JP5443162B2 - 肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 - Google Patents
肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5443162B2 JP5443162B2 JP2009511987A JP2009511987A JP5443162B2 JP 5443162 B2 JP5443162 B2 JP 5443162B2 JP 2009511987 A JP2009511987 A JP 2009511987A JP 2009511987 A JP2009511987 A JP 2009511987A JP 5443162 B2 JP5443162 B2 JP 5443162B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- polymer
- cell
- pet
- hepatocytes
- hepatocyte
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 title claims description 242
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 title description 25
- 239000002356 single layer Substances 0.000 claims description 101
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 68
- IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N Arg-Gly-Asp Chemical group NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O IYMAXBFPHPZYIK-BQBZGAKWSA-N 0.000 claims description 65
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 44
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 43
- RGNVSYKVCGAEHK-GUBZILKMSA-N (3s)-3-[[2-[[(2s)-2-[(2-aminoacetyl)amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoyl]amino]acetyl]amino]-4-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)CN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RGNVSYKVCGAEHK-GUBZILKMSA-N 0.000 claims description 42
- 229920000307 polymer substrate Polymers 0.000 claims description 41
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 41
- 108010072041 arginyl-glycyl-aspartic acid Proteins 0.000 claims description 39
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 35
- 108010034892 glycyl-arginyl-glycyl-aspartyl-serine Proteins 0.000 claims description 29
- 229920000139 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims description 28
- 239000005020 polyethylene terephthalate Substances 0.000 claims description 28
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims description 27
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 25
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 21
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical group [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 13
- 238000009832 plasma treatment Methods 0.000 claims description 11
- 108010052768 tyrosyl-isoleucyl-glycyl-seryl-arginine Proteins 0.000 claims description 11
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 claims description 10
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 10
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 10
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 9
- 239000012190 activator Substances 0.000 claims description 8
- 239000004584 polyacrylic acid Substances 0.000 claims description 8
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims description 8
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims description 8
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 6
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 claims description 6
- -1 polyethylene terephthalate Polymers 0.000 claims description 6
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 claims description 6
- 238000002952 image-based readout Methods 0.000 claims description 5
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N lactose group Chemical group OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O2)CO)[C@H](O1)CO GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 claims description 5
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 claims description 5
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical group ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 4
- 239000008101 lactose Substances 0.000 claims description 4
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims description 4
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 3
- 238000010559 graft polymerization reaction Methods 0.000 claims description 3
- 238000002748 hepatotoxicity test Methods 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000005304 joining Methods 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 claims 2
- 238000003255 drug test Methods 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 99
- RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N Acetaminophen Chemical compound CC(=O)NC1=CC=C(O)C=C1 RZVAJINKPMORJF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 60
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 40
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 40
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 40
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 40
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 39
- 231100000304 hepatotoxicity Toxicity 0.000 description 34
- 206010019851 Hepatotoxicity Diseases 0.000 description 32
- 230000007686 hepatotoxicity Effects 0.000 description 32
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 26
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 25
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 24
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 24
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 19
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 18
- 230000008611 intercellular interaction Effects 0.000 description 18
- 229960005489 paracetamol Drugs 0.000 description 18
