JP5220608B2 - ２−（アミノメチル）−５−クロロベンジルアミド誘導体および凝固因子Ｘａの阻害剤としてのそれらの使用 - Google Patents

２−（アミノメチル）−５−クロロベンジルアミド誘導体および凝固因子Ｘａの阻害剤としてのそれらの使用 Download PDF

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Description

本発明は、心臓血管障害および血栓塞栓症の薬剤のため、ならびに療法、予防および診断のための凝固因子Xa(FXa)の新規阻害剤、その調製および使用に関する。
現在臨床的に使用されているヘパリン型抗凝固剤、およびビタミンKアンタゴニストは、「理想的な」抗血栓剤のすべての必要条件を満たすわけではない。このため、凝固酵素、特にトロンビンおよびFXaの低分子量阻害剤が捜し求められている。トロンビン阻害剤と比較したFXa阻害剤の特定の利点は、多様な動物実験で示されてきているように、出血の傾向がより小さい可能性があることである。したがって、抗血栓有効用量で、FXa阻害剤を用いると、出血時間に最低限の影響しかない(Leadley, R.J. Curr. Topics in Med. Chemistry 1, 151 (2001)(非特許文献1);およびQuan, M.L. & Smallheer, J.M., Curr. Opin. in Drug Discovery & Development 7, 460 (2004)(非特許文献2))。
現在、多様な有効なFXa阻害剤が開発されてきている(Quan, M.L. & Smallheer, J.M., Curr. Opin. in Drug Discovery & Development 7, 460 (2004)(非特許文献2); Pauls, H.W. et al., Frontiers in Medicinal Chemistry - Online 1, 129 (2004)(非特許文献3), およびMaignan, S. & Mikol, V. Curr. Topics in Med. Chemistry 1, 161 (2001)(非特許文献4))。記載された最初のFXa阻害剤は、C末端セグメントに、例えばアミジノまたはグアニジノ基などの非常に塩基性の基を含有した。
X線構造解析によって、これらの塩基性基は、FXaの189位にあるトリプシン様セリンプロテアーゼに特徴的なアスパラギン酸と塩架橋を形成することが示されてきている。これらの非常に荷電した塩基性基のため、第一世代のFXa阻害剤は、通常、経口投与後、非常に低い生物学的利用能しか示さなかった。このため、近年、C末端セグメントにもはやいかなる塩基性基も持たない新規FXa阻害剤が徹底的に検索されてきている。さらなる戦略は、生理学的pH条件下で部分的にのみプロトン付加されている、塩基性が減少した阻害剤の開発を含んだ。第三の戦略は、塩基性基が体内で経口摂取後にのみ開放されるプロドラッグを開発することであった(Quan, M. L. & Smallheer, J.M., Curr. Opin. in Drug Discovery & Development 7, 460 (2004)(非特許文献2); Pauls, H.W. et al., Frontiers in Medicinal Chemistry - Online 1, 129 (2004)(非特許文献3), およびMaignan, S. & Mikol, V. Curr. Topics in Med. Chemistry 1, 161 (2001)(非特許文献4))。
最初の経口利用可能FXa阻害剤が現在、臨床開発下にある(Perzborn, E., J. of Thromb. & Haemost. 3, 514 (2005)(非特許文献5); Quan, M.L., J. Med. Chem. 48, 1729 (2005)(非特許文献6))が、現在まで直接FXa阻害剤で認可を受けたものはない。このため、新規FXa阻害剤の開発に関して徹底的な研究が続いている。
したがって本発明は、高い活性および特異性で凝固因子Xaを阻害し、かつ好ましくは静脈内、皮下、または経口投与後、可能な限り長く体内を循環する、療法的使用に適した活性成分を示す目的に基づく。本発明はまた、薬学的調製物の提供にも関する。
近年、C末端2-(アミノメチル)-5-クロロベンジルアミドを用いて、基質類似性トロンビン阻害剤を開発することが可能になっている(Selnick, H.G. et al., WO 02/50056(特許文献1); Rittle, K.E. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 13, 3477 (2003)(非特許文献7), Stauffer, K.J. et al., J. Med. Chem. 48, 2282 (2005)(非特許文献8))。多様な実験動物への経口投与後、記載される化合物のいくつかに関して、有意な生物学的利用能および抗血栓活性を観察することが可能であった。X線構造解析によって、C末端2-(アミノメチル)-5-クロロベンジルアミド残基の遊離アミノメチル基は、トロンビンに特徴的なグルタミン酸残基192と塩架橋を形成し、かつしたがって阻害活性に有意に寄与する(Rittle, K.E. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 13, 3477 (2003)(非特許文献7), Stauffer, K.J. et al., J. Med. Chem. 48, 2282 (2005)(非特許文献8))。
WO 02/50056(特許文献2)は、トロンビン阻害効果を有し、かつ塞栓症および血栓症の療法に使用可能である、プロリンアミド誘導体を開示する。刊行物、Bioorganic Medical Chemistry Letters (13, 2003, 3477-3482ページ, K.E. Rittle et al.)(非特許文献9)は、トロンビン阻害特性を示すベンゼンスルホンアミドピリジノン誘導体を記載する。
FXaは、トロンビンとは対照的に、192位にグルタミン酸を持たず、かつしたがってC末端残基の遊離アミノメチル基が、192位の残基と塩架橋を形成不能であるにもかかわらず、本発明者らは、驚くべきことに、一般式I
Figure 0005220608
の適切にアシル化された2-(アミノメチル)-5-クロロベンジルアミンが、非常に有効に、かつ選択的に、FXaを阻害することを見出した。驚くべきことに、P3残基としてD立体配置のホモフェニルアラニンの誘導体を有する、特に適切な化合物(Schechter and Berger, Biochem. Biophys. Res. Commun. 27, 157 1967(非特許文献10)の命名法)、特に構造II
Figure 0005220608
のP3残基を有する化合物は、FXaおよびトロンビンに対する効果を比較した際、FXaに対して著しく高い阻害活性を示す。さらに適切なP3残基は、環の窒素が、パラ、メタ、もしくはオルト位にあるか、またはN-オキシドの形であってもよい、D-ホモチロシンまたはD-ホモピリジルアラニンであることが立証された。
Selnick, H.G. et al., WO 02/50056 WO 02/50056 Leadley, R.J. Curr. Topics in Med. Chemistry 1, 151 (2001) Quan, M.L. & Smallheer, J.M., Curr. Opin. in Drug Discovery & Development 7, 460 (2004) Pauls, H.W. et al., Frontiers in Medicinal Chemistry - Online 1, 129 (2004) Maignan, S. & Mikol, V. Curr. Topics in Med. Chemistry 1, 161 (2001) Perzborn, E., J. of Thromb. & Haemost. 3, 514 (2005) Quan, M.L., J. Med. Chem. 48, 1729 (2005) Rittle, K.E. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 13, 3477 (2003) Stauffer, K.J. et al., J. Med. Chem. 48, 2282 (2005) Bioorganic Medical Chemistry Letters (13, 2003, 3477-3482ページ, K.E. Rittle et al.) Schechter and Berger, Biochem. Biophys. Res. Commun. 27, 157 1967
本発明は、したがって、凝固因子Xaの阻害剤としての、一般式I
Figure 0005220608
の化合物およびこれらの化合物の薬学的に適切な塩に関し、式中
X = NR3またはO、
R3 = 好ましくはHであるが、同様に1〜6のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル、特に1〜3のC原子を有するアルキル、特にメチルであってもよく；
n = 0、1、2、3または4、好ましくはn = 1または2、特にn = 2；
R1 = H、-CH2-COOR4、-SO2-R5、-COOR5またはCO-R6、特に-SO2-R5；
R4 = H、または1〜6のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、好ましくは1〜3のC原子を有するアルキル、特にエチル；
R5 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜7のC原子、特に1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアリールもしくはヘテロアリールラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている、アラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、またはシクロヘキシルメチルラジカル、
R7 = ハロゲン、好ましくはClまたはFまたはCN、NHR3、NHCO-R3、-CH2-NHR3、NO2、OR3、SR3、-COOR4または-CH2-COOR4、かつR3およびR4は上に定義される通りであり、
R6 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜8のC原子、特に1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、またはシクロアルキルまたはシクロヘキシルメチルであるが、同様にR4が上に定義されるような-COOR4であり；かつR6はまた、上に定義されるようなR7によって置換されていてもよく、かつ
