JP5506386B2 - P53活性化化合物 - Google Patents
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Description
Yは存在しないか、−C(O)−、−C=S−、または−SO2−であり;
Ar、Ar’はアリールであり;
XはOまたはSであり;
R3およびR4は、独立して、非存在であるか存在し、存在するときは、独立してH、または分枝状または非分枝状の、モノ、ジもしくはトリ置換または無置換の、アルキルもしくはZ−アルキル(ここで、ZがO、NH、NもしくはS)であるか、またはR3およびR4は、共に結合して、分枝状または非分枝状の、置換または無置換の、アルキレンもしくはZ−アルケン(ここで、ZはO、NH、NまたはSである)を形成し;
R5およびR6は、独立して、非存在であるか存在し、存在するときは、独立して分枝状または非分枝状の、置換または無置換のアルキルであり;ここで、
R3が存在するときは、破線bは単結合であり、R3が非存在のときは、破線bは二重結合であり;
R4が存在するときは、破線cおよびdは単結合であり、R4が非存在のときは、破線cまたはdの一方は二重結合であり、他方は単結合であり;そして、
R5およびR6が非存在のとき、破線aおよびeはそれぞれ二重結合であり、R5およびR6が存在するときは、破線aおよびeは、それぞれ単結合である]
で示される、医薬としての使用に供される化合物、または、その生理的に許容可能な塩、溶媒和物、エステルもしくは他の生理的機能性誘導体。
R1は、好ましくは独立してH、または置換または無置換のアルキルまたはアリール基である。
アリール基、Arは、置換または無置換の、単環または多環系アリールもしくはヘテロアリール部分であってもよい。
好ましくは、Arはフェニルである。
Arがフェニルのとき、フェニルにパラ位で結合する基、すなわち、−NH−が−NR3−基に対しパラ位であるのが好ましい。
好ましくはAr’は、1以上の可能な位置に、分枝状または非分枝状の、置換また
は無置換C2−C10アルキルで置換されたフェニルである。好ましくは、R2は二級または三級アルキル基などの、分枝状のアルキル基である。
R2基は、結合するフェニル環のパラ位で結合するのが好ましい。
好ましくは、破線aおよびeが二重結合となるようにR5およびR6は非存在である。
好ましくは、R3およびR4は存在し、好ましくは水素、または、例えば、メチルなどのC1−C4アルキルである。
アリールという語は、置換または無置換の単環もしくは多環系のアリールまたはヘテロアリールを含む。
通常、アルキル基は、遊離末端で、フェニル、ヒドロキシル、アミノ、モルホリノ、ニトロ、アルキルオキシ、アルキルチオ、ホルミル、シアノ、カルバモイル、ハロ(例えば、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨード)、ケトン、−S(O)NR7R8または−S(O)R9(ここで、R7、R8およびR9は、それぞれ独立してアルキル、アルケニル、アルキニル、アリールまたはヘテロアリールから選択される)から選択される置換基で置換される。
末端置換基は、ハロゲンであってもよく、例えば、ブロモの場合は、式Br(CH2)4−を有するR1基を与える。
末端置換基が、アミノまたはモルホリノ基のとき、その窒素原子は、プロトン化(例えば、酸反応により)して、正電荷されたものとなってもよい。
アミノという語は、ここでは、プロトン化された種々のアミン類およびその塩についても含む。例えば、アミンは、プロトン化されてもよく、塩酸、硫酸の酸など、カルボン酸類を含む多くの酸類との塩を形成してもよい。例えば、アミンの塩酸塩は、水や水溶性溶媒中で高い水溶性を示す。
フェニルは、6員アリール基の具体例である。
フリルおよびピロリルは、それぞれ酸素および窒素ヘテロ原子を含む5員ヘテロアリール基の具体例である。
ピリジニルおよびピリミジニルは、それぞれ1つの窒素原子、および2つの窒素原子を含む6員ヘテロアリール基の具体例である。
ナフチルは、縮合6員環を形成する10個の炭素原子の骨格を有するアリール基の具体例である。
または、その生理的に許容可能な塩、溶媒和物、エステルまたは他の生理的機能性誘導体、を有する。
好ましくは、Yは−C(O)−基であり、このため、好ましくは、R1YNH−基はR1C(O)NH−である。
本発明は、さらに以下に詳細を説明するように、その薬学的に許容可能な担体と共に式(I)または(II)の化合物を含む医薬製剤にも及ぶ。
本発明は、さらに以下により詳細に記載するように、ここに記載された1以上の式(I)または(II)の化合物を、それを必要とする患者に投与することを含む治療または予防方法にも及ぶ。
本発明は、式(I)および(II)の範囲に含まれる新規な化合物にも及ぶ。
アルケニル基は、独立してC2−C22アルケニル、好ましくはC2−C10アルケニル、好ましくはC2−C4アルケニルであってもよい。
アルキニル基は、独立してC2−C22アルキニル、好ましくはC2−C10アルキニル、好ましくはC2−C4アルキニルであってもよい。
アルキル、アルケニルまたはアルキニル基は、分枝状または非分枝状、置換または無置換であってもよい。例えば典型的な分枝状のアルキル基は、iso−プロピル、iso−ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、3−メチルブチル、3,3−ジメチルブチルおよびそれらの異性体を含む変形体を含む。
患者は、通常、動物であり、例えば、哺乳動物、特にヒトである。
そのような製剤の1つの可能性としては、吸入器で使用される穴の開けられるカプセル(好ましくは、例えば、ゼラチン)で、あるいは、活性化合物と、適する液体または気体噴射剤、および、場合により界面活性剤および/または固体希釈剤などの他の成分を含む自己噴射性製剤として用いられる、細かく粉砕した粉末の形態である。適する液体噴射剤は、プロパンおよびクロロフルオロカーボン類を含み、適する気体噴射剤は、二酸化炭素を含む。活性化合物が、溶液または懸濁液の溶滴の形態で分散している自己噴射性製剤も、使用されうる。
例えば、創傷や潰瘍に、治療する箇所に直接スプレーや散布しうる液体や粉末製剤も提供されうる。また、製剤を包帯、ガーゼ、メッシュなどの担体にスプレーでき、あるいは散布し、治療する箇所に適用することもできる。
以下の図面を参照して本発明を詳細に説明する。
化合物合成
ここに記載された化合物は、手法1および2を参照し、以下の方法に従って準備された。
アセトン(20mL)中4−tert−ブチルベンゾイルクロライド(10mmol、1.97g)の撹拌溶液に、アルゴン雰囲気下で、チオシアン酸ナトリウム(10mol、0.81g)を加えた。2時間後、この混合物を、0℃に冷却されたアルゴン下で、アセトン(50mL)中1,4−フェニレンジアミン(20mmol、2.16g)溶液に滴下した。周囲温度まで加温後、反応混合物を36時間攪拌した。混合物を減圧下濃縮し、残渣をジクロロメタン中にとり、濾過し、濾液を濃縮し、シリカゲルカラムでクロマトグラフィにかけ、酢酸エチル−石油エーテル混液で溶出した。生じた固体をジエチルエーテルで粉砕し、分析的に純粋な物質2.45g(75%)を得た。分析により以下のデータを得た:mpt 189−191℃;1H−NMR(CDCl3)δ1.36(s,9H),6.81(m,2H),7.47(m,2H),7.54(m,2H),7.81(m,2H),9.05(s,1H),12.41(s,1H);MS(ES+)m/z350[M+Na]+;C18H21N3ONaSの計算値350.1300,実測値350.1303.
