JP5376802B2 - タンパク質多型と冠動脈心疾患との関係 - Google Patents
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Description
1)対象のタンパク質領域の配列解析に基づく方法(例えば、標準的なタンパク質分解、マススペクトロメトリーを用いたタンパク質配列フラグメントの解析);
2)対象の領域に対する抗Kir6.2抗体の使用に基づく方法(例えばELISA);
3)例えばヒト、動物、細菌または酵母細胞を用いたインビトロ分析でのKir6.2の機能的な活性の解析に基づく方法。
1)対象のヌクレオチド領域の配列解析に基づく方法(例えば、パイロシーケンシング、放射標識したヌクレオチド、または、蛍光性色素で標識したヌクレオチドを用いた配列解析方法、マススペクトロメトリーを用いた配列フラグメントの解析);
2)対象の領域へのヌクレオチド配列のハイブリダイゼーションに基づく方法(例えば、DNAマイクロアレイ);
3)対象のヌクレオチド領域の増幅産物の解析に基づく方法(例えば、TaqManTM解析)。
a)Kir6.2タンパク質中の23位においてグルタミン酸以外のアミノ酸、および/または、337位においてバリン以外のアミノ酸、
b)Kir6.2タンパク質中の23位においてグルタミン酸以外のアミノ酸および/または337位においてバリン以外のアミノ酸が生じるような、Kir6.2遺伝子の対立遺伝子の一方または両方におけるヌクレオチド配列中の差異、または、
c)Kir6.2−23−KK、および/または、Kir6.2−337−II、
を有するKir6.2の存在が、個体のサンプル中で決定される。
a)Kir6.2タンパク質中の23位においてグルタミン酸以外のアミノ酸、および/または、337位においてバリン以外のアミノ酸、
b)Kir6.2タンパク質中の23位においてグルタミン酸以外のアミノ酸および/または337位においてバリン以外のアミノ酸が生じるような、Kir6.2遺伝子の対立遺伝子の一方または両方におけるヌクレオチド配列中の差異、または、
c)Kir6.2−23−KK、および/または、Kir6.2−337−II、
を有するKir6.2の存在が、個体のサンプル中で決定される。
a.Kir6.2を含む2種のサンプルを提供すること、
b.1つのサンプルと、可能性のある医薬とを接触させること、
c.可能性のある医薬の存在下および非存在下で、Kir6.2の活性またはKir6.2の構造を決定すること、
d.可能性のある医薬の存在下でのKir6.2の活性と、可能性のある医薬の非存在下での活性とを比較すること。
a)Kir6.2タンパク質中の23位にグルタミン酸以外のアミノ酸、および/または、337位にバリン以外のアミノ酸を含む、Kir6.2タンパク質、またはそれらのフラグメント、
b)Kir6.2タンパク質中の23位においてグルタミン酸以外のアミノ酸および/または337位においてバリン以外のアミノ酸が生じるような、Kir6.2遺伝子の対立遺伝子の一方または両方におけるヌクレオチド配列中の差異を含むKir6.2核酸、またはそれらのフラグメント、または、
c)Kir6.2−23−KK、および/または、Kir6.2−337−II。
e.個体からゲノムDNAを含む生体サンプルを製造すること。
f.標的配列が、その場での方法、例えば上記のサンプル(例えば、組織サンプルまたは細胞)を直接用いたインサイチュPCR、または、直接のゲノム配列解析で直接解析することができない場合、a)に記載のサンプルからのゲノムDNAは、単離するか、または、少なくとも部分的に精製する必要がある。
g.コード配列の67/68/69位および/または1009/1010/1011位に相当する、ゲノムのKir6.2配列のヌクレオチド位置を含むポリヌクレオチドフラグメントを増幅することができるプライマーを用いたPCR反応によって、ポリヌクレオチドフラグメントを増幅すること。
h.c)に記載のポリヌクレオチドフラグメントを配列解析すること。
a.染色体/ゲノムDNAを含む生体サンプルを製造すること。
b.a)に記載のサンプルから染色体DNAを単離すること。
c.それをキャリアーに固定すること。
d.ストリンジェントな条件下で、前記アミノ酸置換の一方または両方が生じるような1個またはそれ以上のヌクレオチド置換を包含するKir6.2配列に、野生型Kir6.2配列より高い親和性で結合することができる1またはそれ以上のプローブを、固定されたDNAにハイブリダイゼーションすること。
1)標識されたプローブを解析する予定の核酸サンプルと、65℃でハイブリダイゼーションすること、または、オリゴヌクレオチドプローブの場合、オリゴヌクレオチドとサンプルとからなる二重鎖のアニーリングまたは融解温度より5℃低い温度で(アニーリングおよび融解温度は、以下で同義的に理解される)、50mMのトリス(pH7.5)、1MのNaCl、1%SDS、10%硫酸デキストラン、0.5mg/ml変性サケまたはニシン精液DNA中で、一晩ハイブリダイゼーションする。