R2 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されてもよい、5〜12の原子を有するアリールもしくはヘテロアリールラジカル、ここでヘテロアリールラジカルは、N、O、もしくはSなどの1〜3のヘテロ原子を含んでもよく、かつヘテロ原子は好ましくはNであり、R2がピリジルラジカルであるならば、ヘテロ原子はまたピリジンN-オキシドの形であってもよく、またはR2は、置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されてもよい5〜7の原子を有するシクロアルキルラジカルであり、ここでこのシクロアルキルラジカルの1つのCH2基はまた、NH、OもしくはSによって置換されていてもよく、かつここでR7は上に定義される通りであり、
P2 = R3が上に定義される通りである、以下の構造
Figure 0005220608
の任意の天然もしくは非天然α-アミノ酸またはα-アザアミノ酸残基、
R8 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜8のC原子、特に1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアリールもしくはヘテロアリールラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、またはシクロヘキシルメチルラジカル、かつここでR7は上に定義される通りであり、または
Y = CHまたはN、あるいは
P2 = R7およびYが上に定義される通りである、以下の構造
Figure 0005220608
の任意のα-イミノ酸またはα-アザイミノ酸残基、かつ
q = 0、1または2、かつ環の1つの炭素原子は、上に定義される通りであるラジカルR7によって置換されていてもよい。
さらに特に適切な化合物は、R1が-CH2-CO-OH、CH2-CO-OCH2CH3、またはベンジルスルホニル、メチルスルホニル、エチルスルホニル、n-プロピルスルホニルまたはn-ブチルスルホニルラジカルである点で特徴付けられる。ベンジルスルホニル基および実施例に用いる基が特に好ましい。
同様に特に適切な化合物は、nが1または2、特に2である点で特徴付けられる。
用語、アリールラジカルは、例えばフェニルまたはナフチルなどの、当業者によく知られている芳香族ラジカルを意味する。用語、ヘテロアリールラジカルは、例えば5または6員複素環芳香族ラジカルを意味するが、同様にキノリン、プリンまたはフェナジンなどの縮合複素環芳香族ラジカルも意味する。複素環芳香族および芳香族系のより正確な説明に関しては、例えば、Rompps Chemie-Lexikon, Thieme 1997を参照されたい。
特に適切な化合物は、アミノ酸またはイミノ酸残基が、XおよびD立体配置のR2とともに存在する点で特徴付けられる。
同様に、特に適切な化合物は、P2がグリシン、セリン、グルタミン酸、グルタミン酸エチル、グルタミン酸メチルまたはプロリン残基である点で特徴付けられる。
P2は、非常に特に好ましくは、グリシン、セリン、グルタミン酸、グルタミン酸エチルまたはグルタミン酸メチル残基を意味する。
特に、ラットの循環系から、より緩慢に排除される化合物は、R7が-COOHもしくは-CH2-COOH基であるか、またはP2がグルタミン酸残基であるものである。
好ましい化合物または化合物群のさらなる例は、特許請求の範囲に見出されるはずである。
薬学的に適切なまたは許容される塩は、最初のまたは基本の化合物と比較して、水中での可溶性がより高いため、医学的適用に特に適している。これらの塩は、薬学的に許容される陰イオンまたは陽イオンを持たなければならない。本発明の化合物の適切な薬学的に許容される酸付加塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、リン酸、メタリン酸、硝酸、スルホン酸および硫酸などの無機酸、または例えば酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グリコール酸、イセチオン酸、乳酸、ラクトビオン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸、p-ツルオンスルホン酸(tuluonsulfonic acids)、酒石酸およびトリフルオロ酢酸などの有機酸の塩である。医学的目的のため、塩素塩を用いることが特に好ましい。適切な薬学的に許容される塩基性塩の例は、アンモニウム塩、アルカリ金属塩(ナトリウムおよびカリウム塩など)およびアルカリ土類金属塩(マグネシウムおよびカルシウム塩など)である。
同様に、薬学的に許容不能な陰イオンを持つ塩が、薬学的に許容される塩を調製するかまたは精製するための有用な中間体として、かつ/または非療法的、例えばインビトロ適用で使用するため、本発明の関連内に属する。
本明細書中、これ以降に用いる用語「生理学的に機能する誘導体」は、式Iの本発明の化合物の生理学的に許容される任意の誘導体、例えば、ヒトなどの哺乳動物に(直接または間接的に)投与した際に、式Iの化合物またはその活性代謝産物を形成することが可能なエステルを指す。生理学的に機能する誘導体にはまた、本発明の化合物のプロドラッグも含まれる。こうしたプロドラッグは、インビボで本発明の化合物に代謝されうる。これらのプロドラッグは、それ自体、活性であってもまたはなくてもよい。
本発明の化合物はまた、多様な立体異性体型で存在してもよく、また多形型で、例えば無定形性および結晶性多形型で存在してもよい。本発明の化合物のすべての多形型および立体異性体は、本発明の関連内に属し、かつ本発明のさらなる局面である。
本明細書中、これ以降、式(I)の化合物に対するすべての言及は、上述のような式(I)の化合物、ならびに本明細書に記載するような塩、溶媒和物および生理学的に機能する誘導体を指す。
化合物を分析するための方法
分析用HPLC
分析用逆相HPLCに用いたのは、サブシステムCTO-10ASカラムオーブン、LC-10ADポンプ(2 x)、DGU-14A脱気装置、SIL-10ADオートインジェクター、SCL-10Aシステムコントローラー、SPD-10A UV-Vis検出装置、およびPhenomenex のカラム、Luna 5 μm C18(2) 100Å、250 x 4.6 mmからなり、適切なソフトウェア、Shimadzu CLASS-VP、バージョン5.3を用いる、Shimadzu LC-10A HPLC系であった。220 nmで検出を行った。用いた溶出剤は、1 ml/分の流速および直線勾配(1% B/分)の、0.1 % TFAを含む水(A)および0.1 % TFAを含むアセトニトリル(B)であった。
調製用HPLC
調製用RP-HPLCに用いたのは、サブシステムLC-8A調製用ポンプ(2 x)、DGU-14A脱気装置、FRC-10Aフラクションコレクター、SCL-10Aシステムコントローラー、SPD-10A UV-Vis検出装置、およびPhenomenex のカラム、Luna 5 μm C8(2) 100Å、250 x 30.0 mmからなり、適切なソフトウェア、Shimadzu CLASS-VP、バージョン5.3を用いる、Shimadzu HPLC系であった。220 nmで検出を行った。用いた溶出剤は、同様に、10または20 ml/分の流速および適切な勾配の、0.1 % TFAを含む水(A)および0.1 % TFAを含むアセトニトリル(B)であった。
質量分析
Finnigan (Bremen, Germany)のESI-MS LCQにおいて、マススペクトルを記録した。
薄層クロマトグラフィー
Macherey-Nagelの強固UV254プレコーティング・シリカゲルプレートを、薄層クロマトグラフィーに用いた。移動相は、n-ブタノール、氷酢酸および水の混合物(4:1:1)であった。254 nmのUV吸光、およびさらに、ニンヒドリン溶液(100 mlのn-ブタノールおよび3 mlの氷酢酸中に溶解した300 mgのニンヒドリン)によって、化合物を検出し、かつ塩素大気中で、TLCプレートをインキュベーションした後、o-トルイジン溶液(2 mlの氷酢酸および148 mlの水に150 mgのo-トルイジンおよび2.1 gのKIを溶解)をスプレー試薬として用いた。
NMR分光法
Bruker Avance DPX 300分光計を用いて、NMRスペクトルを記録した。この目的のため、可能な場合はD2O中に、そうでなければクロロホルム-d (CDCl3)中に試料を溶解した。化学シフトをppmで示し、かつこれは溶媒シグナルを指す。
本発明はしたがって、因子Xaの阻害剤としての式(I)の化合物の使用にも関する。
本発明はまた、式(I)の化合物を含む薬学的組成物にも関する。所望の生物学的効果を達成するために必要な式(I)の化合物の量は、いくつかの要因、例えば選択した特定の化合物、意図される使用、投与様式および患者の臨床状態に応じる。
一日の用量は、一般的に、体重kgあたり一日あたり0.03 mg〜100 mg(典型的には3 mg〜50 mg)の範囲内、例えば3〜10 mg/kg/日である。静脈内用量は、例えば、0.03 mg〜1.0 mg/kgの範囲であってもよく、これを分あたりキログラムあたり10 ng〜100 ngの注入として適切に投与してもよい。これらの目的に適した注入溶液は、ミリリットルあたり、例えば0.1 ng〜10 mg、典型的には1 ng〜10 mgを含んでもよい。単一用量は、例えば、活性成分の1 mg〜10 gを含んでもよい。したがって、注入のためのアンプルは、例えば、1 mg〜100 mgを含んでもよく、かつ経口投与可能な単一用量製剤、例えば錠剤またはカプセルは、例えば、1.0〜1000 mg、典型的には10〜600 mgを含んでもよい。薬学的に許容しうる塩の場合、前述の重量データは、塩が由来する遊離化合物の重量を指す。上述の状態の予防または療法のため、式(I)の化合物をそれ自体、化合物として用いることも可能であるが、好ましくは薬学的組成物の形態で、許容される担体または賦形剤と一緒に存在する。担体または賦形剤はもちろん、組成物の他の成分と適合しかつ患者の健康に有害ではないという意味で許容可能である必要がある。
担体は、固体または液体またはその両方であってもよく、かつ好ましくは単一用量として、例えば錠剤として化合物と共に製剤化され、重量0.05%〜95%の活性成分を含んでもよい。式(I)のさらなる化合物を含む、さらなる薬学的に活性である物質が同様に存在してもよい。成分と、薬理学的に許容される担体および/または賦形剤を混合する工程から本質的になる公知の薬学的方法の1つによって、本発明の薬学的組成物を産生してもよい。
本発明の薬学的組成物は、特に、経口、直腸、局所、経口腔(peroral) (例えば舌下)および非経口(例えば皮下、筋内、皮内または静脈内)投与に適しているが、投与に最も適した様式は、治療しようとする状態の性質および重症度における各個人の症例、ならびに各症例に用いる式(I)の化合物の性質に応じる。コーティング製剤およびコーティング遅延放出製剤もまた、本発明の枠内に属する。酸耐性および胃液耐性製剤が優先性される。胃液に耐性である適切なコーティングは、酢酸フタル酸セルロース、酢酸フタル酸ポリビニル、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ならびにメタクリル酸およびメタクリル酸メチルの陰イオン性ポリマーを含む。