ジクロロメタン(1mL)中、JH129(0.2mmol、65mg)の撹拌溶液に、アルゴン雰囲気下で、5−ブロモプロパノイルクロライド(ジクロロメタン0.2mL中0.2mmol)の溶液を加えた。生じた懸濁液に、トリエチルアミン(0.2mmol、27μL)を加えた。反応混合物を90分間攪拌し、ジクロロメタン(5mL)で希釈し、1MのHCl、2MのNaOHおよび飽和NaCl溶液で洗浄した。有機層を乾燥(MgSO4)し、灰白色固体になるまで濃縮した。酢酸エチルから再結晶し、分析的に純粋な物質64mg(65%)を得た。分析により以下のデータを得た:mpt 152−153℃;1H−NMR(CDCl3)δ1.36(s,9H),1.92(m,4H),2.42(t,2H),3.46(t,2H),7.22(s,1H),7.57(m,4H),7.68(m,2H),7.82(m,2H),9.04(s,1H),12.60(s,1H);MS(ES+)m/z512,514[M+Na]+;C23H28 79BrN3O2NaSの計算値512.0983,実測値512.0995.
ジクロロメタン(10mL)中、JH140(0.1mmol、50mg)の溶液に、ジメチルアミン水溶液(40重量%の2mL)を加えた。二相性の混合物を20時間攪拌した。有機層を分離し、乾燥(MgSO4)し、エバポレートして、乾固するまで濃縮した。残渣をアセトンに溶解し、この溶液をHCl蒸気に曝した。生じたHCl塩を濾過し、純白色固体、33mg(67%)を単離した。分析により以下のデータを得た:mpt 205−206℃;1H−NMR(D6−DMSO)δ1.32(s,9H),1.64(brs,4H),2.39(t,2H),2.75(s,6H),3.06(t,2H),7.60(m,6H),7.94(m,2H),9.64(brs,<1H),10.11(s,1H),11.45(s,1H),12.60(s,1H);MS(ES+)m/z 455[M−Cl]+;C25H35N4O2Sの計算値455.2481,実測値455.2477;分析 C25H35ClN4O2Sの計算値:C,61.14;H,7.18;N,11.41%.実測値:C,60.75;H,7.46;N,11.30%.
in vitro実験:
材料と方法:
ケムブリッジケミカルス(ChemBridge Corporation、16981 Via Tazon、Suite G、サンディエゴ、CA 92127)から得た30,000個の化合物ライブラリー(DIVERSetTM)を、p53腫瘍抑制剤機能の活性化剤についてスクリーニングした。
1次および2次スクリーニングを、以下の細胞ベースのアッセイを用いて行った。
Lu X、Burbidge SA、Griffin SおよびSmith HMによりOncogene.,13(2):413−8(1996年7月18日)に記載された、p53−依存性プロモーター支配下でベータ−ガラクトシダーゼを発現するT22 RGC−ΔFos−lacZ細胞を用いた。
・セレクションなしのDMEM90μl、10%FCSおよびゲンタマイシン1mg/mlを有する96ウェル組織培養プレートに1ウェル当たり、1x104個の低継代T22細胞を播種する。
・細胞播種48時間後に化合物を加える。DMSOは、培地中最終濃度1:100を超えない。非処理の対照と、アクチノマイシンD5ng/mlで処理したポジティブコントロールを使用する。総量=100μl
・18時間後、96ウェルプレートから培地を除き、1ウェルあたり50μlの1倍溶解バッファ(プロメガ)を加える。
・室温で1時間振盪する(すぐに使えるようになるまでプレートを−80℃で冷凍できる)
・1ウェルあたり150μlのCPRG反応混合物を加える。
CPRG反応混合物15mlの調製
[15mlの0.1Mのリン酸バッファ、pH7.5
300μlのCPRG 4mg/ml(ベーリンガー・マンハイム)
80μl(0.1MのMgCl2/0.1M β−メルカプトエタノール)]
・37℃で4時間湿室中でインキュベートする。色が黄色から桃色に変わると、p53活性を示す。
・各ウェルから新たな96ウェルプレートに100μlを移す。これは、細胞壊死組織片が、吸光度の読み取りに干渉するのを防止する。プレートリーダーを用いて570nMでの吸光度を測定する。
・可溶化液を一晩4℃で放置し、次いで、再び吸光度を測定する。
Oncogene.,18(51):7378−86(1999年12月2日)に、Smart P,Lane EB,Lane DP,Midgley C,Vojtesek B,Lain Sにより開示されている神経芽細胞腫細胞株SKNSH−CMVNeo(p53機能あり)およびSKNSH−DDp53(不活化p53)を用いた。
1日目
・6ウェルプレートの1ウェルあたり50,000個の細胞をDMEM−10% FCSで播種する。
2日目
・薬剤を細胞に加える。
4日目
・ブロモデオキシウリジン(BrdU)を30μMになるまで加え、20分間細胞をインキュベートする。
・細胞から培地を除去し、13mlのファルコンチューブに移す。PBSで細胞をすすぎ、これも移す。細胞をトリプシン処理し、チューブに移し、次いで最後にPBSで再度すすぐ。一旦チューブに全てを移し、1500rpmで5分、細胞をペレット化する。
・1mlのPBSに細胞を再懸濁し、ボルテックスする間、3mlのエタノールに流滴を加える。4℃で最短1〜2時間(上限なし)インキュベートする。
5日目
・2,500rpmで5分間の遠心分離によりペレット化し、上澄みを捨てる。
30mMのHCl(pH1.5)中1mg/mlの濃度で、1チューブあたりペプシン溶液2mlを新たに調製し、37℃に予め温める。
・予熱したペプシン溶液2mlを各チューブに加え、37℃で30分間混合する。
・2,500rpmで5分間の遠心分離によりペレット化し、上澄みを捨てる(ペレットは、透明になろう)。
・室温で15−20分間1mlの2M HClを加える(貯蔵瓶は、11.6M)。タイミングが重要であり、長時間のインキュベートは、ブロードなDNAピークとなる。PBSを追加し、前記と同様にペレット化する。
・PBSで再度次いで抗体緩衝液で一度洗浄し、毎回細胞をペレット化する。
抗体緩衝剤:PBS、0.5%のBSA、0.5%のTween−20
・抗体緩衝剤中1:50に希釈されたベクトン・ディッキンソン抗BrdU抗体の200μL中にペレットを再懸濁する。室温で1時間インキュベートする。
・PBSで洗浄し、細胞をペレット化する。
