JP5641599B2 - 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 - Google Patents
腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5641599B2 JP5641599B2 JP2009530080A JP2009530080A JP5641599B2 JP 5641599 B2 JP5641599 B2 JP 5641599B2 JP 2009530080 A JP2009530080 A JP 2009530080A JP 2009530080 A JP2009530080 A JP 2009530080A JP 5641599 B2 JP5641599 B2 JP 5641599B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- protein
- cell
- fstl1
- antibody
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/177—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- A61K38/1793—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/195—Chemokines, e.g. RANTES
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/148—Transforming growth factor alpha [TGF-a]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
- C12N2502/1114—T cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
- C12N2502/1157—Monocytes, macrophages
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/30—Coculture with; Conditioned medium produced by tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2510/00—Genetically modified cells
Description
Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007 Fontenot et al. Nat. Immunol. 4, 330-336, 2003 Fontenot et al. Immunity 22, 329-341, 2005 Zheng et al. J. Immunol. 172, 5213-5221, 2004 Bisikirska et al. J. Clin.Invest. 115, 2904-2913, 2005 Hori et al. Science 299, 1057-1061, 2003 Jiang and Chess J. Clin. Invest. 114, 1198-1208, 2004 Atabani et al. Eur. J. Immunol. 35, 2157-2162, 2005 Ichihara et al. Clin.Cancer Res. 9, 4404-4408, 2003 Wolf et al. Clin.Cancer Res. 9, 606-612, 2003 Hicky et al. Semin. Immunol. 11, 125-137, 1999 Liyanage et al. J. Immunol. 169, 2756-2761, 2002 Sasada et al. Cancer 98, 1098-1099, 2003 Woo et al. Cancer Res. 61, 4766-4772, 2001 Sakaguchi et al. Immunol. Rev. 182, 18-32, 2001 Turk et al. Immunol. Rev. 188, 122-135, 2002 Andaloussi and Lesniak Neuro-Oncology 8, 234-243, 2006
(2)細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤であって、Snailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質を発現する細胞を含有することを特徴とする遺伝子発現増強剤。
(3)細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤であって、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質を含有することを特徴とする遺伝子発現増強剤。
(4)Snailタンパク質を発現する細胞、またはMCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質を分泌する細胞の培養上清を含有することを特徴とする(3)に記載の遺伝子発現増強剤。
(5)前記細胞が腫瘍細胞であることを特徴とする(2)または(4)に記載の遺伝子発現増強剤。
(7)細胞を制御性T細胞に分化誘導する細胞分化誘導剤であって、Snailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質を発現する細胞を含有することを特徴とする細胞分化誘導剤。
(8)細胞を制御性T細胞に分化誘導する細胞分化誘導剤であって、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質を含有することを特徴とする細胞分化誘導剤。
(10)Snailタンパク質を発現する細胞、またはMCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質を発現する細胞を含有する免疫抑制剤。
(11)MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質を含有する免疫抑制剤。
(13)Snailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質を発現する細胞を含有する過剰免疫疾患治療剤。
(14)MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質を含有する過剰免疫疾患治療剤。
(16)細胞におけるFoxP3遺伝子の発現増強を阻害する遺伝子発現増強阻害剤であって、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制することを特徴とする遺伝子発現増強阻害剤。
(17)MCP1阻害活性を有する抗MCP1抗体を含有することを特徴とする(15)または(16)に記載の遺伝子発現増強阻害剤。
(18)FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体、膜型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗膜型IL-13Ra2抗体または分泌型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗分泌型IL-13Ra2抗体を含有することを特徴とする(16)に記載の遺伝子発現増強阻害剤。
(20)細胞の制御性T細胞への分化誘導を阻害する細胞分化誘導阻害剤であって、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制することを特徴とする細胞分化誘導阻害剤。
(21)MCP1阻害活性を有する抗MCP1抗体を含有することを特徴とする(19)または(20)に記載の細胞分化誘導阻害剤。
(22)FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体、膜型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗膜型IL-13Ra2抗体または分泌型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗分泌型IL-13Ra2抗体を含有することを特徴とする(20)に記載の細胞分化誘導阻害剤。
(24)MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する免疫抑制解除剤。
(26)MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する腫瘍免疫賦活剤。
(28)MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する抗腫瘍剤。
(33)Snailタンパク質活性増強物質が、snail遺伝子発現ベクターであることを特徴とする(32)に記載の遺伝子発現増強剤。
(34)前記細胞がPanc-1細胞であることを特徴とする(32)に記載の遺伝子発現増強剤。
(36)前記阻害物質が、snail遺伝子の発現を阻害することを特徴とする(35)に記載の抗癌剤。
(37)血液のがんが白血病であることを特徴とする(35)または(36)に記載の抗癌剤。
(39)細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強方法であって、前記細胞を、Snailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質及び分泌型IL-13Ra2タンパク質からなる群から選択される一以上のタンパク質を発現する細胞と接触させる工程を含む遺伝子発現増強方法。
