JP5393625B2 - 鳥類卵の胚下腔内に器具を正確に位置決めするための方法および装置 - Google Patents
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Description
本出願は、2004年10月25日に提出された米国仮特許出願第60/621,96
4号の利益および前記特許出願に対する優先権を主張し、その開示はその全体に記載のよ
うに参照により本明細書に組み込まれるものである。
本発明は、一般に卵、およびより特別には、卵を処理するシステムおよび方法に関する
。
る。用語「処理するステップ」は、医薬品、栄養素、ホルモンおよび/またはその他の有
益な物質を用いて、胚が卵の中に存在する間に(すなわち、インオボ(in ovo:卵
内))で生きている卵を処理するステップを含んでいるが、それに限定されない。鳥類卵
内への様々な物質の卵内注射は、孵化後罹病率および致死率を減少させるため、潜在的成
長率もしくは結果として生じる鳥の最終的サイズを増加させるため、そして胚の性別確認
に影響を及ぼすためにさえ実施されてきた。生きている卵内へのワクチンの注射は、イン
オボで鳥を免疫するために効果的に使用されてきた。
外卵殻膜14、内卵殻膜16、および内卵殻膜と外卵殻膜14、16の間の卵10の鈍端
で気室18を含む。図示した卵10は、内側の薄い卵白24a、外側の厚い卵白24b、
および外側の薄い卵白24cによって取り囲まれた卵黄20および胚盤葉22をさらに含
む。胚盤葉22は、「胚下腔」26の頂上に座る、細胞数個分の奥行きがある細胞円板で
ある(図2)。胚盤葉円板22の辺縁は、卵黄20に付着している。
ることによって、細胞が鳥類卵の胚下腔内へ注射される。しかし、鳥類卵内の胚下腔が極
めて小さいために、胚下腔内への細胞の正確な送達は困難なことがある。さらに、オペレ
ータは、胚下腔内へ針を伸長させる深さをほとんど、または全く制御できない。さらに、
胚下腔のサイズおよび深さは、卵毎に変動する可能性がある。そこで、胚下腔内への細胞
の注射は、ニワトリが孵化してキメラ現象について試験できるまでは、卵の胚下腔内に細
胞が正確に挿入されているかどうかを知ることが不可能であるために、典型的には「ブラ
インド注射」と呼ばれている。したがって、当分野においては鳥類卵の胚下腔内へ器具を
確実かつ正確に位置決めする改良された方法の必要がある。
装置が提供される。本発明の実施形態によると、卵殻の一部分内に開口部が形成され、そ
の開口部に通して器具が伸長させられる。この器具は、圧力下で流体を含有するルーメン
を有する針を含む。流体圧が監視され、流体の圧力変化の検出に応答して、器具の移動が
停止させられる。または、流体流量が監視され、針からの流体流量を検出するステップに
応答して、器具の移動が停止させられる。
の実施形態によると、本器具は、卵の胚下腔内へ物質(例、細胞、ワクチン、核酸、タン
パク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモン剤、成長因子、サイトカインなど)を送達
するように構成されている物質送達器具であってよい。本発明の他の実施形態によると、
本器具は、卵から物質を除去するように構成されている物質除去器具であってよい。
をより詳細に記載する。しかし本発明は、多数の様々な形態で具体化することができ、本
明細書に記載した実施形態に限定されると見なすべきではなく、むしろこれらの実施形態
は、本開示が完全かつ完璧であり、当業者に本発明の範囲を詳細に伝えるように提供され
ている。
のためであり、本発明を限定することは意図されていない。本明細書で使用するように、
単数形「ある(a)」、「ある(an)」および「その(the)」は、文脈上明らかに
そうでないことを示さない限り、複数形を含むことが意図されている。さらに、用語「含
む」および/または「含んでいる」は、本明細書で使用する場合は、規定された機能、物
、ステップ、作動、要素、および/または構成成分の存在を規定するが、1つまたは複数