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 15
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 15
- 229920002799 BoPET Polymers 0.000 description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 12
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 11
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 11
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 11
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 10
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 10
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 10
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 9
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 9
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 9
- 230000004044 response Effects 0.000 description 9
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 9
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 9
- 102000002004 Cytochrome P-450 Enzyme System Human genes 0.000 description 8
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 8
- 102000006495 integrins Human genes 0.000 description 8
- 108010044426 integrins Proteins 0.000 description 8
- MWOGMBZGFFZBMK-LJZWMIMPSA-N (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s,3s)-2-[[(2s)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-3-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)pentanoic acid Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 MWOGMBZGFFZBMK-LJZWMIMPSA-N 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 7
- 102000008142 Cytochrome P-450 CYP1A1 Human genes 0.000 description 7
- 108010074918 Cytochrome P-450 CYP1A1 Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 7
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000002676 xenobiotic agent Substances 0.000 description 7
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 6
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 6
- 238000004833 X-ray photoelectron spectroscopy Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 6
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 6
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 6
- 210000003518 stress fiber Anatomy 0.000 description 6
- 210000001578 tight junction Anatomy 0.000 description 6
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 6
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 6
- SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 2-(2-methoxy-5-methylphenyl)ethanamine Chemical compound COC1=CC=C(C)C=C1CCN SMZOUWXMTYCWNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 2-Propenoic acid Natural products OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000000591 Tight Junction Proteins Human genes 0.000 description 5
- 108010002321 Tight Junction Proteins Proteins 0.000 description 5
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 5
- 210000001650 focal adhesion Anatomy 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 210000003632 microfilament Anatomy 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 5
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 4
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- CRCWUBLTFGOMDD-UHFFFAOYSA-N 7-ethoxyresorufin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 CRCWUBLTFGOMDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035502 ADME Effects 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 4
- 239000002115 aflatoxin B1 Substances 0.000 description 4
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 description 4
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 210000001736 capillary Anatomy 0.000 description 4
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 4
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 4
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 4
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 4
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 4
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 4
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000008521 reorganization Effects 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 3
- ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N PicoGreen Chemical compound CN(C)CCCN(CCCN(C)C)C1=CC(=CC2=[N+](C3=CC=CC=C3S2)C)C2=CC=CC=C2N1C1=CC=CC=C1 ZYFVNVRFVHJEIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000011154 Tight junction protein ZO-1 Human genes 0.000 description 3
- 108050001370 Tight junction protein ZO-1 Proteins 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 3
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 230000019552 anatomical structure morphogenesis Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 230000008619 cell matrix interaction Effects 0.000 description 3
- 101150055214 cyp1a1 gene Proteins 0.000 description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 3
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 3
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 3
- 150000002402 hexoses Chemical class 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 3
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 3
- HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N resorufin Chemical compound C1=CC(=O)C=C2OC3=CC(O)=CC=C3N=C21 HSSLDCABUXLXKM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 231100000041 toxicology testing Toxicity 0.000 description 3
- 230000002034 xenobiotic effect Effects 0.000 description 3
