JP5307542B2 - 治療的に活性なα−ＭＳＨアナログ - Google Patents

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Description

本発明は、天然型のα-ＭＳＨペプチドに比べて高い効力を有するα-メラニン細胞刺激ホルモン(α-ＭＳＨ)のペプチドアナログに関する。当該α-ＭＳＨアナログは、α-ＭＳＨに比べて、高い抗炎症効果、並びに虚血若しくは虚血後の血管再灌流に関連する全身、臓器、又は細胞の損傷を治療又は予防する高い能力を示す。
天然型のペプチドα-メラニン細胞刺激ホルモン(α-ＭＳＨ)は、１型、３型、４型及び５型メラノコルチン(ＭＣ)受容体の天然アゴニストとして知られている。ＭＣ受容体は、Ｇタンパク質共役受容体のクラスに属する。全ての受容体亜型は、Ｇ-刺激タンパク質に共役し、このことは、受容体刺激がｃＡＭＰの産生増加に関与するということを意味する。ＡＣＴＨは、ＩＩ型受容体(ＭＣ２)に対する天然リガンドである。
様々な組織のＭＣ受容体について一連の研究が行われた。α-ＭＳＨが高い親和性で結合する１型受容体(ＭＣ１)は、幾つかの組織及び細胞、例えば、脳、例えば星状細胞、精巣、卵巣、マクロファージ及び好中球において発現することが知られている。しかしながら、ＭＣ１は、さらに広い範囲の組織において発現される可能性があるが、これはまだ実証されていない。異なるＭＳＨペプチドに結合するＭＣ受容体の選択性は変化する。ＭＣ１は、高い親和性でα-ＭＳＨに結合し、そして低い親和性でβ-ＭＳＨ、γ-ＭＳＨ及びＡＣＴＨと結合する。ＭＣ２は、ＡＣＴＨにのみ結合するが、ＭＳＨペプチドのどれにも結合しないことが報告されている。他の受容体のリガンドについての高い親和性は、γ-ＭＳＨ(ＭＣ３-受容体)及びβ-ＭＳＨ(ＭＣ４受容体)が挙げられる。対照的に、ＭＣ５は、ずっと低い親和性で、ＭＣ１と同じパターン(つまり、α-ＭＳＨに対する最大の親和性)でＭＳＨペプチドに結合する。
ＭＣ受容体の刺激を通して作用するＭＳＨペプチドは、免疫調節、消炎、体温調節、疼痛知覚、アルドステロン合成、血圧調節、心拍数、血管緊張、脳血流、神経成長、胎盤発達、種々のホルモン、例えばアルドステロン、チロキシン、プロラクチン、ＦＳＨなどのホルモンの合成/放出を含む様々な機能を有する。ＡＣＴＨは、ステロイド新生の刺激に主要な効果を有する。α-ＭＳＨは、皮膚における色素形成を誘導する。
どの受容体が関与するかについて、ＭＳＨペプチド類、特にα-ＭＳＨの多くの作用が完全に実証されたわけでないことを強調することは重要である。α-ＭＳＨの抗炎症作用は、マクロファージ及び単球で発現されるＭＣ１受容体と連関するＮＯ産生の妨害、エンドテリン-１作用、インターロイキン１０形成を含む様々なプロセスに関わることが憶測されてきた。
α-ＭＳＨでのＭＣ受容体刺激が、様々な抗炎症プロセスにおいて重要であることが示されてきた(Lipton及びCatania1997)：１)好中球の化学遊走(chemotactive migration)を抑制する(Catania 1996)。２)アナログを含むα-ＭＳＨが、ＬＰＳ処理(Goninard1996)に応答したサイトカイン(ＩＬ-１、ＴＮＦ-α)の放出を抑制する。３)細菌エンドトキシンに応答したＴＮＦ-αを抑制する(Wong,K.Y.ら、1997)。４)α-ＭＳＨのＩＣＶ又はＩＰ投与は、局所投与されたＬＰＳによる中枢ＴＮＦ−α産生を抑制する。５)α-ＭＳＨが、実験的炎症性腸疾患、虚血誘導性急性腎不全の炎症を低下させることを示した。(Star、R.A.ら、1995)。６)接触性過敏症の誘導及び誘発を抑制することにより、幾らかの保護的効果も有し、そしてハプテン抵抗性を誘導し、α-ＭＳＨが、皮膚炎症及び過剰増殖性皮膚疾患の重要な負の制御を媒介し得るということが憶測される(Luger、T.A.、1997)。このため、α-ＭＳＨは、皮膚の微小血管系からのＩＬ-８放出増加を引き起こす(Hartmeyer, M., 1997)。
低酸素症(虚血)及び再灌流損傷の両者は、ヒト病態生理学において重要な因子である。再灌流の間において損傷を受けやすくする組織低酸素症の例として、循環性ショック、心筋虚血、ストローク、一時的腎虚血、大手術及び臓器移植が挙げられる。虚血が原因で生じる疾患は、病的状態と死亡のかなり一般的な原因であり、そして臓器移植がかなり頻繁に行われているので、再灌流損傷を限定的にする可能性についての治療戦略は、公衆健康を改善するためにかなりの必要性がある。虚血再灌流損傷の原因となる病態生理学は複合的であり、そして好中球の浸潤に応答する古典的炎症再灌流応答だけではなく、再灌流組織/臓器内で、腫瘍壊死因子-α(ＴＮＦ-α)、インターロイキン(ＩＬ)１β、ＩＬ-６、ＩＬ-８、インターフェロン-γ及び細胞内接着分子-１(ＩＣＡＭ-１)を含むサイトカイン遺伝子発現に関する。さらに、心筋梗塞を起こした心臓と同様に、局所的に産生されるＴＮＦ-αが収縮の直接的な減少及びアポトーシスを誘導することにより、虚血後の臓器不全に寄与するということが示唆された。虚血及び/又は再灌流損傷の複合的な性質のために、単純な抗炎症治療の考え方は、効果的でないことが示されてきた。再灌流損傷を保護するために、１より多くの活性経路への同時相互作用が必要であるということが多くの実験研究により指摘された。α-ＭＳＨが、抗炎症性、抗酸化性及び抗アポトーシス能力の全てを有することが示され、このことは、再灌流損傷を保護するために当該化合物の有効性をよく説明する。
α-ＭＳＨアミノ酸配列のアミノ酸残基のある改変が、受容体(例えば、ＭＣ４受容体)親和性の増加をもたらすこと、生物学的活性の延長をもたらすこと、又はより強力なペプチドの受容体特異的結合プロファイルをもたらすことが知られている(Schiothら、1998, Hrubyら、1995, Sawyerら、1980, Hiltzら、1991, Scardeningsら、2000)。しかしながら、ペプチド薬剤の作成を目的とする場合、これらのペプチドは、酵素変性に対する安定性の低さについての問題を有する。
上で記載される様に、ペプチド治療活性薬の開発の問題は、ペプチドが迅速にそしてかなり効果的に、一般的に数分の範囲の半減期で酵素により分解されるという点である。プロテアーゼ及び他のタンパク質分解性の酵素は偏在しており、特に消化管に存在しており、その結果ペプチドは通常、経口投与されると複数の場所で分解され、そして血中、肝臓、腎臓及び血管内皮においてある程度分解されやすい。さらに、所定のペプチドは通常、骨格内の１超の結合部で切断されやすく、各場所での加水分解は特定のプロテアーゼにより媒介される。このような障害が克服されたとしても、特に神経ペプチドについては、血液脳関門の通過について困難に直面する。
ペプチドの代謝安定性を増加させるために、ＳＩＰ(構造誘導性プローブ(Structural Induced Probe))と呼ばれる技術が、Larsenら、1999(WO99/46283)により開発された。ＳＩＰ技術は、構造誘導プローブの使用に基いており、これは、親ペプチドのＣ末端又はＮ末端、或いはＣ末端とＮ末端の両方に加えられる短いペプチド配列、つまり(Ｌｙｓ)6により示される。構造誘導性プローブは、細胞間水素結合に基いてより秩序だった立体構造へと親ペプチドを制約し、それにより当該ペプチド・キメラ(プローブに結合されたペプチド)は、ランダムコイル立体構造のペプチドに比べてプロテアーゼに対する分解性を低くする。この構造の結果として、ペプチドキメラは、プロテーゼにより分解されにくくなる。生理的に活性なペプチドにＳＩＰを加えることは、ペプチドの酵素安定性の増加をもたらす一方、同時に生理活性が維持される(Rizziら、2002)。
本発明の要約
本発明者は、驚くべきことに、α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログをペプチドのＮ末端においてＳＩＰ改変することが、天然型のα-ＭＳＨペプチドに比較されたペプチドの最大効力を増加させるということを示した。本発明のペプチドは、天然型のα-ＭＳＨに比べて高い抗炎症効果及び虚血状態を予防するための高い能力を示す。
こうして、本発明は、当該ペプチドのＮ-末端部分においてＳＩＰ改変を含み、かつα-ＭＳＨのアミノ酸配列又は当該ペプチドのＣ末端部分におけるα-ＭＳＨのバリアントを含む具体的ペプチドに関する。
第一態様では、本発明は、以下のアミノ酸配列：
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ
[式中、
Ｘは、６個のアミノ酸残基Ｒ１-Ｒ２-Ｒ３-Ｒ４-Ｒ５-Ｒ６を含み、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は、独立して、Ｌｙｓ又はＧｌｕであり、そして
Ｙは、Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-Ｎａｌ-Ａｒｇ及びＨｉｓ-(Ｄ-Ｎａｌ)-Ａｒｇから選ばれるアミノ酸配列を含み、そして
Ｚは、Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ及びＬｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ)から選ばれるアミノ酸配列を含み、そして
Ａａ1、Ａａ2、Ａａ3、Ａａ4、Ａａ5、Ａａ6及びＡａ7は独立して、天然型又は非天然型のアミノ酸残基であるか、又は存在しないものであり、そして
当該ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１、式中Ｂ１は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＢ２、Ｎ(Ｂ２)(Ｂ３)、ＯＢ２、及びＢ２から選ばれ、ここでＢ２及びＢ３は独立して、場合により置換されるＣ1-6アルキル、場合により置換されるＣ2-6アルケニル、場合により置換されるＣ6-10アリール、場合により置換されるＣ7-16アラルキル、及び場合により置換されるＣ7-16アルキルアリールから選ばれ、
当該ペプチドのアミノ末端は、(Ｂ４)ＨＮ-、(Ｂ４)(Ｂ５)Ｎ-、又は(Ｂ６)ＨＮ-であり、ここでＢ４及びＢ５は独立して、Ｈ、場合により置換されるＣ1-6アルキル、場合により置換されるＣ2-6アルケニル、場合により置換されるＣ6-10アリール、場合により置換されるＣ7-16アラルキル、及び場合により置換されるＣ7-16アルキルアリールから選ばれ；Ｂ６は、Ｂ４-Ｃ(＝Ｏ)-である]
を含む全体で１２〜１９のアミノ酸残基を有するペプチドを提供する。
本発明はまた、哺乳動物の１以上の臓器の組織における状態の治療又は予防のための医薬組成物の製造のためのペプチドの使用に関する。さらに本発明は、組成物、例えば本発明に記載される１以上のペプチド及び医薬として許容される担体を含む医薬組成物、医薬において使用するための本発明のペプチド、及び本発明に従ったペプチドの有効量を投与することを含む哺乳動物の１以上の臓器の組織における病気の治療方法に関する。具体的に、本発明は、虚血、炎症及び/又は毒又は薬剤治療の毒性効果により引き起こされる病気を治療する方法に関する。
本発明は、虚血、炎症、及び/又は毒又は薬剤治療の毒性効果により誘導される臓器機能不全を寛解又は予防する効果を有する治療活性ペプチドに関する。
本明細書に定義される場合、ペプチド配列は、疾患状態、生理的条件、症状又は病因適応症の治療、寛解または軽減、或いはその評価又は診断のために使用することができる場合に、「治療活性」となる。ペプチド配列は、疾患状態、生理的状態、症状又は病因適応症を予防するために使用できる場合に、「予防活性」である。医薬として活性な薬剤は、生理的に及び/又は生物学的に活性である。医薬活性は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、又はｅｘ ｖｉｖｏにおいて生理的及び/又は生物学的システムへの当該物質（ペプチド）の効果を計測し、そして特定のペプチド又は同様の生理的機能を有するペプチドについての技術分野に知られている標準的なｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、又はｅｘ ｖｉｖｏアッセイを用いてアッセイされてもよい。
本発明のペプチド
本発明は、α-ＭＳＨ又は当該ペプチドのＣ末端部分におけるα-ＭＳＨのバリアント、並びに当該ペプチドのＮ末端部分における構造誘導性プローブ（ＳＩＰ）のアミノ酸配列を含むペプチドに関する。本発明のペプチドは、α-ＭＳＨアナログと呼ばれている。本明細書及び特許請求の範囲では、これらの用語は、同義的に用いられる。
α-ＭＳＨバリアントは、配列内での少なくとも１のアミノ酸残基の欠失、置換、添加、又は改変により、天然型のα-ＭＳＨ(Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ、配列番号１０１)に比べて改変されるアミノ酸配列として定義される。α-ＭＳＨバリアントは、好ましくは、以下の構造：Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚを有し、ここでＹは、Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-Ｎａｌ-Ａｒｇ及びＨｉｓ-(Ｄ-Ｎａｌ)-Ａｒｇから選ばれるアミノ酸配列を含み、そしてここでＺは、Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ及びＬｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ)から選ばれるアミノ酸配列を含み、そしてここでＡａ1、Ａａ2、Ａａ3、Ａａ4、Ａａ5、Ａａ6及びＡａ7は独立して、天然又は非天然型アミノ酸残基であるか、又は存在しない。
本文脈では、「アミノ酸残基」という用語は、任意の天然型のアミノ酸残基(天然アミノ酸残基)又は非天然型のアミノ酸残基(非天然アミノ酸残基)を意味する。
天然アミノ酸残基は、天然に存在するアミノ酸残基、例えば、Ａｌａ、Ａｒｇ、Ａｓｎ、Ａｓｐ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｇｌｕ、Ｇｌｙ、Ｈｉｓ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｌｙｓ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｔｈｒ、Ｔｒｐ、Ｖａｌとして定義される。
α-ＭＳＨバリアントの構造についての好ましい天然アミノ酸残基の例は、Ｓｅｒ、Ｔｙｒ、Ｍｅｔ、Ｇｌｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ及びＧｌｙである。
非天然アミノ酸残基は、自然には存在しないが、実験的に作成できるアミノ酸残基として定義される。非天然アミノ酸残基として、合成α、βまたはγアミノ酸残基(Ｌ立体配置又はＤ立体配置のいずれか)並びに、改変チロシンなどの側鎖改変アミノ酸（ここで芳香環は、さらに、例えば１以上のハロゲン、スルホノ基、ニトロ基など及び/又はフェノール基は、エステル基等へと変換される）、例えば側鎖保護アミノ酸であり、ここでアミノ酸側鎖は、ペプチド化学において当業者に知られている方法に従って保護され、例えば、Bodanszkyら、1994, 及びJ. Jones, 及びJones 1991に記載される。好ましい非天然アミノ酸残基の例は、ノルロイシン(Ｎｌｅ)、Ｎａｌ(β-２-ナフチル-アラニン)、Ｄ-Ｎａｌ(β-２-ナフチル-ｄ-アラニン)、Ｄ-フェニルアラニン(Ｄ-Ｐｈｅ)及びＤ-バリン(Ｄ-Ｖａｌ)である。
最も広い態様では、本発明は、以下のアミノ酸配列：
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ
[式中、
Ｘは、６個のアミノ酸残基Ｒ１-Ｒ２-Ｒ３-Ｒ４-Ｒ５-Ｒ６、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立してＬｙｓ又はＧｌｕであり、そして
Ｙは、Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-Ｎａｌ-Ａｒｇ及びＨｉｓ-(Ｄ-Ｎａｌ)-Ａｒｇから選ばれるアミノ酸配列を含み、そして
Ｚは、Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ及びＬｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ)から選ばれるアミノ酸配列を含み、そして
Ａａ1、Ａａ2、Ａａ3、Ａａ4、Ａａ5、Ａａ6及びＡａ7は独立して、天然型又は非天然型のアミノ酸残基であるか、又は存在しないものであり、そして
当該ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１、(式中Ｂ１は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＢ２、Ｎ(Ｂ２)(Ｂ３)、ＯＢ２、及びＢ２から選ばれ、ここでＢ２及びＢ３は独立して、場合により置換されるＣ1-6アルキル、場合により置換されるＣ2-6アルケニル、場合により置換されるＣ6-10アリール、場合により置換されるＣ7-16アラルキル、及び場合により置換されるＣ7-16アルキルアリールから選ばれ、
当該ペプチドのアミノ末端は、(Ｂ４)ＨＮ-、(Ｂ４)(Ｂ５)Ｎ-、又は(Ｂ６)ＨＮ-であり、ここでＢ４及びＢ５は独立して、Ｈ、場合により置換されるＣ1-6アルキル、場合により置換されるＣ2-6アルケニル、場合により置換されるＣ6-10アリール、場合により置換されるＣ7-16アラルキル、及び場合により置換されるＣ7-16アルキルアリールから選ばれ；Ｂ６は、Ｂ４-Ｃ(＝Ｏ)-である]
を含む、全体で１２〜１９のアミノ酸を有するペプチドに関する。
本発明の文脈では、「場合により置換される」という用語は、問題の基が、１又は数回、例えば１〜５回、好ましくは１〜３回、最も好ましくは１〜２回、Ｃ1-8アルキル、Ｃ1-8アルコキシ、オキソ(互変異エノール形態で示されてもよい)、カルボキシル、アミノ、ヒドロキシ(エノール系で存在する場合、互変異ケト形態で示されてもよい)、ニトロ、シアノ、ジハロゲン-Ｃ1-8-アルキル、トリハロゲン-Ｃ1-8-アルキル、ハロゲンで置換されてもよいということを意味することが意図される。一般的に、上記置換基が、さらなる任意の置換基を受け入れる余地があってもよい。
本文脈では、「Ｃ1-6アルキル」という用語は、直線状又は分岐状の飽和炭化水素鎖を意味することを意図し、ここで最長の鎖は、１〜６個の炭素原子を有し、例えばメチル
、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、tert-ブチル、ペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びオクチルなどを有する。分岐状の炭化水素鎖は、炭化水素鎖を有する任意の炭素でＣ1-6-アルキルを意味することを意図する。
本文脈では、「Ｃ2-6アルケニル」は、２〜６個の炭素原子を有する直線状又は分岐状炭化水素を意味することを意図し、そして１又はそれより多くの二重結合を含む。Ｃ2-6アルケニル基の代表的な例として、アリル、ホモ-アリル、ビニル、クロチル、ブテニル、ペンテニル及びヘキセニルがあげられる。１超の二重結合を有するＣ2-6-アルケニル基の代表的な例として、ブタジエニル、ペンタジエニル、ヘキサジエニル、及びヘキサトリエニル基、並びにそれらの分岐形態が挙げられる。不飽和(二重結合)の位置は、炭素鎖に沿った任意の位置であってもよい。
本文脈では、「Ｃ3-8-シクロアルキル」という用語は、炭素原子のみを含む３、４、５、６、７、及び８員環をカバーすることを意図し、ここで、「ヘテロシクリル」という用語は、３、４、５、６、７、及び８員環を意味することを意図し、ここで炭素原子は、１〜３のヘテロ原子と一緒に当該環を構成する。ヘテロ原子は、独立して、酸素、硫黄、及び窒素から独立して選ばれる。
Ｃ3-8シクロアルキル及びヘテロシクリル環は、しかしながら、芳香族π電子系が生じない様式で１以上の不飽和結合を場合により含んでもよい。
好ましい「Ｃ3-8シクロアルキル」の代表的な例は、炭素環シクロプロパン、シクロブタン、シクロペンタン、シクロペンテン、シクロペンタジエン、シクロヘキサン、シクロヘキセン、１,３-シクロヘキサジエン、１,４-シクロヘキサジエン、シクロヘプタン、シクロヘプテン、１,２-シクロヘプタジエン、１,３-シクロヘプタジエン、１,４-シクロヘプタジエン及び１,３,５-シクロヘプタトリエンである。
「複素環」の代表的な例は、複素環２Ｈ-トリピラン、3Ｈ-チピラン、４Ｈ-チピラン、テトラヒドロチオピラン、２Ｈ-ピラン、４Ｈ-ピラン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、１,２-ジチイン、１,２-ジチアン、１,３-ジチイン、１,３-ジチアン、１,４-ジチイン、１,４-ジチアン、１,２-ジオキシン、１,２-ジオキサン、１,３-ジオキサン、１,３-ジオキサン、１,４-ジオキシン、１,４-ジオキサン、ピペラジン、１,２-オキサチイン、１,２-オキサチアン、４Ｈ-１,３-オキサチイン、１,３-オキサチアン、１,４-オキサチイン、１,４-オキサチアン、２Ｈ-１,２-チアジン、テトラヒドロ-１,２-チアジン、２Ｈ-１,３-チアジン、４Ｈ-１,３-チアジン、５,６-ジヒドロ-４Ｈ-チアジン、４Ｈ-１,４-チアジン、テトラヒドロ-１,４-チアジン、２Ｈ-１,２-オキサジン、４Ｈ-１,２-オキサジン、６Ｈ-１,２-オキサジン、２Ｈ-１,３-オキサジン、４Ｈ-１,３-オキサジン、４Ｈ-１,４-オキサジン、マレイミド、スクシンイミド、イミダゾール、ピラゾール、ピロール、オキサゾール、フラザン、バルビツル酸、チオバルビツール酸、ジオキソピペラジン、イソオキサゾール、ヒダントイン、ジヒドロウラシル、モルホリン、トリオキサン、４Ｈ-１,２,３-トリチイン、１,２,３-トリチアン、１,３,５-トリチアン、ヘキサヒドロ-１,３,５-トリアジン、テトラヒドロチオフェン、テトラヒドロフラン、ピロリン、ピロリジン、ピロリドン、ピロリドン、ピラゾリン、ピラゾリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、１,２-ジオキソール、１,２-ジオキソラン、１,３-ジオキソール、１,３-ジオキソラン、３Ｈ-１,２-ジチオール、１,２-ジチオラン、１,３-ジチオール、１,３-ジチオラン、イソオキサゾリン、イソオキサゾリジン、オキサゾリン、オキサゾリジン、チアゾリン、チオゾリジン、３Ｈ-１,２-オキサチオール、１,２-オキサチオラン、５Ｈ-１,２-オキサチオール、１,３-オキサチオール、１,３-オキサチオラン、１,２,３-トリチオール、１,２,３-トリチオラン、１,２,４-トリチオラン、１,２,３-トリオキソール、１,２,３-トリオキソラン、１,２,４-トリオキサオラン、１,２,３-トリアゾリン及び１,２,３-トリアゾリジンである。複素環への結合は、ヘテロ原子の位置であってもよいし、又は複素環の炭素原子を介してもよい。
