JP5296164B2 - 顕微鏡装置 - Google Patents

Description

本発明は、液浸対物レンズを備えた顕微鏡装置に関する。

遺伝子の機能解析に培養細胞を用いた実験が広く行なわれている。実験手法として長時間の間欠撮影によるタイムラプス観察がある。一般に培養細胞つまり生きた細胞は光刺激によりダメージを受ける。ダメージを低減するために少ない励起光でより多くの蛍光を捕獲するために高ＮＡの対物レンズが用いられる。

好適な高ＮＡの対物レンズは液浸対物レンズであり、対物レンズと標本の間は屈折率の高い液体で充填される。特表２００４−５３１７６５号公報は、液浸対物レンズに液体を供給する液体供給装置を提案している。この液体供給装置では、液浸対物レンズの射出レンズの側方近傍に配置された供給器の吐出口から液体を液浸対物レンズに供給する。供給器の吐出口を液浸対物レンズの射出レンズの近くに配置することにより、供給器の移動機構を設けることなく簡易な構成で液体の供給が可能である。
特表２００４−５３１７６５号公報

しかし、供給器の吐出口は射出レンズの側方近傍に配置されているので、射出レンズと標本の間のギャップを液体で充填するには多くの液体を供給しなければならない。液浸対物レンズには、液体として水を用いる水浸対物レンズとオイルを用いる油浸対物レンズとがある。油浸対物レンズで使用されるオイルは高価であり、観察に必要な量のオイルより多量のオイルを供給する必要があるため、実験コストの上昇を招く。また水浸対物レンズに対しては、必要以上の液体をストックするための大きなタンクや、供給時間短縮のために能力の大きなポンプが必要となるため、実験コストの上昇を招く。

必要最少量の液体を供給することは、一般に液体の定量供給に利用されるノズルとポンプを用いることにより可能であるが、その場合、必要個所つまり液浸対物レンズのほぼ真上から液体供給する必要がある。このため、観察の際には液浸対物レンズの移動範囲外にノズルを退避させる機構が必要である。この退避機構のために駆動部を設けることは装置コストを上昇させてしまう。

本発明は、このような実状を考慮して成されたものであり、その目的は、液浸対物レンズに必要最少量の液体を供給可能な顕微鏡装置を廉価に提供することである。

本発明の顕微鏡装置は、標本を観察するための液浸対物レンズと、前記液浸対物レンズをその光軸方向に相対移動させる準焦部と、前記液浸対物レンズに液体を供給するノズルを有する液体供給部と、前記液浸対物レンズの光軸に直交する平面内で前記ノズルと前記液浸対物レンズとを相対的に移動させる水平移動手段とを備えていることを特徴とする。

本発明によれば、液浸対物レンズに必要最少量の液体を供給可能な顕微鏡装置が廉価に提供される。

以下、図面を参照しながら本発明の実施形態について説明する。

＜第一実施形態＞
本発明の第一実施形態の顕微鏡装置を図１に示す。顕微鏡装置は、環境を維持するために培養部１０１と、観察のための顕微鏡部１０２とから構成されている。培養部１０１と顕微鏡部１０２は共に、外部との熱の出入りを遮断する断熱層１１２と、断熱層１１２の内壁に接して設けられたヒーター１０３とを有し、温度を一定に保つことが可能である。培養部１０１と顕微鏡部１０２の接合部には、培養部１０１の気密性を確保するため、弾性を有するシール部材１０８が設けられている。

培養部１０１はさらに、温度センサー１０４、加湿パッド１０５、ＣＯ₂センサー１０
６、電磁弁１０７とを備えている。顕微鏡部１０２に設けた制御器１０９は、温度センサー１０４の信号によりヒーター１０３を制御し、またＣＯ₂センサー１０６の信号により
電磁弁１０７を制御し、培養細胞１１０が設置される培養部１０１を一般に温度３７℃、ＣＯ₂濃度５％、相対湿度９５％以上に維持し、培養細胞１１０の活性を維持する。また
培養部１０１は天面に透過光による観察を可能とするための透過光源１１１を備えている。

