燥した有機層を濃縮乾固して化合物１８を黄色の油（１５７ｇ、９２％収率）として得た。

ステンレス鋼圧力容器の中に置いた凍結乾燥用容器の中で１８（２７ｇ、０．１２９モル）と９５％硫酸（３．２ｇ、０．０３１モル）との混合物を撹拌した。凍結乾燥用容器は、ガラスライナーとしての役を務めた。仕掛けを約−５０℃に維持した。イソブテン（４５ｇ、０．８０４モル）を加え、圧力容器を密閉し、周囲温度に温まらせた。撹拌を周囲温度で２日間続けた。その後、圧力を注意深く放出させ、反応混合物をｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテルで希釈した。有機層を分離し、氷冷重炭酸ナトリウム水溶液で、水層のｐＨが８から９になるまで複数回洗浄した。次に、有機層を塩水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固した。得られた残留物をシリカゲルカラムにかけ、ヘキサン中のジクロロメタン（０から２５％）で溶離した。適切な画分を合わせ、濃縮して純化合物１ｘｉｖを透明な油（１８ｇ、５２％収率）として得た。

ＭＳ （ＴＯＦ） ＥＳＩ＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋，２８７．０８， ２８９．０９ Ｄａ。

（実施例２）
スキーム２の中間体の合成
ｔｅｒｔ−ブチル４−（２−（２−ヒドロキシエトキシ）エトキシ）−２，２−ジメチルブタノエート（６ｉｉ）の合成

以下の手順をアルゴン下で実行した。Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋコンデンサーを用いる共沸蒸留によって、ジエチレングリコール（１８ｍＬ、０．１９モル）とトルエン（５０ｍＬ）との混合物を乾燥した。残留物を室温に冷却し、無水ＤＭＦ（４０ｍＬ）を加えた。次に、氷浴を用いて溶液を０℃に冷却し、ＮａＨ（鉱油中６０％分散物、８２３ｍｇ、２１ミリモル）を加えた。５分後、氷浴を取り外し、混合物を室温に温まらせた。１時間５０分後、ｔ−ブチル４−ブロモ−２，２−ジメチルブチレート（３．０４６ｇ、１２．１ミリモル）１ｉｉをＤＭＦ（２ｍＬ）とともに混合物に加えた。反応混合物を室温で一夜撹拌した。次に、反応混合物を水に加え、ジクロロメタンで抽出した。合わせた有機抽出液を水で洗浄し、塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、ろ過し、真空中で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ヘキサン１：４から４：１）によって６ｉｉを透明な油（２４０ｍｇ、７．２％収率）として得た。この油は、ＴＬＣによって純粋であった。追加の１４２ｍｇの物質（透明な油）を得たが、この物質は、ＴＬＣによって高い方のＲ_ｆのスポットとして可視化することができる不純物を含んでいた。

ＥＳＩ（＋）ＭＳ：［Ｍ＋Ｎａ］^＋ ＝ ２９９．１６； ［Ｍ＋Ｋ］^＋ ＝ ３１５．１７ダルトン。

２−（２−メトキシポリエトキシ）エチル）ヘキサン酸（８ｖｉｉ）の合成

Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋコンデンサーを用いる共沸蒸留によってジエチレングリコール（３３ｇ、０．３２モル）とトルエン（１２０ｍＬ）との混合物を乾燥し、得られた残留物を室温に冷却した。残留物に無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、５０ｍＬ）を加え、混合物を０℃に冷却した。次に、水素化ナトリウム（ＮａＨ、１０８０ｍｇ、鉱油中６０％、２７ミリモル）を加え、混合物を１時間撹拌した。化合物１ｖｉｉ（５．０ｇ、１８ミリモル）を加え、混合物を室温で一夜撹拌した。次に、反応混合物を水に注ぎ、ジクロロメタンで抽出した。有機層を塩水で洗浄し、Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濃縮乾固した。得られた残留物をフラッシュクロマトグラフィーカラム（シリカゲル）にかけ、ジクロロメタン中のメタノール（５％から１０％）で溶離した。適切な画分を集め、濃縮して化合物６ｖｉｉを透明な油（３．０ｇ、５５％収率）として得た。

