JP5247705B2 - 抗細菌活性を持つ置換チエノピリドン化合物 - Google Patents

Description

［０００１］本発明は、クロマンまたはテトラヒドロキノリン基を含む左側、および右側チエノピリドン基を有する、新規二環芳香族複素環化合物に関する。本発明はまた、細菌メチオニルｔＲＮＡシンテターゼ（ＭｅｔＲＳ）の阻害剤としてのこれらの化合物の使用、該化合物の調製プロセス、および抗細菌剤としての、療法における該化合物の使用にも関する。特に、本発明は、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）に基づく感染のための療法に用いられるようなこれらの化合物に関する。

［０００２］抗細菌剤の検索は、「微生物」がヒト疾患を引き起こすことがわかった１８００年代後期に始まった。前世紀の間、科学者らは、多くの細菌株をターゲティングし、そして阻害するのに有用な多様な薬剤を開発した。特に、抗生物質として知られる抗細菌剤が開発され、そして大部分の既知の細菌感染を治療するため、先進工業国の間で一般的に使用されている。元来、ペニシリンのような抗生物質は、細菌細胞壁の構築に関与する酵素であるトランスペプチダーゼの作用を遮断することによって、細菌の複製を阻害した。しかし、過度の使用および多くの細菌株の耐性適応のため、多くの抗生物質は、感染を治療する際の有効性のある程度またはすべてを失った。新規分子増殖機構をターゲットとする一連の抗細菌剤は、抗生物質耐性のさらなる増進を回避するのに有用であろう。１つのこうしたターゲットは、ｔＲＮＡシンテターゼである。

［０００３］ｔＲＮＡシンテターゼは、タンパク質生合成に関与するため、その阻害は細胞増殖の中断につながると予期されうる。したがって、例えば、生物、蛍光菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｓ）によって産生される化合物、ムピロシンは、抗細菌剤であり、そしてＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅによって市販される製品Ｂａｃｔｒｏｂａｎ（登録商標）中の活性成分として用いられている。ムピロシンは、イソロイシルｔＲＮＡシンテターゼの阻害剤であると示されている。各ｔＲＮＡシンテターゼは、薬剤発見のための別個のターゲットに相当する。哺乳動物細胞よりも細菌細胞に対して選択的であるｔＲＮＡシンテターゼ阻害剤は、ヒト疾患の治療において、抗細菌剤として用いられる潜在的可能性を有するため、療法的にかなり興味深い。

［０００４］グラム陽性生物である黄色ブドウ球菌（Ｓ． ａｕｒｅｕｓ）中のｔＲＮＡシンテターゼ遺伝子の配列が最近決定され（例えば、黄色ブドウ球菌ＭｅｔＲＳに関する、欧州特許出願第９７３００３１７．１号、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ Ｂｅｅｃｈａｍを参照されたい）、それによって、阻害剤を同定するプロセスが補助された。さらに、他の病原性細菌、例えばグラム陰性生物、インフルエンザ菌（Ｈ． ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）のｔＲＮＡシンテターゼ遺伝子の配列もまた公表されている（Ｒ．Ｄ． Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２６９， ４９６−５１２， １９９５）。

［０００５］メチオニルｔＲＮＡシンテターゼ（ＭｅｔＲＳ）に対する阻害活性に関して、そして抗細菌剤としての能力に関して、いくつかの化合物が最近開示されている。特に、Ｊａｒｖｅｓｔらは、ＭｅｔＲＳ阻害を示した多様な二環芳香族複素環化合物を記載した（Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． １４（２００４）３９３７−３９４１）。これらの発見に鑑みて、当該技術分野には、ＭｅｔＲＳをターゲットとし、そしてそれによって、感染性疾患の治療に対する新規アプローチを提供する必要性が継続してある。

［０００６］１つの特に興味深い細菌ターゲットは、生物、クロストリジウム・ディフィシレ（Ｃ．ディフィシレ）である。Ｃ．ディフィシレは、より流行している感染性病原体となりつつあり、健康な個体の１〜３パーセントが、この生物のキャリアーである（Ｂａｒｔｌｅｔｔ ＆ Ｐｅｒｌ， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ Ｍｅｄ．， ３５３， ２５０３−２５０５， ２００５； Ｃｌａｂｏｔｓら， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ．， １６６， ５６１−５６７， １９９２； ＭｃＦａｒｌａｎｄら， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ３２０， ２０４−２１０， １９８９）。感染および疾患のリスクは、免疫不全の高齢者、そして特に、医療の場、例えば老人ホーム、病院、診療所などにいる高齢者において、ますます一般的になりつつある。Ｃ．ディフィシレの治療に有望であることが示された慣用的な抗細菌薬剤はほとんどなく、実際、Ｃ．ディフィシレ関連下痢（ＣＤＡＤ）の治療に関して、ＦＤＡによって認可されているのは、バンコマイシンのみである（Ｃ．ディフィシレは慣用的な抗生物質治療に驚くべき抵抗性を示しており、しばしば治療中の個体の腸で増殖する）。

欧州特許出願第９７３００３１７．１号

Ｒ．Ｄ． Ｆｌｅｉｓｃｈｍａｎｎら， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２６９， ４９６−５１２， １９９５ Ｊａｒｖｅｓｔら， Ｂｉｏｏｒｇ． ＆ Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ． １４（２００４）３９３７−３９４１ Ｂａｒｔｌｅｔｔ ＆ Ｐｅｒｌ， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ Ｍｅｄ．， ３５３， ２５０３−２５０５， ２００５ Ｃｌａｂｏｔｓら， Ｊ Ｉｎｆｅｃｔ． Ｄｉｓ．， １６６， ５６１−５６７， １９９２ ＭｃＦａｒｌａｎｄら， Ｎ． Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ３２０， ２０４−２１０， １９８９

こうしたものとして、当該技術分野には、Ｃ．ディフィシレに基づく感染の治療、特に、慣用的な抗生物質治療、そしてしたがって抗生物質耐性を回避する治療に対して、さらなるアプローチを得る必要がある。

［０００７］この背景に対して、本発明が発見された。

［０００８］本発明者らは、現在、細菌ＭｅｔＲＳの強力な阻害剤である、二環芳香族複素環化合物の新規クラスを見出した。この新規クラスの化合物は、多くのグラム陽性およびグラム陰性細菌に対して、抗細菌剤として、広い適用可能性を有することが示されており、そして特に、Ｃ．ディフィシレに基づく感染に対して強力な抗細菌剤であることが示されている（ＭｅｔＲＳ阻害剤は、グラム陽性生物に対して最適の活性を有し、そしてグラム陰性生物に対してはるかにより弱い活性を有する）。

［０００９］一般的に、本発明の二環芳香族複素環化合物は、式１に示すような左側（ＬＨＳ）、および右側（ＲＨＳ）チエノピリドン基を有する。特に、本発明は、式（Ｉ）：

式中：
［００１０］Ｒ^１は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、カルボキシ、または（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルファニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルより選択され；
［００１１］Ｙは、直鎖中に１〜６のメチレン基を有するリンカー基であり、そしてそのうち、１以上のメチレン基が、１以上の（Ｃ_１−６）アルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシまたは（Ｃ_１−６）アルキリデニル置換基を有してもよく；
［００１２］Ｒ^２は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、カルボキシ、または（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルによって場合によって置換される）、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルファニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルより選択され；
［００１３］Ｚ_１がＳである場合、Ｚ_２およびＺ_３はＣＨであり；Ｚ_２がＳである場合、Ｚ_１およびＺ_３はＣＨであり；Ｚ_３がＳである場合、Ｚ_１およびＺ_２はＣＨであり；
［００１４］Ｘは、ＮＨ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＯまたはＣＨ_２であり；
［００１５］ｍは、０、または１〜４の整数であり；そして
［００１６］ｎは１、２または３である
の化合物を提供する。

［００１７］本発明の好ましい態様において、式（ＩＩ）に示すような、左側クロマン基および右側チエノピリドン基を有する化合物を提供する：

式中：
［００１８］Ｒ^３およびＲ^４は、同じ置換基または異なる置換基であってもよく、そして先にＲ^１に関して定義した通りである。好ましい態様において、Ｒ^３はハロゲンであり、そして最も好ましい態様において、Ｒ^３は、臭素、塩素、またはヨウ素である。好ましい態様において、Ｒ^４はハロゲンまたはスルファンであり、そして最も好ましい態様において、Ｒ^４は、臭素、塩素、ヨウ素またはスルファンである。

［００１９］本発明の別の好ましい態様において、左側テトラヒドロキノリン基および右側チエノピリドン基を有する化合物を開示し、そして式（ＩＩＩ）に示す：

式中：
［００２０］Ｒ^３およびＲ^４は、同じ置換基または異なる置換基であってもよく、そして先にＲ^１に関して定義した通りである。好ましい態様において、Ｒ^３はハロゲンであり、そして最も好ましい態様において、Ｒ^３は、臭素、塩素、またはヨウ素である。好ましい態様において、Ｒ^４はハロゲンまたはスルファンであり、そして最も好ましい態様において、Ｒ^４は、臭素、塩素、ヨウ素またはスルファンである。