顕微鏡部１０２はさらに、液浸対物レンズ１１３と、液浸対物レンズ１１３を上下動させる準焦部１１４、培養細胞１１０を入れた標本容器１２１が載せられるステージ１１５、液浸対物レンズ１１３による平行光線を結像させる結像レンズ１１６、液浸対物レンズ１１３を通して照明する落射光源１１７、蛍光フィルター１１８、ＣＣＤカメラ１１９とを備えている。ステージ１１５は直動部と回動部により液浸対物レンズ１１３に対して標本容器１２１を液浸対物レンズ１１３の光軸に直交する平面内で二次元的に移動させることができる。培養部１０１に装着された透過光源１１１は培養細胞１１０の全体像を捕らえるための形態観察に用いられ、落射光源１１７と蛍光フィルター１１８は蛍光色素や蛍光タンパクなどを用いた特定部位の蛍光観察に用いられる。

顕微鏡部１０２から培養部１０１に突出したステージ１１５は、培養部１０１の底面との間に弾性を有するシール部材１２０が挿入されており、培養部１０１の湿気が顕微鏡部１０２に漏れることはない。シール部材１２０を設ける代わりに、ステージ１１５と培養部１０１の底面との間隙をサブｍｍ程度に設定してもよい。制御器１０９は、透過光源１１１と準焦部１１４、ステージ１１５、落射光源１１７、ＣＣＤカメラ１１９とも接続されており、これらも管理する。

液浸対物レンズ１１３と標本容器１２１の間には水や油などの液体が介在される。液体は特別な保持手段が用いられないため、複数の標本容器１２１を観察する場合などに標本容器１２１に液体が付着して液体が不足したり、また同一の標本容器１２１内での観察でも観察位置を変えることにより液体が広がって液体が不足したりする。そのため必要に応じて液体の補給が必要となる。

液体供給装置は機構部と液送部に大別される。液送部は液体供給部と液体排出部とを有している。液体供給部は、液体を貯蔵する供給タンク１２２と、液体を送出する供給ポンプ１２３、液浸対物レンズ１１３の光軸に平行な軸周りに回動する回動アーム１２４と、回動アーム１２４に固定されたノズル１２５とを有している。ノズル１２５と回動アーム１２４は内部に細い孔を有し、回動アーム１２４と供給ポンプ１２３と供給タンク１２２はシリコンなどの材質からなるチューブ１２６で接続されている。液体排出部は、液浸対物レンズ１１３からこぼれ落ちた液体を溜めるための廃液皿１２７と、一定量溜まった液体を排出するための排出ポンプ１２８、液体を貯蔵する排出タンク１２９とを有し、それらは液体供給部と同様なチューブ１２６で接続されている。供給ポンプ１２３から回動アーム１２４までのチューブ１２６は、顕微鏡部１０２の内壁に沿って引き回されている。

図２は液体供給装置の機構部の詳細図である。図２には、液浸対物レンズ１１３を下降させた液体供給状態が実線で示され、液浸対物レンズ１１３を上昇させた観察状態が二点鎖線で示されている。機構部は、準焦部１１４に設けられたカム部材１３０と、顕微鏡部１０２の上部に設置された回動アーム１２４とを有している。カム部材１３０は、液浸対物レンズ１１３の上下移動方向に対して傾斜したカム面を有している。カム部材１３０が動作のトリガーとなり回動アーム１２４を駆動する。回動アーム１２４は、顕微鏡部１０２の内側上面にベアリング１３１により回動可能に支持され、顕微鏡部１０２から培養部１０１に突出している。ノズル１２５は回動アーム１２４の回動軸に直交する状態で回動アーム１２４に固定されている。

図１に示されるように、回動アーム１２４と顕微鏡部１０２との間には弾性を有するシール部材１３２が設置されている。図２において、回動アーム１２４には、準焦部１１４の移動範囲内でカム部材１３０と接触する回動ピン１３３が回動軸に対して垂直に設けられている。顕微鏡部１０２の内側には、回動ピン１３３に接して回動アーム１２４の回動を規制する規制ピン１３４が設置されている。回動ピン１３３を規制ピン１３４に当て付けるため、顕微鏡部１０２の内側上部に設けたフック１３５と回動ピン１３３が弾性を有するバネ部材１３６で接続されている。