本文脈では、「アリール」という用語は、炭素芳香環又は環系を意味することを意図する。さらに、「アリール」という用語は、融合環系を含み、ここで少なくとも２のアリール環、又は少なくとも１のアリール及び少なくとも１のＣ3-8-シクロアルキル、又は少なくとも１のアリール及び少なくとも１のヘテロシクリルは、少なくとも化学結合を共有する。アリール環の代表的な例としては、場合により、置換フェニル、ナフタレニル、フェナンスレニル、アントラセニル、アセナフチレニル、テトラリニル、フルオレニル、インデニル、インドリル、クマラニル、クマリニル、クロマニル、イソクロマニル、及びアズレニルが挙げられる。好ましいアリール基はフェニルである。
本文脈では、「Ｃ7-16アラルキル」は、Ｃ1-6アルキルで置換されたＣ1-6アルキルを意味することを意図する。
本文脈では、「Ｃ7-16アルキルアリール」は、Ｃ6-10アリールで置換されるＣ1-6アルキルを意味することを意図する。
１の実施態様では、本発明は：
Ｘ-Ｙ-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ｙ-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ｙ-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ｙ-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ｙ-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ｙ-Ａａ6-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ｙ-Ａａ6-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ｙ-Ａａ6-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ｙ-Ａａ6-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ａａ6-Ｚ,
Ｘ-Ａａ1-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ、
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ、及び
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ
[式中、
Ｘは、６個のアミノ酸残基Ｒ１-Ｒ２-Ｒ３-Ｒ４-Ｒ５-Ｒ６、ここでＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５及びＲ６は独立してＬｙｓ又はＧｌｕであり、そして
Ｙは、Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ、Ｈｉｓ-Ｎａｌ-Ａｒｇ及びＨｉｓ-(Ｄ-Ｎａｌ)-Ａｒｇから選ばれるアミノ酸配列を含み、そして
Ｚは、Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ及びＬｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ)から選ばれるアミノ酸配列を含み、そして
Ａａ1、Ａａ2、Ａａ3、Ａａ4、Ａａ5、Ａａ6及びＡａ7は独立して、天然型又は非天然型のアミノ酸残基であるか、又は存在しないものであり、そして
当該ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１、(式中、Ｂ１は、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＢ２、Ｎ(Ｂ２)(Ｂ３)、ＯＢ２、及びＢ２であり、ここでＢ２及びＢ３は独立して、場合により置換されるＣ1-6アルキル、場合により置換されるＣ2-6アルケニル、場合により置換されるＣ6-10アリール、場合により置換されるＣ7-16アラルキル、及び場合により置換されるＣ7-16アルキルアリールから選ばれ、
当該ペプチドのアミノ末端が、(Ｂ４)ＨＮ-、(Ｂ４)(Ｂ５)Ｎ-、又は(Ｂ６)ＨＮ-であり、ここでＢ４及びＢ５は独立して、Ｈ、場合により置換されるＣ1-6アルキル、場合により置換されるＣ2-6アルケニル、場合により置換されるＣ6-10アリール、場合により置換されるＣ7-16アラルキル、及び場合により置換されるＣ7-16アルキルアリールから選ばれ；Ｂ６は、Ｂ４-Ｃ(＝Ｏ)-である]
からなる群から選ばれるアミノ酸配列を含む、全体で１２〜１９のアミノ酸残基を有するペプチドに関する。
好ましい実施態様では、本発明は、以下のアミノ酸配列：
Ｘ-Ａａ1-Ａａ2-Ａａ3-Ａａ4-Ａａ5-Ｙ-Ａａ6-Ａａ7-Ｚ
[式中、
Ａａ1、Ａａ2、Ａａ3、Ａａ4、Ａａ5、Ａａ6、及びＡａ7は、独立して、任意の天然又は非天然アミノ酸で在りうる。こうして、Ａａ1、Ａａ2、Ａａ3、Ａａ4、Ａａ5、Ａａ6及びＡａ7は、全て本発明のペプチド中に存在する]
を含む、ペプチドに関する。
１の実施態様では、本発明は、アミノ末端が（Ｂ４）ＨＮ-、（式中、Ｂ４＝Ｈ）である、本発明に従ったペプチドに関する。
１の実施態様では、本発明は、当該ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１、(式中、Ｂ１＝ＯＨ)である本発明に従ったペプチドに関する。
幾つかの方法は、分解に対してペプチドを安定化するため、そして他の化合物、薬剤及び/又は例えば血漿中のペプチド/タンパク質と反応するペプチドの能力を低減するために使用できる。本発明は、当該技術分野に知られているこのような方法により改変される本発明に関するペプチドに関する。好ましい実施態様では、本発明は、ペプチドのアミノ末端がアセチル化により改変される、本発明に従ったペプチドに関する。こうして、好ましい実施態様では、本発明は、当該アミノ末端が(Ｂ６)ＨＮ-であり、ここで、Ｂ６＝Ｂ４-Ｃ(＝Ｏ)-、及びＢ４＝ＣＨ3である、本発明に従ったペプチドに関する。他の好ましい実施態様では、本発明は、当該ペプチドのカルボキシ末端がアミド化により改変された本発明に従ったペプチドに関する。こうして、本発明は、当該ペプチドのカルボキシ末端が-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１、(ここでＢ１＝ＮＨ2)である本発明に従ったペプチドにペプチド関する。
本発明の最も広い態様では、
Ｘは、以下の：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号３７)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号３８)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号３９)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号４０)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号４１)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号４２)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号４３)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号４４)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号４５)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号４６)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号４７)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号４８)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号４９)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号５０)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号５１)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号５２)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号５３)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号５４)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号５５)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号５６)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号５７)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号５８)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号５９)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号６０)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号６１)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号６２)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号６３)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号６４)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号６５)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号６６)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号６７)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号６８)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号６９)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号７０)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号７１)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号７２)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号７３)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号７４)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号７５)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号７６)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号７７)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号７８)、
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号７９)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号８０)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号８１)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号８２)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号８３)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号８４)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号８５)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号８６)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号８７)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号８８)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号８９)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号９０)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号９１)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号９２)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ(配列番号９３)、
Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号９４)、
Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号９５)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号９６)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号９７)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ-Ｇｌｕ(配列番号９８)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｌｙｓ(配列番号９９)、
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ(配列番号１００)
から選ばれる。
本発明の現在好ましいペプチドは、以下のペプチド配列：
Figure 0005307542
 の安定化合物である。
安定化は、上で記載される様にペプチドのＮ末端及び/又はＣ末端を改変することにより行われて、例えば本発明のペプチドのＮ末端をアセチル化し、及び/又は本発明のペプチドのＣ末端をアミド化してもよい。
天然アミノ酸についてアミノ酸配列は３文字表記により与えられる。天然アミノ酸残基の改変及び置換は、以下のように略記される：Ｎｌｅは、ノルロイシンの略記である。Ｄ-Ｎａｌは、β-２-ナフチル-ｄ-アラニンの略記である。Ｄ-Ｖａｌ(Ｄ-バリン)は、バリンのＤ体の略記である。Ｄ-Ｐｈｅ(Ｄ-フェニルアラニン)は、フェニルアラニンのＤ体の略記である。
好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号１)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
さらに別の好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号２)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
さらに別の好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ) (配列番号３)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
さらに好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号５)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
さらに別の好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｎａｌ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号９)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
さらに好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号１３)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
別の好ましい実施態様では、本発明は、以下の化合物：
Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号１７)
のＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている本発明に従ったペプチドに関する。
上で記載される様に、本発明のペプチドは、天然型ペプチドα-ＭＳＨに比べて、高い治療効力及び/又は高い最大応答及び/又は高い最大効力を有する。
発明者は、本発明のペプチドの幾つか：
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号１*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、
Ａｃ-(Ｇｌｕ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号２*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ)-ＮＨ2 (配列番号３*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号５*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｎａｌ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号９*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号１３*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号１７*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)
の生物学的効果を試験した。
一般的に、「Ａｃ-」は、本発明のペプチドがＮ-末端でアセチル化されることを指し、そして「-ＮＨ2」が、本発明のペプチドがＣ末端でアミド化されることを指す。
ヒト白血球細胞の懸濁液中で( 実験例１)、７個全てのペプチドは、用量依存的にＬＰＳに誘導されたＴＮＦ-αの蓄積を抑制する(実施例１〜７)。驚くべきことに、７個のペプチド全てが、天然メラニン細胞刺激ホルモンであるα-ＭＳＨに比べて、ＴＮＦ-α産生について最大抑制効果として定義された場合にさらに効果的であり、並びにＴＮＦ-α蓄積の最大抑制を与えるために必要とされる化合物の濃度として定義された場合にさらに強力である (実施例１〜７)。
本発明者は、実験例で上に挙げられる７個のペプチド(配列番号１*、配列番号２*、配列番号３*、配列番号５*、配列番号９*、配列番号１３*及び配列番号１７*、これら全ては、Ｎ末端でアセチル化されており、そしてＣ末端でアミド化されている)を調査した。ここで、ラットにＬＰＳを静脈内輸液することにより全身炎症を誘導した(実験例２)。これらのペプチドが、循環血液中でＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-αを有意に抑制することが示された。驚くべきことに、７個全てのペプチド(配列番号１*、配列番号２*、配列番号３*、配列番号５*、配列番号９*、配列番号１３*及び配列番号１７*、これら全てはＮ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)は、天然のメラニン細胞刺激ホルモンα-ＭＳＨ(実施例１〜７)よりも高い程度で循環血液中でＴＮＦ-αの濃度を抑制できた(実施例１〜７）。
本発明者は、炎症がラットにおいてＬＰＳを吸入させることにより誘導される実験(実験例３)において以下のペプチド：
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号１*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)、及び
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2(配列番号５*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)
の効果を調査し、そして２個のペプチド(配列番号１*及び５*)がＬＰＳ誘導性の肺内への好酸球の蓄積の効果を有意に抑制することが示された(実施例１及び２)。驚くべきことに、好酸球についての効果に加えて当該ペプチド(配列番号５*)は、天然メラニン細胞刺激ホルモン、α-ＭＳＨ(実施例２)で処理されたラットで見られたよりもずっと高い程度で好中球の浸潤を顕著に抑制した。
腎臓の一時的虚血は、低減された血圧、血液量減少、腎臓及び/又は大動脈の血流低下に関する外科的介入の結果として、又は敗血症に付随して頻繁に見られる。これは、虚血誘導性急性腎不全をもたらし、この大部分が、慢性腎不全へと悪化させる。現在では、腎不全の発達を抑制するための効果的な治療が存在しない。虚血段階後の一般的な知見は、溶質を含まない尿の生産を増加させる尿濃縮障害の発達である。