・抗体緩衝剤中1:64に希釈されたシグマFITC抗体(#3008)の200μL中にペレットを再懸濁する。抗体の消失を予防するために暗所下、室温で30分間インキュベートする。
・PBSで洗浄し、細胞をペレット化する。
・25μg/mlのヨウ化プロピジウム対比染色液を含む500μLのPBS中に最終的なペレットを再懸濁する。FACScanで分析にかけるまで暗所下氷冷する。
・FACScanによるDNA含量の測定(ヨウ化プロピジウム蛍光)およびDNA合成(BrdU取り込み)
・6ウェルプレートの1ウェルあたり、2x105個のMCF−7細胞を播種する。
・24〜36時間インキュベーション後、細胞に薬剤を加え、必要な時間インキュベートする。
・プレートの培地を捨て、PBSで洗浄する。PBSの残りを吸引し100μlの1倍LDS添加緩衝剤(インビトロジェン)をプレートに直接加える。プレートの表面を片隅へかき取り、細胞/LDSをピペットでチューブに取る。
・試料を90℃まで5分間加熱し、次いで各15秒間を2回超音波処理する。最大速で5分間遠心分離し、必要時まで氷冷する。全ての試料のタンパク質濃度を測定(ピアスBCAキット)し、濃度を均等化する。各試料に1:10DTTを加える。
・試料を4〜12%ノベックス・ゲルに添加し、MOPSバッファで1度流し、メーカーの使用説明書(インビトロジェン)に従い、PVDF膜に移す。
・膜をブロックし、標準手順を用い1次、次いで2次抗体でインキュベートし、検出にアマシャムECLを用いた。
・関連する1次抗体は、抗p53DO1マウスモノクローナル抗体、抗p53ホスホセリン−15(サンタクルズ)、抗p21 118マウスモノクローナル抗体を含む。負荷対照としてアクチン検出を用いた。
化合物の相対的水溶性は、UVスペクトルに基づく方法を使用して求めた。各化合物の吸光係数の生成は、分光学的グレードのアセトニトリル(100mL)中に1mgの化合物(一部の化合物は、最初に最小量のDMSOに溶解することを要する)を溶解することにより行われる。次いで6x2倍の連続希釈を行い、合計7溶液を得る。これらの溶液をUVスペクトルで分析し、適当な波長における吸光度をモル濃度に対しプロットした。吸光係数を最適な線勾配から算出した。次いで吸光係数を、40mMのDMSOストックと100μMの化合物の水溶液の実際の濃度を計算するのに用いた。
40mMのDMSOストックと100μMの化合物の水溶液の実際の濃度は、次のように計算した。1mgの化合物を必要量のDMSOに溶解し、40mMストックを得た。次いで、不溶の化合物を遠心分離でペレット化した。上澄み(2μL)をアセトニトリルで4mLに希釈し、理論上2x10-5Mの溶液を作った。次いで溶液をUVスペクトルで分析した。
100μM水溶液の実際の濃度は、40mMDMSO溶液のアリコート(4.2μL)を1mLになるまで水で希釈することにより求めた。この溶液のアリコート(60μL)を水(40μL)に加え、不溶の化合物を遠心分離によりペレット化した。上澄み(80μL)をアセトニトリルで4mLになるまで希釈し、理論上2x10-6Mの溶液を作った。次いでこの溶液をUVスペクトルで分析した。
次いで水における実験的に測定した水溶性を、理論値(パーセンテージとして)と比較し、テノビン1に対する相対的水溶性値を得た。
酵素的SirTlアッセイを、Fluor de Lys蛍光アッセイシステム(バイオモルキットAK555)で精製成分を用い、以下のメーカーの使用説明書に従い行った。FdL基質を7*MおよびNAD+1mMで用いた。化合物をDMSO中、反応において0.25%より小さい最終DSMO濃度で可溶化した。1反応あたり酵素1単位を用いた。反応は、37℃で1時間行った。
図1に示される結果は、JJ91はp53転写因子機能を活性化することを示す。T22 RGC−ΔFos−lacZ細胞をJJ91の指示量で16時間処理した。p53−依存性転写の誘導率を測定した
図2に示される結果は、JJ91がp53を活性化して、選択的に神経芽細胞腫細胞を死滅させることを示す。SKNSH−CMVNeoおよびSKNSH−DDp53細胞は、非処理にしたまま、あるいは10μMのJJ91で48時間処理した。細胞をFACS分析で分析した。JJ91は、明らかにDNA合成と細胞死例を低下させた(sub−G1/G0細胞の数を増加)。これらの効果は、非活性化p53を伴うSKNSH細胞においては、見られない。
図3に示される結果は、JJ91がp53レベルを増加させることを示す。MCF−7細胞を、DNA傷害物質であるマイトマイシン C(10μM)、非遺伝毒性物質nutlin−3(6μM)やJJ91(10μM)で指示時間処理した。JJ91は、nutlin−3と同様の効果を有する。P53レベルは、急速に増加する。p53ホスホセリン−15のレベルは、遺伝毒性物質であるマイトマイシンCで見られたほど高くはない。アクチンを増加させるp53の下流の標的p21のレベルは、負荷対照で分析された。
図4Aおよび4Bに示される結果は、p53レベルにおけるJJ91類縁物質の効果を示す。
図4A:MCF−7細胞を4時間(レーン2から9)または6時間(レーン11から15)、10μMのマイトマイシンC(レーン2)、JJ91(レーン3および11)、JH118(レーン4)、JH129(レーン5)、JH132(レーン6)、JH140(レーン7および12)、JH141(レーン8)および4−アミノアセトアニリド(レーン9)、JH151(レーン13)、JH156(レーン14)および5406085(レーン15)で処理した。レーン2とレーン10において、細胞を非処理とした。細胞抽出液をp53、ホスホセリン−15 p53、p21およびアクチンに対する抗体で、ウエスタンブロット法により分析した。
図4B:MCF−7細胞を、4時間(レーン2から6)6μMのnutlin−3(レーン2)、10μMのJJ91(レーン3)、10μMの7322366(レーン4)、40nMのレプトマイシンB(レーン5)および20μMのMG132 JH129で処理した。細胞抽出液を、p53、アクチン、p21、病原性毒素およびmdm2に対する抗体でウエスタンブロット法により分析した。
図5に関し、JJ91をマウスに5mg/kgの用量で投与した。◆と□は、それぞれi.p.とp.o.の投与ルートに対応する(挿入図は、データの対数プロットを示す。)。血中濃度は、上記のLC−MS/MSで示される時点において測定し、示される値は、3つの測定値の±SDを意味する。結果は、化合物の腹膜内注射が、血中でマイクロモル濃度に達し、顕著な体重や行動変化を起こさず、約1.3時間の半減期を有することを示す。