経口投与に適した薬学的化合物は、例えば各々定義された量の式(I)の化合物を含有する、カプセル、カシェー剤、なめられる錠剤もしくは錠剤の形状；粉末もしくは顆粒の形状；水性もしくは非水性液体中の溶液もしくは懸濁物として；または水中油もしくは油中水エマルジョンの形状など、個々の単位の形状であってよい。これらの組成物は、既に言及したように、活性成分および担体(1つまたは複数のさらなる成分からなってもよい)を接触させる工程を含む、任意の適切な薬学的方法によって調製されてもよい。組成物は一般的に、液体および/または微粉化した固体担体と活性成分との一定で均質な混合によって産生され、この後必要であれば産物を成形する。
したがって、例えば化合物の粉末または顆粒を、適切な場合1つまたは複数のさらなる成分とともに圧縮するかまたは成型することによって、錠剤を産生してもよい。例えば粉末または顆粒などの自由に流動する型の化合物を、適切な場合は結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤および/または1つ(または複数)の表面活性/分散剤と、適切な装置中で混合して錠剤にすることにより、圧縮錠剤を産生してもよい。粉末型でありかつ不活性液体希釈剤で湿らせた化合物を、適切な装置中で成型することによって、成型錠剤を産生してもよい。
経口腔(舌下)投与に適した薬学的組成物は、フレーバー剤、通常はスクロースまたはアラビアゴムまたはトラガカントと共に式(I)の化合物を含有するなめられる錠剤と、ゼラチンおよびグリセロールまたはスクロースおよびアラビアゴムなどの不活性基剤との投与を含むトローチを含む。
非経口投与に適した薬学的組成物は、好ましくは式(I)の化合物の無菌水性調製物を含み、この調製物は好ましくは意図されるレシピエントの血液と等張である。これらの調製物は、好ましくは静脈内投与されるが、投与はまた、皮下、筋内または皮内注射によって行われてもよい。好ましくは化合物を水と混合し、生じた溶液を無菌にし、かつ血液と等張にすることによって、これらの調製物を産生することができる。本発明の注射可能組成物は、一般的に、重量0.1〜5%の活性化合物を含む。
さらなる製剤に関しては、通常のハンドブックを参照されたい。
本発明はまた、一般式(I)の1つまたは複数の化合物が、適切な担体および賦形剤と混合されている、薬学的組成物を産生するための方法にも関する(上記を参照されたい)。
用いる略語
Ac アセチル
Amb アミドベンジル
Ame アミノメチル
aPTT 活性化部分トロンボプラスチン時間
Boc tert-ブチルオキシカルボニル
Bz ベンゾイル
Bzl ベンジル
Bzls ベンジルスルホニル
DIEA ジイソプロピルエチルアミン
DCM ジクロロメタン
DMF N,N-ジメチルホルムアミド
HPLC 高性能液体クロマトグラフィー
iPr イソ-プロピル
i.V. 真空中
mCPBA 3-クロロ過安息香酸
MS 質量分析
NMM N-メチルモルホリン
NMR 核磁気共鳴分光法
PyBOP ベンゾトリアゾール-1-イル-N-オキシ-tris(ピロリジノ)-ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート
PT プロトロンビン時間
RT 室温
tBu tert-ブチル
TEA トリエチルアミン
Tfa トリフルオロアセチル
TFA トリフルオロ酢酸
THF テトラヒドロフラン
TMS-Cl トリメチルシリルクロリド
TT トロンビン時間
本発明は、以下の実施例によって、より詳細に説明される。
実施例1：阻害剤の合成
阻害剤1
Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
1a) 3-(2-ピリジル)プロパノール
35 ml (0.41 mol)の塩化オキサリルを、700 mlの乾燥DCM中に溶解し、かつ-70℃に冷却した。62 ml (0.87 mol)のDMSOおよび40 mlの乾燥DCMの混合物を、25分の期間に渡って、この溶液に一滴ずつ添加した。この間、温度を厳密に-65℃未満に維持した(発熱反応)。-70℃で15分間攪拌した後、150 mlの乾燥DCM中に溶解した、50 g (0.36 mol)の新鮮に蒸留した3-(2-ピリジル)プロパノールを、15分を超えない期間に渡って、-65℃未満で一滴ずつ添加した。218 ml (0.37 mol)のTEAを40分間添加し、かつ次いで、混合物をゆっくりとRTまで温めた。190 mlの水を添加して、形成された塩を溶解した。相を分離し、DCM相を真空中で濃縮し、かつ次いで、産物を蒸留によって精製した(2 mbar、59〜70℃)。
収量：33.6 g (0.25 mol、61%)の無色油、TLC：Rf 0.20。
1b) H-d,l-hAla(2-Pyr)-OH
67 g (0.5 mol)の1aを、18 mlのジエチルエーテルと混合し、かつ0℃に冷却した。88.4 g (1.65 mol)の塩化アンモニウムを300 mlの水中に溶解し、かつ、2-ピリジル-3-プロパノール溶液にゆっくりと添加した。200 mlの水中に溶解した74.3 g (1.4 mol)のシアン化ナトリウムを、混合物に添加した。混合物を0℃で4時間攪拌し、次いで、50℃で4時間加熱し、かつ再びRTに冷却した。混合物を800 mlのクロロホルムで4x抽出し、かつ合わせたクロロホルム相を真空中で濃縮した。残渣を1 lの濃HCl中に溶解し、かつRTで42時間攪拌し、かつ次いで、還流下で35時間煮沸した。溶媒を真空中で除去し、残渣を水と混合し、かつ混合物をやはり真空中で、数回濃縮した。残った残渣を1.5 lのエタノール中に溶解し、かつ4℃に冷却した。沈殿した塩を除去した。母液を濃縮し、かつ酸性イオン交換体(Dowex(登録商標) 50WX8-200、アンモニウム型、10 cm x 15 cm)上、2部分で精製した。産物を0.2 Nアンモニア溶液で溶出させた。生じた分画を真空中で濃縮し、かつアセトンを添加することによって沈殿させ、かつフリット上での吸引でろ過し、かつ真空中で乾燥させた。
収量: 42 g (0.233 mol、47 %)の薄茶色固体、
HPLC: 4.9 % B、
DC: Rf 0,04。
Figure 0005220608
1c) Bz-d,l-hAla(2-Pyr)-OH
17.7 g (98.22 mmol)のH-d,l-hAla(2-Pyr)-OHを60 mlのジオキサンおよび60 mlの水中に溶解し、かつ0℃で17.95 ml (103.14 mmol)のDIEAを添加した。11.97 ml (103.14 mmol)の塩化ベンゾイルを20 mlのジオキサン中に溶解し、かつ同様に0℃で一滴ずつゆっくりと添加した。混合物をRTで一晩攪拌し、かつ次いで溶媒を真空中で除去した。少量の氷酢酸中に残渣を部分的に溶解し、かつ酢酸エチルを添加した。産物は4℃で結晶化した。
収量：23.3 g (81.9 mmol、83%)の白色結晶固体
HPLC：20.5% B。
1d) Bz-d,l-hAla(2-Pyr)-OMe
23.3 g (81.9 mmol)のBz-d,l-hAla(2-Pyr)-OHを35 mlの乾燥メタノール中に懸濁し、かつ-10℃に冷却した。8.9 ml (122.85 mmol)の塩化チオニルを部分で添加し、かつ混合物を-10℃で30分間攪拌した。次いで、塩化チオニルをさらに3 ml (40.95 mmol)添加した。混合物をRTまで温め、かつ一晩攪拌し、かつ溶媒を真空中で除去した。残渣を、800 mlの酢酸エチルで溶解し、200 mlの飽和NaHCO3溶液で2x洗浄し、かつNa2SO4で乾燥させた。溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を乾燥させた。
収量：18.3 g (61.3 mmol、75%)の無定形固体
HPLC：23.7% B。
1e) Bz-d-hAla(2-Pyr)-OMe
6.3 g (21.1 mmol)のBz-d,l-hAla(2-Pyr)-OMeを200 mlのメタノール中に溶解し、かつ750 mlの0.2N酢酸アンモニウム溶液(pH 7.8)を添加した。希アンモニア溶液で、pHを7.5〜8に調整した。1 mlの水中に溶解した25 mgのα-キモトリプシン(ウシ膵臓由来、Merck、350 U/mg)を混合物に添加した。混合物を37℃で3日間インキュベーションした。この間、pHを定期的にチェックし、かつ希アンモニア溶液を添加することによって、pH 7.5〜8で一定に維持した。次いで、混合物を酢酸でpH 4に調整し、溶媒を真空中で濃縮し、かつ残渣を2M酢酸中に溶解した。濃アンモニア溶液を添加することによって、pH 8〜9で産物を沈殿させ、かつフリット上での吸引によってろ過し、少量の水性アンモニア、pH 8.5で洗浄し、かつ真空中で乾燥させた。さらに、なお水性相に存在する産物を単離するため、塩基性水性相を酢酸エチルで3x抽出した。酢酸エチル相をNa2SO4で乾燥させ、かつ溶媒を真空中で除去した。
収量：2.65 g (8.9 mmol、42%)の淡色固体
HPLC：23.7% B
1f) H-d-hAla(2-Pyr)-OH
6 g (2.0 mmol)のBz-d-hAla(2-Pyr)-OMeを100 mlの6N HCl中に溶解し、かつ還流下で20時間加熱した(油槽145℃)。RTまで冷却した後、沈殿した安息香酸をろ過し、溶媒を真空中で除去し、残渣を水中に溶解し、かつ混合物を真空中で2x濃縮した。残渣を酸性イオン交換体(Dowex(登録商標) 50WX8-200、アンモニウム型、10 cm x 15 cm)上で精製した。産物を0.2 Nアンモニア溶液で溶出させた。生じた分画を真空中で濃縮し、かつアセトンを添加することによって産物を沈殿させ、かつフリット上での吸引でろ過し、かつ真空中で乾燥させた。
収量:1.93 g (1.1 mmol)の白色固体(異性体として97%純粋、Marfeyの試薬でチェック)
HPLC: 4.9 % B
TLC: Rf 0.04。
1g) Bzls-d-hAla(2-Pyr)-OH x TFA
1.97 g (10.9 mmol)のH-d-hAla(2-Pyr)-OHを50 mlのDCM中に導入し、かつ3.04 ml (24.05 mmol)のTMS-Cl (Merck)および4.12 ml (24.05 mmol)のDIEA (Fluka)を添加した後、還流下で1時間加熱した。ここで完全に透明である混合物を、次いで、室温まで冷却し、かつ2.18 g (11.5 mmol)の塩化ベンジルスルホニル(Acros)および1.96 ml (11.45 mmol)のDIEAを添加した。最後に、さらなるDIEAでpHを7.5に調整し、かつ室温で3時間攪拌した。溶媒を真空中で除去し、かつさらなる前精製なしに、調製用逆相HPLCによって混合物を精製し、かつ凍結乾燥した。
収量：1.74 g (3.88 mmol)の白色固体
HPLC：24.9% B。
Figure 0005220608
1h) Bzls-d-hAla(2-Pyr)-Gly-OtBu
1.705 g (3.80 mmol)のBzls-d,l-hAla(2-Pyr)-OH x TFAおよび0.637 g (3.80 mmol)のH-Gly-OtBu x HClを50 mlのDMF中に溶解し、かつ0℃に冷却し、かつ1.979 g (3.80 mmol)のPyBOP、および部分での1.95 ml (11.4 mmol)のDIEAを添加した。混合物を0℃で1時間攪拌し、かつ室温でさらに3時間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ混合物を最小量の2M酢酸中に溶解し、濃縮水性アンモニア溶液でpH 8.5にし、かつ酢酸エチルで3回抽出した。合わせた有機相をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、かつ真空中で濃縮した。