ラットにおける虚血及び再灌流により誘導される虚血誘導性急性腎不全(ＡＲＦ)は、尿細管の特徴的な構造変化を引き起こすことが知られており、尿濃縮メカニズムの機能障害を伴う。この虚血誘導性ＡＲＦモデルは、虚血誘導性損傷におけるＭＳＨアナログの効果を評価する適切な実験例を提供する。本発明者は、以下のペプチド：Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2(配列番号１*、Ｎ末端でアセチル化されており、そしてＣ末端でアミド化されている)の効果を調査し、そして、重篤な急性腎疾患誘導性の腎動脈の一時的な両側性閉塞について、当該ペプチドの効果を天然ペプチドα-ＭＳＨの効果と比較した(実験例６)。一時的な腎動脈の閉塞後５日目で評価された場合、ビヒクルで処理されたラットは、腎動脈の偽閉塞にかけられた対照ラットに比べて１０１％より高い利尿により定義される多尿症を発達させた。驚くべきことに、天然ペプチドα-ＭＳＨと等量で与えられた化合物(配列番号１*、Ｎ末端でアセチル化されており、そしてＣ末端でアミド化されている)は、完全に多尿症を通常化し、当該ペプチドが虚血誘導性ＡＲＦに対する保護を与える能力を有することが示唆される。一方、この実験において天然ペプチドでの処理は、尿生産を通常化することができなかった。
急性心筋梗塞(ＡＭＩ)は、先進国において最も一般的な死亡原因のうちの１つである。ＡＭＩは、ほとんどの場合、突然の冠状動脈血栓症のため、冠状動脈アテロームを有する患者において生じる。今日では、線溶療法又は経皮経管冠動脈形成術(ＰＴＣＡ)は、標準的な治療であり、そして５０〜７０％の患者において初期の再灌流を達成できる(自発的な再灌流率は、３０％未満である)。再灌流の目的は、梗塞サイズを低減すること、それにより心筋機能の損傷の発達を低減することである。血栓溶解/ＰＴＣＡの全体の効果は、短期間及び長期間の死亡率を２０％低下することである。しかしながら、ＡＭＩは、炎症反応と関連し、炎症反応は回復と瘢痕形成の必要条件である。冠状動脈閉塞は、心筋の部分への血流を致命的に低減し、これは顕著にエネルギー代謝を損なわせる。かなりの時間(２０分超)の虚血は、梗塞を誘導し、そして炎症応答をもたらし、これらの両方は、虚血心筋が再灌流される場合に促進及び増大される。
心筋虚血/再灌流(ＭＩＲ)は、好中球の浸潤を伴う古典的な炎症性再灌流応答ばかりでなく、腫瘍壊死因子-α(ＴＮＦ-α)、インターロイキン(ＩＬ)-１β、ＩＬ-６、ＩＬ-８、インターフェロン-γ、及び細胞内接着分子-１(ＩＣＡＭ-１)を含む心筋サイトカイン遺伝子の発現を活性化する。この局所的なサイトカインの心筋での発現は、梗塞の大きさの調節だけではなく、血管壁リモデリング、心臓損傷、及び心筋肥大を含む心臓記脳損傷の進行の役割を果たしてもよい。さらに、局所的に産生されたＴＮＦ-αが、収縮性の直接的な減少及びアポトーシスの誘導を介して、虚血後心筋機能不全に寄与することが示唆された。
多くの実験により、抗炎症/抗酸化性/抗アポトーシス戦略は、ＭＩＲの動物モデルにおいて梗塞サイズを低減する能力を有する。しかしながら、臨床試験は、ヒトにおいて有意な効果を示さなかった。
左冠動脈が６０分間閉塞されたラットにおける心筋虚血/再灌流のモデルでは、本発明に記載されるペプチドでの治療が冠状動脈閉塞を取り除く前にされ、そして次にラットをさらに３時間追跡した。次に梗塞サイズについてのペプチドの能力を評価し、そして天然ペプチドα-ＭＳＨ(実験例５)の効果と比べられた。
驚くべきことに、以下の：
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号１*、Ｎ末端でアセチル化されており、そしてＣ末端でアミド化されている)、
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｄ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号５*、Ｎ末端でアセチル化されており、そしてＣ末端でアミド化されている)、及び
Ａｃ-(Ｌｙｓ)6-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｄ-Ｎａｌ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号９*、Ｎ末端でアセチル化されており、そしてＣ末端でアミド化されている)
で表される３個全てのペプチドは、天然ペプチドα-ＭＳＨよりも高い程度に梗塞サイズを低減した(実施例１、３、４)。
上及び実施例において記載されるペプチドの機能性質の点で、本発明は、少なくとも１の以下の性質：
ａ)ヒト白血球によるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α産生を抑制し、
ｂ)炎症誘導性の肺内への好酸球浸潤を抑制し、
ｃ)炎症誘導性の肺内への好中球浸潤を抑制し、
ｄ)循環血液中の炎症誘導性ＴＮＦ-α蓄積を抑制し、
ｅ)虚血誘導性急性腎不全を低減し、
ｆ)心筋梗塞サイズを低減し、
ｇ)心筋梗塞後の心不全の程度を低減し、
ｈ)肺高血圧を低減し、
ｉ)シスプラチン誘導性腎不全を低減する
のうちの少なくとも１を有するペプチドに関する。
ペプチドは、これらの性質のうちの１超、例えば２、３、４、５、６、７、８又は上記性質の全てを有してもよい。これらの性質は、実施例に概説されるように試験することができる。
上に記載される様に、本発明のα-ＭＳＨアナログは、天然α-ＭＳＨに比べて高い効力を有することにより特徴付けられる。
本明細書及び特許請求の範囲では、「効力」という用語は、化合物により獲得可能な最大応答として定義される。本発明のα-ＭＳＨアナログは、実施例に記載される様々な実験において天然α-ＭＳＨに比べて高い最大応答を産生できる。
好ましくは、本発明のα-ＭＳＨアナログは、α-ＭＳＨに比べて最小１０％、より好ましくは２５％、そして最も好ましくは４０％だけ、ヒト白血球によるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α産生を抑制する。
さらに、本発明のα-ＭＳＨアナログは、気管支-肺胞洗浄又は同等の方法により回収される液体内の好酸球の数を低減させる能力により計測される肺内への炎症誘導性好酸球浸潤を抑制してもよい。予期される最小の効果は、α-ＭＳＨに比べて好酸球の１０％、より好ましくは２５％、そして最も好ましくは５０％の低下が見られた。
さらに、本発明のα-ＭＳＨアナログは、気管支-肺胞洗浄又は同等の方法により回収された液体内の好中球の数を低減させる能力により計測される肺内への炎症誘導性好中球浸潤を抑制してもよい。予期される最小の効果は、α-ＭＳＨと比べた場合に、好中球の１０％、より好ましくは２０％、そして最も好ましくは４０％の低下が見られた。
本発明のα-ＭＳＨアナログは、α-ＭＳＨと比べて、最小で１０％、より好ましくは２５％、そして最も好ましくは約４０％だけ循環血液の炎症誘導性ＴＮＦ-αを抑制しうる。
さらに、本発明のα-ＭＳＨアナログは、虚血後多尿症の程度を低減させる能力により計測される虚血誘導性急性腎不全を低下させうる。最小の予期された効果は、１０％、より好ましくは３０％、そして最も好ましくは５０％の多尿症の低下が、α-ＭＳＨに比べた場合に見られる。
さらに、本発明のα-ＭＳＨアナログは、虚血心筋でのネクローシス領域のサイズの低下する能力により示される心筋梗塞サイズを低下しうる。最小の予期された効果は、梗塞サイズの１０％、より好ましくは２０％、そして最も好ましくは３０％の低下が、α-ＭＳＨと比べて見られる。
さらなる態様では、本発明のα-ＭＳＨアナログは、左心室拡張末期圧の直接的な計測又は同様の定性計測を通して評価される心臓機能により証拠付けられる心筋梗塞心不全後の程度を低減させうる。最小の予期される効果は、α-ＭＳＨと比べた場合に、心臓機能の程度の１０％、より好ましくは２０％、そして最も好ましくは２５％の低下である。
さらなる態様では、本発明のα-ＭＳＨアナログは、肺高血圧を低減しうる。予期される最小の効果は、α-ＭＳＨに比べた場合に、１０％、より好ましくは２０％、そして最も好ましくは３０％の肺動脈圧の低下である。
別の態様では、本発明のα-ＭＳＨアナログは、シスプラチン誘導性腎不全を低下しうる。最小の予期された効果は、α-ＭＳＨに比べた場合に見られる１０％、より好ましくは２０％、そして最も好ましくは３０％のマグネシウム血症及び/又は糸球体ろ過割合の低下である。
上に記載されたように、天然ペプチドであるα-メラニン細胞刺激ホルモン(α-ＭＳＨ)は、１型、３型、４型、及び５型メラノコルチン(ＭＣ)受容体の天然アゴニストとして知られている一方、ＡＣＴＨは、２型受容体(ＭＣ２)に対する天然リガンドである。本ペプチドがα-ＭＳＨ又はそのアナログのアミノ酸配列を含むので、本発明のペプチドは、１以上のメラノコルチン受容体、つまり１、３、４、又は５型メラノコルチン受容体を刺激する能力を有する。
本発明のペプチドの製造方法
本発明のペプチドは、当該技術分野に知られている方法により製造されうる。こうして、α-ＭＳＨ、α-ＭＳＨ-バリアント、α-ＭＳＨアナログ及びＸモチーフは、溶液合成又はメリフィールド型の固相合成などの鎖状ペプチド製造技術により製造されうる。
１の可能な合成戦略では、本発明のペプチドは、最初に、周知の標準保護、カップリング及び脱保護方法を用いて、医薬として活性な配列を構築し、その後に連続して活性ペプチドの構築と同様な様式で活性なペプチド上にモチーフＸのアミノ酸配列を順次カップリングし、そして最終的に担体からペプチド全体を切りはなすことにより、固相合成によって製造されうる。この戦略は、当該ペプチド配列Ｘが、当該ペプチドのＮ末端窒素原子で医薬として活性なペプチドに共有結合される、ペプチドを産生する。
別の可能な戦略は、溶液合成、固相合成、組換え技術、又は酵素合成により別々にα-ＭＳＨペプチド/アナログ及びＸモチーフ(又はその一部)の配列を製造し、それに続いて溶液又は固相技術のいずれか、又はその組合せにより、２個の配列をカップリングすることにより、α-ＭＳＨペプチド/アナログの配列を製造することである。１の実施態様では、α-ＭＳＨペプチド/アナログは、組換えＤＮＡ法により製造されてもよいし、そしてＸモチーフは、固相合成により製造されてもよい。α-ＭＳＨペプチド/アナログとＸモチーフの結合は、化学ライゲーションにより行われてもよい。この技術は、高度に特異的な様式で完全に脱保護されたペプチド断片の集合を可能にする(Liuら、1996)。結合は、プロテアーゼ触媒ペプチド結合により行われてもよい。これは、完全に脱保護ペプチド断片をペプチド結合を介して組み合わせるために高度に特異的技術を提供する(Kullmann, 1987)。
適切な固体支持物質(ＳＳＭ)の例は、例えば、ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリエチレングリコール、セルロース、ポリエチレン、ポリエチレングリコールであって、ポリスチレン、ラテックス、ダイナビーズなどに埋め込まれたものなどの官能化レジンである。
Ｘモチーフのペプチド配列のＣ末端アミノ酸、又はα-ＭＳＨ、α-ＭＳＨ-バリアント、又はα-ＭＳＨアナログのＣ末端アミノ酸は、共通のリンカー、例えば、２,４-ジメトキシ-４'-ヒドロキシ-ベンゾフェノン、４-(４-ヒドロキシ-メチル-３-メトキシフェノキシ)-酪酸、４-ヒドロキシ-メチル安息香酸、４-ヒドロキシメチル-フェノキシ酢酸、３-(４-ヒドロキシメチルフェノキシ)プロピオン酸、及びｐ-［(Ｒ,Ｓ)-ａ［１-(９Ｈ-フルオレン-９-イル)メトキシホルムアミド]-２,４-ジメトキシベンジル]-フェノキシ-酢酸などにより固体支持体に結合されるということが必須であるか又は望ましいということが理解されるべきである。
本発明のペプチドは、トリフルオロ酢酸、トリフルオロメタンスルホン酸、臭化水素、塩化水素、塩化フッ素などの酸により、本目的に適した１以上の「スカベンジャー」、例えばエタンジチオール、トリイソプロピルシラン、フェノール、チオアニソールなどと組み合わせて、固体支持物質から切断されうるか、或いは本発明のペプチドコンジュゲートは、アンモニア、ヒドラジン、アルコキシド、例えばナトリウム・エトキシド、水酸化物、例えば水酸化ナトリウムなどの塩基を用いて固体支持体から切断されてもよい。
本発明のペプチドは、当業者に周知の一般的方法及び原理を用いて、組換えＤＮＡ技術を用いることにより製造されうる。本発明のペプチドをコードする核酸配列は、確立された標準方法、例えばホスホアミダイト法により合成的に調製されうる。ホスホアミダイト法に従って、オリゴヌクレオチドは、例えば、自動化ＤＮＡ合成機中で合成され、精製、アニール、ライゲーションされ、そして適切なベクター中にクローン化される。
本発明のペプチドをコードする核酸は、次に、組換え発現ベクターへと挿入される。当該ベクターは、組換えＤＮＡ法に都合よく用いられ得る任意のベクターであってもよい。ベクターの選択は、当該ベクターの導入先の宿主細胞に依存することが多いであろう。こうして、当該ベクターは、自発的に複製するベクター、つまり染色体外染色体として存在するベクターであってもよく、その複製は、染色体複製から独立している。例えばプラスミドである。或いは、当該ベクターは、宿主細胞へと導入された場合に、宿主細胞ゲノムへと組み込まれ、そして組み込まれた染色体と一緒に複製されるベクターであってもよい。
ベクター中では、本発明のペプチドをコードする核酸配列は、適切なプロモーター配列に作用可能なように接続されるべきである。プロモーターは、選択した宿主細胞において転写活性を示す任意の核酸配列であってもよく、宿主細胞に同種又は異種であるタンパク質をコードする遺伝子に由来してもよい。当該ペプチドをコードする核酸配列の哺乳動物細胞内での転写を仕向ける適切なプロモーターの例は、ＳＶ４０プロモーター、ＭＴ-１(メタロチオネイン遺伝子)プロモーター又はアデノウイルス２主要後期プロモーター、ラウス肉腫ウイルスプロモーター、サイトメガロウイルス(ＣＭＶ)プロモーター、及びウシパピローマウイルスプロモーター(ＢＰＶ)である。昆虫細胞で用いるための適切なプロモーターは、ポリヘドリンプロモーターである。
特に細菌宿主細胞での本発明のペプチドをコードする核酸の転写を仕向ける適切なプロモーターの例は、大腸菌ｌａｃオペロン、ストレプトマイシス コエリカラー(Streptomyces coelicolor)のアガラーゼ遺伝子(ｄａｇＡ)、バチルス スブチリス(Bacillus subtilis)のレバンスクラーゼ遺伝子(ｓａｃＢ)、バチルス リケニホルミス(Bacillus licheniformis)のα-アミラーゼ遺伝子(ａｍｙＬ)、バチルス ステアロサーモフィルス(Bacillus stearothermophilus)マルトジェニックアミラーゼ遺伝子(ａｍｙＭ)、バチルス アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)のαアミラーゼ遺伝子(ａｍｙＱ)、バチルス・リケニホルミス(Bacillus licheniformis)のペニシリナーゼ遺伝子(ｐｅｎＰ)、バチルス・スブチリス(Bacillus subtilis)のｘｙｌＡ及びｘｙｌＢ遺伝子、及び原核細胞β-ラクタマーゼ遺伝子、並びにｔａｃプロモーターから得られるプロモーターである。さらなるプロモーターは、"Useful proteins from recombinant bacteria" 、Scientific American, 1980, 242:74-94；及び Sambrookら、10 1989,に記載されている。
糸状菌宿主細胞において、本発明のペプチドをコードする核酸配列の転写を仕向ける適切なプロモーターの例は、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)TAKAアミラーゼ、リゾムコール ミヒー(Rhizomucor miehei)アスパラギン酸プロテイナーゼ、アスペルギルス・ニガー(Aspergillus niger)又はアスペルギルス アワモリ(Aspergillus awamori)のグルコアミラーゼ(ｇｌａＡ)、リゾムコール・ミエヘイ(Rhizomucor miehei)のリパーゼ、アスペルギルス・オリゼ(Aspergillus oryzae)のアルカリプロテアーゼ、アスペルギルス オリゼ(Aspergillus oryzae)トリオースホスフェートイソメラーゼ、アスペルギルス・ニジュランス(Aspergillus nidulans)のアセトアミダーゼ、フサリウム・オキシポルム(Fusarium oxysporum)トリプシン様プロテアーゼ(米国特許第4,288,627号、当該文献は本明細書に援用される)、並びにこれらのハイブリッドに由来するプロモーターである。糸状菌宿主細胞で使用するための特に好ましいプロモーターは、ＴＡＫＡアミラーゼ、ＮＡ２-ｔｐｉ(アスペルギルス・ニガーの中性アミラーゼ及びアスペルギルス・オリゼのトリオースホスフェートイソメラーゼをコードする遺伝子からプロモーターのハイブリッド)、及びｇｌａＡプロモーターである。
酵母宿主では、有用なプロモーターは、サッカロマイシス・セルビシエ(Saccharomyces cerevisiae)エノラーゼ(ＥＮＯ-Ｉ)遺伝子、サッカロマイシス・セルビシエガラクトキナーゼ遺伝子(ＧＡＬ１)、サッカロマイシス・セルビシエのアルコールデヒドロゲナーゼ/グリセルアルデヒド-３-ホスフェートデヒドロゲナーゼ遺伝子(ＡＤＨ２／ＧＡＰ)、及びサッカロマイシス・セルビシエの３-ホスホグリセラーテ・キナーゼ遺伝子から得られる。酵母宿主細胞について有用なほかのプロモーターは、Romanosら、1992, Yeast 8:423-488に記載される。
本発明の当該ペプチドをコードする核酸配列は、適切なターミネーター、例えばヒト成長ホルモンターミネーターなどに作動可能なように接続されていてもよい。糸状菌宿主細胞の好ましいターミネーターは、アスペルギルス・オリゼのＴＡＫＡアミラーゼ、アスペルギルス・ニガーのグルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニデュランス・アンスラニラートシンターゼ、アスペルギルス・ニガーのαグリコシダーゼ、及びフサリウム・オキシスポルム(Fusarium oxysporum)のトリプシン様プロテアーゼから得られる。
酵母宿主細胞についての好ましいターミネーターは、サッカロマイシス・セルビシエのエノラーゼ、サッカロマイシス・セルビシエのシトクロームＣ(ＣＹＣ１)、又はサッカロマイシス・セルビシエのグリセルアルデヒド-３-ホスフェート・デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子から得られる。他の有用な酵母宿主細胞のターミネーターは、Romanosら、1992(上記)を参照のこと。
当該ベクターは、さらに、ポリアデニル化シグナル(例えば、ＳＶ４０由来又はアデノウイルス５Ｅｌｂ領域)、転写エンハンサー配列(例えば、ＳＶ４０エンハンサー)、及び転写エンハンサー配列(例えば、アデノウイルスＶＡのＲＮＡをコードする配列)を含む。さらに、糸状菌宿主細胞についての好ましいポリアデニル化配列は、アスペルギルス・オリゼＴＡＫＡのアミラーゼ、アスペルギルス・ニガーのグルコアミラーゼ、アスペルギルス・ニジュランスのアントラニラート・シンターゼ、及びアスペルギルス・ニガーのα-グリコシダーゼをコードする遺伝子から得られる。酵母宿主細胞についての有用なポリアデニル化配列は、Guo及び Sherman, 1995, Molecular Cellular Biology 15:5983-5990に記載される。
組換え発現ベクターは、問題の宿主細胞においてベクターが複製することを可能にするＤＮＡ配列をさらに含んでもよい。このような配列の例は(宿主細胞が哺乳動物細胞である場合)、ＳＶ４０又はポリオーマの複製開始点である。細菌の複製開始点の例は、プラスミドｐＢＲ３２２、ｐＵＣ１９、ｐＡＣＹＣ１７７、ｐＡＣＹＣ１８４、ｐＵＢ１１０、ｐＥ１９４、ｐＴＡ１０６０、及びｐＡＭＢ１である。酵母宿主細胞で使用する複製開始点の例は、２ミクロンの複製開始点であり、ＣＥＮ６とＡＲＳ４の組合せ、及びＣＥＮ３とＡＲＳ１の組合せである。複製開始点は、宿主細胞においてその機能を温度感受性にする突然変異を有する開始点であってもよい(例えば、Ehrlich, 1978, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75: 1433を参照のこと)。
当該ベクターは、選択可能なマーカー、例えば遺伝子を含む。その産物は、宿主細胞の欠損を補完し、例えばジヒドロフォレートレダクターゼ(ＤＨＦＲ)をコードする遺伝子、又は薬剤、例えばネオマイシン、ジェネテシン、アンピシリン、又はハイグロマイシンなどに対する抵抗性を与える遺伝子を含む。酵母宿主細胞に対する適切なマーカーは、ＡＤＥ２、ＨＩＳ３、ＬＥＵ２、ＬＹＳ２、ＭＥＴ３、ＴＲＰ１、及びＵＲＡ３である。糸状菌宿主細胞において使用するための選択可能なマーカーは、以下の：ａｍｄＳ(アセトアミダーゼ)、ａｒｇＢ(オリチニン・カルバモイルトランスフェラーゼ)、ｂａｒ(ホスフィノチトリシンアセチルトランスフェラーゼ)、ｈｙｇＢ(ハイグロマイシンホスホトランスフェラーゼ)、ｎｉａＤ(硝酸レダクターゼ)、ｐｙｒＧ(オロチジン-５'-ホスフェートデカルボキシラーゼ),ｓＣ(硫酸アデニストランスフェラーゼ)、ｔｒｐＣ(アントラニレート・シンターゼ)、及びグルホシネート抵抗性マーカー、並びに他の種由来の等価物を含む群から選ばれてもよい。アスペルギルス細胞において使用するのに好ましいものは、アスペルギルス・ニジュラス(Aspergillus nidulans）又はアスペルギルス オリゼ(Aspergillus Oryzae）のａｍｄＳ及びｐｙｒＧマーカーであり、そしてストレプトマイシス・ハイグロスコピクス(Streptomyces hygroscopicus）のｂａｒマーカーである。さらに、選別は、例えば、WO91/17243に記載されるコトランスフォーメーションにより達成され得る。ここで選択可能なマーカーは別々のベクター上に存在する。
本発明のペプチドをコードする核酸配列をライゲーションするために使用される方法、プロモーター及びターミネーター、並びにそれらを複製に必須の情報を含む適切なベクターに挿入することは、当業者に周知である(例えば、Sambrookら、前掲)。
発現ベクターが導入された宿主細胞は、本発明のペプチドを産生できる任意の細胞であり、そして真核細胞、例えば無脊椎(昆虫)細胞又は脊椎細胞、例えば、アフリカツメガエル(Xenopus laevis)卵母細胞又は哺乳動物細胞、特に昆虫および哺乳動物細胞でありうる。適切な哺乳動物細胞株の例は、ＣＯＳ(例えばＡＴＣＣ ＣＲＬ１６５０)、ＢＨＫ(例えば、ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６３２、ＡＴＣＣ ＣＣＬ１０)又はＣＨＯ(例えば、ＡＴＣＣ ＣＣＬ ６１)細胞株である。
哺乳動物細胞をトランスフェクションする方法、及び細胞中に導入されたＤＮＡ配列を発現する方法は、当該技術分野に既知の任意の方法でありうる(例えば、MANIATIS, T., E. F. FRITSCH及びJ. SAMBROOK, 1982 Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY.を参照のこと)。