の他の機能、物、ステップ、作動、要素、構成成分、および/またはそれらの群の存在も
しくは付加を排除しないことは理解される。本明細書で使用する用語「および/または」
は、関連する列挙した項目の1つまたは複数の任意および全部の組み合わせを含む。本明
細書で使用する「X〜Yの間」および「約X〜Yの間」などの言い回しは、XおよびYを
含むと解釈されたい。本明細書で使用する「約X〜Yの間」などの言い回しは、「約X〜
約Yの間」を意味する。本明細書で使用する「約X〜Y」などの言い回しは、「約X〜約
Y」を意味する。
を含む)は、本発明が属する当業者によって一般に理解される意味と同一の意味を有する
。さらに、一般に使用される辞書に規定されている用語などの用語は、本明細書および関
連分野の状況におけるそれらの意味に一致する意味を有すると解釈すべきであり、本明細
書に明示的にそのように規定されていない限り理想的もしくは過度に形式的意味で解釈さ
れるべきではないと理解されたい。周知の機能もしくは構造は、簡潔さおよび/または明
確さのために詳述されないことがある。
されて」、「接触して」などと言及される場合は、1つの要素は他の要素の直接、上に、
取り付けられて、接続されて、結合されて、接触していてよい、または介在要素もまた存
在していてよいと理解される。これとは対照的に、1つの要素が、例えばまた別の要素の
「直接上に」、「直接取り付けられて」、「直接接続されて」、「直接結合されて」、ま
たは「直接接触して」いると言われる場合は、介在要素は存在しない。当業者には、他の
機能に「隣接して」配置されている構造もしくは機能についての言及は、隣接機能に重複
する、もしくはその下にある部分を有する可能性があることもまた理解される。
書では図面に例示した1つの要素もしくは機能のまた別の要素もしくは機能との関係を記
載するための説明を容易にするために使用することができる。空間的相対語は、使用もし
くは操作において、図面に描出した方向に加えて、器具の異なる方向を含むことが意図さ
れている。例えば、図面の中の器具が逆転すると、他の要素もしくは機能の「下方」もし
くは「下の」として記載された要素は、他の要素もしくは機能の「上方」に方向付けられ
る。そこで、典型的用語「下方」は、「上方」および「下方」の両方の方向を含むことが
できる。本器具は、別な方向(90度回転させて、または他の方向)に方向付けることが
でき、本明細書で使用した空間的相対記述子はそれに合わせて解釈できる。同様に、用語
「上向きに」、「下向きに」、「垂直」、「水平」などは、詳細に他のことを指示してい
ない限り、本明細書では説明することを目的に使用されている。
/または区域を記載するために使用できるが、これらの要素、構成成分、領域、層、およ
び/または区域はこれらの用語によって限定されるべきではない。これらの用語は、1つ
の要素、構成成分、領域、層もしくは区域を他の要素、構成成分、領域、層もしくは区域
から識別するためにのみ使用される。そこで、以下で考察する「第1」要素、構成成分、
領域、層、もしくは区域は、本発明の教示から逸脱せずに「第2」要素、構成成分、領域
、層、もしくは区域と呼ぶこともできよう。作動(もしくはステップ)の順序は、他に特
別に記載しない限り、特許請求の範囲もしくは図面に提示した順序に限定されない。
含むことが意図されているが、主として卵、肉のために、またはペットとして商業的に育
てられる家禽類を含むことが意図されている。したがって、用語「鳥類」および「鳥類対
象」は、ニワトリ、シチメンチョウ、アヒル、ガチョウ、ウズラ、キジ、インコ、オウム
、バタン、オカメインコ、ダチョウ、エミューなどを含むがそれらに限定されない様々な
鳥類を含むことが特に意図されている。
C)が移動するほぼ発達段階までの鳥類胚を指す。特にニワトリ胚に関して、「初期胚」
は一般に約胚形成期20(H&H)胚以前である。ニワトリ胚の発達段階は、当分野にお
いてよく理解されており、例えばThe Atlas of Chick Develo
pment,R.Bellairs & M.Osmond,eds.,Academi
c Press,1998を参照されたい。
