JP5175984B2 - キノロン類耐性菌用抗菌剤及びその用途 - Google Patents

キノロン類耐性菌用抗菌剤及びその用途 Download PDF

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Description

本発明は、薬剤耐性菌用抗菌剤、そのスクリーニング方法、及び感染症治療薬、併用感染症薬などの該薬剤耐性菌用抗菌剤の用途に関する。
１９４０年の最初の抗生物質ペニシリンＧの実用化以来、多くの抗菌剤が開発され、抗菌化学療法は、現代医療の進歩と平均寿命の延長に大きな貢献をしてきた。しかし、病原性細菌は、次々に抗菌剤に耐性を獲得し、２１世紀になって抗菌化学療法の効力は、著しく後退している（非特許文献１参照）。特に病院感染の最も主要な病原性細菌である黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ：Ｓ．ａｕｒｅｕｓ）からは、英国で１９６０年に全てのβ−ラクタム抗菌剤に耐性を獲得したメチシリン耐性黄色ブドウ球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ：ＭＲＳＡ）が登場し（非特許文献２参照）、その後、現在に至るまでその数を増やしつづけ、現在では全世界に蔓延し、ＭＲＳＡの存在しない病院はないといっても過言ではない。
抗菌剤には多くの種類があり、一つの系統の抗菌剤が無効の場合であっても、作用機序の異なる抗菌剤を用いてその感染症を治療することが可能である。ところが病原性細菌は、それらの個々の抗菌剤に対する耐性を獲得し続け、２０世紀末までには、現実に使用できるほとんど全ての抗菌剤に耐性を獲得した多剤耐性菌（ｍｕｌｔｉｐｌｙ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｂａｃｔｅｒｉａ）が登場した。その代表的な菌としては、グラム陽性菌では、前記ＭＲＳＡ、グラム陰性菌では、アシネトバクター（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ）、抗酸菌では、結核菌などが挙げられる。
多剤耐性ＭＲＳＡには、唯一有効性を長く保ってきた抗菌剤として、バンコマイシン（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ）があったが、本発明者らは、１９９６年に、バンコマイシン治療が無効なバンコマイシン中間耐性黄色ブドウ球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ；ＶＩＳＡ）を発見した（非特許文献３参照）。その後、現在に至るまでに世界各国からＶＩＳＡが発見されている。更に２００３年には、米国でバンコマイシンに高度耐性のＭＲＳＡであるバンコマイシン耐性黄色ブドウ球菌（ｖａｎｃｏｍｙｃｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ：ＶＲＳＡ）が発見され、現在では、米国、イラン、及びインドの３カ国から合計９株が報告されている（非特許文献４参照）。
前記ＶＩＳＡの代表株であるＭｕ５０（非特許文献３参照）は、β−ラクタム、テトラサイクリン、ミノサイクリン、アミノ配糖体、マクロライド、リファンピシン、キノロン、グリコペプチドなどに耐性を示す。また、世界各国で分離したＶＩＳＡ株も、そのほとんどが，同様の多剤耐性を示すことが報告されている。このように黄色ブドウ球菌は、多剤耐性化し、有効な抗菌剤が存在しないのが現状である。
通常、抗菌剤のスクリーニングでは、薬剤感受性菌に有効であり、更に薬剤耐性菌にも有効な抗菌剤を探索及び選別してきた。しかしながら、薬剤感受性菌及び薬剤耐性菌のいずれにも有効な抗菌剤は、例え従来の抗菌剤とは細菌に対する作用機序が異なっていたとしても、上記のように過去半世紀の経緯をみれば、早晩耐性菌が生じるのは明白であり、問題である。
したがって、薬剤耐性を獲得していない細菌には抗菌活性が低く、そのため薬剤耐性を獲得していない細菌を薬剤耐性化させることなく、少なくとも１種の薬剤に耐性を示す薬剤耐性菌に対して優れた抗菌活性を有し、副作用がなく、簡単に製造可能な薬剤耐性用抗菌剤、そのスクリーニング方法、及び前記薬剤耐性用抗菌剤を含有する感染症治療薬の提供が強く望まれているのが現状である。
Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｗｈｉｔｅ， Ｄ．Ｇ． Ａｌｅｋｓｈｕｎ， Ｍ．Ｎ．ａｎｄ ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ， Ｐ．Ｆ．２００５， ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， ＤＣ． Ｊｅｖｏｎｓ， Ｍ． Ｐ．， Ｂｒ Ｍｅｄ Ｊ．ｓ， １９６１， （１）． １２４−１２５． Ｈｉｒａｍａｔｓｕ， Ｋ．， Ｈ． Ｈａｎａｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， １９９７， ４０（１）， １３５−６． Ｐ▲ｅ▼ｒｉｃｈｏｎ Ｂ， Ｃｏｕｒｖａｌｉｎ Ｐ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， ２００９， Ｎｏｖ；５３（１１）， ４５８０−７， Ｅｐｕｂ ２００９ Ｊｕｎ ８
本発明は、従来における前記諸問題を解決し、以下の目的を達成することを課題とする。即ち、本発明は、薬剤耐性を獲得していない細菌には抗菌活性が低く、そのため薬剤耐性を獲得していない細菌を薬剤耐性化させることなく、少なくとも１種の薬剤に耐性を示す薬剤耐性菌に対して優れた抗菌活性を有し、副作用がなく、簡単に製造可能な薬剤耐性菌用抗菌剤、前記薬剤耐性菌用抗菌剤を含有する感染症治療薬及び併用感染症治療薬、並びに前記薬剤耐性菌用抗菌剤のスクリーニング方法を提供することを目的とする。
前記課題を解決するため、本発明者らは鋭意検討した結果、以下のような知見を得た。即ち、本発明のナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを含有する薬剤耐性菌用抗菌剤は、少なくとも１種の薬剤へ耐性を示す薬剤耐性菌に有効であること、好ましくは、薬剤感受性菌の増殖は抑制せず、少なくとも１種の薬剤へ耐性を示す薬剤耐性菌の増殖のみを抑制できること、世界各国由来のＭＲＳＡのＶＩＳＡ臨床菌株、ＭＳＳＡのＶＩＳＡ臨床菌株、及びＶＲＳＡ臨床菌株のほとんどがキノロン類に耐性を有しており、これらの薬剤耐性菌に対しても、前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、優れた抗菌活性を示すこと、またナイボマイシン類は、キノロン類耐性腸球菌に対しても優れた抗菌活性を示すこと、更に本発明のスクリーニング方法は、薬剤感受性菌を耐性化することなく薬剤耐性菌に対して優れた抗菌活性を示す薬剤耐性菌用抗菌剤を選別可能であることを知見し、本発明の完成に至った。
本発明は、本発明者らによる前記知見に基づくものであり、前記課題を解決するための手段としては、以下の通りである。即ち、
＜１＞ ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを含有し、少なくとも１種の薬剤へ耐性を示す薬剤耐性菌に有効であることを特徴とする薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜２＞ ナイボマイシン類が下記一般式（１）で表される前記＜１＞に記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
前記一般式（１）において、Ｒ１は、ＯＨ及びＨのいずれかを表し、Ｒ２は、Ｈを表す。
＜３＞ ナイボマイシン類が、ナイボマイシン、デオキシナイボマイシン、及びこれらの誘導体の少なくともいずれかである前記＜１＞から＜２＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜４＞ ナイボマイシン類が、ナイボマイシン及びデオキシナイボマイシンの少なくともいずれかである前記＜１＞から＜３＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜５＞ 薬剤耐性菌に対する最小発育阻止濃度が８ｍｇ／Ｌ未満である前記＜１＞から＜４＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜６＞ 薬剤耐性菌が、キノロン類耐性菌を少なくとも含む前記＜１＞から＜５＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜７＞ キノロン類耐性菌が、ＤＮＡジャイレース及びトポイソメラーゼＩＶの少なくともいずれかの遺伝子に変異を有する前記＜６＞に記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜８＞ 少なくともキノロン類感受性菌には無効である前記＜１＞から＜６＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜９＞ キノロン類感受性菌に対する最小発育阻止濃度が８ｍｇ／Ｌ以上である前記＜８＞に記載の薬剤耐性菌用抗菌剤である。
＜１０＞ 前記＜１＞から＜９＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤を含有することを特徴とする感染症治療薬である。
＜１１＞ ＭＲＳＡ感染症治療薬、ＶＩＳＡ感染症治療薬、及びＶＲＳＡ感染症治療薬の少なくともいずれかである前記＜１０＞に記載の感染症治療薬である。
＜１２＞ 腸球菌感染症治療薬である前記＜１０＞に記載の感染症治療薬である。
＜１３＞ 腸球菌感染症治療薬が、キノロン類耐性腸球菌による感染症の治療薬である前記＜１２＞に記載の感染症治療薬である。
＜１４＞ 前記＜１＞から＜９＞のいずれかに記載の薬剤耐性菌用抗菌剤と、少なくとも１種のキノロン類とを併用することを特徴とする併用感染症薬である。
＜１５＞ キノロン類感受性菌及びキノロン類耐性菌を用い、それぞれに同一濃度の被験試料を添加して培養し、前記キノロン類感受性菌の増殖は抑制せず、かつ、前記キノロン類耐性菌の増殖は抑制する被験試料を選別することを特徴とする薬剤耐性菌用抗菌剤のスクリーニング方法である。
＜１６＞ キノロン類感受性菌がキノロン類感受性黄色ブドウ球菌であり、キノロン類耐性菌がキノロン類耐性黄色ブドウ球菌である前記＜１５＞に記載のスクリーニング方法である。
本発明によれば、従来における前記諸問題を解決し、前記目的を達成することができ、薬剤耐性を獲得していない細菌には抗菌活性が低く、そのため薬剤耐性を獲得していない細菌を薬剤耐性化させることなく、少なくとも１種の薬剤に耐性を示す薬剤耐性菌に対して優れた抗菌活性を有し、副作用がなく、簡単に製造可能な薬剤耐性菌用抗菌剤、前記薬剤耐性菌用抗菌剤を含有する感染症治療薬及び併用感染症治療薬、並びに前記薬剤耐性菌用抗菌剤のスクリーニング方法を提供することができる。