ＭＳ （ＴＯＦ） ＥＳＩ＋：［Ｍ＋Ｎａ］^＋，３２７．１９ Ｄａ。

Ｄｅａｎ−Ｓｔａｒｋトラップを用いる共沸蒸留によってトルエン（１１０ｍＬ）中のｍＰＥＧ−ＯＭｓ（約５０００Ｄａ、４．１ｇ、０．８２ミリモル）の溶液を乾燥し、７０ｍＬ分のトルエンを取り除いた。別のフラスコ中で化合物６ｖｉｉ（２．５ｇ、８．２３ミリモル）をトルエン（１００ｍＬ）に溶解し、共沸蒸留によって混合物を乾燥し、６０ｍＬ分のトルエンを取り除いた。得られた残留物を０℃に冷却し、ＮａＨ（５００ｍｇ、１２．４ミリモル）を加えて混合物を形成させた。この混合物を０℃で０．５時間撹拌した。乾燥したｍＰＥＧ−ＯＭｓの溶液を室温でこの混合物に加え、混合物を一夜還流させた。次に、反応物を室温に冷却し、濃縮して残留物とし、最小限の量のジクロロメタン（ＤＣＭ）中に再溶解した。この溶液にＴＢＭＥを加え、得られた沈殿物をろ過によって集めた。沈殿物をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解し、水、次いで塩水で洗浄した。溶液をＮａ_２ＳＯ_４上で乾燥し、濃縮した。残留物にＴＢＭＥを加えて生成物７ｖｉｉを淡黄色の固体（３．６ｇ、約８２％収率、例えば国際公開第２００６／０９９７９４号参照）として得た。ＴＬＣ（ＭｅＯＨ／ＣＨＣｌ_３／ＮＨ_４ＯＨ１０／９０／１）は、少量の不純物とともに、７ｖｉｉの存在を示した。化合物７ｖｉｉは、さらには精製しないでそのまま次のステップに用いた。

化合物７ｖｉｉ（３．６ｇ）をＤＣＭ／トリフルオロ酢酸（２０ｍＬ、１：１）に溶解し、溶液を室温で一夜撹拌した。反応混合物を濃縮し、得られた残留物をＤＣＭに再溶解し、水で洗浄し、次に塩水で洗浄した。溶液を硫酸ナトリウム上で乾燥し、小さな体積に濃縮し、ＴＢＭＥで希釈した。沈殿物をろ過によって集め、１から２％のＮＨ_４ＯＨを含むＤＣＭ中のメタノール（７％から１０％）で溶離するフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）によって精製した。適切な画分を集め、濃縮して純粋な８ｖｉｉ（１．６ｇ、最後の２つのステップについて３１％収率を得た。

（実施例３）
４−（ヒドロキシメチル）フェニル２−（２−メトキシポリエトキシ）エチル）ヘキサノエート（１０ｖｉｉ）の合成

ステップ１： ｍＰＥＧ （５０００）メタンスルホネート（ｍＰＥＧ−ＯＭｓ）の調製
参照によって本明細書に組み込まれる国際公開第２００４／０６３２５０号に記載されているようにモノメトキシポリ（エチレングリコール）メタンスルホネート（約５０００Ｄａ）を調製した。詳しくは、ｍＰＥＧ−ＯＨ（約５０００ダルトン、３０グラム）をジクロロメタン／トルエン中でメタンスルホニルクロリド（ＭｓＣｌ、４．３当量）およびトリエチルアミン（ＴＥＡ、４．８当量）と反応させて３０グラムのｍＰＥＧ−ＯＭｓを得た。

ステップ２： ｍＰＥＧ（５０００）−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ｎ−Ｃ_４Ｈ_９）（ＣＯ_２Ｅｔ）_２（１１）の調製
反応を強制的に完結させるべくマロネートおよびＮａＨの過剰量をさらに多くなるように変更した、国際公開第２００４／０６３２５０号に記載されている方法に従って、化合物ｍＰＥＧ−ＯＭｓをトルエン／１，４−ジオキサン（１：１、８００ｍＬ）中、ジエチルブチルマロネート（４０当量）およびＮａＨ（４０当量）で処理した。反応混合物を一夜還流させてから濃縮して小さな体積にした。反応混合物にジクロロメタンおよび氷水を加えて二相系を生じさせた。濃ＨＣｌで水層をｐＨ１．０に調整し、両層を振盪し、有機層を分離し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮して小さな体積にした。有機層にｔ−ブチルメチルエーテルを加え、得られた沈殿物をろ過によって集めてｍＰＥＧ（５０００）−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ｎ−Ｃ_４Ｈ_９）（ＣＯ_２Ｅｔ）_２（１１、４０ｇ）を得た。