［００２１］本発明の別の好ましい態様において、左側ベンゾチオピラン基および右側チエノピリドン基を有する化合物を開示し、そして式（ＩＶ）に示す：

式中：
［００２２］Ｒ^３およびＲ^４は、同じ置換基または異なる置換基であってもよく、そして先にＲ^１に関して定義した通りである。好ましい態様において、Ｒ^３はハロゲンであり、そして最も好ましい態様において、Ｒ^３は、臭素、塩素、またはヨウ素である。好ましい態様において、Ｒ^４はハロゲンまたはスルファンであり、そして最も好ましい態様において、Ｒ^４は、臭素、塩素、ヨウ素またはスルファンである。

［００２３］式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物は、ＭｅｔＲＳの新規阻害剤である。

［００２４］無機酸および有機酸から塩を形成してもよい。式（Ｉ）〜（ＩＶ）の化合物の薬学的に許容されうる塩を形成可能な、適切な無機酸および有機酸の代表的な例には、マレイン酸、フマル酸、安息香酸、アスコルビン酸、パモン酸、コハク酸、ビスメチレン−サリチル酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、酒石酸、サリチル酸、クエン酸、グルコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、イタコン酸、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、シクロヘキシルスルファミン酸、リン酸および硝酸が含まれる。

［００２５］本明細書において、用語「アルキル」、および「アルコキシ」などの類似の用語には、すべての直鎖および分枝鎖異性体が含まれる。その代表的な例には、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルおよびｎ−ヘキシルが含まれる。

［００２６］本明細書において、用語「アルケニル」および「アルキニル」には、すべての直鎖および分枝鎖異性体が含まれる。その代表的な例には、ビニル、エチニルおよび１−プロピニルが含まれる。

［００２７］アルキルおよびアルケニル基の好ましい置換基には、例えば、そして別に定義しない限り、ハロゲン、シアノ、アジド、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルバモイル、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、スルホ、スルファモイル、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、ウレイド、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルアミノ、２，２，２−トリクロロエトキシカルボニルアミノ、アリール、ヘテロシクリル、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アシルオキシ、オキソ、アシル、２−チエノイル、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、ヒドロキシイミノ、（Ｃ_１−６）アルコキシイミノ、ヒドラジノ、ヒドラゾノ、ベンゾヒドロキシモイル、グアニジノ、アミジノおよびイミノアルキルアミノが含まれる。

［００２８］本明細書において、用語「アリール」には、別に定義しない限り、５つまでの、好ましくは３つまでの置換基によって場合によって置換された、フェニルまたはナフチルが含まれる。

［００２９］置換される場合、アリール基は３つまでの置換基を有してもよい。アリール基の好ましい置換基には、例えば、そして別に定義しない限り、ハロゲン、シアノ、（Ｃ_１−６）アルキル、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_２−６）アルケニル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、（Ｃ_２−６）アルケノキシ、アリールＣ_{（１−６）}アルコキシ、ハロ（Ｃ_１−６）アルキル、ヒドロキシル、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、ニトロ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、（Ｃ_１−６）アルケニルオキシカルボニル、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル（Ｃ_１−６）アルキル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキル、（Ｃ_１−６）アルキルカルボニルオキシ、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル（Ｃ_１−６）アルコキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）−アルキルスルファモイルカルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルが含まれる。

［００３０］本明細書において、用語「ヘテロアリール」には、環中に、酸素、窒素および硫黄より選択される、４つまでのヘテロ原子を含む、単環または縮合環が含まれる。好ましくは、ヘテロアリール環は、４〜７、好ましくは５〜６の環原子を含む。縮合ヘテロアリール環系には、炭素環が含まれてもよく、そして１つの複素環を含みさえすればよい。

［００３１］本明細書において、用語「ヘテロシクリル」には、環中に、酸素、窒素および硫黄より選択される、４つまでのヘテロ原子を含む、芳香族および非芳香族単環または縮合環が含まれる。適切には、複素環は、４〜７、好ましくは５〜６の環原子を含む。縮合複素環系には、炭素環が含まれてもよく、そして１つの複素環を含みさえすればよい。

［００３２］置換される場合、ヘテロアリールまたはヘテロシクリル基は、３つまでの置換基を有してもよい。好ましい置換基には、アリール基に関して先に言及したもの、ならびにオキソが含まれる。

［００３３］本明細書において、用語「ハロゲン」および「ハロ」には、それぞれ、フッ素、塩素、臭素、およびヨウ素、ならびにフルオロ、クロロ、ブロモ、およびヨードが含まれる。

［００３４］本発明記載の化合物は、実質的に純粋な形、例えば少なくとも５０％純粋、適切には少なくとも６０％純粋、好適には少なくとも７５％純粋、好ましくは少なくとも８５％純粋、より好ましくは少なくとも９５％純粋、特に少なくとも９８％純粋で提供される。すべての割合は、重量／重量として計算されている。本発明記載の化合物のすべての不純なまたはより純粋でない型は、例えば、薬学的使用に適した、同じ化合物または関連化合物（例えば対応する誘導体）のより純粋な型の調製に使用可能である。

［００３５］本発明の特定の化合物が、１以上のキラル中心を含んでもよく、したがって、化合物が、ジアステレオ異性体および鏡像異性体を含む、立体異性体として存在してもよいことが認識されるであろう。本発明の態様は、こうした立体異性体、およびその混合物をすべて含み、ラセミ体、および鏡像異性体の一方を鏡像異性過剰で有する混合物も含む。

［００３６］したがって、本発明は、式（Ｖ）〜（ＸＩＩＩ）の好ましい化合物を提供する：

［００３７］５−［３−（６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００３８］５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００３９］５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００４０］５−［３−（６−クロロ−８−ヨード−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００４１］５−［３−（６−ブロモ−８−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００４２］５−［３−（６−ブロモ−８−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００４３］５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００４４］５−［３−（８−ブロモ−６−メチルスルファニル−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；

［００４５］５−［３−（６−ブロモ−８−フルオロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；および

２−［３−（６，８−ジブロモ−１−ベンゾチオピラン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−１Ｈ−キノリン−４−オン。

［００４６］式（Ｉ）〜（ＸＩＶ）の化合物は、本明細書記載の方法によって、または本明細書において、以下に援用される先行技術に記載される方法によって、調製可能である。さらに、式（Ｉ）〜（ＩＶ）に関して記載するように、式（Ｖ）〜（ＸＩＶ）の化合物は、薬学的に許容されうる塩であってもよい。

［００４７］第一の態様において、式（ＸＶ、Ｘ＝ＮＨ_２）のアニリン化合物（または他の同様の化合物）をアセトニトリル中に溶解し、そしてβ−プロピオンラクトン（ｎ＝２）を添加する。混合物を還流下で攪拌し、そして次いで水で希釈して、そして塩基でｐＨを上昇させて、ｐＨ ９とする。混合物をジクロロメタンで抽出し、そして水性層を分離し、そして濃酸でｐＨをおよそ５．０に下げる。焼結ガラスじょうご上で、付随する沈殿物を収集し、そしてろ液が中性ｐＨに達するまで、ケーキを水で洗浄する。次いで、固体を真空中で乾燥させて、式（ＸＶＩ）の化合物（フェニルアミノプロパン酸）を得る。

［００４８］別の態様において、式（ＸＶＩ）の化合物をフェノール（ＸＶ、Ｘ＝ＯＨ）またはチオフェノール（ＸＶ、Ｘ＝ＳＨ）から、そしてまず、これを塩基中に溶解することから調製してもよい。混合物をβ−プロピオンラクトン（ｎ＝２）と合わせて、そして反応を還流下で加熱する。一度冷却し、そしてｐＨ＜４．０に酸性化して、ジエチルエーテルで混合物を抽出する。合わせた有機抽出物を、塩水で分配し、乾燥させ、そして蒸発させて、式（ＸＶＩ、Ｘ＝ＯまたはＳ、ｎ＝２、プロパン酸）の化合物を得る。