図１は、ナイボマイシンのメタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：吸光度（Ａｂｓ）、横軸：波長（ｎｍ）。 図２は、ナイボマイシンの重トリフルオロ酢酸中で、２５℃にて測定した６００ＭＨｚにおける１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。 図３は、ナイボマイシンの重トリフルオロ酢酸中で、２５℃にて測定した１５０ＭＨｚにおける１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。 図４は、デオキシナイボマイシンのメタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルのチャートである。縦軸：吸光度（Ａｂｓ）、横軸：波長（ｎｍ）。 図５は、デオキシナイボマイシンの重トリフルオロ酢酸中で、２５℃にて測定した６００ＭＨｚにおける１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。 図６は、デオキシナイボマイシンの重トリフルオロ酢酸中で、２５℃にて測定した１５０ＭＨｚにおける１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートである。横軸：ｐｐｍ単位。
（薬剤耐性菌用抗菌剤）
本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤は、ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを含有し、必要に応じて、更にその他の成分を含有する。
前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、本発明のスクリーニング方法によりスクリーニングされたものであることが好ましい。
＜ナイボマイシン類＞
前記ナイボマイシン類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、下記一般式（１）で表される化合物であることが好ましい。
前記一般式（１）において、Ｒ１は、ＯＨ及びＨのいずれかを表し、Ｒ２は、Ｈを表す。
これらの中でも、前記一般式（１）で表される化合物の化合物としては、下記構造式（１）で表されるナイボマイシン、下記構造式（２）で表されるデオキシナイボマイシンが、抗菌活性が高い点で特に好ましい。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
＜＜含有量＞＞
前記薬剤耐性菌用抗菌剤における前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかそのものであってもよい。
＜＜製造方法＞＞
前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの製造方法としては、特に制限はなく、公知の方法から適宜選択することができ、例えば、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する微生物から製造する方法、遺伝子工学的手法により製造する方法、化学合成により製造する方法などが挙げられる（Ｓｔｒｅｌｉｔｚ Ｆ， ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ， １９５５， ４１（９）， ６２０−６２４．； Ｒｉｎｅｈａｒｔ ＫＬ Ｊｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ａｍ Ｃｈｅｍ Ｓｏｃ， １９７０， ９２（２３）， ６９９４−６９９５．； Ｎａｇａｎａｗａ Ｈ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ａｎｔｉｂｉｏｔ， １９７０， ２３（７）， ３６５−３６８．参照）。
前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する微生物から該ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを製造する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する微生物を培養し、該微生物より前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを採取する方法などが挙げられる。
前記微生物（以下、「ナイボマイシン類生産菌」と称することがある）としては、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する能力を有する限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物などが挙げられる。これらの中でも、前記ナイボマイシン類生産菌は、ストレプトマイセス・ハイリナム（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙａｌｉｎｕｍ−ＭＢ８９１−Ａ１株（ＡＴＣＣ２９８１７）が好ましい。
また、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産できるその他の微生物についても、常法によって、自然界より分離することが可能である。
なお、前記ストレプトマイセス・ハイリナム株を含め、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する微生物を、放射線照射やその他の変異処理に供することにより、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する生産能を高めることも可能である。また、遺伝子工学的手法により前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産する生産能を高めてもよい。
前記培養は、前記ナイボマイシン類生産菌を栄養培地（以下、単に「培地」と称することがある）中に接種し、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの生産に良好な温度で培養することによって行われる。
前記栄養培地としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、従来放線菌の培養に利用されている公知のものを使用することができる。
前記栄養培地に添加する栄養源としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、窒素源としては、市販されている、大豆粉、ペプトン、酵母エキス、肉エキス、コーン・スティープ・リカー、硫酸アンモニウムなどが使用でき、炭素源としては、トマトペースト、グリセリン、でん粉、グルコース、ガラクトース、デキストリンなどの炭水化物、脂肪などが使用できる。更に、食塩、炭酸カルシウム等の無機塩を培地に添加して使用することもでき、その他、必要に応じて、微量の金属塩を培地に添加して使用することもできる。
これらの材料は、ナイボマイシン類生産菌が利用し、ナイボマイシン類の生産に役立つものであればよく、公知の培養材料はすべて用いることができる。
前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの生産のための種母培養液としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、寒天培地上で前記ナイボマイシン類生産菌を斜面培養し、該斜面培養から得られた生育物を使用することができる。
前記培養の条件としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、好気的条件が好ましい。
前記培養の温度としては、前記ナイボマイシン類生産菌の発育が実質的に阻害されずに、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを生産し得る範囲であれば、特に制限はなく、使用するナイボマイシン類生産菌などに応じて適宜選択することができるが、２５℃〜３５℃が好ましい。
前記培養の期間としては、特に制限はなく、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの蓄積に合わせて適宜選択することができる。通常、培養３日間〜１０日間で前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの蓄積が最高となる。
前記ナイボマイシン類生産菌から前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを採取する方法としては、特に制限はなく、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの物理化学的性状などに応じて適宜選択することができ、例えば、微生物の生産する代謝物を採取するのに用いられる公知の方法を用いることができる。
前記採取方法の具体例としては、前記培養による培養上清を、水と混ざらない溶媒により抽出する方法、各種吸着剤に対する吸着親和性の差を利用する方法、ゲルろ過法、向流分配を利用したクロマトグラフィー法等を、単独又は組み合わせて用いる方法などが挙げられる。
また、分離した菌体からは、適当な有機溶媒を用いた抽出方法や、菌体破砕による溶出方法などにより、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを菌体から抽出し、上記と同様に単離精製して採取することができる。
前記単離精製した前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの構造は、適宜選択した各種の分析方法により確認することができ、例えば、マススペクトル、紫外線吸収スペクトル、プロトン核磁気共鳴スペクトル、炭素１３核磁気共鳴スペクトル等の分析を行うことにより確認することができる。
＜その他の成分＞
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、水、デンプン等の薬理学的に許容され得る担体などが挙げられる。
前記薬剤耐性菌用抗菌剤中の、前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。
＜対象＞
前記薬剤耐性菌用抗菌剤が抗菌活性を示す対象としては、少なくとも１種の薬剤へ耐性を示す薬剤耐性菌であれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、キノロン類耐性菌が好ましく、多剤耐性菌であることがより好ましい。