収量：3.01 g (未精製産物、油)
HPLC：36.9% B。
1i) Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Gly-OtBu
3.01 g (未精製産物)の1hを50 mlのDCM中に溶解し、かつ0.933 g (3.80 mmol)のm-CPBA (Fluka、70%)で酸化した。さらに1.51 g (6.12 mmol)のm-CPBAを8時間の期間に渡って、部分で導入した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を最小量の2M酢酸中に溶解し、濃縮水性アンモニア溶液でpH 8.5にし、かつ酢酸エチルで3x抽出した。合わせた有機相をNa2SO4上で乾燥させ、ろ過し、かつ真空中で濃縮した。
収量：2.8 gの油(未精製産物)
HPLC：42.8% B
1j) Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Gly-OH
2.8 gの1iを10 mlの90% TFA中に溶解し、かつ45分間振盪した。次いで、溶媒を真空中で濃縮し、かつ混合物を水から凍結乾燥した。
収量：1.35 g (3.3 mmol)の無定形固体
HPLC：26.8% B
1) Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
52 mg (0.127 mmol)のBzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Gly-OHおよび35 mg (0.127 mmol)のH-Amb(2-Boc-アミドメチル, 5-Cl) (Nelson, T.D. et al., J.Org. Chem. 69 3620 (2004))を2 mlのDMF中に溶解し、かつ0℃で、66 mg (0.127 mmol)のPyBOPおよび42μl (0.254 mmol)のDIEAを添加した。混合物を0℃で20分間攪拌し、かつ室温でさらに60分間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残った残渣を1 mlの90% TFA中に溶解した。混合物を時々振盪しながら、45分間放置し、次いで、真空中で乾燥するまで濃縮し、かつさらなる前精製なしに、調製用逆相HPLCによって精製し、かつ凍結乾燥した。
収量：49 mg (0.072 mmol)の凍結乾燥粉末
HPLC：31.3% B
MS：計算値：559.17、測定値：560.2 (M+H)+
阻害剤2
Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミドx TFA
Figure 0005220608
2a) Bzls-d,l-hAla(2-Pyr)-Ser(tBu)-OtBu
80.6 mg (0.180 mmol)のBzls-d,l-hAla(2-Pyr)-OH x TFAおよび45.6 mg (0.180 mol)のH-Ser(tBu)-OtBu x HClを4 mlのDMF中に溶解し、かつ0℃で、93.5 mg (0.180 mmol)のPyBop、および123μl (0.719 mmol)のDIEAを添加した。混合物を0℃で20分間攪拌し、かつ室温でさらに40分間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチル中に溶解し、飽和NaHCO3溶液で、2x洗浄し、かつNa2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空中で除去した。
収量：148 mgの淡黄色油(未精製産物)
HPLC：49.47% Bおよび49.81% B(ジアステレオマー)。
2b) Bzls-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(tBu)-OtBu
148 mgのBzls-d,l-hAla(2-Pyr)-Ser(tBu)-OtBu(未精製産物)を、40 mlのDCM中に溶解し、分子ふるいA4上で乾燥させ、かつ40.3 mg (0.180 mmol)のmCPBA (70%)を添加した後、室温で1時間攪拌した。さらに1時間の経過に渡って、さらに40.3 mg (0.180 mmol)のmCPBAを、部分で添加した。溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチル中に溶解し、飽和NaHCO3溶液で2x、かつ飽和NaCl溶液で1x洗浄し、かつNa2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空中で除去した。
収量：142 mgの淡黄色油(未精製産物)。
HPLC：55.39% Bおよび55.87% B(ジアステレオマー)
2c) Bzls-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Ser-OH
142 mgのBzls-d,l-hAla(2-Pyr)-Ser(tBu)-OtBu(未精製産物)を2 mlのTFA (90%)中に溶解し、かつ1時間振盪した。溶媒を真空中で除去し、かつ産物を水から凍結乾燥した。
収量：60 mg (0.137 mmol)の凍結乾燥固体
HPLC：25.61% Bおよび26.06% B(ジアステレオマー)
2d) Bzls-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(2-Boc-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミド
60 mgのBzls-d,l-hAla(2-Pyr)-Ser(tBu)-OHおよび37 mg (0.137 mmol)の2-Boc-アミドメチル-5-クロロベンジルアミンを3 mlのDMF中に溶解し、かつ0℃で、71 mgのPyBop、および8.5のpHに調整するのに十分なDIEAを添加した。混合物を0℃で20分間攪拌し、かつ室温でさらに40分間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチルで溶解し、飽和NaHCO3溶液で2x、かつ飽和NaCl溶液で1x洗浄し、かつNa2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空中で除去した。
収量：91 mgの黄色油(未精製産物)。
HPLC：53.175% Bおよび53.81% B(ジアステレオマー)
2) Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド
60 mgの2d (未精製産物)を1 mlのTFA (90%)中に溶解し、かつ1時間振盪した。溶媒を真空中で除去し、かつ調製用RP-HPLCによって混合物を精製し、かつ凍結乾燥し、ジアステレオマーを分離した。阻害活性を介して、最終化合物がd立体配置であることを決定した。
収量：10.5 mgの白色固体
HPLC：30.33% B
MS：計算値：589.18；測定値：590.2 (M+H)+
阻害剤1および2の調製に関して記載してきたのと類似の戦略によって、以下の阻害剤を合成した。ペプチド化学反応の周知の標準的調製法をこれに用いた。修正合成戦略を用いて、阻害剤9および27を合成し、これを詳細に記載する。すべての阻害剤の最終精製は、調製用HPLCによって行った。
阻害剤3
Bzls-l,d-hAla(2-Pyr)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
HPLC：27.2% B(ジアステレオマーは分離されない)
MS：計算値：573.2；測定値：574.2 [M+H]+
阻害剤4
Props-l,d-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
HPLC：26.9% B
MS：計算値：511.2；測定値：512.2 [M+H]+
阻害剤5
Bzls-l,d-hAla(2-Pyr-NO)-Glu(OMe)(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
HPLC：34.4および34.8% Bのジアステレオマー
MS：計算値：645.2；測定値：646.3 [M+H]+
阻害剤6
Bzls-l,d-hAla(2-Pyr-NO)-Glu(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
HPLC：31.8% B(ジアステレオマーは分離されない)
MS：計算値：631.2；測定値：632.3 [M+H]+
阻害剤7
Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
HPLC：33.5% B(ジアステレオマー)
MS：計算値：599.2；測定値：600.2 [M+H]+
阻害剤8
2-ヒドロキシ-4-フェニル-ブチル-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミド x TFA
Figure 0005220608
HPLC：34.4% B、MS：計算値：389.1；測定値：390.1 [M+H]+
阻害剤9
H-l,d-N(CH2-COOH)hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミド x 2 TFA
Figure 0005220608
9a) Tfa-d,l-hAla(2-Pyr)-OH x TFA
TFA中の1当量のH-d,l-hAla(2-Pyr)-OH (0.5 g、2.77 mmol)の溶液を氷-塩混合物で-10℃に冷却した。次いで、攪拌しながら、1.2当量のトリフルオロ酢酸無水物(463μl、3.33 mmol)を数分間の経過に渡って、一滴ずつ添加した。冷却槽を除去し、かつ10℃の水槽に交換した。30分後、過剰な無水物およびTFAを真空中で濃縮し、かつ残渣(油)を調製用HPLCによって分離した。
収量：894 mg (82%)
HPLC：15.5% B
MS：計算値：276.07；測定値：277.04 (M+H)+
9b) Tfa-d,l-hAla(2-Pyr)-Gly-OtBu
6 mlのDMF中の1当量の9a (0.5 g、1.28 mmol)および1.05当量のH-Gly-OtBu (225 mg、1.34 mmol)の溶液を氷槽中で攪拌しながら0℃に冷却した。2.7当量のDIEA (600μl、3.47 mmol)および1.05当量のPyBOP (0.7 g、1.34 mmol)を、冷却した溶液に添加した。15分後、氷槽を除去し、かつ混合物をRT、pH 8〜9で2時間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチル中に溶解し、かつ飽和NaHCO3溶液、NaCl溶液で各3x洗浄した。酢酸エチル相をNa2SO4上で乾燥させ、かつろ過後、溶媒を真空中で濃縮した。次の反応のためにさらに発展させずに、残った油を用いた。
収量：990 mgの未精製産物(油)、HPLC：31.4% B
9c) Tfa-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly-OtBu