図１において、標本容器１２１はステージ１１５に設けた凹部１１５ａに落とし込まれ、弾性を有する板状金属の固定部材１３７で固定される。培養細胞１１０を観察する状態では、液浸対物レンズ１１３は準焦部１１４の移動範囲の上方に位置している。この状態では図２の二点鎖線で示されるように、回動アーム１２４は、回動アーム１２４に接続したバネ部材１３６により規制ピン１３４に当て付けられている。つまり準焦部１１４に取り付けたカム部材１３０と回動アーム１２４の回動ピン１３３は接していない。

ステージ１１５に設置した別の標本容器１２１の培養細胞１１０を観察する際は、ステージ１１５と液浸対物レンズ１１３の干渉を避けるために、準焦部１１４により液浸対物レンズ１１３を大きく下降させる。すると、カム部材１３０により回動ピン１３３が押され、バネ部材１３６の引っ張り力に反して回動アーム１２４が回動され、回動アーム１２４に取り付けたノズル１２５が液浸対物レンズ１１３の先玉の上方近傍に配置される。つまりノズル１２５は準焦部１１４による液浸対物レンズ１１３の移動に連動して移動される。

対物レンズはサブμｍの精度で位置決めされるため、小さな外力が作用するだけでも位置の再現が困難となりピントずれが容易に生じてしまう。しかし本実施形態では、準焦部１１４により回動アーム１２４を回動させるのは画像取得に必要なピント位置ではないため、外力が準焦部１１４に作用してもピントずれは生じない。また液体は、顕微鏡部１０２の内壁を引き回されたチューブ１２６を通る間に顕微鏡部１０２と同じ温度すなわち供給先の液浸対物レンズ１１３と同じ温度になるため、液浸対物レンズ１１３の温度変化によるピントずれも生じない。またノズル１２５が液浸対物レンズ１１３の先玉の上方近傍に配置されるため、ノズル１２５から観察に必要な最少量の液体を供給することが可能となる。またノズル１２５を回動するために専用の駆動手段が不要なため廉価に実現される。

液体の供給タイミングを図３のフローチャートを用いて説明する。

液体不足は、同じ標本容器１２１内での観察部位の変更や、観察点の変更、自然蒸発により生じる。

［Ｓ１］供給器は、装置の電源投入により制御を開始する。

［Ｓ２］移動距離、観察点の変更の有無、前回の供給時からの経過時間を監視する。経過時間＜Ｔ１であるか、移動距離＜Ｌであるか、観察点の変更があった場合、液体の供給を開始する。

［Ｓ３］はじめに準焦部１１４を下降させ、ノズル１２５を液浸対物レンズ１１３の上方に配置する。

［Ｓ４］供給ポンプ１２３と排出ポンプ１２８を所定時間動作させる。供給ポンプ１２３の動作時間は、供給不足を防ぐため、液体を若干多めに供給するように設定するほうがよい。例えば０．２ｃｃの必要量に対して０．３ｃｃを供給するように設定するとよい。

［Ｓ５］観察点の変更が必要な場合はステージ１１５を移動させる。

［Ｓ６］供給ポンプ１２３と排出ポンプ１２８の作動とステージ１１５の移動動作とが共に終了しているかを判断する。

［Ｓ７］次に、準焦部１１４を所定の位置に移動させる。

［Ｓ８］最後に、タイマーで待ち時間Ｔ２を設け、待ち時間Ｔ２が経過した後に供給動作を終了する。待ち時間Ｔ２は、液体と液浸対物レンズ１１３のわずかな温度差を解消するための時間であり、これにより温度差に起因する液浸対物レンズ１１３の材料の伸縮によりピントずれが生じることを防ぐ。

この制御方式では、液浸対物レンズ１１３ヘの液体供給と同時に光軸に対する二次元方向の移動を行なうため、各工程を直列に接続した制御に比べて、次の観察までのインターバルを短縮することができる。またＳ８において観察前に待ち時間Ｔ２を設けることにより、液浸対物レンズ１１３の温度変化によるピントずれの発生が防止され、ボケのない画像取得が可能となる。