＜＜キノロン類耐性菌＞＞
前記キノロン類は、ＤＮＡジャイレース（ＤＮＡ ｇｙｒａｓｅ）及びトポイソメラーゼＩＶの少なくともいずれか（以下、単に「トポイソメラーゼ」と称することがある。）の活性を阻害し、細菌のＤＮＡ合成を阻害する合成抗菌薬であり、医薬品や動物用医薬品として広く用いられている。
前記キノロン類は、第１世代（オールドキノロン類）と、第２世代（ニューキノロン類）とに分けられる。
前記オールドキノロン類は、グラム陰性菌に抗菌活性を示すことから、尿路性器感染症、腸管感染症などに使用される。しかしながら、グラム陽性菌には抗菌活性が低いため、肺炎球菌等による呼吸器感染症などには用いることができない。
前記ニューキノロン類は、塩基性環の６位にフッ素、７位に環状塩基性基を有し、グラム陰性菌だけでなく、グラム陽性菌に対しても抗菌活性が高いため、肺炎球菌や連鎖球菌などにも使用される。このニューキノロン類は、細菌のトポイソメラーゼを阻害することが知られている。
細菌のＤＮＡトポイソメラーゼは、細菌の複製に重要な酵素であり、Ｉ型トポイソメラーゼと、ＩＩ型トポイソメラーゼとに分類される。
前記Ｉ型トポイソメラーゼは、ＤＮＡ２本鎖の一方だけを切断する酵素であり、トポイソメラーゼＩ及びトポイソメラーゼＩＩＩが存在する。
前記ＩＩ型トポイソメラーゼは、ＤＮＡ２本鎖の２本とも切断する酵素であり、前記ＤＮＡジャイレース（トポイソメラーゼＩＩ）及び前記トポイソメラーゼＩＶがこれに分類される。
ＤＮＡジャイレースの遺伝子は、ｇｙｒＡ及びｇｙｒＢによりコードされており、トポイソメラーゼＩＶは、ｇｒｌＡ及びｇｒｌＢによりコードされている。
前記キノロン類耐性菌は、トポイソメラーゼのＡサブユニットに作用するため、Ａサブユニットをコードする遺伝子であるｇｙｒＡ及びｇｒｌＡの少なくともいずれかに変異を有することにより、キノロン類に対する耐性を獲得した細菌である。
＜剤型＞
前記薬剤耐性菌用抗菌剤の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口固形剤、経口液剤、注射剤、吸入散剤などが挙げられる。
−経口固形剤−
前記経口固形剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などが挙げられる。
前記経口固形剤の製造方法としては、特に制限はなく、常法を使用することができ、例えば、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかに、賦形剤、及び必要に応じて、前記その他の成分、各種添加剤を加えることにより製造することができる。ここで、前記賦形剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。また、前記添加剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味／矯臭剤などが挙げられる。
前記結合剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
前記崩壊剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられる。
前記滑沢剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。
前記着色剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられる。
前記矯味／矯臭剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
−経口液剤−
前記経口液剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。
前記経口液剤の製造方法としては、特に制限はなく、常法を使用することができ、例えば、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれか、及び必要に応じて、前記その他の成分に、添加剤を加えることにより製造することができる。ここで、前記添加剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、矯味／矯臭剤、緩衝剤、安定化剤などが挙げられる。
前記矯味／矯臭剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
前記緩衝剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。
前記安定化剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチンなどが挙げられる。
−注射剤−
前記注射剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤などが挙げられる。
前記注射剤の製造方法としては、特に制限はなく、常法を使用することができ、例えば、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれか、及び必要に応じて、前記その他の成分に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加することにより製造することができる。ここで、前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。また、前記安定化剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。前記等張化剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。前記局所麻酔剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。
＜投与＞
前記薬剤耐性菌用抗菌剤の投与方法、投与量、投与時期、及び投与対象としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記投与方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口投与法、注射による方法、吸入による方法などが挙げられる。
前記投与量としては、特に制限はなく、投与対象個体の年齢、体重、体質、症状、他の成分を有効成分とする医薬の投与の有無など、様々な要因を考慮して適宜選択することができる。
前記投与対象となる動物種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、サル、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、トリなどが挙げられるが、これらの中でもヒトに好適に用いられる。
＜抗菌活性＞
本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤の対象となる薬剤耐性菌が、少なくともキノロン類耐性菌を含む場合、前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、前記トポイソメラーゼの遺伝子が変異したキノロン類耐性菌に対して抗菌活性を示すことが好ましい。更に、前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、キノロン類感受性菌には無効であることがより好ましい。
前記抗菌活性を測定する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、最小発育阻止濃度（以下、「ＭＩＣ」と称することがある。）を求める方法などが挙げられる。
前記ＭＩＣを求める方法としては、特に制限はなく、公知の方法を適宜用いることができる。
前記薬剤耐性菌、特に前記キノロン類耐性菌に対するＭＩＣとしては、特に制限はなく、対象となる細菌の種類などに応じて適宜選択することができるが、８ｍｇ／Ｌ未満が好ましく、４ｍｇ／Ｌ以下がより好ましく、２ｍｇ／Ｌ以下が更に好ましく、１ｍｇ／Ｌ以下が特に好ましい。前記ＭＩＣが、８ｍｇ／Ｌ以上であると、抗菌活性が弱く、細菌の増殖を阻害できないことがある。
また、本発明において、本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤がキノロン類感受性菌に無効であるとは、前記キノロン類感受性菌に対する抗菌活性が低い場合も含むものとする。前記薬剤耐性菌用抗菌剤の前記キノロン類感受性菌に対するＭＩＣとしては、特に制限はなく、細菌の種類などに応じて適宜選択することができるが、８ｍｇ／Ｌ以上が好ましい。
＜使用＞
前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、１種単独で使用してもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用してもよい。また、前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用してもよい。
前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、薬剤感受性菌を耐性化させないために、薬剤感受性菌には抗菌活性を示さないことが好ましいことから、薬剤感受性菌にのみ抗菌活性を有する他の成分を有効成分とする薬剤と併用又は前記他の成分を有効成分とする薬剤に配合することが特に好ましい。
＜用途＞
前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかを含有し、少なくとも１種の薬剤へ耐性を示す薬剤耐性菌に対して優れた抗菌活性を示すことから、本発明の感染症治療薬、併用感染症治療薬に好適に利用可能である。
（感染症治療薬、併用感染症治療薬）
＜感染症治療薬＞
本発明の感染症治療薬は、本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤を含有し、必要に応じて、更にその他の成分を含有する。
＜＜薬剤耐性菌用抗菌剤＞＞
前記感染症治療薬における前記薬剤耐性菌用抗菌剤の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。また、前記感染症治療薬は、前記薬剤耐性菌用抗菌剤そのものであってもよい。
＜＜その他の成分＞＞
前記感染症治療薬における前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、水、デンプン等の薬理学的に許容され得る担体などが挙げられる。
前記感染症治療薬中の、前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。
＜＜使用＞＞
