JP5269833B2 - 溶液試料の保持方法、試料セル、および円二色性の測定装置 - Google Patents

Description

本発明は微量の溶液試料の保持方法に関する。特に円二色性の測定に用いる試料セルにおいて、試料セル自体の歪みによる測定精度への影響の排除、および、微量な溶液試料の測定の安定化に関する。

対掌性とも呼ばれるキラリティーをもつ物質は、円偏光を吸収する際に左回りの円偏光と右回りの円偏光に対して吸光度に差が生じるという円二色性(ＣＤ)を示す。このような円二色性の現象は、物質に特有な波長において生じるので、分子の立体構造の解明など幅広く用いられている。また、光学活性な試料を左右の円偏光で励起させたときに発生する蛍光の強度差を測定する蛍光検出円二色性分散計もある。

貼り合わせセル
これらの円二色性分散計を用いて溶液試料を測定する場合、溶液試料を角型セルや円筒セルに入れてセルの窓越しに光を照射する方法が通常用いられる（特許文献１参照）。一般的な試料セルを図９（Ａ）〜（Ｃ）に示す。例えば、１００μＬ程度の溶液試料であれば、図９（Ａ）のような２枚の窓板を貼り合わせたセルを用いる。凹部のある一方の窓板９１に溶液試料を入れて、他方の窓板９２を蓋のように貼り合わせる。２枚の窓板の間隔は測定光の光路長となるから光路長の精度を確保するため、貼り合わせ面は精密研磨されている。

また、特許文献１に説明されているように窓板にストレスが掛かると、円二色性の測定精度に影響が生じるため、接着材などを用いないで両窓板を接触させるだけのセルもある。窓板同士の接触状態は、挟持されている溶液試料の表面張力だけで保持される。窓板に内部応力が残留して歪みが生じると、測定光の偏光状態が乱れてしまい、例えば左円偏光が右円偏光に変わってしまうことがあるからである。

特開２００１−１３３３９９号公報

貴重な天然抽出物やタンパク質などの円二色性を測定する場合、採取可能な試料の容量に制約を受けることが多い。しかしながら、従来の貼り合わせセルでは、貼り合わせ時の気泡の侵入を防ぐため、少なくとも１００μＬ程度の溶液試料が必要となる。また、微量の溶液試料を挟んだ状態でセルを持ち運ぶと、試料に気泡が侵入してしまうこともあり、注意深く取り扱わなければならなかった。

キャピラリーセル
赤外吸光度の測定など一般的な光学測定であれば、図９（Ｂ）、（Ｃ）のような微量の溶液用のキャピラリーセル９３が用いられる。キャピラリーセル９３は、図９（Ｂ）に示す石英ガラス製の毛細管を有し、その管内に微量の溶液試料が浸透するようになっている。対物レンズ９４で集光した測定光をセルに照射し、その透過光を集光レンズ９５で集光することで、セル内の微量の溶液試料を透過する光強度を検出する。
ただし、キャピラリーセルを円二色性分散計に用いる場合には、測定精度上の問題が生じる。つまり、セルが微小径の毛細管であるために歪み易く、測定光として円偏光を照射すると偏光状態が容易に壊れてしまう。セル自体によって偏光状態が変化すると、検出するスペクトルデータのベースラインにうねりが生じてしまい、円二色性分散計の測定精度に影響を与えてしまう。従って、キャピラリーセルは円二色性の測定には適さなかった。

本発明は上記の課題に鑑みなされたものであり、その目的は、微量の溶液試料を透過する光を測定するために、所定間隔で対向させた二枚の板状の透光性部材を用いて、溶液試料をこれら二枚の透光性部材の間に挟んで保持する際に、第一に、板状の透光性部材に歪みが生じにくくすることができ、第二に、数μＬ〜１０μＬ程度の微量の溶液試料を保持することができ、第三に、溶液試料に気泡が侵入しないようにすることができることである。また、上記目的を達成できる試料セル、およびこれを用いた円二色性分散の測定装置を提供することである。

