JP5634710B2 - タンパク質産生用およびウイルス増殖用の培地 - Google Patents
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Description
FASEB J., 8 (1): 28-35 (1994) J. Biol. Chem., 275 (41): 31555-31558 (2000) The Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 102 (50): 17952-17957 (2005)
1.動物細胞を用いて、タンパク質を産生および/またはウイルスを増殖させるための細胞培養用培地において、フルクトース、アラビノース、マルツロース、ラクツロース、メリビオース、パラチノース、トレハロース、キシロース、イソマルトース、ラフィノース、マルトトリオース、N−アセチルグルコサミン、キシリトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、ラクトース、ガラクトース、ツラノースおよびラクチトールからなる群より選択される少なくとも1種の糖を含む細胞培養用培地。
2.選択される少なくとも1種の糖が、フルクトース、マルツロース、ラクツロース、メリビオース、ラフィノース、キシリトール、ソルビトール、およびラクチトールからなる群より選択される前項1に記載の細胞培養用培地。
3.選択される少なくとも1種の糖がラクツロースであり、さらにラフィノースまたはラクトースを含む前項2に記載の細胞培養用培地。
4.選択される少なくとも1種の糖がラフィノースであり、さらにラクトースを含む前項2に記載の細胞培養用培地。
5.選択される少なくとも1種の糖が、フルクトースであり、さらにグルコースまたはガラクトースを含む前項2に記載の細胞培養用培地。
6.細胞培養用培地に含まれる糖濃度が、1.0〜10w/v%である前項1〜5のいずれか1に記載の細胞培養用培地。
7.以下の工程を含む、動物細胞を用いたタンパク質の産生および/またはウイルスの増殖方法:
1)タンパク質を産生および/またはウイルスを増殖する細胞を人為的に構築する工程;
2)当該構築した細胞を、前項1〜6の何れか1に記載の細胞培養用培地を用いて培養する工程。
8.タンパク質を産生する方法であり、上記1)の細胞を構築する工程が以下の工程を含む、前項7に記載の産生方法:
a)当該タンパク質をコードするDNAと、該DNAを発現させるための発現プロモーター配列を含むDNAを含むベクターを調製する工程;と、
b)当該ベクターを動物細胞に導入する工程。
9.上記DNAを発現させるための発現プロモーターが、HCMV MIEプロモーター、SV40 early プロモーター、SRαプロモーター、RSV LTRプロモーター、HIV 5'LTRプロモーター、Pol IIプロモーター、UB(ユビキチン)プロモーターおよびEF-1αプロモーターからなる群より選択される1種以上の発現プロモーターである前項8に記載の産生方法。
10.ウイルスを産生する方法であり、上記1)の細胞を構築する工程が以下の工程を含む、前項8に記載の産生方法;
a)ウイルスを細胞に感染させて感染細胞を構築する工程。
□ 糖無添加培地 (図13〜21)
上記において、動物細胞とは、タンパク質の産生またはウイルスの増殖に使用可能な動物細胞であればよく、特に限定されない。例えばヒト、サル、ウシ、ブタ、ウサギ、イヌ、ラット、ハムスター等の哺乳動物由来の動物細胞;アヒル等の鳥類由来の動物細胞;ゼブラフィッシュ、ドロミノウ、ウナギ、キンギョ、メダカ、テラピア等の魚類由来の動物細胞;カエル、イモリ、サンショウウオ等の両生類由来の動物細胞;ハエ、チョウ、アワヨトウ、ガ、カイコ等の昆虫由来の動物細胞等を挙げることができ、好適には上述のうち哺乳動物由来の動物細胞または昆虫由来の動物細胞を挙げることができる。
本発明の細胞培養用培地は、上記の細胞を培養するための培地の組成物として、さらに糖類を含むものである。具体的には単糖類であるフルクトース、アラビノース、グルコース、ガラクトース;二糖類であるマルツロース、ラクツロース、メリビオース、パラチノース、トレハロース、キシロース、イソマルトース、セロビオース、スクロース、ラクトース、ツラノース;三糖類であるラフィノース、マルトトリオース;アミノ糖であるN−アセチルグルコサミン;糖アルコール類であるキシリトール、イノシトール、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、およびラクチトールからなる群より選択される少なくとも1種の糖を含むことを特徴とする。
1)タンパク質を産生する細胞を人為的に構築する工程
本発明に係るタンパク質の産生方法は、a)所望の目的タンパク質をコードするDNAと、該DNAを発現させるための発現プロモーター配列を含むベクターを調製する工程、およびb)当該ベクターを動物細胞に導入する工程を含む、タンパク質を産生する細胞を人為的に構築する工程を含む。
目的タンパク質をコードするDNAは、常法により調製することができる。例えば、目的タンパク質を産生するように刺激した細胞から総RNAを得、この総RNAから、オリゴdTセルロースカラム等を利用してポリ(A)を有するmRNAを精製する。得られたmRNAから逆転写酵素を用いてcDNAを調製し、さらに所望のDNAを増幅するためのプライマーを用いたPCR反応を行えばよい。
SV40 early プロモーター:サルに感染するウイルスであるSV40の初期発現プロモーターとエンハンサー;
SRαプロモーター:SV40 early プロモーターの下流に、ヒトT細胞リンパ球ウイルス1型(HTLV−1)の末端反復配列の267bpを結合したもの;