前記感染症治療薬は、１種単独で使用してもよいし、他の成分を有効成分とする医薬と併せて使用してもよい。また、前記感染症治療薬は、他の成分を有効成分とする医薬中に、配合された状態で使用してもよい。
前記感染症治療薬は、薬剤感受性菌を耐性化させないために、薬剤感受性菌には抗菌活性を示さないことが好ましいことから、薬剤感受性菌にのみ抗菌活性を有する他の成分を有効成分とする薬剤と併用又は前記他の成分を有効成分とする薬剤に配合することが好ましい。
＜併用感染症治療薬＞
本発明の併用感染症治療薬は、本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤と、少なくとも１種のキノロン類とを併用する治療薬である。
＜＜薬剤耐性菌用抗菌剤＞＞
前記併用感染症治療薬における前記薬剤耐性菌用抗菌剤の含有量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
＜＜キノロン類＞＞
前記併用感染症治療薬に用いるキノロン類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、前記オールドキノロン類、前記ニューキノロン類などが挙げられる。これらは、１種単独で使用してもよく、２種以上を併用してもよい。
前記オールドキノロン類としては、例えば、ナリジクス酸、ピロミド酸、ピペミド酸などが挙げられる。
前記ニューキノロン類は、例えば、ノルフロキサシン、レボフロキサシン、オフロキサシン、エノキサシン、塩化シプロフロキサシン、トシル酸トスフロキサシン、塩酸ロメフロキサシン、フレロキサシン、スパフロキサシン、ガチフロキシン、メシル酸パブフロキサシンなどが挙げられる。
前記併用感染症治療薬中の前記キノロン類の含有量としては、特に制限はなく、キノロン類の種類などに応じて適宜選択することができる。
＜＜併用＞＞
前記併用とは、前記薬剤耐性菌用抗菌剤と、前記キノロン類の少なくとも１種とを併せて使用してもよいし、前記薬剤耐性菌用抗菌剤に前記キノロン類の少なくとも１種を配合して使用してもよい。
これにより、薬剤耐性菌、特にキノロン類耐性菌には、前記併用感染症治療薬に含まれる本発明の前記薬剤耐性菌用抗菌剤が作用し、かつ、薬剤感受性菌、特にキノロン類感受性菌には前記併用感染症治療薬に含まれる前記キノロン類が作用するため、感染症の起因菌における薬剤耐性の有無に関わらず抗菌活性を発揮できる点で有利である。
更に、本発明の併用感染症治療薬において、前記薬剤耐性菌用抗菌剤は、キノロン類の使用により選択されるキノロン類耐性菌に有効なため、キノロン類耐性菌の出現を抑制する点でも有利である。
＜＜その他の成分＞＞
前記併用感染症治療薬における前記併用感染症治療薬が、前記薬剤耐性菌用抗菌剤に前記キノロン類の少なくとも１種を配合して用いられる場合、必要に応じて、更にその他の成分を配合してもよい。
前記その他の成分としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、エタノール、水、デンプン等の薬理学的に許容され得る担体などが挙げられる。
前記併用感染症治療薬中の、前記その他の成分の含有量としては、特に制限はなく、前記ナイボマイシン類及びその誘導体の少なくともいずれかの効果を損なわない範囲内で、目的に応じて適宜選択することができる。
＜対象＞
前記感染症治療薬及び前記併用感染症治療薬の対象となる感染症としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、キノロン類耐性菌による感染症が好ましく、ＭＲＳＡ感染症、ＶＩＳＡ感染症、及びＶＲＳＡ感染症の少なくともいずれかが特に好ましい。
また、前記感染症治療薬及び前記併用感染症治療薬の対象となる感染症としては、グラム陽性菌による感染症が好ましく、腸球菌感染症がより好ましく、キノロン類耐性腸球菌感染症が更に好ましい。
＜剤型＞
前記感染症治療薬及び前記併用感染症治療薬の剤型としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口固形剤、経口液剤、注射剤、吸入散剤などが挙げられる。
−経口固形剤−
前記経口固形剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、錠剤、被覆錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤などが挙げられる。
前記経口固形剤の製造方法としては、特に制限はなく、常法を使用することができ、例えば、前記感染症治療薬の場合は、前記薬剤耐性菌用抗菌剤に、賦形剤、各種添加剤を加えることにより製造することができる。また、前記併用感染症治療薬の場合は、例えば、前記薬剤耐性菌用抗菌剤及び前記キノロン類に、賦形剤、各種添加剤を加えることにより製造することができる。
ここで、前記賦形剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、微結晶セルロース、珪酸などが挙げられる。また、前記添加剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、着色剤、矯味／矯臭剤などが挙げられる。
前記結合剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロース、エチルセルロース、シェラック、リン酸カルシウム、ポリビニルピロリドンなどが挙げられる。
前記崩壊剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリド、乳糖などが挙げられる。
前記滑沢剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ砂、ポリエチレングリコールなどが挙げられる。
前記着色剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、酸化チタン、酸化鉄などが挙げられる。
前記矯味／矯臭剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
−経口液剤−
前記経口液剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、内服液剤、シロップ剤、エリキシル剤などが挙げられる。
前記経口液剤の製造方法としては、特に制限はなく、常法を使用することができ、例えば、前記感染症治療薬の場合は、前記薬剤耐性菌用抗菌剤に、添加剤を加えることにより製造することができる。また、前記併用感染症治療薬の場合は、例えば、前記薬剤耐性菌用抗菌剤及び前記キノロン類に、添加剤を加えることにより製造することができる。
ここで、前記添加剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、矯味／矯臭剤、緩衝剤、安定化剤などが挙げられる。
前記矯味／矯臭剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、白糖、橙皮、クエン酸、酒石酸などが挙げられる。
前記緩衝剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。
前記安定化剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、トラガント、アラビアゴム、ゼラチンなどが挙げられる。
−注射剤−
前記注射剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、溶液、懸濁液、用事溶解用固形剤などが挙げられる。
前記注射剤の製造方法としては、特に制限はなく、常法を使用することができ、例えば、前記感染症治療薬の場合は、前記薬剤耐性菌用抗菌剤に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加することにより製造することができる。また、前記併用感染症治療薬の場合は、例えば、前記薬剤耐性菌用抗菌剤及び前記キノロン類に、ｐＨ調節剤、緩衝剤、安定化剤、等張化剤、局所麻酔剤などを添加することにより製造することができる。
ここで、前記ｐＨ調節剤及び前記緩衝剤としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、リン酸ナトリウムなどが挙げられる。また、前記安定化剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ピロ亜硫酸ナトリウム、ＥＤＴＡ、チオグリコール酸、チオ乳酸などが挙げられる。前記等張化剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩化ナトリウム、ブドウ糖などが挙げられる。前記局所麻酔剤としても、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、塩酸プロカイン、塩酸リドカインなどが挙げられる。
＜投与＞
前記感染症治療薬及び前記併用感染症治療薬の投与方法、投与量、投与時期、及び投与対象としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記投与方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、経口投与法、注射による方法、吸入による方法などが挙げられる。なお、前記併用感染症治療薬において、前記薬剤耐性菌用抗菌剤と、前記キノロン類は、同時に投与されてもよく、別々に投与されてもよい。
前記投与量としては、特に制限はなく、投与対象個体の年齢、体重、体質、症状、他の成分を有効成分とする医薬の投与の有無など、様々な要因を考慮して適宜選択することができる。
前記投与対象となる動物種としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ヒト、サル、ブタ、ウシ、ヒツジ、ヤギ、イヌ、ネコ、マウス、ラット、トリなどが挙げられるが、これらの中でもヒトに好適に用いられる。
＜用途＞
前記感染症治療薬及び併用感染症治療薬は、本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤を含有することから、薬剤感受性菌を耐性化することなく、薬剤耐性菌に優れた抗菌活性を示すため、キノロン類耐性菌による感染症、特にＭＲＳＡ感染症、ＶＩＳＡ感染症、及びＶＲＳＡ感染症の少なくともいずれかに好適に利用可能である。また、前記感染症治療薬及び前記併用感染症治療薬は、腸球菌感染症、特にキノロン類耐性腸球菌感染症にも好適に利用可能である。
従来、キノロン類を含有する薬剤を患者に使用するか否かは、キノロン類感受性菌による感染症であるか、キノロン類耐性菌による感染症であるかについて、感染起因菌を分離し、感受性テストを行うことにより判断されていた。この感受性テストは、検査結果が出るまで２日間〜３日間という時間を要し、治療開始が遅れてしまうという問題があった。これに対し、本発明の感染症併用治療薬は、このような感受性テストを行うことなく早期に治療を開始することができる点で有利である。