宿主細胞は、例えば、原核細胞などの単細胞病原体であってもよいし、又は例えば、真核細胞などの非単細胞病原体であってもよい。有用な単細胞は、細菌細胞、例えばグラム陽性細菌、例えば非限定的に、バチルス細胞、例えばバチルス・アルカロフィルス(Bacillus alkalophilus)、バチルス・アミロリクエファシエンス(Bacillus amyloliquefaciens)、バチルス・ブレビス(Bacillus brevis)、バチルス・サークランス(Bacillus circulans)、バチルス・コアギュランス(Bacillus coagulans)、バチルス・ラウツス(Bacillus lautus)、バチルス・レンツス(Bacillus lentus)、バチルス・リケニホルミス(Bacillus licheniformis)、バチルス・メガテリウム(Bacillus megaterium)、バチルス・ステアロサーモフィラス(Bacillus stearothermophilus)、バチルス・スブチリス(Bacillus subtilis)、及びバチルス・チューリギエンシス(Bacillus thuringiensis);或いはストレプトマイシス細胞、例えばストレプトマイシス・リビダンス(Streptomyces lividans)又はストレプトマイシス・ムリヌス(Streptomyces murinus)、或いはグラム陰性細菌、例えば、大腸菌(E. coli)及びシュードモナスspである。細菌宿主細胞の形質転換は、例えば、プロトプラスト形質転換により、コンピテント細胞の使用により、電気穿孔により、又はコンジュゲーションにより行われてもよい。
宿主細胞は、真菌細胞であってもよい。本明細書に使用される「真菌」として、アスコミコタ門(phyla Ascomycota)、バシジオミコタ門(phyla Basidiomycota)、シトリジオミコタ門(phyla Chytridiomycota)、及びザイゴミコタ門(Zygomycota)、並びにオオミコタ門(phyla Oomycota)及び全ての分生子形成菌が挙げられる。アスコミコタ門の代表的な属は、ニューロスポラ(Neurospora)、ユーペニシリウム(Eupenicillium)(＝ペニシリウム)、エメリセラ(Emericella)(＝アスペルギルス(Aspergillus))、ユーロチウム(Eurotium)(=アスペルギルス(Aspergillus))、及び上記真性酵母が挙げられる。菌類宿主細胞は、酵母細胞であってもよい。本明細書に使用される「酵母」には、子嚢胞子形成酵母(ascosporogenous yeast)(エンドミケス目(Endomyoetales))、担子胞子形成酵母(basidiosporogenous yeast)及び不完全菌類(Fungi Imperfecti)(ブラストミセテス(Blastomycetes))に属する酵母が含まれる。細胞の培養に用いる培地は、哺乳動物細胞を生育するのに好適な通常の培地、例えば適当な添加物を含有する血清含有培地若しくは無血清培地、又は昆虫細胞、酵母細胞、若しくは真菌細胞を生育するのに好適な培地であってよい。好適な培地は、製造業者から入手可能であり、または公表されている配合表(例えば、American Type Culture CoＩｌｅctionのカタログ)に従って調製できる。
次に、細胞により産生される本発明のペプチドは、慣用方法により培養培地から回収することができる。当該慣用方法は、例えば、遠心、ろ過、により培地から宿主細胞を分離し、上清又はろ液のタンパク質成分を硫酸アンモニウムなどの塩を用いて沈殿させることにより培地から宿主細胞を分離すること、種々のクロマトグラフィー法(例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティクロマトグラフィーなど)によって精製することを含む。
こうして、本発明は、以下の
(ａ) 当該ペプチドをコードする核酸配列を宿主細胞に誘導し、
(ｂ) 当該宿主細胞を培養し、そして
(ｃ) 当該培養物から当該ペプチドを単離する
を含むか、或いは
(ａ) 当該ペプチドをコードする核酸配列を含む組換え宿主細胞を、当該ペプチドの産生を許容する条件下で培養し、そして
(ｂ) 当該ペプチドを培養物から単離する
を含む組換えＤＮＡ技術を用いて、本発明に従ったペプチドを製造する方法に関する。
使用
本発明は、特に、上又は以下に記載される病気、障害又は疾患のうちの１以上と組み合わせて使用する医薬において使用するための本発明に記載されるペプチドに関する。
１の実施態様では、本発明は、哺乳動物の１以上の臓器の組織の病気を治療又は予防するための医薬組成物の製造のための、本発明に記載される１以上のペプチドの使用に関する。当該臓器は、非限定的に、腎臓、肝臓、脳、心臓、筋肉、骨髄、皮膚、骨、肺、気道、脾臓、外分泌腺、膀胱、内分泌腺、生殖臓器、例えば卵管、眼、耳、脈管系、胃腸管、例えば小腸、結腸、直腸、及び肛門管及び前立腺からなる群から選ばれうる。
上に記載される場合、本発明のペプチドは、α-ＭＳＨに比べて、高い抗炎症効果及び虚血状態を予防する高い能力を示す。
こうして、本発明は、１以上の臓器の組織において病気を治療又は予防するための医薬組成物の製造のための本発明に記載される１以上のペプチドの使用に関し、ここで当該病気は、虚血又は炎症状態である。当該病気は、毒素又は薬剤誘導性の細胞、組織又は臓器の障害のため生じる可能性がある。
本明細書及び特許請求の範囲では、「治療」という用語は、一般的に、本文がこの解釈を特異的に除外しない限りは、現存する病気の治療、並びにそのような病気の予防(予防的処置)を含む。
最も広い概念として、本発明は、臓器又は組織の通常の機能が虚血又は炎症のために変化している任意の状態に関する。傷害は、急性又は慢性傷害を含みうる。慢性傷害は、臓器又は組織の完全又は部分的に回復している間に次々に行われる繰り返しの傷害の状態を含む。
虚血
本明細書及び特許請求の範囲では、虚血は、１以上の臓器への血流の低下として定義されて、酸素のデリバリーの低下及び/又は組織による利用の低下をもたらす。虚血は、脳、心臓、四肢、腎臓、脾臓、肝臓、腸、胃、肺、目、皮膚、筋肉、膵臓、内分泌臓器などを含む１以上の臓器(非限定的なリスト)で生じうる。
虚血は、動脈血供給の低下／完全な停止により、複数の組織反応、例えば好中球の集積、他の炎症応答及び細胞死を誘導する。虚血は、主に手術そして次に他の重篤な疾患に付随して複数の疾患に関与する。虚血の結果として生じる多くの細胞／組織／臓器の機能障害又は破綻を抑制又は予防できる化合物を同定することは、かなり利益がある。
治療される状態は、動脈狭窄又は他の任意の完全又は部分的な血液供給の制限などにおける組織の虚血のため生じ得るか、又は当該虚血により引き起こされる。虚血は、疾患の重篤度に依存して急性であるか又は慢性的であることもあり、そしてさらに当該状態は、可逆的であるか又は不可逆的であることもある。可逆的状態の例は、外科又は他の治療介入の間に生じる血圧の低下のため生じることもあり、臓器の血液灌流に影響する。従って、治療される状態は、腸、心臓、腎臓又は任意のほかの臓器への全身血流に影響しうる低血圧などの全身血流の任意の低下であってもよい。
一の実施態様では、本発明は、虚血の治療のための医薬組成物の製造のための本発明に記載されるペプチドの使用に関し、ここで当該状態は、急性、亜急性、又は慢性虚血により引き起こされる。
臓器又は四肢又は組織の急性、亜急性、又は慢性虚血は、多様な疾患により引き起こされうる。当該虚血として、(非限定的なリストとして)、血栓症を伴うアテローム性の疾患、任意の臓器、血管又は心臓の塞栓症、血管攣縮、大動脈瘤又は他の臓器の動脈瘤、胸郭又は腹腔或いは解離性大動脈瘤、心疾患から生じる低血圧、全身性の疾患、例えば感染症又はアレルギー反応から生じる低血圧症、１以上の毒性化合物又は毒素又は薬剤のため生じる低血圧症が挙げられる。
第二実施態様では、本発明は虚血の治療用の医薬組成物の製造のための本発明に記載されるペプチドの使用であって、当該状態が、二次虚血により引き起こされる、使用に関する。
疾患又は病気に二次的な虚血は、以下の：糖尿病、高脂血症、閉塞性血栓血管炎(バージャー病)、高安症候群、側頭動脈炎、皮膚粘膜リンパ節症候群(皮膚粘膜リンパ節症候群)、心血管梅毒、結合組織障害、例えばレイノー病、有痛性青股腫、血管外傷、例えば、カニューレ挿入又は外科手術又は臓器移植などの医原外傷から選ばれる疾患及び状態の１以上において観察されうる。さらに、上記リストは、１以上の臓器の手術、１以上の臓器の移植、外科的挿入移植、デバイス、グラフト、プロテーゼ又は他の生医学的化合物又は装置の移植により引き起こされる虚血を含む。
第三実施例では、本発明は、前記状態が肺血製ショック又は全身性低血圧に付随する状態のため生じる虚血により引き起こされる、本発明に記載されるペプチドの使用に関する。
炎症状態
本文脈中の「炎症状態」という用語は、特異的Ｔリンパ球又は抗体と抗原との反応などのメカニズムが、炎症細胞のリクルート及び内在性メディエーター化学物質を引き起こす状態を意味する。幾つかの場合、臓器又は組織の通常の機能は、血管透過性における増加により、及び／又は内臓平滑筋の収縮により変更されよう。このような炎症状態は、炎症疾患を生じさせうる。
一の実施態様では、本発明は、哺乳動物の１以上の臓器の組織における状態を治療又は予防するための医薬組成物の製造のための本発明に記載される１以上のペプチドの使用に関し、ここで当該状態は、炎症状態である。
炎症状態は、(非限定的なリストとして)：関節炎、(例えば、関節炎に付随する疾患)、骨関節炎、関節リウマチ；脊椎関節症(例えば、強直性脊椎塩)、反応性関節炎(例えば、リウマチ熱を伴う関節炎)、ヘノッホ・シェンライン紫斑病、及びライター病を含む炎症性疾患により引き起こされうる。さらに、炎症性疾患として、結合組織障害、例えば全身性エリテマトーデス、ポリ筋炎/皮膚筋炎、全身性硬化症、混合性結合組織病、サルコイドーシス及び原発性シェーグレン症候群、例えば乾性角結膜炎、リウマチ性多発筋痛症、及び他のタイプの血管炎、結晶析出疾患(例えば痛風)、ピロリン酸関節症、急性石灰沈着性関節周囲炎が挙げられる。さらに、炎症疾患として、若年性関節炎(スティル病)、乾癬、骨関節炎、過可動性に付随する骨関節炎、先天性異形成、大腿骨頭滑り症、ペルテス病、関節内骨折、半月板切除術、肥満、反復性転位、反復性作用、血症析出疾患及び軟骨の代謝異常、例えばピロリン酸関節症、オクロノーシス、ヘモクロマトーシス、無血管性壊死、例えば鎌状赤血球病、コルチコイド又は他の薬剤での治療、潜函病、敗血性又は感染性関節炎(例えば、結核性関節炎、髄膜炎菌性関節炎、淋菌性関節炎、サルモネラ関節炎)、感染性心内膜炎 (例えば、緑連菌、大便腸球菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、ヒストプラズマ、ブルセラ、カンジダ及びアスペルゲルス種及びコクシエラ・ブルネッティにより誘発された心内膜炎)、ウイルス性関節炎 (例えば、風疹、流行性耳下腺炎、B型肝炎、ヒト免疫不全ウイルス又はパルボウイルスでの感染)、又は反復性関節血症が挙げられる。さらに 炎症性疾患として、ライム病、梅毒、リケッチア性及びマイコバクテリア感染症、心筋、ウイルス性又は原生動物の感染などのスピロヘータ疾患を含む細菌種での感染のため生じる感染性血管炎などの血管炎が挙げられる。さらに、炎症疾患として、非感染性血管炎、例えば、高安動脈炎、巨大細胞動脈炎(側頭動脈炎及びリウマチ性多発筋痛症)、バージャー病、結節性多発動脈炎、顕微鏡の顕微鏡的多発性動脈炎、ウェグナー肉芽腫症、チャーグ・ストラウス症候群、全身性ループス エリテマトーデスを含む結合組織疾患に続発する血管炎、多発性筋炎/皮膚筋炎、全身性硬化症、混合型結合組織病、サルコイドーシス 及び原発性シェーグレン症候群が挙げられる。さらに炎症性疾患は、関節リウマチに続発する血管炎を含む。
さらに、炎症性疾患として、感覚過敏に続発する非-感染性血管炎及び白血球破砕性血管炎、例えば血清病、ヘノッホ・シェンライン紫斑病、薬剤誘導性血管炎、本態性混合型クリオグロブリン血症、ハイポコンプレンテミア(hypocomplentaemia)、他の種類の悪性度に付随する血管炎、炎症性腸疾患及び原発性胆汁性肝硬変、グッドパスチャー症候群が挙げられる。
さらに、炎症性疾患は、子供における関節炎の全ての種類、例えば、若年性慢性関節炎 、例えばスティル病、若年性関節リウマチ、若年性強直性脊椎炎を含む。
さらに、炎症性疾患として、上部及び下部気道疾患、例えば慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)、アレルギー性及び非アレルギー性喘息、アレルギー疾患、アレルギー性及び非アレルギー性結膜炎が挙げられる。さらに、炎症性疾患として、アレルギー性及び非アレルギー性 皮膚炎も挙げられる。
さらに炎症性疾患として、析出性疾患の全ての種類、例えば痛風、ピロリン酸関節症及び急性石灰沈着性関節周囲炎が挙げられる。
さらに炎症性疾患として、腰痛を引き起こす全ての種類の炎症状態、敗血性椎間板炎、結核、悪性悪性腫瘍(例えば、転移、骨髄腫など)、脊髄腫瘍、強直性関節炎、急性椎間板脱出、慢性椎間板脱出/骨関節炎、骨粗鬆症、及び骨軟化症が挙げられる。パジェット病、副甲状腺機能亢進、腎性骨異栄養症、脊椎すべり症、脊髄狭窄、先天性異常及び線維筋痛症が挙げられる。
さらに、炎症疾患は、全ての種類の軟組織リウマチ、例えば滑液包炎、腱鞘炎又は石灰沈着性腱鞘炎、腱付着部炎、神経圧迫、関節周囲炎又は関節包炎、筋張力及び筋肉機能障害が挙げられる。
さらに炎症性疾患として、胃腸管系の炎症性疾患(例えば、全ての種類の口内炎、天疱瘡、水疱性類天疱瘡及び良性粘膜類天疱瘡)、唾液腺疾患(例えば、サルコイドーシス、唾液腺管閉塞及びシェーグレン症候群)、食道の炎症(例えば、胃-食道逆流又はカンジダ種、単純ヘルペス及びサイトメガロウイルスのため生じる)、胃の炎症性疾患(例えば、急性及び慢性胃炎、ヘリコバクター・ピロリ(helicobacter pylori)感染症及びメントリアー病)、小腸の炎症(例えば、セリアック病、グルテン感受性腸疾患、疱疹状皮膚炎、熱帯性スプルー、ウィップル病、照射腸炎、全身性アミロイドーシス、結合組織障害、例えば全身性エリテマトーデス、多発筋炎/皮膚筋炎、全身性硬化症、混合型結合組織病及びサルコイドーシス)、好酸球性胃腸炎、腸リンパ管拡張症、炎症性腸疾患(例えば、クローン病及び潰瘍性大腸炎)、結腸の憩室性疾患、及び過敏性腸症候群が挙げられる。
好ましい実施態様では、本発明は、哺乳動物の１以上の臓器の組織において病気の治療又は予防のための医薬組成物の製造のための本発明に記載される１以上のペプチドの使用に関し、ここで当該病気は、肺炎症、関節炎、皮膚炎、膵炎及び炎症性腸疾患から選ばれる炎症性状態である。
薬剤誘導性細胞、組織及び臓器不全
１の実施態様では、本発明は、毒素又は薬剤誘導性の細胞、組織又は臓器不全の治療又は予防のための医薬組成物の製造のための本発明に記載される１以上のペプチドの使用に関する。
本明細書及び特許請求の範囲において、「薬剤誘導性の細胞、組織及び臓器不全」は、医薬品により誘導される細胞又は組織の機能及び/又は形態の変化として定義される。当該医薬品としては非限定的に、シスプラチン、カルボプラチン、ダカルベジン(dacarbezine)、プロカルバジン、アルトレタミン、セムスチン、ロムスチン、カルムスチン、ブスルファン、チオテパ、メルファラン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メクロレタミン、アザシチジン、クラドリビン、シタラビン、フルダラビン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メトトレキサート、チオグアニン、アロプリノール、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン (アドリアマイシン)、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン、マイトマイシン、パクリタキセル、プリカマイシン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、アマサクリン(amasacrine)、アスパラギナーゼ、ヒドロキシ尿素、ミチタン(mititane)、ミトキサントロンを含む癌化学治療薬; ストレプトマイシン、ネオマイシン、カナマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、シソマイシン及びニチルマイシン(nitilmicin)を含むアミノグリコシド類などの抗生物質；免疫抑制化合物、例えばシクロスポリン、三環系抗うつ薬、リチウム塩、プレニラミン及びフェノチジン誘導体が挙げられる。
細胞、組織又は臓器の通常機能が変化される状態としては、虚血、急性及び/又は慢性炎症、アレルギー、リューマチ様疾患、ウイルス、心筋、細菌感染、プリオン及び他の微生物及び当該技術分野に既知の病原体を含む感染、薬剤誘導性毒性含む全ての形態の毒性反応、並びに急性及び慢性傷害が挙げられる。慢性傷害としては、臓器又は組織機能の完全又は部分的な回復の期間で次々生じる繰り返しの傷害状態が挙げられる。細胞、組織又は臓器の通常機能が変化される状態は、１以上の臓器又は他の移植用装置の移植に伴う傷害を含み、そして本発明のペプチドが、当該状態の治療又は予防に有用であることが考慮される。臓器は、自分自身のもの、その動物自身のもの、又は他の人又は動物のものでありうる。このことは、臓器移植、骨移植、軟組織移植(シリコーン移植)金属およびプラスチック移植、又は他の医療用の移植可能な装置を含む。個人は、ヒト並びに他の哺乳動物を表す。
治療される状態は、癌により引き起こされるか、又は肺、気管支、上気道、及び/又は心臓及び/又は腎臓及び/又は胃腸系の臓器に影響を与える前癌障害、例えば急性骨髄性白血病、慢性リンパ白血病、ホジキン病、リンパ肉腫、骨髄腫、任意の臓器の転移癌腫により引き起こされ得る。本発明のペプチドが、当該状態の治療又は予防に有用であることが考えられる。
さらに、治療される状態は、糖尿病、ＬＤＬ-コレステロールの絶食レベルが増加した状態、ＬＤＬ-コレステロール及びトリグリセリドの絶食レベルが併せて増加した状態、トリグリセリドの絶食レベルが増加した状態、ＨＤＬ-コレステロールの絶食レベルが増加した状態、後腹膜線維症、エリテマトーデス、結節性多発動脈炎、強皮症、多発性筋炎、皮膚筋炎、関節リウマチ、アナフィラキシー、血清病、溶血性貧血、及びアレルギー性無顆粒球症から選ばれる任意の疾患により引き起こされうる。本発明のペプチドが、当該状態の治療又は予防に有用であることが考えられる。
多くの感染は、組織への影響を有し、そして通常の機能を乱して、低いパフォーマンスをもたらし、これは、本発明のペプチドの有効用量の投与により改善されうる。このような感染としては、プロトゾア、ウイルス、細菌及び真菌による感染を含み、そしてＡＩＤＳ、細菌性敗血症、全身性心筋症、リケッチア病、毒素性ショック症候群、伝染性単核球症、クラミジア・トラコマチス(chlamydia thrachomatis)、クラミジア・シッタシ(chlamydia psittaci)、サイトメガロウイルス感染症、カンピロバクター、サルモネラ、インフルエンザ、灰白髄炎、トキソプラズマ症、ラッサ熱、黄熱病、ビルハルツ住血吸虫症、コリバクテリア、エンテロコッカス、プレテウス(preteus)、クレブシエラ(klebsiella)、シュードモナス、スタフィロココッカス・アウレウス(staphylococcus aureus)、スタフィロコッカス・エピデルミジス(staphylococcus epidermidis)、カンジダ・アルビカンス、結核、流行性耳下腺炎、伝染性単核球症、肝炎及びコックサッキーウイルスなどの状態を含む。
治療される状態は、１以上の毒性物質及び/又は薬剤に関する化学傷害に関連してもよい。このような薬剤として、三環系抗うつ薬、リチウム塩、プレニラミン、フェノチジン誘導体、癌化学療法薬、例えばシスプラチン、カルボプラチン、ダカルバジン(dacarbezine)、プロカルバジン、アルトレタミン、セムスチン、ロムスチン、カルムスチン、ブスルファン、チオテパ、メルファラン、シクロホスファミド、クロラムブシル、メクロレタミン、アザシチジン、クラドリビン、シタラビン(cytorabine)、フルダラビン、フルオロウラシル、メルカプトプリン、メトトレキサート、チオグアニン、アロプリノール、ブレオマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドセタキセル、ドキソルビシン (アドリアマイシン)、エトポシド、イダルビシン、イリノテカン、マイトマイシン、パクリタキセル、プリカマイシン、トポテカン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、アマサクリン、アスパラギナーゼ、ヒドロキシ尿素、ミチタン、ミトキサントロン; 抗生物質、例えば、ストレプトマイシン、ネオマイシン、カナマイシン、アミカシン、ゲンタマイシン、トブラマイシン、シソマイシン及びニチルマイシン(nitilmicin)を含むアミノグリコシドなど；並びに免疫抑制化合物、例えばシクロスポリンが挙げられる。電磁放射を含む物理的傷害は、損傷を引き起こし得る。当該損傷は、本発明に従ったα-ＭＳＨアナログの有効量を投与することにより軽減されうる。
本発明に従って治療される状態として、さらに結合組織疾患、例えば強皮症、全身性エリテマトーデス又は神経筋障害、例えばデュシェンヌ型の進行性筋ジストロフィー、フリードリッヒ運動失調、及び筋緊張性ジストロフィーが挙げられうる。当該様態は、例えば、哺乳動物の腸の組織に関連しうる。
本発明はまた、上記状態が、心筋虚血、アンギナ、心膜炎、心筋梗塞、心筋虚血、心筋炎、粘液水腫、及び心内膜炎である、本発明に記載されるペプチドの使用に関する。
１の実施態様では、本発明は、当該状態が心臓不整脈と関連する本発明に従ったペプチドの使用に関する。
治療方法
本発明は、治療を必要とする個々の哺乳動物の１以上の臓器の組織の状態を治療又は予防する方法であって、当該方法は、本発明に記載される１以上のペプチドの有効量を投与することを含む、前記方法に関する。当該状態は、虚血又は炎症状態であり、及び/又は毒素又は薬剤治療の毒性効果から生じる。
本発明の治療方法は、任意の臓器又は血管の移植により引き起こされるか又はこれらに付随する状態に関して特に利点を有し、例えば組織片対宿主反応の予防を含む。このような状態では、全臓器は、栄養、代謝、灌流などについて全ての変化に対しかなり感受性であり、そして本発明に記載される治療は、状態を安定化し、そして臓器の機能を圧迫する任意の状況に対して組織をより抵抗性にする。本発明に記載される当該方法は、本発明の有効量のペプチドを、受容者に移植する間、移植された臓器に対して投与することを含み、本発明のペプチドの有効量を移植培地に加えることを含む。
さらに、本出願は、心筋虚血などの重篤な疾患において、本発明に記載されるα-ＭＳＨアナログでの治療は、死亡及び臓器不全を劇的に予防するという証拠を提供する。
最も一般的な心臓状態のうちの１は、間欠的狭心症又は胸部疼痛であり、ここで本発明に従った治療は、特に関心が高い。狭心症に関する状態としては、不安定狭心症、安定狭心症及びプリンツメタル型狭心症が挙げられる。