3)65℃(または、オリゴヌクレオチドの場合:アニーリング温度より5℃低い温度で)で30分間、1×SSC/0.1%SDS中で洗浄する。
4)65℃(または、オリゴヌクレオチドの場合:アニーリング温度より5℃低い温度で)で30分間、0.1×SSC/0.1%SDS中で洗浄する。
a.個体由来のRNAを含む生体サンプルを提供すること。
b.RNAを直接解析する必要がない場合(例えば、その場でのPCRによって)、a)に記載のサンプルからRNAを単離するか、または、少なくとも部分的に精製すること。
c.Kir6.2のcDNA配列の67位および/または1009位を含むポリヌクレオチドフラグメントを増幅することができるプライマーを用いたRT−PCR反応によってポリヌクレオチドフラグメントを増幅すること。
d.c)に記載のポリヌクレオチドフラグメントを配列解析すること。
a.個体由来のRNAを含む生体サンプルを提供すること。
b.a)に記載のサンプルからRNAを単離すること。
c.該RNAをキャリアーに固定すること。
d.ストリンジェントな条件下で、23位にグルタミン酸および/または337位にバリンを包含するKir6.2ポリペプチドをコードするKir6.2のRNAより高い親和性で、23位にグルタミン酸以外のアミノ酸および/または337位にバリン以外のアミノ酸を包含するKir6.2ポリペプチドをコードするKir6.2のRNAに結合することができる1種またはそれ以上のプローブに、固定されたRNAをハイブリダイゼーションすること。
a.個体由来のタンパク質を含む生体サンプルを提供すること。
b.該タンパク質をa)に記載のサンプルから単離すること。
c.それをキャリアーに固定すること。
d.そのポリペプチド鎖の337位にグルタミン酸および/または337位にバリンを包含するKir6.2より高い親和性で、そのポリペプチド鎖の23位にグルタミン酸以外のアミノ酸および/または337位にバリン以外のアミノ酸を包含するKir6.2に結合することができる抗体との結合反応を行うこと(野生型タンパク質に結合することができない条件下、または、かなり低い親和性の条件下で);
e.該タンパク質への該抗体の結合を可視化すること;(例えば、標識された一次抗体、または、標識された二次抗体などによって)。
a.個体由来の組織サンプルを提供すること。
b.そのポリペプチド鎖の337位にグルタミン酸および/または337位にバリンを包含するKir6.2より高い親和性で、そのポリペプチド鎖の23位にグルタミン酸以外のアミノ酸および/または337位にバリン以外のアミノ酸を包含するKir6.2に結合することができる抗体との結合反応を行うこと(野生型Kir6.2タンパク質に結合することができない条件下、または、かなり低い親和性の条件下で)。
c.該タンパク質への該抗体の結合を可視化すること;(例えば、標識された第一または二次抗体によって)。
335人の患者のゲノムDNAを、タンパク質変異体Kir6.2−E23K、および、Kir6.2−V337Iが生じるような、Kir6.2遺伝子中のSNP(単一ヌクレオチド多型)に関してスクリーニングした。試験対象患者基準は、以下の通り:ドイツ人家系の白色人種の個体、臨床症状、および、冠動脈造影図が安定していること。除外基準は、以下の通り:ACS、慢性の非心臓性の病気(すなわちリウマチ性関節炎)以外の急性疾患、および、過去5年以内の悪性疾患の病歴を有すること。表2に、この患者の同齢集団の基本的な特徴を概説した。全ての患者は、書面によるインフォームド・コンセントに署名した。
2.1:対象の多型を有するゲノム領域の増幅
増幅用プライマー:
A:Kir6.2遺伝子配列の5657978/79/80位におけるヌクレオチド置換を検出するためのプライマー(登録番号NT_009307)。
フォワードプライマーM67:5'-AGGTGGAGGTAAGGAAGAG-3'(配列番号9)
リバースプライマーM67:5'-GGTGAAGATGAGCAATGTG-3'(配列番号10)。
フォワードプライマーM1009:5'-GGGTGGCAACAGCATCTTC-3'(配列番号11)
リバースプライマーM1009:5'-TGGCTCAGGACAGGGAATC-3'(配列番号12)。
全ての試薬は、アプライド・バイオシステムズ(Applied Biosystems,フォスターシティー,米国)から得た:ゲノムDNA(20ng);TaqGoldポリメラーゼ(1単位);1×Taqポリメラーゼ緩衝液;500μMのdNTP;2.5mMのMgCl2;200nMの各増幅用プライマー対(配列は、上記の増幅用プライマー対1.Aおよび1.Bを参照);H2Oを加えて5μlにした。
95℃×10分×1サイクル
95℃×30秒
70℃×30秒×2サイクル;
95℃×30秒