（スクリーニング方法）
本発明のスクリーニング方法は、キノロン類感受性菌及びキノロン類耐性菌を用い、それぞれに同一濃度の被験試料を添加して培養し、前記キノロン類感受性菌の増殖は抑制せず、かつ、前記キノロン類耐性菌の増殖は抑制する被験試料を選別する薬剤耐性菌用抗菌剤のスクリーニング方法である。
＜キノロン類感受性菌、キノロン類耐性菌＞
前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌として用いる細菌の種類としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌等の病原性ブドウ球菌、前記病原性ブドウ球菌以外の病原性を有さないブドウ球菌、腸球菌などが挙げられる。
前記キノロン類感受性黄色ブドウ球菌としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＦＤＡ２０９Ｐ等の標準株、健康人や患者から得られたキノロン類感受性黄色ブドウ球菌分離株などが挙げられる。
前記キノロン類耐性黄色ブドウ球菌としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＶＲＳ１で代表されるＶＲＳＡ（Ｐ▲ｅ▼ｒｉｃｈｏｎ Ｂ， Ｃｏｕｒｖａｌｉｎ Ｐ．， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， ２００９， Ｎｏｖ；５３（１１）， ４５８０−７， Ｅｐｕｂ ２００９ Ｊｕｎ ８参照）、ＵＳＡ３００ＦＰＲ３７５７で代表される市中獲得型ＭＲＳＡ（Ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ ＭＲＳＡ：ＣＡ−ＭＲＳＡ）（Ｄｉｅｐ ＢＡ， Ｇｉｌｌ ＳＲ， Ｃｈａｎｇ ＲＦ， Ｐｈａｎ ＴＨ， Ｃｈｅｎ ＪＨ， Ｄａｖｉｄｓｏｎ ＭＧ， Ｌｉｎ Ｆ， Ｌｉｎ Ｊ， Ｃａｒｌｅｔｏｎ ＨＡ， Ｍｏｎｇｏｄｉｎ ＥＦ， Ｓｅｎｓａｂａｕｇｈ ＧＦ， “Ｐｅｒｄｒｅａｕ−Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ Ｆ． Ｃｏｍｐｌｅｔｅ ｇｅｎｏｍｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＵＳＡ３００， ａｎ ｅｐｉｄｅｍｉｃ ｃｌｏｎｅ ｏｆ ｃｏｍｍｕｎｉｔｙ−ａｃｑｕｉｒｅｄ ｍｅｔｉｃｉｌｌｉｎ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．” Ｌａｎｃｅｔ．， ２００６， Ｍａｒ ４；３６７（９５１２）， ７３１−９．参照）、Ｍｕ５０で代表されるＶＩＳＡ等のキノロン類耐性分離株（Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ ｉｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． Ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｗｈｉｔｅ， Ｄ．Ｇ． Ａｌｅｋｓｈｕｎ， Ｍ．Ｎ．ａｎｄ ＭｃＤｅｒｍｏｔｔ， Ｐ．Ｆ．２００５， ＡＳＭ Ｐｒｅｓｓ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ， ＤＣ．参照）などが挙げられる。なお、前記ＵＳＡ３００ＦＰＲ３７５７は、以下の実施例において表２−２に示すように、キノロン類に耐性を有する菌株である。
前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌は、前記スクリーニングを行う前に、前培養を行い、所望の菌量に調製してから用いることが好ましい。
前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌を調製する溶液としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、ＢＨＩ（Ｂｒａｉｎ Ｈｅａｒｔ Ｉｎｆｕｓｉｏｎ）、ＭＨ（Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ）などの培地、生理食塩水などが挙げられる。
前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌の添加量としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、１×１０３ＣＦＵ／ｍＬ〜１×１０５ＣＦＵ／ｍＬが好ましく、１×１０４ＣＦＵ／ｍＬがより好ましい。前記添加量が、１×１０３ＣＦＵ／ｍＬ未満であると、抗菌活性を有さない被験試料を添加した場合であっても菌の増殖が不十分となり、抗菌活性の評価ができないことがあり、１×１０５ＣＦＵ／ｍＬを超えると、抗菌活性を有する被験試料を添加した場合であっても、菌量が多すぎて抗菌活性の評価ができないことがある。
前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌の添加量を調製する方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、濁度を吸光度で測定することにより調製する方法などが挙げられる。
前記培養温度、培養時間、培養方法としては、特に制限はなく、細菌の種類など応じて適宜選択することができる。
前記スクリーニングに前記キノロン類感受性黄色ブドウ球菌及び前記キノロン類耐性黄色ブドウ球菌を用いる場合、培養温度としては、３３℃〜３８℃が好ましく、３５℃〜３７℃がより好ましい。
前記スクリーニングに前記キノロン類感受性黄色ブドウ球菌及び前記キノロン類耐性黄色ブドウ球菌を用いる場合、培養時間としては、１６時間〜４８時間が好ましく、１６時間〜２０時間がより好ましい。
前記スクリーニングに前記キノロン類感受性黄色ブドウ球菌及び前記キノロン類耐性黄色ブドウ球菌を用いる場合、培養方法としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、静置培養、振盪培養などがあげられる。
＜被験試料＞
前記被験試料としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、微生物を培養した培養上清、化合物、ＤＮＡ、タンパク質、動植物からの抽出物、合成した糖鎖、ペプチドなどが挙げられる。
前記被験試料を懸濁する溶媒種及び溶媒量としては、細菌の生育を抑制しない限り、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができる。
前記添加する被験試料の濃度としては、各被験試料の濃度を全て同一とする限り、特に制限はなく、被験試料の種類などに応じて適宜選択することができる。
前記被験試料中の抗菌活性を有する物質の濃度が未知であるため、前記被験試料中の抗菌活性を有する物質の濃度が高すぎると、前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌が共に増殖抑制され、選別できないことがある。その場合は、前記被験試料を更に希釈して、全ての被験試料を同一濃度とし、再度スクリーニングを行うことができる。
＜選別＞
前記選別する方法としては、前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌が増殖したか否かを判定することができれば、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができ、例えば、菌体の増殖の有無を濁度により目視して判定する方法、前記濁度を吸光度で測定する方法などが挙げられる。これらの中でも、目視で判定する方法が、確実に増殖したか否かを判定できる点で好ましい。
前記選別において、前記被験試料の濃度は、スクリーニング効率の観点から、まず１次スクリーニングとして１点の濃度で行うことが好ましく、必要に応じて、更に段階希釈して行うこともできる。
前記キノロン類感受性菌が増殖したか否かは、被験試料を添加せず、前記キノロン類感受性菌のみを添加した場合（以下、「キノロン類感受性菌用コントロール」と称することがある。）の増殖と、被験試料を添加し、かつ前記キノロン類感受性菌を添加した場合の増殖とを比較することで判定することができる。
前記キノロン類耐性菌が増殖したか否かについても同様に、被験試料を添加せず、前記キノロン類耐性菌のみを添加した場合（以下、「キノロン類耐性菌用コントロール」と称することがある。）の増殖と、被験試料を添加し、かつ前記キノロン類耐性菌を添加した場合の増殖とをそれぞれ比較することで判定することができる。
ここで、前記被験試料による、前記キノロン類感受性菌の増殖の抑制率（以下、「キノロン類感受性菌増殖抑制率」と称することがある。）及び前記キノロン類耐性菌の増殖の抑制率（以下、「キノロン類耐性菌増殖抑制率」と称することがある。）は、下記計算式で算出することができる。
キノロン類感受性菌増殖抑制率（％）＝（キノロン類感受性菌用コントロールの濁度−被験試料を添加したキノロン類感受性菌の濁度）／キノロン類感受性菌用コントロールの濁度×１００
キノロン類耐性菌増殖抑制率（％）＝（キノロン類耐性用コントロールの濁度−被験試料を添加したキノロン類耐性菌の濁度）／キノロン類耐性菌用コントロールの濁度×１００
ここで、前記被験試料が、前記キノロン類感受性菌又は前記キノロン類耐性菌の増殖を抑制したと判定する基準としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記抑制率が、８０％以上が好ましく、９５％以上がより好ましく、９９％以上が更に好ましい。
前記キノロン類感受性菌の増殖は抑制せず、かつ、前記キノロン類耐性菌の増殖は抑制する被験試料を選別する判定基準としては、前記キノロン類耐性菌増殖抑制率が、前記キノロン類感受性菌増殖抑制率より高ければ、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記キノロン類耐性菌増殖抑制率が、前記キノロン類感受性菌増殖抑制率に対して（キノロン類耐性菌増殖抑制率／キノロン類感受性菌増殖抑制率）、２倍以上が好ましく、４倍以上がより好ましく、８倍以上が更に好ましく、１６倍以上が特に好ましい。
前記選別は、２倍連続段階希釈した前記被験試料中で前記キノロン類感受性菌及び前記キノロン類耐性菌を培養し、それぞれの細菌の増殖を阻止する最大希釈倍率を求めて力価を算出する方法により行ってもよい。
前記力価は、前記キノロン類感受性菌の増殖を阻止する最大希釈倍率に対する前記キノロン類耐性菌の増殖を阻止する最大希釈倍率の比（前記キノロン類耐性菌の増殖を阻止する最大希釈倍率／前記キノロン類感受性菌の増殖を阻止する最大希釈倍率）により算出することができる。