さらなる態様では、当該予防及び治療は、心膜炎、心筋梗塞、心筋虚血、心筋炎、筋脂肪変性(myxodemia)、及び心内膜炎によりひきおこされる状況において利用されうる。
治療される状態は、原発性疾患又は対象の別の状態に対して続発性疾患のいずれかとして、心臓不整脈と関連しうる。不整脈の種々の原因の例として、急性感染症、特に肺に罹患する感染症、肺塞栓症、低血圧、ショック、無酸素血症又は貧血が挙げられ、これらは心筋虚血に関与し、そうして不整脈を引き起こす。不整脈は、循環障害を悪化させ、それによりひどい自己永続的なサイクルを作り上げてしまう。
本発明に記載される治療は、不整脈の発達の閾値を増加させ、そうして不整脈の発達を予防するということが信じられている。この効果は、伝導系に直接的に作用するか、又は不整脈の原因を模倣するか又は原因そのものである状態に作用することにより間接的に作用してもよい。
本方法に従って軽減され得る症候群又は不整脈は、原発性であってもよいし、又は続発性であってもよく、そして心室又は上心室頻脈性不整脈、房室ブロック、洞結節病、ウォルフ・パーキンソン・ホワイト症候群、レングレー病(Lenegres Disease), レブ病、心房と心室の間における異常な心筋の結合を含む症候群から選ばれうる。
不整脈を抑制する目的で行われる抗不整脈治療は、常に、新たな不整脈を作り出す危険性を伴う。不整脈は、薬剤の過用量のため生じる毒性反応として生じる可能性がある。しかしながら、特に、クラスＩＡ薬剤として知られている薬剤群を用いた治療の間、非用量依存性の副作用-特異体質反応-として不整脈が生じ、治療範囲内の薬剤濃度で発達させる可能性がある。さらなる実施態様では、１以上の不整脈薬剤、例えば、ジギタリス、キニジン、ジソピラミド、アデノシン、アプリンジン、フレカイニド、アミオダロン、ソタロール、メキシレチン、β遮断薬、及びベラパミルにより引き起こされ得る。
本発明に従ったα-ＭＳＨアナログでの治療は、他の抗不整脈薬での併用療法のため生じる不整脈を発達させるリスクを低減させる。
本発明のさらなる態様では、当該状態は、心電図記録法(ＥＣＧ)により計測される１以上の異常により特徴づけられうる。ＥＣＧでの異常は、Ｐ波、ＳＴセグメント、Ｔ波、ＱＲＳコンプレックス、Ｑ波、δ波、及びＵ波から選択される構成の１以上の変化から選択される。
本発明に記載されるペプチドの有効量の投与により軽減され得る他の状態は、臓器(例えば、心臓)についての電解質撹乱の効果並びに撹乱そのものであり、例えば個別のイオンの相対濃度の異常を含む。この様な状態は、カリウム、カルシウム、ナトリウム及びマグネシウムからなる群から選ばれる電解質の１以上の異常血清濃度を含む。
本発明によると、影響され得る組織は、臓器に存在する１以上の細胞型を含み、そして上皮細胞、マクロファージ、細網内皮系単球、好中球顆粒球、好酸球顆粒球、好塩基球顆粒球、Ｔ細胞、Ｂ細胞、マスト細胞、及び樹状細胞から選ばれてもよい。特に、Ｔ細胞、Ｂ細胞及びマスト細胞は、この点で特に関心が高い。
本発明の好ましい態様は、予防又は治療であって、本発明に従ったα-ＭＳＨアナログの用量が、当該状態又は当該状態の任意の症状の進行を予防するために投与される、前記予防又は治療に関する。
予防又は予防的処置は、例えば、冠動脈狭窄を患う患者において心発作を予防するための、又は例えば外科手術の際の治療でありうる。予防処理は、限られた期間の間であってもよい。当業者は、実際の状況に基いて、特異的治療スケジュールを評価することができよう。好ましい実施態様では、治療又は予防は、冠動脈狭窄の虚血の際の梗塞サイズを低減することができる。このような梗塞サイズは、未処理の対象と比べて２０％、少なくとも３０％、好ましくは少なくとも５０％低減する可能性がある。
従って、本発明に記載されるα-ＭＳＨアナログの用量は、病気又は病気の任意の症状の発達を予防するために、予防的に投与される。
本発明に従ったα-ＭＳＨアナログの用量は、１回用量、習慣的又は継続投与として、或いは連続投与として投与されてもよい。
投与は、全身投与、局所投与であってもよく、例えば、薬剤標的系の使用、カテーテル及びインプラントの使用、経口投与、非経口投与、例えば皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、腹腔内投与、くも膜下内投与、肺投与、例えば吸入、局所投与、経粘膜投与、経皮投与を含む。
従って、投与は、全身投与；組織又は関節を含む体腔中に注射し；組織又は体腔にインプラントし；皮膚又は任意の胃腸管表面へと、或いは体腔のライニングを含む粘膜表面へと局所的に適用することを含む。
上の記載から明らかなように、任意の関連する投与経路により本明細書に開示されるいずれかの状態を治療又は予防するための医薬の製造のための、本発明に従ったペプチドの使用に関する。
医薬製剤及び組成物
本発明は、本発明に従った１以上のペプチドを含む医薬組成物にも関する。当該医薬組成物は、さらに１以上の医薬担体を含んでもよい。さらに、当該医薬組成物は、さらに１以上の医薬として許容される賦形剤を含んでもよい。
本発明に従った医薬組成物は、非限定的に非経口、経口、局所、経粘膜又は経皮組成物でありうる。
以下の実施例では、本発明に従った１以上のペプチドを含む適切な組成物が与えられる。対象(動物又はヒト)への投与のために、当該物質が好ましくは当該物質及び場合により１以上の医薬として許容される賦形剤を含む医薬組成物へと剤形される。
組成物は、例えば、固体、半固体、又は液体組成物、例えば、非限定的に、生体吸収可能なパッチ、水薬、包帯材、ハイドロゲル包帯材、ハイドロコロイド包帯材、フィルム、泡、シート、包帯、硬膏剤、デリバリー装置、移植片、粉末、顆粒、顆粒化する、カプセル、アガロース又はキトサン・ビーズ、錠剤、ピル、ペレット、マイクロカプセル、微粒子、ナノ粒子、噴霧、エアロゾル、吸入装置、ゲル、ハイドロゲル、ペースト、軟膏、クリーム、ソープ、坐薬、バジトリー(vagitory)、歯磨き粉、溶液、分散、懸濁液、乳濁液、混合物、ローション、口腔洗浄薬、シャンプー、浣腸；例えば２個の別個の容器を含むキット、ここで第一コンテナが本発明に従ったペプチドを含み、そして第二容器が、使用前に第一容器へと加えることを意図された適切な溶媒を含み、すぐ使える組成物を得ることができるキット、及び他の適切な形態、例えば移植片又は移植片の被膜、又はインプラント又は移植と組み合わせて使用するのに適した形態などの形態である。
組成物は、慣用の医薬慣例に従って剤形されてもよい。例えば、Remington: 「The science and practice of pharmacy」第２０版、Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3 及び「Encyclopedia of Pharmaceutical Technology", Swarbrick, J. & J. C. Boylan, Marcel Dekker, Inc., New York, 1988 ISBN 0-8247- 2800-9.を参照のこと。
活性物質を含む医薬組成物は、薬剤デリバリーシステムとして機能する。本文脈では、用語「薬剤デリバリーシステム」は、投与の際に活性物質をヒト又は動物の体に提示する医薬組成物(医薬製剤又は薬剤形態)を指す。こうして、「薬剤デリバリーシステム」という用語は、例えば、クリーム、軟膏、液体、粉末、錠剤などの通常の医薬組成物、並びにより洗練された製剤、例えばスプレー、プラスター、包帯材、包帯、デバイスなどを包含する。
上で記載される様に、本発明に従って使用される医薬組成物は、医薬として又は化粧品として許容される賦形剤を含んでもよい。
本発明に従って使用するための組成物中の医薬として許容される賦形剤の選択、並びにその最適濃度は、一般的に予想できず、そしてその実験的決定に基いて決定されなければならない。医薬として許容される賦形剤が、医薬組成物中で使用するのに適しているかは、どの種類の投与形態が選択されるかに一般的に依存する。しかしながら、医薬製剤の技術分野で当業者は、指針、例えばRemington: 「The science and practice of pharmacy」第２０版、Mack Publishing, Easton PA, 2000 ISBN 0-912734-04-3を見つけることができる。
医薬として許容される賦形剤は、当該組成物が投与される対象にとって実質的に害のない物質である。この様な賦形剤は、通常、国立薬品局により与えられる要件を満たす。公的な薬局方、例えば、英国薬局方、米国薬局方、及び欧州薬局方は、周知の医薬として許容される賦形剤についての基準を定めた。
本発明に従って使用するための関連する医薬組成物についての総説を以下に与える。当該総説は、投与の特定経路に基いている。しかしながら、医薬として許容される賦形剤が異なる投与形態又は組成物中で使用されうる場合、特定の医薬として許容される賦形剤の適用は、特定の薬剤形態又は特定の賦形剤の機能に限定されないということが認められる。
非経口組成物
全身適用では、本発明に記載される組成物は、慣用的に非毒性の医薬として許容される担体及び賦形剤であって、マイクロスフィア及びリポソームを含むものを含みうる。
本発明に従って使用するための組成物として、全ての種類の固体、半固体、及び液体組成物を含む。特に関係のある組成物は、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、ゲル、移植錠剤及びインプラントが挙げられる。
医薬として許容される賦形剤として、溶媒、緩衝剤、保存剤、湿潤剤、キレート剤、抗酸化剤、安定剤、乳化剤、懸濁剤、ゲル形成薬、希釈液、崩壊剤、結合剤、潤滑剤及び湿潤剤が挙げられうる。様々な薬剤の例として、以下を参照のこと。
局所、経粘膜及び経皮組成物
粘膜又は皮膚について適用するために、本発明に従って使用するための組成物は、慣用的に、非毒性医薬として許容される担体及び賦形剤、例えばマイクロスフィア及びリポソームを含みうる。
本発明に従って使用するための組成物として、全ての種類の固体、半固体、及び液体組成物が挙げられる。特に関係のある組成物は、例えば、ペースト、軟膏、親水性軟膏、クリーム、ゲル、ハイドロゲル、溶液、乳濁液、懸濁液、ローション、リニメント剤、リソリブレット(resoriblets)、坐薬、浣腸、腟坐薬、成型ペッサリー、腟坐薬、腟カプセル、腟錠剤、シャンプー、ゼリー、ソープ、スティック、スプレー、粉末、フィルム、泡、パッド、スポンジ (例えば、コラーゲンスポンジ)、パッド、包帯剤(例えば、吸着性創傷包帯剤)、ドレンチ、包帯、硬膏剤及び経皮デリバリーシステムが挙げられる。他の薬剤の例については以下を参照のこと。
医薬として許容される賦形剤として、溶媒、緩衝剤、保存料、湿潤剤、キレート剤、抗酸化剤、安定剤、乳化剤、懸濁剤、ゲル形成剤、軟膏基剤、坐薬基剤、浸透エンハンサー、芳香剤、皮膚保護剤、希釈液、崩壊剤、結合剤、潤滑剤及び湿潤剤が挙げられる。
経口組成物
粘膜又は皮膚への適用のために、本発明に従って使用するための組成物は、マイクロスフィア及びリポソームを含む慣用的に非毒性の医薬として許容される担体及び賦形剤を含みうる。
本発明に従って使用するための組成物として、全ての種類の固体、半固体、そして液体組成物を含む。特定の関連のある組成物は、例えば、溶液、懸濁液、乳濁液、未被膜錠剤、過異変放出錠剤、胃腸抵抗性錠剤、口腔内崩壊錠、発泡錠、咀嚼錠、軟カプセル、硬カプセル、改変放出カプセル、胃抵抗性カプセル、未被覆顆粒、発泡顆粒、経口使用するための液体の調製用顆粒、被膜顆粒、胃抵抗性顆粒、改変放出顆粒、経口投与用粉末及び経口使用用の液体の製造のための粉末が挙げられる。
医薬として許容される賦形剤として、溶媒、緩衝剤、保存料、湿潤剤、キレート薬、抗酸化剤、安定剤、乳化剤、懸濁剤、ゲル形成剤、希釈剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、被膜薬剤及び湿潤剤が挙げられる。異なる薬剤の例として、以下を参照のこと。
様々な薬剤の例
溶媒の例は、非限定的に、水、アルコール、植物油又は魚油(例えば、食用油、例えばアーモンド油、ヒマシ油、カカオバター、やし油、トウモロコシ油、綿実油、亜麻仁油、オリーブ油、パーム油、ピーナッツ油、ケシの実油、アブラナ油、ゴマ油、ダイズ油、ヒマワリ油、及び茶油)、ミネラルオイル、脂肪油、流動パラフィン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、液体ポリアルキルシロキサン及びそれらの混合物である。
緩衝薬の例は、非限定的に、クエン酸、酢酸、酒石酸、乳酸、リン酸水素、ジエチルアミンなどである。
組成物中で使用するための保存剤の例は、非限定的に、パラベン、例えば、メチル、エチル、プロピルp-ヒドロキシ安息香酸、ブチルパラベン、イソブチルパラベン、イソプロピルパラベン、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、安息香酸、メチル安息香酸、フェノキシエタノール、ブロノポール、ブロニドックス、ＭＤＭヒダントイン、ヨードプロピニルブチルカルバマート、ＥＤＴＡ、ベンズアルコニウム・クロリド、及びベンジルアルコール、又は保存剤の混合物である。
湿潤剤の例は、非限定的に、グリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、乳酸、尿素、及びそれらの混合物である。
キレート薬の例は、非限定的にＥＤＴＡナトリウム及びクエン酸である。
抗酸化剤の例は、非限定的に、ブチル化ヒドロキシアニソール(ＢＨＡ)、アスコルビン酸及びその誘導体、トコフェロール及びその誘導体、システイン、及びこれらの混合物である。
乳化剤の例は、非限定的に、天然ゴム、例えばアカシアゴム又はトラガカントゴム；天然ホスファチド、例えば大豆レシチン；モノオレイン酸ソルビタン誘導体；羊毛脂；羊毛アルコール；ソルビタン・エステル；モノグリセリド；脂肪アルコール；脂肪酸エステル(例えば脂肪酸トリグリセリド)；及びそれらの混合物である。
懸濁剤の例は、非限定的にセルロース及びセルロース誘導体、例えば、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシセチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カラギーナン、アカシアゴム、アラビアゴム、トラガカントゴム、及びそれらの混合物である。
ゲル基剤及び増粘剤の例は、非限定的に、流動パラフィン、ポリエチレン、脂肪油、コロイド性シリカ又はアルミニウム、亜鉛セッケン、グリセリン、プロピレングリコール、トラガカント、カルボキシビニル重合体、ケイ酸マグネシウム-アルミニウム、Ｃａｒｂｏｐｏｌ（登録商標）、親水性重合体、例えばデンプン又はセルロース誘導体、例えばカルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース及び他のセルロース誘導体、吸水性親水コロイド、カラギーナン、ヒアルロン酸 (例えば、場合により塩化ナトリウムを含むヒアルロン酸ゲル)、及びアルギン酸塩、例えばアルギン酸プロピレングリコールである。
軟膏基剤の例は、非限定的に、蜜蝋、パラフィン、セタノール、セチルパルミチン酸、植物油、脂肪酸のソルビタンエステル(Ｓｐａｎ)、ポリエチレングリコール、及び脂肪酸ソルビタンエステルと酸化エチレンとの縮合物、例えばモノオレイン酸ポリオキシエチレン・ソルビタン(Ｔｗｅｅｎ)である。
疎水性軟膏基材の例は、非限定的に、パラフィン、植物油、動物性脂肪、合成グリセリド、ワックス、ラノリン、及び液体ポリアルキルシロキサンである。
親水性軟膏基剤の例は、非限定的に固体マクロゴール(ポリエチレングリコール)である。
粉末成分の例は、非限定的に、アルギン酸、コラーゲン、ラクトース、粉末であって、傷に適用された場合にゲルを形成できる(液体／傷からの浸出液を吸収する)成分である。
希釈剤及び崩壊剤の例は、非限定的にラクトース、サッカロース、エムデックス(emdex）、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、デンプン及び微結晶セルロースである。
結合薬の例は、非限定的に、サッカロース、ソルビトール、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン及びポリエチレングリコールである。
湿潤薬の例は、非限定的にラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート８０である。
潤滑剤の例は、非限定的に、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、酸化ケイ素、プレシロール及びポリエチレングリコールである。
被膜薬剤の例は、非限定的に、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポイビニルプロピリドン、エチルセルロース及びポリメチルアクリレートである。
座剤基材の例は、非限定的に、カカオ脂、アデプス・ソリダス(Adeps solidus)及びポリエチレングリコールである。
α-ＭＳＨアナログは、医薬品の重量あたり０.００１〜９９％、一般的には０.０１〜７５％、より一般的に０.１〜２０％、特に１〜１５％、例えば１〜１０％の量で医薬品中に存在する。
用量は、治療される状態に左右される。個々の薬剤は、当業者に知られている用量で使用されうる。本発明に記載される１以上のペプチドの投与量が、１ｎｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ体重、一般的に１μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重、より一般的に１０μｇ〜１ｍｇ／ｋｇ体重、例えば５０〜５００μｇ／ｋｇ体重であることが意図される。
さらなる態様では、本発明は、場合により医薬として許容される担体を伴って本発明に記載される１以上のペプチドを含む上記医薬組成物に関する。
本発明に従った医薬組成物は、当業者に知られている慣用技術を用いることにより、そして慣用の医薬担体を伴って製造される。さらに、医薬組成物は、本明細書に記載される任意の使用に適した任意の形態であってもよい。
本明細書に記載され、そして特許請求される発明は、本明細書に開示された具体的実施態様により範囲を制限されるべきではない。なぜなら、これらの実施態様は、本発明の幾つかの態様の例示として意図されるからである。任意の同等の実施態様は、本発明の範囲内であることが意図される。さらに、本明細書に示されそして記載されている発明に加えて、本発明の様々な改変が、前述の記載から当業者に明らかになるであろう。この様な改変は、添付の特許請求の範囲内に入ることが意図される。
様々な参考文献が本明細書に引用される。この開示は、その全てを本明細書に援用される。
この明細書を通して、「含む」という語句、又は「含んでいる」又は「含む」などの変化形は、記載された要素、整数又はステップ、或いは要素、整数又はステップの群を含めることを意図するが、任意のほかの要素、整数又はステップ、或いは要素、整数又はステップの群を除くことを意図しない。
本発明の様々な態様、及びこれらの態様の具体的な実施態様についての上の記載について、１の態様及び/又は本発明の態様の１の実施態様と組み合わせて上に記載され、言及された任意の特性及び特徴は、記載された本発明の他のいくらか又は全ての態様の類似点により適用することが理解されるべきである。
本発明は、以下に、非限定的な図面及び実施例により記載される。
以下において、本発明のペプチドを試験する方法が、一般的に記載されている。試験されたペプチドについての結果は、実施例１〜７に与えられる。本方法の目的は、虚血、炎症又は薬剤の毒性効果の結果として生じる細胞/組織/臓器の機能障害を抑制又は予防する抗炎症効果及び能力について本発明のペプチドを試験することである。
炎症応答又は慢性炎症における再燃は、細胞性メディエーター、例えば腫瘍壊死因子α(ＴＮＦ-α)、インターロイキン(ＩＬ-１β、ＩＬ-８)、一酸化窒素(ＮＯ)、及び遊離の酸素ラジカルの産生により特徴付けられる。これらは、最終的に、全身の血管において細動脈の緊張の喪失を伴う広範囲の内皮損傷、毛細血管透過性、持続性高血圧及び臓器不全を誘導する。肺での臓器不全は、好中球及び好酸球を含む白血球の肺胞領域への集積を伴う。病原菌から放出されるリポ多糖(ＬＰＳ)は、ＴＮＦ-αを含む多くの炎症メディエーターを誘導することにより、感染に対する炎症応答に中心的な役割を果たす。ＴＮＦ-α産生を抑制する能力を用いた治療は、その結果、顕著な抗炎症効果を有することが信じられている。本発明者は、多くのセットアップ(実施例１-３を参照)において炎症応答を産生する為にＬＰＳ刺激を用い、そして本発明に従ったペプチドの抗炎症効果についての主なマーカーは、ＴＮＦ-α産生を抑制する能力である。
動脈血供給の低減/完全な停止により誘導される虚血は、好中球の集積、他の炎症応答及び細胞死を含む複数の組織反応を誘導する。虚血/炎症の結果として生じる多くの細胞/組織/臓器の機能障害又は破壊を抑制又は予防できる化合物の同定はかなりの利益がある。発明者は、一時的な虚血について２つのモデルを使用する：１)ラットにおける心筋虚血再灌流モデル、当該モデルは、、急性心筋梗塞を発達させ、次に、線溶療法又は冠動脈血管形成術により達成されるように(実験例４)、血液供給の回復させることを模倣する。２)両側腎動脈狭窄、当該狭窄は、外科的大介入を受けている患者において見られる様に、腎臓血液供給の一時的な低下により誘導されるＡＦＲに匹敵する急性腎不全(ＡＲＦ)を誘導する(この例は、腹部大動脈瘤のための外科的介入でありうる)(実験例５)。
腎毒性は、シスプラチン治療の周知の副作用である。必ずしもそうではないが、用量制限のある腎毒性はそれでも大部分の患者に影響を与え、そして糸球体ろ過率の有意な低下が治療の間に観察される。シスプラチンの腎毒性は、特に腎近位尿細管のＳ３セグメントにおける外側髄質におけるネフロン、並びにヘンレ係蹄の厚上行脚(thick ascending limb)におけるネフロンにおける直接的な細胞傷害性損傷として現れる。それゆえ、シスプラチン処理は、尿を希釈する能力の障害を含む尿細管再吸収の欠損を招く。シスプラチンで治療された患者の５０％において、低マグネシウム血症が観察され、そしてこれは、おそらく、腎臓マグネシウム再吸収の欠損のために生じる。Ｍｇ補給が、シクロスポリンＡの腎毒性作用に対する保護に決定的な因子であることが、近年の研究により示唆され、そしてＭｇ欠損とシスプラチン誘導性の腎毒性との間の潜在的な反応が示唆されてきた。低マグネシウム血症を予防することを目的とした処置が、その結果、Ｍｇ補給の必要性を低下させるだけでなく、シスプラチンの腎毒性を低下させる有利な効果を有する。本発明に従ったペプチドのシスプラチン誘導性腎毒性についての効果は、実験例６で試験された。
材料と方法
本発明のペプチドは、以下に記載される方法の試験化合物である。
実験例１
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血球によるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-α産生の抑制
