JP5303482B2

JP5303482B2 - 抗インフルエンザウイルス剤及びこれを吸着、含浸、添加させてなるインフルエンザ感染抑制用品

Info

Publication number: JP5303482B2
Application number: JP2010012394A
Authority: JP
Inventors: 一史清水; 和道黒田; 玲子澤井; 謙二大澤; 進志村
Original assignee: Lotte Co Ltd
Current assignee: Lotte Co Ltd
Priority date: 2010-01-22
Filing date: 2010-01-22
Publication date: 2013-10-02
Anticipated expiration: 2024-06-04
Also published as: JP2010120951A

Description

本発明はインフルエンザウイルスの感染抑制作用を有する植物由来の抽出物を有効成分とする抗インフルエンザウイルス剤及びそれを吸着、含浸、添加させてなるインフルエンザ感染抑制用品に関するものである。

毎年のようにインフルエンザの流行を引き起こすインフルエンザウイルスは直径１万分の１ミリメートル程度のエンベロープ膜を有するＲＮＡウイルスである。その抗原性の違いからＡ、Ｂ、Ｃの３つの型に分類されるが、流行的な広がりをみせるのはＡ型、Ｂ型である。これらのウイルスの粒子表面には、赤血球凝集素（ＨＡ）とノイラミニダーゼ（ＮＡ）という２種類の糖蛋白がスパイク状に突き出しており、内部には８本に分節した遺伝子ＲＮＡが存在する。ウイルスの表面にあるＨＡとＮＡは同一の亜型内で変異を頻繁に起こし、毎年のように新しい抗原変異株が出現する。

咳による飛沫によって放出されたインフルエンザウイルスはヒトの鼻や口から侵入し、ウイルス表層のスパイク状糖蛋白質ＨＡにより上気道の粘膜上皮細胞に吸着し、細胞へ侵入後増殖を開始する。近年の研究により、ウイルスの感染メカニズムが明らかにされている。ウイルスはヒトの標的細胞の表層に存在する糖鎖よりなるレセプターに結合し、エンドゾームへ取り込まれ、ウイルス膜とエンドゾーム膜の融合により細胞内に侵入し、ウイルス遺伝子の発現と複製、さらに宿主細胞膜からの出芽により子孫ウイルス粒子を形成し増殖する。

インフルエンザウイルスの感染により数日で突然の発熱、頭痛、関節の痛み、全身倦怠感等の症状が現れ、それと前後して咳や喉の痛み、鼻水、鼻づまりなどの呼吸器症状が出現する。いわゆる風邪とは異なり、感染力が強く短期間で爆発的な流行を引き起こすのが特徴である。またインフルエンザウイルスのＨＡ蛋白質の構造は年ごとに変異を繰り返し、過去の感染によりできた抗体があまり役に立たないことも感染を広げてしまう要因になっている。

インフルエンザウイルスの感染を抑制するためには、上皮細胞への吸着の阻害、細胞への侵入の阻害、遺伝子の転写・複製の抑制、蛋白質の合成阻害、細胞からの放出の抑制などが考えられ、それぞれが抗ウイルス薬のターゲットになっている。現在までに、アマンタジン、リマンタジン、ザナミビル等の抗ウイルス薬が開発されているが、過敏症、精神神経症状、消化器系症状、自律神経系症状等の副作用が報告されており、その応用に関しては注意が必要である。

またインフルエンザウイルスは気道粘膜上皮で感染、増殖することや、その年の流行型が正確には予想できないことから、ワクチンの接種によって感染を抑えることも困難であると考えられている。頻繁なうがいと、喉の乾燥を避けること、栄養と休息を十分にとることなどが、現在最も有効な予防策と考えられている。感染抑制効果が高く、さらに安全性に問題がなく、日常的に利用できる抗インフルエンザウイルス剤の開発が望まれている。

近年、天然物由来の抗インフルエンザ素材としてお茶や紅茶のポリフェノール成分が報告されており（例えば、非特許文献１及び２参照。）、人を用いた試験により紅茶のうがいが実際のウイルス感染を抑えることが明らかになっている（例えば、非特許文献３参照。）。またオウゴン由来のフラボノイド成分が、ウイルスのシアリダーゼ阻害活性によりインフルエンザ感染抑制効果を示すことが報告されている（例えば、非特許文献４参照。）。さらに漢方製剤である桂枝二越婢一湯（例えば、特許文献１参照。）、黒房すぐり抽出物（例えば、特許文献２参照。）、馬鈴薯アントシアニン色素（例えば、特許文献３参照。）、グァバ葉抽出物（例えば、特許文献４参照。）羅布麻抽出物（例えば、特許文献５参照。）等の抗ウイルス効果が報告されている。