ステップ３： ｍＰＥＧ（５０００）−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ｎ−Ｃ_４Ｈ_９）（ＣＯ_２Ｈ）_２（１２）の調製
化合物１１を水（１００ｍＬ）の中のＮａＯＨ（８．１ｇ）およびＮａＣｌ（１．３ｇ）の水溶液と合わせ、８０℃で一夜加熱した。次に、溶液を周囲温度に冷却し、ジクロロメタンを加えて二相系を形成させ、水層を濃ＨＣｌでｐＨ１．８から２．０に調整した。二相系の両層を振盪し、有機層を分離した。水層をジクロロメタンで逆抽出し、有機層を集め、硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮して小さな体積にした。この小さな体積の有機層にｔ−ブチルメチルエーテルを加え、得られた沈殿物をろ過によって集めて１２（２９ｇ）を白色の固体として得た。

ステップ４： ｍＰＥＧ（５０００）−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ｎ−Ｃ_４Ｈ_９）（ＣＯ_２Ｈ）（８ｖｉｉ）の調製
国際公開第２００４／０６３２５０号に記載されているようにジオキサン（１５０ｍＬ）中の化合物１２（２９ｇ）を処理した。反応混合物を一夜還流させ、室温に冷却し、濃縮乾固した。得られた残留物を少量のジクロロメタンに溶解し、ｔ−ブチルメチルエーテルを加え、得られた沈殿物をろ過によって集めて８ｖｉｉ（２７．４ｇ）を白色の固体として得た。ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：ＮＨ_４ＯＨ（９０：１０：１）を展開溶媒として用いて活性化シリカゲルプレート上でＴＬＣ分析を行った。化合物８ｖｉｉは、基本的に純粋な化合物（Ｒ_ｆ約０．４５）のようであり、ｍＰＥＧ−ＯＨと同時溶離する高めのＲ_ｆ（約０．５０）の成分によってごくわずかに汚染していた。

ステップ５： ｍＰＥＧ（５０００）−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ｎ−Ｃ_４Ｈ_９）（Ｃ（＝Ｏ）ｔｚ）（９ｖｉｉ）（ｔｚ＝チアゾリジン−２−チオン−３−イル）の調製
化合物８ｖｉｉ（２．０ｇ ０．４ミリモル）、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、９８ｍｇ、０．８ミリモル）および２−メルカプトチアゾリン（９５ｍｇ、０．８ミリモル）を無水ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解し、溶液を０℃に冷却した。１５分間撹拌した後、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ−ＨＣｌ、１５３ｍｇ、０．８ミリモル）を加えた。０℃から室温へ撹拌を一夜続けた。ＴＬＣ（９０：１０：１ ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：ＮＨ_４ＯＨ）は、ステップ４からのｍＰＥＧ（５０００）−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃ（ｎ−Ｃ_４Ｈ_９）（ＣＯ_２Ｈ）が完全に消費されたことを示した。粗生成物にｔ−ブチルメチルエーテルを加え、得られた沈殿物をろ過によって集め、乾燥して９ｖｉｉを黄色の固体（２ｇ）として得た。

ステップ６： ４−（ヒドロキシメチル）フェニル２−（２−（２−メトキシポリエトキシ）エチル）ヘキサノエート（１０ｖｉｉ）の調製
化合物９ｖｉｉ（１．０ｇ、０．２ミリモル）、４−ヒドロキシベンジルアルコール（９８ｍｇ、０．８ミリモル）およびＤＭＡＰ（９８ｍｇ、０．８ミリモル）を無水ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、２４時間還流した。反応混合物を室温に冷却し、それにｔ−ブチルメチルエーテルを加え、得られた沈殿物をろ過によって集めた。沈殿物をジクロロメタンに溶解し、溶液を０．５Ｎ ＨＣｌ、次に塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウム上で乾燥し、濃縮乾固して白色の固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）によって固体をさらに精製し、ＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：ＮＨ_４ＯＨ（９５：５：０．５から９０：１０：１）で溶離した。適切な画分を集め、濃縮して１０ｖｉｉ（６００ｍｇ）を白色の固体として得た。^１Ｈ ＮＭＲスペクトルに痕跡量のＤＭＡＰが見られた。

