JP5571389B2 - 医薬組成物、医薬組成物製造のための２−イミノピロリジン誘導体の使用および心疾患の治療用または改善用キット - Google Patents

Description

本発明は、医薬組成物、医薬組成物製造のための２−イミノピロリジン誘導体の使用および心疾患の治療用または改善用キット等に関する。

心疾患には、急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞などが含まれる。これらの心疾患を治療するための標的となる物質として、血液凝固系因子の１つであるトロンビンが考えられる。また、血小板膜糖タンパク質であるＧＰ(Glycoprotein)IIb/IIIaのレセプターも心疾患を治療するための標的となり得る。さらに、トロンビンレセプターは、血小板、血管平滑筋細胞、内皮細胞、および繊維芽細胞等の細胞に存在することが知られている。トロンビンレセプターも、心疾患を治療するための標的となり得る。

このような状況の下、心疾患等の疾患を効果的に治療または改善することができる医薬組成物が求められていた。

本発明者らは、上記課題を解決するため鋭意検討を重ねた結果、少なくとも１つの所定の２−イミノピロリジン誘導体を少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）と併用することで、心疾患等を効果的に治療または改善することができることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は以下のとおりである。

（１）下記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩、および下記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を含有する、医薬組成物。
本発明のある態様によれば、組成物は心疾患の治療用又は改善用の医薬組成物である。

（２）下記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）と併用する心疾患の治療用または改善用医薬組成物の製造のための、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。

（３）下記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物と、下記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を含有する医薬組成物を含む、心疾患の治療用または改善用キット。

（４）下記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩および下記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）の有効量を同時または別々に患者に投与することを特徴する、心疾患の治療又は改善方法。

（Ｂ群）
シクロオキシゲナーゼ阻害剤、トロンボキサンＡ２生合成阻害剤、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、アデノシン二リン酸受容体アンタゴニスト、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト、ＰＧＥ１またはＰＧＩ２誘導体、血小板凝集阻害剤、セロトニン受容体アンタゴニスト、トロンビン阻害剤、ヘパリン、低分子ヘパリン、Ｘａ阻害剤、ＶＩＩａ阻害剤、Ｋ^＋チャネル阻害剤、ビタミンＫ拮抗剤、アンジオテンシンアンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素阻害剤、エンドセリンアンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、カルシウム拮抗剤、β遮断薬、亜硝酸薬、血栓溶解剤、ＨＭＧＣｏＡ還元酵素阻害剤、フィブラート系薬剤、ニコチン酸系薬剤、胆汁酸吸着薬、コレステロール吸収阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲαアゴニスト、ＰＰＡＲβアゴニスト、中性のエンドペプチダーゼ阻害剤および利尿薬。

本発明において、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩としては、例えば式（Ｉ）に示す化合物の臭化水素酸塩が挙げられる。
また、本発明の１つの態様において、心疾患としては、たとえば急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患が挙げられる。
本発明において、上記化合物（Ｂ）としては、シクロオキシゲナーゼ阻害剤であるアスピリン、またはアデノシン二リン酸受容体アンタゴニストであるクロピドグレルを例示することができる。

本発明は、疾患を効果的に治療または改善することができる医薬組成物を提供する。本発明の好ましい態様によれば、心疾患を効果的に治療または改善することができる。

モルモット光増感血栓モデルにおける実施例１化合物、アスピリン並びに両化合物併用投与での抗血栓作用を示すグラフである。

以下、本発明を詳細に説明する。以下の実施の形態は、本発明を説明するための例示であり、本発明をこの実施の形態にのみ限定する趣旨ではない。本発明は、その要旨を逸脱しない限り、さまざまな形態で実施をすることができる。
なお、本明細書において引用した文献、および公開公報、特許公報その他の特許文献は、参照として本明細書に組み込むものとする。また、本明細書は、本願の優先権主張の基礎となる日本特許出願２００８−４３１８号及び米国仮出願 ６１／０２０，４２６号の明細書又は図面に記載された内容を包含する。

本発明のある態様によれば、少なくとも１つの２−イミノピロリジン誘導体と少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を含有する、医薬組成物が提供される。また、本発明の別の態様によれば、少なくとも１つの２−イミノピロリジン誘導体を含有する、少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）と併用するための医薬組成物が提供される。医薬組成物は、好ましくは、心疾患治療用又は改善用医薬組成物である。

（１）２−イミノピロリジン誘導体
本発明の医薬組成物に含まれる２−イミノピロリジン誘導体は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つ（例えば１つ）の化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明において用いる２−イミノピロリジン誘導体は、好ましくは、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩である。

本発明において、薬学的に許容される塩は、心疾患等の疾患に対する治療作用または改善作用を有し、薬学的に許容されるものであれば特に限定されない。具体的には、例えば、ハロゲン化水素酸塩（例えばフッ化水素酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩およびヨウ化水素酸塩）、無機酸塩（例えば硫酸塩、硝酸塩、過塩素酸塩、リン酸塩、炭酸塩および重炭酸塩）、有機カルボン酸塩（例えば酢酸塩、シュウ酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、フマル酸塩およびクエン酸塩）、有機スルホン酸塩（例えばメタンスルホン酸塩、トリフルオロメタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩およびカンファースルホン酸塩）、アミノ酸塩（例えばアスパラギン酸塩およびグルタミン酸塩）、四級アミン塩、アルカリ金属塩（例えばナトリウム塩およびカリウム塩）、ならびにアルカリ土類金属塩（例えばマグネシウム塩およびカルシウム塩）が挙げられる。

また、２−イミノピロリジン誘導体に幾何異性体およびジアステレオマーなどの光学異性体が存在する場合には、心疾患等の疾患に対する治療作用または改善作用を有する限り、これらの異性体も本発明の化合物またはその薬理学的に許容される塩に含まれ得る。

さらに、２−イミノピロリジン誘導体は無水物であってもよく、水和物などの溶媒和物を形成していてもよい。溶媒和物は水和物または非水和物のいずれであってもよいが、水和物が好ましい。溶媒は水、アルコール（例えば、メタノール、エタノール、n−プロパノール）、ジメチルホルムアミドなどを使用することができる。心疾患等の疾患に対する治療作用または改善作用を有する限り、これらの溶媒和物も本発明の化合物またはその薬理学的に許容される塩に含まれる。

ここで、本発明の医薬組成物に含まれる２−イミノピロリジン誘導体（好ましくは、式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩）は、トロンビンレセプターの１つであるプロテアーゼ活性化受容体（ＰＡＲ１）のアンタゴニストである。ＰＡＲ１アンタゴニストは、抗血栓活性、抗血小板凝集活性、抗アテローム性動脈硬化活性、抗再狭窄活性からなる群から選ばれる少なくとも１つの活性を有することから、２−イミノピロリジン誘導体（好ましくは、式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩）は、急性冠症候群（例えばＳＴ非上昇心筋梗塞および不安的狭心症）、アテローム血栓症（例えば末梢動脈閉塞）、再狭窄、高血圧、安定狭心症、労作性狭心症、安静時狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞、血栓性脳卒中、血栓塞栓性脳卒中、静脈血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、アテローム性動脈硬化症、末梢性血管性疾患、炎症性疾患、大脳虚血、脳梗塞、その他の閉塞性血管疾患、播種性血管内血液凝固症候群、リウマチ、喘息、糸球体腎炎、骨粗鬆症および神経疾患等からなる群から選ばれる少なくとも１つの疾患を治療または改善のために用いることができる。

