JP5365547B2 - Maldi−ms用試料調製方法 - Google Patents
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a)酸と塩基から生成される有機塩であって前記酸が酸性基を持つベンゼン環であり前記塩基がアミンである液体マトリックスと、分析対象物質を含む試料液とをサンプルプレート上に滴下するステップと、
b)前記サンプルプレート上に滴下された液体マトリックス及び試料液の上にメタノール又はアセトニトリルを含む液滴統一用液体を滴下するステップと、
を有することを特徴としている。
以下に述べる実施例1、2は、本発明の方法による試料調製を行ったものであり、比較例1、2は、液滴統一用液体の滴下を行わない従来法による試料調製を行ったものである。実施例1では液滴統一用液体として100%メタノールを使用し、実施例2では100%アセトニトリルを使用した。また、実施例1、2及び比較例2では試料液と混合するマトリックスとして液体マトリックスであるCHCA_Bを用い、CHCA_Bを0.05%トリフルオロ酢酸を含む50%アセトニトリル水溶液に1mg/mLの濃度で溶解させて使用した。一方、比較例1ではマトリックスとして固体マトリックスであるCHCAを用い、CHCAを0.05%トリフルオロ酢酸を含む50%アセトニトリル水溶液に3mg/mLの濃度で溶解させて使用した(メーカー推奨濃度)。なお、以下の実験では、分析対象物質としてペプチド(Angiotensin_2、ACTH1−18、又はACTH7−38)を用い、該ペプチドを、0.05%トリフルオロ酢酸(TFA)を含む27%アセトニトリル(ACN)水溶液(LC抽出溶媒条件の最大アセトニトリル割合)に100fmol/μLとなるように溶解したものを試料液として使用した。
(1)まず、液体マトリックスと試料液をサンプルプレートの同一ウェルにそれぞれ1μLずつ滴下した。
(2)その後、前記のウェル上に100%メタノール又は100%アセトニトリルを1μLずつ滴下した。
(3)このサンプルプレートをMALDI−TOFMS装置に挿入して質量分析を行った。このとき、図3に示すように試料/マトリックス混合物表面の9点についてそれぞれ500(又は1000)ショットずつレーザー照射を行った。
以下に述べる実施例3は、本発明の方法による試料調製を行ったものであり、比較例3は、従来法による試料調製を行ったものである。なお、以下の実験では、試料液と液体マトリックス(又は固体マトリックス溶液)の滴下は自動試料滴下装置(Accuspot、島津製作所製)によって行い、液滴統一用液体(すなわち100%メタノール)の滴下は分析作業者が手作業で行った。実施例3では試料液と混合するマトリックスとして液体マトリックスであるCHCA_Bを用い、実施例1のようにCHCA_Bを0.05%トリフルオロ酢酸を含む50%アセトニトリル水溶液に1mg/mLの濃度で溶解させたものがウェル上に滴下されるように調製し、自動試料滴下装置にセットした。一方、比較例3ではマトリックスとして固体マトリックスであるCHCAを用い、CHCAを0.05%トリフルオロ酢酸を含む50%アセトニトリル水溶液に3mg/mLの濃度で溶解させたものがウェル上に滴下されるように調製し、自動試料滴下装置にセットした。
(1)まず、自動滴下装置内に液体マトリックスをセットすると共に、装置内の所定の位置にサンプルプレートを載置した。
(2)前記自動滴下装置に接続されたHPLCシステムに、市販のBSAトリプシン消化物(Waters社製)を0.05%トリフルオロ酢酸水溶液に5pmol/5μLとなるように溶解したものを注入し、リテンションタイム(カラムに対する試料保持時間)に従い、6分間で試料分離を行った。
(3)それと同時に、順次カラムから溶出される試料液と前記液体マトリックスを、前記のサンプルプレートの60ウェル分に滴下した。
(4)その後、各ウェルの試料/マトリックス混合物上に、100%メタノールを1μLずつ滴下した。
(5)このサンプルプレートをMALDI−TOFMS装置に挿入し、試料/マトリックス混合物表面の1ポイントのみレーザー照射してMS分析を、続いて2ポイントのみレーザー照射してMS/MS分析を行うよう設定すると共に、得られたデータを利用してプロテオーム解析用データベース検索ソフトウエア(MASCOT、MATRIX SCIENCE社)のMS/MSイオンサーチによる解析を実行するように設定して自動分析を行った。
(6)自動分析終了後、得られたMS/MSイオンサーチ結果を確認し、試料の同定を確認した。
11…ウェル
21…溶離液槽
22…送液ポンプ
23…試料導入部
24…カラム
25…検出器
30…自動試料滴下装置
31…第一配管
32…第二配管
33…第三配管
34、36…液体容器
35、37…送液ポンプ
38…ニードル
39…電磁弁
41…信号処理部
42…制御部
Claims (2)
- マトリックス支援レーザー脱離イオン化法による質量分析用の試料を調製するための方法であって、
a)酸と塩基から生成される有機塩であって前記酸が酸性基を持つベンゼン環であり前記塩基がアミンである液体マトリックスと、分析対象物質を含む試料液とをサンプルプレート上に滴下するステップと、
b)前記サンプルプレート上に滴下された液体マトリックス及び試料液の上にメタノール又はアセトニトリルを含む液滴統一用液体を滴下するステップと、
を有し、
前記液滴統一用液体が、メタノール又はアセトニトリルを60v/v%以上含む液体であることを特徴とするMALDI−MS用試料調製方法。 - 前記液体マトリックスが、α−シアノ−4−ヒドロキシケイ皮酸のブチルアミン塩、α−シアノ−4−ヒドロキシケイ皮酸のジヒドロキシルアミン塩、2,5−ジヒドロキシ安息香酸のブチルアミン塩、及び、2,5−ジヒドロキシ安息香酸のジヒドロキシルアミン塩からなる群より選ばれる少なくとも一の有機塩であることを特徴とする請求項1に記載のMALDI−MS用試料調製方法。
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