に、胚盤葉は、産卵時から原腸胚形成終了時までの胚を含む。胚盤葉は、時々は当分野に
おけるまた別の名称である「胚盤」とも呼ばれる。胚盤葉は、初期胚における卵割中に形
成されて原腸胚形成終了時まで遺残する細胞の平らな細胞円板として説明されることがで
きる。産卵時までに、胚盤葉の2つの主要な領域(中心に位置する明域および周辺に位置
する暗域)を視認することができる(The Atlas of Chick Deve
lopment,R.Bellairs & M.Osmond,eds.,Acade
mic Press,1998)。特にニワトリ胚に関すると、胚盤葉は、典型的には産
卵時(すなわち第IX期もしくは第X期(EG&K)から約第XIII期 (EG&K)
)以降の胚であると特徴付けられている。
内へ送達もしくは放出する方法、物質(すなわち、サンプル)を卵もしくは胚内から取り
出す方法、および/または検出器具を卵もしくは胚内へ挿入する方法を含む、器具を卵も
しくは胚内へ挿入する方法を含む。
胚からの細胞を含有するレシピエント鳥もしくは胚を指す。用語「トランスジェニック鳥
」および「トランスジェニック胚」は、本明細書では当分野において一般に理解されてい
るそれらの意味によって使用される。トランスジェニック鳥もしくはトランスジェニック
胚は、1つまたは複数の細胞中に異種核酸配列を含有している。
、外卵殻膜、内卵殻膜、漿尿膜、VM膜、および羊膜(amnion)が含まれるが、そ
れらに限定されない。
可能であることが意図されている。
0とともに鳥類卵10が示されている。針30は、当業者には理解されるように、それを
通って卵の胚下腔26内に挿入させるべき流体が送達されるルーメンを含有している。圧
感知システム40(図3)は、針30の先端が卵黄膜25を通過して胚下腔26に進入し
た時点が正確に決定するために利用される。圧感知システム40は、針30内に保持され
た流体が針ルーメンの壁間で表面張力によってある程度まで保持されるという原理で作動
する。針先端が空気に取り囲まれたときに流体が針先端内のルーメン出口から流出するた
めには、当業者には理解されるように、ルーメンの他方の端(すなわち、ルーメン入口)
へ最小限の圧力が適用されなければならない。しかしルーメン出口が水などの液体で浸漬
させられていると、当業者には同様に理解されるように、表面張力は実質的に取り除かれ
、ルーメン内の流体は、ルーメン入口へ適用されるはるかに小さい圧力でルーメンから流
出する。
口で有意に大きな圧力が必要とされることを見いだした。特定の理論に固執することを望
む訳ではないが、本出願人らは、これは少なくとも一部には、卵内の他の流体と比較して
、卵白の高粘度に起因すると考えている。さらに本出願人らは、胚下腔内の胚下流体は、
ルーメン出口から流体の流出を引き起こすために空気の場合と比較してはるかに低い圧力
を必要とする水に類似する特徴を有すると考えている。針が胚下腔内に配置された時点と
比較して、針が卵白内に配置された時点で流体の流動を引き起こすために必要とされる圧
力の差は、圧センサを介して胚下腔内に針が配置された時点の正確な決定を可能にする。
時点を確実かつ正確に検出するように構成されている圧感知システム40が示されている
。図示したシステム40は、圧リザーバ42、ピンチバルブ44、圧トランスデューサ4
6、装填シリンジ48、およびリニアスライド50を含む。マイクロピペット30(上述
した針の機能を果たす)は、鳥類卵の胚下腔内へ物質(例えば細胞、ワクチン、核酸、タ
ンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモン剤、成長因子、サイトカインなど)を送
達するように構成されている。マイクロピペット30は流体を含有しており、圧リザーバ
42によって所定圧へ加圧される。この所定圧は、マイクロピペット先端が卵白内に位置
する場合はマイクロピペット30を通って流体は流出しないが、マイクロピペット先端が
胚下腔内へ通過するとマイクロピペット30を通って流体が流出する圧力である。圧トラ