第一実施形態では、培養部を備えた顕微鏡装置を用いて説明したが、本実施形態の液体供給装置は、一般的な手動の顕微鏡に適用されてもよい。

＜第二実施形態＞
第二実施形態の顕微鏡装置において、第一実施形態と相違する液体供給に関する部位を図４に示す。つまり図４において図示が省略された部分は第一実施形態と同じである。本実施形態の顕微鏡装置は、培養部２００と顕微鏡部２０１とを有している。顕微鏡部２０１の上面には一軸方向への移動が可能な直動ステージ２０２が設置され、直動ステージ２０２には回動可能な回動ステージ２０３が設置されている。直動ステージ２０２は、顕微鏡部２０１から培養部２００に突出したシール部２０２ａを有している。また回動ステージ２０３は、顕微鏡部２０１から培養部２００に突出したトレー接続部２０３ａを有している。

トレー接続部２０３ａはオスアリ２０３ｂを有しており、トレー２０５はオスアリ２０３ｂに対応する形状のメスアリ２０５ａを有している。シール部２０２ａは液浸対物レンズ２０４に液体を供給するためのノズル２０６を備えている。培養部２００で生じた湿気が顕微鏡部２０１へ漏れるのを防止するため、シール部２０２ａと顕微鏡部２０１の上面との間には弾性を有するシール部材２０７が挿入されている。シール部材２０７を設ける代わりに、シール部２０２ａと顕微鏡部２０１の上面との間隙をサブｍｍ程度に設定してもよい。

標本容器２０８に用いる一般的なガラスボトムディッシュは３５ｍｍ程度の外径と、直径１０ｍｍ程度の観察範囲を有している。標本容器２０８はトレー２０５上で、回動ステージ２０３の回動軸Ｙを中心とする半径約７０ｍｍの円周上に設置される。また直動ステージ２０２の移動方向は、回動ステージ２０３の回動軸Ｙと液浸対物レンズ２０４の光軸Ｘに直交する直線と平行に設定される。直動ステージ２０２と回動ステージ２０３は共働して、トレー２０５に設置された標本容器１２１を液浸対物レンズ２０４の光軸に直交する平面内で二次元的に移動させることができる。標本容器２０８の観察範囲が直径１０ｍｍであることから、直動ステージ２０２の移動範囲は観察のために１０ｍｍ程度が必要である。これにより標本容器２０８の観察範囲内のＣＣＤカメラによる観察が可能となる。ＣＣＤカメラの撮像範囲に対する回動ステージ２０３の回転角が十分小さいため、作業者は直交する２方向への移動との認識で作業が可能である。

本実施形態の直動ステージ２０２は、観察のために必要な１０ｍｍにさらに２０ｍｍを追加した移動範囲を有している。追加した２０ｍｍの移動範囲は、液浸対物レンズ２０４の最外径の直径３０ｍｍｍの半値１５ｍｍを基に設定した値である。３０ｍｍの移動範囲により、標本容器２０８の観察範囲内では液浸対物レンズ２０４の外側に位置するノズル２０６を、液浸対物レンズ２０４の先玉の上方近傍に配置することが可能となる。

図５に示されるように、シール部２０２ａはノズル２０６の取り付け用の凹部２０２ｂを有している。シール部２０２ａには、図４に示されるように、凹部２０２ｂと顕微鏡部２０１の内側に通じる細孔２０２ｃが設けられている。細孔２０２ｃにはチューブ２０９が接続され、チューブ２０９は図４には図示されていないが供給ポンプと供給タンクに接続されている。

図５に示されるように、ノズル２０６はシール部２０２ａの凹部２０２ｂに対応する凸部２０６ａを有し、凸部２０６ａとノズル先端近傍の底面を接続する細孔２０６ｂを備える。また凸部２０６ａの円筒部に設けた溝２０６ｃには弾性を有するＯリング２１０が挿入されている。またノズル２０６は凸部２０６ａより一回り大きなフランジ部２０６ｄを有し、フランジ部２０６ｄはノズル２０６のシール部２０２ａへの当て付け面として働く。ノズル２０６はＯリング２１０の弾性によってシール部２０２ａに固定される。そのため装置の制御器での処理エラーや、作業者による外力が働いた場合、洗浄の際などに、容易にノズルを外すことが可能であり、装置の損傷や装置内部の汚染を防止できる。