(40)前記細胞が腫瘍細胞であることを特徴とする(39)に記載の遺伝子発現増強方法。
(41)細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強方法であって、前記細胞を、Snailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質及び分泌型IL-13Ra2タンパク質からなる群から選択される一以上のタンパク質と接触させる工程を含む遺伝子発現増強方法。
(42)細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強方法であって、前記細胞をSnailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質及び分泌型IL-13Ra2タンパク質からなる群から選択される一以上のタンパク質を発現する細胞の培養上清と接触させる工程を含む(40)に記載の遺伝子発現増強方法。
(43)前記細胞が腫瘍細胞であることを特徴とする(42)に記載の遺伝子発現増強方法。
(45)細胞を制御性T細胞に分化誘導する細胞分化誘導方法であって、前記細胞を、Snailタンパク質、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質を発現する細胞と接触させる工程を含む細胞分化誘導方法。
(46)細胞を制御性T細胞に分化誘導する細胞分化誘導方法であって、前記細胞を、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質と接触させる工程を含む細胞分化誘導方法。
(48)過剰免疫を生じている患者の治療方法であって、前記患者に、Snailタンパク質を発現する細胞、またはMCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質を発現する細胞を投与する工程を含む方法。
(49)過剰免疫を生じている患者の治療方法であって、前記患者に、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、または分泌型IL-13Ra2タンパク質を投与する工程を含む方法。
(52)細胞におけるFoxP3遺伝子の発現増強を阻害する遺伝子発現増強阻害方法であって、前記細胞において、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する工程を含む遺伝子発現増強阻害方法。
(53)前記細胞を、MCP1阻害活性を有する抗MCP1抗体と接触させることを特徴とする(51)に記載の遺伝子発現増強阻害方法。
(54)前記細胞を、FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体、膜型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗膜型IL-13Ra2抗体または分泌型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗分泌型IL-13Ra2抗体と接触させることを特徴とする(52)に記載の遺伝子発現増強阻害方法。
(56)細胞の制御性T細胞への分化誘導を阻害する細胞分化誘導阻害剤であって、前記細胞において、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する工程を含む細胞分化誘導阻害方法。
(57)前記細胞を、MCP1阻害活性を有する抗MCP1抗体と接触させることを特徴とする(55)に記載の細胞分化誘導阻害方法。
(58)前記細胞を、FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体、膜型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗膜型IL-13Ra2抗体または分泌型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗分泌型IL-13Ra2抗体と接触させることを特徴とする(56)に記載の細胞分化誘導阻害方法。
(60)免疫が抑制されている患者の免疫抑制を解除する免疫抑制解除方法であって、前記患者において、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する工程を含む方法。
(62)腫瘍免疫が抑制されている患者において、腫瘍免疫を賦活する方法であって、MCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する工程を含む腫瘍免疫賦活方法。
(64)腫瘍患者の治療方法であって、前記患者においてMCP1タンパク質、FSTL1タンパク質、膜型IL-13Ra2タンパク質または分泌型IL-13Ra2タンパク質の機能を抑制する方法。
(65)腫瘍患者の治療方法であって、前記患者においてTSP1タンパク質の機能を抑制する方法。
(67)Snailタンパク質活性増強物質が、snail遺伝子発現ベクターであることを特徴とする(66)に記載の遺伝子発現増強方法。
(68)前記細胞がPanc-1細胞であることを特徴とする(66)に記載の遺伝子発現増強方法。
(70)前記阻害物質が、snail遺伝子の発現を阻害することを特徴とする(69)に記載の治療方法。
(71)血液のがんが白血病であることを特徴とする(69)に記載の治療方法。
本発明にかかる、対象とする細胞において、MCP1(monocyte chemoattractant protein-1)遺伝子、TSP1(thrombospondin-1)遺伝子、FSTL1( Follistatin-like 1)遺伝子、及びIL-13Ra2(interleukin 13 alpha 2 receptor)遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤は、Snailタンパク質活性増強物質を含有することを特徴とする。
本発明にかかる、対象とする細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤は、Snailタンパク質活性増強物質を含有することを特徴とする。
ここで、対象とする細胞は特に限定されないが、T細胞であることが好ましく、ナイーブT細胞、CD4+T細胞またはCD8+T細胞であることがより好ましい。
本発明にかかる、対象とする細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤は、対象とする細胞及び/又は対象とする細胞と共存する他の細胞においてMCP1シグナルを活性化させることを特徴とする。
ここで、対象とする細胞は特に限定されないが、T細胞であることが好ましく、ナイーブT細胞、CD4+T細胞またはCD8+T細胞であることがより好ましい。
FoxP3タンパク質は、免疫抑制機能を有する制御性T細胞の分化と機能を制御するマスター遺伝子である(Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007; Hori et al. Science 299, 1057-1061, 2003; Jiang and Chess J. Clin. Invest. 114, 1198-1208, 2004; )。従って、上述したFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤は、対象とする細胞を制御性T細胞に分化誘導するための細胞分化誘導剤、及び免疫抑制剤として用いることができる。実際、snail遺伝子を発現している細胞を含有するFoxP3遺伝子発現増強剤は、共培養したCD4+細胞に対し、T細胞の増殖抑制能を獲得させることも、FoxP3遺伝子発現増強剤が細胞分化誘導剤及び免疫抑制剤として用いることができることを示している。
制御性T細胞の機能低下は、自己免疫やアレルギー疾患などの過剰免疫疾患を引き起こす(Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007; Turk et al. Immunol. Rev. 188, 122-135, 2002)。従って、対象とするT細胞を制御性T細胞に分化誘導し、それにより免疫を抑制することによって、これらの過剰免疫疾患を治療することができる。従って、上述の細胞分化誘導剤及び免疫抑制剤は、自己免疫やアレルギー疾患などの過剰免疫疾患治療剤として用いることができる。ここで、過剰免疫疾患とは、制御性T細胞の機能低下が原因になる疾患であればよく、自己免疫やアレルギー疾患に限定されない。なお、対象とする細胞は特に限定されないが、T細胞であることが好ましく、ナイーブT細胞、CD4+T細胞またはCD8+T細胞であることがより好ましい。
本発明にかかる、対象とする細胞においてFoxP3遺伝子の発現増強を阻害するFoxP3遺伝子発現増強阻害剤は、対象とする細胞及び/又は対象とする細胞と共存する細胞のMCP1シグナルを抑制することを特徴とする。
この遺伝子発現増強阻害剤が含有する有効成分は、例えばMCP1タンパク質やMCP1受容体の機能を抑制すればよく、具体的には、それらの機能を阻害する阻害抗体や、その阻害抗体を分泌するハイブリドーマ、阻害活性を示す低分子化合物などが挙げられる。
この遺伝子発現増強阻害剤が含有する有効成分は、例えばFSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体、膜型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗膜型IL-13Ra2抗体または分泌型IL-13Ra2タンパク質阻害活性を有する抗分泌型IL-13Ra2抗体などが挙げられる。
ここで、対象とする細胞は特に限定されないが、T細胞であることが好ましく、ナイーブT細胞、CD4+T細胞またはCD8+T細胞であることがより好ましい。