- 230000022814 xenobiotic metabolic process Effects 0.000 description 3
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229930195730 Aflatoxin Natural products 0.000 description 2
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 2
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 2
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical group C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 102000007547 Laminin Human genes 0.000 description 2
- 108010085895 Laminin Proteins 0.000 description 2
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 2
- 231100000070 MTS assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000000719 MTS assay Methods 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005409 aflatoxin Substances 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000013 bile duct Anatomy 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000008512 biological response Effects 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000002843 carboxylic acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 2
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 238000006352 cycloaddition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003436 cytoskeletal effect Effects 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000032459 dedifferentiation Effects 0.000 description 2
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 2
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 2
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 2
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 2
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 2
- 231100000334 hepatotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003082 hepatotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007056 liver toxicity Effects 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 2
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 2
- JIWAALDUIFCBLV-UHFFFAOYSA-N oxoosmium Chemical compound [Os]=O JIWAALDUIFCBLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004738 parenchymal cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 2
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 230000009772 tissue formation Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000747 viability assay Toxicity 0.000 description 2
- 238000003026 viability measurement method Methods 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 2-[2,4-di(pentan-2-yl)phenoxy]acetyl chloride Chemical compound CCCC(C)C1=CC=C(OCC(Cl)=O)C(C(C)CCC)=C1 NGNBDVOYPDDBFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012605 2D cell culture Methods 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 4-[5-[3-(carboxymethoxy)phenyl]-3-(4,5-dimethyl-1,3-thiazol-2-yl)tetrazol-3-ium-2-yl]benzenesulfonate Chemical compound S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=C(OCC(O)=O)C=CC=2)=NN1C1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 APRZHQXAAWPYHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 5-[(1r)-1-hydroxy-2-[4-[(2r)-2-hydroxy-2-(4-methyl-1-oxo-3h-2-benzofuran-5-yl)ethyl]piperazin-1-yl]ethyl]-4-methyl-3h-2-benzofuran-1-one Chemical compound C1=C2C(=O)OCC2=C(C)C([C@@H](O)CN2CCN(CC2)C[C@H](O)C2=CC=C3C(=O)OCC3=C2C)=C1 OCKGFTQIICXDQW-ZEQRLZLVSA-N 0.000 description 1
- 102000010825 Actinin Human genes 0.000 description 1
- 108010063503 Actinin Proteins 0.000 description 1
- XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N Aflatoxin G Chemical compound O=C1OCCC2=C1C(=O)OC1=C2C(OC)=CC2=C1C1C=COC1O2 XWIYFDMXXLINPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N Arg-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N XUUXCWCKKCZEAW-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 101150075175 Asgr1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000532370 Atla Species 0.000 description 1
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical group C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001369 Brass Inorganic materials 0.000 description 1
- MWNLTKCQHFZFHN-UHFFFAOYSA-N CBQCA reagent Chemical compound C1=CC(C(=O)O)=CC=C1C(=O)C1=CC2=CC=CC=C2N=C1C=O MWNLTKCQHFZFHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 102000016362 Catenins Human genes 0.000 description 1
- 108010067316 Catenins Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000004328 Cytochrome P-450 CYP3A Human genes 0.000 description 1
- 108010081668 Cytochrome P-450 CYP3A Proteins 0.000 description 1
- 102100024889 Cytochrome P450 2E1 Human genes 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 238000013382 DNA quantification Methods 0.000 description 1
- 238000005698 Diels-Alder reaction Methods 0.000 description 1
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 1
- 239000004593 Epoxy Substances 0.000 description 1
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 1
- 102000013366 Filamin Human genes 0.000 description 1
- 108060002900 Filamin Proteins 0.000 description 1
- 108010001498 Galectin 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100021736 Galectin-1 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 102000008015 Hemeproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010089792 Hemeproteins Proteins 0.000 description 1
- 101000909131 Homo sapiens Cytochrome P450 2E1 Proteins 0.000 description 1