［００４９］次いで、式（ＸＶＩ、Ｘ＝ＮＨ、ｎ＝２）の化合物を、Ｐ_２Ｏ_５およびＨ_３ＰＯ_４の混合物に１００℃で添加する。混合物を攪拌し、反応の完了をＬＣ−ＭＳで決定する。完了したら、反応を氷で停止し、そして沈殿物をろ過し、水で洗浄し、そして乾燥させて、式（ＸＶＩＩ、Ｘ＝ＮＨ、ｎ＝２）のオフホワイト固体を得る。別の態様において、フェノキシプロパン酸（ＸＶＩ、Ｘ＝Ｏ、またはＳ、ｎ＝２）をベンゼン中に溶解し、そしてＰ_２Ｏ_５を添加する。完了するまで混合物を還流し、そして次いで、周囲温度まで冷却する。ベンゼンをデカントし、そして残渣を氷水で反応停止した。ジエチルエーテルで混合物を抽出し、そして合わせた有機抽出物を飽和重炭酸ナトリウムで分配し、そして硫酸ナトリウム上で乾燥させ、次いでろ過し、そして真空中で蒸発乾固する。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製して、式（ＸＶＩＩ、Ｘ＝ＯまたはＳ、ｎ＝２）の化合物を得る。

［００５０］式（ＸＩＸ）を有する化合物は、式（ＸＶＩＩＩ）の化合物（合成は実施例セクションに記載する）を、還元性アルキル化条件下で、式（ＸＶＩＩ）の化合物と反応させることによって、一般的に上に示すように調製可能である。方法の特定の例を、実施例１に後述する。

［００５１］本発明の化合物は、スタフィロコッカス属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｉ）、例えば黄色ブドウ球菌オックスフォード株（Ｓ． ａｕｒｅｕｓ Ｏｘｆｏｒｄ）、および表皮ブドウ球菌（Ｓ． ｅｐｉｄｅｒｍｉｄｉｓ）などのスタフィロコッカス属の凝固酵素陰性株；連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ）、例えば化膿性連鎖球菌（Ｓ． ｐｙｏｇｅｎｅｓ）ＡＴＣＣ１９６１５および肺炎連鎖球菌（Ｓ． ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）Ｒ６；クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ）、例えばＣ．ディフィシレ、ならびに腸球菌属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｉ）、例えばフェカリス菌（Ｅ． ｆａｅｃａｌｉｓ）１およびフェシウム菌（Ｅ． ｆａｅｃｉｕｍ）などのグラム陽性生物を含む、ある範囲の重要な病原性細菌に対して活性である。好ましくは、本発明の化合物はまた、ヘモフィルス属（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ）、例えばインフルエンザ菌Ｑ１；モラクセラ属（Ｍｏｒａｘｅｌｌａ）、例えばカタル球菌（Ｍ． ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ）１５０２；ヘリコバクター属（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ）、例えばピロリ菌（Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ）ＡＴＣＣ７００８２４、および大腸菌属（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ）、例えば大腸菌（Ｅ． ｃｏｌｉ）ＤＣ０などのグラム陰性生物に対してもまた活性である。本発明の最も好ましい化合物は、生物、Ｃ．ディフィシレ、黄色ブドウ球菌、肺炎連鎖球菌、フェカリス菌、フェシウム菌、インフルエンザ菌、ならびにカタル球菌およびピロリ菌に対して活性であろう。

［００５２］さらに、本発明の化合物は、他の抗細菌剤、例えばβ−ラクタム抗生物質、例えばメチシリン、マクロライド、アミノグリコシド、オキサゾリジノン、およびリンコサミドなどに耐性である（多剤耐性を含む）、黄色ブドウ球菌、および表皮ブドウ球菌などのスタフィロコッカス属の凝固酵素陰性株などのスタフィロコッカス属生物に対して活性である。本発明の化合物は、したがって、ＭＲＳＡおよびＭＲＣＮＳの治療に有用である。

［００５３］本発明の化合物はまた、バンコマイシン耐性株を含む、フェカリス菌の株に対しても活性であり、そしてしたがって、ＶＲＥ生物に関連する感染を治療する際に有用である。さらに、本発明の化合物は、ムピロシンに耐性であるスタフィロコッカス属生物の処置に有用である。

［００５４］本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレを含むクロストリジウム属の株に対して特に強力、すなわち活性である。したがって、本発明の化合物を用いて、Ｃ．ディフィシレに関連する感染、例えば偽膜性大腸炎、中毒性巨大結腸（ｍｅｇａｃｏｌｉｎ）、および他の抗生物質関連下痢（ＡＡＤ）を治療することも可能である。

［００５５］しかし、本発明の化合物は、哺乳動物細胞に対しては活性でない。これによって、病原性細菌に対して活性が高く、そして哺乳動物細胞に対して活性が低いかまたは活性がない、最適な組み合わせが提供され、哺乳動物治療において、そして特にヒトにおいて、本発明の化合物を使用することが可能になる。

［００５６］治療可能な細菌感染には、呼吸管感染、中耳炎、髄膜炎、心内膜炎、ヒトにおける皮膚および軟組織感染、ウシにおける乳腺炎、ならびにまた、ブタおよびウシなどの農場動物における呼吸器感染が含まれる。したがって、さらなる側面において、本発明は、ヒトまたは非ヒト動物における細菌感染を治療する方法であって、本明細書に先に定義したような式（Ｉ）〜（ＸＩＶ）の化合物の療法的有効量を、こうした療法が必要なヒトまたは非ヒト動物に投与する工程を含む、前記方法を提供する。グラム陽性およびグラム陰性細菌両方に対する活性を含む、広い範囲の抗細菌活性を有する本発明の化合物が、市中感染の経験的治療のため、地域社会で非常に役立つであろうことが認識されるであろう。相対的に、より限定された範囲、例えばグラム陽性細菌に対する活性を持つ本発明の化合物は、原因病原性生物が同定されている状況において、用いられる可能性がより高い。

［００５７］本発明は、薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤と一緒に、式（Ｉ）〜（ＸＩＶ）の化合物のいずれかを含む、薬学的組成物を提供する。

［００５８］本発明はさらに、薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤と一緒に、式（Ｉ）〜（ＸＩＶ）の化合物の組み合わせを含む薬学的組成物を提供する。例えば、本発明の薬学的組成物には、キャリアーまたは賦形剤と組み合わせて、式（Ｖ）の化合物および式（ＶＩＩ）の化合物が含まれてもよい。

［００５９］本発明はまた、哺乳動物において、特にヒトにおいて、そして家畜動物において、細菌感染を治療する方法であって、本発明の化合物、または本発明記載の組成物を、その必要がある患者に投与する工程を含む、前記方法も提供する。

［００６０］本発明は、細菌感染の治療において使用するための薬剤組成物の調製における、本発明の化合物の使用をさらに提供する。

［００６１］本発明記載の化合物および組成物は、他の抗生物質から類推して、ヒトまたは獣医学的薬剤において使用するための、任意の好適な方法で投与するために、配合可能である。

［００６２］本発明記載の化合物および組成物を、任意の経路、例えば経口、局所、非経口、または直腸によって投与するために配合してもよい。組成物は、例えば、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、ロゼンジ、クリーム、座薬、軟膏、ジェル、ローション、シロップ、あるいは経口使用のために、または注射もしくは注入による非経口投与のために無菌型で配合可能な液体調製物、例えば溶液または懸濁物の形で調製されてもよい。

［００６３］経口投与のための錠剤およびカプセルは、単位投薬型であってもよく、そして例えば結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、またはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、スクロース、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤化（ｔａｂｌｅｔｔｉｎｇ）潤滑剤、例えばステアリン酸マグネシウム、タルク、ポリエチレングリコールまたはシリカ；崩壊剤、例えばジャガイモデンプン；および薬学的に許容されうる湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムを含む、慣用的な賦形剤を含有してもよい。通常の薬学的実施に周知の方法にしたがって、錠剤をコーティングしてもよい。

［００６４］経口液体調製物は、例えば、水性または油性懸濁物、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形であってもよいし、あるいは水または別の適切なビヒクルで、使用前に再構成するための乾燥製品として提示されてもよい。こうした液体調製物は、例えば懸濁剤、例えばソルビトール、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲルまたは水素化食用油脂；乳化剤、例えばレシチン、モノオレイン酸ソルビタンまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油脂を含んでもよい）、例えばアーモンド油、油性エステル（例えばグリセリン）、プロピレングリコール、またはエチルアルコール；保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルもしくはプロピル、またはソルビン酸；ならびに望ましい場合、慣用的なフレーバーおよび着色剤を含む、慣用的な添加剤を含有してもよい。

［００６５］局所投与を意図される本発明記載の組成物は、例えば、軟膏、クリーム、ローション、目の軟膏、点眼剤、点耳剤、浸透性包帯材、およびエアロゾルの形であってもよく、そして例えば保存剤、薬剤浸透を補助する溶媒、ならびに軟膏、ゲル、およびクリーム中の皮膚軟化剤を含む、適切な慣用的添加剤を含有してもよい。こうした局所配合物はまた、適合する慣用的キャリアー、例えばクリームまたは軟膏基剤、およびローションのためのエタノールまたはオレイルアルコールも含有してもよい。こうしたキャリアーは、配合物重量の約１％〜約９８％を構成してもよく；より一般的には配合物重量の約８０％までを構成するであろう。