また、バラ科植物においては、その花蕾または花弁の抽出物を有効成分とする抗インフルエンザ剤が開示されている（例えば、特許文献６参照。）が、カリンの抗インフルエンザウイルス効果は明らかにされていない。ミカン属においては、その種子成分の細菌およびウイルス等による感染症に対する予防効果が開示されている（例えば、特許文献７参照。）が、ミカン属の葉の効果については触れられていない。すなわち、本特許に示された植物抽出物のインフルエンザウイルス感染抑制効果に関する報告はみられず、本特許により初めて明らかにされたものである。

感染症学雑誌，６８（７）８２４−８２９（１９９４）感染症学雑誌，７０（１１）１１９０−１１９２（１９９６）感染症学雑誌，７１（６）４８７−４９４（１９９７）Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．３８（５）１３２９−１３３２（１９９０）

特開平６−１９９６８０号公報特開２０００−２１２０９２公報特開２００１−３１６３９９公報特開２０００−２７３０４８公報特開平１１−７１２９６号公報特開２００２−１４５７９０公報特表２００２−０２０３０５公報

本発明の目的は、日常的に安心して使用できる安全性の高い植物抽出物を用いて、インフルエンザウイルスの感染に対して高い抑制効果を示し、副作用の無い抗インフルエンザウイルス剤、それを吸着、含浸、添加させてなるインフルエンザ感染抑制用品を提供することである。

上記課題を解決するために、本発明者らは副作用がなく安全性の高い古くより食品や香料、お茶などに利用されてきた植物や生薬、ハーブなどに着目し、これらの中から抗インフルエンザウイルス作用を有する植物抽出物を見出すため、インフルエンザウイルス（Ａ型ウイルス株：Ｕｄｏｒｎ／３０７／７２Ｈ３Ｎ２Ｂ型ウイルス：Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／５／９９）のＭＤＣＫ細胞に対する感染性の抑制効果を指標に試験を実施した。その結果、カカオより得られた抽出物が、強いインフルエンザウイルスの感染抑制効果を有することを見出し、本発明品を完成させた。

すなわち、本発明は、脱脂されたカカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ）の種子を５０〜９０℃、１〜５時間含水エタノールまたはエタノールで抽出した抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗インフルエンザウイルス剤である。

また、本発明は、上記抗インフルエンザウイルス剤を吸着、含浸、添加させてなるインフルエンザ感染抑制用品である。

本発明は安全性の高い植物の抽出物を有効成分とし、インフルエンザウイルスに対して強い感染抑制作用を有する抗インフルエンザウイルス剤を提供するものである。また、本発明の抗インフルエンザウイルス剤の有効成分である植物抽出物は安全性が高いことから、マスク、エアコンフィルター、衣類、ウェットティッシュ、スプレー液等に吸着、含浸、添加することにより、インフルエンザウイルス感染抑制用品として日常生活において広く利用することができる。さらに、チューインガム、キャンディ、錠菓、飲料等の飲食物に添加し、抗インフルエンザウイルス作用を有する飲食物として日常的に利用、摂取することも可能である。本発明品はインフルエンザウイルスの感染予防や、インフルエンザウイルスに起因する疾病症状の緩和に有効である。

本発明品の原料となるルーにおいてはその全体を使用することができるが、ミカン属植物については葉を、カリンについてはその実を、エヴァーラスティング、リンデンについては花を、キャッツクロー、ベイベリーについては樹皮を、オールスパイス、カカオについては種子を使用することが望ましい。またカカオ種子については、ロースト処理したものについても使用する事ができる。

上記植物の粉砕物から本発明の抽出物を得る方法については特に限定しないが、水、メタノール、エタノール、ｎ−プロパノール並びにｎ−ブタノール等の低級アルコール、エーテル、酢酸エチル、アセトン、グリセリン、プロピレングリコール等の有機溶剤の１種または２種以上の混合溶媒を加えて、従来行なわれている抽出方法によって抽出する。しかし、本発明の抗インフルエンザウイルス剤を経口で摂取することを考慮すると、安全性の面から水、エタノールもしくはその混合液を用いて抽出することが望ましい。