（２）２−イミノピロリジン誘導体の製造方法
本発明で使用される２−イミノピロリジン誘導体、すなわち、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つ（例えば１つ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、例えば、国際公開02/085855号パンフレット、国際公開04/078721号パンフレットなどに記載された方法で製造することができる。より具体的には、これらの化合物またはその薬学的に許容される塩は、例えば、国際公開02/085855号パンフレットの明細書４０頁２４行〜１３９頁１５行、１７０頁６行〜１７７頁１２行（実施例７）、１７７頁１３行〜１８３頁１行（実施例８）、１９０頁２１行〜１９３頁２行（実施例１１）、２００頁１１行〜２０３頁１行（実施例１４）、２０３頁２行〜２０５頁１７行（実施例１５）、３１６頁７行〜３１７頁３行（実施例１１２）、および３２５頁３行〜１３行（実施例１２５）などに記載された方法又はそれに準じる方法で製造することができる。あるいは、これらの化合物またはその薬学的に許容される塩は、国際公開04/078721号パンフレットの明細書全体に記載された方法又はそれに準じる方法で製造することができる。
尚、後述の実施例１では、式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩および塩化水素塩を製造する場合を例に挙げて、２−イミノピロリジン誘導体の製造方法を説明している。式（ＩＩ）〜（ＶＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩は、例えば、実施例１の方法に準ずる方法で製造することができる。

（３）医薬組成物
本発明の医薬組成物は、前述のように少なくとも１つ（例えば１つ）の２−イミノピロリジン誘導体を含有する。本発明において、所定の２−イミノピロリジン誘導体は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩である。

本発明の医薬組成物は、心疾患の治療用又は改善用に用いられる。「治療」又は「改善」とは、一般的に、所望の薬理学的効果及び/又は生理学的効果を得ることを意味する。効果は、疾病及び/又は症状を完全に又は部分的に防止する点では予防的であり、疾病及び/又は疾病に起因する悪影響の部分的又は完全な治癒という点では治療的である。本明細書において「治療」又は「改善」とは、患者哺乳動物、特にヒトの疾病の任意の治療又は改善を意味し、上記一般的治療の意味も包含する。「治療又は改善」には、例えば以下の（a）〜（c）の事項の少なくとも１つを含む：
（a）疾病又は症状の素因を持ちうるが、まだ持っていると診断されていない患者において、疾病又は症状が起こることを予防すること；
（b）疾病症状を阻害する、即ち、その進行を阻止又は遅延すること；
（c）疾病症状を緩和すること、即ち、疾病又は症状の後退、消失、又は症状の進行の逆転を引き起こすこと。

本発明において、２−イミノピロリジン誘導体は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩であり、好ましくは式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩であり、さらに好ましくは、式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩である。
本発明の医薬組成物では、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩をそのまま用いることも、公知の薬学的に許容される担体などを配合して製剤化することも可能である。このような薬学的に許容される担体としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤、安定化剤、乳化剤、吸収促進剤、界面活性剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、および抗酸化剤などを挙げることができる。

また、本発明の医薬組成物の投与形態は特に限定されず、上記の剤形に基づいて経口又は非経口的に投与することができる。非経口投与の形態として、例えば静脈内注射、点滴静注、皮下注射、皮内注射、又は腹腔内注射などが挙げられる。製剤化の剤形としては、経口的投与形態に用いられる錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などが、また非経口的投与形態に用いられる坐剤、注射剤、軟膏剤、バップ剤などが挙げられる。

経口的投与形態に用いられる経口用製剤を調製する場合には、当該有効成分に賦形剤、さらに必要に応じて結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味矯臭剤などを加えた後、常法により錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、カプセル剤等とすることができる。

賦形剤としては、例えば、乳糖、コーンスターチ、白糖、ぶどう糖、ソルビット、結晶セルロース、二酸化ケイ素などが、結合剤としては、例えばポリビニルアルコール、エチルセルロース、メチルセルロース、アラビアゴム、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等が、滑沢剤としては、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、シリカ等が、着色剤としては医薬品に添加することが許可されているものが、矯味矯臭剤としては、ココア末、ハッカ脳、芳香酸、ハッカ油、龍脳、桂皮末等が用いられる。これらの錠剤、顆粒剤には糖衣、ゼラチン衣、その他必要により適宜コーティングすることは勿論差し支えない。

本発明において、注射剤は、必要により主薬に非水性の希釈剤（例えばプロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどのグリコール、オリーブ油などの植物油、エタノールなどのアルコール類など）、懸濁剤、溶解補助剤、安定化剤、等張化剤、保存剤、pH調整剤、緩衝剤などを添加して調製することが可能である。注射剤の無菌化は、フィルターによる濾過滅菌、殺菌剤の配合などにより行えばよい。また、注射剤は、用時調製の形態として製造することができる。すなわち、凍結乾燥法などによって無菌の固体組成物とし、使用前に無菌の注射用蒸留水又は他の溶媒に溶解して使用することができる。貼布剤として経皮吸収により投与する場合には、塩を形成しない、いわゆるフリー体を選択することが好ましい。注射剤は、常法により点滴静注剤、あるいは静脈、皮下、筋肉内注射剤とすることができる。

懸濁剤としては、例えば、メチルセルロース、ポリソルベート80、ヒドロキシエチルセルロース、アラビアゴム、トラガント末、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレートなどを挙げることができる。

溶解補助剤としては、例えばポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリソルベート80、ニコチン酸アミド、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、マクロゴール、ヒマシ油脂肪酸エチルエステルなどを挙げることができる。

また安定化剤としては、例えば亜硫酸ナトリウム、メタ亜硫酸ナトリウム等を、保存剤としては、例えばパラオキシ安息香酸メチル、パラオキシ安息香酸エチル、ソルビン酸、フェノール、クレゾール、クロロクレゾールなどを挙げることができる。

経口投与における式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効な投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投与間隔、投与期間、製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なるが、当業者であれば適宜設定することができる。例えば、成人（体重６０ｋｇ）に１日あたり0.001〜10,000ｍｇ、好ましくは0.1〜1,000ｍｇ、より好ましくは1〜1,000ｍｇを経口投与することができる。

非経口投与、例えば注射剤における式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の有効な投与量は、症状の程度、患者の年齢、性別、体重、感受性差、投与方法、投与時期、投与間隔、投与期間、製剤の性質、調剤、種類、有効成分の種類等によって異なるが、当業者であれば適宜設定することができ、生理食塩水又は市販の注射用蒸留水などの薬学的に許容される担体中に、適当な濃度になるように溶解又は懸濁したものを、処置を必要とする患者に対し、適宜投与することができる。例えば、注射剤の場合、成人（体重６０ｋｇ）に１日あたり0.001〜10,000ｍｇ、好ましくは0.01〜1,000ｍｇ、より好ましくは0.1〜1,000ｍｇを投与することができる。

（４）２−イミノピロリジン誘導体と他の化合物（Ｂ）の併用
本発明では、心疾患等の疾患を治療または改善するために、少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を、少なくとも１つ（例えば１つ）の前記２−イミノピロリジン誘導体と併用する。併用とは、少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）と、前記２−イミノピロリジン誘導体との組合せを意味し、上記化合物（Ｂ）及び２−イミノピロリジン誘導体を、同時にまたは続けて投与する形態、および混合物（配合剤）としての形態の両方を含む。すなわち、化合物（Ｂ）と２−イミノピロリジン誘導体との投与時期が完全同一であることのみを意味するものではなく、１つの投与スケジュールの中に化合物（Ｂ）と２−イミノピロリジン誘導体とを投与する態様が含まれている限り、そのような投与形態は「併用」を意味する。

併用のために、他の化合物（Ｂ）は、前記２−イミノピロリジン誘導体を含む医薬組成物中にさらに含有されていても良いし、上記２−イミノピロリジン誘導体を含む医薬組成物とは別の医薬組成物に含有されていても良い。
他の化合物（Ｂ）は、好ましくは、抗血栓、抗血小板凝集、抗アテローム性動脈硬化、抗再狭窄および抗血液凝固等からなる群から選ばれる少なくとも１つの作用を有する薬剤である。
他の化合物（Ｂ）は、好ましくは、以下のＢ群から選ばれる少なくとも１つの治療薬である。