［００６６］本発明記載の組成物を座薬として配合してもよく、座薬は、慣用的な座薬基剤、例えばココアバターまたは他のグリセリドを含有してもよい。

［００６７］非経口投与を意図される本発明記載の組成物は、好適に、液体単位投薬型中にあってもよく、化合物、および水が好ましい無菌ビヒクルを利用して、該投薬型を調製してもよい。化合物は、用いるビヒクルおよび濃度に応じて、ビヒクル中に懸濁されてもまたは溶解されてもいずれでもよい。溶液を調製する際、化合物を注射用水中に溶解し、そして適切なバイアルまたはアンプル内に充填する前にフィルター滅菌し、次いで密封してもよい。好適には、例えば局所麻酔剤、保存剤、および緩衝剤を含む、慣用的な添加物をビヒクル中に溶解してもよい。溶液の安定性を増進するため、バイアル内に充填した後、組成物を凍結してもよく、そして真空中で水を除去してもよい；次いで、生じた凍結乾燥粉末をバイアル中に密封してもよく、そして使用前に液体を再構成するため、注射用水の付随バイアルを供給してもよい。溶解する代わりにビヒクル中に化合物を懸濁し、そして滅菌が、ろ過によっては達成不能であることを除いて、実質的に同じ方式で、非経口懸濁物を調製してもよい。代わりに、無菌ビヒクル中に懸濁する前に、酸化エチレンに曝露することによって、化合物を滅菌してもよい。好適には、化合物の均一な分布を促進するため、こうした懸濁物中には、界面活性剤または湿潤剤が含まれる。

［００６８］本発明記載の化合物または組成物を、適切に、抗細菌的に有効な量で患者に投与してもよい。

［００６９］本発明記載の組成物は、適切には、投与法に応じて、本発明記載の化合物を重量０．１％〜、好ましくは重量１０〜６０％（組成物の総重量に基づいて）含有してもよい。

［００７０］本発明記載の化合物は、適切には、１．０〜１００ｍｇ／体重ｋｇの一日投薬量で患者に投与可能である。成人（およそ７０ｋｇ体重）に関しては、５０〜３０００ｍｇ、例えば約１５００ｍｇの本発明記載の化合物を毎日投与してもよい。適切には、成人のための投薬量は、１日あたり、５〜４０ｍｇ／ｋｇである。しかし、通常の臨床診療にしたがって、より高いまたはより低い投薬量を用いてもよい。

［００７１］本発明記載の組成物を単位投薬型で提示する際、各単位用量は、適切には、２５〜１０００ｍｇ、好ましくは５０〜５００ｍｇの本発明記載の化合物を含んでもよい。

［００７２］以下の実施例１３〜１８は、本発明の化合物の強力な抗細菌活性を例示する。

［００７３］例示目的のためにのみ、以下の実施例を提供し、そしてこれらは本発明の範囲を限定することを意図されない。

実施例１：本発明の化合物の合成

［００７４］方法Ａ：式（ＸＶ、Ｘ＝ＮＨ_２、３０ｍｍｏｌ）のアニリンをアセトニトリル中に溶解し、そしてβ−プロピオンラクトン（１当量）を添加した。混合物を還流下で３時間攪拌し、そして次いで水で希釈して、そして水酸化ナトリウムでｐＨを上昇させて、ｐＨ＝９にした。混合物をジクロロメタンで３回抽出し、そして水性層を分離し、そして濃ＨＣｌでｐＨをおよそ５．０に下げた。焼結ガラスじょうご上で、付随する沈殿物（式ＸＶＩ）を収集し、そしてろ液が中性ｐＨに達するまで、ケーキを水で洗浄した。次いで、固体を真空中で乾燥させて、式（ＸＶＩ、Ｘ＝ＮＨ、ｎ＝２）の化合物を得る。

［００７５］方法Ｂ：式（ＸＶ、Ｘ＝ＯＨ、またはＳＨ、３０ｍｍｏｌ）のフェノールまたはチオフェノールを２Ｍ水性水酸化ナトリウム（３０ｍｍｏｌ）中に溶解した。この混合物に、β−プロピオンラクトン（３０ｍｍｏｌ）を添加し、そして反応を２時間還流した。反応混合物を周囲温度に冷却し、そしてＨＣｌでｐＨ＜４に酸性化して、そしてジエチルエーテルで抽出した。合わせた有機抽出物を、飽和水性重炭酸ナトリウムで抽出した。塩基性水性層をｐＨ＜４に酸性化し、そして次いで、エーテルで抽出した。次いで、このエーテル抽出物を塩水で分配し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、そして真空中で蒸発させて、式（ＸＶＩ、Ｘ＝Ｏ、またはＳ、ｎ＝２）のオフホワイト固体を得た。

［００７６］方法Ｃ：フェニルアミノプロパン酸（式ＸＶＩ、Ｘ＝ＮＨ、ｎ＝２、２．０ｍｍｏｌ）を、Ｐ_２Ｏ_５（１５ｇ）およびＨ_３ＰＯ_４（６ｍｌ）の混合物に１００℃で添加した。温度を維持しながら、混合物を２時間攪拌した。ＬＣ−ＭＳによって判断されるように、反応が完了したら、反応を氷で停止し、そして沈殿物をろ過し、そして水で洗浄し、そして真空中で乾燥させて、式（ＸＶＩＩ、Ｘ＝ＮＨ、ｎ＝２）のオフホワイト固体を得た。

［００７７］方法Ｄ：フェノキシプロパン酸（式ＸＶＩ、Ｘ＝Ｏ、またはＳ、ｎ＝２、６．０ｍｍｏｌ）をベンゼン中に溶解し、そしてＰ_２Ｏ_５を添加した。混合物を２時間還流し、そして次いで、周囲温度まで冷却した。ベンゼンをデカントし、そして残渣を氷水で反応停止した。ジエチルエーテルで混合物を３回抽出し、そして合わせた有機抽出物を飽和重炭酸ナトリウムで分配し、そして次いで、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、ろ過し、そして真空中で蒸発乾固した。残渣をカラムクロマトグラフィーによって精製して、産物をヘキサン中の０〜２０％酢酸エチルの勾配で溶出して、式（ＸＶＩＩ、Ｘ＝Ｏ、またはＳ、ｎ＝２）の白色固体を得た。

［００７８］方法Ｅ：方法Ｅの代表的な例は、以下の通りである。５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製：メタノール（０．０８Ｍ）中の５−（３−アミノ−プロピルアミノ）−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（ＸＶＩＩＩ）の溶液を調製し、そして次いで、ナトリウムメトキシド（２当量、メタノール中の０．５Ｍ）で処理した。８−ブロモ−６−クロロ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−キノリン−４−オン（１当量）を固体として添加した。シアノ水素化ホウ素ナトリウム（３当量）を固体として添加した。次いで、混合物を２０時間還流し、さらなる当量のシアノ水素化ホウ素ナトリウムを１６時間後に添加した。反応混合物をシリカゲルカラム上に注ぎ、そして産物を１０％ＮＨ_３（飽和）／ＭｅＯＨおよびジクロロメタンで溶出させた。次いで、溶媒を真空中で除去した。フラッシュクロマトグラフィーによって未精製産物の精製を達成し、産物を０〜１２％ＮＨ_３（飽和）／ＭｅＯＨおよびジクロロメタンの勾配で溶出させた。生じた固体をエーテルですりつぶし（ｔｒｉｔｕｒａｔｅ）、ろ過によって単離し、そして乾燥させて、白色固体として表題化合物を得た（式ＸＩＸ、Ｘ＝ＮＨ）。

［００７９］方法Ｆ：方法Ｆの代表的な例は、以下の通りである。５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製：メタノール（０．１２５Ｍ）中の５−（３−アミノ−プロピルアミノ）−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩（ＸＶＩＩＩ）の溶液を調製した。この溶液をナトリウムメトキシド（メタノール中の０．５Ｍ、２当量）および過剰な酢酸（０．５ｍｌ／ｍｍｏｌ）で処理した。６，８−ジブロモ−クロマン−４−オン（１当量）を固体として添加した。還流するまで反応を加熱した。清澄な溶液が得られたならば、熱を除去し、そしてシアノ水素化ホウ素ナトリウム（２当量）を固体として添加した。次いで、混合物を４８時間還流した。反応混合物を水（メタノールの６ｘ体積）に注いだ。ｃｅｌｉｔｅを通じた真空ろ過によって、生じた固体を単離した。次いで、固体をメタノール中に取り、そしてろ過してｃｅｌｉｔｅを除去した。フラッシュクロマトグラフィーによって未精製産物の精製を達成し、産物を０〜１２％ＮＨ_３（飽和）／ＭｅＯＨおよびジクロロメタンの勾配で溶出させて、白色固体として表題化合物を得た（式ＸＩＸ、Ｘ＝Ｏ、またはＳ）。