- 101000956263 Homo sapiens Uncharacterized protein C19orf48 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical group Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 1
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 1
- 101150053185 P450 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000002033 PVDF binder Substances 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N Phenolsulfonephthalein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1(C=2C=CC(O)=CC=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 BELBBZDIHDAJOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002845 Poly(methacrylic acid) Polymers 0.000 description 1
- 101710130420 Probable capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 239000012083 RIPA buffer Substances 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 101000930457 Rattus norvegicus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101710204410 Scaffold protein Proteins 0.000 description 1
- 102000006463 Talin Human genes 0.000 description 1
- 108010083809 Talin Proteins 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 102100038573 Uncharacterized protein C19orf48 Human genes 0.000 description 1
- PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N [N].NC(N)=O Chemical compound [N].NC(N)=O PNNCWTXUWKENPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PPZYBFUYKJPWBY-UHFFFAOYSA-N acetylene azide Chemical group C#C.[N-]=[N+]=[N-] PPZYBFUYKJPWBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 108091005764 adaptor proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035181 adaptor proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000007259 addition reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 230000035578 autophosphorylation Effects 0.000 description 1
- IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N azide group Chemical group [N-]=[N+]=[N-] IVRMZWNICZWHMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010462 azide-alkyne Huisgen cycloaddition reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000010951 brass Substances 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 230000015861 cell surface binding Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 125000003636 chemical group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000007334 copolymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006204 deethylation Effects 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001687 destabilization Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000005906 dihydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000007876 drug discovery Methods 0.000 description 1
- 230000008406 drug-drug interaction Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006735 epoxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002118 epoxides Chemical class 0.000 description 1
- 125000002534 ethynyl group Chemical group [H]C#C* 0.000 description 1
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000003948 formamides Chemical group 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 210000003976 gap junction Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000013537 high throughput screening Methods 0.000 description 1
- 231100000171 higher toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 150000002432 hydroperoxides Chemical class 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000010365 information processing Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000010859 live-cell imaging Methods 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000005439 maleimidyl group Chemical group C1(C=CC(N1*)=O)=O 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000007102 metabolic function Effects 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000655 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229910000487 osmium oxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229960003531 phenolsulfonphthalein Drugs 0.000 description 1
- NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N phloretic acid Chemical compound OC(=O)CCC1=CC=C(O)C=C1 NMHMNPHRMNGLLB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 1
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000001878 scanning electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 231100000004 severe toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M sodium;1-hydroxy-2,5-dioxopyrrolidine-3-sulfonate Chemical compound [Na+].ON1C(=O)CC(S([O-])(=O)=O)C1=O RPENMORRBUTCPR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine thiocyanate Chemical group [Cl-].C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=C(SC#N)C=C1C(O)=O JGVWCANSWKRBCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700004921 tetramethylrhodaminylphalloidine Proteins 0.000 description 1
- 125000003831 tetrazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- 230000025934 tissue morphogenesis Effects 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 125000001425 triazolyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000007039 two-step reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0676—Pancreatic cells
- C12N5/0677—Three-dimensional culture, tissue culture or organ culture; Encapsulated cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0068—General culture methods using substrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/067—Hepatocytes
