JP5652096B2 - 抗炎症剤 - Google Patents
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Description
[1].トロメタモールからなるリポタイコ酸(LTA)不活化剤。
[2].トロメタモールを有効成分として含有するリポタイコ酸(LTA)不活化剤組成物。
[3].トロメタモールからなる、リポタイコ酸(LTA)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤。
[4].トロメタモールを有効成分として含有する、リポタイコ酸(LTA)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤組成物。
[5].トロメタモールからなるリポポリサッカライド(LPS)不活化剤。
[6].トロメタモールを有効成分として含有するリポポリサッカライド(LPS)不活化剤組成物。
[7].トロメタモールからなる、リポポリサッカライド(LPS)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤。
[8].トロメタモールを有効成分として含有する、リポポリサッカライド(LPS)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤組成物。
本発明は、トロメタモールからなる抗炎症剤であり、トロメタモールを抗炎症用途に用いるものである。さらに、LPS又はLTAのIL−6発現量阻害剤、抑制剤、不活化剤としても用いることができる。後述する試験例の結果からも明らかであるように、トロメタモールがLPSやLTAといった毒素に結合し、これらの毒素によって引き起こされる炎症を抑制することは、本発明者らの新知見である。ここで、不活化とは、LPS・LTAの機能(炎症を惹起する機能)が阻害(又は抑制)されている状態を表す。
[LPS・LTAに対するトロメタモールの結合性]
上記で得られた大腸菌表層由来のLPS 0.1mg/mL(4.1μmol/L)又は黄色ブドウ球菌表層由来のLTA 0.1mg/mL(9.7μmol/L)と、0.1質量%のトロメタモールとを用いて、等温滴定型熱量測定(ITC)を行い、LPS・LTAに対するトロメタモールの結合性を評価した。LPSの結果(N=19.3、K=4.7E4、ΔH=−1.47kcal/mol)を図1に、LTAの結果(N=7.0、K=7.9E4、ΔH=−2.49kcal/mol)を図2に示す。Nは結合分子数、Kは結合定数を示す。
[抗炎症評価:IL−6発現量]
サイトカインの1種であるIL−6の発現量を下記方法で測定した。結果を、大腸菌表層由来のLPS・トロメタモール(表1、図3)、緑濃菌表層由来のLPS・トロメタモール(表2、図4)、黄色ブドウ球菌由来のLTA・トロメタモール(表3、図5)、黄色ブドウ球菌由来のLTA・EDTA(表4、図6)に示す。
ウサギ角膜上皮細胞(倉敷紡績株式会社)を専用増殖培地(倉敷紡績株式会社、RCGM2)で培養し、コンフルエントになるまで培養した状態で試験を行なった。コンフルエントになった後、培地をα−MEM(インビトロジェン社)に交換し、24時間・37℃でインキュベートした。培地を除去し、LPS又はLTA(培地中の濃度は0.1μg/mL)と、トロメタモール又はエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム・二水和物(以下、EDTAと略記する)(培地中の濃度を表及び図に示す)とを含むα−MEMを加えた培地を添加し、24時間・37℃でインキュベートした(炎症惹起)。その後、培地を除去し、細胞をPBSで洗浄した。
QIAシュレッダー及びRNeasy(共にキアゲン社)を用いて、角膜上皮細胞からmRNAを抽出した。続いて、Rever−Tra ace(東洋紡績株式会社)を用いて、採取したmRNAからDNAをPCR法により合成した。このDNAを用いて、IL−6遺伝子の発現量を、リアルタイムPCR(BIORAT社製)を用いて測定した。このとき、内部標準遺伝子としてGAPDH遺伝子を用い、GAPDH遺伝子の発現量に対するIL−6遺伝子の相対遺伝子発現量を算出した。
<IL−6プライマー>
Forward primer:TTTGAATGAAGAAGCCACCC(配列番号1)
Reverse primer:GATGGTGTGTTCTGACCGTG(配列番号2)
<GAPDHプライマー>
Forward primer:AGGTCATCCACGACCACTTC(配列番号3)
Reverse primer:GTGAGTTTCCCGTTCAGCTC(配列番号4)
下記液剤を常法に基づき調製した。この液剤を、炎症を起こしている皮膚に用いたところ、炎症が抑制された。
配列表の配列番号2:IL−6のリバースプライマー
配列表の配列番号3:GAPDHのフォワードプライマー
配列表の配列番号4:GAPDHのリバースプライマー
Claims (8)
- トロメタモールからなるリポタイコ酸(LTA)不活化剤。
- トロメタモールを有効成分として含有するリポタイコ酸(LTA)不活化剤組成物。
- トロメタモールからなる、リポタイコ酸(LTA)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤。
- トロメタモールを有効成分として含有する、リポタイコ酸(LTA)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤組成物。
- トロメタモールからなるリポポリサッカライド(LPS)不活化剤。
- トロメタモールを有効成分として含有するリポポリサッカライド(LPS)不活化剤組成物。
- トロメタモールからなる、リポポリサッカライド(LPS)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤。
- トロメタモールを有効成分として含有する、リポポリサッカライド(LPS)により誘導される炎症性サイトカインIL−6の発現抑制剤組成物。
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