［００８０］化合物ＸＶＩＩＩ、５−（３−アミノ−プロピルアミノ）−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン塩酸塩の合成

［００８１］工程［１］：メチル３−アミノチオフェン−２−カルボン酸エステル（３１ｇ、０．１９７ｍｍｏｌ）を、２Ｎ ＮａＯＨ（水性）（１５０ｍＬ）中に懸濁し、そして還流下で４０分間加熱した。生じた溶液を冷却し、そして濃ＨＣｌでｐＨ２に酸性化した。生じたスラリーをろ過し、そしてフィルターフラスコに１時間、一定の減圧を加えて、フィルター膜上に放置した。

［００８２］工程［２］： ３−アミノチオフェン−２−カルボン酸塩酸塩（Ｂａｒｋｅｒ， Ｊ．Ｍ．ら Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍ． １９９５， ２５， ３７２９−３７３４）の湿ったケーキを、濃塩酸（１ｍＬ）の存在下で、クロロホルム（３００ｍＬ）中に懸濁し、そしてすべての出発物質が消費されるまで、還流下で加熱した。反応を周囲温度に到達させ、そして反応溶液を次の工程に用いた。

［００８３］工程［３］：生じた有機溶液（工程［２］を参照されたい）を、炭酸ナトリウム（３１ｇ）および水（１００ｍＬ）（ｐＨ： ８．０）で処理した。上記の二相溶液を氷槽で冷却して、そして反応温度を１０℃未満に調節しながら、チオホスゲン（１９ｍＬ、０．２３６ｍｍｏｌ）を１滴ずつ添加した。添加が完了した後、反応を２０分間攪拌した。有機層を分離し、塩水で分配し、そして無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。ろ過し、そして真空中で溶媒を除去した後、フラッシュシリカゲルカラムによって混合物を精製し、酢酸エチル／ヘキサン（１：４）で産物を溶出させて、ダーク油として、望ましい産物、３−チオフェンイソチオシアネート（１４ｇ、５０％）を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： ７．２７（１Ｈ， ｍ）， ７．１７（１Ｈ， ｍ）， ６．９８（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝５．２ ＭＨｚ）ｐｐｍ。

［００８４］工程［４］： ３−チオフェンイソチオシアネート（１４ｇ、９９ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（１５．３ｇ、１０９ｍｍｏｌ）の存在下で、ジメチルスルホキシド（８５ｍＬ）中の２，２−ジメチル−ｌ，３−ジオキサン−４，６−ジオン（１５．７ｇ、１０９ｍｍｏｌ）で処理し、そして１０時間攪拌した。次いで、２時間に渡ってゆっくり添加することによって、混合物をヨードメタン（１４．７８ｇ， １０４ｍｍｏｌ）で処理した。反応終点をＨＰＬＣによってチェックした。上記混合物に水（５００ｍＬ）をゆっくり添加して、産物を沈殿させた。ろ過し、そして真空下で乾燥させた後、黄褐色固体として、２，２−ジメチル−５−（メチルスルファニル−チオフェン−３−イルアミノ−メチレン）−［ｌ，３］ジオキサン−４，６−ジオンを得た（２７．３８ｇ、９４％）。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： １２．７（１Ｈ， ｂｒｓ）， ７．３８（１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝３．２， ５ ＭＨｚ）， ７．２５（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝３．２ ＭＨｚ）， ７．０９（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝５）， ２．３８（３Ｈ， ｓ）， １．７６（６Ｈ， ｓ）ｐｐｍ。

［００８５］工程［５］： ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（４：１、１２０ｍＬ）中の２，２−ジメチル−５−（メチルスルファニル−チオフェン−３−イルアミノ−メチレン）−［ｌ，３］ジオキサン−４，６−ジオン（２７．８３ｇ、９２．８ｍｍｏｌ）の溶液を、１時間に渡って、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ（４：１、１４０ｍＬ）中の１，３−ジアミノプロパン（５４．９ｇ、１３８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した（氷槽中で冷却）。添加完了後、氷槽を除去した。反応を周囲温度で２時間攪拌し、次いで、ＤＣＭ（１００ｍＬ）で希釈し、そして生じた有機溶液を、水（６０ｍＬｘ４）および塩水（６０ｍＬ）で洗浄した。次いで、無水酢酸（１１ｍＬ、１１６ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（１６ｍＬ、１１１．４ｍｍｏｌ）を、上記有機溶液に添加して、そして３０分間攪拌した。１Ｎ ＨＣｌ、次いで、ＮａＨＣＯ_３（飽和）そして次いで、塩水を用いて、水性後処理（ａｑｕｅｏｕｓ ｗｏｒｋ−ｕｐ）を行った。有機層をＭｇＳＯ_４で乾燥させ、ろ過し、そして真空中で揮発性溶媒を除去して、茶色油として、望ましい産物、Ｎ−（３−｛［（２，２−ジメチル−４，６−ジオキソ−［ｌ，３］ジオキサン−５−イリデン）−（チオフェン−３−イルアミノ）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−アセトアミド（３０．７ｇ、８４％）を得て、これをさらに精製せずに、次の工程に用いた。^１Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）： １１．３（１Ｈ， ｂｒ ｓ）， １０．０（１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ７．３３（１Ｈ， ｄｄ， Ｊ＝３．２， ５ ＭＨｚ）， ７．０７（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝３．２ ＭＨｚ）， ６．９８（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝５）， ３．２０（２Ｈ， ｑｕａｒｔ， Ｊ＝６．４ ＭＨｚ）， ３．９０（１Ｈ， ｑｕａｒｔ． Ｊ＝６．８ ＭＨｚ）， １．９４（３Ｈ， ｓ）， １．７３（６Ｈ， ｓ）， １．６８（２Ｈ， ｍ）ｐｐｍ。

［００８６］工程［６］：キシレン（１５０ｍＬ）中のＮ−（３−｛［（２，２−ジメチル−４，６−ジオキソ−［ｌ，３］ジオキサン−５−イリデン）−（チオフェン−３−イルアミノ）−メチル］−アミノ｝−プロピル）−アセトアミド（３０．６５ｇ、８３．５ｍｍｏｌ）およびヘキサメチルジシラザン（４０．４、２５１ｍｍｏｌ）を還流下で４時間加熱し、そして次いで乾燥するまで濃縮した。生じた油をメタノール（２０ｍＬ）で注意深く処理した。メタノールを除去して、望ましい産物、５−（３−アセトアミド−プロピルアミノ）−６−カルボキシル−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンとして、固体を得た。^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_６−ＤＭＳＯ）： １１．９（１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ９．９１（１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ８．０４（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝４．８ ＭＨｚ）， ７．９０（１Ｈ， ｂｒ ｓ）， ７．２７（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝４．８ ＭＨｚ）， ３．４１（１Ｈ， ｑｕａｒｔ． Ｊ＝６．０ ＭＨｚ）， ３．２０（２Ｈ， ｑｕａｒｔ， Ｊ＝６．０ ＭＨｚ）， １．７８（３Ｈ， ｓ）， １．７４（２Ｈ， ｍ）ｐｐｍ
［００８７］工程［７］： ５−（３−アセトアミド−プロピルアミノ）−６−カルボキシル−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（工程［６］由来の未精製）を６Ｎ ＨＣｌ（２００ｍＬ）中に懸濁し、そして還流下で１６時間加熱した。水性溶液を真空中で蒸発させた後、生じた塩をエタノール／水（８５：１５、１００ｍＬ）中に溶解し、そして木炭とともに、還流下で２０分間加熱した。次いで、ろ過によって茶色の溶液を得て、そしてこの溶液に酢酸エチル（４００ｍＬ）を添加して、望ましい産物を沈殿させた。ろ過し、そして酢酸エチルでリンスして、黄褐色固体として、最終純粋産物を得た（２３．８ｇ、９６％）。５−（３−アミノ−プロピルアミノ）−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン塩酸塩（ＸＶＩ）の^１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）： ７．７７（１Η， ｄ， Ｊ＝５．６ ＭＨｚ）， ７．１４（１Ｈ， ｄ， Ｊ＝５．６ ＭＨｚ），． ３．３５（１Ｈ， ｔ． Ｊ＝６．４ ＭＨｚ）， ３．１３（２Ｈ， ｔ， Ｊ＝７．６ ＭＨｚ）， ２．０３（２Ｈ， ｍ）ｐｐｍ。

実施例２： ５−［３−（６，８−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００８８］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例３： ５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００８９］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例４： ５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９０］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例５： ５−［３−（６−クロロ−８−ヨード−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９１］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例６： ５−［３−（６−ブロモ−８−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９２］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例７： ５−［３−（６−ブロモ−８−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９３］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例８： ５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９４］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例９： ５−［３−（８−ブロモ−６−メチルスルファニル−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９５］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例１０： ５−［３−（６−ブロモ−８−フルオロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンの調製
［００９６］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例１１： ２−［３−（６，８−ジブロモ−１−ベンゾチオピラン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−１Ｈ−キノリン−４−オンの調製
［００９７］実施例１に記載する一般的な合成法にしたがって、以下の化合物を調製した。スペクトルデータによって、化合物の同一性を確認する。