ンスデューサ46は、マイクロピペット30の先端が胚下腔内へ移動する(これは流体が
マイクロピペット30から流出することを引き起こす)につれてマイクロピペット30内
の流体における圧の変化を検出する。
から液体出口まで導くチューブを有する圧縮空気もしくは他のガスの供給源であってよい
。図示した実施形態では、三方バルブ47がピンチバルブ44と装填シリンジ48との間
に配置されている。ピンチバルブ44は、圧リザーバ42を介してのマイクロピペット3
0の加圧を促進する。三方バルブ47は、マイクロピペット30が加圧されているときは
装填シリンジ48を隔離し、流体が装填シリンジ48を介してマイクロピペット30内へ
装填されるときは圧リザーバ42を隔離する。三方バルブ49は、装填シリンジ48を介
して流体がマイクロピペット30内へ装填される場合に圧トランスデューサ46を隔離す
る。
ド50は、マイクロピペット30の移動を正確に制御する。圧トランスデューサ46は、
マイクロピペットルーメン内の流体の圧変化を検出するように構成されている。
ューサからの信号は、マイクロピペット30の移動を制御するために利用できる。流動セ
ンサが利用される他の実施形態によると、流動センサからの信号を利用すると、マイクロ
ピペット30の移動を制御できる。
下腔へ細胞およびその他の物質を送達する従来方法よりも確実な方法を提供できる。さら
に、本発明の実施形態による圧感知システムを利用する方法は、胚下腔内への細胞送達が
発生した時点を決定するためのフィードバックを提供する。注射針の深さを精密に制御す
るためのリニアスライド50の使用もまた有益である。リニアスライドは、針の制御され
た移動を提供する。注射が手で実施される場合は、卵黄膜および/または他の内卵殻膜を
裂いてしまう手の側方運動が存在するかどうか、または胚下腔の下方もしくは上方の領域
に針を過度に深く配置する過剰な垂直運動が存在するかどうかを確認しようがない。さら
に、圧低下は送達される容量と線形相関を示す可能性があり、それにより正確な容量(例
、0.1μL以内)を送達するための極めて正確な方法を提供する。
質を送達する方法を例示しているフローチャートである。ブロック内に記載した機能は図
4に記載した順序から外れて生じる可能性があることを留意されたい。順に示した2つ(
以上)のブロックは、実際には実質的に同時に実行されてよく、または含まれる機能性に
依存して、ブロックはときには逆の順序で実行されてもよい。
られているパンチまたは他の器具による方法を含む様々な方法で形成できる。さらに、開
口部は任意の適切な場所に、例えば赤道軸近くの卵の側面や、卵の一方の端などに形成す
ることができる。本発明の1つの実施形態では、卵殻の開口部が、一般に水平に位置決め
された卵の殻の上方に面する部分に導入される。しかし、本発明の実施形態は、卵の任意
の特定方向には限定されない。
の表面は、細菌(もしくは他の)汚染を減少させるために(例えば、アルコールもしくは
他の消毒液を用いて)消毒されてもよい。しかし、開口部の部位を含む卵を消毒するステ
ップは、本発明の実施形態に関しては必要とされない。
ック105)。針ルーメン内の流体は、ピンチバルブ44を開くことによって(例えば、
約5〜20インチの水で)加圧され(ブロック110)、図3を参照しながら上述したよ
うに、圧感知システムによって圧力が監視される。次にピンチバルブ44は閉鎖され(ブ
ロック115)、針は卵白内へ挿入され、押し進められる(ブロック120)。ルーメン
内の圧低下が検出されると、針の移動が停止させられ、針のルーメン出口は卵の胚下腔内
に位置決めされる(ブロック125)。流体物質は、圧低下のために胚下腔内へ流入する
(ブロック130)。ルーメンから流出する流体は、卵内へ送達しなければならない物質
であってよい(例えば細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、
ホルモン、成長因子、サイトカインなどを含む流体)。または、卵内に送達しなければな
らない物質は、圧低下のために流動する初期流体に従ってもよい。