ＥＤＴＡ入りのＶａｃｕｔａｉｎｅｒ（登録商標）チューブ中に２０ｍｌのヒト血液を回収した。Ｆｉｃｏｌｌ-Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ(Amershamの製品、71-7167-00 AD, 2002-06)を用いてＰＢＭＣを単離した。トリパンブルー溶液(Sigma)を用いてＰＢＭＣを計数し、そして１０ｍＭのＨｅｐｅｓ(Sigma)、２ｍＭのＬ-グルタミン(Sigma)、０.１％のＢＳＡ(Sigma)及び５０Ｕ／５０μｇ／ｍＬのペニシリン／ストレプトマイシン(Sigma)を添加したＲＰＭＩ１６４０(Applichem)中で５×１０5細胞/ｍｌの濃度でインキュベートした。単離ＰＢＭＣを、培地、１０ｎｇＬＰＳ/ｍｌ(Sigma)、及び試験化合物を入れた２４ウェル平底プレート(Corning Incorporated)中で、加湿５％ＣＯ2、９５％空気中でインキュベートした。１８時間後、サンプルを遠心し、そして上清中のＴＮＦ-αを、Human Biotrak ELISA System(Amersham)からの腫瘍壊死因子α[(ｈ)ＴＮＦ-α]を用いて計測した。
サンプルをドナーごとに以下のようにインキュベートした：
ＲＰＭＩ中のＰＢＭＣ(時間対照)
１０ｎｇＬＰＳ／ｍｌを伴うＰＢＭＣ(ビヒクル)
ＰＢＭＣ、１０ｎｇＬＰＳ／ｍＬ、１０-17Ｍのα-ＭＳＨ又はα-ＭＳＨアナログ
ＰＢＭＣ、１０ｎｇＬＰＳ／ｍＬ、１０-15Ｍのα-ＭＳＨ又はα-ＭＳＨアナログ
ＰＢＭＣ、１０ｎｇＬＰＳ／ｍＬ、１０-13Ｍのα-ＭＳＨ又はα-ＭＳＨアナログ
ＰＢＭＣ、１０ｎｇＬＰＳ／ｍＬ、１０-11Ｍのα-ＭＳＨ又はα-ＭＳＨアナログ
ＰＢＭＣ、１０ｎｇＬＰＳ／ｍＬ、１０-9Ｍのα-ＭＳＨ又はα-ＭＳＨアナログ
ＰＢＭＣ、１０ｎｇＬＰＳ／ｍＬ、１０-7Ｍのα-ＭＳＨ又はα-ＭＳＨアナログ
全てのサンプルを、最初のストック溶液から１.４×１０-4Ｍ〜１.８×１０-3Ｍで希釈する。
当該化合物の容器の表面への結合を保護するために、全ての溶液をＢＳＡ被膜容器中で取り扱う。
データを平均±ＳＥで示す。ＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α遊離についての試験化合物の効果は、ＬＰＳビヒクル群におけるＴＮＦ-αの蓄積の割合として表現される。全ての比較は、スチューデントの対応のないｔ検定で分析した。確率水準(ｐ)＝０.０５を有意差とした。
実験例２
ｉｎ ｖｉｖｏでのラットにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦαの抑制
実験動物
雌Ｗｉｓｔａｒラット(２２０〜２４０ｇ)をCharles River, Sulzfeld, Germanyから購入し、そして１２時間の明暗サイクル(午前６時から午後６時まで明るくする)で温度及び湿度が調節された動物室中(２２〜２４℃)(４０〜７０％)で飼育した。ラットを、１４０ｍｍｏｌ／ｋｇのナトリウム、２７５ｍｍｏｌ／ｋｇのカリウム及び２３％タンパク質(Altromin International, Lage, Germany)を含むげっ歯類の標準飼料で維持し、そして自由に水へとアクセスさせた。
動物標本
イソフルラン-亜酸化窒素麻酔中に大腿動脈及び静脈を介して、腹部大動脈及び下大静脈中に、常設医療品質のＴｙｇｏｎカテーテルを動物にインプラントした。設置の後に、動物を個別に７〜１０日間、実験の日まで飼育した。
実験プロトコル
実験前に、全てのラットを、それぞれ２回２時間トレーニングさせることにより実験に使用する梗塞ケージに順応させた。実験の日に、動物を拘束ケージに移し、そして１５０ｍＭのグルコースを含むビヒクル溶液を静脈内に輸液を開始した。輸液速度は、実験を通して０.５ｍｌ／時であった。短い適応期間の後に、リポ多糖(ＬＰＳ)の輸液を開始する。ＬＰＳ(大腸菌セロタイプ０１２７ Ｂ８、Ｌ ３１２９、Sigma、St.Louis, USA)を４ｍｇ／ｋｇ体重の用量でｉ.ｖ.輸液として１時間かけて与えた。０.３ｍｌの動脈血試料を、ＬＰＳ輸液開始後６０、９０、及び１２０分でとり、そして通常のドナーラットから直ぐにヘパリン化血と取り替えた。
実験群：
ＬＰＳ輸液に加えて、全てのラットを、以下の：
ビヒクル(０.５ｍｌ等張生理食塩水)
以下の用量：５０μｇ／ｋｇ体重；２００μｇ／ｋｇ体重又は１０００μｇ／ｋｇ体重のうちの１の用量のα-ＭＳＨ；
以下の用量：５０μｇ／ｋｇ体重；２００μｇ／ｋｇ体重又は１０００μｇ／ｋｇ体重のうちの１の用量の試験化合物
のボーラス注射で処理する。
血漿中のＴＮＦ-αの計測：
血液試料を予め凍結された、０.５ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７.４、及び２０×１０6ＩＵ／ｍｌアプロチニンを入れた試験管中に回収した。４℃で遠心した後に、血漿サンプルを予め凍結させた試験管に移し、そして-２０℃でのちにＴＮＦ-αを計測するまで貯蔵した。血漿中のＴＮＦ-αは、ＥＬＩＳＡにより決定される(Biotrak,Amersham, UK)。
統計分析
結果を平均±ＳＥとして示す。繰り返し計測についての２-ウェイＡＮＯＶＡを、群間の差について試験するために用いる。ｐ＜０.０５の場合、対応するペプチド間の差は、対応のないｔ検定により評価され、有意差のレベルについてボンフェローニの補正を行った。
実験例３
ラットにおけるＬＰＳ吸入後の好中球及び好酸球浸潤の抑制
M&B A/S, DK-8680 Ry, Denmarkから得た雄のスプラーグ-ドーリーラット(体重〜２００ｇ)を全ての実験に用いた。ラットを標準３型ケージにいれ、そして１２時間の明暗サイクル(午前６時から午後６時まで明るくする)で温度及び湿度調節された動物室(２２〜２４℃、４０〜７０％)で飼育した。食餌は、オートクレーブ済みのAltromin 1324特別処方(Altromin Denmark, Chr. Pedersen A/S, 4100 Ringsted, Denmarkにより販売される)であった。
馴化後に、ラットをランダムに実験群に割り当て、そしてＬＰＳ誘導の開始時、及びＬＰＳ誘導後８時間でもう一度、試験化合物をＩ.Ｖ.で投与した。
第３群のラットを０.１ｍｌのヒポノルム／ドルミカムpr.で麻酔し、１００ｇの試験化合物を投与した。投与後すぐに、ラットを吸入チャンバー内に配置し、ここでラットは噴霧上のＬＰＳ溶液に晒した。ＬＰＳの濃度は、１ｍｇ／ｍｌである。投与時間は、１５分である。ラットを試験物質を投与後２４時間で安楽死させた。最後にラットはＣＯ2／Ｏ2で安楽死させた。次に気管支洗浄を、６×２.５ｍｌのＰＢＳを右肺に入れ、そして取り出すことにより行う。胸骨と助骨を取り除いた後に、肺を胸腔中に留めて行う。左肺への接続を、この方法を行う間に結紮した。気管支肺胞洗浄液(ＢＡＬＦ)を４℃で１０分間１０００ｒｐｍで遠心する。上清を取り除いた後に、細胞ペレットを０.５ｍｌＰＢＳ中に懸濁する。Ｍａｙ-Ｇｒｕｗａｌｄ Ｇｉｅｍｓａ染色で染色された２個のＢＡＬＦのスメアを各ラットから作成した。各ラットからのＢＡＬＦを総細胞数の計測にかけ、そして白血球の百分率を計算する。
実験群：
ＬＰＳの注入に加え、ラットを以下の：
ビヒクル(０.５ｍｌ等張生理食塩水)
α-ＭＳＨ：２００μｇ／ｋｇ／ｂｗ
α-ＭＳＨアナログ：２００μｇ／ｋｇ／ｂｗ
のいずれかのボーラス注射で処理する。ＬＰＳ吸入をされなかった時間対照群は、ビヒクルで処理される。
統計
データは、平均±標準偏差として示される。分散の１ウェイ分析を行い、次にフィッシャーの最小有意差検定行うことにより、群間比較を行う。
実験例４
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＬＰＳ誘導性サイトカイン放出及びブタにおける肺高血圧の抑制
雌のランドレースブタ(Landrace pig)(〜３０ｋｇ)を一晩絶食させたが、水は自由に与えた。次に、ブタに筋中でケタミン(１０ｍｇ／ｋｇ)及びミダゾラム(０.２５ｍｇ／ｋｇ)を前投与する。静脈内ケタミン(５ｍｇ／ｋｇ)で麻酔を誘導する。ブタに経口挿管し、そしてフェンタニル(６０μｇ／ｋｇ／ｈ)及びミダゾラム(６ｍｇ／ｋｇ／ｈ)を連続静脈内輸液して麻酔を維持する。動物を、体積制御ベンチレーター(Servo 900ベンチレーター；Siemens Elema, Solna, Sweden)を用いて５ｃｍＨ2Ｏの呼吸終末陽圧でベンチレートした。１回換気量を１０〜１５ｍｌ／ｋｇに維持し、そして炭酸正常状態を維持するために(３４〜４５ｍｍＨｇの範囲の二酸化炭素圧[ＰａＣＯ2])、呼吸数を調節した(２０〜２５回の呼吸／分)。１０５ｍｍＨｇを超える動脈酸素圧(ＰａＯ２)を達成するために空気中の酸素を用いて行った。１の動脈及び２の静脈シースを、輸液のために頚動脈及び対応する静脈に配置した。液体を満たしたカテーテルを通して血圧を計測し、血液サンプリング及び導入カテーテルに用いた。
Ｓｗａｎ-Ｇａｎｚカテーテル(Edwards Lifescience Crop.,Irvine, CA)を右上大静脈を介して、肺動脈に挿入する。バルーンカテーテルの位置を、心臓の右側を通して肺動脈へと進める際のモニター上での特徴的な圧力追跡を観察することにより、並びにＸ線により測定した。別のカテーテル(5 French; St. Jude Medical Company, St. Paul, MN)を連続血圧モニタリング及び血液サンプリングのために左頚動脈中に挿入する。尿カテーテルを尿採取のために挿入する。心臓パフォーマンスをアッセイする際に、一時的ペースメーカーカテーテルを、静脈シースを通して右心房へと挿入して(Ｘ線ガイド)、心拍を標準化した。
血行動態モニタリング
心臓血圧、心拍数(心電図)、及び肺動脈圧(ＰＡＰ)の連続観察を行った。
リポ多糖注入
大腸菌リポ多糖エンドトキシン(大腸菌、０２６：＿６、バクトリポ多糖；Difco Laboratoies、Detroit、MI)を、全ての沈殿を溶解するために各実験の前に１２０分間生理食塩水中に溶解した。安定期間後に、リポ多糖の注入は、２.５μｇ／ｋｇ／ｈの割合でベースラインで開始し、そして徐々に３０分間、１５μｇ／ｋｇ／分に増加させた。この後に、１５０分間、２.５μg／ｈｋｇ／ｈの割合で維持し、そしてその後に止めた。
介入群
ＬＰＳ注入を開始する直前に、対照群に介入群と等体積のビヒクルを与える。介入群に１回静脈内ボーラス注射として、α-ＭＳＨアナログを２００μｇ／ｋｇの用量で与える。
サイトカイン
ＥＤＴＡ安定化血液から得られた新鮮凍結血漿サンプル(-８０℃)を、製造説明書に従って、市販の酵素結合免疫吸着アッセイを用いることによりＴＮＦ-αの計測のために使用する。
統計
データを平均±Ｓ.Ｅ.で表す。群間比較を、分散の１ウェイ分析の次にフィッシャーの最小有意差検定を行うことにより行なう。差は、０.０５レベルで有意であるとした。
実験例５
ラットの左前下行枝の６０分間の閉塞により誘導される心筋梗塞のサイズの抑制
バリア-ブレッド(barrier-bred)及び特定病原菌除去ウィスターラット(２５０ｇ)をCharles River, Hannover, Germanyから購入した。動物を１２時間の明暗サイクルの温度及び湿度調節動物室(２２〜２４℃、４０〜７０％)で飼育した(午前６時から午後６時までを明るくした)。全ての動物に水道水、並びに約１４０ｍmol/ｋｇのナトリウム、２７５ｍｍｏｌ/ｋｇのカリウム及び２３％のタンパク質を含むペレット状のラット飼料(Altrominカタログ番号１３１０、Altoromin International Large, Germany)を自由に与えた。
大腿静脈及び動脈を介して、下大静脈及び腹部大動脈に常設医療品質のＴｙｇｏｎカテーテルを設置する。１週間後、ラットを４％イソフルラン+Ｏ2で吸入チャンバー内で麻酔する。気管内チューブの挿入後、Hugo Basile Rodentベンチレーターを用いて、動物を人工的に１.０％イソフルランを含むＯ2をベンチレートした。一回換気体積を８〜１０ｍｌ/ｋｇ ｂ.ｗ.及び呼吸回数を７５分-1とし、これにより動脈ｐＨを７.３５から７.４５に維持した。外科手術の間に、直腸温度を３７℃から３８℃に維持する加熱台に当該動物を置いた。標準ＥＣＧ(二次リード(second lead))を、Hugo Sachs ECG Couplerを用いて計測し、そして４０００ＨｚのＰｏｗｅｒＬａｂでオンラインで回収した。胸骨傍での開胸術及び心膜を開口した後に、左前下行枝(ＬＡＤ)を目に見える位置にした。結紮の再開口を可能にする閉塞器(occluder)を用いた非外傷性の６-０絹縫合を、肺躯幹(pulmonary trunk)と左心耳のより低い右末端との間のＬＡＤの周囲に配置した。１０分後、左前下行枝(ＬＡＤ)を閉塞させる。閉塞の成功は、ＥＣＧの変化(ＳＴ上昇及びＲ波振幅の増大)の変化により、及びＭＡＰの減少により確認された。再灌流は、閉塞を開口することにより行なった。対照ラットは偽手術される。
ラットは、以下の：
ビヒクル：０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ
α-ＭＳＨ：２００μｇ又は１０００μｇのα-メラニン細胞刺激ホルモン/ｋｇ ｂ.ｗ.を含む０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ
試験化合物：２００μｇ又は１０００μｇの試験化合物/ｋｇ ｂ.ｗ.を含む０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ
のｉ.ｖ.処理のうちの１にかける。
虚血及び壊死心筋の大きさの決定
ラットを、虚血／再灌流後に麻酔状態を維持し、そしてＬＡＤの再拘束を、再灌流後３時間で行なった。この期間の間に、ＥＣＧ及びＭＡＰを連続して計測した。次に虚血領域のサイズを決定するためにＥｖａｎｓ青色色素(１ｍｌ；２％ｗ／ｖ)をｉ.ｖ.で投与した。心臓を取り除き、そして水平切片に切り、虚血領域の大きさを決定した。心臓を取り出し、そして水平切片に切り、虚血領域の大きさを決定し、そして非虚血心筋から虚血心筋を分離した。虚血領域を単離し、そして０.５％トリフェニルテトラゾリウム・クロリド溶液で３７℃で１０分間インキュベートした。ネクローシス組織の大きさは、次に、コンピューターによるイメージプログラムを用いることによって計測した。さらなる動物の実験例では、動物は、術後にブプレノルフィンで処理され、そしてケージに戻し、医薬による治療の高層性心不全の発達についての効果を評価するために、２週間後に左心室拡張末期圧(ＬＶＥＤＰ)を計測した。右頚動脈を介して左心室へと挿入される２Ｆマイクロチップカテーテルを用いて、ＬＶＥＤＰを計測した。８５〜９０ｍｍＨｇに平均動脈血圧(ＭＡＰ)を安定化させるために、イソフルラン濃度を調節した。
統計
データを、平均±Ｓ.Ｅ.で示す。スチューデントの対応のあるｔ検定を用いて群間比較を分析する。群間比較を、分散の１ウェイ分析をし、次にFishersの最小有意差検定により行なった。０.０５レベルで差を有意差とみなした。
実験例６
ラットにおいて、腎動脈の４０分の両側閉塞により誘導される腎不全の抑制
バリア-ブレッド及び特定病原体除去の雌ウィスターラット(２５０ｇ)をCharles River, Hannover, Germanyから購入した。当該動物を１２時間の明暗サイクルで温度及び湿度調節動物室(２２〜２４℃、４０〜７０％)で飼育した。全ての動物に水道水、並びに約１４０ｍmol/ｋｇのナトリウム、２７５ｍｍｏｌ/ｋｇのカリウム及び２３％のタンパク質を含むペレット状のラット飼料(Altrominカタログ番号１３１０、Altoromin International Large, Germany)を自由に与えた。
前もって常設静脈カテーテルを設置されたラットを、代謝ケージに入れ、そして代謝ケージに２日間馴化後に、両側腎動脈を６０分間閉塞させることにより実験的にＡＲＦを誘導した。外科手術の間、ラットをイソフルラン-亜酸化窒素で麻酔し、そして加熱テーブルに置いて直腸温度を３７℃に維持した。両方の腎臓を側腹切開を通してあらわにし、脂肪被膜から切り離すことにより可動化した。次に、腎動脈の一部分を、動脈からゆっくり切り離した。腎動脈を平滑表面血管クリップ(６０ｇ圧；World Precision Instruments, UK)で４０分間閉塞させた。全ての腎臓表面の青白化により、完全な虚血が確認される。虚血期間の間、体温を維持するために創傷を一時的に閉じた。クリップを取り除いた後に、血液の再灌流を示す色の変化を確かめるために、腎臓をさらに２〜５分間観察した。次に傷を３-０絹結紮糸で閉じた。ラットを代謝ケージに戻し、そして毎日２４時間尿量と水の摂取量を５日間計測した。対照群として、ＡＲＦラットについて用いた手術と同一であるが、腎動脈の結紮を行なわない偽手術をラットに行なった。偽手術されたラットは、ＡＲＦを患うラットと平行してモニターされた。
ラットに、以下の：
ビヒクル：０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ、
α-ＭＳＨ：２００μｇのα-メラニン細胞刺激ホルモン/ｋｇ ｂ.ｗ.を含む０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ、
試験化合物：２００μｇの試験化合物/ｋｇ ｂ.ｗ.を含む０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ
のｉ.ｖ.処理のうちの１を行なう。腎臓の再灌流の５分前に処理を行い、そして続いて６及び２４時間後に行なう。
統計
データを平均±Ｓ.Ｅ.として示す。群間比較は、スチューデントの対応のあるｔ検定を用いて分析した。群間比較を、分散の１ウェイ分析を行い、次にＦｉｓｈｅｒの最小有意差試験を行なった。０.０５レベルの差を有意差とした。
実験例７
シスプラチン誘導性腎不全の抑制
前もって常設静脈カテーテルを設置されたラットを代謝ケージにいれ、そして代謝ケージへの馴化期間の後に、ラットを腹腔内シスプラチン注射５.０ｍｇ／ｋｇｂｗを含む０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ又はビヒクル(０.５ｍｌ・１５０ｍＭ・ＮａＣｌ)で処理した。５日後、次にラットを代謝ケージに戻し、そして続く５日間、毎日２４時間の尿量及び水摂取量を計測し、そして回収した。次に全てのラットをハロタン／Ｎ2Ｏで麻酔し、そして動脈血液サンプルを予め凍結されたＥＤＴＡ被膜バイアル中に回収した。血液サンプルを、０.５ｍＭ・ＥＤＴＡ、ｐＨ７.４、及び２０×１０6ＩＵ／ｍｌアプロチニンを入れた予め凍結された試験チューブに回収し、そして-２０℃で、クレアチニン及びマグネシウム(Ｍｇ)を後に計測した。このクレアチニンに加えて、血液採取の前の最後の２４時間の期間回収された尿を計測する。糸球体ろ過量(ＧＦＲ)の指標として使用されるクレアチニンクリアランス(Ｃcr)は、Ｃcr＝Ｖu×Ｕcr／Ｐcrとして計算できる。ここでＶuは、２４時間の尿生産である；Ｕcrは、尿についてのックレアチニン濃度であり、そしてＰcrは、血漿におけるクレアチニン濃度である。尿及び血漿におけるクレアチニンの計測は、臨床化学システムＶＩＴＲＯＳ９５０(Ortho-Clinical diagnostics Inc., Johnson & Johnson, NJ)及びRoche Hitachi Modular (Roche Diagnostics, Manheim, Germany)を用いることにより行なわれる。
ラットを以下の：
ビヒクル：０.５ｍｌ・１５０ｍＭ・ＮａＣｌ、
α-ＭＳＨ：２００μｇのα-メラニン細胞刺激ホルモン／ｋｇ ｂ.ｗ.を含む０.５ｍｌ１５０ｍＭ・ＮａＣｌ、
試験化合物：２００μｇの試験化合物／ｋｇ ｂ.ｗ.を含む０.５ｍｌの１５０ｍＭ・ＮａＣｌ、
のi.v.処置のうちの１を行なう。腎臓の再灌流の５分前に処置を行い、そして６時間及び２４時間後に処置を行なう。
統計
データーを平均±Ｓ.Ｅ.として示す。群間比較を、スチューデントの対応のあるｔ検定で分析した。群間比較は、分散の１ウェイ分析を行ない、次にＦｉｓｈｅｒの最小有意差検定を行なうことにより行なわれる。０.０５レベルの差を有意差とした。
結果
実施例１
試験化合物は、以下のα-ＭＳＨアナログ＃１：
Ａｃ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号１*：Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている)
である。当該化合物は、実験例１-７で試験された。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血球によるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α産生の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の両方が、独立して、ヒト白血球懸濁液におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの蓄積を低減させた。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の抑制性効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症性効果よりも顕著に強調されている。これと対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、ＴＮＦ-α蓄積をビヒクルの４７±２％に低減することができる(αＭＳＨに対してＰ＜０.０１)(図１を参照のこと)。
ｉｎ ｖｉｖｏでのラットにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α産生の抑制
α-ＭＳＨとα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の両方が、ＬＰＳのｉｖ注入の間ラットにおいてＴＮＦ-αの蓄積を低減した。α-ＭＳＨ並びにα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の投与量で達成し、そしてＴＮＦ-α産生に対する最大抑制効果は、ＬＰＳ融合の開始後１２０分で見られる。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)抑制性効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果よりも顕著により強調される。ラット血漿中のＴＮＦ-α濃度を、最大応答(ＬＰＳ-ビヒクル)の１７±３％に抑制する一方、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、ＴＮＦ-α蓄積を９±１％のビヒクルに低減することができる(α-ＭＳＨに対してＰ＝０.０５)(図２を参照のこと)。
ラットにおけるＬＰＳ吸入後の好中球及び好酸球の浸潤の抑制