（実施例４）
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）−メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（ＩＡｉ）の合成

ステップ１： ２，５−ジオキソピロリジン−１−イル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（１３）の合成
米国特許第６，９９２，１６８号に報告されている方法の変更形によって化合物８ｉおよび１３を調製した。詳しくは、該特許においては結晶化だけによって化合物８ｉを得ているが、本発明においてはＣＨＣｌ_３：ＭｅＯＨ：ＮＨ_４ＯＨ（９５：５：０．５および９０：１０：１）を溶離液として用いるフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル）によってさらに精製した。適切な画分を集め、濃縮して純８ｉを得た。

化合物８ｉ（６．０ｇ、１．２ミリモル）を６０ｍＬの塩化メチレンに溶解した。この溶液に１．６ｍＬの塩化メチレン中のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ、１８０ｍｇ、１．６ミリモル）とＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ、３３０ｍｇ、１．６０ミリモル）を加えた。混合物を一夜撹拌した後にろ過し、エチルエーテル（２８０ｍＬ）を加えて生成物を結晶化させた。混合物を０から５℃で２時間冷却し、沈殿物をろ過によって集め、真空下４０℃で３時間乾燥して化合物１３（５．５８ｇ、９３％収率）を白色の粉体として得た。

ステップ２： ４−（ヒドロキシメチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（１０ｉ）の合成
参照によって本明細書に全体が組み込まれるＧｒｅｅｎｗａｌｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， １９９９， ４２（１８）， ３６５７−３６６７に報告されている手順の変更形によって１３から１０ｉへの変換を行った。５５ｍＬの塩化メチレン中の１３（５．５ｇ、１．１ミリモル）の溶液に、ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、５５０ｍｇ、４．４ミリモル）および４−ヒドロキシベンジルアルコール（５５０ｍｇ、４．４ミリモル）を加えた。混合物を２４時間還流させ、室温に冷却し、さらに４０時間撹拌し、ろ過した。ろ液を蒸発乾固し、得られた残留物を熱い２−プロパノール（１００ｍＬ）に溶解した。溶液を０から５℃に３時間冷却し、沈殿物を形成させた。沈殿物をろ過によって集め、２−プロパノール（３０ｍＬ）およびエチルエーテル（５０ｍＬ）で洗浄し、真空下４５℃で２．５時間乾燥して１０ｉ（４．９３ｇ、９０％）を白色の固体として得た。１３および１０ｉの両方のＭａｌｄｉ ＴＯＦ質量スペクトルを得た。既に記載した同じ同族体について、理論質量差と観測質量差とを比較した。こうして、同族体１０５について、１３および１０ｉの観測質量はそれぞれ４８９０．０および４８９９．２ダルトンであった。観測した差は９．２ダルトンである。非繰り返し単位についての理論的な差は９．０３ダルトンの増加である。従って、質量スペクトルデータは、予測される反応が起こったという主張を支持する。

ステップ３： ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）−メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（ＩＡｉ、ＭＷ約５０００ダルトン）の合成
Ｇｒｅｅｎｗａｌｄらの方法の変更形によって化合物１０ｉをＩＡｉに変換した。２０ｍＬの塩化メチレン中の１０ｉ（１．２５ｇ、０．２５ミリモル）の溶液に炭酸ジスクシンイミジル（ＤＳＣ、１２８ｍｇ、０．５ミリモル）およびピリジン（７９ｍｇ、１．０ミリモル）を加えた。混合物を室温で１８時間撹拌して透明な溶液を形成させた。溶液を蒸発乾固し、残留物を塩化メチレン（６０ｍＬ）に溶解した。塩化メチレン溶液をＨＣｌ（０．１Ｎ、２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ_３（２５ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ（２５ｍＬ）水溶液で順に洗浄した。有機層をＮａ_２ＳＯ_４で乾燥し、蒸発乾固した。残留物を塩化メチレン（１０ｍＬ）に溶解し、エチルエーテル（４０ｍＬ）を加えた。混合物を０℃から５℃に２時間冷却した。得られた沈殿物をろ過によって集め、エチルエーテル（４０ｍＬ）で洗浄し、真空下４０℃で２時間乾燥してＩＡｉ（８９０ｍｇ、７１％）を白色の固体として得た。