(ブロック135)、器具は卵から抜去される(ブロック140)。卵殻の開口部は、シ
ーラントを用いてシールすることができ(ブロック145)、卵は孵化するまで孵卵する
ことができる(ブロック150)。
サを使用できる。そのような実施形態では、流量センサは、流路外でマニホールドにより
連結されている圧センサとは対照的に、直列で(流路内に)配置できる。これによって、
上述した圧感知システムと比較して、流路および流量の両方の削減を見込むことができる
。このシステムは、液体またはガス流量センサを利用できる。ガス流量センサが使用され
た場合は、ガス圧がマイクロピペットまたは針の前ではなく流量センサの後の流路に直接
的に適用されるから、圧リザーバが排除される。このため、ガス/流体界面は、圧リザー
バの内側ではなく、チューブの内側になる。
へ物質(例えば細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモ
ン、成長因子、サイトカインなど)を送達する方法を例示しているフローチャートである
。ブロック内に記載した機能は図5に記載した順序から外れて生じる可能性があることを
留意されたい。順に示した2つ(以上)のブロックは、実際には実質的に同時に実行され
てよい、または含まれる機能性に依存して、ブロックはときには逆の順序で実行されても
よい。
られているパンチまたは他の器具による方法を含む様々な方法で形成できる。さらに、開
口部は任意の適切な場所に、例えば赤道軸近くの卵の側面や、卵の一方の端などに形成す
ることができる。本発明の特定の好ましい実施形態では、卵殻の開口部が、一般に水平に
位置決めされた卵の殻の上方に面する部分に導入される。しかし、本発明の実施形態は、
卵の任意の特定方向には限定されない。
の表面は、細菌(もしくは他の)汚染を減少させるために(例えば、アルコールもしくは
他の消毒液を用いて)消毒されてもよい。しかし、開口部の部位を含む卵を消毒するステ
ップは、本発明の実施形態に関しては必要とされない。
ック205)。針ルーメン内の流体は、(例えば、約5〜20インチの水に)加圧され、
針は卵白内およびそれに通して移動させられる(ブロック210)。ルーメンを通る流体
流動が検出されると、針の移動が停止させられ、針は卵の胚下腔内に正しく位置決めされ
る(ブロック215)。流体物質(例えば細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド
、ウイルス、抗原、ホルモン、成長因子、サイトカインなどを含む流体)は、胚下腔内へ
流動させられる(ブロック220)。ルーメンから胚下腔内への所定流量が流量センサお
よび分注時間から平均流速に基づいて見積もられると(ブロック225)、流体の送達が
停止させられ、器具は卵から抜去される(ブロック230)。流量センサ信号は、送達さ
れる流体の容量を入手するために統合される。卵殻の開口部は、シーラントを用いてシー
ルすることができ(ブロック235)、卵は孵化するまで孵卵することができる(ブロッ
ク240)。
ると、または針が胚下腔内に入ると、圧リザーバ(42、図3)へ加圧することによって
増加させることができる。
時点を確実かつ正確に検出するように構成されている流動感知システム300が示されて
いる。図示したシステム300は、加圧源、質量流量計304、三方弁47、およびマイ
クロピペット30(上述した針の機能を果たす)からの圧縮ガス(例、空気)の流量を調
節する圧調節器302を含む。マイクロピペット30は、鳥類卵の胚下腔内へ物質(例え
ば細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモン剤、成長因
子、サイトカインなど)を送達するように構成されている。卵内に送達すべき物質を含有
するマイクロピペット30は、圧縮ガス源からの圧縮ガスによって所定圧に加圧される。
この所定圧は、マイクロピペット先端が卵白内に位置する場合はマイクロピペット30を
通って流体は流出しないが、マイクロピペット先端が胚下腔内へ通過するとマイクロピペ