実施例１２：ＭｅｔＲＳの発現および精製
［００９８］以下の実施例は、実施例１３、１４および１５に示す機能アッセイにおいて有用な、Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳの発現および精製を例示する。

［００９９］過剰産生ベクターのクローニング： Ｎ末端で６Ｈｉｓタグ化されたＣ．ディフィシレＭｅｔＲＳを増幅し、そしてｐＥＴｃｏｃｏ−２にクローニングした。以下のプライマーを用いて、ゲノムＤＮＡからＤＮＡを増幅した： ５’−ＣＴＧＣＡＧＡＧＣＴＡＧＣＡＡＡＣＣＧＡＧＴＴＴＴＴＡＴＧＴＡＡＣ−３’（順方向）（配列番号１）、５’−ＣＴＴＴＣＴＡＡＧＣＴＴＣＴＡＣＴＡＡＣＧＡＡＣＣＴＣＧＧＡＴＣＣ−３’（逆方向）（配列番号２）。増幅されたＤＮＡを、ＳｐｈｌおよびＨｉｎｄＩＩＩ制限エンドヌクレアーゼで処理し、消化後にこれらの酵素を熱不活化した。断片をエタノール沈殿させ、そして同じ酵素に加えてエビ（ｓｈｒｉｍｐ）アルカリホスファターゼで処理しておいたｐＥＴｃｏｃｏ−２ベクター（Ｎｏｖａｇｅｎ）と合わせた。断片を連結し、そして連結混合物を、コンピテントＤＨ１０大腸菌に形質転換した。形質転換体を、５０ｕｇ／ｍｌアンピシリンとともに、グルコースを加えたＦ培地上にプレーティングした。グルコース中の増殖は、複製因子Ｔｒｆ Ａの発現を駆動するｐＢＡＤプロモーターの抑制状態を維持し、したがって、低コピー数が維持された。両方向で、挿入物を配列決定することによって、生じた発現クローン、ｐＥＴｃｏｃｏ−Ｃｄｉｆｆ−ＭＲＳを確認した。

［００１００］Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳの精製。発現ベクター、ｐＥＴｃｏｃｏ−Ｃｄｉｆｆ−ＭＲＳを、Ｒｏｓｅｔｔａ ＤＥ３発現株に形質転換し、そしてこれを用いて、１０ｕｇ／ｍＬクロラムフェニコール、５０ｕｇ／ｍＬアンピシリン、０．２％グルコースを補った４リットルのＦ培地に接種した。ＯＤ ０．６６で、１ｍＭ ＩＰＴＧを用いて培養を誘導した。誘導４時間後、細胞を採取した（収量＝３８ｇ細胞ペレット）。−２０℃で保存しておいたＴｒｉｓ−スクロース中の凍結細胞（３９ｇ細胞）の１：１懸濁物７８ｇを、あらかじめ４５℃に温めておいた１０７．２５ｍｌのＴｒｉｓ−スクロース緩衝液に添加することによって、ペレットにした細胞を溶解した（２．７５ｍｌ／細胞ｇ）。攪拌混合物に、１．９５ｍｌの０．５Ｍ １，４−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）（０．０５ｍｌ／細胞ｇ）および９．７５ｍｌの溶解緩衝液（ｐＨ ７．５に調整したＴｒｉｓ−スクロース中の２Ｍ ＮａＣｌ、０．３Ｍスペルミジン）（０．２５ｍｌ／細胞ｇ）を添加した。スラリーのｐＨをｐＨ試験紙で試験し、そして５０ｍｌの２Ｍ Ｔｒｉｓ塩基を添加することによって、ｐＨ ８．０に調整した。２０ｍｌのＴｒｉｓ−スクロース緩衝液中で、リゾチーム（１１７ｍｇ）を添加した（３ｍｇリゾチーム／細胞ｇ）。スラリーを遠心ボトルに分配し、そして４℃で１時間インキュベーションした後、３７℃で４分間インキュベーションした。遠心分離（２３，０００ｘｇ、６０分間、４℃）によって、不溶性細胞構成要素を除去した。回収した上清（１９２ｍｌ）は分画Ｉを構成した。装填緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ７．５、１０％グリセロール、４０ｍＭ ＫＣｌ、１０ｍＭイミダゾール、ｐＨ ６．８、および７ｍＭベータメルカプトエタノール）中で平衡化させた１５ｍＬ Ｎｉ−ＮＴＡカラム上に、分画Ｉを装填した。１０カラム体積の洗浄緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ７．５、１０％グリセロール、８００ｍＭ ＫＣｌ、２０ｍＭイミダゾール、ｐＨ ６．８、および７ｍＭベータメルカプトエタノール）でカラムを洗浄した。０．５ｍＬ／分の洗浄緩衝液から溶出緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ ７．５、１０％グリセロール、４０ｍＭ ＫＣｌ、２５０ｍＭイミダゾール、ｐＨ ６．８、および７ｍＭベータメルカプトエタノール）の１０カラム体積勾配でタンパク質を溶出させて、３ｍＬ分画を収集した。分画を収集し、そしてＳＤＳ−ＰＡＧＥによってタンパク質に関して分析した。Ｃ．ディフィシレＭｅｔＲＳ ｔＲＮＡチャージングアッセイにおいて、分画をアッセイした。ピーク活性を含有する分画をプールして、分画ＩＩ（１．３ｍｇ／ｍｌで６０ｍｇ）を形成した。分画ＩＩは、比活性３．２ｘ１０^５単位／ｍｇを有した。クーマシーブルーで染色したＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの濃度測定に基づいて、純度は９７％より高いと概算された。

実施例１３：本発明の化合物は、ＭｅｔＲＳ酵素に対して強力な阻害活性を有する
［００１０１］以下のように、組換えＭｅｔＲＳを用いて、本発明の化合物をアッセイして、酵素ＭｅｔＲＳを阻害する能力を決定した：
［００１０２］反応混合物（１ｍｌあたり）

［００１０３］２０μｌの適切に希釈した純粋な酵素（阻害剤とあらかじめインキュベーションしたもの）を２５μｌの反応混合物に、室温で１０分間添加することによって、反応を開始した。ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ）ＳＰＡビーズ（０．８３３ｍｇ／ｍｌ）を含有する、１５０μｌの１６７ｍＭクエン酸ナトリウム、ｐＨ ２．１５を添加することによって、反応を終結させる。ビーズへの放射標識産物の結合によって、同位体が十分に近接して、トリチウムから放射線照射されて、ビーズ内のシンチラントが励起することが可能になる。いかなる未結合放射標識も、このエネルギー移動を可能にするほどシンチラントに十分に近接せず、したがって、シグナルはまったく生成されない。反応終結後、プレートをＭｉｓｔｒａｌ ３０００Ｅプレート遠心分離装置中、２５００ｒｐｍで５分間回転させる（あるいは１時間静置させる）。９６ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐａｃｋａｒｄ）中で、アッセイを行う。ＴｏｐＣｏｕｎｔ（Ｐａｃｋａｒｄ ９６ウェルカウンター）上でプレートを計測する。

［００１０４］試薬：混合大腸菌ＭＲＥ ６００ ｔＲＮＡおよびＡＴＰをＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ−Ｍａｎｎｈｅｉｍより購入し、Ｌ−［メチル−^３Ｈ］メチオニンおよびホスホジエステラーゼ・シンチレーション近接（ＳＰＡ）ビーズをＡｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈより購入し、そして他の試薬をＳｉｇｍａより購入した。

［００１０５］結果：データは、本発明の化合物が、＜１．５〜１００ｎＭの範囲で、ＭｅｔＲＳに対するＩＣ_５０値を有することを示す。すべて、哺乳動物酵素に関して、非常に選択的である（１μＭまで、ラットＭｅｔＲＳをまったく阻害しない）。ＭｅｔＲＳ阻害剤は、メチオニンの競合的阻害剤およびＡＴＰの非競合的阻害剤である。

実施例１４：本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレに対する強力な抗細菌活性を有する
［００１０６］本発明の化合物を、Ｃ．ディフィシレ増殖を阻害する能力に関してもまたアッセイしてもよい。標準的なアガーに基づくアッセイを用いて、ＭＩＣ_９０（Ｃ．ディフィシレの９０％の増殖を阻害するのに必要な最小阻害濃度）を決定した。