抽出条件としては特に制限はないが、５０〜９０℃で１〜５時間程度が望ましい。抽出液を濾過し、抽出溶剤を留去したあと、減圧下において濃縮または凍結乾燥したものを使用することができる。また、これらの抽出物を有機溶剤分画、カラムクロマトグラフィー等により分画精製したものも使用することができる。

本発明品の利用形態については特に制限はなく、有効成分として例示した植物抽出物に溶剤、分散剤、製剤用担体、乳化剤、希釈剤、安定剤等を添加することにより、散剤、錠剤、トローチ剤、吸入剤、うがい薬、含漱剤、座剤、注射剤等任意の製剤として調製することが可能であり、投与経路として経口投与、気道投与、静脈内投与、直腸投与、皮下投与、皮内投与等を例示することができる。この場合成人への投与量は各抽出物で１０〜２０００ｍｇ／日が好ましいが、この値に制限されるものではない。各種製剤への抽出物の添加量としては、その製剤の形態によって異なるが、０．００１重量％以上、好ましくは約０．０１重量％以上の割合になるように添加するのが好適である。

また、本発明の抗インフルエンザウイルス剤を、マスク、エアコンフィルター、衣類、ウェットティッシュ、スプレー液等に吸着、含浸、添加することにより、インフルエンザ予防に寄与しうる感染抑制用品を提供することができる。これらの用途における植物抽出物の吸着、添加量は、その感染抑制用品の形態に応じて異なり、一概に規定することは出来ないが、０．００１〜５重量％の割合になるように添加するのが好適である。

また本発明の抗インフルエンザウイルス剤は安全性が高いことから、例えばチューインガム、キャンディ、錠菓、グミゼリー、チョコレート、ビスケット等の菓子、アイスクリーム、シャーベット等の冷菓、飲料、スープ、ジャム等の飲食物に配合し、日常的に利用することが可能である。添加量としては、その利用形態および抽出物の呈味性によって異なるが、飲食品に対して０．００１〜５重量％、好ましくは約０．０１〜１重量％の割合になるように添加するのが好適である。

以下実施例、試験例を挙げて本発明を具体的に説明するが本発明はこれらに限定されるものではない。

リンデン花粉末３０ｇに５０％エタノール３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、凍結乾燥することにより抽出物を４．８６ｇ得た。

同様にして、ミカン属植物葉、キャッツクロー樹皮、ベイベリー樹皮、ルー全草、エヴァーラスティング花、オールスパイス種子、カカオ種子（ロースト・未ロースト）、カリン実について、５０％エタノールを用いて抽出し、抽出液を濃縮・凍結乾燥することにより抽出物を調製した。なお、カカオ種子（ロースト、未ロースト）については、粉砕後、１０倍量のｎ−ヘキサンで脱脂処理を行なったものを用いた。各抽出物の収率を表１に示した。

ミカン属植物葉粉末３０ｇに７０％エタノール３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、凍結乾燥することにより抽出物を４．６８ｇ得た。

同様にして、ベイベリー樹皮について、７０％エタノールを用いて抽出し、抽出液を濃縮・凍結乾燥することにより抽出物を調製した。各抽出物の収率を表１に示した。

キャッツクロー樹皮粉末３０ｇに１００％エタノール３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、乾固することにより抽出物を３．４２ｇ得た。

同様にして、ミカン属植物葉、エヴァーラスティング花、リンデン花、オールスパイス種子、カカオ種子（ロースト・未ロースト）、カリン実について１００％エタノールを用いて抽出し、抽出液を濃縮・乾固することにより抽出物を調製した。なお、カカオ種子（ロースト、未ロースト）については、粉砕後、１０倍量のｎ−ヘキサンで脱脂処理を行なったものを用いた。各抽出物の収率を表１に示した。

ベイベリー樹皮粉末３０ｇに水３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、凍結乾燥することにより抽出物を６．７８ｇ得た。

同様にして、ミカン属植物葉、キャッツクロー樹皮、ルー全草、エヴァーラスティング花、リンデン花、オールスパイス種子について水を用いて抽出し、抽出液を濃縮・凍結乾燥することにより抽出物を調製した。各抽出物の収率を表１に示した。

エヴァーラスティング花粉末３０ｇに１００％メタノール３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、乾固することにより抽出物を２．４９ｇ得た。抽出物の収率を表１に示した。

ベイベリー樹皮粉末３０ｇに酢酸エチル３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、乾固することにより抽出物を９．２７ｇ得た。