発明者らは、貼り合わせセルの一方の窓板の表面に例えば環状のフッ素コートを施し、中央部分に溶液試料を滴下させたところ、溶液試料がフッ素コートの疎水性や疎油性によって移動しにくくなり、滴下した箇所での微量の溶液試料の安定保持が可能となることに着目した。そして、微量の溶液試料がこのような状態であれば、気泡が侵入することなく容易に他方の窓板を覆うことができることを見出した。

すなわち、上記目的を達成するため、本発明に係る溶液試料の保持方法では、溶液試料が滴下される滴下領域と該滴下領域を囲む撥液領域とを含んだ載置面を有する一方の透光性部材、および、前記一方の透光性部材を載せる面とその面に形成された貫通孔とを有するホルダーを用いて、前記ホルダーに前記一方の透光性部材を置く工程と、
前記微量の溶液試料を前記載置面の滴下領域に滴下する滴下工程と、
前記溶液試料を前記他方の透光性部材によって覆うとともに、前記一方の透光性部材と前記他方の透光性部材との間隔を所定の大きさに保つ被覆工程と、を備えることを特徴とする。
ここで、前記一方の透光性部材のおける前記載置面の撥液領域は撥液性物質で覆われており、前記他方の透光性部材における前記載置面に対向する面は前記撥液性物質で覆われておらず、前記二枚の透光性部材の両方に接触させた状態の前記溶液試料の表面張力によって、前記二枚の透光性部材の挟持状態を維持させて、前記微量の溶液試料を保持する。撥液性は、撥水や撥油のように液体をはじく性質を示し、試料が水溶液である場合の疎水性を含む意味である。

また、上記目的を達成するため、本発明に係る試料セルは、所定間隔で対向する二枚の板状の透光性部材と、前記一方の透光性部材を載せる面及びその面に形成された貫通孔を有するホルダーとを有し、前記溶液試料を前記二枚の透光性部材の間に挟んで保持する試料セルであって、
一方の透光性部材は、前記溶液試料が滴下される滴下領域と該滴下領域を囲む撥液領域とを含んだ載置面を有し、該載置面の撥液領域は撥液性物質で覆われており、前記載置面を上向きにして前記ホルダーに置かれていて、
前記他方の透光性部材における前記載置面に対向する面は、前記撥液性物質で覆われておらず、当該他方の透光性部材は、前記一方の透光性部材との間隔が所定の大きさとなるように保たれ、かつ、前記載置面の滴下領域に滴下された前記溶液試料を覆っており、
前記二枚の透光性部材の両方に接触させた状態の前記溶液試料の表面張力によって、前記二枚の透光性部材の挟持状態が維持され、前記微量の溶液試料を保持することを特徴とする。

ここで、前記ホルダーは、前記一方の透光性部材の厚さ寸法よりも深い寸法を有する凹部を有する。そして、前記一方の透光性部材は、前記凹部の底面に置かれていることが好ましい。
さらに、本発明の試料セルは、前記他方の透光性部材の表面に対して透過光測定の測定光が直角に入射し、溶液試料からの透過光が前記ホルダーの貫通孔から出射するように、前記測定光に合わせた姿勢にして用いられることが好ましい。
また、前記一方の透光性部材は、表裏いずれの面が前記載置面であるかを色または形状によって表示する表示手段を有することが好ましい。
さらに、本発明の試料セルは、円二色性の測定用であって、前記二枚の透光性部材には前記ホルダーによるストレスが掛かっていないことが好ましい。

さらに、上記目的を達成するため、本発明に係る円二色性の測定装置は、前記試料セルと、光照射手段から照射された光の偏光状態を周期的に変調させる偏光変調手段と、光を検出する検出手段と、を備え、
前記試料セルの他方の透光性部材越しに前記変調された偏光状態の光を前記微量の溶液試料に照射して、該溶液試料を透過する光を前記検出手段により検出することで前記溶液試料の円二色性を測定することを特徴とする。

本発明の溶液試料の保持方法、試料セル、円二色性の測定装置によれば、２枚の板状の透光性部材の間に溶液試料を挟んで、溶液試料の表面張力によりその挟持状態が維持されるので、従来のキャピラリーセルのようなセル自体に歪みが生じることがなく、ベースラインのうねりの発生を抑えることができる。