（Ｂ群）
シクロオキシゲナーゼ阻害剤、トロンボキサンＡ２生合成阻害剤、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体アンタゴニスト、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト、ＰＧＥ１またはＰＧＩ２誘導体、血小板凝集阻害剤、セロトニン受容体アンタゴニスト、トロンビン阻害剤、ヘパリン、低分子ヘパリン、Ｘａ阻害剤、ＶＩＩａ阻害剤、Ｋ^＋チャネル阻害剤、ビタミンＫ拮抗剤、アンジオテンシンアンタゴニスト、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）阻害剤、エンドセリンアンタゴニスト、ホスホジエステラーゼ阻害剤、カルシウム拮抗剤、β遮断薬、亜硝酸薬、血栓溶解剤、ＨＭＧＣｏＡ還元酵素阻害剤、フィブラート系薬剤、ニコチン酸系薬剤、胆汁酸吸着薬、コレステロール吸収阻害剤、ＰＰＡＲγアゴニスト、ＰＰＡＲαアゴニスト、ＰＰＡＲβアゴニスト、中性のエンドペプチダーゼ阻害剤ならびに利尿薬。

上記化合物（Ｂ）の具体例として、以下のものを挙げることができる。
(1) シクロオキシゲナーゼ阻害剤：アスピリン、メロキシカム、ロフェコキシブ(rofecoxib)およびセレコキシブ(celecoxib)など
(2) トロンボキサンＡ２生合成阻害剤：オザグレル等
(3)トロンボキサン受容体アンタゴニスト：セラトロダスト、ピコタミドおよびラマトロバン等
(4) アデノシン二リン酸受容体アンタゴニスト：クロピドグレル(Clopidogrel)、プラスグレル(Prasugrel)、AZD-6140、Cangrelorおよびチクロピジン（Ticlopidine）など
(5) GPIIb/IIIaアンタゴニスト：アブシキシマブ(Abciximab)、エピチフィバチド(Eptifibatide)およびチロフィバン(Tirofiban)など
(6) PGE1またはPGI2誘導体：リマプロスト(Limaprost)およびベラプロスト(Beraprost)など
(7) 血小板凝集阻害剤：シロスタゾール(Cilostazol)およびジピリダモール(Dipyridamole)など
(8) セロトニン受容体アンタゴニスト：塩酸サルポグレラート(Sarpogrelate) など
(9) トロンビン阻害剤：アルガトロバン(Argatroban)、ビバリルジン(Bivalirudin)およびダビガトラン(Dabigatran) など
(10) ヘパリン、低分子ヘパリン：未分画ヘパリンおよびエノキサパリン(Enoxaparin）など
(11) Xa阻害剤：ホンダパリナックス(Fondaparinux)、リバロキサバン(Rivaroxaban)およびアピキサバン(Apixaban) など
(12) VIIa阻害剤：rNAPc2、PCI-27483など
(13) Ｋ^＋チャネル阻害剤：ベプリジル、ソタロールなど
(14) ビタミンＫ拮抗剤：ワーファリン(Warfarin) など
(15) アンジオテンシンアンタゴニスト：バルサルタン、テルミサルタン、カンデサルタン(Candesartran)、イルベサルタン(Irbesartran)、イソサルタンおよびエプロサルタンなど
(16) アンジオテンシン変換酵素阻害剤：カプトプリル、エナラプリル、エナリプリラット(Enaliprilat)、スピラプリル、キナプリル、ペリンドプリル，ラミプリル、ホシノプリル(Fosinopril)、トランドラプリル、リシノプリル、モエキシプリルおよびベナザプリルなど
(17) エンドセリンアンタゴニスト：テゾセンタン等
(18) ホスホジエステラーゼ阻害剤：ミルリノン(Milrinone)およびエノキシモン(Enoximone) など
(19) カルシウム拮抗剤：アムロジピン(Amrodipine) など
(20) β遮断薬：アテノロール(Atenolol)およびプロプラノロール(Propranolol)等
(21) 亜硝酸薬：ニトログリセリンおよび硝酸イソソルビド等
(22) 血栓溶解剤：ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼおよび組織プラスミノゲン活性化因子等
(23) HMGCoA還元酵素阻害剤：アトルバスタチン(Atorvastatin)、フルバスタチン(Fluvastatin)およびプラバスタチン(Pravastatin) など
(24) フィブラート系薬剤：ゲムフィブロジル(Gemfibrozil)、フェノフィブラート(Fenofibrate)およびベザフィブラートなど
(25) ニコチン酸系薬剤：ナイアシンなど
(26) 胆汁酸吸着薬：コレスチラミン(Cholestyramine)およびコレスチポール(Cholestipol) など
(27) コレステロール吸収阻害薬：エゼチミブ(Ezetimibe) など
(28) PPARγアゴニスト：ピオグリタゾンなど
(29) PPARαアゴニスト:LY518674、WY14643など
(30) PPARβ/δアゴニスト：GW501516、L165041など
(31) 中性のエンドペプチダーゼ阻害剤：カンドキサトリル(Candoxatril)およびエカドトリル(Ecadotril) など
(32) 利尿薬：クロロチアジド、ヒドロクロロチアジド、エタクリン酸(Ethacrynic acid)、フロセミドおよびアミロライドなど

前記２−イミノピロリジン誘導体との併用に用いる他の化合物（Ｂ）は、好ましくは、シクロオキシゲナーゼ阻害剤、トロンボキサンＡ２生合成阻害剤、トロンボキサン受容体アンタゴニスト、アデノシン二リン酸（ＡＤＰ）受容体アンタゴニスト、ＧＰＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト、ＰＧＥ１またはＰＧＩ２誘導体、ホスホジエステラーゼ阻害剤または血小板凝集阻害剤である。より好ましくは、他の化合物（Ｂ）は、アスピリン、クロピドグレルである。

他の化合物（Ｂ）は、経口的または非経口的に投与することができ、前記医薬組成物の製剤化方法と同様の方法で製剤化することができる。
他の化合物（Ｂ）の有効な投与量は、薬効を示す用量であれば特に限定されないが、好ましくは、各化合物（Ｂ）が単剤にて処方される用量もしくはそれ以下である。具体的には、他の化合物（Ｂ）の投与量は、成人（体重６０ｋｇ）に１日あたり、例えば、0.015〜4000ｍｇ、好ましくは50〜400ｍｇであり、前記２−イミノピロリジン誘導体に対して、例えば、約0.0001〜100倍（重量比）、好ましくは約0.1〜10倍（重量比）である。
より具体的には、前記２−イミノピロリジン誘導体とアスピリンとを組み合わせる場合、特に限定されないが、２−イミノピロリジン誘導体の投与量を、成人（体重60 kg）１日あたり、例えば、1〜1000ｍｇ、好ましくは10〜600ｍｇ、さらに好ましくは50〜400ｍｇとし、アスピリンの投与量を、成人（体重60 kg）１日あたり、例えば、10〜1000ｍｇ、好ましくは50〜600ｍｇ、さらに好ましくは80〜350ｍｇとし、さらに、アスピリンの投与量を、２−イミノピロリジン誘導体の投与量に対して、例えば、約0.1〜10倍（重量比）、好ましくは約0.2〜2倍（重量比）となるようにする。
また、前記２−イミノピロリジン誘導体とクロピドグレルとを組み合わせる場合、特に限定されないが、２−イミノピロリジン誘導体の投与量を、成人（体重60 kg）１日あたり、例えば、1〜1000ｍｇ、好ましくは10〜600ｍｇ、さらに好ましくは50〜400ｍｇとし、クロピドグレルの投与量を、成人（体重60 kg）１日あたり、例えば、10〜1000ｍｇ、好ましくは50〜600ｍｇ、さらに好ましくは75〜300ｍｇとし、さらに、クロピドグレルの投与量を、２−イミノピロリジン誘導体の投与量に対して、例えば、約0.1〜10倍（重量比）、好ましくは約0.2〜2倍（重量比）となるようにする。