未精製産物9bをDCM中に溶解し、かつRTで攪拌しながら、およそ1.5当量のmCPBA (70%純粋、475 mg、1.92 mmol)を添加した。3時間後にHPLCでチェックすると、出発物質がなお存在していることが示され、かつしたがって、さらに0.5当量のmCPBAを導入し、かつ混合物を一晩攪拌した。溶媒を真空中で濃縮し、残渣を2M酢酸中に溶解し、かつ沈殿物をろ過した。次いで、ろ液を水性NH3溶液でpH〜8.5に調整し、かつ溶液をEAで3x抽出した。酢酸エチル相をNa2SO4上で乾燥させ、かつ溶媒を真空中で濃縮した。次の反応のためにさらに発展させずに、残った油を用いた。
収量：707 mgの未精製産物(油)
HPLC：36.0% B
9d) Tfa-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly-OH
未精製産物9cを2 mlの90% TFAと混合し、かつRTで1時間振盪し、水で希釈し、かつ凍結乾燥した。次の反応のためにさらに発展させずに、残った油を用いた。
収量：596 mgの未精製産物(<100%)
HPLC：19.0% B
MS計算値：349.09；測定値：348.04 (M-H)-
9e) Tfa-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-Boc-アミドメチル-5-クロロ)ベンジルアミド
3 mlのDMF中のおよそ1 mmolの未精製産物9dおよび1当量の2-(Boc-アミドメチル)-5-クロロ)ベンジルアミン(270 mg、1 mmol)の溶液を氷槽中で攪拌しながら0℃に冷却した。1当量のDIEA (175μl、1 mmol)および1当量のPyBOP (523 mg、1 mmol)を冷却した溶液に添加した。15分後、氷槽を除去し、かつpHを監視しながら(pH 8〜9)、RTで2時間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチル中に溶解し、かつ飽和NaHCO3溶液およびNaCl溶液で各3x洗浄した。酢酸エチル相をNa2SO4上で乾燥させ、かつろ過後、溶媒を真空中で濃縮した。調製用HPLCによって、残った未精製産物を精製した。
収量：175 mg
HPLC：47.9% B
9f) H-d,l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-Boc-アミドメチル-5-クロロ)ベンジルアミド x HCl
1 mlのジオキサンおよび1 mlの1N NaOH中の9e (175 mg、0.3 mmol)の溶液を40℃で3時間攪拌した。次いで、1N HClで中和し、溶媒を回転蒸発装置中で濃縮し、かつ残渣を凍結乾燥した。次の反応のためにさらに発展させずに、残った未精製産物を用いた。
HPLC 17.7% B
MS：計算値：505.21；測定値：506.1 (M+H)+
9g) H-d,l-N(CH2-COOH)-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-Boc-アミドメチル-5-クロロ)ベンジルアミド x TFA
1.1当量のK2CO3 (45 mg、0.33 mmol)および1.1当量の酢酸エチル・ブロモアセテート(55 mg、0.33 mmol)を、5 mlのTHF中の未精製産物9fの溶液に添加し、かつ混合物をRTで24時間攪拌した。沈殿物をろ過し、かつ溶媒を真空中で濃縮した。次いで、残渣を2 mlのジオキサン中に溶解し、かつ2 mlの1N NaOHと、RTで2時間攪拌した。次いで、混合物を1N HClで中和し、溶媒を真空中で濃縮し、かつ残渣を調製用HPLCによって精製した。
収量：86 mg (53%)
HPLC：36.9% B
MS：計算値：563.2；測定値：564.1 (M+H)+
9h) H-d,l-N(CH2-COOH)-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-Boc-アミドメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
86 mg (0.13 mmol)の9gを1 mlの90% TFAと混合し、かつRTで1時間振盪し、かつ次いでH2Oから凍結乾燥した。残渣を調製用HPLCによって精製した。
収量：61 mg (69%)
C25H26ClF6N5O9：HPLC 17.5% B
MS：計算値：463.2；測定値：564.2 (M+H)+
阻害剤10
Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Ala(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミドx TFA
(工程hにH-Ala-OtBuを用いて、阻害剤1と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：31.8% B、MS：計算値：573.18；測定値：574.2 [M+H]+
阻害剤11
Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Glu(OMe)(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(阻害剤5と同様に調製、かつ調製用HPLCによる最終工程においてジアステレオマーを分離)
Figure 0005220608
HPLC：34.4% B、MS：計算値：645.2；測定値：646.3 [M+H]+
阻害剤12
Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Dap(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミドx 2 TFA
(工程hにH-Dap(Boc)-OMeを用いて、かつ工程jにおいてLiOHでメチルエステルを加水分解して、阻害剤1と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：28.4% B、MS：計算値：588.19；測定値：589.2 [M+H]+
阻害剤13
(4-MeOOC-CH2)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノ-メチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程hに(4-MeOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-OHを用いて、阻害剤1と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：32.2% B、MS：計算値：631.19；測定値：632.3 [M+H]+
阻害剤14
(4-HOOC-CH2)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノ-メチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(最終工程におけるLiOHでの加水分解によって、阻害剤13から調製)
Figure 0005220608
HPLC：28.2% B、MS：計算値：617.17；測定値：618.3 [M+H]+
阻害剤15
(4-HOOC-CH2)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤14と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：25.6% B、MS：計算値：601.18；測定値：602.3 [M+H]+
阻害剤16
(4-MeOOC-CH2)-Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程aに(4-MeOOC-CH2)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-OHを用いて、阻害剤2と同様に調製、調製用HPLCによって、最終工程においてジアステレオマーを分離した)
Figure 0005220608
HPLC：24.9% B、MS：計算値：631.19；測定値：632.2 [M+H]+
阻害剤17
(4-HOOC-CH2)-Bzls-d-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(最終工程においてLiOHでの加水分解によって阻害剤16から調製、かつ調製用HPLCによって精製)
Figure 0005220608
HPLC：27.4% B、MS：計算値：647.18；測定値：648.3 [M+H]+
阻害剤18
(4-MeOOC-CH2)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤16と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：28.5% B、MS：計算値：645.2；測定値：646.3 [M+H]+
阻害剤19
(4-HOOC-CH2)-Bzls-d-hAla(2-Pyr)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(最終工程においてLiOHでの加水分解によって阻害剤18から調製、かつ調製用HPLCによってジアステレオマーを分離)
Figure 0005220608
HPLC：24.9% B、MS：計算値：631.19；測定値：632.3 [M+H]+
阻害剤20
(4-MeOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程hに(4-MeOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-OHを用いて、阻害剤1と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：32.16% B、MS：計算値：617.17；測定値：618.2 [M+H]+
阻害剤21
(4-HOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(最終工程においてLiOHでの加水分解によって、阻害剤20から調製)
Figure 0005220608
HPLC：27.13% B、MS：計算値：603.16；測定値：604.2 [M+H]+
阻害剤22
(4-MeOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤20と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：28.96% B、MS：計算値：601.18；測定値：602.2 [M+H]+
阻害剤23
(4-HOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(LiOHでの加水分解によって、阻害剤22から調製)
Figure 0005220608
HPLC：24.58% B、MS：計算値：587.16；測定値：588.2 [M+H]+
阻害剤24