また、一方の透光性部材に撥液領域を設けて撥液性のある物質を配置したので、滴下領域に滴下された溶液試料は撥液領域からはじかれて、移動することができず、滴下領域に集合しているしかない。このように溶液試料が撥液領域の撥液性によって滴下領域から出ることを制限され、滴下領域にて溶液試料が安定した状態で、他方の透光性部材を被せることができるので、微量の溶液試料を覆う際に気泡の侵入を防ぐことができる。

また、溶液試料は、両方の透光性部材に接触した状態で保持されており、かつ、周囲に撥液性の物質が配置されているので、試料セルを移動したり、試料セルを立てたりしても、溶液試料がセル内で移動することがない。
以上のように、本発明によれば、板状の透光性部材に歪みが生じにくくすることができ、また、数μＬ〜１０μＬ程度の微量の溶液試料を保持することができ、さらに、溶液試料に気泡が侵入しないようにすることができる。

本発明の円二色性分散計の概略構成図である。 本発明の試料セルの分解図である。 （Ａ）〜（Ｃ）は、本発明の試料セルに溶液試料を収納する手順を説明する断面図である。 本発明の変形例の試料セルを示し、（Ａ）は試料セルの分解図であり、（Ｂ）は断面図であり、（Ｃ）は別の変形例の試料セルを示す断面図である。 試料セルに形成された表示手段を説明する斜視図である。 実施例にかかるベースラインの測定結果を示すグラフである。 実施例にかかるｄ−１０−ＡＣＳのＣＤスペクトルを示すグラフである。 実施例にかかるリゾチームのＣＤスペクトルを示すグラフである。 従来の貼り合わせセルおよびキャピラリーセルを示す図である。

以下に本発明にかかる円二色性分散の測定装置（以降、円二色性分散計と呼ぶ。）について図面を参照して説明する。
図１は円二色性分散計の一実施形態の全体構成図である。円二色性分散計１０は、光照射手段１２と、光照射手段１２からの光の偏光状態を周期的に変調するための偏光変調手段１４と、光を検出する検出手段１６と、を備える。本実施形態では、偏光変調手段１４によって変調された円偏光が試料セル３０を照射し、試料セル３０を透過する光を検出手段１６で検知する場合を説明するが、例えば、試料セル３０の後段に積分球を設けて、拡散透過光も含めて検出できるようにしてもよい。

光照射手段１２は、光源１８および分光器２０を含んで構成されている。光源１８から出射された紫外領域または可視領域の光は、分光器２０により単波長光とされる。分光器２０として回折格子を搭載したモノクロメータを用いることにより、必要な単波長光を順次選択して所定範囲の波長走査を行うことができる。

偏光変調手段１４は、偏光子２２と光弾性変調子であるピエゾエラスティックモジュレータ（ＰＥＭ）２４とを含んで構成される。分光器２０からの単波長光は、偏光子２２によって直線偏光にされる。ＰＥＭ２４の方位角は、光軸を中心に偏光子２２の方位角よりも所定角度(例えば４５°)だけ回転した角度となっている。偏光子２２からの直線偏光はＰＥＭ２４を通ることにより、独立な方向の偏光成分に位相差を与えられ、直線偏光の偏光状態が周期的に変調する。つまり、直線偏光は周期的に変化する左円偏光と右円偏光となる。このＰＥＭ２４は所定周波数(例えば５０ｋＨｚ)の駆動電圧が加えられ、この周波数に応じて左右の円偏光が試料セル３０に照射される。

ＰＥＭ２４により変調された円偏光は、試料セル３０に照射され、試料セル３０内の溶液試料Ｓを透過する。透過光は、検出手段１６である光電子増倍管（ＰＭＴ）で検出される。この検出信号から溶液試料Ｓの円二色性が測定される。検出信号から円二色性（ＣＤ）スペクトルを算出する方法は従来と同様に行えばよい。つまり、検出信号のうち、ＰＥＭ２８の変調周波数と同一の周波数成分を用いて円二色性を求め、さらに分光器２４により溶液試料Ｓに照射する円偏光の波長操作を行って、ＣＤスペクトルが得られる。