同様にして、ミカン属植物葉について酢酸エチルを用いて抽出し、抽出液を濃縮・乾固することにより抽出物を調製した。各抽出物の収率を表１に示した。

ミカン属植物葉粉末３０ｇにアセトン３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、乾固することにより抽出物を２．３７ｇ得た。抽出物の収率を表１に示した。

ルー全草粉末３０ｇにｎ−ブタノール３００ｍｌを加えたフラスコに、還流冷却器を取り付け、１時間還流しながら抽出する。得られた抽出液を濾別し、溶媒を除去した後、乾固することにより抽出物を５．８２ｇ得た。

同様にして、キャッツクロー樹皮についてｎ−ブタノールを用いて抽出し、抽出液を濃縮・乾固することにより抽出物を調製した。各抽出物の収率を表１に示した。

試験例１

実施例１〜８で示した本発明品である抽出物を試料として、インフルエンザウイルス感染抑制効果を調べた。インフルエンザウイルスはＡ／Ｕｄｏｒｎ／３０７／７２（Ｈ３Ｎ２）、Ｂ／Ｊｏｈａｎｎｅｓｂｕｒｇ／５／９９Ｎ２株を用いた。試料をジメチルスルフォキシドに溶解（５０ｍｇ／ｍｌ）したものを試料原液とした。試料原液をＴｒｉｓ−Ｇｌｕｃｏｓｅ−Ｓａｌｉｎｅ（ＴＧＳ）で１０倍段階希釈し（１０^６倍希釈まで）、これらの試料希釈液とウイルス液（１０００ＰＦＵ（ｐｌａｑｕｅｆｏｒｍｉｎｇｕｎｉｔ）／ｍｌ）を１：１に混合して室温で３０分間反応させた。この０．１ｍｌをＭａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙｃａｎｉｎｅｋｉｄｎｅｙ（ＭＤＣＫ）細胞の単層培養（直径３５ｍｍシャーレ）に接種し、ウイルスを室温で１時間吸着させ、２ｍｌのＬ−１５アガロース培地を流し込み固めて３４℃、３日間培養し、生じたプラーク数を計測した。プラーク数がＴＧＳ処理コントロールの５０％以下となる試料の希釈倍数を感染中和価とした。実施例１〜８で調製した本発明品である抽出物のインフルエンザウイルス感染抑制活性（感染中和価）を、以下の表２に示した。本発明品であるこれらの抽出物はいずれも感染中和価が１０^３以上であり、強いウイルス感染抑制効果を示した。

実施例１〜８で調製した植物抽出物を用いて、うがい薬、吸入剤、トローチ剤、スプレー液、チューインガム、キャンディ、錠菓、飲料、粉末剤、錠剤、含漱剤、グミゼリー、チョコレート、ビスケット、アイス、シャーベット、スープ、ジャム、ウェットティッシュ、マスクを調製した。以下に実施例としてその処方を示した。

うがい薬の処方
エタノール２．０重量％
香料１．０重量％
サッカリン０．０５重量％
塩酸クロルヘキシジン０．０１重量％
ベイベリー樹皮７０％エタノール抽出物（実施例２）０．５重量％
水残
１００．０重量％

吸入剤の処方
エタノール５．０重量％
エヴァーラスティング花
１００％エタノール抽出物（実施例３）１．０重量％
水残
１００．０重量％

トローチ剤の処方
ブドウ糖７２．３重量％
乳糖１９．０重量％
アラビアゴム６．０重量％
香料１．０重量％
モノフルオロリン酸ナトリウム０．７重量％
キャッツクロー樹皮
ｎ−ブタノール抽出物（実施例８）１．０重量％
１００．０重量％

スプレー液の処方
エタノール２５．０重量％
クエン酸１．５重量％
クエン酸三ナトリウム１．０重量％
ルー全草５０％エタノール抽出物（実施例１）０．５重量％
水残
１００．０重量％

チューインガムの処方
ガムベース２０．０重量％
砂糖５４．７重量％
グルコース１５．０重量％
水飴９．３重量％
香料０．５重量％
カカオ種子（ロースト）
５０％エタノール抽出物（実施例１）０．２重量％
ミカン属植物葉５０％エタノール抽出物（実施例１）０．３重量％
１００．０重量％

キャンディの処方
砂糖５０．０重量％
水飴３４．０重量％
クエン酸１．０重量％
香料０．２重量％
リンデン花水抽出物（実施例４）０．４重量％
水残
１００．０重量％