(4-MeOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Ser(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程aに(4-MeOOC)-Bzls-d/l-hAla(2-Pyr)-OHを用いて、阻害剤2と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：31.36% B、MS：計算値：647.18；測定値：648.2 [M+H]+
阻害剤25
3-ピリジル(NO)-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程hに3-ピリジル-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr)-OHを用いて、阻害剤1と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：20.7% B、MS：計算値：576.16；測定値：577.2 [M+H]+
阻害剤26
3-ピリジル-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 3 TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤25と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：17.8% B、MS：計算値：544.17；測定値：545.2 [M+H]+
阻害剤27
HOOC-CH2-SO2-d-hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
Figure 0005220608
27a)イソプロピルクロロスルホンアセテート(Tetrahedron Lett. 2000, 41, 6743)
Figure 0005220608
1.166 g (6.3 mmol)の市販されているメチルクロロスルホンアセテート(Aldrich)を4 mlの乾燥ジエチルエーテル中に溶解し、かつ0℃で、485μl (6.3 mmol)のイソプロパノールを添加した。RTで2時間攪拌した後、溶媒を真空中で濃縮し、かつ次の工程のためにさらに発展させずに、残渣を用いた。
27b) iPr-OOC-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr)-OH x HCl
Figure 0005220608
500 mg (2.77 mmol)のH-d,l-hAla(2-Pyr)-OH (1b)を、60 mlの乾燥DCM中に懸濁し、かつ830μl (8.58 mmol)のTMS-Cl (Merck)および1.5 ml (8.58 mmol)のDIEA (Fluka)を添加した後、還流下で1時間加熱した。次いで、ここで完全に透明な混合物を0℃に冷却し、かつ615 mg (3.05 mmol)の11aおよび530μl (3.05 mmol)のDIEAを添加した。さらなるDIEAを用いてpHを7.5〜8に調整し、かつRTでさらに1.5時間攪拌した。溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を40 mlの水中に溶解し、かつ少量の酢酸エチルで3x洗浄し、かつ水性相を凍結乾燥した。
収量：塩を含む、2.3 gの未精製産物
HPLC：21.2% B
MS：計算値：344.1、測定値：345.1 (M+H)+
27c) iPr-OOC-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr)-Pro-OtBu x TFA
Figure 0005220608
2.04 g (未精製産物、およそ2.42 mmol)の11bおよび415 mg (2.42 mmol)のH-Pro-OtBu (Bachem)を15 mlのDMF中に溶解し、かつ0℃で、1.262 g (2.42 mmol)のPyBopおよび422μl (2.42 mmol)のDIEAを添加した。DIEAを添加することによって、pHをおよそ8〜9に調整した。混合物を0℃で15分間攪拌し、かつRTでさらに2時間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチルで溶解し、飽和NaHCO3溶液で2x、飽和NaCl溶液で1x洗浄し、かつNa2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空中で除去し、かつ残渣(油)を調製用RP-HPLCによって分離した。
収量：410 mgの油
HPLC：38.0% Bおよび39.5% B(ジアステレオマー)
MS：計算値：497.2、測定値：498.1 (M+H)+
27d) iPr-OOC-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Pro-OtBu
Figure 0005220608
410 mg (0.67 mmol)の11cを100 mlの乾燥DCM中に溶解し、かつ0℃で、500 mg (2.02 mmol)のmCPBA (70%)を部分で添加し、かつ次いで、RTで1時間攪拌した。1時間後(HPLCでチェック)、さらに190 mg (0.767 mmol)のmCPBAを部分で添加した。溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチルで溶解し、飽和NaHCO3溶液で2x、飽和NaCl溶液で1x洗浄し、かつNa2SO4上で乾燥させた。溶媒を真空中で除去した。
収量：800 mgの黄色がかった油(未精製産物)。
HPLC：43.3% Bおよび45.0% B(ジアステレオマー)
27e) iPr-OOC-CH2-SO2-d-hAla(2-Pyr-NO)-Pro-OH
Figure 0005220608
800 mgの11d (未精製産物)を4 mlのTFA (90%)中に溶解し、かつRTで1時間振盪した。溶媒を真空中で除去し、かつジアステレオマーを調製用HPLCによって分離した。
収量：70 mgの純粋ジアステレオマー(油)
HPLC：29.1% B
27f) iPr-OOC-CH2-SO2-d-hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-Boc-アミドメチル-5-クロロ)ベンジルアミド
Figure 0005220608
70 mg (0.153 mmol)の11eおよび42 mg (0.153 mmol)のH-Amb(2-Boc-アミドメチル, 5-Cl) (Nelson, T.D. et al., J. Org. Chem. 69 3620 (2004))を5 mlのDMF中に溶解し、かつ0℃で、79 mg (0.153 mmol)のPyBopおよび26μl (0.153 mmol)のDIEAを添加した。DIEAをさらに添加することによって、pHを8〜9に調整した。混合物を0℃で15分間、かつ室温でさらに1時間攪拌した。次いで、溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を酢酸エチルで溶解し、飽和NaHCO3溶液で2x、飽和NaCl溶液で1x洗浄し、かつNa2SO4上で乾燥させた。
収量：145 mgの無定形固体。
HPLC：41.59% B
27g) HOOC-Me-SO2-d-hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
145 mgの11f (未精製産物)を1 mlのTFA (90%)中に溶解し、かつ室温で1時間振盪した。溶媒を真空中で除去し、かつ残渣を3 mlの1M LiOHおよび3 mlのMeOHで溶解し、かつ室温で1時間振盪した。溶液を10% TFAで中和し、かつ溶媒を真空中で除去した。調製用RP-HPLCによって残渣を分離し、かつ産物を凍結乾燥した。
収量：53 mg (白色固体)
HPLC：24.48% B、MS：計算値：567.16；測定値：568.2 [M+H]+
阻害剤28
iPr-OOC-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程cにH-Gly-OtBuを用いて、イソプロピルエステルの最終加水分解を伴わず、阻害剤27と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：29.7% B、MS：計算値：569.17；測定値：570.2 [M+H]+
阻害剤29
HOOC-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(LiOHでの加水分解によって、阻害剤28から調製)
Figure 0005220608
HPLC：21.4% B、MS：計算値：527.12；測定値：528.3 [M+H]+
阻害剤30
iPr-OOC-CH2-SO2-d/l-hAla(2-Pyr)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤28と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：26.7% B、MS：計算値：553.18；測定値：554.3 [M+H]+
阻害剤31
オキサリル-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)-ベンジルアミドx TFA
(工程aにメトキサリル-d/l-hAla(2-Pyr)-OHおよびH-Pro-OtBuを用い、かつ最終工程においてLiOHで加水分解して、阻害剤2と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：23.9% B、MS：計算値：517.17；測定値：518.2 [M+H]+
阻害剤32
マロニル-d/l-hAla(2-Pyr-NO)-Gly(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx TFA
(工程aにエトキシマロニル-d/l-hAla(2-Pyr)-OHおよびH-Gly-OtBuを用い、かつ最終工程においてLiOHで加水分解して、阻害剤2と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：20.4% B、MS：計算値：491.16；測定値：492.1 [M+H]+
阻害剤33
H-d-N(CH2-COOEt)hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(工程bにH-Pro-OtBuを用いて、阻害剤9と同様に調製、調製用HPLCによって、最終工程においてジアステレオマーを分離した)
Figure 0005220608
HPLC：23.23% B、MS：計算値：531.22；測定値：532.3 [M+H]+
阻害剤34
H-d-N(CH2-COOEt)hAla(2-Pyr)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 3 TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤33と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：21.7% B、MS：計算値：515.23；測定値：516.2 [M+H]+