試料セル
本実施形態では試料セル３０として、微量の溶液試料Ｓを安定して保持できるマイクロディスクセルを用いる。
図２は、試料セル３０の分解図である。試料セル３０は、保持手段としてのディスクホルダー３２、透光性部材である２枚のディスク３４、３６を有して構成され、ディスク間に微量の溶液試料Ｓを挟持する。

ディスクホルダー３２には、第１ディスク３４を収納する円筒状の凹部３８が形成され、この凹部３８には第１ディスク３４と略同じ円形の底面４６がある。底面４６の略中央にはディスクホルダー３２を貫通する貫通孔４０が形成されている。底面４６は、第１ディスク３４を載置する面であり、精密研磨されている。
第１ディスク３４は石英ガラスからなり、一方の面には、フッ素コート４２が環状に施されている。この面は本発明の載置面に相当し、フッ素コート４２の領域３４Ｂと、これに囲まれた中央の領域３４Ａとに区分される。前者は本発明の撥液領域３４Ｂ、後者は本発明の滴下領域３４Ａに相当する。フッ素コート４２は、撥水性と撥油性を示し、第１ディスク３４の両面に施してもよいが、ディスクホルダー３２の底面４６と接触する面にはフッ素コートしない方がその平坦度を精度良く仕上げる上で好適である。

本発明ではフッ素コートに限らず、他の疎水コートや撥油コートでもよい。少なくとも溶液試料に対して撥液性を示す物質を用いればよい。または、撥液性のある物質を用いる代わりに、撥液領域３４Ｂを微細な凹凸構造に形成してもよい。微細な凹凸構造であれば、撥液領域３４Ｂの表面積が増大して撥液性が生じる。
第２ディスク３６は石英ガラスからなり、第１ディスク３４の凹部３８全体を覆うことができる大きさである。ディスクホルダー３２の凹部３８のある表面のうち、この凹部３８の外側周辺は、第２ディスク３６を貼り合わせる面４４であり、精密研磨されている。

試料セルの使用方法
図３（Ａ）〜（Ｃ）は、試料セル３０を用いて数μＬ〜１０μＬ程度の微量の溶液試料Ｓを保持する手順を示す図である。
図３（Ａ）にて、ディスクホルダー３２の凹部３８に、まず第１ディスク３４のみをフッ素コート４２の面が上向きとなるように載置する。そして微量の溶液試料Ｓをピペットなどで滴下領域３４Ａに必要なだけ滴下する。一滴のみ滴下してもよい。ここまでを滴下工程（ＳＴＥＰ１）と呼ぶ。

フッ素コート４２は、滴下された溶液試料Ｓをはじくので、溶液試料Ｓは移動できず滴下領域３４Ａに集合しているしかない。このように溶液試料Ｓは撥液領域３４Ｂの撥液性によって滴下領域３４Ａから出ることを制限され、図３（Ｂ）に示す状態で保持される。

図３（Ｂ）にて、凹部３８を第２ディスク３６で覆う。凹部３８の深さ寸法は第１ディスク３４の厚さ寸法よりも大きいので、両ディスクの隙間が生じる。第１ディスク３４の厚さ寸法を適宜変えることにより、この隙間に基づく光路長Ｌを設定することができる。また、凹部３８を第２ディスク３６で覆うと、微量の溶液試料Ｓが第２ディスク３６の内側の表面とも接触して、図３（Ｃ）の状態になる。このようにして、微量の溶液試料Ｓが２枚のディスク間に保持される。ここまでを被覆工程（ＳＴＥＰ２）と呼ぶ。

図３（Ｃ）のように、２枚のディスク間には、溶液試料Ｓと気体が存在するが、溶液試料Ｓがフッ素コート４２によって滴下領域３４Ａで集合した状態で維持されているので、上記の被覆工程（ＳＴＥＰ２）において、溶液試料Ｓに気体がとり込まれることなく、第２ディスク３６を被せることができ、気泡の侵入を防止できる。