制御フローについて説明する。はじめに液体供給の必要性を判断する。供給が必要な際は、はじめにトレー２０５と液浸対物レンズ２０４の干渉を防止するため、準焦部２１１を下降させる。その後、ふたつの動作を並行に実施する。ひとつは標本容器２０８の交換や観察部位の変更に伴う回動ステージ２０３の回動の動作であり、もうひとつは液体供給の動作である。回動動作では、液体供給動作の終了後に、液浸対物レンズ２０４の光軸Ｘ上に次の観察地点が位置するように回動ステージ２０３が回動される。また液体供給動作では、直動ステージ２０２によりノズル２０６を液浸対物レンズ２０４の先玉の上方近傍に配置し、液体を供給し、その後、直動ステージ２０２によりノズル２０６をほぼ元の位置に戻すが、その際に液浸対物レンズ２０４の光軸Ｘ上に次の観察地点が位置するように位置決めする。これらふたつの動作が終了した後、準焦部２１１を液浸対物レンズ２０４のピント位置に上昇させる。その後、温度差補正のための待ち時間を置いてから観察を開始する。

この制御において、トレー２０５の形状を加味し、準焦部２１１の移動を直動ステージ

２０２の移動より遅くすることによって、トレー２０５と液浸対物レンズ２０４の干渉を防止し、かつ制御系での待ち時間を短縮することが可能となる。

本実施形態では、直動ステージの移動範囲の拡大と直動ステージのシール部へのノズル付加により液体供給を可能としているため、新規に駆動部を設ける必要がなく、第一実施形態で追加した部品よりさらに少ない部品で必要最少量の液体供給を実現している。

＜第三実施形態＞
第三実施形態の顕微鏡装置において、第一実施形態と相違する液体供給に関する部位を図６に示す。つまり図６において図示が省略された部分は第一実施形態と同じである。また本実施形態の顕微鏡装置は第二実施形態の顕微鏡装置と類似点が多く、図６において第二実施形態の顕微鏡装置の部材と同様の部材は同じ参照符号で示してある。また図６の対物レンズ周辺部を上方から見た図を図７に示す。

図６に示されるように、準焦部３００には、複数の対物レンズを切り換えるための回転式のレボルバー３０２が設けられている。レボルバー３０２には二個の液浸対物レンズ３０１ａと３０１ｂが装着可能であり、レボルバー３０２は回転により液浸対物レンズ３０１ａと３０１ｂを移動させ、９０度ごとに位置決め可能に設計されている。図７において、観察に使用される対物レンズが配置される顕微鏡部１０２の光学系の光軸Ｘに直交する平面内においてレボルバー３０２の回転中心を中心として光軸Ｘ上を通る円周上に位置し光軸Ｘから９０度ずれた点を通る光軸Ｘに平行な軸Ｚ上にノズル３０３の先端が設置されている。

レボルバー３０２は二個の対物レンズが装着可能であるが、ｎ個の対物レンズが装着可能であってもよく、その場合には角度θ＝３６０÷２ｎごとに位置決め可能に設計される。またノズル３０３は、レボルバー３０２の回転中心を中心として光軸Ｘ上を通る円周上であって、光軸Ｘから角度θ＝３６０÷２ｎだけずれた位置に設置される。

液浸対物レンズ３０１ａと３０１ｂの一方が観察のために光軸Ｘ上に配置されたとき、他方は軸Ｚ上に存在しない。光軸Ｘ上に配置された液浸対物レンズは観察の際に上昇され、標本容器２０８との間のＷＤは０．１ｍｍ程度となる。また、液浸対物レンズ３０１ａと３０１ｂの一方が液体供給のために軸Ｚ上に配置されたとき、他方は光軸Ｘ上に存在せず、準焦部３００を上昇させる必要はない。このため、液浸対物レンズ３０１ａと３０１ｂの一方の先玉をノズル３０３の下方近傍に配置し、ノズル３０３により液浸対物レンズに上方から液体を供給することができる。

次に制御フローについて説明する。はじめに液体供給の必要性を判断する。供給が必要な際は、はじめにトレー２０５と液浸対物レンズ３０１ａの干渉を防止するため、準焦部３００を下降させる。その後、ふたつの動作を平行に実施する。ひとつは標本容器２０８の交換や観察部位の変更に伴う回動ステージ２０３と直動ステージ２０２の移動であり、もうひとつは液体供給の動作である。液体供給の動作では、まずレボルバー３０２の回転により液浸対物レンズ３０１ａを軸Ｚ上に配置する。これにより、液浸対物レンズ３０１ａの先玉がノズル３０３の下方近傍に配置される。続いて、液体を供給した後、レボルバー３０２の回転により液浸対物レンズ３０１ａを光軸Ｘ上に戻す。その後、準焦部３００を観察位置に上昇させる。その後、温度差補正の待ち時間を置いてから観察を開始する。