薬物の最大効果を速やかに発揮させるため、初回投与時に２−イミノピロリジン誘導体と他の化合物（Ｂ）の一方もしくは両方を維持用量より高い用量を導入用量として投与することも可能である。

本発明では、少なくとも１つの所定の２−イミノピロリジン誘導体と少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を併用することにより、例えば、急性冠症候群（例えばＳＴ非上昇心筋梗塞および不安的狭心症）、アテローム血栓症（例えば末梢動脈閉塞）、再狭窄、高血圧、安定狭心症、労作性狭心症、安静時狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞、血栓性脳卒中、血栓塞栓性脳卒中、静脈血栓塞栓症、深部静脈血栓症、肺塞栓、アテローム性動脈硬化症、末梢性血管性疾患、炎症性疾患、大脳虚血、脳梗塞、その他の閉塞性血管疾患、播種性血管内血液凝固症候群、リウマチ、喘息、糸球体腎炎、骨粗鬆症および神経疾患等からなる群から選ばれる少なくとも１つの疾患を治療または改善し得る。好ましくは、本発明では、心疾患を治療または改善し得る。本発明において、治療または改善し得る心疾患としては、例えば、急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる少なくとも１つの疾患を挙げることができる。
本発明において、前記本発明の２−イミノピロリジン誘導体と他の化合物（Ｂ）とを併用した場合、前記本発明の２−イミノピロリジン誘導体以外の化合物と他の化合物（Ｂ）とを併用した場合と比較してこれらの疾患をより効果的に治療又は改善することができる。

（５）治療方法および改善方法
本発明は、少なくとも１つ（例えば１つ）の所定の２−イミノピロリジン誘導体および少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）の有効量を患者に投与することを特徴とする、心疾患等の疾患の治療または改善方法を提供する。本発明の方法において、所定の２−イミノピロリジン誘導体は、前記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物等であり、好ましくは式（Ｉ）の化合物等であり、さらに好ましくは式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩である。ここで、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物等には、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物の薬学的に許容される塩も包含される。また、他の化合物（Ｂ）については、前記２−イミノピロリジン誘導体と他の化合物（Ｂ）の併用の記載を参照することができる。本発明の方法において、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物及び化合物（Ｂ）の投与径路および投与方法は特に限定されないが、上記医薬組成物の記載を参照することができる。

（６）キット
本発明には、少なくとも１つの所定の２−イミノピロリジン誘導体を含有する医薬組成物と、少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を含有する医薬組成物を含む、心疾患等の疾患の治療用または改善用キットが含まれる。本発明のキットにおいて、所定の２−イミノピロリジン誘導体は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物等であり、好ましくは式（Ｉ）の化合物等であり、さらに好ましくは式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩である。本発明のキットにおいて、他の化合物（Ｂ）については、前記２−イミノピロリジン誘導体と他の化合物（Ｂ）の併用の記載を参照することができる。
キットには、必要に応じて、アクセサリーおよび使用説明書等が含まれていても良い。

（７）使用
本発明には、少なくとも１つ（例えば１つ）の他の化合物（Ｂ）と併用するための心疾患等の疾患の治療用または改善用医薬組成物を製造するための、少なくとも１つの所定の２−イミノピロリジン誘導体の使用が含まれる。本発明の使用において、所定の２−イミノピロリジン誘導体は、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物等であり、好ましくは式（Ｉ）で表される化合物等であり、さらに好ましくは式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩である。本発明の使用において、他の化合物（Ｂ）については、前記２−イミノピロリジン誘導体と他の化合物（Ｂ）の併用の記載を参照することができる。
さらに、本発明には、少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）と併用し心疾患等の疾患を治療または改善するための、式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩が包含される。

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本実施例により本発明は限定されるものではない。

（１）式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩の製造
１−（３−第３ブチル４−メトキシ−５−モルフォリノ−フェニル）−２−（５，６−ジエトキシ−７−フルオロ−１−イミノ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−エタノン；臭化水素酸塩

（工程Ａ−１）
１−ブロモ−３，４−ジエトキシ−２−フルオロベンゼン

氷冷下、１，２−ジエトキシ−３−フルオロベンゼン（１５０．００ｇ，８１４ｍｍｏＬ）のアセトニトリル（９００ｍＬ）溶液にＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）（１５３．７２ｇ，８６４ｍｍｏＬ）のアセトニトリル（１．５Ｌ）溶液を滴下後、室温で一晩撹拌した。溶媒を留去後、残渣に酢酸エチルを加え、水洗した。得られた水層を酢酸エチルで再抽出し、先の有機層と混合した。有機層を水、飽和食塩水、水の順で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶液を濃縮し、油状物を得、これにヘキサンを加え析出した結晶を濾去した。溶液を再度濃縮し油状物を得、減圧蒸留して標記化合物を２０５．６５ｇ（収率：９６％）得た。

ｂ．ｐ℃：１１０〜１１１℃／２ｍｍＨｇ
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．４２（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．０３（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．１１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．５７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．０，９．３Ｈｚ），７．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．３，８．８Ｈｚ）．
ＭＳ ｍ／ｚ：２６２（Ｍ^＋）

（工程Ａ−２）
３，４−ジエトキシ−２−フルオロベンゾニトリル

室温下、１−ブロモ−３，４−ジエトキシ−２−フルオロベンゼン（１２．０ｇ，４５．６ｍｍｏＬ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（６０ｍＬ）溶液にシアン化銅（Ｉ）（６．８ｇ，６８．３ｍｍｏＬ）を加え、その後、１５５℃で３時間撹拌した。反応液を氷冷後、酢酸エチル、２８％アンモニア水を加え有機層を分取し、水、飽和食塩水で洗浄して無水硫酸マグネシウムで乾燥した。濾過後溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン、酢酸エチル）で精製して標記化合物を９．０ｇ（収率：９４．３％）得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３５（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．４９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．１４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．１５（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），６．７０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．５，８．８Ｈｚ），７．２４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４，８．８Ｈｚ）．
ＭＳ ｍ／ｚ：２０９（Ｍ^＋）

（工程Ａ−３）
３，４−ジエトキシ−２−フルオロ−６−ホルミルベンゾニトリル

反応缶にＴＨＦ（１８．７Ｋｇ）を窒素気流下投入後、続いてｎ−ヘプタン（１３．７ｋｇ）を投入、さらに２，２，６，６−テトラメチルピペリジン（ＴＭＰ）（７．５０ｋｇ，５３．１ｍｏｌ）を投入し、撹拌した。系を閉鎖系とし、窒素微陽圧で−１５℃に冷却し終夜撹拌した。内温を−４２．３℃とした、１５％ ｎ−ブチルリチウム−ヘキサン溶液（２２．４ｋｇ，５０．２ｍｏｌ）を内温−１０℃以下で滴下した。滴下配管内はｎ−ヘプタン（０．６８ｋｇ）でリンスした。その後内温を−８６．９℃に冷却し、３，４−ジエトキシ−２−フルオロベンゾニトリル（７．００ｋｇ，３３．５ｍｏｌ）のＴＨＦ（１０．６８ｋｇ）溶液を滴下した。滴下配管をＴＨＦ（１．８ｋｇ）でリンスした。約１時間後Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（４．８９ｋｇ，６６．９ｍｏｌ）のＴＨＦ（４．４９ｋｇ）溶液を滴下した。ＤＭＦ−ＴＨＦ溶液滴下終了３３分後、ｎ−ヘプタン（３４．５Ｋｇ）を滴下した。１時間撹拌後、酢酸（１０．５ｋｇ，１７５．０ｍｏｌ）のＴＨＦ（２．９９ｋｇ）溶液し、外浴を１０℃とした。５５分後、水（５０．４Ｌ）を滴下、さらにｎ−ヘプタン（１７．２ｋｇ）を加えた。外浴を１０℃とし、１４．７時間撹拌した。反応液を抜き出し、半量ずつ遠心分離した。得られた結晶をｎ−ヘプタン（５Ｌ）、水５Ｌ、とｎ−ヘプタン（５Ｌ）で洗浄し、粗体を４．８５ｋｇ得、冷蔵庫にて保管した。もう一方のスラリーも初回と同様に処理し、粗体５．２５ｋｇを得た（湿体合計：１０．１０ｋｇ）。