前記力価による選別は、前記１次スクリーニングの後に、２次スクリーニングとして行ってもよいし、前記１次スクリーニングで前記キノロン類感受性菌と、前記キノロン類耐性菌との増殖で差が認められなかった被験試料について行ってもよい。
前記力価としては、特に制限はなく、目的に応じて適宜選択することができるが、前記キノロン類感受性菌の増殖を阻止する最大希釈倍率に対する前記キノロン類耐性菌の増殖を阻止する最大希釈倍率の比が、２倍以上が好ましく、４倍以上がより好ましく、８倍以上が更に好ましく、１６倍以上が特に好ましい。
このように選別された被験試料は、キノロン類感受性菌には作用せず、キノロン類耐性菌にのみ作用してその増殖を抑制するため、キノロン類感受性菌を耐性化することがなく、キノロン類耐性菌に対しては優れた抗菌活性を示す。そのため、本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤として好適に利用可能である。
なお、前記スクリーニング方法で選別された薬剤耐性菌用抗菌剤が、キノロン類耐性菌用抗菌剤として用いられる場合、前記スクリーニング後に、更に、変異したトポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの少なくともいずれかと、変異していないトポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの少なくともいずれかとの親和性を確認し、前記変異したトポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの少なくともいずれかに強く作用する被験試料を更に選別してもよい。
変異したトポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの少なくともいずれかへの親和性を確認する方法としては、例えば、同一の遺伝的バックグラウンドを共有する菌株で、トポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの遺伝子が変異していない菌株と、トポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの少なくともいずれかの遺伝子が変異した菌株とをセットで用い、これらの菌株に対する、前記被験試料のＭＩＣを測定することで確認することができる。ここで、前記被験試料は、トポイソメラーゼＩＶ及びＤＮＡジャイレースの少なくともいずれかの遺伝子が変異した菌株に対するＭＩＣの値が、前記遺伝子に変異のない菌株に対するＭＩＣの値と比べて低いほど、キノロン類耐性菌用抗菌剤として好適に利用可能である。
以下に本発明の実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に何ら限定されるものではない。また、以下の実施例及び試験例中、「％」は、特に明記のない限り「質量％」を表す。
（実施例１：薬耐性菌に有効な物質のスクリーニング）
＜スクリーニングサンプル＞
スクリーニングサンプルとしては、後述するストレプトマイセス・ハイリナム（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙａｌｉｎｕｍ−ＭＢ８９１−Ａ１株（ＡＴＣＣ２９８１７）を含む、土壌より分離した放線菌１，９２８種を、公知の培養方法により培養して得られた培養上清１，９２８種を用いた。
−ストレプトマイセス・ハイリナムの培養−
前記放線菌の培養方法の一例として、ストレプトマイセス・ハイリナムの培養方法を以下に示す。
寒天斜面培地に培養したストレプトマイセス・ハイリナム（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｈｙａｌｉｎｕｍ−ＭＢ８９１−Ａ１株（ＡＴＣＣ２９８１７）を、ガラクトース２％、デキストリン２％、バクトソイトン（ディフコ株式会社製）１％、コーン・スティープ・リカー０．５％、硫酸アンモニウム０．２％、炭酸カルシウム０．２％を含む液体培地（ｐＨ７．０に調整）を三角フラスコ（５００ｍＬ容）に１１０ｍＬずつ分注して、常法により１２０℃で２０分間滅菌した培地に接種した。その後３０℃で２日間回転振盪培養し、種母培養液を得た。
コーン・スティープ・リカー０．５％、グリセリン０．５％、スクロース２．０％、乾燥酵母（オリエンタル酵母工業株式会社製）１．０％、ソイビーンミール（日清製油株式会社製）１．０％、塩化コバルト６水和物０．００００１％を含む液体培地（ｐＨ７．０に調整）を三角フラスコ（５００ｍＬ容）に１１０ｍＬずつ分注して、常法により１２０℃で２０分間滅菌し、生産培地とした。この生産培地に、上記の種母培養液の２体積％量を接種し、２７℃、５日間回転振盪培養した（１８０ｒｐｍ）。
このようにして得られた培養液１１０ｍＬを遠心分離して、培養ろ液を得た。この培養ろ液を９６ウエルプレートに１００μＬ／ウエルずつ分注し、減圧下で濃縮乾燥した。ここへ、１００μＬ／ウエルの７０％メタノールを添加し、氷上で３時間〜５時間放置して溶解させた。
＜スクリーニング＞
−薬剤感受性黄色ブドウ球菌及び薬剤耐性黄色ブドウ球菌の培養−
薬剤感受性黄色ブドウ球菌としては、ＦＤＡ２０９Ｐ（ＡＴＣＣ６５３８Ｐ）を用いた。また、薬剤耐性黄色ブドウ球菌としては、ＶＩＳＡの代表株であるＭｕ５０（Ｈｉｒａｍａｔｓｕ， Ｋ．， Ｈ． Ｈａｎａｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， １９９７， ４０（１）， １３５−６．参照）を用いた。
ＦＤＡ２０９Ｐと、Ｍｕ５０とをそれぞれＢＨＩ培地（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）４ｍＬを用い、３７℃で一晩振盪培養した。
培養終了後、Ｍｕ５０及びＦＤＡ２０９Ｐの培養液を、それぞれ吸光度計（Ｂｉｏｃｈｒｏｍ社製）を用いて５７８ｎｍで０．３の吸光度となるようにＢＨＩ培地で調製し、更にＢＨＩ培地で１，０００倍希釈した。このとき、菌液は、いずれも約１×１０５ＣＦＵ／ｍＬであった。
−スクリーニング−
Ｒｏｕｎｄ Ｂｏｔｔｏｍ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、＃３７９９、９６ウエル）にＭｕ５０の菌液及びＦＤＡ２０９Ｐの菌液をそれぞれ１００μＬ加え（約１×１０４ＣＦＵ／ウエル）、このウエルに前記７０％メタノールに懸濁した前記スクリーニングサンプルを２．５μＬ／ウエル添加し（４０倍希釈）、３７℃で一晩静置培養した。コントロールとして前記スクリーニングサンプルを添加しないウエルを置き、前記スクリーニングサンプルによりＭｕ５０及びＦＤＡ２０９Ｐの増殖が抑制されたか否かは、それぞれのコントロールと比較して判定した。
培養終了後、菌の増殖を濁度により目視して判定した。ＦＤＡ２０９Ｐの増殖と比較して、Ｍｕ５０の増殖を４倍以上抑制したサンプルを、薬剤耐性黄色ブドウ球菌に抗菌活性を示す物質として選別した。ここで、選別されたサンプルは、１，９２８スクリーニングサンプル中、１サンプルであった。
（試験例１：抗菌活性物質の力価測定）
実施例１で得た１サンプルについて、力価測定を行った。
Ｍｕ５０と、ＦＤＡ２０９Ｐとをそれぞれ実施例１と同様の方法で培養し、吸光度計を用いて５７８ｎｍで０．３の吸光度となるようにＢＨＩ培地で調製し、更にＢＨＩ培地で５００倍希釈した。このとき、菌液は、いずれも約２×１０５ＣＦＵ／ｍＬであった。
滴定用プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製）を用い、ＢＨＩ培地１００μＬ／ウエル及び実施例１で得た１サンプルを２．５μＬ／ウエル添加（４０倍希釈）した。ここから、２倍段階希釈を行い、５，１２０倍まで７段階の希釈を行った。
前記各濃度に希釈したサンプルを含むＢＨＩ培地５０μＬ／ウエルに、前記５００倍希釈したＭｕ５０及びＦＤＡ２０９Ｐの菌液を、それぞれ５０μＬ／ウエルを添加し、３７℃で一晩静置培養した。
培養終了後、各ウエルにおける各菌株の増殖の有無を濁度により目視して判定し、ＦＤＡ２０９Ｐに対するＭｕ５０の力価の比（Ｍｕ５０／ＦＤＡ２０９Ｐ）を求めた。Ｍｕ５０の力価が、ＦＤＡ２０９Ｐの力価の４倍以上である場合に、抗菌活性を有すると評価した。
その結果、ストレプトマイセス・ハイリナムの培養上清の力価は、ＦＤＡ２０９Ｐにおいては４０未満であり、Ｍｕ５０においては１６０であった。即ち、Ｍｕ５０の力価は、ＦＤＡ２０９Ｐに対して４倍以上高いことが判明した。
（試験例２：ストレプトマイセス・ハイリナムの培養上清の分析）
試験例１の結果より、ストレプトマイセス・ハイリナムの培養上清は、ＦＤＡ２０９Ｐに対する増殖抑制活性が低く、かつＭｕ５０に対しては高い増殖抑制活性を示しため、ストレプトマイセス・ハイリナムの培養上清に含まれる物質について更に詳細な分析を行った。
＜培養＞
ストレプトマイセス・ハイリナムを実施例１と同様の方法で培養し、培養ろ液を得た。この培養液を３Ｌのブタノールで抽出し、ブタノール抽出液を得た。このブタノール抽出液を減圧下でブタノールを溜去し、１．２ｇの抽出物を得た。この抽出物にヘキサン５００ｍＬを加え十分撹拌した後、これを遠心分離機によりヘキサン可溶画分とヘキサン不溶画分に分画した。このヘキサン不溶画分にクロロホルム３００ｍＬ、メタノール３６０ｍＬ、水２４０ｍＬを加え十分撹拌し分配した。下層を分離し、減圧下で濃縮乾固を行い粗抽出物１８２ｍｇを得た。
前記粗抽出物を遠心液々分配クロマトグラフ（三鬼エンヂニアリング株式会社製）によりクロマトグラフィーを行った。遠心液々分配クロマトグラフの固定層（２５０ｍＬ、６００ｒｐｍ）は、クロロホルム：メタノール：水＝５：６：４（体積比）の溶媒比で分配した溶媒の下層を用いた。移動層はクロロホルム：メタノール：水＝５：６：４（体積比）の溶媒比で分配した溶媒の上層を用い８ｍＬ／分間の流速で行い、９５分間後に移動層をクロロホルム：メタノール：水＝５：６：４（体積比）の溶媒比で分配した溶媒の下層に替え８ｍＬ／分間の流速で２１分間クロマトグラフィーを行った。１フラクションを１２ｍＬずつ分画した。
前記クロマトグラフィーにより得られた画分を濃縮乾固した後、１００μＬのメタノールに溶解した。
［ＨＰＬＣ条件］
溶媒：０．０１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル−０．０１％トリフルオロ酢酸含有水２液勾配（５％（０分間）−１００％（３０分間）−１００％（１５分間）；０．０１％トリフルオロ酢酸含有アセトニトリル）合計４５分間
カラム：Ｓｈｉｓｅｉｄｏ ｃａｐｃｅｌｌ ｐａｋ ＵＧ１２０ ４．６ｍｍ径×１５０ｍｍ
カラム温度：２５℃
流速：１．０ｍＬ／分間
検出器：ＰＤＡ
画分：９０分画
＜抗菌活性の測定＞