（実施例５）
４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）−メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（ＩＡｉ、スキーム４、ＭＷ約２０００ダルトン）の合成
ステップ１： ４−（ヒドロキシメチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（１０ｉ）の合成

２００ｍＬナシ形フラスコ中の４−ヒドロキシベンジルアルコール（１．１２３５ｇ、９．０５ミリモル、１２当量）に３０ｍＬのアセトニトリルを加えた。この容器に栓をし、アルコールの大部分が溶解するまで混合物を室温で激しく撹拌した。この容器にトリエチルアミン（１．２７０ｍＬ、９．０７ミリモル、１２当量）を加え、白色の沈殿物を形成させた。混合物をさらに３０分間撹拌し、スキーム４からの１３（１．５０６６ｇ、０．７５３３ミリモル、１当量）を加えた。化合物１３は、ｍＰＥＧ（ＭＷ約２０００Ｄａ）の誘導体であり、ｍは約４０である。室温で撹拌を続け、ＴＬＣによって反応を監視した。４２時間後、混合物は曇った灰色／白色の懸濁液の外観を呈した。出発原料のほぼすべてが消費されていた。混合物を高真空下で濃縮して黄褐色の油とし、塩化メチレン（３０ｍＬ）を加えた。得られた混合物を４５分間激しく撹拌し、淡黄褐色のスラリーを形成させた。スラリーを２時間静置した後に２本のネジぶたＴＥＦＬＯＮ（登録商標）遠心分離管へ移した。６ｍＬずつの塩化メチレンで反応容器を２回すすぎ、１回分のすすぎ液を２つの遠心分離管のそれぞれに移した。最後に、１０ｍＬずつの氷冷水で反応容器を２回すすぎ、残っている固体物質をすべて溶解させ、１回分のすすぎ液を２つの遠心管のそれぞれに移した。管を断続的に３０秒間振っては圧を抜き、次に遠心分離した。それぞれの管から水層（上層）を取り除いた。この水抽出によって未反応の４−ヒドロキシベンジルアルコールおよびトリエチルアンモニウム塩を除去した。２つの管のそれぞれについて氷冷水による抽出を同じ方法でさらに５回繰り返した。

有機層を合わせ、曇っていることを観察した。この曇っている溶液を塩化メチレンで１１０ｍＬとし、焼結ガラスロート（密）を通してろ過した。まだいくらか曇っているろ液を２４℃の水浴を用いて高真空下で回転式蒸発法によって濃縮して白色の半固体を得た。エチルエーテル（５０ｍＬ）を加え、混合物を激しく２時間撹拌し、こうして生成物を白色粒状固体の懸濁物に変えた。中多孔度の焼結ガラスロートを通して懸濁物をろ過し、沈殿物を高真空下２４℃で１２時間乾燥して１０ｉを白色の固体１．１５ｇ（約８０％収率）として得た。

化合物１３と１０ｉとの分子量の差が予測通りであることを確認するために質量分析を用いた。これらのスペクトルは、ポリマーの同族体に起因する良好に分解されたピークの包絡線からなっていた。各同族体は、予測通り４４ダルトン離れていた。所定の同族体について、どちらの分子においても繰り返しエチレンオキシド単位（−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−）の全質量は同じである。従って、質量差は、非繰り返し末端基単位の差によるものであろう。１３と１０ｉとについて繰り返し末端基単位の厳密な質量は、それぞれ２２９．１０ダルトンおよび２３８．１２ダルトンであり、出発原料と生成物との間の分子量の差は９．０２ダルトンの増加である。１３および１０ｉの両方について４２繰り返し単位による同族体を特定した。観測質量は、１３および１０ｉについてそれぞれ２１０１．５０ダルトンおよび２１１０．１２ダルトンであり、差は８．６２ダルトンの増加であった。この値を予測された９．０２ダルトンの差と比較すると良好であり、従って、質量スペクトルデータは、予測された反応が起こったという主張を支持する。観察された質量からナトリウムを含む非繰り返し単位の全質量を引き、差をエチレンオキシドの質量４４．０３ダルトンで除することによって、特定の同族体の中の繰り返し単位の数を求めた。整数値を得た。これらの整数を同族体の中の繰り返し単位の数とした。

ステップ２： ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）−メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート（ＩＡｉ）の合成