湿体を反応缶へ投入し、水（４０Ｌ）とｎ−ヘプタン（８０Ｌ）を加え、２５℃で１８．７時間撹拌した。反応液を抜き出し、缶壁をｎ−ヘプタン（５Ｌ）と水（１０Ｌ）の混液でリンスした。反応液とリンス液をあわせた後、遠心分離した。得られた結晶をｎ−ヘプタン（５Ｌ）、水（５Ｌ）、さらにｎ−ヘプタン（５Ｌ）で洗浄し、標記化合物を湿体として１０．３０ｋｇ得た。

湿体をコニカルドライヤーに投入後、５０℃で２０時間、５５℃で４時間減圧乾燥し標記化合物を微緑白色粉末状結晶として５．９８ｋｇ（収率：７５．３％）得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．４９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．２８（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），７．３２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），１０．１９（１Ｈ，ｓ）
ＭＳ ｍ／ｚ：２３８［（Ｍ＋Ｈ）^＋］

（工程Ａ−４）
３，４−ジエトキシ−２−フルオロ−６−ヒドロキシメチルベンゾニトリル

反応缶に窒素雰囲気下、３，４−ジエトキシ−２−フルオロ−６−ホルミルベンゾニトリル（５．９０ｋｇ，２４．８７ｍｏｌ）と酢酸エチル（５９．０Ｌ）を投入し、攪拌下トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢ（ＯＡｃ）_３Ｈ）（１１．７０ｋｇ）を加えた。３０分撹拌後、内温を４０℃へと加熱し、２時間撹拌した。反応液を冷却し、内温１５℃で水（２Ｌ）をゆっくり滴下し、過剰のトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウムの分解を行った。さらに水（２７．５Ｌ）を加えた。外浴を４０℃にし不溶物を溶解させ、再度冷却し、分液した。分液後、得られた有機層を重曹水で２回洗浄後、食塩水で洗浄した。得られた有機層は外浴１０℃で冷却し、終夜放置した。

外浴を５０℃とし、液量約１４Ｌまで減圧濃縮した。外浴を１０℃にしｎ−ヘプタン（５９Ｌ）を投入し、２．８時間撹拌した。析出した結晶をろ過後、結晶をｎ−ヘプタン（５．９Ｌ）で洗浄し湿体の標記化合物を５．６６ｋｇ得た。この湿体をコニカルドライヤーで５０℃下、１８．３時間減圧乾燥を行い、標記化合物を微黄白色粉末状結晶として５．１７ｋｇ（収率：８７％）得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ：１．３６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．４８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．１２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．１７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），４．８２（２Ｈ，ｓ），５．５３（１Ｈ，ｓ），６．９５（１Ｈ，ｓ）．
ＭＳ ｍ／ｚ：２４０（Ｍ＋Ｈ）^＋

（工程Ａ−５）
メタンスルホン酸２−シアノ−４，５−ジエトキシ−３−フルオロベンジル

反応缶に３，４−ジエトキシ−２−フルオロ−６−（ヒドロキシメチル）ベンゾニトリル（４．５０ｋｇ，１８．８１ｍｏｌ）と１，２−ジメトキシエタン（４５Ｌ）を投入後、攪拌した。反応液を冷却し、系内を窒素雰囲気下にした。内温８．４℃で、トリエチルアミン（２．４７ｋｇ，２４．４５ｍｏｌ）を加えた。さらに塩化メタンスルホニル（２．５９ｋｇ，２２．６１ｍｏｌ）を内温が２０℃を越えないように滴下した。３４分撹拌後、系内を窒素気流下とし、冷却を停止した。反応液にトルエン（４５Ｌ）と０．５Ｎ塩酸（９Ｌ）を加え分液した。得られた有機層を水（１８Ｌ）、１０％炭酸水素ナトリウム水溶液（１８Ｌ）、１０％食塩水（１８Ｌ）、水（１８Ｌ）で洗浄し、有機層を減圧濃縮した。濃縮液にトルエン（４５Ｌ）を投入後、再度減圧濃縮し、濃縮液を冷却後、トルエン（４０Ｌ）を加え希釈し、反応缶より希釈液を容器２つへ均等に抜き出した。反応缶壁はトルエン（５Ｌ）でリンスした。このリンス液は２等分し、先の希釈液に混合し、メタンスルホン酸２−シアノ−４，５−ジエトキシ−３−フルオロベンジルのトルエン溶液を得た。それぞれをＡ溶液、Ｂ溶液とし、溶液重量を計量（Ａ溶液：３２．１６Ｋｇ，Ｂ溶液：３２．２４ｋｇ）後、溶液を一部サンプリングしてＨＰＬＣで定量した。

メタンスルホン酸２−シアノ−４，５−ジエトキシ−３−フルオロベンジルのトルエン溶液
性状：褐色トルエン溶液、定量値：５．７９ｋｇ（Ａ溶液２．９２ｋｇ，Ｂ溶液２．８７ｋｇ）、収率：９６．９％、ＨＰＬＣ純度：Ａ溶液９８．８％，Ｂ溶液９８．６％
^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ：１．３８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．５０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．１３（３Ｈ，ｓ），４．１７（４Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），５．２８（２Ｈ，ｓ），６．８９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．０Ｈｚ）．
ＭＳ ｍ／ｚ：３１７（Ｍ^＋）

（工程Ａ−６）
５，６−ジエトキシ−７−フルオロ−３Ｈ−イソインドール−１−イルアミン
反応缶に上記工程で得られたメタンスルホン酸２−シアノ−４，５−ジエトキシ−３−フルオロベンジルのトルエンＡ溶液［３２．１６ｋｇ（メタンスルホン酸２−シアノ−４，５−ジエトキシ−３−フルオロベンジルとして２．９２ｋｇ），９．２０ｍｏｌ］とトルエン（１７０Ｌ）を投入し、室温下撹拌した。反応液を２０℃以下になるまで冷却し、撹拌を停止後アンモニアで系内を置換した。撹拌後、再度アンモニアを０．８６ＭＰａまで加圧した。反応液はこのまま終夜撹拌後、アンモニアガスをリークした。反応液に水（３５Ｌ）を加えた後、２Ｎ塩酸を（３５Ｌ）加え、分液した。得られた有機層に１Ｎ塩酸（２３．４Ｌ）を加え、分液した。得られた水層を先の水層と混合し、清澄ろ過した。水（１０Ｌ）でリンスし後、反応缶へ移送した。水（１５Ｌ）で洗い込み、反応液を冷却した。５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（７．１８Ｌ）を滴下し、反応液を外浴３０℃で加熱し約４時間撹拌した。反応液を冷却し、反応液温１７．４℃で５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１２．８２Ｌ）を滴下後、反応液を終夜撹拌した。析出した結晶をろ過後、結晶を水（３０Ｌ）、ｔｅｒｔ−ブチル メチル エーテル（６Ｌ）で洗浄し、湿体を２．２９ｋｇ得た。この湿体をコニカルドライヤーで、４０℃下、減圧乾燥を行い、標記化合物（１．８５ｋｇ）を微黄白色粉末状結晶として得た。
性状：微黄白色粉末状結、収量：１．８５ｋｇ、収率：８４％、ＨＰＬＣ純度：９７．５％、水分含量：０．２２％