このように、試料セル３０は、セル内に溶液試料Ｓを滴下するので一滴測定セルとも呼ばれる。従来の貼り合わせセルとは構造が異なり、第１ディスク３４にフッ素コート４２が施されているので、溶液試料Ｓが微量であっても気泡が入りにくい構造となっている。両ディスクの隙間である光路長Ｌは、０．１ｍｍ〜数ｍｍの範囲内で設定するとよい。より好ましくは、０．１ｍｍ〜１ｍｍの範囲内がよい。第１ディスク３４の厚さ寸法を適宜変えてディスクの隙間を設定すれば、０．２μＬ〜１０μＬ程度の微量の溶液試料Ｓを安定して挟持することができる。

円二色性の測定方法
図３（Ｃ）に示すように、円二色性の測定の際、ＰＥＭ２４からの円偏光５０を第２ディスク３６の外側の表面に対して直角に入射させる。入射角度が直角であることが円偏光５０の偏光状態を維持する上でよい。溶液試料Ｓを透過した円偏光は、第１ディスク３４の滴下領域３４Ａを通って、ディスクホルダー３２の貫通孔４０から出射され、検出手段１６で検出される。

なお、図１に示すように、試料セル３０を立てた状態にして円二色性分散計１０に載置することができる。試料セル３０の第２ディスク３６は、溶液試料Ｓとの接触により、その表面張力が作用してディスクホルダー３２に保持されている。よって、試料セル３０が移動したり、姿勢が変わったりしても第２ディスク３６が外れることなく、溶液試料Ｓを安定して保持することができる。

本実施形態の試料セル３０を用いて円二色性の測定を行えば、０．２μＬ〜１０μＬ程度の微量の溶液試料Ｓを安定して挟持することができる。従来、十分な量の溶液試料を得ることが困難であった貴重な天然抽出物やタンパク質なども測定することができる。また、従来のキャピラリーセルと比較すると、石英ガラスのディスク３４、３６がディスクホルダー３２で保持されていて、ディスク３４、３６に不要な外力が作用しないので、セル自体の歪みが生じにくく、ベースラインのうねりの発生を抑えることができる。

なお、滴下領域３４Ａの全周に形成された撥液領域３４Ｂを複数に分割して、滴下領域３４Ａの周りに分散させてもよい。例えば、滴下領域３４Ａの周りにフッ素コート４２と、フッ素コート以外の表面加工とを交互に施しても構わない。

本実施形態の変形例として、２枚のディスク１３４、１３６間の光路長Ｌを調整するための調整部材４８を用いた試料セル１３０について、図４（Ａ）、（Ｂ）に基づいて説明する。試料セル１３０は、図４（Ａ）に示す分解図のように、ディスク１３４、１３６間に環状板である調整部材４８を介在させるようになっている。第１ディスク１３４は前述の第１ディスク３４と略同等であるが、撥液領域３４Ｂの外側にフッ素コート４２のない周辺領域３４Ｃを有している。第２ディスク１３６は、前述の第２ディスク３６と同じものが使える。

調整部材４８の両面は、２枚のディスク１３４、１３６を貼り合わせる面４８Ａ、４８Ｂとなるため、その厚さ寸法が光路長Ｌと一致するように精密研磨されている。図４（Ｂ）の断面図は、調整部材４８の両面にディスク１３４、１３６を接触させて微量の試料Ｓを挟持している状態を示す。

同図のように、調整部材４８の環状部の内径寸法は、第１ディスク１３４の撥液領域３４Ｂを充分に囲む程度に設定されている。また、調整部材４８の厚さ寸法が光路長Ｌとなるから、予め厚さ寸法の異なる幾つかの調整部材４８を準備しておき、所望の光路長Ｌに応じた調整部材４８を選択すればよい。両ディスク１３４、１３６の内側表面に溶液試料Ｓが接触しているため、両ディスクが溶液試料Ｓの表面張力によって調整部材４８から外れないようになっている。
なお、環状板の調整部材４８を用いれば、図４（Ｃ）に示す別の変形例のように、微量の溶液試料Ｓを保持することができる。同図のように透光性のある試料載置台２３４の表面にフッ素コート４２を施しておく。溶液試料Ｓを滴下した後、調整部材４８を介して第２ディスク１３６を被せればよい。