図6に関し、BL2バーキットリンパ腫細胞を、1μM〜10μMの範囲の指示濃度のJJ91(70%シクロデキストリンに溶解)で2時間処理した。このとき、生存細胞の数をカウントした。この短い暴露のあと、細胞を洗浄し、化合物を除去した。この処理は、6日間毎日繰り返した。実験を三回実施し、標準偏差を示した。図6に示されるように化合物への6回の短い暴露のあと、BL2細胞の生存は、大きく減少した。
図7に関し、SCIDマウスにおけるBL2バーキットリンパ腫異種移植腫瘍を腫瘍が触知できるまで7日間樹立した。このとき、ビヒクル(70%シクロデキストリン)(上段パネル)およびJJ91(92mg/kg)(下段パネル)を毎日腹膜内注射で投与した。腫瘍サイズを、注射した日(1日目)および注射後4、8および11日目で測定した。示されるように、JJ91は、SCIDマウスにおけるBL2異種移植腫瘍の成長を低下させる。
SirT1活性を、メーカーにより特定されるバイオモルのFluor de Lys SirT1蛍光活性アッセイ(カタログ番号AK−555)を用いて評価した。反応は、1ミリモルのNAD+、7マイクロモルのFluor de Lys基質および過量のJH164を含んだ。脱アセチル化と展開液反応を37℃で1時間行った。JH164のIC50は、23.5マイクロモルである。図8はSirT1に対するJH164の抑制効果を示す。
上記態様は、本発明の代表的なものであり、請求の範囲に定義された発明の範囲を制限すると解釈されるものではない。
カテゴリー1:水溶性類縁物質
a)テノビン6(JH164):中間体JHl40から調製
JH140は、可逆的にp53を活性化するこれまでに調製された他の化合物全てとは異なり、非可逆的p53活性化を示すことから、潜在的に興味深い。その合成は、テノビン6の手順中、以下に説明される。
化合物1 上記
化合物5〜8 上記
手法1:a テノビン6および類縁物質1、5〜7の合成
試薬と条件:(i)SOCl2、CH2Cl2、室温16時間(96%)。(ii)NaSCN、アセトン、室温、8時間、次いで1,4−フェニレンジアミン、16時間(58%)。(iii)酸塩化物、NEt3、DCM、室温。(iv)40% HNMe2水溶液、DCM/H2O、室温、24時間。(v)2M HCl(ジエチルエーテル中)。
アセトン(50mL)中、3(J.Am.Chem.Soc.1985、207、898に記載の2から調製)の溶液(6.53g、33mmol、1当量)に、チオシアン酸ナトリウム(2.69g、33mmol、1当量)を加えた。クリーム色の懸濁液を室温で16時間攪拌し、次いで、アセトン(50mL)中、p−アミノアセトアニリドの溶液(4.95g、33mmol、1当量)を加えた。黄色懸濁液を室温で16時間攪拌し、溶媒を減圧下濃縮し、淡橙色残渣を得、それをCH2Cl2中に再懸濁し、不溶性固体を濾過した。濾液を減圧下濃縮し、淡橙色固体を得、それを酢酸エチルから再結晶することにより精製し、テノビン1(7.49g、61%)を淡黄色固体として得た。
1H−NMR(アセトン−d6,300MHz)δ1.36(s,9H,(CH 3)3),2.09(s,3H,CH 3),7.63(d,2H,J=8.7Hz,ArH),7.71(s,6H,ArH),8.03(d,2H,J=8.7Hz,ArH),9.26(s(br),1H,NH),10.12(s(br),1H,NH),12.80(s(br),1H,NH).
13C−NMR(アセトン−d6,100MHz)δ23.36,29.70,30.40,34.83,118.95,124.14,125.71,128.15,129.36,133.31,137.82,157.00,167.97,178.73.
アセトン(30mL)中、3(J.Am.Chem.Soc.1985、207、898に記載の2から調製)の溶液(4g、20.4mmol、1当量)に、チオシアン酸ナトリウム(1.68g、20.8mmol、1.02当量)を加えた。生じた淡黄色懸濁液を室温で8時間攪拌し、次いで、0℃でアセトン(30mL)中1,4−フェニレンジアミン溶液(4.41g、40.8mmol、2当量)を加えた。
褐色懸濁液を室温まで加温し、16時間撹拌した。溶媒を減圧下濃縮し、残った残渣をCH2Cl2に再懸濁し、不溶性固体を濾過した。濾液を減圧下濃縮し、褐色固体を得、シリカのカラムクロマトグラフィにより精製(50%酢酸エチル/石油エーテル)し、続いて酢酸エチルから再結晶により4(4.42g、58%)を淡黄色固体として得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.36(s,9H,(CH 3)3,3.75(s(br),2H,NH 2),6.71(d,2H,J=11.8Hz,ArH),7.49(dd,2H,J=8.6,33.4Hz,ArH),7.81(d,2H,J=10.8Hz,ArH),7.68(dd,4H,J=8.6,81.3Hz,ArH),9.02(s(br),1H,NH),12.37(s(br),1H,NH).
13C−NMR(CDCl3,100MHz)δ31.1,35.0,115.1,125.8,126.2,127.4,128.7,128.8,145.4,157.7,166.8,178.5.
CH2Cl2(110mL)中、チオ尿素4(6g、18.3mmol、1当量)をN2雰囲気下で攪拌した。5−ブロムワレリルクロライド(3.65g、18.3mmol、1当量)、続いてトリエチルアミン(2.51mL、18.3mmol、1当量)を加えた。ベージュ色の懸濁液を室温で4時間攪拌し、CH2Cl2(50mL)で希釈した。有機溶液を1Mの塩酸水溶液(1x50mL)、10%水酸化ナトリウム水溶液(1x50mL)、および飽和塩水(1x50mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮した。生じた褐色泡をシリカのフラッシュクロマトグラフィで精製(50%酢酸エチル/石油エーテル)し、5−ブロモ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド(中間体JH140)(6.76g、77%)を黄色粉末として得た。
13C−NMR(CDCl3,100MHz)δ24.6,27.7,31.1,32.5,33.6,37.4,119.9,124.9,126.3,127.4,128.6,133.6,157.9,166.9,170.9,178.4.