^１Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ：１．２４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），１．３４（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．０１（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．１７（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），４．３８（２Ｈ，ｓ），６．０４（２Ｈ，ｂｓ），７．０４（１Ｈ，ｓ）．
ＭＳ ｍ／ｚ：２３９（Ｍ＋Ｈ）^＋

（工程Ｂ−１）
１−（３−tert−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）エタノン

塩化アルミニウム (44.4 g, 333 mmol)を-45 ℃に冷却し、トルエン (1.25 L)を加えた。２−tert−ブチルフェノール (50.0 g, 333 mmol) を加え2時間撹拌した。さらに塩化アセチル (26.1 g, 333 mmol)を滴下し、2.5時間撹拌した。反応液を氷冷水 (250 mL)に滴下後、室温撹拌した。結晶をろ取後、減圧乾燥 (50 ℃)し、標記化合物を白色結晶として48.7 g得た(収率: 76.1%, HPLC純度: 99.8%)。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) δ: 1.43 (9H, s), 2.57 (3H, s), 6.17 (1H, s), 6.76 (1H, d, J=8.0 Hz), 7.73 (1H, dd, J=2.4, 8.0 Hz), 7.96 (1H, d, J=2.4 Hz).
MS m/z: 193 [(M+H)+]

（工程Ｂ−２）
１−（５−ブロモ−３−tert−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）エタノン

１−（３−tert−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）エタノン (690.9 g, 3.75 mol)をアセトニトリル (6.05 L)に溶解し、氷冷撹拌下、N-ブロモスクシンイミド (701.28 g, 3.94 mol)のアセトニトリル (5 L)溶液を滴下した。室温まで昇温させた後、溶媒を約3 Lまで濃縮し、n-ヘプタン (5 L)および水 (5 L)を加えて抽出、分液した。水層を更にn-ヘプタン (2 L)で抽出、分液し、有機層を混合後、5%チオ硫酸ナトリウム水溶液 (1 L)および水 (2 L)で洗浄し、減圧濃縮 (35℃)を行って標記化合物を微褐色油状物として977.0 g得た (収量：99.1%, HPLC純度：95.8%)。
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) δ: 1.42 (9H, s), 2.55 (3H, s), 6.26 (1H, s), 7.88 (1H, d, J=2.0 Hz), 7.99 (1H, d, J=2.0 Hz).
MS m/z: 271 [(M+H)+]

（工程Ｂ−３）
２−ブロモ−６−tert-ブチル−４−（１，１−ジメトキシエチル）アニソール

窒素雰囲気下、１−（５−ブロモ−３−tert−ブチル−４−ヒドロキシフェニル）エタノン (678 g, 2.50 mol)にメタノール(678 mL)、オルトギ酸トリメチル(796 g, 7.50 mol)と(±)-10-カンファースルホン酸[(±)-CSA] (11.6 g, 0.050 mol, 2 mol%)を加え撹拌した。2.7時間撹拌後、N,N-ジメチルホルムアミド(1.7 L)を加え、氷冷した。さらにヨウ化メチル(700 g)、続いて炭酸カリウム(518 g)を加え、室温下撹拌した。5.5時間撹拌後、水(4750 mL)とn-ヘプタン(4750 mL)を加え分液した。有機層を水(2370 mL)で洗浄後、硫酸ナトリウム(120.2 g)を加え撹拌後、吸引ろ過した。この際、n-ヘプタン(250 mL)で洗い込みを行った。ろ液を溶媒留去(50 ℃)し、標記化合物を褐色油状物として808 g得た (収率:98%, HPLC純度:96.8%)。

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d₆) δ: 1.35 (9H, s), 1.43 (3H, s), 3.07 (6H, s), 3.86 (3H,s), 7.32 (1H, d, J=2.0 Hz), 7.47 (1H, d, J=2.0 Hz).
MS m/z: 330 (M+)

（工程Ｂ−４）
４−［３−tert−ブチル−５−（１，１−ジメトキシエチル）−２−メトキシフェニル］モルホリン

窒素雰囲気下、２−ブロモ−６−tert−ブチル−４−（１，１−ジメトキシエチル）アニソール (650 g, 1.962 mol)、酢酸パラジウム (4.4 g, 19.6 mmol, 1 mol%)および(±)-BINAP (18.3 g, 29.4 mmol, 1.5 mol%)を１，２−ジメトキシエタン (1.96 L)で室温にて溶解し、モルホリン(205 g, 2.36 mol)およびナトリウムtert-ブトキシド (264 g, 2.75 mol)を加えた。

85℃にて2時間撹拌後、氷冷撹拌下、温度を30℃以下とした。不溶物をろ過後、濾さいを１，２−ジメトキシエタン (1 L)で洗浄した。溶媒を減圧留去後、メタノール (600 mL)、N,N-ジメチルホルムアミド (1.2 L)およびn-ヘプタン (6 L)を加え、抽出、分液した。更にN,N-ジメチルホルムアミド層をn-ヘプタン (3 L)で2回抽出、分液後、n-ヘプタン層を混合し、メタノール (200 mL)および水 (1.8 L)で洗浄した。得られたn-ヘプタン層にチオシアヌル酸 (TMT) (13 g)を加え、15時間室温にて撹拌後、セライトろ過した。濾さいをn-ヘプタン (500 mL)で洗浄し、ろ液を87% N,N-ジメチルホルムアミド水 (1.3 L)および水 (1.3 L)で洗浄後、減圧濃縮 (50℃)し標記化合物を褐色油状物として618 g得た(収率：93.3%， HPLC純度：99.5%)。

¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) δ: 1.37 (9H, s), 1.52 (3H, s), 3.07 (4H, t, J=4.4 Hz), 3.18 (6H, s), 3.88 (4H, t, J=4.4 Hz), 3.94 (3H, s), 6.97 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.10 (1H, d, J=2.4 Hz).
MS m/z: 337 (M+)

（工程Ｂ−５）
２−ブロモ−１−（３−tert−ブチル−４−メトキシ−５−モルホリノフェニル）エタノン

４−［５−（１，１−ジメトキシエチル）−３−tert−ブチル−２−メトキシフェニル］モルホリン(600 g, 1.78 mol)をテトラヒドロフラン (2.67 L)およびメタノール (0.89 L)の混合溶媒に溶解し、窒素雰囲気下、7℃にてフェニルトリメチルアンモニウム トリブロミド (716 g, 1.87 mol)を投入した。1時間撹拌後、5%チオ硫酸ナトリウム水溶液 (660 mL)を反応液に加えた。さらに水 (4.68 L)を投入し、1時間撹拌後、結晶をろ取し、標記化合物の粗結晶を黄肌色結晶として得た。

標記化合物の粗結晶をn-ヘプタン (1980 mL)および2-プロパノール (660 mL)の混合溶媒で7℃にて懸濁撹拌した。13時間撹拌後、結晶を濾取し、10% 2-プロパノール/n-ヘプタン溶液 (660 mL)およびn-ヘプタン (660 mL)で洗浄後、減圧乾燥 (50℃)し標記化合物を淡黄白色結晶として566.2 g得た(収率：86.0%, HPLC純度：99.0%)。

４−[５−（２−ブロモ−１，１−ジメトキシエチル）−３−tert−ブチル−２−メトキシフェニル]モルホリン
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) δ: 1.37 (9H, s), 3.07 (4H, t, J=4.4 Hz), 3.24 (6H, s), 3.57 (2H, s), 3.88 (4H, t, J=4.4 Hz), 3.94 (3H, s), 6.98 (1H, d, J=2.4 Hz), 7.08 (1H, d, J=2.4 Hz).