Ｇｈｏｓｈらの方法（Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ． ３３， ２７８１−２７８４ （１９９２））を適応させることによって、化合物ＩＡｉを調製した。１５ｍＬのアセトニトリルに化合物１０ｉ（１．００１２ｇ、０．５００ミリモル、１当量）を加え、アルゴン下で撹拌した。この溶液に炭酸Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）（０．２５８２ｇ、１．０１ミリモル、２当量）を加え、続いてさらに５ｍＬのアセトニトリルを加えた。この溶液を速く撹拌してトリエチルアミン（２８２μＬ、２．０２ミリモル、４当量）を加え、撹拌を４時間続けた。４時間後、混合物は、濁った灰色／白色の外観を呈し、ＴＬＣ評価は１０ｉが完全にＩＡｉに変換されたことを示した。いくらか曇っている溶液を２４℃の水浴を用いて高真空下の回転蒸発法によって濃縮乾固した。半固体の残留物（わずかに黄色）を塩化メチレン４０ｍＬに溶解し、２つのネジぶたＴＥＦＬＯＮ（登録商標）遠心分離管の間で配分した。管を強く３０秒間振り、乳濁液を遠心分離し、水層を取り除くことによってそれぞれの管の中の溶液を１０ｍＬのｐＨ８．２６の重炭酸ナトリウム水溶液で抽出した。さらに３回抽出を繰り返した。得られたそれぞれの管の中の有機層を１０ｍＬの水で４回洗浄し、遠心分離を用いて乳濁を解除した。有機層を合わせ、濃縮して白色の半固体残留物とした。残留物にエチルエーテル（５０ｍＬ）を加え、混合物を室温で激しく５時間撹拌して半固体を白色粒状固体に変えた。得られた懸濁物を焼結ガラスロート（中）を通してろ過し、高真空下２４℃で４時間乾燥してＩＡｉの粗製試料（０．８９５ｇ、約８９％収率）を得た。ＴＬＣおよびＮＭＲによるとこの試料は少量の不純物しか含んでいなかった。化合物ＩＡｉの一部（０．３１９８ｇ）を１２．５ｍＬのクロロホルムに溶解してからエチルエーテル（４２ｍＬ）を加えることによって再結晶した。溶液を一夜冷蔵した。得られた白色の粒状沈殿物を焼結ガラスロート（中）を通すろ過によって集めて０．２３ｇの再結晶生成物を得た。８ｍＬのクロロホルムと２７ｍＬのエチルエーテルとを用いてこの生成物をもう１回再結晶した。得られた沈殿物を高真空下２４℃で１０時間乾燥して一定重量とし、０．１６ｇの精製ＩＡｉを得た。

１０ｉとＩＡｉとの分子量差が予測通りであることを確認するために質量分析法を用いた。１３と１０ｉとの間の質量差の場合と同じく、１０ｉとＩＡｉとの対応同族体の間の質量差は、非繰り返し末端基単位の間の差に依存するはずである。１０ｉおよびＩＡｉについて非繰り返し単位の厳密な質量はそれぞれ２３８．１２ダルトンおよび３７９．１３のダルトンであり、中間体１０ｉと生成物ＩＡｉとの間の分子量の差は１４１．０１ダルトンの増加である。１０ｉおよびＩＡｉのどちらについても４２繰り返し単位による同族体を特定した。観測質量は、１０ｉおよびＩＡｉについてそれぞれ２１１０．１２ダルトンおよび２２５１．３８ダルトンであり、差は１４１．２６ダルトンの増加であった。この値を予測された１４１．０１ダルトンの差と比較すると良好であり、従って、質量スペクトルデータは、予測された反応が起こったという主張を支持する。上記の１０ｉの場合と同じ方法で特定の同族体の中の繰り返し単位の数を求めた。この計算の場合に整数を得たという事実が、仮定した非繰り返し単位の重量が正しかったという主張を支持した。

（実施例６）
ＰＥＧ化トリプトファンの調製

トリプトファン（１．７ｍｇ、８．３μＭ）を１ｍＬのＰＢＳ緩衝液（０．１０Ｍ、ＮａＣｌ ０．１０Ｍ、ｐＨ７．５）に溶解し、撹拌した。撹拌中の溶液に２８．５ｍｇのＰＥＧ誘導体ＩＡｉ（ＭＷ約２３００、約１２．４μＭ）を加え、混合物を室温で６０分間撹拌した。この反応混合物の０．７ｍＬに追加のＰＥＧ誘導体（７．５ｍｇ）を加え、室温でさらに２時間撹拌した。反応混合物から０．１０ｍＬを採取して８μＬのＨＣｌ（１．０ Ｎ）と混合し、０．０１％のトリフルオロ酢酸を含む２０％アセトニトリルを用いて約１ｍＬに希釈した。得られた溶液から０．０５０ｍＬを採取してＨＰＬＣ分析（実施例８）に用いた。