阻害剤35
H-d-N(CH2-COOH)hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(最終工程におけるLiOHでの加水分解によって、阻害剤33から調製)
Figure 0005220608
HPLC：20.36% B、MS：計算値：503.19；測定値：504.3 [M+H]+
阻害剤36
H-d-N(CH2-COOH)hAla(2-Pyr)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 3 TFA
(ピリジル窒素の酸化を伴わず、阻害剤35と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：18.0% B、MS：計算値：487.19；測定値：488.2 [M+H]+
阻害剤37
H-d-N(CH2-COO-ヘキシル)hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(工程gにヘキシルブロモアセテートを用いて、阻害剤9と同様に合成)
Figure 0005220608
HPLC：35.55% B、MS：計算値：587.29；測定値：588.4 [M+H]+
阻害剤38
H-d-N(CH2-COO-シクロヘキシル)hAla(2-Pyr-NO)-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(工程gにシクロヘキシルブロモアセテートを用いて、阻害剤9と同様に合成)
Figure 0005220608
HPLC：31.47% B、MS：計算値：585.27；測定値：586.3 [M+H]+
阻害剤39
H-d-N(CH2-COOH)hTyr-Pro(2-アミノメチル-5-クロロ)ベンジルアミドx 2 TFA
(工程bにTfa-d-hTyr(tBu)-OHおよびH-Pro-OtBuを用いて、阻害剤9と同様に調製)
Figure 0005220608
HPLC：25.2% B、MS：計算値：502.2；測定値：503.2 [M+H]+
実施例2：阻害効果を決定するための酵素動力学研究
特異的合成発色基質を用いて、因子Xa、トロンビンおよびプラスミンに対する阻害剤の阻害効果を概算した。マイクロプレート読取装置(iEMS reader MF 1401, LABSYSTEMS, Helsinki, Finnland)を用いて、405 nmで吸光度を測定し、かつコンピュータプログラムの補助で、Dixonの線形回帰によってKi値を計算した。> 2 nMのKi値の決定は、マイクロタイタープレート上、Tris緩衝液(0.05 M Tris；0.9% NaCl；5%エタノール；pH 8.0)中、25℃で行った。阻害剤をTris緩衝液中に溶解し、基質(すべてPentapharm Ltd., Basel, CH)を水中に溶解した。25μlの基質溶液および50μlの酵素溶液を200μlの阻害剤溶液に添加し、かつ25μlの50%酢酸を添加することによって、3〜5分後に反応を停止した(Sturzebecher, J. et al., J. Med. Chem 40, 3091 (1997))。FXaに関して< 2.0 nMのKi値では、Specord M 400 UV-Vis分光光度計(Carl Zeiss, Jena)中、アクリル性キュベット中で、減少した酵素濃度(混合物中100 pM)で測定を反復した。各場合で、3つの異なる基質濃度および5つの異なる阻害剤濃度を測定した。計算Ki値は、少なくとも2つの個々の測定値からの平均に対応し、これらの個々の値は、25%より大きくは異ならない。
測定には、以下の酵素および基質を用いた：
ヒト因子Xa(Enzyme Research Lab.、Haemochrom Diagnostica GmbH, Essenより購入)
酵素含量：0.67μg/ml
基質：CH3OCO-D-Cha-Gly-Arg-pNA (Pefachrome Xa)、濃度：4、2および1 mM；反応時間：4分間。
トロンビン(ウシ)
酵素含量：2.5 IE/ml (1% HSAを含む0.9% NaCl中)
基質：CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-pNA (Pefachrome tPA)、濃度：2、1および0.5 mM反応時間：3分間
ヒト・プラスミン(CHROMOGENIX, Milano, Italy)
酵素含量：500μg/ml酵素(25%グリセロールを含む0.9% NaCl中)
基質：Tos-Gly-Pro-Lys-pNA (Chromozym PL)、濃度：2、1および0.67 mM；反応時間：3分間
(表１)多様な阻害剤による、FXa、トロンビンおよびプラスミンの阻害
Figure 0005220608
n.d. = 未測定
実施例3：プロトロンビナーゼ複合体(PTC)およびヒト血漿中の凝固(TT、aPTT、PT)に対する阻害剤の阻害効果の測定
特異的発色基質を用いて、プロトロンビナーゼ複合体の阻害に関するIC50値を概算した。405 nmおよび37℃でマイクロプレート読取装置(上記を参照されたい)を用いて、吸光度を測定した。250μlのセファリン(PTT試薬、Roche Diagnostics, Mannheimのセファリン凍結乾燥物；5 mlのTris緩衝液A (0.05M Tris；0.9% NaCl；pH 7.5)中に溶解)、50μlの0.5M CaCl2、25μlの因子Xa (ヒト、Haemochrom Diagnostica GmbH, Essen；0.16μg/ml)、80μlの因子Va (ヒト、American Diagnostica, Greenwich, USA；52μg/ml)および1845μlのTris緩衝液B (0.05 M Tris；0.9% NaCl；0.1% PEG 6000；pH 7.5)を、氷上で注意深く混合することによって、プロトロンビナーゼ複合体を調製し、かつ0℃で30分間インキュベーションして置換した。5%エタノールを含むTris緩衝液Bに、阻害剤を溶解した。25μlの阻害剤溶液を、45μlのプロトロンビナーゼ複合体と、RTで5分間インキュベーションした。その後、30μlのプロトロンビン(ヒト、Haemochrom Diagnostica GmbH, Essen；29μg/ml)を添加し、かつ37℃で10分間インキュベーションした後、緩衝液B中の150μlの0.083 mM EDTAを添加することによって、反応を停止した。
25μlのインキュベーション混合物に、50μlの基質(H-D-Phe-Pip-Arg-pNA x HCl, S-2238, Haemochrom Diagnostica GmbH, Essen; 0.6 mM)およびTris緩衝液B中の200μlのEDTAを添加することによって、形成されたトロンビンの活性を発色によって決定した。
IC50、すなわちトロンビン形成の50%の阻害を引き起こす阻害剤の濃度をグラフで決定した。直接トロンビン阻害を通じたプロトロンビナーゼ複合体の阻害のシミュレーションを防ぐため、生成されたトロンビンの直接阻害もまた測定した(EDTAで停止した後、最高阻害剤濃度で、25μlのTris緩衝液Bを添加することによる)。形成されたトロンビンの直接阻害が>7%である場合、IC50は示さなかった。各場合で、5つの異なる阻害剤濃度を測定した。計算IC50値は、少なくとも3つの個々の測定値からの平均に対応し、これらの個々の値は、25%より大きくは異ならない。
3000 rpmで10分間遠心分離したヒト・クエン酸血漿を用いて、凝固時間を測定した。Thrombotrack凝固測定装置(Immuno GmbH, Heidelberg)を用いて、37℃で測定を行った。
阻害剤濃度に対する凝固時間の依存性から、IC200を計算した。これは、凝固時間の倍増をもたらす阻害剤濃度を提供する。計算IC200値は、少なくとも3つの個々の測定値からの平均に対応し、これらの個々の値は、25%より大きくは異ならない。
トロンビン時間(TT)
100μlのヒト・クエン酸血漿を、NaCl (0.9%；5%エタノール)中の50μlの阻害剤溶液と混合し、かつ37℃で2分間インキュベーションした。50μlのトロンビン(1% HSAを含む0.9% NaCl中、2.5 IU/ml)を添加することによって、凝固を開始した。
プロトロンビン時間(PT)
CaCl2 (0.025 M；5%エタノール)中の50μlの阻害剤溶液を、50μlのトロンボプラスチン(Dade Diagnostika GmbH, UnterschleiBheim)と37℃で2分間インキュベーションした。50μlのヒト・クエン酸血漿を添加することによって、凝固を開始した。
活性化部分トロンボプラスチン時間(aPTT)
50μlのヒト・クエン酸血漿を、50μlのPTT試薬(Roche Diagnostics, Mannheim)と37℃で3分間インキュベーションした。阻害剤を含有する50μlのCaCl2溶液(0.025 M；5%エタノール)を添加することによって、凝固を開始した。
(表２)プロトロンビナーゼ複合体(PTC)の阻害およびヒト血漿における抗凝固活性
Figure 0005220608
n.d. = 未測定

Claims (18)

  1. 式(I)の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩：
    Figure 0005220608
    式中
    X = NR3またはO、
    R3 = H、1〜6のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル、
    n = 0、1、2、3または4、
    R1 = H、-CH2-COOR4、-SO2-R5、-COOR5またはCO-R6；
    R4 = H、または1〜6のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、
    R5 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜7のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアリールもしくはヘテロアリールラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、またはシクロヘキシルメチルラジカル、
    R7 = ClまたはFまたはCN、同様にNHR3、NHCO-R3、-CH2-NHR3、NO2、OR3、SR3、-COOR4または-CH2-COOR4、かつR3およびR4は上に定義される通りであり、
    R6 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、またはシクロアルキルまたはシクロヘキシルメチルであるが、同様にR4が上に定義されるような-COOR4であり；かつR6はまた、上に定義されるようなR7によって置換されていてもよく、かつ
    R2 = 下記からなる群から選ばれるいずれかの構造：
    Figure 0005220608
    P2 = R3が上に定義される通りである、以下の構造
    Figure 0005220608
    の、任意の天然または非天然α-アミノ酸残基、
    Y = CHまたはN、