65℃×30秒×2サイクル;
95℃×30秒
60℃×30秒×2サイクル;
95℃×30秒
56℃×30秒
72℃×30秒×40サイクル;
72℃×10分
4℃×30秒×1サイクル。
ミニシーケンスのプロトコール、および、多型の検出:
全ての試薬は、アプライド・バイオシステムズ(フォスターシティー,米国)から得た。精製したPCR産物2μl;ビッグダイ(BigDye)ターミネーターキット(1.5μl);200nMの1種の配列解析用プライマー(配列は、上記の増幅用フォワードまたはリバースプライマー1.Aおよび1.Bを参照);H2Oを加えて10μlにした。
96℃×2分×1サイクル;
96℃×10秒
55℃×10秒
65℃×4分×30サイクル;
72℃×7分
4℃×30秒×1サイクル;
まず、生データ抽出のための配列解析ソフトウェア(アプライド・バイオシステムズ,フォスターシティー,米国)で配列を解析し、Phred(ベースコーラー)、Phrap(アセンブラー)、Polyphred(SNPコーラー)、および、Consed(リザルトビューワー)を用いて加工した。Phred、Phrap、PolyphredおよびConsedは、Phil Green氏によってWashU(http://www.genome.washington.edu)で設計されたソフトウェアである。
心臓血管疾患や代謝性疾患に罹った患者における臨床転帰へのKir6.2多型の影響を解析するために、本発明者等は、1型または2型糖尿病に罹った335人の個体からなる患者の同齢集団における、Kir6.2多型のE23K、L270VおよびI337Vの相関分析を行った。350種を超える臨床パラメーターのなかから、狭心症と、Kir6.2タンパク質の23位のリシン(K)および/または337位のバリン(V)に関してホモ接合型の患者とが、有意な相関を有していた。
SAS統計パッケージ(バージョン6.12,SASインスティテュート社(SAS Institute GmbH),ハイデルベルグ/ドイツ)を用いて全ての解析を行った。遺伝子の多型と、多数の臨床的な関連パラメーターとの関連を検出するために、記述統計をコンピューターで計算し(中央値、四分位数)、ウィルコクソンの順位和検定を行った。ウィルコクソンの順位和検定は、2つの独立したサンプルを比較するために用いられた。上記検定の統計の計算結果は、プールされたサンプル中の順位に基づく。
表2に、335人の個体におけるKir6.2変異体E23KとV337Iとの分布を示す。表3〜8で概説したように、Kir6.2−23−KKとKir6.2−337−II、Kir6.2−23−EKとKir6.2−337−VI、および、Kir6.2−23−EEとKir6.2−337−VVの強い関連が観察された。従って、例えば、Kir6.2−23−KKに関して得られた全ての統計的分析データは、Kir6.2−337−IIに関するデータに類似しているはずである。
Yamada Y,Kuroe A,Li Q,Someya Y,Kubota A,Ihara Y,Tsuura Y,Seino Y(2001).
Genomic variation in pancreatic ion channel genes in Japanese type 2 diabetic patients.
Diabetes Metab Res Rev 17:213−216.
Hani EH,Boutin P,Durand E,Inoue H,Permutt MA,Velho G,Froguel P(1998).
Missense mutations in the pancreatic islet beta cell inwardly rectifying K+ channel gene(KIR6.2/BIR):a meta−analysis suggests a role in the polygenic basis of Type II diabetes mellitus in Caucasians.
Diabetologia 41:1511−1515.
特に他の指定がない限り、以下の標準的な文献に従って標準的な実験方法を行った:
Sambrook等(1989)Molecular Cloning:A Laboratory Manual.Second edition.Cold Spring
Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,NY.545 pp;
Current Protocols in Molecular Biology;regularly updated,e.g.Volume 2000;Wiley & Sons,Inc;Editors:Fred M.Ausubel,Roger Brent,Robert Eg.Kingston,David D.Moore,J.G.Seidman,John A.Smith,Kevin Struhl.