上述したように、FoxP3タンパク質は、免疫抑制機能を有する制御性T細胞の分化と機能を制御するマスター遺伝子である(Miyara and Sakaguchi Trends Mol. Med. 13, 108-116, 2007; Hori et al. Science 299, 1057-1061, 2003; Jiang and Chess J. Clin. Invest. 114, 1198-1208, 2004; )。従って、FoxP3タンパク質の発現増強を抑制すると、対象とする細胞の制御性T細胞への分化誘導を阻害することができ、ひいては、制御性T細胞による免疫抑制を解除することができる。このように、上述したFoxP3遺伝子の発現増強を抑制する遺伝子発現増強阻害剤は、対象とする細胞の制御性T細胞への分化誘導を阻害する細胞分化誘導阻害剤、及び免疫抑制解除剤として用いることができる。
本発明者らは、腫瘍細胞において、Snailタンパク質がMCP1遺伝子、TSP1遺伝子、FSTL1遺伝子、及びIL-13Ra2遺伝子の発現を増強し、それらの遺伝子産物が、CD4+T細胞やCD8+T細胞に対し、直接的及び間接的に作用し、制御性T細胞の活性化マーカーであるFoxP3の発現を増強することを見出した。即ち、腫瘍細胞は、MCP1タンパク質、TSP1タンパク質、FSTL1タンパク質、IL-13Ra2タンパク質、IL-13タンパク質、IL-4タンパク質、CCR2タンパク質、IL-10タンパク質などの腫瘍免疫抑制介在タンパク質によって、周囲の免疫細胞に働きかけ、その免疫細胞を制御性T細胞に分化させることにより、宿主の癌免疫を抑制すること明らかにした。この事実から、これらの介在タンパク質の作用を阻害する、本発明のFoxP3遺伝子発現増強阻害剤は、腫瘍細胞による腫瘍免疫抑制を解除し、腫瘍免疫を賦活することができる。患者自身の腫瘍免疫を賦活化すれば、患者において腫瘍の治療効果が得られる。従って、本発明のFoxP3遺伝子発現増強阻害剤は、腫瘍免疫賦活剤及び抗腫瘍剤として用いることができる。ここで、腫瘍免疫抑制介在タンパク質の機能を阻害する阻害物質としては、腫瘍免疫抑制介在タンパク質の抗体や競合阻害分子(ドミナントネガティブ変異体)などが例示できる。
本発明にかかる腫瘍増殖抑制剤は、MCP1シグナルまたはTSP1タンパク質の機能を抑制することにより、その腫瘍細胞の増殖を抑制する。腫瘍増殖抑制剤は、有効成分として、例えば、MCP1タンパク質、MCP1受容体、またはTSP1タンパク質の機能を阻害する阻害抗体や、その阻害抗体を分泌するハイブリドーマを含有する。
本発明にかかる腫瘍細胞浸潤抑制剤は、MCP1シグナルまたはFSTL1タンパク質の機能を抑制することにより、その腫瘍細胞の浸潤を抑制する。
腫瘍細胞が転移を起こす際、正常細胞間や血管壁を形成する細胞間を浸潤する。従って、腫瘍細胞の浸潤を抑制することにより、腫瘍の転移を抑制することができる。従って、腫瘍細胞浸潤抑制剤は腫瘍転移抑制剤として利用することができる。
本発明にかかる血液のがんに対する抗癌剤は、Snailタンパク質の機能を阻害する阻害物質を含有する抗癌剤である。ここで、Snailタンパク質の機能を阻害する阻害物質とは、Snailタンパク質分子の固有の活性を阻害させる低分子化合物やたんぱく質(ドミナントネガティブ型変異体)等だけでなく、細胞内で全体としてSnailタンパク質の機能を阻害する物質であれば限定されず、一例として、Snailタンパク質の発現を阻害する核酸(アンチセンスRNA、siRNA、shRNA等)や、それら核酸の強制発現ベクター、競合阻害たんぱく質などが挙げられる。この抗癌剤は、癌化した血液細胞の浸潤を阻害することにより、その機能を発揮することが望ましい。
<目的>
ヒト膵癌細胞株Panc-1細胞において、snail遺伝子を強制発現し、Snailの発現が増強している細胞クローンD6、D10、F3、F5について、細胞の形状、Snail及びE−カドヘリンについてのmRNAとタンパク質の発現レベル、細胞増殖能、細胞接着能、細胞移動能、細胞浸潤能に関する表現型を調べた。
(1)snail遺伝子の強制発現ベクターの作製ならびにその導入
EMT誘導剤の一つとして知られるTGF-betaで刺激したPanc-1細胞からsnail cDNA (CDS 71-865, 795 bp)をPCRで増幅し、G418耐性遺伝子を有するpcDNA3.1(+)プラスミドベクター(Invitrogen社)の制限酵素EcoR I-Xho Iサイトに挿入した。これを腫瘍細胞株にエレクトロポレーションによって導入し、2週間培養した後、G418(2mg/mL)で薬剤耐性細胞を選択し、細胞をクローニングした。
ヒト腫瘍細胞株からRNeasy(QIAGEN社)でRNAを抽出し、AMVで逆転写(42℃・50分→70℃・15分)して得たcDNAを用いて、PCRを行った(iCycler, BIO-RAD社)。snail cDNAに対するプライマーの配列は以下の通りである。
Forward 5'-CAGATGAGGACAGTGGGAAAGG-3'(配列番号1)
Reverse 5'-ACTCTTGGTGCTTGTGGAGCAG-3'(配列番号2)
腫瘍細胞におけるタンパク質の発現レベルを調べるため、腫瘍細胞(5x104個)をスライドチャンバー内で一晩培養し (37℃, 5%CO2)、4%パラホルムアルデヒドで固定した。正常ヤギ血清による非特異的染色のブロッキング処理後、細胞内染色のためにCytofix/Cytoperm(BD Phermingen社)で処理し(4℃、20分)、その後各種抗体(例えば、抗Snail抗体(SANTA CRUZ社)+ Alexa488標識抗goat IgG(Molecular Probes社 )、または、抗E-cadherin抗体(BD Bioscience社)+ Alexa568標識抗mouse IgG(Molecular Probes社 ))で1時間4℃で染色した。その後、Vecter Shield(Vector Laboratories 社)で細胞を封入し、蛍光顕微鏡 (LSM 5 PASCAL, Carl Zeiss社)で観察・撮影した。
図1Aに、snail遺伝子導入細胞株の表現型を表にまとめた。
親細胞株であるPanc-1細胞においてもSnailタンパク質の固有の発現は観察されるが、snail遺伝子の強制発現ベクターを導入することにより、表に示したクローンでSnailタンパク質の発現レベルが亢進した。その結果として、いずれのクローンにおいても、細胞形状は球状(round)から扁平な紡錘形(spindle/spreading)に変化し、in vitro 及びin vivoにおいて細胞増殖能(proliferation)は低下し、E−カドヘリン(E-cadherin)のタンパク質レベル及び細胞接着能(Adhesion)が低下し、細胞移動能(migration)及び細胞浸潤能(Invasion)は亢進した。特に、クローンF3において、上皮-間充織転換(EMT)に関する顕著な効果が観察されたので、以下の実施例においてF3を用いた。
<目的>
TGF-beta処理したヒト・メラノーマHs294T細胞をPBMCと共培養することにより、PBMC中のCD4+細胞においてFoxP3タンパク質の発現増強が生じること、FoxP3タンパク質の発現がsnail遺伝子のノックダウンにより消失することを示す。
(1)腫瘍細胞のTGF-beta処理
6穴プレートを用いて、ヒト・メラノーマHs294T細胞の培地に、下記のsnail遺伝子特異的なsiRNA(Invitrogen社)、または、ネガティブコントロールとして、そのスクランブル配列のオリゴヌクレオチドを2μg/3×105個/2mL添加して培養した。2日後、それらの細胞を洗浄後、TGF-beta(5 ng/mL)を添加して、さらに3日間培養した。
Forward 5'- GCGAGCUGCAGGACUCUAA-3'(配列番号3)
Reverse 5'- UUAGAGUCCUGCAGCUCGC-3'(配列番号4)
snail遺伝子特異的siRNA#2の配列
Forward 5'- CCCACUCAGAUGUCAAGAA-3'(配列番号5)
Reverse 5'- UUCUUGACAUCUGAGUGGG-3'(配列番号6)
siRNAコントロールの配列
Forward 5'-GCGCGUCAGGACUCGAUAA-3'(配列番号7)
Reverse 5'-UUAUCGAGUCCUGACGCGC-3'(配列番号8)
腫瘍細胞を回収し、[1]と同様にしてRT-PCRでsnail遺伝子の発現を測定した。同時に、下記プライマーを用いて、発現定量のためのコントロールとしてGAPDH遺伝子の発現を測定した。
Forward 5'- GTCAACGGATTTGGTCGTATT-3'(配列番号9)
Reverse 5'- ATCACTGCCACCCAGAAGACT-3'(配列番号10)
健常人から1/10量の4%クエン酸ナトリウムを加えて採血後、フィコール(比重1.090)に重層して遠心分離(1500rpm、20分、室温)し、中間層に存在する細胞分画を「(bulk)PBMC」として使用した。
得られた腫瘍細胞は、予め、MMC(100μg/mL、2時間、37℃)で処理するか、あるいはX線(20K rad)を照射することにより不活化した。PBMCは腫瘍細胞と1:10の割合(例えば、96穴プレートの場合は、1x105個のPBMCと1x104個の腫瘍細胞、24穴プレートの場合は、5x105個のPBMCと5x104個の腫瘍細胞)でプレートに播種して、37℃、5%CO2で共培養し、3〜5日後にPBMCを回収した。
得られたPBMCは、まず、市販されている抗CD4抗体 (BD PharMingen社)と抗CD25抗体 (BD PharMingen社)で1時間反応させた。次に、細胞内染色のためにCytofix/Cytoperm(BD Phermingen社)で処理(4℃、20分)し、抗FoxP3抗体 (eBioscience社)を用いて4℃、1時間反応させ、その後で、フローサイトメーターFACScan(Becton Dickinson社)を使用してCD4+またはCD4+CD25+の細胞分画にゲーティングし、FoxP3の発現レベルを調べた。