ット30を通って流体が流出する圧力である。質量流量計(例、ガス質量流量計)304
は、マイクロピペット30の先端が胚下腔内へ移動する(これは流体がマイクロピペット
30から流出することを引き起こす)につれてマイクロピペット30を通る流体流量を検
出する。図示していないが、流量感知システム300は、マイクロピペット30の移動を
正確に制御するためにリニアスライドをさらに利用できる。
7が配置されている。流体供給源は、マイクロピペット30へ流体もしくは他の物質を供
給するように構成されているポンプもしくは他の器具であってよい。三方弁47は、流体
がマイクロピペット30内に装填される場合に圧縮空気供給源を隔離し、マイクロピペッ
ト30が加圧される場合には流体供給源を隔離する。
流量計304からの信号は、マイクロピペット30の移動を制御するために利用できる。
を理解するであろう。さらに、本明細書に記載した方法は、完全手動、完全自動化、また
は半自動化であってよい。
の典型的実施形態が記載されているが、当業者であれば、本発明の新規の教示および長所
から実質的に逸脱せずに典型的実施形態において多数の修飾が可能であることを容易に理
解するであろう。
40 圧感知システム
42 圧リザーバ
44 ピンチバルブ
46 圧トランスデューサ
47 三方バルブ
48 装填シリンジ
49 三方バルブ
50 リニアスライド
Claims (28)
- 卵内に器具を位置決めする方法であって、
開口部を卵の殻の一部分内へ形成するステップと、
開口部を通して卵内に器具を伸長させるステップであって、器具が加圧下で流体を含有するルーメンを有する針を含み、該ルーメンは、所定圧に加圧され、該所定圧は、ルーメン先端が卵白内に位置する場合は、ルーメンを通って流体は流出しないが、ルーメン先端が胚下腔内へ通過するとルーメンを通って流体が流出する圧力としたステップと、
ルーメン内の流体の圧力における変化を検出するステップと、
ルーメン内の流体の圧力における変化を検出するステップに応答して前記器具の移動を停止させるステップと
を含む方法。 - 前記器具が物質送達器具を含み、器具の移動を停止させるステップに応答して物質送達器具を介して卵内に物質を注射するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 前記物質が、細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモン、成長因子、およびサイトカインからなる群から選択される、請求項2に記載の方法。
- 前記器具が物質除去器具を含み、器具の移動を停止させるステップに応答して物質除去器具を介して卵から物質を除去するステップをさらに含む、請求項1に記載の方法。
- 卵から器具を除去するステップと、
卵殻の開口部をシールするステップと
をさらに含む、請求項1に記載の方法。 - 卵を孵化するまで孵卵するステップをさらに含む、請求項3に記載の方法。
- 前記除去するステップが、ルーメン内の流体の圧力が所定レベルへ低下したことを検出するステップに応答して実施される、請求項5に記載の方法。
- 鳥類卵の胚下腔内に物質送達器具を位置決めする方法であって、
開口部を卵の殻の一部分内へ形成するステップと、
開口部を通して卵内の卵白内に物質送達器具を伸長させるステップであって、物質送達器具が圧力下で流体を含有するルーメンを有する針を含み、ルーメンが出口を含むステップであって、該ルーメンは、所定圧に加圧され、該所定圧は、ルーメン先端が卵白内に位置する場合は、ルーメンを通って流体は流出しないが、ルーメン先端が胚下腔内へ通過するとルーメンを通って流体が流出する圧力としたステップと、
ルーメン内で流体の圧力における変化を検出するステップと、
ルーメン内の流体の圧力における変化を検出するステップに応答してルーメン出口が前記胚下腔内に配置されるように、卵白内を進む物質送達器具の移動を停止させるステップと
を含む方法。 - 前記器具の移動を停止させるステップに応答して物質送達器具を介して前記胚下腔内へ物質を注射するステップをさらに含む、請求項8に記載の方法。