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.33(s,9H,(CH 3)3),1.66(m,4H,(CH 2)2),2.40(t,2H,J=6.1Hz,COCH 2),2.75(s,6H,N(CH 3)2),3.06(m,2H,CH 2NH(CH3)2),7.59(m,6H,ArH),7.95(d,2H,J=8.4Hz,ArH),9.77(s(br),1H,NH(CH3)2),10.13(s(br),1H,NH),11.43(s(br),1H,NH),12.61(s(br),1H,NH).
13C−NMR(DMSO−d6,75MHz)δ22.4,23.8,31.3,35.3,35.9,42.5,56.7,119.5,125.3,125.8,129.1,129.7,133.3,137.9,156.8,168.5,171.2,179.4.
HRMS実測値455.2477(C17H39N6O4S2の計算値455.2474).
アセトニトリル(4mL)中、5−ブロモ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド(中間体JH140、テノビン6に記載の通り調製)(80mg、0.16mmol)の溶液に、モルホリン(0.4mL)およびヨウ化カリウム(触媒量)を加えた。反応混合物を40分間加熱還流し、室温まで冷却し、減圧下濃縮した。残った残渣を、75%飽和炭酸水素ナトリウム水溶液とCH2Cl2間で分配した。有機層をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮し、ベージュ色の粗固体を得た。EtOAcから再結晶により精製し、5−モルホリン−4−イル−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミドを得、蒸気拡散により塩酸塩に変換した。25%CDCl3/ジエチルエーテル中ジメチルアミンの溶液を、塩化水素に曝し、1を白色沈殿として得、濾過により集めた。
HRMS実測値497.2585(C27H37N4O3Sの計算値.497.2586).
チオ尿素4(200mg、0.61mmol、1当量)をCH2Cl2(10mL)中、N2雰囲気下で攪拌した。4−ブロモブチリルクロライド(169mg、0.92mmol、1.5当量)、続いてトリエチルアミン(85μL、0.61mmol、1当量)を加えた。橙色溶液を室温で1.5時間攪拌し、CH2Cl2(10mL)で希釈した。有機溶液を1M塩酸水溶液(1x10mL)、10%水酸化ナトリウム水溶液(1x50mL)、および飽和塩水(1x10mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮した。生じた淡黄色泡をシリカ(50%酢酸エチル/石油エーテル)のフラッシュクロマトグラフィにより精製し、4−ブロモ−N−{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−ブチルアミド(138mg、48%)を黄色オイルとして得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.35(s,9H,(CH 3)3),2.26(m,2H,CH 2CH2Br),2.57(t,2H,J=7.0Hz,CH 2),3.52(t,3H,J=6.2Hz,CH 2),7.60(m,6H,ArH),7.82(d,2H,J=8.7Hz,ArH),9.08(s(br),1H,NH),12.59(s(br),1H,NH).
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.32(s,9H,(CH 3)3),1.95(m,2H,CH 2),2.44(t,2H,J=7.3Hz,CH 2),2.79(d,6H,J=4.8Hz,N(CH 3)2),3.09(m,2H,CH 2),7.62(m,6H,ArH),7.95(d,2H,J=8.5Hz,ArH),9.64(s(br),1H,NH(CH3)2),10.17(s(br),1H,NH),11.44(s(br),1H,NH),12.61(s(br),1H,NH).
チオ尿素4(200mg、0.61mmol、1当量)をCH2Cl2(10mL)中、N2雰囲気下で攪拌した。6−ブロモヘキサノイルクロリド(195.8mg、0.92mmol、1.5当量)、続いてトリエチルアミン(85μL、0.61mmol、1当量)を加えた。
ベージュ色の懸濁液を室温で1.5時間攪拌し、CH2Cl2(10mL)で希釈した。有機溶液を1M塩酸水溶液(1x10mL)、10%水酸化ナトリウム水溶液(1x50mL)、および飽和塩水(1x10mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮した。生じた褐色の泡をシリカ(50%酢酸エチル/石油エーテル)のフラッシュクロマトグラフィにより精製し、6−ブロモ−ヘキサン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド(166mg、55%)を黄色オイルとして得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.35(s,9H,(CH 3)3),1.51(m,2H,CH 2),1.73(m,2H,CH 2),1.89(m,2H,CH 2),2.36(t,2H,J=7.4Hz,COCH 2),3.40(t,2H,J=6.7Hz,CH 2Br),7.57(m,7H,ArH,NH),9.10(s(br),1H,NH),12.58(s(br),1H,NH).
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.32(s,9H,(CH 3)3),1.64(m,4H,(CH 2)2),2.35(t,2H,J=7.1Hz,CH 2),2.73(d,6H,J=4.8Hz,N(CH 3)2),3.01(m,2H,CH 2),7.59(m,6H,ArH),7.94(d,2H,J=8.4Hz,ArH),9.83(s(br),1H,NH(CH3)2),10.08(s,1H,NH),11.42(s,1H,NH),12.59(s,1H,NH).
8−ブロモオクタン酸(2g、8.90mmol、1当量)をCH2Cl2(15mL)中、N2雰囲気で攪拌し、塩化チオニル(784μL、10.68mmol、1.2当量)、続いて、DMF(数滴)を加えた。溶液を16時間攪拌し、減圧下濃縮して8−ブロモオクタノイルクロライド(2.04g、95%)を黄色オイルとして得、さらなる精製をせずに用いた。チオ尿素4(600mg、1.84mmol、1当量)を、CH2Cl2(15mL)中、N2雰囲気下で攪拌した。8−ブロモオクタノイルクロライド(532mg、2.02mmol、1.2当量)、続いてトリエチルアミン(256μL、1.84mmol、1当量)を加えた。ベージュ色の懸濁液を室温で16時間攪拌し、CH2Cl2(20mL)で希釈した。有機溶液を1M塩酸水溶液(1x20mL)、10%水酸化ナトリウム水溶液(1x20mL)、および飽和塩水(1x20mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮した。生じた黄色の泡をシリカ(50%酢酸エチル/石油エーテル)のフラッシュクロマトグラフィで精製し、8−ブロモ−オクタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド(579mg、59%)を黄色オイルとして得た。
1H−NMR(CDCl3,400MHz)δ1.36(s,9H,(CH 3)3),1.44(m,6H,(CH 2)3),1.74(m,2H,CH 2),1.86(m,2H,CH 2),2.37(t,2H,J=7.4Hz,COCH 2),3.41(t,2H,J=6.8Hz,CH 2Br),7.18(s,1H,NH),7.56(m,6H,ArH),7.63(d,2H,J=8.9Hz,ArH),7.82(d,2H,J=8.6Hz,ArH),9.04(s,1H,NH),12.59(1H,NH).