図2Aにsnail遺伝子の発現及びFoxP3の発現を調べた結果を示す。ヒト・メラノーマHs294T細胞をTGF-beta処理すると、snail遺伝子の発現が亢進する(図ではControl)が、snail遺伝子特異的siRNAにより、その発現は抑制された。その時、CD4+細胞分画中でFoxP3を発現している細胞の割合は、TGF-betaで処理をしないとき(25%)に比べ、処理をすると増加する(31%)が、snail遺伝子特異的siRNAによってsnail遺伝子の発現を抑制すると、TGF-beta処理の有無にかかわらず、減少した(処理無:25%→17%、処理有:31%→20%)。このことは、CD4+細胞におけるFoxP3の発現の亢進が、Hs294T細胞におけるsnail遺伝子の発現の亢進によるものであることを示している。
<目的>
PBMCとF3細胞またはD10細胞を共培養することにより、PBMC中のCD4+細胞においてFoxP3タンパク質の発現増強が生じ、かつCD4+細胞がT細胞の増殖を抑制する活性を獲得することを示す。
(1)PBMCと腫瘍細胞(Panc-1細胞またはF3細胞)の共培養
Panc-1細胞またはF3細胞を用いて、[2]と同様の方法でPBMCとの共培養を行った。
腫瘍細胞と3〜5日間共培養したPBMCをフィコール(比重1.090)に重層して遠心分離(1500rpm、20分、室温)し、中間層に存在する細胞分画を採取・洗浄後、磁気ビーズ結合抗CD4抗体(MACS抗体、Miltenyi Biotec社)を加えて4℃、30分間反応させ、MACS細胞自動分離機(Miltenyi Biotec社)を使用してCD4+細胞を分離した。
[2]に記載の方法と同様に、FoxP3タンパク質の発現を調べた。
(1)FoxP3タンパク質の発現解析
図2BにFACS解析の結果を示す。
上段(CD4+CD25+ in lymphocytes)は、CD4及びCD25の発現により細胞を分画した結果であり、図中の数字は、リンパ球分画中のCD4+CD25-(左)またはCD4+CD25+(右)の細胞が占める割合(%)を示している。下段(FoxP3+ in CD4+ fraction)は、CD4+細胞分画中でのFoxP3+タンパク質の発現レベルを示しており(各グラフでx軸に沿ってFoxP3+タンパク質の発現レベルが高くなる)、グラフ中の数字は使用したFoxP3抗体のIsotype control (rat IgG2a)との比較解析によって、発現陽性と判断された範囲に存在するCD4+細胞分画におけるFoxP3+細胞が占める割合(%)を示している。
図2Cに、各T細胞の増殖測定の結果を示す(左図がCD4+T細胞、右図がCD8+T細胞)。なお、Noneは、抗CD3抗体もCD4+細胞も加えないT細胞増殖の純粋なバックグランド値を示す。また、ポジティブコントロールとして、CD4+細胞を加えずに抗CD3抗体のみを加えたT細胞の増殖は、CD4+細胞、CD8+細胞ともに2.0以上の値を示した(図中には表示していない)。
<目的>
Panc-1細胞の代わりに、ヒト大腸癌細胞株HCT116細胞を用いて、[1][2]と同様の実験を行った。実験方法は[1][2]と同様である。
図3にFACS解析の結果を示す。
腫瘍細胞と共培養しない場合(図ではNo tumor:FoxP3の発現レベルは20.42)と比べ、Snailを強制発現させていないHCT116細胞と共培養しても、FoxP3の発現は増強しない(図ではParent:18.30)。しかし、snail遺伝子を強制発現させたB11クローンと共培養させると、FoxP3の発現が増強した(図ではB11:44.79)。このように、snail遺伝子の発現レベルとFoxP3の発現増強能の相関は、複数の癌種で観察された。
<目的>
F3細胞だけでなく、F3細胞の細胞培養上清も、CD4+細胞に対してFoxP3タンパク質発現を増強することを示す。
(1)培養上清の調製方法
1x105個の腫瘍細胞を25cm2のフラスコで3〜4日間培養し、その培養上清を別の試験管に移して高速遠心(3000 rpm、20分間、4℃)分離後、その上清を培養上清とした。実験に使用するまでは、4℃で保存した。
24穴プレートを用いて、5x105個のPBMC(またはその一分画)の浮遊液と腫瘍細胞の培養上清を等容量比で、つまり、2倍に希釈した腫瘍細胞の培養上清で37℃、5%CO2で3〜4日間培養し、その後、そのPBMCを回収した。なお、ネガティブコントロールとして、腫瘍細胞の培養上清の代わりに、培養を行っていない培地を用いて、同様の実験を行った。
FoxP3タンパク質の発現解析は、[2]と同様に行った。
図4にFACS解析の結果を示す。
CD4+細胞(図A上段)、CD4+CD25-細胞(図A下段)、CD4+CD25+細胞(図B)のいずれに対しても、親細胞株(図AではPrt-sup、図BではParent)及びSnail導入細胞(図AではD6-snail+など、図BではSnail-Tr)の培養上清は、培地のみの場合(図AではMedium、図BではNo stimulant)と比較して、FoxP3タンパク質の発現を増強した。このことは、Snailタンパク質の発現によるFoxP3タンパク質発現の増強作用は、液性因子を介していることを示す。
このように、Snailタンパク質を発現している細胞の培養上清も、FoxP3タンパク質発現の増強剤として用いることができる。
<目的>
Panc-1、HCT116、及びHs294Tにおいて、Snailタンパク質の強制発現により、MCP1、TSP1、FSTL1、または分泌型IL-13Ra2の発現が亢進することを示す。
(1)MCP1、TSP1、FSTL1、またはIL-13Ra2の発現レベルの測定方法
MCP1(ELISAキット:ENDOGEN社製 #EHMCP1)、TSP1(同:CHEMICON社製 #CYT168)、分泌型IL-13Ra2(同:ABCAM社製 #ab46112)のタンパク質の発現については、市販のELISAキットを使用して、その添付プロトコールに従って検出した。なお、ネガティブコントロールとして、細胞培養を行っていない培地を用いて、同様の実験を行った。
Forward2 5'-GCACAGGCAACTGTGAGAAA-3' (配列番号11)
Reverse2 5'-CATAGTGTCCAAGGGCTGGT-3' (配列番号12)
腫瘍細胞における膜型ならびに細胞内/核内に存在するIL-13Ra2の発現は、Snailタンパク質の発現と同様にして、 [1](3)に示した免疫染色法に準じて行った。
図5に結果を示す。(A)には、MCP1、TSP1、及びsIL-13Ra2(分泌型)のタンパク質発現レベルの比較、(B)には、FSTL-1のmRNA発現レベルの比較の結果を示す。また、(C)には、各腫瘍細胞におけるIL-13Ra2の局在を示す。
いずれのSnail強制発現クローン(D6, D10, F3, F5)においても、親株(Prt)より上記サイトカインの発現が亢進していることが示された。また、IL-13Ra2は、分泌型(図5A)だけでなく、図5Cに示すように、いずれのクローンにおいても、細胞膜や細胞質内、核内でも発現が亢進していることが示された。
このように、Snailタンパク質の活性を増強させることにより、MCP1、TSP1、IL-13Ra2、FSTL-1の発現を増強させることができる。
<目的>
MCP1、TSP1、FSTL1、IL13Ra2の各タンパク質に対する抗体が、F3クローンによるFoxP3タンパク質発現増強作用を阻害することを示す。
(1)本実施例で使用した抗体
市販されている抗MCP1抗体(BD PharMingen社製 #551226)、抗TSP1抗体(ABCAM社製 #ab3131)、抗FSTL1抗体(R&D社製 #MAB1694)、抗TGF-beta1抗体(R&D社製 #MAB246)、抗IL-10抗体(R&D社製 #MAB2171)、抗IL-13Ra2抗体(R&D社製 #AF146)、マウスIgG抗体(BD Pharmingen #557273)を用いた。
抗MCP1抗体、抗TSP1抗体、抗FSTL1抗体、抗IL13Ra2抗体を最終濃度1〜5μg/mLで不活性化した腫瘍細胞に直接またはその培養培地に添加してPBMCと3日間培養し、そのPBMCを回収した。ポジティブコントロールとして、抗TGF-beta1抗体、抗IL-10抗体を用い、ネガティブコントロールとして、マウスIgG抗体を用いた。
腫瘍細胞の培養上清の調製方法やFoxP3タンパク質の発現解析は[5]と同様に行った。
図6には、各抗体を用いたときのCD4+細胞におけるFoxP3タンパク質の発現レベルの測定結果を示す。また、図7には、各抗体を用いたときのCD4+細胞、CD4+CD25+細胞、CD4+CD25-細胞におけるFoxP3タンパク質の発現レベルの測定結果を示す。
<目的>
抗IL-13Ra2抗体が、B11クローンによるFoxP3タンパク質発現増強活性を阻害することを示す。
抗体として、抗MCP1抗体及び抗IL-13Ra2抗体を用い、腫瘍細胞としてB11クローンを用いた以外は、[7]と同様に実験を行った。ここでは、FoxP3発現増強活性を阻害するポジティブコントロールとして、抗IL-13抗体を用いた。
図8に抗MCP1抗体及び抗IL-13Ra2抗体を用いた結果を示す。
<目的>
抗MCP1抗体、及び抗IL-13Ra2抗体が、マウスメラノーマB16-F10のFoxP3タンパク質発現増強活性を阻害することを示す。
(1)脾臓細胞の調整方法
免疫細胞としてはbulk PBMCの代わりに、マウス脾臓細胞を用いた。まず、マウスから脾臓を採取し、ホモゲナイズ後、細胞浮遊液をヒトbulk PBMCと同様にフィコールで分離し、中間層にある細胞分画を使用した。
基本的には、ヒト培養細胞と同様に行ったが、共培養あるいは培養上清存在下での培養は、ヒト細胞が3〜4日間であるのに対し、マウスメラノーマでは5〜6日間行った。
図9(上段)に抗MCP1抗体、抗TSP1抗体、及び抗IL-13Ra2抗体を用いた結果を示す。ネガティブコントロールとしてマウスIgGを、ポジティブコントロールとして抗TGF-b抗体、及び抗IL-10抗体を用いた。