Ｍｕ５０と、ＦＤＡ２０９Ｐとをそれぞれ実施例１と同様の方法で培養し、実施例１と同様の方法で希釈した（菌液は、いずれも約１×１０５ＣＦＵ／ｍＬ）。
Ｒｏｕｎｄ Ｂｏｔｔｏｍ Ｃｅｌｌ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｐｌａｔｅ（Ｃｏｒｎｉｎｇ社製、＃３７９９、９６ウエル）にＭｕ５０の菌液及びＦＤＡ２０９Ｐの菌液をそれぞれ１００μＬ加え（約１×１０４ＣＦＵ／ウエル）、このウエルに前記７０％メタノールに懸濁した前記ＨＰＬＣ画分を５μＬ／ウエル添加し（２０倍希釈）、３７℃で一晩振盪培養した。コントロールとしては、前記ＨＰＬＣ画分を添加しないウエルを置いた。
培養終了後、菌の増殖の有無を濁度により目視して判定した。ＦＤＡ２０９Ｐの増殖と比較して、Ｍｕ５０の増殖を４倍以上抑制したサンプルを、薬剤耐性黄色ブドウ球菌に抗菌活性を示す物質として選別した。その結果、前記クロマトグラフィーのフラクション番号３７、３８、及び４１に抗菌活性が認められた。
前記フラクション番号３７、３８、及び４１をそれぞれ集めて減圧下で濃縮乾固し、同定を行ったところ、フラクション番号３７及び３８にはナイボマイシン、フラクション番号４１にはデオキシナイボマイシンが活性成分として含有されていることがわかった。以下にナイボマイシン及びデオキシナイボマイシンの物理化学性状を示す。
なお、前記クロマトグラフィーにより得られた画分の濃縮乾固により、純粋なナイボマイシンを９．０ｍｇ、デオキシナイボマイシンを９．０ｍｇ得ることができた。
［ナイボマイシンの物理化学性状］
（１） 外観は、無色パウダー状であった。
（２） 分子式は、Ｃ１６Ｈ１４Ｎ２Ｏ４で表された。
（３） 高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）による、実験値は、ｍ／ｚ ２９９．１０２（Ｍ＋Ｈ）＋であり、計算値は、ｍ／ｚ ２９９．１０２９（Ｃ１６Ｈ１５Ｎ２Ｏ４として）であった。
（４） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルのチャートは、図１に示す通りである。
（５） プロトン核磁気共鳴スペクトルとして、６００ＭＨｚにおいて重トリフルオロ酢酸中で、２５℃にて測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートは、図２に示す通りである。なお、図２において、「ｉｍｐ」は、不純物（ｉｍｐｕｒｉｔｙ）のピークを示す。ここでは、溶媒由来のピークと考えられる。
（６） 炭素１３核磁気共鳴スペクトルとして、１５０ＭＨｚにおいて重トリフルオロ酢酸中で２５℃にて測定した１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートは、図３に示す通りである。
［デオキシナイボマイシンの物理化学的性状］
（１） 外観は、無色パウダー状であった。
（２） 分子式は、Ｃ１６Ｈ１４Ｎ２Ｏ３で表された。
（３） 高分解能質量分析（ＨＲＥＳＩＭＳ：正イオンモード）による、実験値は、ｍ／ｚ ２８３．１０７５（Ｍ＋Ｈ）＋であり、計算値は、ｍ／ｚ２８３．１０７７（Ｃ１６Ｈ１５Ｎ２Ｏ３として）であった。
（４） メタノール中で測定した紫外線吸収スペクトルのチャートは、図４に示す通りである。
（５） プロトン核磁気共鳴スペクトルとして、６００ＭＨｚにおいて重トリフルオロ酢酸中で２５℃にて測定した１Ｈ−ＮＭＲスペクトルのチャートは、図５に示す通りである。なお、図５において、「ｉｍｐ」は、不純物（ｉｍｐｕｒｉｔｙ）のピークを示す。ここでは、溶媒由来のピークと考えられる。
（６） 炭素１３核磁気共鳴スペクトルとして、１５０ＭＨｚにおいて重トリフルオロ酢酸中で２５℃にて測定した１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルのチャートは、図６に示す通りである。
（試験例３：ナイボマイシン類の作用点の確認）
表１−１に示すメチシリン感受性黄色ブドウ球菌（ｍｅｔｈｉｃｉｌｌｉｎ−ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ Ｓ．ａｕｒｅｕｓ；ＭＳＳＡ）、ＭＲＳＡ、及びこれらの変異株を用い、キノロン類、並びに、前記試験例２で精製したナイボマイシン（以下、「ＮＭ」と称することがある。）及びデオキシナイボマイシン（以下、「ＤＮＭ」と称することがある。）を用い、各菌株に対する抗菌活性について、下記に示すＭＩＣ測定方法を用いて検討した。
キノロン類としては、ノルフロキサシン（以下、「ＮＦＬＸ」と称することがある。）、レボフロキサシン（以下、「ＬＶＦＸ」と称することがある。）、オフロキサシン（以下、「ＯＦＬＸ」と称することがある。）、塩化シプロフロキサシン（以下、「ＣＰＦＸ」と称することがある。）、トシル酸トスフロキサシン（以下、「ＴＦＬＸ」と称することがある。）、及びスパフロキサシン（以下、「ＳＰＦＸ」と称することがある。）を用いた。
ここで、前記ＭＳＳＡとは、β−ラクタム類のオキサシリン（以下、「ＯＸＡ」と称することがある。）のＭＩＣが４ｍｇ／Ｌ未満の菌株を意味する。
なお、表１−１において、変異株は、親株を段階的に、より高い活性を持ったキノロン類で選択して取得した菌株であり、ｇｙｒＡがコードするＤＮＡジャイレース（トポイソメラーゼＩＩ）のＡサブユニット（ＧｙｒＡ）において、ｇｙｒＡの変異によりアミノ酸が変異したもの、若しくはｇｒｌＡがコードするトポイソメラーゼＩＶ（ＧｒｌＡ）において、ｇｒｌＡの変異によりアミノ酸が変異したものである（Ｆｕｋｕｄａ， Ｈ．， Ｓ． Ｈｏｒｉ， ｅｔ ａｌ．， “Ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｇａｔｉｆｌｏｘａｃｉｎ （ＡＭ−１１５５， ＣＧ５５０１， ＢＭＳ−２０６５８４）， ａ ｎｅｗｌｙ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｆｌｕｏｒｏｑｕｉｎｏｌｏｎｅ， ａｇａｉｎｓｔ ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｑｕｉｎｏｌｏｎｅ−ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｍｕｔａｎｔｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｎｏｒＡ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔ ｏｆ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ．”， Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ， １９９８， ４２（８）， １９１７−２２．参照）。即ち、第１段キノロン類耐性変異株は、臨床分離株である親株において、表１−１に示す遺伝子が変異した菌株であり、第２段キノロン類耐性変異株は、前記第１段キノロン類耐性変異株において、表１−１に示す遺伝子が更に変異した菌株であり、第３段キノロン類耐性変異株は、前記第２段キノロン類耐性変異株において、表１−１に示す遺伝子が更に変異した菌株であり、第４段キノロン類耐性変異株は、前記第３段キノロン類耐性変異株において、表１−１に示す遺伝子が更に変異した菌株である。
＜ＭＩＣの測定＞
−各菌株の前培養−
表１−１に示す各菌株を４ｍＬの培地（Ｔｒｙｐｔｉｃａｌ Ｓｏｙ Ｂｒｏｔｈ：ＴＳＢ、Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）で３７℃にて一晩振盪培養した。コントロールとしては、ＦＤＡ２０９Ｐを用いた。
培養終了後、カチオン調整Ｍｕｅｌｌｅｒ Ｈｉｎｔｏｎ Ｂｒｏｔｈ（ＣＡＭＨＢ、 Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社製）に懸濁し、吸光度計を用いて５７８ｎｍで０．３の吸光度となるようにＣＡＭＨＢで菌液を調製し、更にＣＡＭＨＢで５００倍希釈した。
−キノロン類及びナイボマイシン類の調製−
キノロン類及びナイボマイシン類（ＮＭ及びＤＮＭ）は、ＣＡＭＨＢにて、それぞれ２５６ｍｇ／Ｌに調製した。ここから、２倍段階希釈を行い、０．１２５ｍｇ／Ｌまで１１段階の希釈を行った。
−ＭＩＣの測定−
前記各濃度のキノロン類及びナイボマイシン類を含むＣＡＭＨＢ ５０μＬ／ウエルに、前記５００倍希釈した前培養した各菌液をそれぞれ５０μＬ／ウエル添加し、３７℃で一晩静置培養した。
培養終了後、菌の増殖の有無を濁度にて目視して判定し、各菌株のＭＩＣを求めた。ここで、キノロン類耐性黄色ブドウ球菌は、ＬＶＦＸに対するＭＩＣが４ｍｇ／Ｌ以下の菌株である。ナイボマイシン類の評価基準としては、ＭＩＣが４ｍｇ／Ｌ以下となる場合に抗菌活性を有する（有効である）と評価した。結果を表１−２に示す。
なお、試験例３において、ナイボマイシン類が、変異したｇｙｒＡ及びｇｒｌＡの少なくともいずれかに作用しているか否かは、前記評価基準で評価した場合のナイボマイシン類感受性菌と、ナイボマイシン耐性菌とにおけるＭＩＣ値が、ｇｙｒＡ及びｇｒｌＡの少なくともいずれかの遺伝子の変異により変化したか否かをみることで判断することができ、これらのＭＩＣの値が４倍以上変化する場合を「有意」であると評価した。即ち、ｇｙｒＡ及びｇｒｌＡの少なくともいずれかの遺伝子が変異した変異株におけるナイボマイシン類のＭＩＣ値が、親株のＭＩＣ値と比較して１／４（変異株／親株）の場合を「有意」であると評価した。
表１−２の結果より、第１段キノロン類耐性変異株から第４段キノロン類耐性変異株にかけて、段階的に薬剤耐性が高くなっていることが確認された。ＳＰＦＸ以外のキノロン類は、第１段キノロン類耐性変異株で抗菌活性が低くなった。ＳＰＦＸは、第２段キノロン類耐性変異株で抗菌活性が低くなった。これらの結果より、トポイソメラーゼＩＶ又はＤＮＡジャイレースに変異が生じると、キノロン類に耐性を示すことが確認された。
これに対し、ナイボマイシン類は、キノロン類で抗菌活性が高かった菌株については、抗菌活性が低く、反対に、キノロン類で抗菌活性が低かった菌株については、抗菌活性が高かった。また、ナイボマイシン類は、Ｓｅｒ８４がＬｅｕに変異したＤＮＡジャイレースに共通して作用していることが確認された。
したがって、ナイボマイシン類は、変異したＤＮＡジャイレースに特異的に作用し、キノロン類に対する耐性を獲得した菌株に高い抗菌活性を示すことが示唆された。また、ＮＭと、ＤＮＭとでは、ＤＮＭの方が、抗菌活性が高かった。更に、ＭＳ５９５２−３におけるＤＮＭの結果より、ナイボマイシン類は、トポイソメラーゼＩＶの変異に対しても、キノロン類と比較して高い抗菌活性を有することがわかった。
（試験例４：黄色ブドウ球菌に対する、グリコペプチド類、β−ラクタム類、キノロン類、及びナイボマイシン類の抗菌活性の評価）