（実施例７）
ＰＥＧ−トリプトファンからのトリプトファンの放出
実施例７からのＰＥＧ化トリプトファン反応溶液から０．１０ｍＬを採取して０．６０ｍＬのＰＢＳ緩衝液（０．１０Ｍ、ＮａＣｌ、０．１０Ｍ、グリシン０．１０Ｍ、ｐＨ７．５）で希釈し、オーブン中３７℃でインキューベートした。２時間、７時間、３２時間および１０２時間のインキュベーション間隔で０．１０ｍＬの分画を採取し、ＨＰＬＣ分析（０．１０ｍＬ注入）のために１０μｌのＨＣｌ（０．０１％のトリフルオロ酢酸を含む０．４ｍＬの２０％アセトニトリルで希釈して１．０Ｎとした）で反応停止させた。

８．５のｐＨを有する開裂溶液および１時間、６時間、２４時間および３２時間のインキュベーション間隔を用いて上記の手順を繰り返した。

ＨＰＬＣ分析
２８０ｎｍにおける検出を用いるＣ−１８逆相ＨＰＬＣでＰＥＧ−トリプトファン（実施例７）と開裂試料との両方を分析した。ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。Ｃ−１８カラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｓｙｍｍｅｔｒｙ、４．６×２５０ｍｍ）、流量１．０ｍＬ／分、１５分間かけて２０％から８０％へのアセトニトリルのグラジエント、続いてアセトニトリル８０％において１０分間の洗浄（すべて０．０１％トリフルオロ酢酸を含む）。

結果
ｐＨ７．５における開裂反応生成物のトリプトファンおよびＰＥＧ−トリプトファンの含有率（積分面積）をＨＰＬＣで分析し、下表に挙げた。

トリプトファンの増加およびＰＥＧ−トリプトファンの減少が１０２時間にわたって観測された。ｐＨ７．５におけるＰＥＧ−トリプトファンの半減期は約８５時間である。

ｐＨ８．５における開裂反応生成物のトリプトファンおよびＰＥＧ−トリプトファンの含有率（積分面積）をＨＰＬＣで分析し、下表に挙げた。

トリプトファンの増加およびＰＥＧ−トリプトファンの減少が３２時間にわたって観測された。ｐＨ８．５におけるＰＥＧ−トリプトファンの半減期は約１７時間である。

ｐＨ７．５においてグリシンを加えたとき、またはｐＨ８．５におけるＰＥＧ化トリプトファンのインキュベーションは、増加するトリプトファンとＰＥＧ化トリプトファンの減少との傾向を明白に示している。ＰＥＧ化トリプトファンの半減期は、ｐＨ８．５において１７時間、グリシン存在下ｐＨ７．５において８５時間と定めた。トリプトファンとＰＥＧ化トリプトファンとの総和は、時間とともに減少した。これは、ＨＰＬＣスペクトルにおいて生成物が示されるトリプトファンの副反応による可能性がもっとも高かった。

Claims (14)

1. 式Ｉ
   

   