抗TSP1抗体では、マウスメラノーマB16-F10のFoxP3タンパク質発現増強作用を抑制できなかったが、抗MCP1抗体及び抗IL-13Ra2抗体は、図に示されているように28〜45%程度、FoxP3タンパク質発現増強作用を抑制した。
このように、FoxP3タンパク質発現増強作用の抑制は、ヒト腫瘍細胞に限らず、マウス腫瘍細胞でもその効果が観察される。
<目的>
MCP1、TSP1、FSTL1、または分泌型IL-13Ra2の各サイトカインがCD4+細胞に対し、FoxP3タンパク質の発現を増強させることを示す。
培養上清に代えて、各サイトカインを1ng/mLの濃度で添加した培地を用いる以外は、[5]と同様に実験を行った。ポジティブコントロールとして、Panc-1細胞及びF3クローンの培養上清、TGF-b及びIL-10のサイトカインを用いた。各サイトカインは市販されているものを使用した(MCP1: R&D社 #279-MC, TSP1: R&D社 #3074-TH, FSTL1: R&D社 #669-FO, 分泌型IL-13Ra2: Abcam社 #ab46112, TGF-b: R&D社 #100-B, IL-10: eBioscience社 #34-8109)。
図10にFoxP3タンパク質の発現の測定結果を示す。
何も添加しない培地(図ではMediumと表示;発現レベルは2.55)と比較して、MCP1タンパク質(発現レベルは17.35)、TSP1タンパク質(発現レベルは18.40)、FSTL1タンパク質(発現レベルは16.00)、分泌型IL-13Ra2タンパク質(発現レベルは20.21)のいずれもが、F3クローンの培養上清(発現レベルは17.08)と同程度のFoxP3タンパク質発現増強作用を示した。
このように、MCP1、TSP1、FSTL1、及び分泌型IL-13Ra2の各サイトカインは、FoxP3タンパク質発現増強剤として有用である。
<目的>
Snail発現細胞によるFoxP3タンパク質の発現増強作用には、直接的作用と間接的作用があり、間接的作用には少なくとも樹状細胞が関与していることを示す。
免疫細胞として、bulk PBMCの代わりに、単離したCD4+細胞を用い、(1)CD4+細胞単独にF3細胞を加えた場合(2)CD4+細胞+樹状細胞(DC)にF3細胞を加えた場合(3)CD4+細胞+他の細胞(others=bulk PBMCから CD4+細胞と樹状細胞を除去した残りの細胞)にF3細胞を加えた場合(4)CD4+細胞単独にF3細胞培養上清を加えた場合(5)CD4+細胞単独にF3細胞/DCの共培養上清を加えた場合(6)CD4+細胞単独にF3細胞/他の細胞の共培養上清を加えた場合(7)CD4+細胞単独にF3細胞/DC/他の細胞の共培養上清を加えた場合、のそれぞれにおいて、CD4+細胞におけるFoxP3タンパク質の発現レベルを調べた。
CD4+細胞及びCD11c+細胞(樹状細胞)は、(2)と同様の方法でMACS抗体(Miltenyi Biotec社)を用いてbulk PBMCから単離した。その他の実験方法もまた上記に準じる。
図11にFoxP3タンパク質の発現の測定結果を示す。図中、中段は細胞を添加した場合の実験結果、下段は培養上清を添加した場合の実験結果を示す。
<目的>
CD8+細胞においても、CD4+細胞と同様に、snail遺伝子強制発現クローンF3の細胞上清によってFoxP3タンパク質発現が誘導されることを示す。
対象とする細胞をCD4+細胞からCD8+細胞に変えた以外は、[5]と同様の方法で実験を行った。
図12にFoxP3タンパク質の発現の測定結果を示す。
CD4+細胞で得られた結果と同様、腫瘍細胞の上清を加えない場合(図ではNo Tumor)に比べ、親細胞株であるPanc-1の細胞上清(図ではParent(Snail-))では、FoxP3タンパク質発現は少ししか上昇しないが、F3の細胞上清を加えると(図ではF3(Snail+))、CD8+細胞においてもFoxP3タンパク質発現の増強が観察された。
このように、CD8+細胞に対しても、Snail発現細胞の培養上清は、FoxP3タンパク質発現を増強させる。
<目的>
CD8+細胞においても、CD4+細胞と同様に、抗TSP1抗体及び抗IL-13Ra2抗体によって、CD8+細胞におけるFoxP3タンパク質発現増強が抑制されることを示す。
対象とする細胞をCD4+細胞からCD8+細胞に変えたこと以外は、[7]と同様の方法で実験を行った。なお、F3細胞に対しては抗MCP1抗体及び抗TSP1抗体を用い、B11細胞に対しては抗IL-13Ra2抗体を用いた。ネガティブコントロールには、マウスIgG抗体を用いて同様の実験を行った。
図13には、F3細胞に対して抗MCP1抗体及び抗TSP1抗体を用いた場合、図14には、B11細胞に対しては抗IL-13Ra2抗体を用いた場合のFoxP3タンパク質の発現の測定結果を示す。
<目的>
snail遺伝子を発現している腫瘍細胞に対し、抗MCP1抗体及び抗TSP1抗体を添加すると、腫瘍細胞の増殖が抑制されることを示す。
(1)細胞増殖測定方法
Panc-1細胞及びF3細胞の培地に、抗MCP1抗体、抗TSP1抗体、または、コントロールとして抗TGF-b抗体を2μg/mLの濃度で添加して3日間培養後、1/10量のPremix WST-1溶液(タカラバイオ社)を加えてさらに4時間培養し、その後、マイクロプレートリーダーで吸光度(450-655nm)を測定して、その数値を細胞の増殖量とした。測定結果は、コントロールのmIgGで得られたときの値を100%として増殖阻害率も表示した。
結果を図15に示す。抗MCP1抗体及び抗TSP1抗体は、Panc-1細胞(図ではParent-snail(-))及びF3細胞(図ではF3-snail(+))の両方に対し、34%〜77%まで増殖を阻害する。このように、MCP1またはTSP1の機能を阻害することにより、腫瘍細胞の増殖能を低下させることができる。
<目的>
snail遺伝子を発現している腫瘍細胞に対し、抗MCP1抗体及び抗FSTL1抗体を添加すると、腫瘍細胞の浸潤が抑制されることを示す。
5x104個のF3細胞をメンブレンがmatrigelでコートされたTranswell Chamber(ポアサイズ8μm, BD bioscience社)の上層に入れて一晩培養した (37℃, 5%CO2)。抗MCP1抗体または抗FSTL1抗体は上層と下層の両方に1μg/mLの濃度で添加して培養した。メンブレン上の細胞を完全に除去後、下層へ浸潤した細胞をクリスタルバイオレット溶液で固定・染色して顕微鏡下で計数することにより、細胞浸潤能を測定した。ネガティブコントロール(mIgG)で得られた結果を100%とし、浸潤した細胞の個数の割合も表示した。なお、ポジティブコントロールとして、抗IL-10抗体と抗TGF-b抗体を用いた。
細胞浸潤能の測定結果を図16に示す。
親株のPanc-1細胞(図ではparentと示した)に比べ、F3細胞(図ではmIgGと示した)は細胞浸潤能が増強していた。そのF3細胞に対し、抗TSP1抗体を投与した場合では、細胞の浸潤能は変化が無かったが、抗MCP1抗体または抗FSTL1抗体を用いたときは、細胞の浸潤能が約45%に低下した。このように、抗MCP1抗体及び抗FSTL1抗体は、Snail発現腫瘍細胞の細胞浸潤能を低下させる作用を有する。
白血病細胞において、Snail発現を抑制することにより、白血病細胞の浸潤能を低下させることができることを示す。
まず、白血病細胞株(Molt-3、Molt-4、UF1、KT1、K562、MC3)において、Snail、MCP-1、FSTL-1の発現をRT-PCRで調べた。方法は、[1][2][6]に記載の通りであるが、MCP-1に対しては、以下の配列を有するプライマーを用いた。
Forward 5'-GTGTTTGACATCTTTGAACTC-3'(配列番号13)
Reverse 5'-CCAAAGACAAACCTCACATTC-3'(配列番号14)
図17Aに示したRT-PCRの結果から、調べた限り、全ての白血病細胞株でSnailの高発現が検出された。
また、図17Bに、各白血病細胞株に対して測定した浸潤細胞数を示す。いずれの白血病細胞株においても、snail遺伝子に特異的なsiRNAで処理しない白血病細胞(図ではNoneまたはControl)に比べ、snai1遺伝子特異的なsiRNAで処理した場合に浸潤能が有意に抑制された(P<0.001〜0.05)。
このように、白血病細胞において、Snail発現を抑制することにより、白血病細胞の浸潤能を低下させることができる。従って、Snailの機能を抑制する物質は、抗白血病薬として有用である。
<目的>
腫瘍細胞は、貪食細胞によって貪食されて消化・排除されるが、Snail発現腫瘍細胞は、その貪食作用を阻害し、さらに、MCP1タンパク質、IL-13Ra2タンパク質、IL-13タンパク質、IL-4タンパク質、CCR2タンパク質、IL-10タンパク質に対する抗体が、Snail発現腫瘍細胞による貪食阻害作用を抑制することを示す。
抗MCP-1抗体:BD Phamingen社、抗CCR2抗体:Abcam社:、抗IL-13抗体:Abcam社:、抗IL-13Ra2抗体:R&D社:、抗IL-4抗体:BD Biosciences社:、抗IL-10抗体:R&D社
<方法>
ヒト大腸癌HCT116細胞またはsnail遺伝子を強制発現させたB11クローンとヒトPBMCとを、各抗体(1μg/mL)の存在下で3日間共培養して接触させ、そのPBMCをPKH26赤色蛍光でラベルした。このPBMCにCSFE緑色蛍光でラベルしたHCT116細胞を1:1で加え、2時間、37℃で培養後に、フローサトメトリー(FCM)で赤色と緑色の両方の蛍光でラベルされた細胞(即ち、癌細胞を貪食しているPBMC中の細胞)の割合を解析した。なお、自然に生じる貪食(バックグランド)を見るため、低温(4℃)で2時間培養した。
<結果>
snail遺伝子を発現していないHCT116細胞で処理したPBMC(図18ではMock-treated PBMCs)は、約25%の細胞が両方の蛍光でラベルされていた。しかし、B11クローンで処理したPBMC(図18ではB11-treated PBMCs)は、PBMC中約10%の細胞のみが両方の蛍光でラベルされていた。このように、Snail発現腫瘍細胞は、PBMCに含まれる貪食細胞の作用を抑制する機能を有する。