錠菓の処方
砂糖７６．１重量％
グルコース１９．０重量％
ショ糖脂肪酸エステル０．２重量％
香料０．２重量％
オールスパイス種子
５０％エタノール抽出物（実施例１）０．５重量％
水残
１００．０重量％

飲料の処方
ミカン属植物果汁３０．００重量％
異性化糖１５．２４重量％
クエン酸０．１０重量％
ビタミンＣ０．０４重量％
香料０．１０重量％
カリン実５０％エタノール抽出物（実施例１）０．１０重量％
水残
１００．００重量％

粉末剤の処方
トウモロコシ澱粉５５．０重量％
カルボキシセルロース４０．０重量％
エヴァーラスティング花水抽出物（実施例４）５．０重量％
１００．０重量％

錠剤の処方
ラクトース７０．０重量％
結晶性セルロース１５．０重量％
ステアリン酸マグネシウム５．０重量％
リンデン花５０％エタノール抽出物（実施例１）１０．０重量％
１００．０重量％

含漱剤の処方
エタノール２．００重量％
香料１．００重量％
サッカリン０．０５重量％
塩酸クロルヘキシジン０．０１重量％
ベイベリー樹皮酢酸エチル抽出物（実施例６）０．５０重量％
水残
１００．００重量％

グミゼリーの処方
ゼラチン６０．００重量％
水飴２３．００重量％
砂糖８．５０重量％
植物油脂４．５０重量％
マンニトール２．９５重量％
レモン果汁１．００重量％
オールスパイス種子
１００％エタノール抽出物（実施例３）０．０５重量％
１００．００重量％

チョコレートの処方
粉糖４０．８０重量％
カカオビター２０．００重量％
全脂粉乳２０．００重量％
カカオバター１７．００重量％
マンニトール１．００重量％
香料０．２０重量％
ミカン属植物葉水抽出物（実施例４）１．００重量％
１００．００重量％

ビスケットの処方
薄力１級２５．５９重量％
中力１級２２．２２重量％
精白糖４．８０重量％
食塩０．７３重量％
ブドウ糖０．７８重量％
パームショートニング１１．７８重量％
炭酸水素ナトリウム０．１７重量％
重亜硫酸ナトリウム０．１６重量％
米粉１．４５重量％
全脂粉乳１．１６重量％
代用粉乳０．２９重量％
ベイベリー樹皮７０％エタノール抽出物（実施例２）０．５０重量％
水残
１００．００重量％

アイスの処方
脱脂粉乳５０．０重量％
生クリーム２５．０重量％
砂糖１０．０重量％
卵黄１０．０重量％
キャッツクロー樹皮
５０％エタノール抽出物（実施例１）１．０重量％
香料０．１重量％
水残
１００．０重量％

シャーベットの処方
ミカン属植物果汁２５．０重量％
砂糖２５．０重量％
卵白１０．０重量％
ミカン属植物葉水抽出物（実施例４）２．０重量％
水残
１００．０重量％

スープの処方
牛乳６０．００重量％
たまねぎ２０．００重量％
にんじん１０．００重量％
野菜ブイヨン１．００重量％
バター０．１０重量％
コショウ０．０５重量％
塩０．０５重量％
オールスパイス種子水抽出物（実施例４）１．００重量％
水残
１００．００重量％

ジャムの処方
果肉４．０重量％
砂糖６５．０重量％
清澄果汁２５．０重量％
クエン酸０．５重量％
カリン実５０％エタノール抽出物（実施例１）２．０重量％
水残
１００．０重量％

ウェットティッシュの処方
中液塩化ベンザルコニウム０．２重量％
ルー全草５０％エタノール抽出物（実施例１）０．２重量％
水残
１００．０重量％
不織布（１５０×２００ｍｍ）２０枚を重ねて、前記成分を不織布重量に対して３倍重量を含浸させた。

マスクの処方
リンデン花１００％エタノール抽出物（実施例３）１．０重量％
水残
１００．０重量％
不織布を前記成分に浸し、軽く脱水後乾燥した。

Claims

脱脂されたカカオ（Ｔｈｅｏｂｒｏｍａｃａｃａｏ）の種子を５０〜９０℃、１〜５時間含水エタノールまたはエタノールで抽出した抽出物を有効成分とすることを特徴とする抗インフルエンザウイルス剤。
請求項１記載の抗インフルエンザウイルス剤を吸着、含浸、添加させてなるインフルエンザ感染抑制用品。