RSV LTRプロモーター: マウス肉腫ウイルスの3'末端反復配列プロモーター;
HIV 5' LTRプロモーター:ヒト免疫不全ウイルス(HIV)のゲノム両端に存在する繰り返し配列(LTR)のうち5'末端側に位置する。エンハンサー、プロモーターを含む。
UbC(ユビキチンC)プロモーター:ユビキチンCのプロモーターで種々の培養細胞で安定して働く。
EF-1αプロモーター:タンパク質成合成の伸長因子であるEF-1αのプロモーターで種々の細胞で安定して強く働く。
次に、上記工程で得られたベクターを細胞に導入するかまたは感染させる。ここで使用する細胞は、使用するベクターに感受性を有し、且つ導入された発現プロモーターの活性化により導入DNAを発現できるものであり、導入する発現プロモーターに応じて、適宜選択することができる。
次いで、上記1)で構築したDNA導入細胞を培養する。培養温度は、DNA導入細胞の生育や、目的タンパク質の発現および安定性に適する温度を適宜選択することにより決定することができる。また、培養時間は、予備実験や、培地中や細胞内における目的タンパク質の生成のモニター結果などにより適宜決定すればよい。
・ 細胞内へのDNAの導入効率
・ 細胞内へ導入されたDNAの、核への到達率
・ 発現プロモーターの活性化率
・ mRNAからタンパク質合成の効率
・ 産生されたタンパク質の安定性
上記ウイルス増殖促進方法は、所望の目的ウイルスを細胞に感染させて感染細胞を構築する工程を含み、当該目的ウイルスを感染した細胞を本発明の培地を用いて培養することによる。目的ウイルスを細胞に感染させる工程は、ベクターの代わりに目的ウイルスを用いる以外は、本発明に係るタンパク質の製造方法におけるDNA導入工程と同様に行うことができる。但し、使用する細胞は、目的ウイルスが感染可能なものとする。また、培養工程も、本発明に係るタンパク質の製造方法と同様に行うことができる。但し、溶菌により遊離ウイルスを放出せしめるために、紫外線や放射線を照射するなどにより細胞を弱体化してもよい。
アフリカミドリザル腎細胞由来のCV−1細胞を、5 v/v%ウシ胎児血清(FBS)含有MEM培地へ0.5×105細胞/mLの密度で懸濁した。この細胞浮遊液を100μL/ウェルずつ96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。
発現プロモーターとしてHCMV MIEプロモーター (CMV)、SV40 early プロモーター (SV40)またはRSV LTRプロモーター (RSV)を用い、糖としてラクツロース、D−ラクチトール、メソエリスリトール、またはグリセロールを用いた以外は上記実施例1と同手法により実験を行った。
実施例1と同様の方法により、発現プロモーターとしてHCMV MIEプロモーター (CMV)を用いて、各種糖類を加えたときの蛍光強度を調べた。アロースなどの糖類の他、アスコルビン酸やグルクロン酸などを用いた系についても確認した。
上記実施例3と同様の方法で実験を行い、糖としてイソマルトース、セロビオース、ツラノース、マルツロース、ラクツロース、マルトトリオース、ラクチトールを用いたときの蛍光強度を調べた。追加した各糖の培地における最終濃度は、マルトトリオースを6 w/v%とした他は4 w/v%とした。糖類無添加の対照を1とした場合の蛍光強度の相対値を、図4に示した。
実施例3と同様の方法で実験を行い、糖類として各濃度のメリビオースを加えたときの蛍光強度を調べた。糖類を用いなかった場合の結果を1とした場合の蛍光強度の相対値を、図5に示した。その結果、メリビオース0.2 w/v%の添加で、1.5倍以上の増強効果が認められた。
糖類と共に、転写活性化因子を併用した場合におけるタンパク質遺伝子の発現向上効果を試験した。転写活性化因子の利用は、ヒトサイトメガロウイルス (HCMV)の転写活性化因子であるHCMV pp71 をコードする遺伝子を発現できるプラスミドpCGN71を、GFP遺伝子を組み込んだレポータープラスミドと共に遺伝子導入することにより行った。
具体的には実施例3と同様の方法で実験を行い、糖類を添加せず、転写活性化因子を利用しない場合(図6において「GFP」と示す。)、糖類を添加せず且つ転写活性化因子を利用した場合(pp71)、糖類としてメリビオースを培地中に3 w/v%添加した場合(Meli)、および糖類としてメリビオースを培地中に3 w/v%添加し且つ転写活性化因子を併用した場合(pp71+Meli)について、培養開始から24、48、および72時間後における蛍光強度を測定した。
各糖の組合せによる発現プロモーターの活性化効果を確認した。具体的には実施例3と同様の方法で実験を行い、単糖の組合せによるHCMV MIEプロモーターの活性化と、二糖および三糖の組合せによるHCMV MIEプロモーターの活性化を調べた。添加した各糖の濃度は、各々2 w/v%であった。
ハムスター卵巣細胞由来のCHO−K1細胞を、5 v/v%FBS含有MEM培地へ0.5×105細胞/mLの密度で懸濁した。この細胞浮遊液を100μL/ウェルずつ96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。その他は、実施例3と同様の実験を行った。
初代仔ウサギ腎臓由来のRK細胞を、5 v/v%FBS含有MEM培地へ0.5×105細胞/mLの密度で懸濁した。この細胞浮遊液を100μL/ウェルずつ96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。その他は、実施例3と同様の実験を行った。