<目的>
Snailタンパク質の機能あるいはMCP1シグナルをin vivoで抑制することにより、腫瘍細胞による腫瘍免疫抑制が解除できることを示す。
マウスメラノーマB16-F10に対し、snail遺伝子を強制発現させた細胞(H6-snail+)を[1]と同様に作製し、C57BL/6Nマウスに移植(1x106個の皮下接種と2x105個の静脈内接種を1匹の個体に両方同時に行った)した。7日後に、PEI(Polyplus Transfection社)を用いて脂質複合体を形成させたSnailまたはMCP1遺伝子に特異的なsiRNAまたはコントロールsiRNA(5μg/匹,Invitrogen社)をその皮下移植した腫瘍内へそれぞれ注入した。
マウスsnail遺伝子特異的siRNAの配列:
Sense 5'-GGAAGAUCUUCAACUGCAA-3'(配列番号15)
Antisense 5'-UUGCAGUUGAAGAUCUUCC-3'(配列番号16)
マウスMCP1遺伝子特異的siRNAの配列:
Sense 5'-CCAGCAAGAUGAUCCCAAU-3'(配列番号17)
Antisense 5'-AUUGGGAUCAUCUUGCUGG-3'(配列番号18)
マウスsiRNA用コントロールの配列:
Sense 5'-CCAGAAGUACUACCGCAAU-3'(配列番号19)
Antisense 5'-AUUGCGGUAGUACUUCUGG-3'(配列番号20)
図19に、測定した腫瘍体積(A)、肺転移結節数(B)、および、腫瘍内浸潤細胞のフローサイトメトリー解析(C)の結果を示す。
<目的>
TSP1タンパク質の機能をin vivoで抑制することにより、腫瘍細胞による腫瘍免疫抑制が解除できることを示す。
マウスメラノーマB16-F10及びH6-snail+をC57BL/6Nマウスに1x106個を皮下移植した7日後、抗TSP-1抗体(5μg/匹、Calbiochem社)をその皮下接種腫瘍内へ注入し、1週間後に以下のアッセイを行った。
(1)腫瘍体積を測定した。
(2)各臓器(LG 肺; SP 脾臓; PB 末梢血; BM 骨髄)において、腫瘍細胞の微少転移を検出するために、B16-F10細胞が特異的に発現する癌抗原gp100の遺伝子発現をRT-PCRによって調べた。なお、下記のプライマーを用いた以外、RT-PCRは[1]と同様に行った。
gp100に特異的なプライマー配列:
Forward 5'-ACAGCCAGTGTATCCACAGG-3'(配列番号22)
Reverse 5'-ACTTCCATTGTGTGTGTGCC-3'(配列番号23)
コントロールであるGAPDHに特異的なプライマー配列:
Forward 5'-TTGACCTCAACTACATGGTCTA-3'(配列番号24)
Reverse 5'-ACCAGTAGACTCCACGACATAC-3'(配列番号25)
(3)腫瘍内浸潤細胞を、[18]と同様にしてフローサイトメーターFACScanで解析した。
図20に、測定した腫瘍体積(A)、肺転移結節数(B)、および、腫瘍内浸潤細胞のフローサイトメトリー解析(C)の結果を示す。
Claims (30)
- 細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤であって、
Snailタンパク質、またはFSTL1タンパク質を発現する細胞を含有することを特徴とする遺伝子発現増強剤。 - 細胞においてFoxP3遺伝子の発現を増強させる遺伝子発現増強剤であって、
FSTL1タンパク質を含有することを特徴とする遺伝子発現増強剤。 - Snailタンパク質を発現する細胞、またはFSTL1タンパク質を分泌する細胞の培養上清を含有することを特徴とする請求項2に記載の遺伝子発現増強剤。
- 前記細胞が腫瘍細胞であることを特徴とする請求項1または3に記載の遺伝子発現増強剤。
- 細胞を制御性T細胞に分化誘導する細胞分化誘導剤であって、
Snailタンパク質、またはFSTL1タンパク質を発現する細胞を含有することを特徴とする細胞分化誘導剤。 - 細胞を制御性T細胞に分化誘導する細胞分化誘導剤であって、
FSTL1タンパク質を含有することを特徴とする細胞分化誘導剤。 - Snailタンパク質を発現する細胞、またはFSTL1タンパク質を発現する細胞を含有する免疫抑制剤。
- FSTL1タンパク質を含有する免疫抑制剤。
- Snailタンパク質、またはFSTL1タンパク質を発現する細胞を含有する過剰免疫疾患治療剤。
- FSTL1タンパク質を含有する過剰免疫疾患治療剤。
- 細胞(ヒト個体中の細胞を除く)におけるFoxP3遺伝子の発現増強を阻害する遺伝子発現増強阻害方法であって、
抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制することを特徴とする遺伝子発現増強阻害方法。 - 細胞におけるFoxP3遺伝子の発現増強を阻害する遺伝子発現増強阻害剤であって、
FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有することを特徴とする遺伝子発現増強阻害剤。 - 細胞(ヒト個体中の細胞を除く)の制御性T細胞への分化誘導を阻害する細胞分化誘導阻害方法であって、
抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制することを特徴とする細胞分化誘導阻害方法。 - 細胞の制御性T細胞への分化誘導を阻害する細胞分化誘導阻害剤であって、
FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有することを特徴とする細胞分化誘導阻害剤。 - ヒト以外の脊椎動物において、抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制する免疫抑制解除方法。
- FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有する免疫抑制解除剤。
- ヒト以外の脊椎動物において、抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制する腫瘍免疫賦活方法。
- FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有する腫瘍免疫賦活剤。
- ヒト以外の脊椎動物において、抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制する抗腫瘍方法。
- FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有する抗腫瘍剤。
- ヒト以外の脊椎動物において、抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制する腫瘍細胞浸潤抑制方法。
- FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有する腫瘍細胞浸潤抑制剤。
- ヒト以外の脊椎動物において、抗FSTL1抗体を用いてFSTL1タンパク質の機能を抑制する腫瘍転移抑制方法。
- FSTL1タンパク質阻害活性を有する抗FSTL1抗体を含有する腫瘍転移抑制剤。
- 細胞(ヒト個体中の細胞を除く)におけるFoxP3遺伝子、MCP1(monocyte chemoattractant protein-1)遺伝子、TSP1(thrombospondin-1)遺伝子、FSTL1(Follistatin-like 1)遺伝子、またはIL-13Ra2(interleukin 13 alpha 2 receptor)遺伝子の遺伝子発現増強方法であって、
Snail遺伝子の強制発現ベクターを前記細胞に導入してSnailタンパク質の活性を増強することを特徴とする遺伝子発現増強方法。 - 細胞におけるFoxP3遺伝子、MCP1(monocyte chemoattractant protein-1)遺伝子、TSP1(thrombospondin-1)遺伝子、FSTL1(Follistatin-like 1)遺伝子、またはIL-13Ra2(interleukin 13 alpha 2 receptor)遺伝子の遺伝子発現増強剤であって、
Snail遺伝子強制発現ベクターを含有することを特徴とする遺伝子発現増強剤。 - 前記細胞がPanc-1細胞であることを特徴とする請求項26に記載の遺伝子発現増強剤。
- 前記細胞がPanc-1細胞であることを特徴とする請求項25に記載の遺伝子発現増強方法。
- 血液のがんに対する抗癌剤であって、Snailタンパク質阻害活性を有する抗Snail抗体、並びにSnailタンパク質の発現を阻害するアンチセンスRNA、siRNAおよびshRNAからなる群から選択される1以上を含有する、抗癌剤。
- 血液のがんが白血病であることを特徴とする請求項29に記載の抗癌剤。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2009530080A JP5641599B2 (ja) | 2007-08-24 | 2008-08-22 | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007218977 | 2007-08-24 | ||
JP2007218977 | 2007-08-24 | ||
PCT/JP2008/064987 WO2009028411A1 (ja) | 2007-08-24 | 2008-08-22 | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 |
JP2009530080A JP5641599B2 (ja) | 2007-08-24 | 2008-08-22 | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2009028411A1 JPWO2009028411A1 (ja) | 2010-12-02 |