本実施形態では、液浸対物レンズ３０１ａと３０１ｂの切り換え部であるレボルバー３０２を用いることにより、固定されたノズル３０３の下方に液浸対物レンズを配置している。これにより、第二実施形態よりさらに単純な構成で必要最少量の液体供給を実現している。

これまで、図面を参照しながら本発明の実施形態を述べたが、本発明は、これらの実施形態に限定されるものではなく、その要旨を逸脱しない範囲において様々な変形や変更が施されてもよい。

本発明の第一実施形態の顕微鏡装置を示している。 図１の顕微鏡装置における液体供給装置の機構部の詳細図である。 本発明の第一実施形態における液体供給のフローチャートである。 本発明の第二実施形態の顕微鏡装置における主要部分に示している。 図４のノズル周辺部を拡大して示している。 本発明の第三実施形態の顕微鏡装置における主要部分に示している。 図６の対物レンズ周辺部を上方から見た図である。

１０１…培養部、１０２…顕微鏡部、１０３…ヒーター、１０４…温度センサー、１０５…加湿パッド、１０６…センサー、１０７…電磁弁、１０８…シール部材、１０９…制御器、１１０…培養細胞、１１１…透過光源、１１２…断熱層、１１３…液浸対物レンズ、１１４…準焦部、１１５…ステージ、１１５ａ…凹部、１１６…結像レンズ、１１７…落射光源、１１８…蛍光フィルター、１１９…ＣＣＤカメラ、１２０…シール部材、１２１…標本容器、１２２…供給タンク、１２３…供給ポンプ、１２４…回動アーム、１２５…ノズル、１２６…チューブ、１２７…廃液皿、１２８…排出ポンプ、１２９…排出タンク、１３０…カム部材、１３１…ベアリング、１３２…シール部材、１３３…回動ピン、１３４…規制ピン、１３５…フック、１３６…バネ部材、１３７…固定部材、２００…培養部、２０１…顕微鏡部、２０２…直動ステージ、２０２ａ…シール部、２０２ｂ…凹部、２０２ｃ…細孔、２０３…回動ステージ、２０３ａ…トレー接続部、２０３ｂ…オスアリ、２０４…液浸対物レンズ、２０５…トレー、２０５ａ…メスアリ、２０６…ノズル、２０６ａ…凸部、２０６ｂ…細孔、２０６ｃ…溝、２０６ｄ…フランジ部、２０７…シール部材、２０８…標本容器、２０９…チューブ、２１０…Ｏリング、２１１…準焦部、３００…準焦部、３０１ａ…液浸対物レンズ、３０１ｂ…液浸対物レンズ、３０２…レボルバー、３０３…ノズル。

Claims (11)

1. 液浸対物レンズ、および標本を搭載するステージを備えた倒立型顕微鏡を用いた標本観察方法であって、
   前記液浸対物レンズに前回液体を供給した時からの観察点の変更の有無を監視する監視ステップと、
   前記監視ステップの監視の結果、観察点の変更があった場合、
   前記液浸対物レンズに所定時間、液体の供給を行なう液体供給ステップと、
   前記液浸対物レンズに所定時間、液体の供給を行なった後、液体の供給を停止する液体供給停止ステップと、
   を含むことを特徴とする標本観察方法。
   
2. 前記倒立型顕微鏡を用いた標本観察方法において、前記倒立型顕微鏡は前記液浸対物レンズを上下動させる準焦部をさらに備えており、
   前記監視ステップの監視の結果、観察点の変更があった場合、
   前記液体の供給を行なう液体供給ステップの前に、前記準焦部を下降させる第１の準焦部移動ステップと、
   前記液体の供給を行なう液体供給ステップの後に、前記準焦部を上昇させて所定の位置に移動させる第２の準焦部移動ステップと、
   を含むことを特徴とする請求項１に記載の標本観察方法。
   