次に、本実施形態の第１ディスクの表裏を容易に確認できる構成について、図５に基づいて説明する。
図５は、文字、マーク、色などの表示手段を備えた第１ディスク３３４を示す斜視図である。フッ素コート４２自体が透明であるため、フッ素コート４２だけでは小さな形状の第１ディスク３３４のいずれの面にフッ素コート４２が施されているのかが不明となり得る。図５の第１ディスク３３４では、撥液領域３４Ｂの外側にフッ素コートのない周辺領域３４Ｃが設けられており、周辺領域３４Ｃの一部にレーザー加工などで所望の文字３４Ｄが刻まれている。また、滴下領域３４Ａには、円形のマーク３４Ｅが同様に刻まれている。レーザー加工などにより第１ディスク３３４の表面に溝が形成されているから、測定者がこれらの文字３４Ｄやマーク３４Ｅを認識し易く、第１ディスク３３４の表裏を容易に確認できる。また、円形のマーク３４Ｅは、滴下工程（ＳＴＥＰ１）での滴下位置の目安にもなり、正確な位置に滴下を行える。

また、周辺領域３４Ｃの表面に微細な凹凸を形成し、回折格子などの光干渉面を作製してもよい。光干渉面からの発色（干渉模様）によって第１ディスク３３４の表裏を容易に確認できる。なお、第１ディスク３３４には、これら文字、マーク、色の少なくとも一つが形成されていれば充分であり、また、第１ディスク３３４のフッ素コート４２が施された面と同面にこれらの表示手段を設けることが好ましい。
なお、本実施形態の試料セルを蛍光検出円二色性分散計に適用してもよい。

本発明の円二色性分散計１０および試料セル３０を用いて、実際に溶液試料Ｓの円二色性を測定した例を説明する。
まず、試料セル３０に溶媒のみを入れて、ＣＤスペクトルのベースラインを測定した。図１と同様の構成の測定装置を用いて、溶媒に円偏光を照射してその透過光を検出することでベースラインの測定を行った。主な測定条件を示す。
溶媒容量： １０μＬ
セル長さ（光路長Ｌ）： １.０ｍｍ
測定温度： 室温

図６は溶媒のみのＣＤスペクトルを示す。横軸に照射する円偏光の波長を示し、縦軸に円二色性の大きさをモル楕円率によって示す。溶媒にはキラリティーを示さないので、モル楕円率は零となり、ＣＤスペクトルは平坦であることが理想である。図６のグラフからわかるように、本発明の試料セル３０を用いた場合、１８５ｎｍ〜３５０ｎｍの波長範囲においてベースラインの変化は−１．４ｍｄｅｇ〜＋２．９ｍｄｅｇの範囲内に収まっている。従来のキャピラリーセルのようなセルの歪みによるベースラインの乱れは見られない。つまり、本発明の試料セル３０を用いれば、うねりのない良好なベースラインが得られる。

次に、ｄ体の１０−カンファースルホン酸アンモニウム（ｄ−１０−ＡＣＳ）を溶液試料とした場合のＣＤスペクトルを図７に示す。溶液試料の重量濃度を０．０６％とし、容量を５μＬとした。本発明の試料セル３０を用いた結果と、比較例として従来の貼り合わせセルを用いた結果を合わせて示す。いずれの結果も、１９２ｎｍ付近で負のピークを示し、２９０ｎｍ付近で正のピークを示し、これらのＣＤ強度比が正常値である１：２を示している。

また、リン酸緩衝液を用いて、リゾチームのＣＤスペクトルを測定した。リゾチームは０．０７ｍｇ／ｍＬのものとし、容量を５μＬとした。図８に示すように、本発明の試料セル３０および従来の貼り合わせセルのいずれの結果も、１９０ｎｍ付近で正のピークを示し、２０８ｎｍ付近で負のピークを示し、２２０ｎｍ付近で肩の存在を示し、正常なＣＤスペクトルが得られることが分かる。
従って、本発明の試料セル３０を用いれば、タンパク質や貴重な天然抽出物などの試料溶液が数μＬ〜１０μＬ程度の微量であっても、正常なＣＤスペクトルを取得することが可能である。