- C12N5/0671—Three-dimensional culture, tissue culture or organ culture; Encapsulated cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/20—Small organic molecules
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/30—Synthetic polymers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/52—Fibronectin; Laminin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2533/00—Supports or coatings for cell culture, characterised by material
- C12N2533/50—Proteins
- C12N2533/54—Collagen; Gelatin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
本願は、2006年5月24日出願の米国仮出願番号第60/802,768号の利益を主張する。この特許仮出願の開示は、参照によりその全体が本願明細書に引用されたものとする。
a)前記ポリマー基材を活性化して活性化されたポリマー基材を形成するステップと、
b)前記活性化されたポリマー基材を、前記糖基を含む第1の試薬および前記ペプチド基を含む第2の試薬と反応させて前記表面を形成するステップと
を含むことができる。
本願明細書全体を通して、文脈が別段の定義を必要としていないかぎり、「含む(comprise)」との用語、または「含む(comprises)」もしくは「含む(compromising)」などの変化形は、述べられたステップもしくは要素もしくは整数またはステップもしくは要素もしくは整数の郡の包含を含み、いかなる1つのステップもしくは要素もしくは整数または要素もしくは整数の群の排除を含まないと理解される。
本願明細書に記載されるとおり、本発明は、(i)少なくとも1つのポリマー基材(ポリエチレンテレフタレートフィルムなど)、ならびに(ii)このポリマー基材に結合される(連結される)糖基(ガラクトースなど)およびペプチド基(RGDペプチドなど)を含む表面を提供する。ポリマー基材上のRGDペプチドおよびガラクトースは、本願明細書に記載されるような、基材への細胞接着および肝臓特異的な活性を高める。
ポリマー基材は、それに糖基およびペプチド基を連結するのに先立って活性化することができる。この活性化は、基材が糖基(ガラクトースなど)およびペプチド基(RGDペプチドなど)と反応できるようにし上記表面を形成できるようにする前処理ステップを実行することにより行うことができる。基材は、活性化剤の付加である化学反応により活性化することができる。好適な活性化剤は、ポリマー基材に連結することができる官能基ならびにそれぞれ糖基およびペプチド基を含有する第1の試薬および第2の試薬と反応することができる別の官能基を有することができる。あるいは、その活性化剤は、第1の試薬および第2の試薬のポリマー基材との反応を活性化することができるものであってもよい。一実施形態では、第1の試薬および第2の試薬は少なくとも1つのアミン基を含み、ポリマー基材は表面カルボキシル基を有する。この実施形態において、好適な活性化剤はN−ヒドロキシスクシンイミドである。この試薬は、第1の試薬および第2の試薬をアミド基を介してポリマー基材に連結するために、ポリマー上の表面カルボキシル基と反応することができ、引き続いて第1の試薬および第2の試薬上のアミン基によって置換され得る。別の好適な試薬はジシクロヘキシルカルボジイミド(DCC)である。他の類似の活性化剤は当業者には明らかであろう。
本発明で準備されるポリマー基材は、熱可塑性ポリマーとして公知のポリマーの群に属するものであってよい。一実施形態では、熱可塑性ポリマーはポリエステルであってよい。別の実施形態では、ポリエステルはポリエチレンテレフタレートであってよい。ポリマー基材は、第2のポリマーがグラフトされた第1のポリマーを含んでいてよい。第2のポリマーは付加ポリマーであってよい。それはポリアクリル酸またはポリメタクリル酸などのポリ酸であってもよい。一実施形態では、第1のポリマー(PETなど)は、ポリアクリル酸またはポリメチルアクリル酸(必要に応じてメチル基上で置換されている)でグラフト化することにより官能化され、カルボン酸基が導入されてもよい。第2のポリマーは、グラフト重合により第1のポリマーに結合されていてもよい。しかしながら、結合するための他の好適な技法は、当業者が想起するとおり、使用することができる。グラフト化は、例えば、プラズマ処理(アルゴンプラズマ処理など)および/またはUV誘導共重合を使用して実施することができる。
本願明細書において、糖基は単糖であってよいことが想起される。単糖は、ヘキソースまたはその誘導体であってよい。このヘキソースはガラクトースであってよい。糖基は、ガラクトース部分を含む任意の糖(乳糖など)であってよい。
本発明ではペプチド基を準備する。これらのペプチド基は、インテグリンに結合できるものとすることができる。これらのペプチド基の例はトリペプチドまたはYIGSRペプチドである。トリペプチドは、RGDペプチドであってよい。(Tyr−Ile−Gly−Ser−Arg(YIGSR)[Carlisleら,Tissue Eng 2000]、Gly−Phe−Hyp−Gly−Glu−Arg(GFOGER)[Reyesら J Biomed Mater Res A 2003]。
本発明では、多孔性であってもよくまたは不透過性であってもよい表面を準備する。この表面は単層であってもよく、多層であってもよい。この表面は、膜、管、マイクロタイターウェル、カラム、中空糸、ローラーボトル、プレートおよびマイクキャリアの形態であってもよい。
本願明細書に記載される場合、結合は、糖基(ガラクトースなど)およびペプチド基(RGDペプチドなど)を結合するために使用される任意の化学であり得る。これらの基は本発明を実施するのに好適な表面を生成するために互いに、および/または基層へと結合することができる。本願明細書に記載されるとおり、連結(coupling)は結合(conjugation)であってもよい。
基層上のカルボン酸基は、アミン基を含有するガラクトースリガンドおよびRGDペプチド(またはその誘導体)に連結され、アミド基を形成することができる。
基層上のカルボン酸のN−ヒドロキシスクシンイミドエステルは、アミン基を含有するガラクトースリガンドおよびRGDペプチド(またはその誘導体)に連結され、アミド基を形成することができる。
基層上のアミン基は、酸クロリドを有するガラクトースリガンドおよびRGDペプチド(またはその誘導体)に連結され、アミド基を形成することができる。
基層上のアジド基は、アセチレン基を有するガラクトースリガンドおよびRGDペプチド(またはその誘導体)に連結され、トリアゾール基を形成することができる。
基層上のマレイミド基は、Michael型の付加によってチオール基を有するガラクトースリガンドおよびRGDペプチド(またはその誘導体)に連結され、N−ヒドロキシスクシンイミドチオエーテル基を生成することができる。
3D組織様構造の形態形成を理解し制御することができることは、細胞生物学および発生生物学および組織工学研究の基本的な目的である。肝細胞スフェロイド形成には、組織形成のプロセスに似た細胞の移送(translocation)および細胞形状の変化が関与する。ハイブリッドポリマー基層中の生物活性リガンドによって肝細胞スフェロイド形成を調節することができれば、スフェロイド形成のメカニズム研究が可能になる。
バイオ人工肝臓装置のためのバイオリアクターは、膜、管、ミクロタイターウェル、カラム、中空糸、ローラーボトル(roller bottler)、プレート、およびマイクロキャリアなどの任意の好適な形態であってよい。バイオリアクターの「支持表面」は、細胞と物理的に接して細胞の付着を支持することが意図されている。好適な支持体材料は、剛直性、表面積、調製および使用の容易さ、ならびにコストなどの特性の最適の組合せを示す表面を提供する。
コラーゲンコーティングされた基層上で培養された従来の2D肝細胞単層と比べて、RGD/ガラクトースハイブリッド基層上で培養された3D肝細胞単層は、生体内での肝細胞と同様の細胞構造および細胞極性、細胞−細胞相互作用ならびに分化機能を呈した。
3D肝細胞単層は3Dスフェロイドよりも良好な付着性および物質移動を呈した。
3D肝細胞単層は、Primara皿上の肝細胞スフェロイドおよび肝細胞単層の混合物[Tzanakakis ESら Cell Transplant.2001;10:329−42.1]に比べて、より均一な単層モルホロジーを呈した。
3D肝細胞単層は、「コラーゲンを欠く」生物活性サンドイッチ培養物構成よりもより効果的な物質移動を呈した。
3D肝細胞単層を生成するために必要とされる表面は、未同定の成分を有しバッチ毎に変動する天然の細胞外マトリックスに比べて、単純で定量的な制御可能な生物活性の手掛かりを含有する。
合成ポリマー表面は、長期保存および低温保存のために化学的にかつ力学的に安定である。
合成ポリマー表面で増殖した肝細胞は、高濃度のDEXにより維持されるPrimara皿で培養された光度に官能化された単層と比べて、高レベルのホルモンに曝露することなく通常の培養培地で培養することができる。
合成ポリマー表面は、生体適合性でありかつ光学的に透明である。このため、その表面はミクロプレートベースのADME/TOXスクリーニングプラットフォームまたは膜ベースのバイオリアクターに直ちに適合させることができる。
複数のリガンドをPETフィルム上へと結合するという同一の技術を使用して、肝細胞ベースの応用のための基底膜組成物をよりよく模倣するために、他の生物活性リガンドを結合することができる。
本願明細書に記載されるとおり、プレスフェロイド3D単層段階は、応用への大きな潜在能力を示す従来の2D単層よりも、相対的に強固な細胞−基層相互作用、高められた細胞−細胞相互作用、改善された極性および肝臓特異的な機能を特徴とした。ガラクトース/RGDハイブリッド基層を使用してこの構成を安定化することにより、本発明者らは、この3D単層段階を1週間まで維持することができた。その化学的かつ力学的安定性および定量的に制御可能な生物活性の手掛かりをもとに、透明なハイブリッドポリマー基層は、コラーゲンコーティングされた基層の代替物として、高スループット薬物代謝/肝毒性スクリーニングのための現在のミクロプレートベースの自動化プラットフォームに簡単にかつ直ちに組込まれる。例示的な薬物肝毒性研究が示すとおり、提供された3D肝細胞単層構成は、生体内での生物反応をよりよく要約する、生体異物の薬物動態/動態学データの生体外予測を改善した。このハイブリッド基層は、より良好な細胞付着性および機能を備えた3D肝細胞単層を得るためのバイオ人工肝臓装置用のバイオリアクターの細胞培養表面としても有用である可能性がある。
3D肝細胞単層は、例えば[AP.Li Drug Discovery Today 2005;2:179−185;White RE. Annu Rev Pharmacol Toxicol.2000;40:133−57;Battersby BJ Trends Biotechnol.2002;20:167−73]に記載されているような肝細胞ベースの高スループットの生体異物の代謝または肝毒性スクリーニングのために使用することができる。