２−ブロモ−１−（３−tert−ブチル−４−メトキシ−５−モルホリノフェニル）エタノン
¹H-NMR (400MHz, CDCl₃) δ: 1.40 (9H, s), 3.09 (4H, t, J=4.4 Hz), 3.90 (4H, t, J=4.4 Hz), 3.99 (3H, s), 4.41 (2H, s), 7.52 (1H, d, J=2.0 Hz), 7.69 (1H, d, J=2.0 Hz).
MS m/z: 369 (M+)

（工程Ｂ−６：最終工程）
１−（３−tert−ブチル−４−メトキシ−５−モルホリノフェニル）−２−（５，６−ジエトキシ−７−フルオロ−１−イミノ−１，３−ジヒドロ−２H−イソインドール−２−イル）エタノン ハイドロブロミド

２−ブロモ−１−（３−tert−ブチル−４−メトキシ−５−モルホリノフェニル）エタノン (550 g, 1.485 mol)をテトラヒドロフラン (3 L)に溶解し、清澄濾過後、外温6℃にて撹拌下、５，６−ジエトキシ−７−フルオロ−３Ｈ−イソインドール−１−イルアミン (300 g, 1.254 mol)のテトラヒドロフラン (4.5 L)溶液を3回に分けて (100 g/1.5 Lを3回)滴下した。滴下終了後、結晶が析出した。18時間撹拌後、析出した結晶をろ取した。氷冷下冷却したテトラヒドロフラン (1.2 L)で洗浄し、標記化合物を湿体の結晶として696.5 g得た。

この湿体の結晶(693.5 g)を50%テトラヒドロフラン／水 (5 L)中、50℃にて溶解後、清澄ろ過し、50%テトラヒドロフラン／水 (0.5 L)で洗浄した。氷冷撹拌下、濾液に水(2.5 L)を加え、種結晶 (1.52 g)を加えた後、水 (7.5 L)を滴下した。8℃にて15時間撹拌後、結晶をろ取し、水 (2 L)で洗浄後、26時間通風乾燥 (60℃)を行い、標記化合物を白色結晶として622.1 g得た (収率：81.5%, HPLC純度：99.6%)。

（工程Ｂ−６ 別法（１）：最終工程）
５，６−ジエトキシ−４−フルオロ−１Ｈ−３−イソインドールアミン（２０ｇ），２−ブロモ−１−［３−（第３ブチル）−４−メトキシ−５−モルフォリノフェニル］−１−エタノン（３４．２ｇ）をジメチルフォルムアミド（３００ｍｌ）に溶解し室温で４８時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、残沙に酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え結晶化した。得られた結晶を濾過後、酢酸エチルで洗浄して目的化合物（４０ｇ）を白色結晶として得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ（ｐｐｍ）
１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）１．３６（９Ｈ，ｓ）１．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ））２．９５^〜３．１２（４Ｈ，ｍ）３．７５^〜３．８４（４Ｈ，ｍ）３．９４（３Ｈ，ｓ）４．１２（２Ｈ，ｑ）４．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）４．７８（２Ｈ，ｓ）５．４６（２Ｈ，ｓ）７．３３（１Ｈ，ｓ）７．４９（１Ｈ，ｓ）７．５９（１Ｈ，ｓ）
ＭＳ：ｍ／ｅ（ＥＳＩ）５２８．２（ＭＨ＋）

（工程Ｂ−６ 別法（２）：最終工程）
１−（３−第３ブチル４−メトキシ−５−モルフォリノ−フェニル）−２−（５，６−ジエトキシ−７−フルオロ−１−イミノ−１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−エタノン；塩酸塩

５，６−ジエトキシ−４−フルオロ−１Ｈ−３−イソインドールアミン（３．２ｇ）、２−ブロモ−１−［３−（第３ブチル）−４−メトキシ−５−モルフォリノフェニル］−１−エタノン（４．８ｇ）をジメチルフォルムアミド（１５ｍｌ）に溶解し室温で４８時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、残沙に酢酸エチルを５０ｍｌ加え結晶化した。得られた結晶を濾過後、酢酸エチルで洗浄して目的化合物（２．５６ｇ）を白色結晶として得た。

^１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ（ｐｐｍ）
１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）１．３６（９Ｈ，ｓ）１．３９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ））２．９５^〜３．０４（４Ｈ，ｍ）３．７７^〜３．８５（４Ｈ，ｍ）３．９４（３Ｈ，ｓ）４．１１（２Ｈ，ｑ）４．２０（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）４．７７（２Ｈ，ｓ）５．４６（２Ｈ，ｓ）７．３２（１Ｈ，ｓ）７．４９（１Ｈ，ｓ）７．５９（１Ｈ，ｓ）

式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物等の活性は、以下の手順により決定することができる。

（１）式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）の化合物等に対するインビトロ試験の手順
（ａ）血小板膜の調製
1週間以内に薬物を服用していない健常人より採血を行い、凝固阻止剤として３．８%クエン酸（血液９に対して１の割合）を添加する。室温下、１００ｇで１０分間遠心することで多血小板血漿（PRP:platelet rich plasma）を得る。PRPを遠心して得た血小板をｐH７．５の５ｍMＴｒｉｓ−ＨＣｌ、5ｍM ＥＤＴＡに懸濁し、Dounce homogenizerでホモジナイズし、４０，０００ｇで６０分間遠心し血小板膜を得た。得られた血小板膜は、１０ｍM ＭｇＣｌ_２と１ｍM ＥＧＴＡ（エチレングリコール四酢酸）を含むｐＨ７．５の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（緩衝液１）に１％の濃度になるようにＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）を添加した溶液で懸濁し、−８０℃で保存する。

（ｂ）トロンビンレセプター放射リガンド結合アッセイ
トロンビンレセプターアンタゴニスト活性は、Ａｈｎらのトロンビンレセプター放射リガンド結合アッセイ法（Ａｈｎら、Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，５１巻，ｐ．３５０−３５６（１９９７））の改変を使用して評価する。緩衝液１（ｐＨ７．５の５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、１０ｍＭ ＭｇＣｌ_２、１ｍＭ ＥＧＴＡ）にウシアルブミンおよびＤＭＳＯをそれぞれ０．１％および２０％となるように添加して被験化合物の調製液とする。この調製液で種々の濃度に希釈した被験化合物溶液（２０μｌ）を９６穴のマルチスクリーンプレートに添加する。その後、緩衝液１にて２５ｎＭに希釈した［^３Ｈ］Ａla−（4−ｆｌｕｏｒｏ）Ｐｈｅ−Ａｒｇ−（ｃｙｃｌｏｈｅｘｙｌ）Ａｌａ−（ｈｏｍｏ）Ａｒｇ−Ｔｙｒ−ＮＨ_２（ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙＴＲＡＰ）８０μｌを添加する。さらに、あらかじめ調製しておいた血小板膜溶液（０．４ｍｇ／ｍｌ）１００μｌを添加して混和した後、３７℃で１時間インキュベーションする。反応液を吸引ろ過後に２００μｌの緩衝液１にて３回洗浄する。その後、液体シンチレーター３０μｌを添加してトップカウンター（パッカード）によりプレートの放射活性を測定する。被験物質存在時の放射活性から非特異的結合分を差し引いた値を、特異的結合（化合物非存在時の結合から非特異的結合分を差し引いた値）で除することにより結合率を求め、ＩＣ_５０値を算出する。なお、特異的な結合は１０μＭのｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ＴＲＡＰ）を添加した値とする。