［００１０７］生物： Ｃ．ディフィシレの非反復臨床単離体コレクションに対する抗細菌活性に関して、すべての化合物を試験した。２０％グリセロールを補ったＢｒｕｃｅｌｌａブロス中で、生物を凍結保存した。冷凍庫から生物を取り出し、そしてＣＤＣアガー上で２回継代培養して、純度および増殖を確実にした。嫌気性条件下で、プレートを少なくとも２４時間インキュベーションした。形態；黄色、ガラス粉末の質感および特徴的な臭いに関して細菌コロニーを調べた。試験した対照生物は、バクテロイデス・フラジリス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ ｆｒａｇｉｌｉｓ）ＡＴＣＣ ２５２８５であった。

［００１０８］抗微生物感受性試験： ＣＬＳＩ指針（ＣＬＳＩ、Ｍ１１−Ａ２）にしたがって、ビタミンＫ_１、ヘミンおよび５％ヒツジ溶解血（ｌａｋｅｄ ｓｈｅｅｐ ｂｌｏｏｄ）を補充したＢｒｕｃｅｌｌａアガー上、アガー希釈法によって、抗微生物感受性試験を行った。試験化合物を連続希釈して、そして融解した補充Ｂｒｕｃｅｌｌａアガーに添加した。各抗微生物プレートシリーズの接種前および後に、薬剤不含プレートに接種し、そしてこれらを増殖対照として用いた。薬剤プレート２セットの後に、薬剤不含プレート上、嫌気性／好気性増殖対照を実行した。細菌コロニーをＢｒｕｃｅｌｌａブロス中に懸濁して、０．５ ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準のものと等しい濁度にして、そして１０^５ＣＦＵ／スポットを送達するＳｔｅｅｒｓレプリケーターで、プレートに適用した。嫌気性条件下で、プレートを３５℃で２４時間インキュベーションした後、結果を読み取った。最小阻害濃度（ＭＩＣ）は、増殖を完全に阻害するか、または薬剤不含増殖対照のものに比較して、増殖の見かけに顕著な減少を引き起こす濃度であった。

結果：実施例に例示した化合物のＭＩＣ_９０は、０．５〜８μｇ／ｍｌの範囲である。これらの結果は、典型的にはおよそ１．０μｇ／ｍｌの、Ｃ．ディフィシレに対する本発明の化合物の強力な活性を示す。さらに、ＩＣ_５０データは、本発明の化合物が、Ｃ．ディフィシレに特異的であり、哺乳動物ＭｅｔＲＳに対してはほとんどまたはまったく活性を示さないことを示す。ＭｅｔＲＳ阻害剤化合物は、正常な腸フロラに害を加えずに、Ｃ．ディフィシレおよびグラム陽性好気性細菌に対して強力な活性を示す。

実施例１５：本発明の化合物は、他の細菌に対して強力な抗細菌活性を有する
［００１０９］一団のグラム陽性細菌に対する抗細菌活性に関して、本発明の化合物を試験した。ＣＬＳＩレファレンス・ブロス微量希釈法を用いて、グラム陽性好気性細菌に対して、化合物を試験した。黄色ブドウ球菌、フェカリス菌、フェシウム菌、化膿性連鎖球菌、表皮ブドウ球菌およびＳ．ヘモリチクス（Ｓ． ｈａｅｍｏｌｙｔｉｃｕｓ）に対してデータを得た。試験した化合物は、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌および化膿性連鎖球菌の耐性株を含めて、＜０．００８〜８μｇ／ｍｌのＭＩＣ範囲で、すべての単離体に対して、強力な抗細菌活性を示した。標準的なＣＬＳＩ指針アガー希釈法を用いて、ヘリコバクター、ピロリ菌に対してもまたデータを得て、そしてこの結果は、本発明の化合物が、ピロリ菌に対して活性であることを示す。

［００１１０］データは、他のグラム陽性細菌、例えば、黄色ブドウ球菌、フェカリス菌、フェシウム菌、化膿性連鎖球菌、表皮ブドウ球菌、およびＳ．ヘモリチクスに対して、そしてグラム陰性細菌、ピロリ菌に対して、抗細菌剤として、本発明の化合物を用いる有用性を例示した。

実施例１６：本発明の化合物は、ｉｎ ｖｉｖｏ試験中、強い療法的有用性を示す：
［００１１１］動物研究を実行して、Ｃ．ディフィシレ感染の治療に関するＭｅｔＲＳ阻害剤の効能を決定した。試験したＭｅｔＲＳ阻害剤は、５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン（ラセミ混合物およびＲ鏡像異性体両方）および５−［３−（（Ｒ）−８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンであった。２−［３−｛３，５−ジブロモ−２−［２−（４−メチル−チアゾール−５−イル）−エトキシ］−ベンジルアミノ｝−プロピルアミノ］−１Ｈ−キノリン−４−オンもまた試験した。

［００１１２］慣用的な抗生物質、バンコマイシンで治療したＣ．ディフィシレ感染ハムスターに結果を比較した。感染したハムスターを、５〜５０ｍｇ／ｋｇのＭｅｔＲＳ阻害剤の溶液または懸濁物いずれか、あるいは２．５、５または２５ｍｇ／ｋｇのバンコマイシンで治療した。群あたり８匹のハムスターであり、実験の最終終点は生存であった。死亡したハムスターのＧＩ状態を調べた。

［００１１３］研究に関するデータは、対照ハムスター（Ｃ．ディフィシレに感染したが、まったく治療を受けていない）が３〜４日以内に死亡することを示した。ＭｅｔＲＳ阻害剤で治療したハムスターは、生存の有意な増加を示し、しばしば、研究終了時まで、典型的には２８日以上生存した。これらの結果は、バンコマイシン治療を用いて得た結果と類似であるかまたはそれより優れていた。５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンが最適な効能を示した。５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンは、バンコマイシンより優れた効能を示し、バンコマイシンでは０〜１０％生存であったのに比較して、第２８日で、＞６０％生存が観察された（５ｍｇ／ｋｇ ＢＩＤ）。生存動物は、健康なＧＩ外観および組織病理を有した。ＭｅｔＲＳ阻害剤の経口投与後、ハムスターでは、低い全身曝露および生物学的利用能が観察された。

［００１１４］本実施例中のデータは、本発明の化合物が、Ｃ．ディフィシレに感染した動物を治療する能力において、バンコマイシンに匹敵するかまたはそれより優れていることを例示する。

実施例１７：本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレの毒素産生に影響を及ぼす：
［００１１５］Ｃ．ディフィシレの病原性は、細胞外毒素ＡおよびＢを産生する能力と関連する。高毒素産生株は、最近の高死亡率の突発の原因である。対照的に、毒素を産生しない単離体は、非病原性である。毒素産生は、活性タンパク質合成を必要とするため、タンパク質合成機構の阻害は、新規毒素産生を抑制すると予期される。したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ．ディフィシレ毒素産生に対する影響に関して、ＭｅｔＲＳ阻害剤を評価した。

方法：
［００１１６］Ｃ．ディフィシレ株ＡＴＣＣ４３２５５をＣＤＣ嫌気性菌アガー（Ｒｅｍｅｌ、カンザス州レネクサ）上で嫌気的に増殖させ、そして維持した。増殖に対する抗細菌剤の影響を試験するため、１０^６ＣＦＵ／ｍＬの最初の接種物を用いて、９６ウェル・ブレイン・ハート・インフュージョン（ＢＨＩ）ブロス培養中で３５℃で４０時間、細胞を嫌気的に増殖させた。Ｃ．ディフィシレ細胞が高密度の際の、毒素産生に対する抗細菌剤の影響を試験するため、９６ウェル・ブレイン・ハート・インフュージョン（ＢＨＩ）ブロス培養中で３５℃で２４時間、細胞を嫌気的に増殖させた。次いで、消費した培地を、０．０１５〜１６μｇ／ｍＬの濃度範囲でＭｅｔＲＳ阻害剤および対照剤を含有する新鮮なブロスと交換した。４日後、５９５ｎｍでの光学密度測定によって、そしてＣＤＣ嫌気性菌アガー上での培養によって、それぞれ、増殖および細胞生存度を監視した。培養上清を収集し、そして抗毒素Ａモノクローナル抗体（Ｎｏｖｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ、コロラド州センテニアル）を用いたＥＬＩＦＡ（酵素連結免疫フローアッセイ）によって毒素Ａを検出した。

結果：
［００１１７］ＭｅｔＲＳ阻害剤、５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンおよび５−［３−｛３，５−ジブロモ−２−［２−（４−メチル−チアゾール−５−イル）−エトキシ］−ベンジルアミノ｝−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンは、ブロス中、０．２５μｇ／ｍＬ以上の濃度で、Ｃ．ディフィシレの増殖を防止した。