ADME/TOX薬物特性、つまり吸収、体内動態、代謝、排泄および毒性、は臨床における成功に関連しかつそれにとって重大な、重要な薬物特性である。薬物ADME/Tの正確な予測は、製薬業界にとっては依然として主要な課題のままである。予想されなかった副作用に起因する市販されている薬物の毎年の使用中止または厳しい使用制限から明らかなように、臨床前および臨床時の薬物ADME/T評価の日常的な実施では、明らかに不十分である。肝臓は生物変換および生体異物(薬物を含む)の解毒の主たる臓器であるので、肝臓の実質細胞として、肝細胞ベースの薬物スクリーニングは、薬物候補の代謝および毒性を評価するために広く使用されてきた。生体異物の現在の肝細胞ベースの高スループット代謝/肝毒性スクリーニングのほとんどは、基材調製の容易さおよび一貫性に起因して、I型コラーゲンがコーティングされた96ウェルまたは384ウェルのミクロプレート上で培養された肝細胞を使用して行われている。いくつかの他の生体外培養物構成は、肝細胞ベースの系の機能性および生体模倣性を改善しようとしており、それらとしては、3Dミクロカプセル、サンドイッチ培養物、3Dスフェロイド培養物マイクロキャリア培養物、バイオリアクター内部での潅流培養物および非実質細胞との共培養が挙げられる。しかしながら、それらの複雑な系は、プレート取扱いロボット、色素ベースの分析のための高密度ミクロプレートおよびプレート走査型リーダーなどの平行プロセスを支持する自動化および機器分析をもたらしている標準的な高スループットスクリーニングプラットフォームに容易には適合できない技術的複雑さという問題を抱えている。
高含有量スクリーニングは、自動化された画像ベースの技術を使用する細胞検定の解析を指す、細胞ベースの系に適用できる高スループットアプローチである。これによって、複数の検定パラメータをモニタリングすること、および細胞情報(細胞形状および生存能力、標的の動きおよびその化合物と他の生体分子との相互作用を含む)をワンステップで捕捉することが可能になる。差は、2D撮像装置を使用すると1ウェルあたり数1000であるのに対して、通常の観察時間測定を使用して1ウェルあたり数データポイントである。このように、高含有量アプローチは、多くの細胞の特徴が一度に追跡できるため、細胞ベースのスクリーニングのコストを下げることができる。
ハイブリッド基層上で培養された肝細胞3D単層のスフェロイドを模倣する特性、単層構造、および効果的な付着のために、本願明細書に記載されるハイブリッド基層は、肝細胞ベースの応用(ミクロプレートベースの代謝および肝毒性試験ならびに平坦プレートバイオ人工補助装置など)のための従来のコラーゲンコーティングされた2D基層についての優れた代替物となる。APAPの例示的な肝毒性研究に示されるように、ハイブリッド基層上で培養された肝細胞は、APAPに対して、コラーゲン上で培養された肝細胞よりもより高い感度を示した。
厚みが約100μmの二軸配向させたポリエチレンテレフタレート(PET)フィルムを英国、ケンブリッジのGoodfellow Inc.から購入した。ガラクトースリガンド、1−O−(6’−アミノへキシル)−D−ガラクトピラノシド(AHG、M.W.279)を以前に開発された方法[Yingら,Biomacromolecules 2003,Jan−Feb;4(1):157−165;Findeis MA、Int J Pept Protein Res,1994,May;43(5):477−485;Weigelら,Carbohydr Res,1979;70:83−91]に従って合成し、NMRスペクトルにより確認した。RGDペプチド(GRGDS)をPeptides Internationalから購入した。別段の記載がないかぎり、すべての他の化学物質をSigma−Aldrich Singaporeから購入した。
pAA−g−PET(すなわちpAAをグラフトしたPET)ストリップを、96ウェルのミクロプレートにフィットさせるために直径6.4mmの円形のディスクに切った。RGDペプチドおよびガラクトースリガンド(AHG)を、「2ステップ」EDC(1−エチル−3−[3−ジメチルアミノプロピル]カルボジイミド塩酸塩)化学を使用して、別々にまたは同時にアミド結合を介してpAAc−g−PET基層に結合した(図1)。手短に言えば、第1のステップで、1.5mg EDCおよび0.3mgスルホ−NHSを含有する100μlのMES緩衝液(50mM、pH5.5)をpAA−g−PETディスクを含む各96ウェルに加え、NHSエステルを形成することにより表面カルボキシル基を活性化した。室温での2時間の活性化後、MES溶液を完全に除去し、リガンドを含む100μl リン酸緩衝液(0.1M、pH7.4)で再び満たし、サーモミキサー(Eppendorf)中で4℃で48時間、300rpmで振盪することにより活性化された基層と反応させた。
ガラクトシル化された基層上での肝細胞自己集合のプロセスを、以下の方法を使用して調べた。
細胞骨格は細胞の広がり、移行および組織形成を媒介する主要な動力源(force apparatus)であるため、ガラクトシル化された基層上での肝細胞3Dスフェロイド自己集合の間、および比較としてのコラーゲンコーティングされた基層の上での従来の2D単層形成の間、主要な骨格タンパク質の1つであるアクチンフィラメントの動的再組織化を調べた。
アクチン細胞骨格はアダプタータンパク質(α−アクチニン、タリン、フィラミン)を介して細胞−基層相互作用を媒介するための接着斑(focal adhesion complex)およびカテニンを介して細胞−細胞相互作用を媒介するためのカドヘリンの両方に連結されているため、様々なアクチン構成の存在は、細胞−細胞相互作用によりもたらされる力と細胞−基層相互作用によりもたらされる力との間の競合を示す。この競合を、肝細胞3D単層および従来の2D単層の形成の間のリン酸化された接着斑キナーゼ(p−FAK)およびE−カドヘリン(ELISAによる)の発現レベルの変化を(ELISAにより)定量することにより調べた(図6A)。接着斑キナーゼ(FAK)は、インテグリンを介した基層への付着の際に細胞骨格によってもたらされる力に反応して接着斑の集合を調節することに関与する、鍵となるタンパク質である。細胞外マトリックス(ECM)への細胞のインテグリン媒介性接着は、FAKのTyr−397残基での自己リン酸化を開始させる。p−FAKの発現を、細胞−基層相互作用のインジケータとして定量した。細胞−細胞相互作用を媒介するための主要な細胞接着タンパク質として、E−カドヘリンを細胞−細胞相互作用のインジケータとして選択した。
様々な培養構成の間の機能的構造の特徴を、極性および密着結合形成によって評価した。これらは、それらが生体内での状況を予想するものであれば、生体外構成についての貴重な基準である。細胞極性の形成の研究は、多剤耐性関連タンパク質(Mrp2)および側底CD147をそれぞれ頂端(apical)マーカーおよび側底(basolateral)マーカーとして、毛細胆管トランスポーターを調べることにより行った。共焦点画像を、これらの2マーカーの共局在化を定量するために加工した。一次抗CD147モノクローナル抗体をSerotec(ノースカロライナ州、ローリー)から購入した。一次ウサギ抗ZO−1抗体をZymed laboratories(米国、サンフランシスコ)から購入した。
プレスフェロイド3D単層構成の潜在的な応用の可能性を評価するために、2日目で培養されたこの一過性の段階における肝細胞の肝臓特異的な機能(合成、解毒および代謝活性など)を2日目の従来の2D単層、および3日目の3Dスフェロイドと比較した。
一般に使用される鎮痛剤であるアセトアミノフェン(APAP)は、動物およびヒトにおいて大量に摂取した場合、特に慢性的なエタノール消費後に投与した場合に、肝毒性を引き起こすことが知られている。肝毒性は、組織高分子に結合し、それにより細胞壊死を開始することができる毒性のある中間体へと、アセトアミノフェンがシトクロムP450(P450)酵素によって生物変換されることに由来する。CYP1A、CYP2EおよびCYP3Aは、アセトアミノフェンを代謝することができることが示されているもっとも活性なアイソフォームである。CYP活性の誘発は、APAP毒性の高まりをもたらすことが示された。アフラトキシンB1は、ヒトおよび実験動物において急性肝毒性および肝臓癌を引き起こす。アフラトキシンは、通常、CYP2C11および3A2によって酸化され、中間体の反応性エポキシドを生成し、このエポキシドは、細胞高分子に結合し肝臓の門脈周辺領域に損傷を与える。プレスフェロイド単層および2D単層に対してアセトアミノフェンまたはアフラトキシンB1が引き起こす肝毒性に対する反応を調べた。
実施例1で同定したプレスフェロイド3D単層は肝細胞自己集合の動的プロセスの間の一過性の段階にすぎないため、本発明者らは、それらが長期の応用で使用できるように、GRGDSペプチドおよびガラクトースリガンドをPET基層上へ結合すること(RGD/ガラクトースPET−ハイブリッド)によるプレスフェロイド3D単層の安定化の実行可能性を調べた。様々な生物活性基層(PET−Gal、PET−RGD、PET−ハイブリッド)を製作するための方法は実施例1Bで説明した。
様々な生物活性基層(PET−Gal、PET−RGD、PET−ハイブリッド)上の肝細胞付着性を調べた。
肝細胞モルホロジーに対する基層特徴(結合される生物活性リガンドの存在など)の重大な影響が観察された。
いかなる提案された作用メカニズムにも拘束されることはないが、PET−ハイブリッド上で培養された肝細胞は、2D単層より強固な細胞−細胞相互作用およびより弱い細胞−基層相互作用を経験し、このためにPET−ハイブリッド上で培養された肝細胞は3D細胞モルホロジーを維持することができると考えられる。PET−ハイブリッド上で培養された3D単層は、上で観察したように、培養基層により良好に接着するので、PET−Gal上の3Dスフェロイドよりも強固な細胞−基層相互作用をも有するはずである。コラーゲン基層上で培養された肝細胞の2D単層は、細胞全体にわたって強いアクチンストレスファイバーを示し、これは強固な細胞−基層相互作用を示す(図12)。3D単層としてPET−ハイブリッド上で培養された肝細胞は、コラーゲン基層上の2D単層よりも少ないアクチンストレスファイバーを有したが、3Dスフェロイドより多くのストレスファイバーを有しており、これは細胞−基層相互作用の中間の強さを示す。PET−ハイブリッド上の3D単層は、PET−Gal上で培養された3Dスフェロイドと同様の皮質F−アクチン分布を呈し、これは、生体内の肝細胞の強固な細胞−細胞相互作用の特徴を示す。細胞内のクラスターとしてのp−FAK分布は、細胞−基層相互作用の特異的なインジケータである。点状のp−FAKクラスターのシグナルは、2D単層および3D単層では強く、3Dスフェロイドでは非常に弱い(図12)。これは、3D単層は3Dスフェロイドより強固な細胞−基層相互作用を経験し、基層により良好に接着することができたことを確認させる。細胞−細胞相互作用の特異的インジケータとしてのE−カドヘリン発現を調べた。E−カドヘリンは、3D単層およびスフェロイドでは細胞−細胞境界に局在化するが、2D単層では肝細胞の細胞質全体にわたって細胞内に存在することが見出された。これは、3D単層およびスフェロイドにおける2D単層よりも強固な細胞−細胞相互作用を確認する。
いかなる提案された作用メカニズムに拘束されることはないが、このハイブリッド基層におけるGRGDSペプチドの役割は、インテグリン膜受容体と結合することを通して「単層」段階を安定化すること、および「単層」が3Dスフェロイドへと開くのを防ぐことと考えられる。
PET−ハイブリッド上の安定化した3D肝細胞単層の肝臓特異的な機能を調べた。
PET−Gal上で培養された3Dスフェロイドおよびコラーゲン基層上の2D肝細胞単層と比較した、PET−ハイブリッド上で培養された3D肝細胞単層に対する、APAPのみおよび3MCと同時投与により引き起こされる肝毒性の効果を調べた。CYP1Aの誘導物質である3−MCとの同時投与を、より高い毒性につながる薬物−薬物相互作用の評価として実施した。アセトアミノフェンの肝毒性試験を、実施例1Hに記載した方法に従って実施した。
Claims (35)
- (i)合成ポリマー基材ならびに(ii)前記基材に連結された糖基およびRGDペプチド基を含む表面であって、前記糖基が3D肝細胞単層を形成するのに十分な密度でガラクトース、ガラクトース部分またはこれらの組合せを含み、前記RGDペプチド基が前記ガラクトース、ガラクトース部分またはこれらの組合せと共結合されて、前記3D肝細胞単層を安定化する、表面。
- 前記ポリマー基材が熱可塑性ポリマーを含む、請求項1に記載の表面。
- 前記熱可塑性ポリマーがポリエステルを含む、請求項2に記載の表面。