アフリカミドリザル腎細胞由来のCV−1細胞を、5 v/v%FBS含有MEM培地へ0.5×105細胞/mLの密度で懸濁した。この細胞浮遊液を100μL/ウェルずつ96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。
実施例10と同様に、アフリカミドリザル腎細胞由来のCV−1細胞を、96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。
実施例10と同様に、アフリカミドリザル腎細胞由来のCV−1細胞を、96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。
実施例10と同様に、アフリカミドリザル腎細胞由来のCV−1細胞を、96ウェルプレートへ播き、37℃で24時間培養した。
4%ラクトースの代わりに、4%フルクトースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%ガラクトースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%ラクツロースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%ツラノースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%パラチノースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%トレハロースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%ソルビトールを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
4%ラクトースの代わりに、4%メリビオースを用いた他は、実施例13と同手法により蛍光強度を測定した。
Vero細胞(アフリカミドリザルの腎臓上皮由来細胞)を、ウシ新生児血清(NCS)を5 v/v%含むMEM培地で0.5×105細胞/mLの密度で懸濁した。この細胞浮遊液を100μL/ウェルずつ96ウェルプレートへ播き、2日間培養後、培地を除去した。予めNCSを2 v/v%含むMEM培地で希釈したヒト単純ヘルペスウイルス1型(HSV-1) 深山-GCr株の懸濁液を、50 pfu/ウェルの濃度となるように加えた。このウイルス濃度は、細胞1個あたり約0.0025 pfuに相当する濃度である。37℃で2時間インキュベートすることにより細胞へウイルスを吸着させてから吸着しなかったウイルス、即ち培地を除去した。別途、NCS 2 v/v%とメチルセルロース1.5%を含むMEM半固形培地に3 w/v%のD−マルトース、4 w/v%のラクツロース、または4 w/v%のラクチトールを添加した。比較のために糖を添加しない培地も用意した。各培地を1ウェル当り200μLずつ加えて37℃で培養した。添加した培地は半固形であることから、ウイルスは培地を介して他の細胞に感染することができず、ウイルスが定着し増殖した細胞に隣接する細胞にのみ感染が広がりプラークを形成した。
NCSを2 v/v%含むMEM培地にラクトースを1〜7 w/v%の各濃度で添加した他は、実施例22と同手法により実験を行った。各培地の添加から24時間ごとに上澄を採取し、実施例22と同様に、常法に従ってVero細胞を用いたプラークアッセイを行うことによりウイルス量を算定した。
二糖類であるマルトースについて、ウイルス増殖促進に及ぼす影響を参考例として示した。Vero細胞を、実施例22と同手法にて96ウェルプレートへ播き、37℃で2日間培養後、培地を除去した。予めNCSを2 v/v%含むMEM培地で希釈したHSV-1 深山-GCr株の懸濁液を、50pfu/ウェルの濃度となるように加え、37℃で2時間インキュベートすることにより細胞へウイルスを吸着させた後、吸着しなかったウイルス、即ち培地を除去した。別途、NCSを2 v/v%含むMEM培地にD−マルトースを1〜7 w/v%の各濃度で添加した。比較のために、D−マルトースを添加しない培地も用意した。各培地を200μL/ウェルずつ加えて37℃で培養した。各培地の添加から24時間ごとに培養上清を採取し、常法に従ってVero細胞を用いたプラークアッセイを行うことによりウイルス量を算定した。
アフリカミドリザル腎臓由来(CV−1)細胞に各濃度のグルコースを添加した5 v/v%FBS含有MEM培地を用いて48時間培養した場合に及ぼす影響を調べた。方法としては、1ウェルあたりの細胞数をトリパンブルーによる色素排除法で計数した。また,1ウェル当たりの総DNA量をDNA結合性蛍光色素PicoGreen(R)(Molecular Probes社製)を用いて測定した。1ウェル当たりの総蛋白量はクマシーブリリアントブルー染色法により定量した。1ウェルあたりの細胞の取り込み活性をニュートラルレッド法により定量した。1ウェルあたりの代謝活性はalamarBlue(R)(Invitrogen社製)を用いて測定した。
Claims (2)
- 以下の工程を含む、動物細胞を用いたタンパク質の産生方法:
1)タンパク質を産生する細胞を人為的に構築する工程:
a)当該タンパク質をコードするDNAと、該DNAを発現させるためのHCMV MIEプロモーター配列を含むDNAを含むベクターを調製する工程;と、
b)当該ベクターを動物細胞に導入する工程。
2)当該構築した細胞を、少なくともマルツロースを含む細胞培養用培地を用いて培養する工程。 - 細胞培養用培地に含まれる糖濃度が、1.0〜10w/v%である請求項1に記載の産生方法。