13C−NMR(CDCl3,75MHz)δ25.5,28.0,28.6,29.1,31.1,32.7,34.0,37.6,120.1,124.8,126.2,127.5,128.6,133.4,136.8,157.8,167.0,171.6,178.5.
1H−NMR(DMSO−d6,400MHz)δ1.32(s,9H,(CH 3)3),1.32(m,6H,CH 2)3),1.62(m,4H,(CH 2)2),2.33(m,2H,CH 2),2.72(s(br),6H,N(CH 3)2),2.99(m,2H,CH 2),7.62(m,6H,ArH),7.97(dd,2H,J=8.5,16.5Hz,ArH),9.95(s,1H,NH),10.08(s(br),1H,NH),11.44(s,1H,NH),12.60(s,1H,NH).
試薬と条件:(i)JOC 2004、69、639に記載された文献反応により調製。(87%)(ii)CrO3/H2SO4、アセトン、0℃から室温、16時間(65%)。(iii)SOCl2、CH2Cl2、室温、16時間。(iv)4、NEt3、CH2Cl2、室温、16時間、(46%)。(v)LiBr、アセトン、還流、24時間(81%)。(vi)40%HNMe2水溶液、CH2Cl2/H2O、室温、24時間(91%)。(vii)ジエチルエーテル中2MのHCl、CH2Cl2、(73%)。
ヘキサエチレングリコール(11)(2.82g、10mmol、1当量)を、N2雰囲気下、CH2Cl2(100mL)に溶解し、酸化銀(3.48g、15mmol、1.5当量)、続いて塩化トシル(2.10g、11mmol、1.1当量)およびヨウ化カリウム(332mg、2mmol、0.2mmol)を加えた。溶液を室温で1時間攪拌し、次いで、濃縮し、セライトを通じて濾過し、酢酸エチルで溶出した。濾液を減圧下濃縮し、淡黄色オイルを得、シリカ(酢酸エチル)のカラムクロマトグラフィで精製し、12(3.79g、87%)を淡黄色オイルとして得た。
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.80(s(br),1H,OH),2.44(s,3H,CH 3),3.64(m,22H,(CH 2)11),4.15(m,2H,CH 2),7.33(d,2H,J=8.0Hz,ArH),7.79(d,2H,J=8.4Hz,ArH).
1.5M硫酸水溶液(10mL)を0℃に調製し、三酸化クロムを加えて撹拌し、橙色溶液を得た。アルコール12(1g、2.29mmol)をアセトン(15mL)に溶解し、その溶液を硫酸に0℃で滴下した。混合物を室温まで温め、16時間撹拌した。生じた緑色の溶液をセライトで濾過し、減圧下濃縮した。生じた水溶性の残渣をH2Oで希釈し、CH2Cl2(3x50mL)で抽出した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮し、13(672mg、65%)を淡黄色オイルとして得、更なる精製は行わなかった。
1H−NMR(アセトン−d6,300MHz)δ2.46(s,3H,CH 3),3.59(m,18H,(CH 2)9),4.13(m,4H,(CH 2)2),7.49(d,2H,J=8.0Hz,ArH),7.82(d,2H,J=8.0Hz).
13C−NMR(CDCl3,100MHz)δ21.6,68.5,68.6,68.8,69.1,69.3,70.3,70.4,70.4,70.5,70.6,70.6,70.7,70.8,71.2,71.3,76.8,77.1,77.4,127.9,129.9,132.9,144.9,172.7.
LRMS(M+Na)実測値473.16.
酸13(117mg、0.26mmol)を、触媒量のDMFを含有する塩化オキサリル中で攪拌した。溶液を1時間加熱還流し、次いで、室温に冷却し、溶媒を減圧下濃縮し、対応する酸塩化物を得、更なる精製を行わずに用いた。酸塩化物(138mg、0.29、1.3当量)を乾燥CH2Cl2(10mL)中、N2雰囲気下で攪拌し、チオ尿素4(74mg、0.23mmol、1当量)を加え、明黄色溶液を得た。トリエチルアミン(41μL、0.23mmol、1当量)を加え、混合物を室温で16時間撹拌した。溶液をCH2Cl2(1x10mL)で希釈し、1M塩酸水溶液(1x10mL)、1M水酸化ナトリウム水溶液、続いて飽和塩水(1x10mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、溶媒を減圧下濃縮した。生じた黄色の泡をシリカ(50%酢酸エチル/石油エーテル)のフラッシュクロマトグラフィで精製し、トルエン−4−スルホン酸 2−[2−(2−{2−[2−({4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニルカルバモイル}−メトキシ)−エトキシ]−エトキシ}−エトキシ)−エトキシ]−エチルエステル(79mg、46%)を黄色オイルとして得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.34(s,9H,(CH 3)3),2.41(s,3H,CH 3),3.63(m,18H,(CH 2)9),4.10(m,4H,(CH 2)2),7.31(d,2H,J=8.0Hz,ArH),7.53(d,2H,J=8.6Hz,ArH),7.67(m,4H,ArH),7.79(m,m,4H,ArH),8.99(s,1H,NH),9.15(s,1H,NH),12.61(s,1H,NH).
13C−NMR(CDCl3,100MHz)δ21.7,31.1,35.3,68.7,69.3,70.1,70.4,70.5,70.6,70.7,71.2,120.2,124.6,126.1,126.2,127.5,127.9,128.6,129.8,133.7,136.1,144.8,157.8,166.89,168.4,178.3.
HRMS(M+Na)実測値782.2756(C37H49N3O10NaS2の計算値782.2757).
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.36(s,9H,(CH 3)3),3.45(t,2H,J=6.3Hz,CH 2Br),3.71(m,16H,(CH 2)8),4.18(s,2H,NHCOCH 2),7.55(d,2H,J=8.6Hz,ArH),7.70(q,4H,J=9.0Hz,ArH),7.82(d,2H,J=8.6Hz,ArH),9.06(s,1H,NH),9.16(s(br),1H,NH),12.61(s,1H,NH).
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.32(s,9H,(CH 3)3),2.77(d(br),6H,J=4.0Hz,NH(CH 3)2),3.61(m,18H,(CH 2)9),4.10(m,4H,(CH 2)2),7.63(m,6H,ArH),7.95(d,2H,J=8.4Hz,ArH),9.55(s,1H,NH),9.77(s,1H,NH),11.45(s,1H,NH),12.62(s,1H,NH).