   の化合物であって、
   式中、
   Ｙは、ハロゲン化物、−Ｎ_３、−ＣＮ、ＲＯ−、ＮＨ_２Ｏ−、ＮＨＲＯ−、ＮＲ_２Ｏ−、ＲＣＯ_２−、ＲＯＣＯ_２−、ＲＳ−、ＲＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＣＳ_２−、ＲＳＣ（Ｏ）Ｓ−、ＲＳＣＳ_２−、ＲＳＣＯ_２−、ＲＯＣ（Ｓ）Ｏ−、ＲＯＣＳ_２−、ＲＳＯ_２−、ＲＳＯ_３−、ＲＯＳＯ_２−、ＲＯＳＯ_３−、ＲＰＯ_３−、ＲＯＰＯ_３−、イミダゾリル、Ｎ−トリアゾリル、Ｎ−ベンゾトリアゾリル、ベンゾトリアゾリルオキシ、イミダゾリルオキシ、Ｎ−イミダゾリノン、Ｎ−イミダゾロン、Ｎ−イミダゾリンチオン、Ｎ−スクシンイミジル、Ｎ−フタルイミジル、Ｎ−スクシンイミジルオキシ、Ｎ−フタルイミジルオキシ、Ｎ−（５−ノルボルネン−２，３−ジカルボキシイミジルオキシ）、２−チオキソチアゾリジン−３−イル、−ＯＮ＝Ｃ（ＣＮ）Ｒ、２−ピリジルオキシ、フェノキシ、ｐ−クロロフェノキシ、ｐ−ニトロフェノキシ、トリクロロフェノキシおよびペンタクロロフェノキシからなる群から選ばれ、
   Ｒは、アルキル基またはアリール基であり、
   Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ^３からなる群から選ばれ、
   ｎは、１から１０の間の整数であり、
   Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、前提条件として、Ｒ^１およびＲ^２は両方が水素であることはできず、
   Ｒ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれ、
   ＰＯＬＹＭＥＲは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリビニルピロリドン、およびポロキサマーからなる群から選ばれる、
   化合物。
2. Ｒ^２は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピルおよびｎ−ブチルからなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
3. Ｘは、ＯおよびＮＨからなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
4. ｎは、１および２からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
5. 前記化合物は、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２−メチルブタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル４−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルブタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル５−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルペンタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル６−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルヘキサノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−エチル−５−（２−メトキシポリエトキシ）ペンタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル５−（２−メトキシポリエトキシ）−２−プロピルペンタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル３−（２−メトキシポリエトキシ）−２，２−ジメチルプロパノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−２−メチルブタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−エチル−２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）ブタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−２−メチルペンタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−２−プロピルペンタノエート、
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）−３−メチルブタノエート、および
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（（２−メトキシポリエトキシ）メチル）ヘキサノエート、
   からなる群から選ばれる、請求項１に記載の化合物。
6. ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル２−（２−（２−メトキシエトキシ）エチル）ヘキサノエート、または
   ４−（（（２，５−ジオキソピロリジン−１−イルオキシ）カルボニルオキシ）メチル）フェニル３−（２−メトキシエトキシ）−２−メチルプロパノエート
   の構造を有する、化合物。
7. 式ＩＩ
   

   

   の薬物結合体、あるいはそれらの薬学的に許容される塩、または溶媒和物であって、
   式中、
   Ｘは、Ｏ、ＳおよびＮＲ^３からなる群から選ばれ、
   ｎは、１から１０の間の整数であり、
   Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、前提条件として、Ｒ^１およびＲ^２は両方が水素であることはできず、
   Ｒ^３は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から選ばれ、
   ＤＲＵＧは、アミノ含有分子、ペプチドまたはタンパク質の残基であって、ここで、ＮＨ _２ 基がそれらから除去されており、
   ここで、ＰＯＬＹＭＥＲは、ポリ（アルキレングリコール）、ポリビニルピロリドン、およびポロキサマーからなる群から選ばれる、
   薬物結合体、あるいはそれらの薬学的に許容される塩、または溶媒和物。
8. ＤＲＵＧは、血漿タンパク質または血液凝固因子の残基である、請求項７に記載の薬物結合体。
9. 請求項７〜８のいずれかに記載の薬物結合体と、薬学的に許容される賦形剤とを含む薬学的製剤。
10. 前記製剤は、微粒子中にカプセル化されている、請求項９に記載の薬学的製剤。
11. 患者の疾患を治療するための、請求項９または１０に記載の薬学的製剤。
12. 前記疾患は血液凝固病であり、ＤＲＵＧは血漿タンパク質または血液凝固因子の残基である、請求項１１に記載の薬学的製剤。
13. 構造式Ｃ
    

    

    を有し、
    式中、
    ｎは、１、２、３または４であり、
    Ｒ^１およびＲ^２は、水素、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキル、（Ｃ_１〜Ｃ_６）−アルキレンアリールおよびアリールからなる群から独立に選ばれ、
    ｍ−ＰＥＧ−は、２００から５００，０００の分子量を有するモノメトキシポリ（エチレングリコール）であり、
    前提条件として、Ｒ^１およびＲ^２の少なくとも１つは水素と異なる、化合物。
14. 

    からなる群から選ばれる、請求項１３に記載の化合物。