- 前記ポリエステルがポリエチレンテレフタレート(PET)を含む、請求項3に記載の表面。
- 前記ポリマー基材が第1のポリマー、および前記第1のポリマーにグラフト化された第2のポリマーを含む、請求項1から請求項4のいずれか1項に記載の表面。
- 前記糖基およびペプチド基が前記第2のポリマーに連結されている、請求項5に記載の表面。
- 前記第2のポリマーがポリアクリル酸を含む、請求項6に記載の表面。
- 前記ガラクトース部分が乳糖である、請求項1から請求項7のいずれか1項に記載の表面。
- さらに、YIGSRペプチド、GFOGERペプチドまたはこれらの組合せを含む、請求項1から請求項8のいずれか1項に記載の表面。
- 前記RGDペプチドがアミノ酸配列GRGDSを含む、請求項9に記載の表面。
- 前記RGDペプチド基がアミノ酸配列GRGDSからなる、請求項1から請求項9のいずれか1項に記載の表面。
- 前記表面が多孔性である、請求項1から請求項11のいずれか1項に記載の表面。
- 前記表面が非多孔性である、請求項1から請求項11のいずれか1項に記載の表面。
- 請求項1から請求項13のいずれか1項に記載の表面を含む、装置。
- 肝細胞を増殖させるための装置であって、請求項1から請求項13のいずれか1項に記載の表面を含む、装置。
- 前記装置がバイオ人工肝臓補助装置(BLAD)である、請求項14または請求項15に記載の装置。
- 前記BLADがバイオリアクターである、請求項16に記載の装置。
- 安定化された3D肝細胞単層を提供するためのプロセスであって、
(i)糖基およびペプチド基が連結された合成ポリマー基材を含む表面を準備するステップと、
(ii)前記肝細胞が前記表面に接着するのに好適な時間および条件の下で、肝細胞の存在下で生体外で前記表面をインキュベーションするステップと、
(iii)前記表面に接着している前記肝細胞を培養して安定化された3D肝細胞単層を生成するステップと、
を含むプロセス。 - 糖基およびRGDペプチド基をポリマー基材に連結するステップを含む、請求項1から請求項13のいずれか1項に記載のポリマー表面を作製するためのプロセス。
- さらに、第2のポリマーを第1のポリマー上にグラフト化して、前記連結するステップに先立って前記ポリマー基材を形成するステップを含む、請求項18または請求項19に記載のプロセス。
- 前記第2のポリマーを前記第1のポリマー上にグラフト化するステップが、プラズマ処理および/またはUV誘導グラフト重合を含む、請求項20に記載のプロセス。
- 前記第1のポリマーがプラズマ処理またはUV方法によってグラフト化できる、請求項21に記載のプロセス。
- 前記プラズマ処理がアルゴンプラズマ処理である、請求項22に記載のプロセス。
- 前記連結するステップが、
a)前記ポリマー基材を活性化して活性化されたポリマー基材を形成するステップと、
b)前記活性化されたポリマー基材を、前記糖基を含む第1の試薬および前記ペプチド基を含む第2の試薬と反応させて前記表面を形成するステップと
を含む、請求項19から請求項23のいずれか1項に記載のプロセス。 - 前記活性化するステップが、前記ポリマー基材を活性化剤と反応させて、活性化する基を前記ポリマー基材の前記表面に結合するステップを含む、請求項24に記載のプロセス。
- 前記連結するステップが、さらに、前記ポリマー基材をクエンチ剤でクエンチし、これにより未反応の活性化する基をクエンチするステップを含む、請求項25に記載のプロセス。
- 前記活性化剤がN−ヒドロキシスクシンイミド(NHS)基を含み、前記第1の試薬および前記第2の試薬がともに少なくとも1つのアミン基を含む、請求項26に記載のプロセス。
- 前記クエンチ剤がアミン基を含む、請求項27に記載のプロセス。
- 前記糖基がガラクトースおよび/もしくは乳糖またはこれらの組合せを含む、請求項18から請求項28のいずれか1項に記載のプロセス。
- さらに、YIGSRペプチド、GFOGERペプチドまたはこれらの組合せを含む、請求項18から請求項29のいずれか1項に記載のプロセス。
- 肝細胞を培養するためのバイオリアクターであって、請求項1から請求項13のいずれか1項に記載の表面を備えるバイオリアクター。
- 前記バイオリアクターが、膜、管、マイクロタイターウェル、カラム、中空糸、ローラーボトル、組織培養プレートまたはマイクロキャリアの形態である、請求項31に記載のバイオリアクター。
- バイオ人工肝臓補助装置(BLAD)における、請求項1から請求項13のいずれか1項に記載の表面の使用。
- 前記BLADがバイオリアクターである、請求項33に記載の使用。
- 請求項1から請求項13のいずれか1項に記載の表面の使用であって、前記使用が、ミクロプレートベースのプラットフォームでの高スループット薬物試験、高含有量スクリーニング、肝毒性試験、代謝試験、平板バイオ人工補助装置、および/または膜ベースのバイオリアクターからなる群から選択される、表面の使用。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US80276806P | 2006-05-24 | 2006-05-24 | |
US60/802,768 | 2006-05-24 | ||
PCT/SG2007/000147 WO2007136354A1 (en) | 2006-05-24 | 2007-05-24 | Bioactive surface for hepatocyte-based applications |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013220601A Division JP2014064572A (ja) | 2006-05-24 | 2013-10-23 | 肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2009538130A JP2009538130A (ja) | 2009-11-05 |
JP5443162B2 true JP5443162B2 (ja) | 2014-03-19 |
Family
ID=38723580
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2009511987A Active JP5443162B2 (ja) | 2006-05-24 | 2007-05-24 | 肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 |
JP2013220601A Pending JP2014064572A (ja) | 2006-05-24 | 2013-10-23 | 肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2013220601A Pending JP2014064572A (ja) | 2006-05-24 | 2013-10-23 | 肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US9670462B2 (ja) |
EP (2) | EP2027257A4 (ja) |
JP (2) | JP5443162B2 (ja) |
WO (1) | WO2007136354A1 (ja) |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP5000439B2 (ja) * | 2007-09-19 | 2012-08-15 | 三洋化成工業株式会社 | 細胞培養用担体 |
JP5413648B2 (ja) * | 2008-04-28 | 2014-02-12 | Dic株式会社 | 糖鎖固定化高分子基材、その製造方法および医療器具 |
GB0818074D0 (en) | 2008-10-02 | 2008-11-05 | Lytix Biopharma As | Treatment of biofilms |
EP2459704A1 (en) | 2009-07-28 | 2012-06-06 | Corning Inc. | High surface area substrate for cell culture |
EP2361968B1 (en) * | 2010-02-26 | 2014-11-19 | Corning Incorporated | Synthetic polysaccharide microcarriers for culturing cells |
US9068182B2 (en) | 2009-07-28 | 2015-06-30 | Corning Incorporated | Synthetic polysaccharide microcarriers for culturing cells |
WO2011106222A2 (en) * | 2010-02-23 | 2011-09-01 | Corning Incorporated | Modified substrates for protection of peptide-immobilized surfaces from gamma radiation degradation |
WO2012027218A2 (en) | 2010-08-27 | 2012-03-01 | Corning Incorporated | Peptide-modified surfaces for cell culture |
KR20170061723A (ko) | 2011-09-20 | 2017-06-05 | 주식회사 쿠라레 | 접착성 세포의 배양 방법 |
FR3016128B1 (fr) * | 2014-01-07 | 2018-03-23 | Aptar France Sas | Tete de distribution et d'application. |
CA3176084A1 (en) | 2015-04-22 | 2016-10-27 | Berkeley Lights, Inc. | Microfluidic device for culturing biological cells and methods of use thereof |
US10799865B2 (en) | 2015-10-27 | 2020-10-13 | Berkeley Lights, Inc. | Microfluidic apparatus having an optimized electrowetting surface and related systems and methods |
CN109689213B (zh) | 2016-05-26 | 2022-10-14 | 伯克利之光生命科技公司 | 共价修饰的表面、试剂盒及制备方法和用途 |
KR101941361B1 (ko) | 2017-02-17 | 2019-01-22 | 경희대학교 산학협력단 | 폴리도파민으로 코팅된 투명 원반형 마이크로입자 |
US11993766B2 (en) | 2018-09-21 | 2024-05-28 | Bruker Cellular Analysis, Inc. | Functionalized well plate, methods of preparation and use thereof |
CN111909245B (zh) * | 2020-08-05 | 2021-07-20 | 兰州大学 | 一种包含芳香族氨基酸的胶原靶向多肽探针,制备方法及其应用 |
WO2022092150A1 (ja) * | 2020-11-02 | 2022-05-05 | 積水化学工業株式会社 | マイクロ流路チップ、細胞分析装置、細胞分析システム、及び細胞分析方法 |
EP4382532A1 (en) * | 2021-08-02 | 2024-06-12 | Spiber Inc. | Porous body and method for producing same |