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US20160185848A1 (en) * | 2014-07-09 | 2016-06-30 | Abbvie Inc. | Methods for modulating the glycosylation profile of recombinant proteins using sugars |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005532813A (ja) * | 2002-07-15 | 2005-11-04 | イミュネックス・コーポレーション | 哺乳動物細胞により産生されるタンパク質のシアル酸付加を調節する方法および培地 |
JP2007505625A (ja) * | 2003-09-18 | 2007-03-15 | レイヴェン バイオテクノロジーズ, インコーポレイテッド | 細胞培養培地 |
Family Cites Families (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPS5533310B2 (ja) * | 1974-02-20 | 1980-08-29 | ||
US4071407A (en) * | 1976-11-16 | 1978-01-31 | The Board Of Trustees Of The University Of Alabama | Novel maltase enzyme produced by a new yeast strain |
JPH02200177A (ja) * | 1989-01-31 | 1990-08-08 | Nippon Kayaku Co Ltd | 動物細胞培養用組成物、培養方法および生理活性物質の製造法 |
CA2097803C (en) * | 1990-12-07 | 2010-08-03 | Lonnie O. Ingram | Recombinant cells that highly express chromosomally-integrated heterologous genes |
FR2671100B1 (fr) * | 1990-12-28 | 1993-03-05 | Bio Merieux | Procede d'analyse bacteriologique, et milieu de detection des bacteries genre salmonella. |
JP3046415B2 (ja) * | 1991-10-04 | 2000-05-29 | 日水製薬株式会社 | 浮遊細胞用無血清合成培地 |
JP3274716B2 (ja) * | 1992-08-19 | 2002-04-15 | 日水製薬株式会社 | サルモネラ分離用培地 |
JP3261571B2 (ja) * | 1997-10-16 | 2002-03-04 | 雪印ラビオ株式会社 | ビフィズス菌の生残性改善方法 |
JPH11127890A (ja) * | 1997-10-31 | 1999-05-18 | Kazuo Shimada | 糖蛋白質の生産方法 |
JP3999894B2 (ja) * | 1998-11-04 | 2007-10-31 | 花王株式会社 | 腸内酪酸菌生育促進剤 |
JP2002253245A (ja) * | 2001-02-28 | 2002-09-10 | Toyota Central Res & Dev Lab Inc | 融合タンパク質 |
CA2496990A1 (en) * | 2002-08-23 | 2004-03-04 | E.I. Du Pont De Nemours And Company | Utilization of starch products for biological production by fermentation |
-
2008
- 2008-03-17 WO PCT/JP2008/054918 patent/WO2008120570A1/ja active Application Filing
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2013
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Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2005532813A (ja) * | 2002-07-15 | 2005-11-04 | イミュネックス・コーポレーション | 哺乳動物細胞により産生されるタンパク質のシアル酸付加を調節する方法および培地 |
JP2007505625A (ja) * | 2003-09-18 | 2007-03-15 | レイヴェン バイオテクノロジーズ, インコーポレイテッド | 細胞培養培地 |
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Title |
---|
JPN6013028117; J. Mol. Biol. Vol. 338, 2004, p. 657-667 * |
JPN6013028119; 中国農業試験場研究報告 第9号, 1991, p. 1-9 * |
JPN6013028121; Endocrinology Vol. 146, No. 5, 2005, p. 2397-2405 * |
JPN6013028123; 第55回日本ウイルス学会学術集会 プログラム・抄録集 , 2007, p. 275 * |
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