Current Protocols in Human Genetics;regularly uptdated;Wiley & Sons,Inc;Editors:Nicholas C.Dracopoli,Honathan L.Haines,Bruce R.Korf,Cynthia C.Morton,Christine E.Seidman,J.G.Seigman,Douglas R.Smith.
Current Protocols in Protein Science;regularly updated;Wiley & Sons,Inc;Editors:John E.Coligan,Ben M.Dunn,Hidde L.Ploegh,David W.Speicher,Paul T.Wingfield.Molecular Biology of the Cell;third edition;Alberts,B.,Bray,D.,Lewis,J.,Raff,M.,Roberts,K.,Watson,J.D.;Garland Publishing,Inc.New York & London,1994;
Short Protocols in Molecular Biology,5th edition,by Frederick M.Ansubel(Editor),Roger Brent(Editor),Robert E.Kingston(Editor),David D.Moore(Editor),J.G.Seidman(Editor),John A.Smith(Editor),Kevin Struhl(Editor),October 2002,John Wiley & Sons,Inc.,New York“
図1:
ポリペプチド鎖の23位(グルタミン酸)と337位(バリン)(コード配列の67/68/69位におけるコドンGAG、および、1009/1010/1011位におけるGTCに相当する)において最も頻度が高い変異体を包含するKir6.2(KCNJ11)のタンパク質配列とヌクレオチドのコード配列である。これらの変異体は、Kir6.2−23K−337V(または、両方の対立遺伝子が、23位および/または337位に関して同様である場合、KKおよび/またはVV)と称される。このKir6.2変異体のタンパク質の登録番号(NCBIタンパク質データベース)は、D50582である。ポリペプチド配列の23位および337位、および、それに相当するヌクレオチド位置、同様に、コード配列中のATGは、下線で示す。
23位におけるリシンの変異、および、最も頻度が高い337位におけるバリンの変異(コード配列の67/68/69位におけるコドンAAG、および、1009/1010/1011位におけるGTCに相当する)を包含するKir6.2(KCNJ11)のタンパク質配列とヌクレオチドのコード配列である。このKir6.2変異体のタンパク質配列の登録番号(NCBIタンパク質データベース)は、XP_006398である(図2A;配列番号2)。
ヌクレオチド配列(NCBIヌクレオチドデータベース)に関する登録番号は、XM_006398である(図2B;配列番号4)。コード配列中のポリペプチド配列の23位および337位、および、それに相当するヌクレオチド位置は、下線で示す。
最も頻度が高い23位におけるグルタミン酸の変異、および、337位におけるイソロイシンの変異(コード配列の67/68/69位におけるコドンGAG、および、1009/1010/1011位におけるATCに相当する)を包含するKir6.2(KCNJ11)のタンパク質配列とヌクレオチドのコード配列である。このタンパク質配列は、配列の登録番号D50582に記載された「野生型」Kir6.2の配列に相当する(ただし、337位において、バリンの代わりにイソロイシンを有することを除く)。このコード配列は、配列の登録番号D50582に記載された「野生型」Kir6.2の配列に相当する(ただし、1009位において、グアノシンの代わりにアデノシンを有することを除く)。コード配列中のポリペプチド配列の23位および337位、および、それに相当するヌクレオチド位置は、下線で示す。
23位におけるリシンの変異、および、337位におけるイソロイシンの変異(コード配列の67/68/69位におけるコドンAAG、および、1009/1010/1011位におけるATCに相当する)を包含するKir6.2(KCNJ11)のタンパク質配列とヌクレオチドのコード配列である。このタンパク質配列は、配列の登録番号D50582に記載された「野生型」Kir6.2の配列に相当する(ただし、23位において、グルタミン酸の代わりにリシンを有し、337位において、バリンの代わりにイソロイシンを有することを除く)。このコード配列は、配列の登録番号D50582に記載された「野生型」Kir6.2の配列に相当する(ただし、67位において、グアノシンの代わりにアデノシンを有し、1009位において、グアノシンの代わりにアデノシンを有することを除く)。コード配列中のポリペプチド配列の23位および337位、および、それに相当するヌクレオチド位置は、下線で示す。