JP5641599B2 true JP5641599B2 (ja) | 2014-12-17 |
Family
ID=40387133
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009530080A Active JP5641599B2 (ja) | 2007-08-24 | 2008-08-22 | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US20100291677A1 (ja) |
EP (2) | EP3178496A1 (ja) |
JP (1) | JP5641599B2 (ja) |
CN (2) | CN101808664A (ja) |
WO (1) | WO2009028411A1 (ja) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5709396B2 (ja) * | 2010-03-30 | 2015-04-30 | 学校法人慶應義塾 | がんワクチン |
EP2981822B1 (en) | 2013-05-06 | 2020-09-02 | Scholar Rock, Inc. | Compositions and methods for growth factor modulation |
CA2919765C (en) * | 2013-08-01 | 2023-03-21 | Universite Catholique De Louvain | Anti-garp protein and uses thereof |
US20170073406A1 (en) * | 2014-05-06 | 2017-03-16 | Scholar Rock, Inc. | Compositions and methods for growth factor modulation |
US10806787B2 (en) | 2015-02-16 | 2020-10-20 | Pharma Foods International Co., Ltd. | Anticancer agents or antimetastatic agents using FSTL1 and combination drug thereof |
JP7012363B2 (ja) * | 2016-08-01 | 2022-01-28 | 株式会社ファーマフーズ | がん患者におけるfstl1阻害剤による治療効果を予測するためのバイオマーカー |
JP6311148B2 (ja) * | 2016-11-15 | 2018-04-18 | 国立大学法人三重大学 | 線維症予防又は治療剤 |
JPWO2018186032A1 (ja) * | 2017-04-05 | 2020-02-13 | 国立大学法人千葉大学 | Swi/snf複合体の機能阻害剤 |
CN110573181A (zh) * | 2017-04-28 | 2019-12-13 | 成均馆大学校产学协力团 | 表达foxp3的树突状细胞在癌症的诊断和治疗中的用途 |
JP6985135B2 (ja) * | 2017-12-25 | 2021-12-22 | 小林製薬株式会社 | 制御性t細胞分化抑制剤、及び免疫調節用組成物 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2005062972A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Tanox, Inc. | Treatment of cancer with novel anti-il 13 monoclonal antibodies |
JP2005526842A (ja) * | 2002-03-22 | 2005-09-08 | ザ ペン ステート リサーチ ファウンデーション | 癌免疫療法 |
JP2005536534A (ja) * | 2002-08-19 | 2005-12-02 | アブジェニックス・インコーポレーテッド | 単球走化性タンパク質−1(mcp−1)に対する抗体、およびその使用 |
JP2006206538A (ja) * | 2005-01-31 | 2006-08-10 | Institute Of Physical & Chemical Research | 抗原提示細胞の機能制御剤 |
WO2006109301A2 (en) * | 2005-04-15 | 2006-10-19 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Molecules and methods of using same for treating mcp-1/ccr2 associated diseases |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69132708T2 (de) * | 1990-09-24 | 2002-06-20 | Grace W R & Co | Therapeutische Vervendung von Peptiden mit Thrombospondin - ähnlicher Aktivität |
WO2004087758A2 (en) * | 2003-03-26 | 2004-10-14 | Neopharm, Inc. | Il 13 receptor alpha 2 antibody and methods of use |
-
2008
- 2008-08-22 JP JP2009530080A patent/JP5641599B2/ja active Active
- 2008-08-22 EP EP16201981.4A patent/EP3178496A1/en not_active Withdrawn
- 2008-08-22 CN CN200880110043A patent/CN101808664A/zh active Pending
- 2008-08-22 CN CN201210408856.3A patent/CN103223165B/zh active Active
- 2008-08-22 US US12/674,881 patent/US20100291677A1/en not_active Abandoned
- 2008-08-22 WO PCT/JP2008/064987 patent/WO2009028411A1/ja active Application Filing
- 2008-08-22 EP EP08792646.5A patent/EP2193805A4/en not_active Ceased
-
2012
- 2012-09-26 US US13/627,655 patent/US9169324B2/en active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005526842A (ja) * | 2002-03-22 | 2005-09-08 | ザ ペン ステート リサーチ ファウンデーション | 癌免疫療法 |
JP2005536534A (ja) * | 2002-08-19 | 2005-12-02 | アブジェニックス・インコーポレーテッド | 単球走化性タンパク質−1(mcp−1)に対する抗体、およびその使用 |
WO2005062972A2 (en) * | 2003-12-23 | 2005-07-14 | Tanox, Inc. | Treatment of cancer with novel anti-il 13 monoclonal antibodies |
JP2006206538A (ja) * | 2005-01-31 | 2006-08-10 | Institute Of Physical & Chemical Research | 抗原提示細胞の機能制御剤 |
WO2006109301A2 (en) * | 2005-04-15 | 2006-10-19 | Rappaport Family Institute For Research In The Medical Sciences | Molecules and methods of using same for treating mcp-1/ccr2 associated diseases |
Non-Patent Citations (13)
Title |
---|
JPN6008061129; DePaolo R.W. et al.: 'CC chemokine ligand 2 and its receptor regulate mucosal production of IL-12 and TGF-beta in high dos' The Journal of Immunology Vol.171, No.7, 2003, p.3560-3567 * |
JPN6008061131; Miyara M. et al.: 'Natural regulatory T cells: mechanisms of suppression' Trends in molecular medicine Vo.13, No.3, 200703, p.108-116 * |
JPN6008061132; 村上孝 他: '制御性T細胞の誘導とその応用' 今日の移植 第20巻,第4号, 20070803, p.335-340 * |
JPN6008061133; 西川博嘉 他: '制御性T細胞による免疫抑制とその克服-有効な癌ワクチン療法の開発に向けて' 医学のあゆみ 第221巻,第8号, 20070526, p.631-636 * |