α-ＭＳＨとαＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の両方が、ＬＰＳ吸入後２４時間で収集された気管支肺胞洗浄液中の好酸球の顕著な減少により示されるように、肺胞スペース内におけるＬＰＳ吸入に対する炎症応答を低減する。α-ＭＳＨ処置は、ＢＡＬＦの好酸球の数を、２６.７±４.３×１０5細胞に低減し(ビヒクルに対してＰ値＜０.０５)、そしてα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、好酸球の数を、４９.０±１０.５×１０5細胞(ビヒクルに対してＰ値＜０.０５)に低減し、ＢＡＬＦ中の好酸球の数が１６４.６±４２.２×１０5細胞であるビヒクル処理されたラットに比べられる(図３を参照のこと)。上と一致して、ＢＡＬＦ内の好中球の数の効果は、α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)と同様である。
ｉｎ ｖｉｖｏにおいてブタのＬＰＳ誘導性サイトカイン放出及び肺性高血圧の抑制
α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)で処理されたブタにおいてＬＰＳ誘導後に、ＴＮＦαの血漿濃度の顕著な低下により示される顕著な抗炎症効果を有する。この抗炎症効果に加えて、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、驚くべきことに、肺性高血圧の発達に対する保護能力を有し、当該能力は、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１)で処理されたラットにおいて見られたＰＡＰのＬＰＳ誘導性の増加の顕著な減少により証拠付けられる(ＰＡＰの最大増加：ビヒクルについて２２±４ｍｍＨｇ、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)について８±２ｍｍＨｇ；ｐ＝０.０５)(図４を参照のこと)。
ラットにおける左前下行枝の６０分間の閉塞により誘導される心筋梗塞のサイズの抑制
α-ＭＳＨとは対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、驚くべきことに、ＬＡＤ-再灌流後３時間で計測されたリスク領域の画分としての壊死領域として表現される心筋梗塞サイズを低下させる。α-ＭＳＨアナログ＃１の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成され、ここで梗塞サイズの低下は、ビヒクル処理されたラットに比べて約３０％である(ビヒクルについてリスク領域の５０.６±２.６％、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)についてリスク領域の３５.７±５.６、ｐ＝０.０１)(図５を参照のこと)。１０００μｇ／ｋｇ体重の用量で、梗塞サイズの低減は、ビヒクル処理されたラットに比較して〜３０％である(α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)についてリスク領域の３５.０±４.４％、ビヒクルに対してｐ＜０.０１)(図５を参照のこと)。６０分のＬＡＤの閉塞後の１４日目の動物のさらなる実験例での左心室拡張末期圧(ＬＶＥＤＰ)の計測により、梗塞サイズのα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の有利な効果がＬＶＥＤＰの顕著な低下、そしてそれにより、梗塞後うっ血性心不全の発達の顕著な低下を伴うことが示された(ＬＶＥＤＰ：α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)：１０.４±２.９ｍｍＨｇ；対ビヒクル：２０.０±２.２ｍｍＨｇ；Ｐ＜０.０１；対時間対照７.５±２.３ｍｍＨｇ；ＮＳ)(図６を参照のこと)。
ラットにおける腎動脈の４０分間の両側閉塞により誘導される腎不全の抑制
６０分の両側腎虚血(ＲＩＲ)は、顕著な虚血多尿症を誘導する。ＲＩＲラットは、持続性多尿症を患い、虚血誘導の４日後に、偽手術対照ラットと比べて１０１％だけ増加した(ＲＩＲ-ビヒクル：３４.８±３.３ｍｌ／２４時間対時間対照：１７.３±２.１ｍｌ／２４時間、Ｐ＜０.０１)。α-ＭＳＨ処理は、多尿症を低減することができない(ＲＩＲ-α-ＭＳＨ：２９.０±２.９ｍｌ／２４時間；ＮＳ対ＲＩＲ-ビヒクル)。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)は、尿流量の完全な通常化を誘導できる(ＲＩＲ-α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)：１８.８±３.６ｍｌ／２４時間；ＮＳ対時間対照；Ｐ＜０.０１対ＲＩＲ-ビヒクル)(図７を参照のこと)。
シスプラチン誘導性腎不全の抑制
シスプラチン処理は、顕著な低マグネシウム症及びＧＦＲの低下により証拠付けられるネフロン毒性を誘導する。これに従って、シスプラチン及びビヒクルで処理されたラットは低マグネシウム血漿を誘導し(血漿Ｍｇ：０.６１±０.０４ｍＭ、対照ラット：０.７７±０.０５ｍＭ、Ｐ＜０.０５)、そしてＧＦＲの顕著な低下を誘導した。血漿Ｍｇは、シスプラチン及びα-ＭＳＨで処理されたラットにおいて低下した(０.３７±０.０４ｍＭ、Ｐ＜０.０５対対照ラット)。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)での処理は、シスプラチン誘導性の低マグネシウム血漿を抑制し(０.８４±０.０４ｍＭ、ＮＳ対対照ラット)、そしてシスプラチン誘導性のＧＦＲの低下を予防する。
実施例２
試験化合物は以下のα-ＭＳＨアナログ＃２：
Ａｃ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号５* Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)
である。
α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５)は、１０位でＭｅｔをＮｌｅに置換し、そして１３位のＰｈｅを(Ｄ-Ｐｈｅ)に立体化学的に置換する点でα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)とは異なっている。
当該化合物を、実験例１-３、及び５-７で試験した。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血球によるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の両方は、独立してヒト白血球懸濁液中でＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-αの蓄積を低減する。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果よりもより顕著である。α-ＭＳＨは、最大応答(ＬＰＳ-ビヒクル)の７３±９％にＴＮＦ-αの蓄積を抑制する。これとは対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)は、ビヒクルの４２±１１％へのＴＮＦ-αへと蓄積を低減できる(Ｐ＜０.０１対α-ＭＳＨ)(図８を参照のこと)。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の両方が、ＬＰＳのｉｖ注入の間にラットにおいてＴＮＦ-αの蓄積を低減する。α-ＭＳＨ並びにα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成される。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果よりも顕著に強調される。一方、α-ＭＳＨが、ラット血漿中へのＴＮＦ-αの濃縮を最大応答(ＬＰＳ-ビヒクル)の１７±３％へと抑制する一方、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)は、ＴＮＦ-αの蓄積を、ビヒクルの９±１％へと低減する(Ｐ＜０.０５対α-ＭＳＨ)(図９を参照のこと)。
ラットにおけるＬＰＳ吸入後の好中球及び好酸球の浸潤の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の両方が、ＬＰＳ吸入に応答する肺胞スペース内の炎症を低下させる。当該炎症の低下は、ＬＰＳ吸入後２４時間で回収されたＢＡＬＦ中の好酸球の顕著な低下により示される。α-ＭＳＨ処理は、ＢＡＬＦ中の好酸球の数を２６.７±４.３×１０5細胞に低減し(ビヒクルに対してＰ値＜０.０５)、そしてα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)が、ビヒクル処理されたラットに比べて、好酸球を３４.０±８.６×１０5細胞(ビヒクルに対してＰ値＜０.０５)に低減する。ビヒクル処理されたラットでは、ＢＡＬＦ中の好酸球数は、１６４.６±４２.２×１０5細胞である(図１０を参照のこと)。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)は、α-ＭＳＨに比べてＢＡＬＦ内の好中球についてより顕著な抑制効果を有した(α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)では９.１±２.４×１０5細胞、α-ＭＳＨでは２０.１±２.５×１０5細胞；Ｐ＜０.０５)(図１１を参照のこと)。
ラットにおいて左下行性冠動脈の６０分間の閉塞により誘導される心筋梗塞サイズの抑制
α-ＭＳＨとは対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)は驚くべきことに、ＬＡＤ再灌流後３時間で計測されたリスク領域の画分として壊死領域として表される心筋梗塞サイズを低減する。α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成され、ここで当該梗塞サイズの低下は、ビヒクル処理されたラットに比べて約２７％である(ビヒクルについてリスク領域の５１.４±２.１％の割合対α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)：リスク領域の３７.４±５.１％、ｐ＝０.０１)(図１２を参照のこと)。６０分のＬＡＤの閉塞の１４日後の動物のさらなる実験例における左心室拡張末期圧(ＬＶＥＤＰ)の計測は、梗塞サイズについてのα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)の有利な効果は、ＬＶＥＤＰの顕著な低下と関連し、それにより梗塞後うっ血性心不全の発達の低下と関連することを示す。
ラットにおける腎動脈の４０分の両側閉塞により誘導される腎不全の抑制
６０分の両側腎虚血(ＲＩＲ)は、顕著な虚血後多尿症を誘導した。ＲＩＲラットは、持続性多尿症を有した。虚血発作後５日で当該多尿症は、偽手術対照ラットに比べて１０１％だけ増加した(ＲＩＲ-ビヒクル：３４.８±３.３ｍｌ／２４時間対 時間対照：１７.３±２.１ｍｌ／２４時間、ｐ＜０.０１)。α-ＭＳＨ処置は、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)で処置することに比べて、ＲＩＲ後に見られる多尿症の程度を顕著に低減する。
シスプラチン誘導性の腎不全の抑制
シスプラチン処置は、顕著な低マグネシウム症及びＧＦＲの低下により証拠付けられるネフロン毒性を誘導する。これに従って、シスプラチン及びビヒクルで処置されたラットは、ＧＦＲの低下に関連する低マグネシウム症(血漿Ｍｇ：０.６１±０.０４ｍＭ、対照ラットに対して０.７７±０.０５ｍＭ、ｐ＜０.０５)を発達させる。血漿Ｍｇは、シスプラチン及びα-ＭＳＨで処置されたラットにおいても低減する(０.３７±０.０４ｍＭ、Ｐ＜０.０５対対照ラット)。これとは対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)は、シスプラチン誘導性低マグネシウム症、並びにシスプラチン誘導性ＧＦＲの低下を予防する。
実施例３
試験化合物は、α-ＭＳＨアナログ＃３：
Ａｃ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｄ-Ｎａｌ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2 (配列番号９* Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)
であった。
α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)は、１０位でＭｅｔをＮｌｅに置換し、そして１３位でＰｈｅをＤ-Ｎａｌに置換する点で、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)と異なる。
化合物は、実験例１、２及び５において試験される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血球によるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-α産生の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の両方は、用量依存的にヒト白血球懸濁物においてＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α蓄積を独立して低減する。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の抑制効果は、天然ペプチドであるα-ＭＳＨの抗炎症効果と比べて顕著により強調されている。α-ＭＳＨは、最大応答(ＬＰＳ-ビヒクル)の７３％±９％にＴＮＦ-αの蓄積を抑制する。これとは対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)は、ビヒクルの５３±１３％にＴＮＦ-αの蓄積を低減することができる(α-ＭＳＨに対してＰ＜０.０５)(図１３を参照のこと)。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットのＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の両方が、ＬＰＳのｉｖ注入の間、ラットにおいてＴＮＦ-αの蓄積を低減する。α-ＭＳＨ並びにα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の最大抑制効果が、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成される。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症性効果と比べて、顕著により強調されている。α-ＭＳＨがラット血漿において、最大応答(ＬＰＳ-ビヒクル)の１７±３％にＴＮＦ-α濃度を抑制する一方、α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)が、ビヒクルの１１±３％にＴＮＦ-αの蓄積を低減することができる(Ｐ＜０.０５対α-ＭＳＨ)(図１４を参照のこと)。
ラットにおける左前下行枝の６０分間の閉塞により誘導される心筋梗塞サイズの抑制
α-ＭＳＨとは対照的に、α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)は、驚くべきことに、ＬＡＤ再灌流後３時間でリスク領域の画分としての壊死領域として表現される心筋梗塞サイズを低下する。α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成され、ここで梗塞サイズの低下は、ビヒクル処理されたラットに比べて約２４％である(ビヒクルについて５１.３±２.１５、α-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)について３９.０±３.４％のリスク領域、ｐ＝０.０５(図１５を参照のこと)。ＬＡＤの６０分間の閉塞後１４日目での動物の追加実験例における左心室拡張末期圧(ＬＶＥＤＰ)の計測により、梗塞サイズについてのα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)の有利な効果が、ＬＶＥＤＰの顕著な低下に関連し、そしてそれにより梗塞後うっ血性心不全の発達の顕著な低下に関連するということが示された。
実施例４
試験化合物は、以下のα-ＭＳＨアナログ＃４：
Ａｃ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2(配列番号１３*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)
である。
α-ＭＳＨアナログ＃４(配列番号１３)は、８位においてＴｙｒをＳｅｒで置換し、９位においてＳｅｒをＩｌｅで置換し、１０位においてＭｅｔをＩｌｅで置換し、そして１１位においてＧｌｕをＳｅｒで置換する点でα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)と異なっている。
化合物を実験例１及び２で試験する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血病によるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃４(配列番号１３*)の両方ともが、ヒト白血球懸濁物において用量依存的にＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの蓄積を低減する。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃４(配列番号１３*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果よりも顕著により強調されている。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットでのＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃４(配列番号１３*)の両方は、ＬＰＳのｉｖ注入の間ラットにおいてＴＮＦ-αの蓄積を低減する。α-ＭＳＨ並びにα-ＭＳＨアナログ＃４の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成される。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃４の抑制効果は、天然ペプチドであるα-ＭＳＨの抗炎症性効果に比べて顕著により強調されている。α-ＭＳＨがラット血漿中のＴＮＦ-αの濃度を最大応答(ＬＰＳ-ビヒクル)の１７±３％に抑制する一方、α-ＭＳＨアナログ＃４(配列番号１３*)は、ＴＮＦ-α蓄積をビヒクルの１２±２％に低減することができる(α-ＭＳＨに対して、Ｐ＜０.０５)(図１６を参照のこと)。
実施例５
試験化合物は、以下のα-ＭＳＨアナログ＃５：
Ａｃ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2(配列番号１７*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化されている)である。
α-ＭＳＨアナログ＃５(配列番号１７)は、８位でＴｙｒをＳｅｒで置換し、９位でＳｅｒをＩｌｅで置換し、１０位でＭｅｔをＩｌｅに置換し、１１位位でＧｌｕをＳｅｒに置換し、そして１３位でＰｈｅの立体化学を(Ｄ-Ｐｈｅ)に置換する点でα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)とは異なる。
当該化合物は、実験例１及び２で試験される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血球によるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃５(配列番号１７*)の両方は、独立して、ヒト白血球懸濁におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α蓄積を低減する。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃５(配列番号１７*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果よりも顕著である。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットでのＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃５(配列番号１７*)の両者は、ＬＰＳのｉｖ注入の間ラットにおけるＴＮＦ-αの蓄積を低減する。α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃５(配列番号１７*)の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成される。驚くべきことにα-ＭＳＨアナログ＃５(配列番号１７*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果よりも顕著により強調される。
実施例６
試験化合物は、以下のα-ＭＳＨアナログ＃６：
Ａｃ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｇｌｕ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ-ＮＨ2(配列番号２*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)
である。
α-ＭＳＨアナログ＃６(配列番号２)は、１〜６位で(Ｌｙｓ)6を(Ｇｌｕ)6に置換する点でα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)とは異なっている。
当該化合物は、実験例１及び２において試験される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒト白血球によるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃６(配列番号２*)の両方が、独立してヒト白血球懸濁液中でＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α蓄積を低減する。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃６(配列番号２*)の抑制効果が、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果に比べてより顕著に強調されている。