3. 液浸対物レンズ、および標本を搭載するステージを備えた倒立型顕微鏡を用いた標本観察方法であって、
   前記液浸対物レンズに前回液体を供給した時からの前記液浸対物レンズと前記ステージの相対的な移動距離を監視する監視ステップと、
   前記監視ステップによる前記ステージの移動距離の監視の結果に基づいて
   前記液浸対物レンズに液体の供給を行なう液体供給ステップと、を含むことを特徴とする標本観察方法。
   
4. 前記供給ステップは、前記ステージの移動距離の監視の結果、前記移動距離が、ある距離より大きくなった場合、前記液浸対物レンズに液体を供給する
   ことを特徴とする請求項３に記載の標本観察方法。
   
5. 前記倒立型顕微鏡を用いた標本観察方法において、前記倒立型顕微鏡は前記液浸対物レンズを上下動させる準焦部をさらに備えており、
   前記ステージの移動距離の監視の結果、前記移動距離が、ある距離より大きくなった場合、前記液体の供給を行なう液体供給ステップの前に、前記準焦部を下降させる第１の準焦部移動ステップと、
   前記液体の供給を行なう液体供給ステップの後に、前記準焦部を上昇させて所定の位置に移動させる第２の準焦部移動ステップと、
   を含むことを特徴とする請求項４に記載の標本観察方法。
   
6. 標本を観察するための液浸対物レンズと、
   前記標本を搭載するステージと、
   前記液浸対物レンズに液体を供給する供給器と、
   を備えている倒立型顕微鏡システムであって、
   前記倒立型顕微鏡システムはさらに、
   前記液浸対物レンズに前回液体を供給した時からの観察点の変更の有無を監視する監視手段を備え、
   前記監視手段の監視の結果、観察点の変更があった場合、
   前記供給器により前記液浸対物レンズに所定時間、液体の供給を行ない、前記液浸対物レンズに所定時間、液体の供給を行なった後、液体の供給を停止することを特徴とする倒立型顕微鏡システム。
   
7. 前記倒立型顕微鏡システムにおいて、前記液浸対物レンズを上下動させる準焦部をさらに備えており、
   前記監視ステップの監視の結果、観察点の変更があった場合、前記液体の供給を行なう前に、前記準焦部を下降させ、
   前記液体の供給を行なった後に、前記準焦部を上昇させて所定の位置に移動させる
   ことを特徴とする請求項６に記載の倒立型顕微鏡システム。
   
8. 標本を観察するための液浸対物レンズと、
   前記標本を搭載するステージと、
   前記液浸対物レンズに液体を供給する供給器と、
   前記液浸対物レンズに前回液体を供給した時からの前記ステージの相対的な移動距離を監視する監視手段と、
   を備えている倒立型顕微鏡システムであって、
   前記監視手段による前記ステージの相対的な移動距離の監視の結果に基づいて、前記液浸対物レンズに液体の供給を行なうこと
   を特徴とする倒立型顕微鏡システム。
   
9. 前記監視手段による監視の結果、
   前記移動距離が、ある距離より大きくなった場合、前記供給器により、
   前記液浸対物レンズに液体を供給する
   ことを特徴とする請求項８に記載の倒立型顕微鏡システム。
   
10. 前記倒立型顕微鏡システムにおいて、前記液浸対物レンズを上下動させる準焦部をさらに備えており、
    前記監視手段による監視の結果、
    前記移動距離が、ある距離より大きくなった場合、
    前記液浸対物レンズに液体の供給を行なう前に、前記準焦部を下降させ、
    前記液浸対物レンズに液体の供給を行なった後に、
    前記準焦部を上昇させて所定の位置に移動させる
    ことを特徴とする請求項９に記載の倒立型顕微鏡システム。
    
11. 前記倒立型顕微鏡システムはさらに、
    前記標本の観察を行なうための撮像手段と、
    前記供給器により供給が行なわれた液体と前記液浸対物レンズの温度差が解消される所定の時間を経過したか否かを監視する時間監視手段と、
    を備えており、
    前記時間監視手段による監視の結果、所定の時間を経過した場合、前記撮像手段により、前記標本の観察を開始することを特徴とする請求項６〜１０のうち、いずれか１項に記載の倒立型顕微鏡システム。
    
    以上。

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