    R8 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアリールもしくはヘテロアリールラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、またはシクロヘキシルメチルラジカル、かつここでR7は上に定義される通りであり、あるいは
    P2 = 以下の構造
    Figure 0005220608
    の任意のα-アザイミノ酸残基
    q = 0、1または2、かつ環の炭素原子は、上に定義される通りであるラジカルR7によって置換されていてもよい。
  2. R1が-CH2-COOH、-CH2-COOCH2CH3またはベンジルスルホニル-、メチルスルホニル-、エチルスルホニル、n-プロピルスルホニルまたはn-ブチルスルホニル-である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  3. XおよびR2を含むアミノ酸残基が、以下の構造：
    Figure 0005220608
    を有する点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  4. XおよびR2を含むアミノ酸またはイミノ酸残基がD立体配置にある点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  5. P2がアザグリシン、アザプロリン、セリン、グルタミン酸、グルタミン酸エチル、グルタミン酸メチルまたはα,β-ジアミノ-プロピオン酸残基である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  6. R7がOH、NH2、-COOH、-COOCH2CH3、-CH2-COOH、または-CH2-COOCH2CH3基である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  7. R 1 = -CH 2 -COOC 2 H 5 、およびn = 2である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  8. R1が-CH2COOC6H11であり、かつ/またはP2がアラニン残基である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  9. X = NR3またはO、
    R3 = H、
    n = 2、
    R1 = H、-CH2-COOR4、-SO2-R5、-COOR5またはCO-R6；
    R4 = H、または1〜6のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、
    R5 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜7のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、
    R7 = NHR3、OR3または-COOR4、かつR3およびR4は上に記載される通りであり
    R6 = -COOR4、ここでR4は上に記載される通りであり、かつ

    R2 = 下記からなる群から選ばれるいずれかの構造：
    Figure 0005220608
    P2 = R3が上に定義される通りである、以下の構造
    Figure 0005220608
    の、任意の天然または非天然α-アミノ酸残基
    Y = CHまたはN、
    R8 = 置換されていないかまたはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル
    である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  10. X = NR3、
    R3 = H、
    n = 2、
    R1 = -CH2-COOR4、-SO2-R5、
    R4 = Hまたはエチル、
    R5 = 1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、
    R7 = OR3または-COOR4、かつR3およびR4は上に定義される通りであり
    R2 = 下記からなる群から選ばれるいずれかの構造：
    Figure 0005220608
    P2 = R3が上に定義される通りである、以下の構造
    Figure 0005220608
    の、任意の天然または非天然α-アミノ酸残基
    Y = CHまたはN、
    R8 = 置換されていないかまたはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル
    である点で特徴付けられる、請求項1記載の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩。
  11. 以下の一般式(I)の化合物またはその薬学的に適切な塩を含む、凝固因子Xaを阻害するための薬剤：
    Figure 0005220608
    式中、
    X = NR3またはO、R3 はH、または1〜6のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル；
    n = 0、1、2、3または4、
    R1 = H、-CH2-COOR4、-SO2-R5、-COOR5またはCO-R6；
    R4 = H、または1〜6のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、
    R5 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアリールもしくはヘテロアリールラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている、アラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、またはシクロヘキシルメチルラジカル、
    R7 = ClまたはFまたはCN、NHR3、NHCO-R3、-CH2-NHR3、NO2、OR3、SR3、-COOR4または-CH2-COOR4、かつR3およびR4は上に定義される通りであり、
    R6 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、またはシクロアルキルまたはシクロヘキシルメチルであるが、同様にR4が上に定義されるような-COOR4であり；かつR6はまた、上に定義されるようなR7によって置換されていてもよく、かつ
    R2 = 下記からなる群から選ばれるいずれかの構造：
    Figure 0005220608
    P2 = R 3 が上に定義される通りであり、R 8 が請求項１に記載の定義である、以下の構造
    Figure 0005220608
    の任意の天然もしくは非天然α-アミノ酸残基またはα-アザアミノ酸残基、ならびに
    Y = CHまたはN、あるいは
    P2 =以下の構造
    Figure 0005220608
    またはR 7 およびYが上に定義される通りである、
    Figure 0005220608
    の任意のα-イミノ酸またはα-アザイミノ酸残基、ならびに
    q = 0、1または2、かつ環の1つの炭素原子は、上に定義される通りであるラジカルR7によって置換されていてもよい。
  12. R1 = -CH 2 -COOC 2 H 5 、およびn = 2である点で特徴付けられる、請求項11記載の薬剤。
  13. R1が-CH2COOC6H11であり、かつ/またはP2がアラニン残基である点で特徴付けられる、請求項11記載の薬剤。
  14. X = NR3またはO、
    R3 = H、
    n = 2、
    R1 = H、-CH2-COOR4、-SO2-R5、-COOR5またはCO-R6；
    R4 = H、または1〜6のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、
    R5 = 置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されている1〜7のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、
    R7 = NHR3、OR3、または-COOR4、かつR3およびR4は上に定義される通りであり
    R6 = -COOR4、ここでR4は上に定義される通りであり、かつ
    R2 = 下記からなる群から選ばれるいずれかの構造：
    Figure 0005220608
    P2 = R3が上に定義される通りであるか、または1〜6のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカルである、以下の構造
    Figure 0005220608
    の任意の天然もしくは非天然α-アミノ酸残基
    またはプロリン残基
    Y = CHまたはN、
    R8 = 置換されていないかまたはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル
    である点で特徴付けられる、請求項11記載の薬剤。
  15. X = NR3、
    R3 = H、
    n = 2、
    R1 = -CH2-COOR4、-SO2-R5、
    R4 = Hまたはエチル、
    R5 = 1〜4のC原子を有する分枝鎖もしくは非分枝鎖アルキルラジカル、または置換されていないかもしくはラジカルR7によって置換されているアラルキルもしくはヘテロアラルキルラジカル、
    R7 = OR3または-COOR4、かつR3およびR4は上に定義される通りであり

    R2 = 下記からなる群から選ばれるいずれかの構造：
    Figure 0005220608
    P2 = R3が上に定義される通りである、以下の構造
    Figure 0005220608
    の、任意の天然または非天然α-アミノ酸残基
    Y = CHまたはN、
    R8 = 置換されていないかまたはラジカルR7によって置換されている1〜4のC原子を有する分枝鎖または非分枝鎖アルキルラジカル
    である点で特徴付けられる、請求項11記載の薬剤。
  16. 請求項1記載の一般式(I)の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩、および少なくとも1つの適切な担体または賦形剤を含む、薬学的組成物。
  17. 請求項1記載の一般式(I)の化合物またはこの化合物の薬学的に適切な塩、および少なくとも1つの担体または賦形剤が混合されている、薬学的組成物を産生するための方法。
  18. 下記式(II)
    Figure 0005220608
    または下記式（III）
    Figure 0005220608
    の化合物、またはこれらの薬学的に適切な塩。
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