JPN6008061134; Fichtner-Feigl S. et al.: 'IL-13 signaling through the IL-13alpha2 receptor is involved in induction of TGF-beta1 production an' Nature medicine Vol.12, No.1, 200601, p.99-106 * |
JPN6008061135; Skapenko A. et al.: 'The IL-4 receptor alpha-chain-binding cytokines, IL-4 and IL-13, induce forkhead box P3-expressing C' Journal of immunology Vol.175, No.9, 2005, p.6107-6116 * |
JPN6008061136; 横山和博 他: '扁平上皮癌の高度浸潤能獲得過程におけるSnailの発現とその作用' 日本口腔腫瘍学会誌 第13巻,第4号(補), 20011215, p.293-300 * |
JPN6008061137; 五十嵐庸 他: '転写因子SNAILのビタミンD受容体を介したヒト大腸がんへの作用の解明' ビタミン 第79巻,第12号, 20051225, p.595-596 * |
JPN6008061138; 三好篤 他: '転写因子Snail,SIP1は肝癌細胞のE-cadherin遺伝子発現を抑制するとともに浸潤能を亢進させる' 日本外科学会雑誌 第104巻,臨時増刊号, 20030430, p.556-557 * |
JPN6008061139; 栢尾純子 他: '白血球細胞の緒臓器への浸潤とその細胞像' 日本臨床細胞学会雑誌 第44巻,補冊2号, 20050922, 第340頁 * |
JPN6008061140; Seo N. et al.: 'Interleukin-10 expressed at early tumour sites induces subsequent generation of CD4(+) T-regulatory' Immunology Vol.103, No.4, 2001, p.449-457 * |
JPN6008061141; Castle V. et al.: 'Antisense-mediated reduction in thrombospondin reverses the malignant phenotype of a human squamous' The Journal of clinical investigation Vo.87, No.6, 1991, p.1883-1888 * |
JPN6008061142; サイトカイン・増殖因子 用語ライブラリー , 20050301, p.147, 株式会社羊土社 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP2193805A4 (en) | 2013-09-04 |
US9169324B2 (en) | 2015-10-27 |
CN103223165A (zh) | 2013-07-31 |
JPWO2009028411A1 (ja) | 2010-12-02 |
US20100291677A1 (en) | 2010-11-18 |
CN103223165B (zh) | 2015-02-11 |
WO2009028411A1 (ja) | 2009-03-05 |
CN101808664A (zh) | 2010-08-18 |
US20130115225A1 (en) | 2013-05-09 |
EP2193805A1 (en) | 2010-06-09 |
EP3178496A1 (en) | 2017-06-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5641599B2 (ja) | 腫瘍細胞による免疫抑制の解除剤とそれを用いた抗腫瘍剤 | |
JP7344898B2 (ja) | 養子注入されたt細胞の持続性を増強する方法 | |
JP2021113200A (ja) | 能動的細胞免疫療法のためのサイトカイン組成物を用いたリンパ球の増殖 | |
KR102028340B1 (ko) | 항원-특이적 t 세포의 증식 방법 | |
KR101610353B1 (ko) | Cdca1 펩티드 및 이를 포함하는 약학적 조성물 | |
JP7374769B2 (ja) | Nk細胞を活性化するための組成物及び方法 | |
US20180325951A1 (en) | Nk cells with an increased antibody-dependent cellular toxicity (adcc) against tumors | |
US10597442B2 (en) | Compositions and methods for modified B cells expressing reassigned biological agents | |
KR20230016183A (ko) | 키메라 항원 수용체를 발현하는 바이러스 특이적 면역 세포 | |
US20220381772A1 (en) | Systems and methods for evaluating nk cells | |
JP2015525069A (ja) | 免疫抑制細胞、並びにその作成方法及び使用方法 | |
JP2023052033A (ja) | 自家t細胞を用いた多発性硬化症の処置方法 | |
AU2009214980B2 (en) | Methods of obtaining antigen-specific T cell populations | |
US20070128670A1 (en) | Methods for the identification and preparation of regulator/suppressor t lymphocytes, compositions and use thereof | |
Matsumiya et al. | High frequency of Bob1lo T follicular helper cells in florid reactive follicular hyperplasia | |
JP5801202B2 (ja) | 抗腫瘍剤およびそのスクリーニング方法 | |
US20210322474A1 (en) | Modulation of apoptosis susceptible cells | |
EP3768707A1 (en) | Compositions and methods for modified b cells expressing reassigned biological agents | |
MacDonald | Understanding & optimizing human T regulatory cell function in patients with autoimmunity and/or undergoing transplantation | |
Treg | The role of Tr1-cells in inflammatory bowel diseases | |
Popple | The tumour microenvironment influences antigen specific T cell transmigration | |
Zhou | Regulation of T Cell Development and Function by GARP-TGFβ complexes | |
Burocchi | Modulation of regulatory T cell suppression in tumors through OX40 | |
Taylor | Balancing Pro-and Anti-Inflammatory Signals for Effective Immunotherapy in the Post-Hematopoietic Stem Cell Transplant and Solid Tumor Settings | |
Tien | Immune cell alterations in mouse models of prostate cancer |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20110623 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20130611 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130812 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140408 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140609 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20140805 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140901 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20140912 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20141007 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20141024 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5641599 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313113 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |