JP5182415B2 - チャンネルへ適用するための水溶液及び適用方法 - Google Patents
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Description
式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;Z1は、炭素数1〜4のヒドロキシアルキル基、又はポリエーテル基を表し;Z2は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又はポリエーテル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;yは、1以上の整数を表し、xは、0以上の整数を表す。
式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;Zはポリエーテル基を表し;yは1以上の整数を表し;xは0以上の整数を表す。
式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R2は、アルキル基、アセチル基、水素原子又はOH基を表し;R3は、アルキレン基を表し;R5は、水素原子、又はOH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;yは、1以上の整数を表し;x、m、n、p及びqはそれぞれ独立して、0以上の整数を表す。
式中、R1は、それぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R2は、炭素数1〜4のアルキル基、アセチル基、水素原子、又はOH基を表し;R5は、水素原子、又はOH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;y、m'及びp'はそれぞれ独立して、1以上の整数を表し、x、n'及びq'はそれぞれ独立して、0以上の整数を表す。
式中、Q1はそれぞれ独立して、水素原子又は炭素数1〜4のアルキル基を表し;Q2はそれぞれ独立して、水素原子又は炭素数1〜4のアルキル基を表し;Q3はそれぞれ独立して、水素原子又は炭素数1〜4のアルキル基を表し;Q4はそれぞれ独立して、水素原子又は−OH基を表し;a、b及びcはそれぞれ独立して、1以上の整数を表す。
有機シリコーン界面活性剤を含む溶液は、有機シリコーン界面活性剤の性能を向上させるためにブロッキング剤を更に含有していてもよい。
式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;Z1は、炭素数1〜4のヒドロキシアルキル基、又はポリエーテル基を表し;Z2は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又はポリエーテル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;yは、1以上の整数を表し、xは、0以上の整数を表す。
式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;Zはポリエーテル基を表し;yは1以上の整数を表し;xは0以上の整数を表す。
式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R2は、アルキル基、アセチル基、水素原子又はOH基を表し;R3は、アルキレン基を表し;R5は、水素原子、又はOH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;yは、1以上の整数を表し;x、m、n、p及びqはそれぞれ独立して、0以上の整数を表す。
式中のR3は、トリメチレン基であってよい。
指数yは、1以上の整数である。具体的には、yは、下限が1以上であり、上限が40以下、30以下、20以下、又は4以下であってよい。yは1であってよい。
指数x+yは、下限が1以上であり、上限が170以下、70以下、30以下、又は8以下であってよい。
指数n及びqは、それぞれ独立して、ゼロ(0)以上である。具体的には、nは、下限が0(ゼロ)以上であり、上限が50以下、25以下、10以下、又は4以下であってよい。指数nは、0(ゼロ)であってよい。指数m+nは、下限が1以上、2以上、3以上、又は4以上であり、上限が100以下、55以下、30以下、又は16以下である。q及びp+qは、同様に定義することができる。
少なくとも、m、n、p及びqは1以上である。
又は
式中、R1は、それぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R2は、炭素数1〜4のアルキル基、アセチル基、水素原子、又はOH基を表し;R5は、水素原子、又はOH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;y、m'及びp'はそれぞれ独立して、1以上の整数を表し、x、n'及びq'はそれぞれ独立して、0以上の整数を表す。
R1は、メチル基であってよい。
R2及びR5は、メチル基、水素原子又はアセチル基であってよく、又はOH基であってよい。
指数yは、1以上の整数である。具体的には、yは、下限が1以上であり、上限が40以下、30以下、20以下、又は4以下である。yは1であってよい。
指数x+yは、下限が1以上であり、上限が170以下、70以下、30以下、又は8以下である。
指数n'及びq'は、それぞれ独立して、ゼロ(0)以上の整数である。具体的には、n'は、下限が0(ゼロ)以上であり、上限が50以下、25以下、10以下、又は4以下であってよい。指数n'は、0(ゼロ)であってよい。指数m'+n'は、下限が1以上、2以上、3以上、又は4以上であり、上限が100以下、55以下、30以下、又は16以下である。q'及びp'+q'は、同様に定義することができる。
式中、R2、x、y、m'及びn'は上記に同じ。
式中、R4、R5、x、y、p'及びq'は上記に同じ。
式中、R2、y、m'及びn'は上記と同じであり、m'+n'=4〜12である。
水溶液は、少なくとも緩衝液及び有機シリコーン界面活性剤を含み、また、ブロッキング剤を含有していてもよい。更に、水溶液は、リーディング・イオン、トレーリング・イオン、分析物、試料、アナログ、標識物質、抗体、抗原、核酸鎖、タンパク質、荷電ポリマー、ミセルを形成する荷電物質、分離媒体(高分子−篩マトリックス)から成る群より選ばれる少なくとも1つの成分を含んでいてもよい。
また、アナログは、直接的に又はアナログに結合する物質を介して、標識物質で標識されていてもよい。
エチジウムブロマイド、エチジウムホモダイマー−1(EthD-1)などのインターカレーター色素、POPO-1、BOBO-1、YOYO-1、TOTO-1などのシアニンダイマー系色素、及び他の蛍光核酸染色色素が、特定の核酸配列を検出するための核酸プローブ用標識として用いることができる。発光やスピン標識も、また、標識物質として使用することができる。
また、標識物質は、分析物又はアナログに結合する物質に結合させてもよい。
具体的には、分析物又はアナログに結合する物質は、分析物又はアナログに対する抗体、又は分析物又はアナログに結合する抗原、又は分析物又はアナログに結合するタンパク質であってもよい。
式中、Q1はそれぞれ独立して、水素原子又は炭素数1〜4のアルキル基を表し;Q2はそれぞれ独立して、水素原子又は炭素数1〜4のアルキル基を表し;Q3はそれぞれ独立して、水素原子又は炭素数1〜4のアルキル基を表し;Q4はそれぞれ独立して、水素原子又は−OH基を表し;a、b及びcはそれぞれ独立して、1以上の整数を表す。
式[2]において、bは1以上の整数である。具体的には、bは、下限が1以上、2以上、50以上であり、上限が100以下、又は70以下である。
式[2]において、cは1以上の整数である。具体的には、cは、下限が1以上、12以上であってよく、上限が130以下、101以下、又は50以下であってよい。
指数a+b+cは、下限が3以上、20以上、又は40以上であってよく、上限が500以下、350以下、又は250以下であってよい。
式中、Q2、a、b及びcは上記に同じ。
(1)フィールド・アンプリフィケーション・サンプル・スタッキング法;Field Amplification Sample Stacking Method(FASS) [US-A-2003-0057092 A1; Weiss, D. J., Saunders, K., Lunte, C.E. Electrophoresis 2001, 22, 59-65; Britz-McKibbin, P., Bebault, G.M., Chen, D.D.Y. Anal Chem. 2000, 72, 1729-1735; and Ross, D., Locascio, L.E. Anal Chem. 2002, 71, 5137-5145];
(2)フィールド・アンプリフィケーション・サンプル・インジェクション法;Field Amplification Sample Injection Method(FASI)[Chien, R.L et al. J. Chromatogr. 1991, 559, 141-148, and the like];
(3)等速電気泳動法;Isotachophoresis(ITP)[Everaerts, F.M., Geurts, M. Mikkers, F.E.P., Verheggen, T.P.E.M J Chromatogr. 1976, 119, 129-155;Mikkers, F.E.P., Everaerts, F.M., Peek, J.A.F. J. Chromatogr. 1979, 168, 293-315;Mikkers, F.E.P., Everaerts, F.M., Peek, J.A.F. J. Chromatogr. 1979, 168, 317-332; Hirokawa, T, Okamoto, H. Ikuta, N., and Gas, B., Analytical Sciences 2001, Vol. 17 Supplement il85, and the like];
(4)等電点電気泳動法;Isoelectric Focusing method(IF)[Wehr T, et al., Am. Biotechnol. Lab. 1990, 8, 22;Kilar F. et al., and Electrophoresis 1989, 10, 23-29];
(5)ラージ−ボリューム・サンプル・スタッキング法;Large-volume sample stacking method(LVSS)[Siri, N. et al., J. Chormatogr. B, (2003), 793, 151-157];
(6)pHジャンクション法;pH junction method(pH-メディエイテッド・スタッキング法;pH-mediated stacking)[P. Britz-McKibbin et al., 2000, Anal. Chem., 72, 1242, P. Britz-McKibbin et al., 2002, Anal. Chem., 74, 3736];
(7)スィーピング法;Sweeping method(スタッキングミセル動電クロマトグラフィー;stacking micellar electrokinetic chromatography)[J. P. Quirino et al., 1998, Science, 282, 465, J. P. Quirino et al., 1999, Anal. Chem., 71, 1638, Y. Sera et al., 2001, Electrophoresis, 22, 3509];
・それぞれの物質を荷電強度に依存して異なる速度で移動させることにより目的物質を分離する、所謂キャピラリー・ゾーン電気泳動法(CZE)、なお、この方法では、キャピラリーは、基本的に電気泳動用の緩衝溶液でのみ充填される[Reference: H. Hisamoto at al., Chem. Commun., (2001), 2662, and the like];
・イオン性ミセルを形成する荷電物質を用い、当該ミセルとの相互作用により目的物質を分離する、所謂ミセル動電クロマトグラフィー(MEKC)[Reference: S. Terabe, Trends Anal. Chem., (1989), 8, 129, and the like];
・分子ふるい効果を有するポリマーなどの充填剤を使用し、当該ポリマーとの相互作用を誘導する分子の荷電及び分子のサイズにより目的物質を分離する、所謂キャピラリーゲル電気泳動法(CGE)[Reference: S. Hjerten, J.Chromatogr., (1987), 397, 409]。
上記及び本明細書で引用したいずれの参考文献も、参照することにより本明細書に取り込まれている。
最初に、有機シリコーン界面活性剤の原液(1%v/v)を、1容量のトリシロキサン(CAS番号67674-67-3、2-[ヒドロキシ(ポリエチレンオキシ)プロピル]-ヘプタメチルトリシロキサン8 EO)(TS-HY)に対して99容量の水とを混合して調製した。マイクロ流体システムのマイクロチャンネルを満たすために用いる試薬類を調製するために、有機シリコーン界面活性剤の最終濃度に応じて、この1%有機シリコーン界面活性剤を濃縮された試薬に異なる量添加した。1例として、75mMトリス−塩酸、pH7.5の0.1%有機シリコーン界面活性剤溶液を調製するために、1部の1%有機シリコーン界面活性剤、5部の150mMトリス−塩酸、pH7.5、及び4部の水を室温で混合した。
別の実施例では、疎水性チャンネルの湿潤性を高めることに加えて、試薬への有機シリコーン界面活性剤のような有機シリコーン界面活性剤の添加は、オン・チップAFPアイソフォーム免疫測定の再現性も改善した(表2)。この実施例は、実施例1と同じ試薬を使用して、実施例1と同様に実施した。
甲状腺刺激ホルモン(TSH)のオン・チップ免疫測定に関する別の実施態様では、上記のようなリーディングバッファーのpHを変化させ、ピーク形状(ピークの高さ及び幅)に及ぼす影響を調べた。この実施例は、ヒトAFPに対するモノクローナル抗体の代わりにTSHに対して特異的なモノクローナル抗体を使用したこと、及びAFPを含む試料の代わりにTSH(血清中100mIU/L)を含む試料を使用したこと以外は、実施例1と同様の方法で実施した。上記のような試薬及び有機シリコーン界面活性剤を含む試料(100 mIU/LのTSHを含む血清)を、乾燥したプラスチック製マイクロ流体チップのウェルに加え、それを廃棄用ウェルからの陰圧によって乾燥したマイクロチャンネルに充填した。結果は、リーディングバッファーのpHがpH7.5からpH9に上昇するにつれてTSHのピーク形状が鋭くなることを示した。その結果を、図5A及び5Bにまとめる。図5Aに示したように、ピークの高さはpHがpH7.5からpH9.0に上昇するにつれて高まった。一方、図5Bに示したように、ピーク幅はpHがpH7.5からpH9.0に上昇するにつれて減少した。これらの結果は、pHが上昇するにつれてピーク形状が鋭くなることを示している。
別の実施態様において、各種の湿潤剤について、DCP(デス−カルボキシプロトロンビン)アッセイにおけるチップ充填と分析性能の有効性に関して、試験を行った。このアッセイは、正常な補体のカルボキシ末端アミノ酸の側鎖が欠損した、翻訳後修飾されたプロトロンビンタンパク質である、肝細胞癌のタンパク質バイオマーカーに対するものである。DCPのアッセイでは、AFPアッセイと同様の組成の緩衝液と、電気泳動移動度調整剤としてのDNA又は蛍光標識としてのHilyte色素のいずれかで標識された、DCPタンパク質に特異的な抗体とを使用する。有機シリコーン界面活性剤湿潤剤として、0.1%のTS-HY(3-[ヒドロキシ(ポリエチレンオキシ)プロピル]-ヘプタメチルトリシロキサン)、1%のKF-642、1%のKF-640及び0.04%のTS-ME(2-[メトキシ(ポリエチレンオキシ)-プロピル]ヘプタメチルトリシロキサン)について試験を行った。無気泡チャンネル充填活性を最適化するため、及びそれと同時に、湿潤剤の厄介な性質である発泡活性を低減するために、各種有機シリコーン界面活性剤を所定の濃度に調整した。各種有機シリコーン界面活性剤湿潤剤及びプルロニックF-127を表に明記した通りに添加して、下記の表3に記載したアッセイ試薬を調製した。
2.移動時間安定性は、試験したすべての有機シリコーン界面活性剤について同等であった。
3.ピーク面積回収率は、KF-640を用いた場合は他の有機シリコーン界面活性剤と比較してピークがブロードになったため、KF-640がDCPアッセイで試験した他のものほど有用ではなかったことを除けば、試験したすべての有機シリコーン界面活性剤について同等であった。
4.発泡活性は、最高から最低の順に、TS-HY>TS-ME=KF-642(KF-640 ND)であった。
Claims (26)
- 疎水性表面を有する、電気泳動分離用のマイクロ流体チャンネルへ水溶液を適用する方法であって:
緩衝液及び有機シリコーン界面活性剤を含む水溶液を用意し;
疎水性表面を有する、電気泳動分離用のマイクロ流体チャンネルへ当該水溶液を適用する;
ことを含む当該方法。 - 有機シリコーン界面活性剤が、シロキサン基及びシロキサン基に結合するポリエーテル基を含むものである、請求項1に記載の方法。
- 有機シリコーン界面活性剤が、下式[1]又は[1-2]で示されるものを含むものである、請求項1に記載の水溶液:
〔式中、R1は、それぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R2は、炭素数1〜4のアルキル基、アセチル基、水素原子、又はOH基を表し;R5は、水素原子、又はOH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;y、m'及びp'はそれぞれ独立して、1以上の整数を表し、x、n'及びq'はそれぞれ独立して、0以上の整数を表す。〕。 - 水溶液が、更にブロッキング剤を含むものであって、ブロッキング剤が、ポリ(アルキレンオキサイド)オリゴマー又は/及びポリ−ジメチルアクリルアミド(p-DMA)である、請求項1に記載の方法。
- Q1がそれぞれ水素原子であり、Q3がそれぞれ水素原子である、請求項7に記載の方法。
- 水溶液が、更にブロッキング剤を含むものであり、ブロッキング剤が、有機シリコーン界面活性剤よりも長い鎖長を有するポリ(アルキレンオキオキサイド)オリゴマーである、請求項1に記載の方法。
- p-DMAが、50,000以上の数平均分子量及び100,000以上の重量平均分子量を有するものである、請求項6に記載の方法。
- トレーリング・イオン、リーディング・イオン、分析物、試料、アナログ、標識物質、抗体、抗原、核酸鎖、タンパク質、荷電ポリマー、ミセルを形成する荷電物質及び充填剤から成る群より選ばれる少なくとも1つの成分を水溶液中に含有させること、を更に含む、請求項1に記載の方法。
- 疎水性表面を有するチャンネルが、マイクロ流体チャンネル内で又はそれに沿って細胞を分類又は計量するための疎水性マイクロ流体チャンネルである、請求項1記載の方法。
- 疎水性表面を有する、電泳動分離用のマイクロ流体チャンネルに適用するための水溶液であって、
緩衝液及び
有機シリコーン界面活性剤
を含み、
有機シリコーン界面活性剤が下式で示されるものを含むものである、ことを特徴とする当該水溶液:
〔式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;Z1は、炭素数1〜4のヒドロキシアルキル基又はポリエーテル基を表し;Z2は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又はポリエーテル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;yは、1以上の整数を表し、xは、0以上の整数を表す。〕。 - 有機シリコーン界面活性剤が、下式[1]又は[1-2]で示されるものを含むものである、請求項14に記載の水溶液:
〔式中、R1はそれぞれ独立して、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R2は、炭素数1〜4のアルキル基、アセチル基、水素原子、又はOH基を表し;R5は、水素原子、又はOH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基を表し;R4は、OH基を有する若しくは有さない炭素数1〜4のアルキル基、又は
(式中、R6は、OH基を有する又は有さない炭素数1〜4のアルキル基を表す。)を表し;y、m'及びp'はそれぞれ独立して、1以上の整数を表し;x、n'及びq'はそれぞれ独立して、0以上の整数を表す。〕。 - 緩衝液が、約pH6〜約pH8、約pH6〜約pH9、又は約pH6〜約pH10を有するものである、請求項14に記載の水溶液。
- R1が、−CH3基である、請求項14に記載の水溶液。
- 更にブロッキング剤を含む、請求項14に記載の水溶液。
- ブロッキング剤が、ポリ(アルキレンオキサイド)オリゴマー又は/及びポリ−ジメチルアクリルアミド(p-DMA)である、請求項19に記載の水溶液。
- Q1がそれぞれ水素原子であり、Q3がそれぞれ水素原子である、請求項21に記載の水溶液。
- ブロッキング剤が、ポリ(アルキレンオキサイド)オリゴマーであり、有機シリコーン界面活性剤よりも長い鎖長を有するポリ(アルキレンオキシド)オリゴマーである、請求項19に記載の水溶液。
- p-DMAが、50,000以上の数平均分子量及び100,000以上の重量平均分子量を有するものである、請求項20に記載の水溶液。
- トレーリング・イオン、リーディング・イオン、分析物、試料、アナログ、標識物質、抗体、抗原、核酸鎖、タンパク質、荷電ポリマー、ミセルを形成する荷電物質及び充填剤から成る群より選ばれる少なくとも1つの成分を更に含む、請求項14に記載の水溶液。
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