［００１１８］高細胞密度の４日目の静止期培養物における毒素産生は、０．２５μｇ／ｍＬ程度の低い濃度で、４つの異なるＭｅｔＲＳ阻害剤（５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン、５−［３−｛３，５−ジブロモ−２−［２−（４−メチル−チアゾール−５−イル）−エトキシ］−ベンジルアミノ｝−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン、Ｒ−（＋）−５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン二塩酸塩、５−［３−（６，８−ジブロモ−１，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン三塩酸塩）によって阻害された。対照的に、毒素産生を阻害するには、はるかにより高い濃度（４〜＞１６μｇ／ｍＬ）の比較剤（メトロニダゾール、バンコマイシン、レボフロキサシン）が必要であった。

結論：
［００１１９］ＭｅｔＲＳ阻害剤は、ブロス培養中、Ｃ．ディフィシレの増殖および毒素産生の両方に阻害効果を示す。さらに、毒素産生は、静止期培養中で、効果的に遮断された。静菌性のＭｅｔＲＳ阻害剤による毒素産生のこの抑制の結果として、Ｃ．ディフィシレは、本質的に非毒素産生性となり、そしてしたがって非病原性となる。この効果は、その作用様式が、細菌が活発に増殖することを必要としない、ＭｅｔＲＳ阻害剤などの、タンパク質合成阻害剤に特有である。

実施例１８：本発明の化合物は、Ｃ．ディフィシレにおける胞子産生に影響を及ぼす：
［００１２０］Ｃ．ディフィシレは、加熱、乾燥、および殺菌剤などの多くの洗浄剤に耐性である胞子を形成する能力に関してよく知られている生物である。環境中に存在する胞子は、疾患を引き起こす生物の貯蔵庫として働きうる。Ｃ．ディフィシレ感染は、しばしば、胞子の摂取によって開始され、この胞子が、ＧＩ管で出芽してＣＤＡＤを引き起こす。ＣＤＡＤ治療後、腸に胞子が保持されることもまた、再発疾患の主な原因であると考えられる。Ｃ．ディフィシレが胞子を産生する能力または胞子の出芽が減少すると、この疾患の治療の重要な前進に相当しうる。胞子コートは、主にタンパク質で構成され、胞子コートの生成にはタンパク質合成が必要であり、そして活性タンパク質合成の阻害は、この生物において、胞子産生に影響を及ぼすと予期される。したがって、ｉｎ ｖｉｔｒｏのＣ．ディフィシレ胞子産生に対するその影響に関して、ＭｅｔＲＳ阻害剤を評価した。

方法：
［００１２１］ＢＩ／ＮＡＰ１遺伝子型に属する、２つの最近の突発単離体を含む、Ｃ．ディフィシレの４つの臨床単離体の胞子形成に対する影響に関して、ＭｅｔＲＳ阻害剤を評価した。Ｃ．ディフィシレ株を補充Ｂｒｕｃｅｌｌａ血上で２４〜４８時間増殖させ、そしてコロニーを生理食塩水中に懸濁して、０．５ ＭｃＦａｒｌａｎｄ標準と等しい濁度を達成した。０．０６〜２μｇ／ｍＬの範囲の濃度でＭｅｔＲＳ阻害剤を含有する５％ヒツジ溶解血を含む、新鮮な補充Ｂｒｕｃｅｌｌａアガープレート表面上に、Ｃ．ディフィシレ懸濁物（１０μＬ）をスプレッドし、そして３５℃で９６時間、嫌気的にインキュベーションした。ＭｅｔＲＳ含有プレートに接種するのに用いたものと同じ細胞懸濁物のアリコットを、生菌数用にもまたプレーティングし、そしてさらに２５０μＬアリコットを、２５０μＬの無水エタノールで、室温で１時間処理して、植物性（ｖｅｇｅｔａｔｉｖｅ）細胞を除去し、そして胞子を数えることを可能にした。化合物の存在下で９６時間インキュベーションした後の４つのすべての株に関して、胞子対総細胞の比を再び決定し、そしてこれを用いて、胞子形成率に対する薬剤不含対照とＭｅｔＲＳ阻害剤の効果を比較した。

結果：
［００１２２］４つのＣ．ディフィシレ株のうち３つが、測定可能な数の胞子を産生し、そしてこれらを上述のように評価した。５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンですべての株を処理すると、すべての株において、０．２５ｘＭＩＣ（＜２％胞子）および０．５ｘＭＩＣ（＜１％胞子）で、胞子産生の減少が示された。これは、メトロニダゾールでの処理後に得た結果とは顕著に対照的であり、メトロニダゾールの場合、試験したすべての株は、薬剤のＭＩＣ濃度未満に曝露した後、胞子産生の顕著な増加（１００％までの胞子）を示す。バンコマイシンでの処理は、２つの株では類似の胞子産生増加を誘導したが、１つの株では誘導せず、この株では胞子数は低いままであった。

結論：
［００１２３］ＭＩＣ未満（０．２５および０．５ｘＭＩＣ）の５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンは、Ｃ．ディフィシレの植物性細胞が胞子を形成するのを防止する際に有効であった。これらのデータは、５−［３−（（Ｒ）−６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オンが、突発を防止し、そして環境におけるＣ．ディフィシレ胞子の広い蔓延と相関づけられている再発率を減少させる際に有用な役割を有する可能性もあることを示唆する。

［００１２４］本発明は、いくつかの態様に言及して、特に示され、そして記載されているが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、本明細書に開示する多様な態様に、形式および詳細の変化を作製してもよく、そして本明細書に開示する多様な態様は、請求項の範囲に対する限定として働くようには意図されないことを、当業者は理解するであろう。

Claims (8)

1. 式（Ｉ）：
   

   

   式中：
   Ｒ^１は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、カルボキシ、または（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルによって置換されていてもよい）、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルより選択され；
   Ｙは、直鎖中に１〜６のメチレン基を有するリンカー基であり、そしてそのうち、１以上のメチレン基が、１以上の（Ｃ_１−６）アルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシまたは（Ｃ_１−６）アルキリデニル置換基を有してもよく；
   Ｒ^２は、ハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、カルボキシ、または（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルによって置換されていてもよい）、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルより選択され；
   Ｚ_１がＳである場合、Ｚ_２およびＺ_３はＣＨであり；Ｚ_２がＳである場合、Ｚ_１およびＺ_３はＣＨであり；Ｚ_３がＳである場合、Ｚ_１およびＺ_２はＣＨであり；
   Ｘは、ＮＨ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、Ｏ、またはＣＨ_２であり；
   ｎは１、２または３であり；そして
   ｍは、０、または１〜４の整数である
   の化合物。
2. 式（ＩＩ）：
   

   

   式中：
   Ｒ^３およびＲ^４は、同じ置換基または異なる置換基であってもよく、そしてハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、カルボキシ、または（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルによって置換されていてもよい）、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルより選択される
   を有する請求項１の化合物。
3. 式（ＩＩＩ）：
   

   

   式中：
   Ｒ^３およびＲ^４は、同じ置換基または異なる置換基であってもよく、そしてハロ、シアノ、ヒドロキシル、（Ｃ_１−６）アルキル（ハロ、ヒドロキシル、アミノ、モノからペルフルオロ（Ｃ_１−３）アルキル、カルボキシ、または（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニルによって置換されていてもよい）、（Ｃ_３−７）シクロアルキル、（Ｃ_１−６）アルコキシ、アミノ、モノまたはジ−（Ｃ_１−６）アルキルアミノ、アシルアミノ、カルボキシ、（Ｃ_１−６）アルコキシカルボニル、カルボキシ（Ｃ_１−６）アルキルオキシ、（Ｃ_１−６）アルキルチオ、（Ｃ_１−６）アルキルスルフィニル、（Ｃ_１−６）アルキルスルホニル、スルファモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルスルファモイル、カルバモイル、モノおよびジ−（Ｃ_１−６）アルキルカルバモイル、ならびにヘテロシクリルより選択される
   を有する請求項１の化合物。
4. 請求項１の化合物の塩。
5. 薬学的に許容されうる塩である、請求項４の塩。
6. ５−［３−（６，８−ジブロモ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（６，８−ジブロモ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（６−クロロ−８−ヨード−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（６−ブロモ−８−クロロ−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（６−ブロモ−８−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（８−ブロモ−６−クロロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；
   ５−［３−（８−ブロモ−６−メチルスルファニル−クロマン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン；および
   ５−［３−（６−ブロモ−８−フルオロ−ｌ，２，３，４−テトラヒドロ−キノリン−４−イルアミノ）−プロピルアミノ］−４Ｈ−チエノ［３，２−ｂ］ピリジン−７−オン
   より選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物。
7. 薬学的に許容されうるキャリアーまたは賦形剤と一緒に、抗細菌的に有効な量の請求項１記載の化合物を含む、薬学的組成物。
8. 細菌感染の治療に用いる、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を含有する薬学的組成物であって、
   前記化合物は、治療の必要がある患者に、抗細菌的に有効な量で投与される、前記薬学的組成物。