以下の手法に従い24を調製した。
上記に記載されたとおり、ベンズアミド26(1g、5.64mmol、1当量)を塩化オキサリル(834μL、9.59mmol、1.7当量)と反応させた。生じたイソシアネート(27)を、アニリン18と共に乾燥アセトニトリル中で素早く撹拌し、3時間加熱還流した。生じたベージュ色の懸濁液を室温まで冷却し、沈殿を濾過により集め、28(400mg、17%)をベージュ色の固体として得、さらに精製しなかった。
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.31(s,9H,(CH 3)3),1.47(s,9H,OC(CH 3)3),7.43(m,4H,ArH),7.55(d,2H,J=8.6Hz,ArH),7.97(d,2H,J=8.6Hz,ArH),9.31(s,1H,NH),10.77(s,1H,NH),10.91(s,1H,NH).
N−アシル尿素28(300mg、0.73mmol)をトリフルオロ酢酸(1.2mL)中、40分間攪拌し、減圧下濃縮し、1−(4−アミノ−フェニル)−3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−ウレア(トリフルオロ酢酸塩として)(383mg、定量的)を褐色な綿状の固体として得、更なる精製をしなかった。
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.30(s,9H,(CH 3)3),7.32(d,2H,J=8.8Hz,ArH),7.55(d,2H,J=8.6Hz,ArH),7.70(d,2H,J=8.9Hz,ArH),7.98(d,2H,J=8.6Hz,ArH),10.96(s,1H,NH),11.02(s,1H,NH).
1H−NMR(DMSO−d6,300MHz)δ1.31(s,9H,(CH 3)3),1.80(m,4H,(CH 2)2),2.33(t,2H,J=7.2Hz,COCH 2),3.57(t,2H,J=6.6Hz,CH 2Br),7.54(m,6H,ArH),7.98(d,2H,J=8.5Hz,ArH),9.90(s,1H,NH),10.82(s,1H,NH),10.93(s,1H,NH).
ブロモ化合物29(123mg、0.27mmol)をCH2Cl2(10mL)、40%HNMe2水溶液(3mL)およびH2O(7.5mL)中、室温で20時間攪拌した。反応混合物をCH2Cl2(20mL)で希釈し、H2O(1x10mL)、10%NaOH水溶液(1x10mL)、および飽和塩水(1x10mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮し、クリーム色の固体を得、アセトンに溶解し、ジエチルエーテル中2M塩酸で処理した。白色沈殿を得、濾過により単離し、24(44mg、36%)をクリーム色の粉末として得た。
1H−NMR(DMSO−d6,400MHz)δ1.31(s,9H,(CH 3)3),1.64(m,4H,(CH 2)2),2.36(t,2H,J=6.7Hz,COCH 2),2.75(s,6H,NH(CH 3)2),3.05(m,2H,CH 2Br),7.53(m,6H,ArH),7.98(d,2H,J=8.6Hz,ArH),9.63(s(br),1H,NH),9.98(s,1H,NH),10.82(s,1H,NH),10.93(s,1H,NH).
この類縁物質は、以下に示すp53活性化アッセイにおいて、非常に良好な活性を示したので、重要な化合物である。
アセトン(15mL)中3(869μL、4.79mmol、1当量)の撹拌溶液に、N2雰囲気下、チオシアン酸ナトリウム(389mg、4.79mmol、1当量)を加え、反応混合物を室温で4時間撹拌した。アニリン18(1g、4.79mmol、1当量)をアセトン(10mL)中に溶液として加えた。生じたベージュ色の懸濁液を室温で16時間攪拌し、溶媒を減圧下濃縮した。残った残渣を、CH2Cl2に再懸濁し、不溶の固体を濾過した。濾液を減圧下濃縮し、クリーム色の粗固体を得、50%酢酸エチル/石油エーテルから再結晶することにより精製し、{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−カルバミン酸 tert−ブチルエステル(1.4g、66%)を金色微粉末として得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.36(s,9H,(CH 3)3),1.63(s,9H,OC(CH 3)3),6.52(s,1H,NH),7.42(d,2H,J=8.7Hz,ArH),7.55(d,2H,J=8.5Hz,ArH),7.64(d,2H,J=8.8Hz,ArH),8.82(d,2H,J=8.7Hz,ArH),9.03(s,1H,NH),12.56(s,1H,NH).
このタイプの試薬として、テノビン類に基づく親和性マトリックスの調製が含まれ、テノビン類の可能性のあるタンパク質標的や、サーチュインタンパク質ファミリーやその他の範囲の抑制剤の選択性のアッセイにおいて、可能性のある関連物質(例えばMeijer,Laurent;Skaltsounis,Alexios−Leandros;Magiatis,Prokopios;Polychronopoulos,Panagiotis;Knockaert,Marie;Leost,Maryse;Ryan,Xiaozhou P.;Vonica,Claudia Alin;Brivanlou,Ali;Dajani,Rana;Crovace,Claudia;Tarricone,Cataldo;Musacchio,Andrea;Roe,S.Mark;Pearl,Laurence;Greengard,Paul.「古代紫インディルビン類から誘導されるGSK−3−選択的な抑制剤」Chemistry&Biology(2003),10(12),1255−1266により報告される以下の類縁物質プロトコール)を同定するのに重要である。親和性マトリックスを調製する手順は次のとおりである。
6−アミノヘキサン酸(3.1g、23.63mmol、1当量)を、ジオキサン/H20(1:1、75mL)中、0℃で水酸化ナトリウム(1.05g、23.63mmol)と共に攪拌した。この溶液に、Boc無水物(5.2g、21.27mmol、0.9当量)を加え、反応を16時間室温まで温めた。反応混合物を1M塩酸水溶液でpH5まで酸性にした。混合物をCH2Cl2(3x50mL)で抽出し、合わせた有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮し、31を無色のオイル(4.5g、89%)として得、更なる精製を行わなかった。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.42(m,4H,(CH 2)2),1.44(s,9H,(CH 3)3),1.65(m,2H,CH 2),2.35(t,2H,J=7.4Hz,CH 2),3.10(m,2H,CH 2),4.55(s,(br),1H,NH).