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるラットでのＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃６（配列番号２*）の両方が、ＬＰＳのｉｖ注射の間ラットにおいてＴＮＦ-αの蓄積を低減する。α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃６（配列番号２*）の最大抑制効果は、２００μｇ/ｋｇ体重で達成される。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃６（配列番号２＊）の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果をよりも顕著に強調されている。
実施例７
試験化合物が、以下のα-ＭＳＨアナログ＃７：
Ａｃ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-(Ｄ-Ｖａｌ)-ＮＨ2(配列番号３*、Ｎ末端でアセチル化され、そしてＣ末端でアミド化される)である。
α-ＭＳＨアナログ＃７(配列番号３)は、１９位でＰｈｅの立体化学をＤ-Ｖａｌへと置換する点で、α-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)とは異なる。
当該化合物は、実験例１及び２において試験される。
ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてヒト白血球によるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃７(配列番号３)の両方が、独立してヒト白血球懸濁物中でのＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α蓄積を低減する。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃７(配列番号３*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果に比べて顕著により強調される。
ｉｎ ｖｉｖｏにおいてラットのＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産の抑制
α-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃７(配列番号３*)の両方が、ＬＰＳのｉｖ注入の間にラットにおいてＴＮＦ-α蓄積を低減する。α-ＭＳＨ、並びにα-ＭＳＨアナログ＃７(配列番号３*)の最大抑制効果は、２００μｇ／ｋｇ体重の用量で達成される。驚くべきことに、α-ＭＳＨアナログ＃７(配列番号３*)の抑制効果は、天然ペプチドα-ＭＳＨの抗炎症効果に比べて顕著により強調される。
参考文献
米国特許第４，２８８，６２７号
ＷＯ ９１／１７２４３
ＷＯ ９９／４６２８３
Figure 0005307542
Figure 0005307542
ヒトリンパ球の懸濁物におけるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-αの蓄積。当該図は、実験例１におけるα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)(ＭＣＡ＃１)の最大抗炎症効果を示す。ＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産についての最大抑制効果は、α-ＭＳＨ及びＭＣＡ＃１について１０-7Ｍだけ達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：ビヒクルに対しｐ＜０.０５、＃：α-ＭＳＨに対しｐ＜０.０５。 血漿におけるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-αの蓄積。当該図は、実験例２におけるα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の最大抗炎症効果を示す。ラットにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産についての最大抑制効果は、ｉｖで与えられた２００μｇ／ｋｇ体重のα-ＭＳＨ及びＭＣＡ＃１の両方により達成された。平均±ＳＥ(各群についてＮ＝４〜６)。*：ビヒクルに対してｐ＜０.０５、＃：α-ＭＳＨに対してｐ＜０.０５。 好酸球。当該図は、実験例３において肺内への好酸球の集積についてのα-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)(ＭＣＡ＃１)の効果を示す。両方の化合物は、ｉｖ ｂｉｄで与えられた２００μｇ／ｋｇ体重の用量で与えられた。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：ビヒクルとの差。 肺動脈圧。当該図は、ブタにおける肺動脈圧のＬＰＳ誘導性の変化についてのα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)(ＭＣＡ＃１)の効果を示す。平均±ＳＥ(２群においてＮ＝３及び６)。*：ビヒクルとの差。 再懸濁後３時間での梗塞サイズ。当該図は、実験例４における心筋梗塞サイズについてのα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の保護的効果を示す。ＭＣＡ＃１の最大効果は、ｉｖで２００μｇ／ｋｇ体重で与えられることにより達成される。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝５〜１０)。*：ビヒクルとの差。 ６０分間のＬＡＤ閉塞後二週後のＬＶＥＤＰ。当該図は、実験例４の梗塞後うっ血性心不全の発達についてのα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)(ＭＣＡ＃１)の保護的効果を示す。ＭＣＡ＃１の効果は、２００μｇ／ｋｇ体重により達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：偽手術に対してｐ＜０.０５；＃：ビヒクルに対してｐ＜０.０５。 利尿。当該図は、実験例５における虚血後多尿症の発達についてのα-ＭＳＨアナログ＃１(配列番号１*)の保護的効果を示す。ＭＣＡ＃１の効果を、ｉｖで与えられる２００μｇ／ｋｇ体重により達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝５〜７)。*：ビヒクルとは異なる。 ヒトリンパ球の懸濁物におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの蓄積。当該図は、実験例１におけるα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５)(ＭＣＡ＃２)の最大抗炎症効果を示す。ＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産についての最大抑制効果は、α-ＭＳＨ及びＭＣＡ＃２の両方について１０-7Ｍにより達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：ビヒクルとは異なる。 血漿におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの蓄積。当該図は、実験例２におけるα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５)(ＭＣＡ＃２)の最大抗炎症効果を示す。ラットにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生産についての最大抑制効果は、α-ＭＳＨ及びＭＣＡ＃２の両方についてｉｖで２００μｇ／ｋｇ体重により達成される。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝４〜６)。*：ビヒクルについてｐ＜０.０５；＃：α-ＭＳＨについてｐ＜０.０５。 好酸球。当該図は、実験例３における肺内への好酸球の集積についてのα-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)(ＭＣＡ＃２)の効果を示す。両化合物は、iｖ ｂｉｄで与えられる２００μｇ／ｋｇ体重で与えられる。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：ビヒクルとの差。 好中球。当該図は、実験例３における肺内への好中球の集積についてのα-ＭＳＨ及びα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)(ＭＣＡ＃２)の効果を示す。両方の化合物が、ｉｖ ｂｉｄで２００μｇ／ｋｇ体重の用量で与えられる。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：ビヒクルとの差。 再灌流後３時間での梗塞サイズ。当該図は、実験例４のいて心筋梗塞サイズについてのα-ＭＳＨアナログ＃２(配列番号５*)(ＭＣＡ＃２)の保護的効果を示す。ＭＣＡ＃３の効果を、ｉｖで与えられた２００μｇ／ｋｇ体重により達成した。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝５〜１０)。*ビヒクルとの差。 ヒトリンパ球の懸濁物におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの蓄積。当該図は、実験例１におけるα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)(ＭＣＡ＃３)の最大抗炎症効果を示す。ＬＰＳ誘導性ＴＮＦα産生についての最大抑制性効果は、α-ＭＨＳ及びＭＣＡ＃３の両方について１０-7Ｍにより達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝６〜９)。*：ビヒクルについてｐ＜０.０５；＃：α-ＭＳＨについてｐ＜０.０５。 血漿におけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-αの蓄積。当該図は、実験例２におけるα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９)の最大抗炎症効果を示す。ラットにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦαについての最大抑制効果は、α-ＭＳＨ及びＭＣＡ＃３の両方についてのｉｖで与えられる２００μｇ／ｋｇ体重により達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝４〜６)。*：ビヒクルについてｐ＜０.０５；＃：α-ＭＳＨについてｐ＜０.０５。 再灌流後３時間での梗塞サイズ。当該図は、実験例４において心筋梗塞サイズについてのα-ＭＳＨアナログ＃３(配列番号９*)(ＭＣＡ＃３)の保護的効果を示す。ＭＣＡ＃３の効果は、ｉｖで与えられた２００μｇ／ｋｇ体重により達成される。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝５〜１０)。*：ビヒクルとの差。 血漿におけるＬＰＳ誘導性のＴＮＦ-αの蓄積。 当該図面は、実験例２におけるα-ＭＳＨアナログ＃４(配列番号１３)(ＭＣＡ＃４)の最大抗炎症効果を示す。ＬＰＳ誘導性ＴＮＦα生産についての最大抑制効果は、α-ＭＳＨ及びＭＣＡ＃４の両方についてｉｖで与えられる２００μｇ／ｋｇ体重により達成された。平均±ＳＥ(各群においてＮ＝４〜６)。*：ビヒクルに対してｐ＜０.０５；＃α-ＭＳＨに対してｐ＜０.０５)。

Claims (45)

  1. 以下のアミノ酸配列：
    Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｍｅｔ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ(配列番号１)
    を含み、合計で１９アミノ酸のペプチドであって、当該ペプチドのアミノ末端が、ＣＨ3-Ｃ(＝Ｏ)-である、前記ペプチド。
  2. 前記ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-ＯＨである、請求項１に記載のペプチド。
  3. 前記ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-ＮＨ2である、請求項１に記載のペプチド。
  4. １）以下の：
    Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ(配列番号５)、
    Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ(配列番号１３)、
    からなる群から選ばれるペプチドであって、当該ペプチドのアミノ末端が、(Ｂ４)ＮＨ-、(Ｂ４)(Ｂ５)Ｎ-、又は(Ｂ６)ＨＮ-であり、ここでＢ４及びＢ５は、独立して、Ｈ、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ6-10アリール、Ｃ7-16アラルキル、及びＣ7-16アルキルアリールから選ばれ；Ｂ６がＢ４−Ｃ（＝Ｏ）−であり；そして

    そして当該ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１であり、ここでＢ１が、ＯＨ、ＮＨ2、ＮＨＢ２、Ｎ(Ｂ２)(Ｂ３)、ＯＢ２、及びＢ２から選ばれ、ここでＢ２及びＢ３が独立して、Ｃ1-6アルキル、Ｃ2-6アルケニル、Ｃ6-10アリール、Ｃ7-16アラルキル、及びＣ7-16アルキルアリールから選ばれる、前記ペプチド。
  5. 前記ペプチドが以下の：
    Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｇ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｔｙｒ-Ｓｅｒ-Ｎｌｅ-Ｇｌｕ-Ｈｉｓ-(Ｄ-Ｐｈｅ)-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号５)
    で表される配列を含む、請求項４に記載のペプチド。
  6. 前記ペプチドが、以下の：
    Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｌｙｓ-Ｓｅｒ-Ｓｅｒ-Ｉｌｅ-Ｉｌｅ-Ｓｅｒ-Ｈｉｓ-Ｐｈｅ-Ａｒｇ-Ｔｒｐ-Ｇｌｙ-Ｌｙｓ-Ｐｒｏ-Ｖａｌ (配列番号１３)
    で表される配列を含む、請求項４に記載のペプチド。
  7. 前記ペプチドのアミノ末端が、（Ｂ４）ＨＮ-であり、ここでＢ４がＨである、請求項４〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
  8. 前記ペプチドのアミノ末端が、（Ｂ６）ＨＮ−であり、ここでＢ６がＢ４−（＝Ｏ）−であり、ここでＢ４がＣ１−６アルキルである、請求項４〜６のいずれか一項に記載のペプチド。
  9. Ｂ４がＣ１アルキルである、請求項４-６、及び８のいずれか一項に記載のペプチド。
  10. 前記ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１であり、Ｂ１がＯＨである、請求項４〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
  11. 前記ペプチドのカルボキシ末端が、-Ｃ(＝Ｏ)-Ｂ１であり、Ｂ１がＮＨ2である、請求項４〜９のいずれか一項に記載のペプチド。
  12. 前記ペプチドが、１、３、４及び５型メラノコルチン受容体から選ばれる１以上のメラノコルチン受容体を刺激する能力を有する、請求項１〜１１のいずれか一項に記載のペプチド。
  13. 前記ペプチドが以下の性質：
    ａ)ヒト白血球によりＬＰＳ誘導性ＴＮＦ-α生成を抑制し、
    ｂ)肺内への炎症誘導性好酸球の浸潤を抑制し、
    ｃ)肺内への炎症誘導性好中球の浸潤を抑制し、
    ｄ)循環血液中での炎症誘導性ＴＮＦ-αの蓄積を抑制し、
    ｅ)虚血誘導性急性腎不全を軽減し、
    ｆ)心筋梗塞サイズを低減し、
    ｇ)心筋梗塞性心不全後の程度を低減し、
    ｈ)肺血管高血圧を低減し、
    ｉ)シスプラチン誘導性腎不全を低減する
    のうち少なくとも１を有する、請求項１〜１２のいずれか一項に記載のペプチド。
  14. 医薬において使用するための、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチド。
  15. 請求項１〜１３のいずれか一項に記載されるペプチドを含む医薬組成物。
  16. 前記ペプチドが水溶液中に存在する、請求項１５に記載の医薬組成物
  17. １以上の医薬として許容される賦形剤をさらに含む、請求項１５又は１６に記載の医薬組成物。
  18. 前記組成物が、１以上の緩衝剤を含む、請求項１５〜１７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  19. 前記緩衝剤が、クエン酸、酢酸、酒石酸、乳酸、リン酸水素、及びジエチルアミンからなる群から選ばれる、請求項１５〜１８のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  20. 前記緩衝剤が酢酸である、請求項１８又は１９に記載の医薬組成物。
  21. １以上の医薬として許容される担体をさらに含む、請求項１５〜２０のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  22. 前記組成物が、非経口、経口、局所、経粘膜、又は経皮組成物である、請求項１５〜２１のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  23. 哺乳動物の１以上の臓器の組織の状態の治療又は予防用の医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、前記医薬組成物。
  24. 前記臓器が、腎臓、肝臓、脳、心臓、筋肉、骨髄、皮膚、骨、肺、気道、脾臓、外分泌腺、膀胱、内分泌腺、卵管を含む生殖臓器、眼、耳、脈管系、小腸、結腸、直腸、及び肛門管を含む胃腸管、及び前立腺からなる群から選ばれる、請求項２３に記載の医薬組成物。
  25. 前記状態が、虚血又は炎症状態である、請求項２３又は２４に記載の医薬組成物。
  26. 前記状態が、毒素又は薬剤誘導性の細胞、組織又は臓器不全のため生じる、請求項２３〜２５のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  27. 前記状態が、虚血状態である、請求項２３に記載の医薬組成物。
  28. 前記状態が急性、亜急性、又は慢性虚血である、請求項２７に記載の医薬組成物。
  29. 前記状態が、二次的虚血である、請求項２７又は２８に記載の医薬組成物。
  30. 前記二次的虚血が、敗血性ショック又は全身性低血圧に付随する状態のため生じる、請求項２９に記載の医薬組成物。
  31. 前記状態が、心筋虚血である、請求項２３〜２７のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  32. 前記状態が、狭心症又は心筋梗塞である、請求項３１に記載の医薬組成物。
  33. 前記状態が、炎症性状態である、請求項２５に記載の医薬組成物。
  34. 前記炎症状態が、肺炎症、関節炎、皮膚炎、膵炎、炎症性腸疾患、心膜炎、心筋炎及び心内膜炎から選ばれる、請求項２５に記載の医薬組成物。
  35. 前記状態が、心不整脈に付随する、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の医薬組成物。
  36. 請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、肺脈管高血圧を抑制又は低下するための医薬組成物。
  37. 請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、虚血誘導性急性腎不全を低下するための医薬組成物。
  38. 請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、心虚血誘導性損傷を低下するための医薬組成物。
  39. 請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、心筋梗塞後心臓不全の程度を低下するための医薬組成物。
  40. 哺乳動物の１以上の臓器の組織における機能障害又は破壊を治療又は予防するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含み、当該機能障害又は破壊が、手術により引き起こされる虚血のため生じる、前記医薬組成物。
  41. 哺乳動物の１以上の臓器の組織における機能障害又は破壊を治療又は予防するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含み、当該機能障害又は破壊が、臓器移植により引き起こされる虚血のため生じる、前記医薬組成物。
  42. 哺乳動物の１以上の臓器の組織における機能障害又は破壊を治療又は予防するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含み、当該機能障害又は破壊が、移植物、装置、移植片又はプロテーゼの外科的挿入により引き起こされる虚血のため生じる、前記医薬組成物。
  43. 哺乳動物の１以上の臓器の組織における機能障害又は破壊を治療又は予防するための医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含み、当該機能障害又は破壊が、敗血性ショックにより引き起こされる虚血のため生じる、前記医薬組成物。
  44. 炎症性腸疾患の予防又は治療用の医薬組成物であって、請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、前記医薬組成物。
  45. 請求項１〜１３のいずれか一項に記載のペプチドを含む、関節リウマチ、骨関節炎、及び反応性関節炎からなる群から選ばれる関節炎の治療又は予防用の医薬組成物。
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