表２−１に示す黄色ブドウ球菌のＭＲＳＡ、ＣＡ−ＭＲＳＡ、及びＭＳＳＡを用い、グリコペプチド類、イミペネム類、キノロン類、及びナイボマイシン類を用い、各菌株に対する抗菌活性について検討した。
なお、表２−１に記載の各菌株は、下記文献に記載され、それぞれの研究機関から、あるいは、公的な菌株バンクであるＮＡＲＳＡ：Ｎｅｔｗｏｒｋｏｎ Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎ Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓから取得することができる。各菌株と文献との対応は、表２−１に記載のとおりである。
文献１：Ｓｃｈｕｈａｒｄｔ ＶＴ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ， １９６８， Ｓｅｐ ９６ （３）， ７３４−７
文献２：Ａｐｐｒｏｖｅｄ Ｓｔａｎｄａｒｄ−８ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ． Ｗａｙｎｅ， ＰＡ：Ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｓｔａｎｄａｒｄｓ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ；ＣＬＳＩ Ｍ７−Ａ７．
文献３：Ａｍｉｎａｋａ Ｍ ｅｔ ａｌ．， ２００８， Ｖｏｌ ５６ （１）， １６−２０
文献４：Ｋｕｒｏｄａ Ｍ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ， ２００１， Ａｐｒ ２１， ３５７（９２６４）， １２２５−４０．
文献５：Ｂａｂａ Ｔ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ， ２００２， Ｍａｙ ２５， ３５９（９３２０）， １８１９−２７
文献６：Ｎｏｖｉｃｋ ＲＰ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ， １９６５， Ａｕｇ ９０， ４６７−８０
文献７：Ｇｉｌｌ ＳＲ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ， ２００５ Ａｐｒ， １８７（７）， ２４２６−３８．
文献８：Ｄｉｅｐ ＢＡ ｅｔ ａｌ．， Ｌａｎｃｅｔ， ２００６， Ｍａｒ ４， ３６７（９５１２）， ７３１−９．
ここで、グリコペプチド類としては、バンコマイシン（以下、「ＶＣＭ」と称することがある。）及びテイコプランニン（以下、「ＴＥＩＣ」と称することがある。）を用いた。
β−ラクタム類としては、イミペネム（以下、「ＩＰＭ」と称することがある。）及びＯＸＡを用いた。
キノロン類としては、ＮＦＬＸ、ＬＶＦＸ、ＯＦＬＸ、ＣＰＦＸ、ＴＦＬＸ、及びＳＰＦＸを用いた。
ナイボマイシン類としては、試験例２で精製したＮＭ及びＤＮＭを用いた。
＜ＭＩＣの測定＞
試験例３において、菌株を表１−１に示す菌株に代えて表２−１に示す菌株を用い、前記菌株に作用させる化合物を表１−２に示す化合物に代えて表２−２に示す化合物を用いたこと以外は、試験例３と同様の方法で菌株の培養、各化合物の調製、及びＭＩＣの測定及び評価を行った。結果を表２−２に示す。
表２−２の結果より、ナイボマイシン類は、キノロン類で抗菌活性が高かった菌株については、抗菌活性が低く、反対に、キノロン類で抗菌活性が低かった菌株については、抗菌活性が高かった。また、ナイボマイシン類の抗菌活性は、黄色ブドウ球菌に対しては、ＮＭよりＤＮＭの方が高い抗菌活性を示した。
ナイボマイシン類で高い抗菌活性が認められた菌株に対して、グリコペプチド類及びイミペネム類は、キノロン類より高い抗菌活性を示したが、その活性は、ナイボマイシン類と比較すると低いものであった。
（試験例５：多剤耐性菌臨床菌株に対する、グリコペプチド類、キノロン類、及びナイボマイシン類の抗菌活性の評価）
表３−１に示す世界各国由来のＭＲＳＡのＶＩＳＡ臨床分離菌株（以下、「ＶＩ−ＭＲＳＡ」と称することがある。）及びＭＳＳＡのＶＩＳＡ臨床分離菌株（以下、「ＶＩ−ＭＳＳＡ」と称することがある。）、並びに、表４に示すアメリカで分離されたＶＲＳＡ臨床菌株に対する抗菌活性について、試験例５で用いたグリコペプチド類、β−ラクタム類、キノロン類、及びナイボマイシン類を用いて検討した。
なお、表３−１に「†」で示した菌株は、Ｌｕｌｉｔａｎｏｎｄ Ａ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ， ２００９， Ｊｕｌ；４７（７）， ２３１１−６． Ｅｐｕｂ ２００９ Ａｐｒ ２９．に、「＊」で示した菌株は、Ｃｕｉ， Ｌ．， Ｘ． Ｍａ， ｅｔ ａｌ．， ２００３， Ｊ Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ ４１（１）， ５−１４．に、「§」で示した菌株は、Ｗａｎｇ， Ｊ． Ｌ．， Ｓ． Ｐ． Ｔｓｅｎｇ， ｅｔ ａｌ．， ２００４， Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １０（９）， １７０２−４．に記載されており、それぞれの各研究機関から入手できる。
また、表３−１及び表４におけるその他の菌株は、ＮＡＲＳＡより入手できる。
ここで、グリコペプチド類としては、ＶＣＭ及びＴＥＩＣを用いた。β−ラクタム薬としては、ＯＸＡを用いた。キノロン類としては、ＮＦＬＸ、ＬＶＦＸ、ＯＦＬＸ、ＣＰＦＸ、ＴＦＬＸ、及びＳＰＦＸを用いた。ナイボマイシン類としては、試験例２で精製したＮＭ及びＤＮＭを用いた。
＜ＭＩＣの測定＞
試験例３において、菌株を表１−１に示す菌株に代えて表３−１及び表４に示す菌株を用い、前記菌株に作用させる物質を表１−２に示す化合物に代えて表３−２及び表４に示す化合物を用いたこと以外は、試験例３と同様の方法で菌株の培養、各化合物の調製、及びＭＩＣの測定及び評価を行った。結果を表３−２及び表４に示す。
表３−２の結果より、ＶＩ−ＭＳＳＡの３株（ＳＡ ＭＥＲ−Ｓ２０、ＳＡ ＭＥＲ−Ｓ１２、及びＳＡ ＭＥＲ−Ｓ６）以外の全ての菌株が、キノロン類に耐性を示した。即ち、世界各国のＶＩＳＡ株は、そのほとんどがキノロン類耐性であることが示唆された。
これに対し、ナイボマイシン類は、キノロン類が有効であった前記３株に対しては抗菌活性を示さなかったが、前記３株以外のキノロン類に耐性を有する菌株に対しては、高い抗菌活性を示した。
また表４の結果より、ＶＲＳＡ株は、全てのグリコペプチド類、β−ラクタム類、及びキノロン類に耐性を示した。これに対し、ナイボマイシン類は、これらの菌株に高い抗菌活性を示した。なお、これらの株はＮＡＲＳＡから分譲された。
（試験例６：腸球菌に対するキノロン類及びナイボマイシン類の抗菌活性の評価）
表６に示す腸球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）（ＮＣＴＣ１２２０１及びＮＣＴＣ１２２０３以外の株は、塩野義製薬株式会社から分譲された。なお、順天堂大学細菌学教室から入手することも可能である。）を用い、キノロン類及びナイボマイシン類を用い、各菌株に対する抗菌活性について検討した。ＮＣＴＣ株は、いずれもバンコマイシン耐性腸球菌で、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅｓ（ＮＣＴＣ）から入手できる。なお、表６に示すキノロン類耐性腸球菌は、ＬＶＦＸに対するＭＩＣが４ｍｇ／Ｌ以上の腸球菌を示す。
ここで、キノロン類としては、ＮＦＬＸ、ＬＶＦＸ、ＯＦＬＸ、ＣＰＦＸ、ＴＦＬＸ、及びＳＰＦＸを用いた。ナイボマイシン類としては、試験例２で精製したＮＭ及びＤＮＭを用いた。
＜ＭＩＣの測定＞
試験例３において、菌株を表１−１に示す菌株に代えて表６に示す菌株を用い、前記菌株に作用させる化合物を表１−２に示す化合物に代えて表６に示す化合物を用いたこと以外は、試験例３と同様の方法で菌株の培養、各化合物の調製、及びＭＩＣの測定及び評価を行った。結果を表６に示す。
表６の結果より、ナイボマイシン類は、キノロン類感受性菌については、抗菌活性が低く、反対に、キノロン類耐性菌では、抗菌活性が高かった。また、試験例４における、黄色ブドウ球菌に対するナイボマイシン類の抗菌活性は、ＮＭよりＤＮＭの方が高かったが、腸球菌に対しては、ＮＭの方が高い抗菌活性を示した。
試験例４〜６の結果より、ナイボマイシン類は、従来抗菌剤として用いられてきたキノロン類に対して感受性の細菌には無効であるため、キノロン類感受性菌が耐性化することなく、またキノロン類耐性菌には有効であるため、従来キノロン類が無効であった細菌に優れた抗菌活性を示すことから、キノロン類耐性菌による感染症の治療に好適に利用可能であることが示唆された。更に、従来のキノロン類と併用することで、感染症が、キノロン類感受性菌によるものであっても、キノロン類耐性菌によるものであっても有効に治療できると考えられる。
本発明の薬剤耐性菌用抗菌剤、前記薬剤耐性菌用抗菌剤を含有する感染症治療薬、及び前記薬剤耐性菌用抗菌剤と、従来のキノロン類とを併用する併用感染症治療薬は、少なくともキノロン類感受性菌を含む薬剤感受性菌に対しては抗菌活性が低い、あるいは無効であり、該薬剤感受性菌を薬剤耐性化させることなく、少なくとも１種の薬剤に耐性を示す薬剤耐性菌に対しては優れた抗菌活性を有し、また副作用がなく、簡単に製造可能であるため、薬剤耐性菌による感染症、特にキノロン類耐性菌による感染症の予防乃至治療に好適に利用可能である。
また、本発明のスクリーニング方法は、薬剤感受性菌には無効であり、薬剤耐性菌にのみ有効である物質をスクリーニングできることから、薬剤耐性を獲得していない細菌を薬剤耐性化させることなく、少なくとも１種の薬剤に耐性を示す薬剤耐性菌に有効な予防薬乃至治療薬のスクリーニングに好適に利用可能である。

Claims (5)

  1. 下記一般式（１）で表される化合物を含有することを特徴とするキノロン類耐性菌用抗菌剤。
    前記一般式（１）において、Ｒ１は、ＯＨ及びＨのいずれかを表し、Ｒ２は、Ｈを表す。
  2. 少なくともキノロン類感受性菌には無効である請求項１に記載のキノロン類耐性菌用抗菌剤。
  3. 請求項１から２のいずれかに記載のキノロン類耐性菌用抗菌剤を含有し、ＭＲＳＡ感染症治療薬、ＶＩＳＡ感染症治療薬、及びＶＲＳＡ感染症治療薬の少なくともいずれかであることを特徴とする感染症治療薬。
  4. 請求項１から２のいずれかに記載のキノロン類耐性菌用抗菌剤を含有し、キノロン類耐性腸球菌感染症治療薬であることを特徴とする感染症治療薬。
  5. 請求項１から２のいずれかに記載のキノロン類耐性菌用抗菌剤と、少なくとも１種のキノロン類とを併用することを特徴とする併用感染症薬。
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