（２）カニクイザルのエキソビボでの血小板凝集
（ａ）薬物投与および血液採取
覚醒下においてカニクイザルに前記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を、単独あるいは混合して経口投与する。前記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を静脈内持続投与する場合、ケタミンで導入麻酔後、麻酔ガス（組成：笑気2L/min、酸素1L/min、イソフルラン０．５％）で吸入麻酔を行う。留置針を用いて試験物質の注入のためのカテーテルを上腕静脈に挿入する。インフュージョンポンプを用いて、一定時間、例えば９０分間にわたって薬物を静脈内に投与する。採血は被験物質の経口投与前、及び両被験物資の投与終了後に行う。採血は、上腕静脈または伏在静脈から、抗凝固剤として３．８%クエン酸溶液２００μLを入れたシリンジを用いて１．８ｍL採取する。

（ｂ）ＰＲＰ凝集
採血した血液をエッペンドルフチューブに移し、室温にて６４００ｒｐｍで5秒間遠心を行い、上清をＰＲＰとして分離する。分離したあとの血液はさらに１０，０００ｒｐｍで５分間遠心を行い乏血小板血漿（ＰＰＰ：platelet poor plasma）を分離する。ＰＰＰを用いてＰＲＰの血小板濃度を希釈して３×１０^５／μＬとなるように調製する。ＰＲＰ凝集はＢｏｒｎらの濁度法に従って行う。ＰＲＰ（２２５μｌ）を測定チャンネルに入れ、３７℃に温めた後、トロンビン受容体活性化ペプチド（ＴＲＡＰ）を２５μＬ添加し、６分間濁度変化に基づく凝集カーブを記録する。この凝集カーブ下の面積値を凝集強度として評価する。

（３）インビトロ血小板凝集の手順
１週間以内に薬物を服用していない健常人より採血を行い、凝固阻止剤として３．８％クエン酸（血液９に対して１の割合）を添加する。室温下、１００ｇで１０分間遠心することでＰＲＰを得る。ＰＲＰを除去した血液をさらに１０００ｇで１０分間遠心することでＰＰＰを得る。血小板数は他項目自動血球計数装置（Ｋ４５００、シスメックス）で測定し、約３０万／μｌとなるようにＰＲＰをＰＰＰで希釈する。前記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる化合物を種々の濃度に希釈した溶液とＰＲＰを３７℃にて６０分間プレインキュベーションする。プレインキュベーション処理したＰＲＰ（１７５μｌ）に前記Ｂ群の化合物（Ｂ）の種々の濃度の溶液（２５μｌ）を添加し、フィブリン重合阻止剤としてＧＰＲＰ−ＮＨ_２（最終濃度１ｍＭ）２５μｌを添加する。血小板凝集能はアグリゴメータ（エムシーメディカル）を用いて測定を行い、３７℃で３分間保温した後、２５μｌのトロンビン溶液（１Ｕ／ｍｌ）を添加し、６分間の凝集反応を調べ、凝集曲線の曲線下面積を比較することで抑制作用を評価する。トロンビン以外の凝集惹起剤を使用する場合は、ＧＰＲＰ−ＮＨ₂の添加は行わず、ＰＲＰの容量を２００μｌに変更して行う。

[実施例３−１]
前記式（Ｉ）〜（ＶＩＩ）からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物またはその薬学的に許容される塩、および前記Ｂ群より選ばれる少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を、単独あるいは混合して雄性ハートレー系モルモットに経口にて投与する。媒体には0.5%メチルセルロース溶液またはジメチルスルホキシド、Tween20を含む水溶液を用いる。（反復投与してもよい。）

経口投与してから一定時間後にペントバルビタール酸ナトリウムを腹腔内投与して麻酔する。麻酔下にて頸静脈を露出し、ローズベンガル投与用にポリエチレンチューブをカニュレーションする。大腿動脈を露出し血流測定用のプローブを装着する。プローブの上流部位に緑色光(波長540nm、500,000ルクス)を照射し、照射５分後、5mg/mLとなるように生理食塩液に溶解したローズベンガル溶液（5mg/kg）を約１分間かけて投与を行う。完全に血流が停止するまでの時間を測定する。

これらの実験データにより、化合物単独並びに併用による抗血栓作用を評価する。

[実施例３−２]
上記式（I）の化合物の臭化水素酸塩（以下、実施例１化合物）及びアスピリンをそれぞれ２００及び１０００ｍｇ／ｍｌとなるようにＤＭＳＯで溶解した。これらのＤＭＳＯ溶液とTween20ならびに蒸留水を用いて、ＤＭＳＯ及びTween20の濃度がそれぞれ5%及び2%の水溶液となるように化合物非存在のＶｅｈｉｃｌｅ、実施例１化合物単独６ｍｇ／ｍｌ、アスピリン単独５０ｍｇ／ｍｌ並びに実施例１化合物６ｍｇ／ｍｌとアスピリン２０ｍｇ／ｍｌの混合溶液の４種類の投与溶液を調製した。雄性ハートレー系モルモットに５ｍｌ／ｋｇの割合で経口投与を行い、約８０分を経過した時点でペントバルビタール酸ナトリウムを腹腔内投与して麻酔を行った。麻酔下にて頸静脈を露出し、ローズベンガル投与用にポリエチレンチューブをカニュレーションした。大腿動脈を露出し血流測定用のプローブを装着した。化合物投与約１１５分後にプローブの上流部位に緑色光(波長540nm、500,000ルクス)を照射し、照射５分後、5mg/mLとなるように生理食塩液に溶解したローズベンガル溶液（5mg/kg）を約１分間かけて投与を行った。ローズベンガル溶液投与開始から完全に血流が停止するまでの血流時間を測定することで抗血栓作用を評価した。

＜結果＞
図１に示したようにＶｅｈｉｃｌｅを投与したコントロール群では血流時間が６．７２分であったのに対し、実施例１化合物３０ｍｇ／ｋｇ及びアスピリン１００ｍｇ／ｋｇの血流時間を、それぞれ１０．７７分及び１１．３０分と血流時間をそれぞれ延長した。さらに両者を併用した群では血流時間を２４．１９分に延長した。
この結果は、一般式(I)〜(VII)からなる群より選ばれる少なくとも１つの化合物とアスピリンなどの所定の化合物(Ｂ)とを併用投与することで、優れた抗血栓作用が得られることを示している。よって、この結果から、両化合物を患者に併用投与することで、心疾患などの疾患を治療または改善できることがわかる。

本発明により、少なくとも１つの２−イミノピロリジン誘導体、および少なくとも１つの他の化合物（Ｂ）を含有する、医薬組成物が提供される。前記医薬組成物は、例えば、心疾患を治療または改善するために有用である。

Claims (5)

1. 下記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、およびアスピリンを含有する、急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる少なくとも１つの血栓に起因する心疾患に用いる医薬組成物。
   
2. 式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩が、式（Ｉ）の化合物の臭化水素酸塩である、請求項１に記載の組成物。
3. 組成物が急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる少なくとも１つの血栓に起因する心疾患の治療用又は改善用の医薬組成物である、請求項１または２に記載の組成物。
4. アスピリンと併用する、急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる少なくとも１つの血栓に起因する心疾患の治療用または改善用医薬組成物の製造のための、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩の使用。
   
5. 下記式（Ｉ）の化合物もしくはその薬学的に許容される塩を含有する医薬組成物と、アスピリンを含有する医薬組成物を含む、、急性冠症候群、アテローム血栓症、再狭窄、高血圧、安定狭心症、不整脈、心不全、ＳＴ上昇心筋梗塞および脳梗塞からなる群より選ばれる少なくとも１つの血栓に起因する心疾患の治療用または改善用キット。