チオ尿素4(100mg、0.31mmol、1当量)を乾燥CH2Cl2(5mL)中、N2雰囲気下で攪拌し、酸31(106mg、0.46mmol、1.5当量)、続いてブロモ−トリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスファート(214mg、0.46mmol、1.5当量)、およびN,N−ジイソプロピルエチルアミン(53μL、0.31mmol、1当量)を加えた。反応混合物を室温で16時間攪拌し、次いで、CH2Cl2(20mL)で希釈し、1M塩酸水溶液(1x10mL)、1M水酸化ナトリウム水溶液(1x10mL)、および飽和塩水(1x10mL)で洗浄した。有機相をMgSO4で乾燥し、減圧下濃縮し、粗黄色オイルを得、シリカ(25〜50%酢酸エチル/石油エーテル)のカラムクロマトグラフィで精製し、32(86mg、54%)を無色のオイルとして得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.36(s,9H,(CH 3)3),1.40(s,9H,OC(CH 3)3),1.40(m,2H,CH 2),1.52(m,2H,CH 2),1.75(m,2H,CH 2),2.36(t,2H,J=7.5Hz,CH 2),3.12(m,2H,CH 2),4.61(s(br),1H,NHBoc),7.54(d,2H,J=8.7Hz,ArH),7.62(m,4H,ArH),7.82(d,2H,J=8.6Hz,ArH),9.09(s,1H,NH),12.59(s,1H,NH).
LRMS(M+Na)実測値563.15.
Boc保護されたアミン32(20mg、0.04mmol)をCH2Cl2(1mL)およびトリフルオロ酢酸(166μL)中、室温で30分間攪拌した。減圧下濃縮し、33を淡黄色オイルとして得た。
1H−NMR(CDCl3,300MHz)δ1.29(m,2H,CH 2)1.30(s,9H,(CH 3)3),1.59(m,4H,(CH 2)2),2.28(m,2H,CH 2),2.90(m,2H,CH 2),7.60(m,6H,ArH),7.75(d,2H,J=8.2Hz,ArH),8.75(s(br),1H,NH),9.21(s,1H,NH),12.50(s,1H,NH).
Affigel−15(BioRad)(1mL)を冷イソプロパノールで洗浄し、濾過した。Affigel(210mg)に、ジオキサン(1mL)、33(2mg)および過剰のトリエチルアミンを加えた。さらにジオキサンを加え、総量を1.5mLに調節した。混合物を4℃で24時間撹拌し、次いで3000rpmで3分間遠心分離した。母液をデカントし、新鮮なジオキサンを加え、混合物を振盪した。遠心分離し、2回デカントした。
Claims (24)
- 式(I)
[式中、
R1は、アミノ、モルホリノ、およびハロから選択される置換基で末端の炭素原子が置換された直鎖アルキルであり;
Yは、−C(O)−、または−SO2−であり;
Arはフェニレンであり;および、
Ar’は1以上の可能な位置に、分枝状または非分枝状の、置換または無置換C2−C10アルキルで置換されたフェニルである]
で示される化合物、または、その生理的に許容可能な塩、およびその製薬学的に許容可能な担体を共に含む、医薬組成物。 - R1は、ジメチルアミノで末端の炭素原子が置換された直鎖アルキルである、請求項1に記載の医薬組成物。
- R1は、アミノまたはモルホリノで末端の炭素原子が置換された直鎖C3−6アルキルである、請求項1に記載の医薬組成物。
- R1の置換基が、アミノまたはモルホリノであり、前記アミノまたはモルホリノがプロトン化された窒素原子を含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- Yが−C(O)−である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の医薬組成物。
- 前記化合物が、式(II)
[式中、R2は分枝状または非分枝状の、置換または無置換のC2−C10アルキルである]
で示される請求項1〜5のいずれか1項に記載の医薬組成物。 - R1YNH基、および/またはR2は、それらが結合する各フェニル基のパラ位にある請求項6に記載の医薬組成物。
- 前記組成物が5−ジメチルアミノ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミドおよび5−モルホリノ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド、またはその生理的に許容可能な塩、およびその製薬学的に許容可能な担体を共に含む、請求項1に記載の医薬組成物。
- 式(I)
[式中、
R1は、アミノ、モルホリノおよびハロから選択される置換基で末端の炭素原子が置換された直鎖C3−6アルキルであり;
Yは−C(O)−または−SO2−であり;
Arはフェニレンであり;および、
Ar’は1以上の可能な位置に、分枝状または非分枝状の、置換または無置換C2−C10アルキルで置換されたフェニルである]
で示される化合物、またはその生理的に許容可能な塩を含む医薬。 - R1は、ジメチルアミノで末端の炭素原子が置換された直鎖アルキルである、請求項9に記載の医薬。
- R1は、アミノまたはモルホリノで末端の炭素原子が置換された直鎖C3−6アルキルである、請求項9に記載の医薬。
- R1の置換基が、アミノまたはモルホリノであり、前記アミノまたはモルホリノがプロトン化された窒素原子を含む、請求項9に記載の医薬。
- Yが−C(O)−である、請求項9〜12のいずれか一項に記載の医薬。
- 前記化合物が、式(II)
[式中、R2は分枝状または非分枝状の、置換または無置換のC2−C10アルキルである]
で示される請求項9〜13のいずれか1項に記載の医薬。 - 前記組成物が5−ジメチルアミノ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミドおよび5−モルホリノ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド、またはその生理的に許容可能な塩を含む、請求項9に記載の医薬。
- 式(I)
[式中、
R1は、アミノ、モルホリノおよびハロから選択される置換基で末端の炭素原子が置換された直鎖C3−6アルキルであり;
Yは−C(O)−または−SO2−であり;
Arはフェニレンであり;および、
Ar’は1以上の可能な位置に、分枝状または非分枝状の、置換または無置換C2−C10アルキルで置換されたフェニルである]
で示される化合物、またはその生理的に許容可能な塩。 - R1は、ジメチルアミノで末端の炭素原子が置換された直鎖アルキルである、請求項16に記載の化合物。
- R1は、アミノまたはモルホリノで末端の炭素原子が置換された直鎖C3−6アルキルである、請求項16に記載の化合物。
- R1の置換基が、アミノまたはモルホリノであり、前記アミノまたはモルホリノがプロトン化された窒素原子を含む、請求項16に記載の化合物。
- Yが−C(O)−である、請求項16〜19のいずれか一項に記載の化合物。
- 前記化合物が、式(II)
[式中、R2は分枝状または非分枝状の、置換または無置換のC2−C10アルキルである]
で示される請求項16〜20のいずれか1項に記載の化合物。 - 前記化合物が5−ジメチルアミノ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミドおよび5−モルホリノ−ペンタン酸{4−[3−(4−tert−ブチル−ベンゾイル)−チオウレイド]−フェニル}−アミド、またはその生理的に許容可能な塩から選択される、請求項16に記載の化合物。
- 細胞増殖に関連する疾患、または糖尿病、筋分化、炎症、異常なまたは望ましくない免疫反応、肥満、心不全、神経変性、老化、HIV感染およびマラリアから選択されるサーチュイン発現および/または機能に関連する疾患/状態の治療または予防剤である請求項1〜8のいずれか1項に記載の医薬組成物。
- 前記細胞増殖に関連する疾患の治療または予防剤が、癌の治療または予防剤である、請求項23に記載の医薬組成物。
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