Kir6.2のコード配列の67/68/69位に相当するKir6.2のゲノム配列の位置におけるヌクレオチド置換を検出するための、DNAプライマーM67フォワード(配列番号9)、および、リバース(配列番号10)であり、配列の登録番号に記載のKir6.2のコード配列の1009/1010/1011位に相当するKir6.2のゲノム配列の位置におけるヌクレオチド置換を検出するための、DNAプライマーM1009フォワード(配列番号11)、および、リバース(配列番号12)である。配列番号25に関して、上記位置は、それぞれ5657106/107/108、および、5657978/79/80である。
いくつかのKir6.2変異体のゲノムおよびコード配列の、それに相当するヌクレオチド位置の大要である。ゲノム配列中の位置の番号付けは、ヒト第11染色体のゲノムコンティグ(NCBI登録番号NT_009307)から得られたものである(また、図10の、Kir6.2のゲノムの遺伝子座を含むコンティグの一部を参照)。
ポリペプチド鎖の23位においてグルタミン酸からリシンへのアミノ酸置換、および、337位においてバリンからイソロイシンへのアミノ酸置換が生じるような、Kir6.2ヌクレオチド配列の差異である。ヌクレオチド位置は、Kir6.2のコード配列を参照している。これらの位置は、配列番号25に記載のゲノムのKir6.2配列の5657106/7/8位、および、5657978/79/80位と相関がある(ここで、配列番号25は、タンパク質配列の337位においてバリンをコードする)。最も高い頻度で発生する変異体(すなわち野生型)は、通常の文字で記載され、ヌクレオチドまたはアミノ酸配列中で、この野生型からの変化は、太字で示される。23位のアミノ酸に関して、単一のヌクレオチド置換G67Aにより、ポリペプチド鎖にリシンが包含されるようになるが、それに対して、置換G69Aは、単独では、アミノ酸配列の変化を起こさない。このタイプの突然変異は、一般的に、サイレント突然変異と称される。一方で、上記のヌクレオチド置換の両方が一緒に起こると、同様に23位にリシンが包含される。アミノ酸鎖の337位に関して、単一のヌクレオチド置換C1011T、C1011A、および、C1011Gはサイレントだが、それに対して、単一のヌクレオチド置換G1009Aにより、このG1009A置換と共に置換C1011TまたはC1011Aが起こったとしても、ポリペプチド鎖の337位にイソロイシンの取り込みが起こる。67/68/69位および/または1009/1010/1011位において、その他の置換が生じる可能性があり、それにより、ポリペプチド鎖に、それぞれ23位にGまたはK以外の、または、337位にVまたはI以外のアミノ酸の取り込みが生じる(これらの遺伝子コードから生じる相関は、一般的に当業界の最先端において既知である)。
5657106/107/108位におけるヌクレオチドGACを包含する(コード配列の1009/1010/1011位におけるコドンGTCに相当する、従って、ポリペプチド配列の337位のアミノ酸にバリンを包含するタンパク質変異体をコードする)、および、5657978/79/80位におけるヌクレオチドCTTを包含する(コード配列の67/68/69位におけるコドンAAGに相当する、従って、ペプチド配列の23位のアミノ酸にリシンを包含するタンパク質変異体をコードする)Kir6.2(KCNJ11)遺伝子座のゲノム配列である。示されたヌクレオチドのトリプレットは、太字で記載され、下線で示される。配列番号9〜12に記載のPCRプライマーのハイブリダイゼーション位置も同様に、太字で記載され、下線で示される。このプライマー配列は、同様に、テンプレートとしてKir6.2のcDNAを用いてポリヌクレオチドが増幅されるように選択される。このKir6.2のゲノム変異体を含むヒト第11染色体のゲノム連続配列を公共的に利用可能にする配列の登録番号(NCBIヌクレオチドデータベース)は、NT_009307である(配列番号25)。
表1:
全ての解析を行った患者の同齢集団の基本的な特徴である。
解析された糖尿病患者の同齢集団におけるKir6.2変異体の分布である。
χ2乗検定で計算した、タンパク質の23位におけるKir6.2変異体と、糖尿病患者における狭心症との関係である。狭心症陽性群において、Kir6.2−23−KKキャリアーの頻度が高いことが観察できた。
ロジスティック回帰による、Kir6.2−23−KKと、糖尿病患者における狭心症との関係に関する統計的有意性の計算である。
Kir6.2−23−KKキャリアーの狭心症を伴う糖尿病患者の危険と、Kir6.2−23−EK、および、Kir6.2−23−EEキャリアーの危険とを比較したオッズ比の計算である。