１０ 円二色性分散計
１２ 光照射手段
１４ 偏光変調手段
１６ 検出手段
３０ 試料セル
３２ ディスクホルダー
３４ 第１ディスク（一方の透光性部材）
３４Ａ 滴下領域
３４Ｂ 撥液領域
３４Ｃ、３４Ｄ、３４Ｅ 表示手段
３６ 第２ディスク（他方の透光性部材）
Ｓ 溶液試料

Claims (7)

1. 微量の溶液試料を透過する光を測定するために、所定間隔で対向させた二枚の板状の透光性部材を用いて、前記溶液試料を前記二枚の透光性部材の間に挟んで保持する方法であって、
   前記一方の透光性部材は、前記溶液試料が滴下される滴下領域と該滴下領域を囲む撥液領域とを含んだ載置面を有し、該載置面の撥液領域は撥液性物質で覆われており、前記他方の透光性部材における前記載置面に対向する面は、前記撥液性物質で覆われておらず、
   前記一方の透光性部材を載せる面とその面に形成された貫通孔とを有するホルダーを用いて、当該ホルダーに前記載置面を上向きにして前記一方の透光性部材を置く工程と、
   前記微量の溶液試料を前記載置面の滴下領域に滴下する滴下工程と、
   前記溶液試料を前記他方の透光性部材によって覆うとともに、前記一方の透光性部材と前記他方の透光性部材との間隔を所定の大きさに保つ被覆工程と、を備え、
   前記二枚の透光性部材の両方に接触した状態の前記溶液試料の表面張力によって、前記二枚の透光性部材の挟持状態を維持させて、前記微量の溶液試料を保持することを特徴とする溶液試料の保持方法。
2. 微量の溶液試料を透過する光を測定するために用いられ、所定間隔で対向する二枚の板状の透光性部材と、前記一方の透光性部材を載せる面及びその面に形成された貫通孔を有するホルダーとを有し、前記溶液試料を前記二枚の透光性部材の間に挟んで保持する試料セルであって、
   前記一方の透光性部材は、前記溶液試料が滴下される滴下領域と該滴下領域を囲む撥液領域とを含んだ載置面を有し、該載置面の撥液領域は撥液性物質で覆われており、前記載置面を上向きにして前記ホルダーに置かれていて、
   前記他方の透光性部材における前記載置面に対向する面は、前記撥液性物質で覆われておらず、当該他方の透光性部材は、前記一方の透光性部材との間隔が所定の大きさとなるように保たれ、かつ、前記載置面の滴下領域に滴下された前記溶液試料を覆っており、
   前記二枚の透光性部材の両方に接触させた状態の前記溶液試料の表面張力によって、前記二枚の透光性部材の挟持状態が維持され、前記微量の溶液試料を保持することを特徴とする試料セル。
3. 請求項２記載の試料セルにおいて、
   前記ホルダーは、前記一方の透光性部材の厚さ寸法よりも深い寸法を有する凹部を有し、
   前記一方の透光性部材は、前記凹部の底面に置かれていることを特徴とする試料セル。
4. 請求項３記載の試料セルにおいて、
   前記他方の透光性部材の表面に対して透過光測定の測定光が直角に入射し、溶液試料からの透過光が前記ホルダーの貫通孔から出射するように、前記測定光に合わせた姿勢にして用いられることを特徴とする試料セル。
5. 請求項２から４のいずれかに記載の試料セルにおいて、
   前記一方の透光性部材は、表裏いずれの面が前記載置面であるかを色または形状によって表示する表示手段を有することを特徴とする試料セル。
6. 請求項２から５のいずれかに記載の試料セルは、円二色性の測定用であって、
   前記二枚の透光性部材には前記ホルダーによるストレスが掛かっていないことを特徴とする円二色性測定用試料セル。
7. 請求項２から６のいずれかに記載の試料セルと、
   光照射手段から照射された光の偏光状態を周期的に変調させる偏光変調手段と、
   光を検出する検出手段と、を備え、
   前記試料セルの他方の透光性部材越しに前記変調された偏光状態の光を前記微量の溶液試料に照射して、該溶液試料を透過する光を前記検出手段により検出することで前記溶液試料の円二色性を測定することを特徴とする円二色性の測定装置。

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