- 前記物質が、細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモン、成長因子、およびサイトカインからなる群から選択される、請求項9に記載の方法。
- 卵から物質送達器具を除去するステップと、
卵殻の前記開口部をシールするステップと
をさらに含む、請求項8に記載の方法。 - 卵を孵化するまで孵卵するステップをさらに含む、請求項11に記載の方法。
- 前記除去するステップが、ルーメン内の流体の圧力が所定レベルへ低下したことを検出するステップに応答して実施される、請求項11に記載の方法。
- 卵内に器具を位置決めする方法であって、
開口部を卵の殻の一部分内へ形成するステップと、
開口部を通して卵内に器具を伸長させるステップであって、器具が圧力下で流体を含有するルーメンを有する針を含み、ルーメンが出口を含むステップであって、該ルーメンは、所定圧に加圧され、該所定圧は、ルーメン先端が卵白内に位置する場合は、ルーメンを通って流体は流出しないが、ルーメン先端が胚下腔内へ通過するとルーメンを通って流体が流出する圧力としたステップと、
ルーメン出口を通る流体の流量を検出するステップと、
流体流量を検出するステップに応答して器具の移動を停止させるステップと
を含む方法。 - 前記器具が物質送達器具を含み、器具の移動を停止させるステップに応答して物質送達器具を介して卵内に物質を注射するステップをさらに含む、請求項14に記載の方法。
- 前記物質が、細胞、ワクチン、核酸、タンパク質、ペプチド、ウイルス、抗原、ホルモン、成長因子、およびサイトカインからなる群から選択される、請求項15に記載の方法。
- 前記器具が物質除去器具を含み、器具の移動を停止させるステップに応答して物質除去器具を介して卵から物質を除去するステップをさらに含む、請求項14に記載の方法。
- 卵から器具を除去するステップと、
卵殻の開口部をシールするステップと
をさらに含む、請求項14に記載の方法。 - 卵を孵化するまで孵卵するステップをさらに含む、請求項18に記載の方法。
- 卵殻の開口部を介して取り外し可能なように卵内に挿入されるように構成された装置であって、
伸長可能かつ抜去可能な針であり、圧力下で流体を含有するルーメンを含む針であって、該ルーメンは、所定圧に加圧され、該所定圧は、ルーメン先端が卵白内に位置する場合は、ルーメンを通って流体は流出しないが、ルーメン先端が胚下腔内へ通過するとルーメンを通って流体が流出する圧力とした針と、
前記針が卵内の物質を通って移動するにつれてルーメン内の流体の圧力における変化を検出するように構成されている圧トランスデューサであって、流体の圧力変化を検出する圧トランスデューサに応答して針の移動が停止される、圧トランスデューサと
を含む装置。 - 前記針が物質送達器具を含む、請求項20に記載の装置。
- 前記針が物質除去器具を含む、請求項20に記載の装置。
- 卵殻に開口部を形成するように構成されたパンチをさらに含む、請求項20に記載の装置。
- 卵殻に開口部を介して取り外し可能なように卵内に挿入されるように構成された装置であって、
伸長可能かつ抜去可能な針であって、圧力下で流体を含有するルーメンを含む針であって、該ルーメンは、所定圧に加圧され、該所定圧は、ルーメン先端が卵白内に位置する場合は、ルーメンを通って流体は流出しないが、ルーメン先端が胚下腔内へ通過するとルーメンを通って流体が流出する圧力とした針と、
前記針が卵内の物質を通って移動するにつれてルーメンを通る流体の流量を検出するように構成されている流量センサであって、流体流量を検出する流量センサに応答して針の移動が停止される、流量センサと
を含む装置。 - 前記針が物質送達器具を含む、請求項24に記載の装置。
- 前記針が物質除去器具を含む、請求項24に記載の装置。
- 卵殻に開口部を形成するように構成されたパンチをさらに含む、請求項24に記載の装
置。 - 前記流量センサがガス質量流量センサを含む、請求項24に記載の装置。
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