χ2乗検定で計算された、タンパク質の337位におけるKir6.2変異体と、糖尿病患者における狭心症との関係である。狭心症陽性群において、Kir6.2−337−IIキャリアーの頻度が高いことが観察できた。
ロジスティック回帰による、Kir6.2−337−IIと、糖尿病患者における狭心症との関係に関する統計的有意性の計算である。
Kir6.2−337−IIキャリアーの狭心症を伴う糖尿病患者の危険と、Kir6.2−337−VI、および、Kir6.2−337−VVキャリアーの危険とを比較したオッズ比の計算である。
Claims (19)
- 個体における狭心症に関する危険の増加を同定する方法であって、Kir6.2タンパク質中の23位におけるリシンの存在、および/または、337位におけるイソロイシンの存在が、サンプル中で決定される、上記方法。
- 個体における狭心症に関する危険の増加を同定する方法であって、Kir6.2タンパク質中の23位にリシン、および/または、337位にイソロイシンを包含するKir6.2ポリペプチド配列が生じる、Kir6.2遺伝子の対立遺伝子の一方または両方における、Kir6.2ヌクレオチド配列中の変異の存在が、サンプル中で決定される、上記方法。
- ヌクレオチド配列は、Kir6.2のコード配列の67位にAを有する、請求項2に記載の方法。
- ヌクレオチド配列は、Kir6.2のコード配列の1009位にAを有する、請求項2または3に記載の方法。
- 個体は糖尿病患者である、請求項1〜4のいずれか一項に記載の方法。
- 糖尿病は真性糖尿病である、請求項5に記載の方法。
- Kir6.2−23−KK、および/または、Kir6.2−337−IIの存在が、サンプル中で決定される、請求項1〜6のいずれか一項に記載の方法。
- サンプルは、組織サンプル、細胞もしくは組織抽出物、または、細胞である、請求項1〜7のいずれか一項に記載の方法。
- アミノ酸置換の存在は、
b)サンプルから染色体DNAを単離すること、
c)コード配列の67/68/69位および/または1009/1010/1011位に相当する、ゲノムのKir6.2配列のヌクレオチド位置を含むポリヌクレオチドフラグメントを増幅することができるプライマーを用いたPCR反応によって、ポリヌクレオチドフラグメントを増幅すること、
d)c)に記載のポリヌクレオチドフラグメントを配列決定すること、
によって決定される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - ポリヌクレオチドフラグメントの増幅は、配列番号9〜12に記載のプライマーの少なくとも1種、好ましくは2種を用いて行われる、請求項9に記載の方法。
- 配列決定は、配列番号9〜12に記載のプライマーの1種を用いて行われる、請求項9または10に記載の方法。
- アミノ酸置換は、
b)サンプルからRNAを単離すること、
c)Kir6.2のcDNA配列の67位および/または1009位を含むポリヌクレオチドフラグメントを増幅することができるプライマーを用いたRT−PCR反応によってポリヌクレオチドフラグメントを増幅すること、
d)c)に記載のポリヌクレオチドフラグメントを配列決定すること、
によって決定される、請求項1〜8のいずれか一項に記載の方法。 - 配列番号9〜12に記載のプライマーの少なくとも1種が用いられる、請求項12に記載の方法。
- Kir6.2タンパク質中の23位にリシン、および/または、337位にイソロイシンを包含するKir6.2ポリペプチド配列が生じる、Kir6.2遺伝子の対立遺伝子の一方または両方における、Kir6.2ヌクレオチド配列中の変異の存在を試験するための試験キットであって、該キットは、個体における狭心症に関する危険の増加を同定するものであり、少なくとも、ヌクレオチド配列中の該変異を検出するためのプライマー群を含む、上記キット。
- Kir6.2のヌクレオチドの配列は、コード配列の67位にAを有する、請求項14に記載の試験キット。
- Kir6.2のヌクレオチドの配列は、コード配列の1009位にAを有する、請求項14または15に記載の試験キット。
- Kir6.2のコード配列の67位および/または1009位を含むポリヌクレオチドフラグメントを増幅することができるプライマー群を含む、請求項15または16に記載の試験キット。
- 配列番号13に記載のKir6.2のゲノム配列の5657106/107/108位および/または5657978/79/80位を含むポリヌクレオチドフラグメントを増幅することができるプライマー群を含む、請求項15〜17のいずれか一項に記載の試験キット。
- 配列番号9〜12に記載のプライマーの少なくとも1種を含む、請求項17または18に記載の試験キット。
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