EP4382661A1 (en) * | 2021-08-02 | 2024-06-12 | Spiber Inc. | Artificial leather and method for producing same |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0587205A1 (en) * | 1992-07-23 | 1994-03-16 | Duphar International Research B.V | Culture system for anchorage dependent cells |
JPH07274941A (ja) * | 1992-07-23 | 1995-10-24 | Duphar Internatl Res Bv | 基質依存性細胞のための培養システム |
US6197575B1 (en) * | 1998-03-18 | 2001-03-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Vascularized perfused microtissue/micro-organ arrays |
ATE275977T1 (de) | 1998-04-13 | 2004-10-15 | Massachusetts Inst Technology | Kamm-polymere zur regelung der zelloberflächenwechselwirkung |
EP1534818A4 (en) * | 2002-09-06 | 2006-09-06 | Johns Hopkins Singapore Pte Lt | PROCESS FOR IMMOBILIZING LIGANDS CLUSTERS ON A POLYMER SURFACE AND USE IN CELL CONSTRUCTION |
JP2009523864A (ja) * | 2006-01-12 | 2009-06-25 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 生分解性エラストマー |
-
2007
- 2007-05-24 EP EP07748692A patent/EP2027257A4/en not_active Withdrawn
- 2007-05-24 US US12/301,890 patent/US9670462B2/en active Active
- 2007-05-24 WO PCT/SG2007/000147 patent/WO2007136354A1/en active Application Filing
- 2007-05-24 JP JP2009511987A patent/JP5443162B2/ja active Active
- 2007-05-24 EP EP13186742.6A patent/EP2682456A3/en not_active Withdrawn
-
2013
- 2013-10-23 JP JP2013220601A patent/JP2014064572A/ja active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20110053783A1 (en) | 2011-03-03 |
EP2027257A4 (en) | 2010-10-20 |
EP2682456A2 (en) | 2014-01-08 |
EP2682456A3 (en) | 2014-03-05 |
EP2027257A1 (en) | 2009-02-25 |
JP2014064572A (ja) | 2014-04-17 |
JP2009538130A (ja) | 2009-11-05 |
US9670462B2 (en) | 2017-06-06 |
WO2007136354A1 (en) | 2007-11-29 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5443162B2 (ja) | 肝細胞ベースの応用のための生物活性表面 | |
Du et al. | 3D hepatocyte monolayer on hybrid RGD/galactose substratum | |
Du et al. | Synthetic sandwich culture of 3D hepatocyte monolayer | |
Seto et al. | Engineering of capillary-like structures in tissue constructs by electrochemical detachment of cells | |
Ahmed et al. | 3D liver membrane system by co-culturing human hepatocytes, sinusoidal endothelial and stellate cells | |
Annabi et al. | Hydrogel-coated microfluidic channels for cardiomyocyte culture | |
JP4111446B2 (ja) | 動物の培養細胞のスフェロイドを含む培養細胞構築物およびその使用 | |
Hatakeyama et al. | Patterned biofunctional designs of thermoresponsive surfaces for spatiotemporally controlled cell adhesion, growth, and thermally induced detachment | |
Linke et al. | Engineered liver-like tissue on a capillarized matrix for applied research | |
Kasuya et al. | Hepatic stellate cell-mediated three-dimensional hepatocyte and endothelial cell triculture model | |
Hirose et al. | Temperature-responsive surface for novel co-culture systems of hepatocytes with endothelial cells: 2-D patterned and double layered co-cultures | |
Tong et al. | Constrained spheroids for prolonged hepatocyte culture | |
JP6704604B2 (ja) | 肝代謝物の毛細胆管様構造への蓄積と排泄を促進する肝細胞培養装置、並びに該肝細胞培養装置を用いた胆汁中又は血液中排泄感受性の候補化合物及び該候補化合物の肝代謝物の評価方法 | |
Berger et al. | Matrix decoded–A pancreatic extracellular matrix with organ specific cues guiding human iPSC differentiation | |
Piscioneri et al. | Biodegradable and synthetic membranes for the expansion and functional differentiation of rat embryonic liver cells | |
CN108753687B (zh) | 微肝组织培养模型、其构建方法及其应用 | |
Lee et al. | One-step delivery of a functional multi-layered cell sheet using a thermally expandable hydrogel with controlled presentation of cell adhesive proteins | |
Yu et al. | Preparation of gelatin density gradient on poly (ε-caprolactone) membrane and its influence on adhesion and migration of endothelial cells | |
Hatakeyama et al. | Influence of insulin immobilization to thermoresponsive culture surfaces on cell proliferation and thermally induced cell detachment | |
Rogozhnikov et al. | Generation of a scaffold-free three-dimensional liver tissue via a rapid cell-to-cell click assembly process | |
Pereira-Rodrigues et al. | Modulation of hepatocarcinoma cell morphology and activity by parylene-C coating on PDMS | |
Iwasaki et al. | Selective biorecognition and preservation of cell function on carbohydrate-immobilized phosphorylcholine polymers | |
Akiyama et al. | Temperature-responsive polymers for cell culture and tissue engineering applications | |
Iwasaki et al. | Selective cell attachment to a biomimetic polymer surface through the recognition of cell-surface tags | |
Tan et al. | Adhesion contact dynamics of primary hepatocytes on poly (ethylene terephthalate) surface |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20100513 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120725 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20121009 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20130109 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20130117 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20130212 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20130625 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20131023 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20131031 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20131210 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20131219 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5443162 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |