JP5131751B2 - 小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 - Google Patents
小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5131751B2 JP5131751B2 JP2007551990A JP2007551990A JP5131751B2 JP 5131751 B2 JP5131751 B2 JP 5131751B2 JP 2007551990 A JP2007551990 A JP 2007551990A JP 2007551990 A JP2007551990 A JP 2007551990A JP 5131751 B2 JP5131751 B2 JP 5131751B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- tslc1
- lung cancer
- cell lung
- small cell
- expression
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 268
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 title claims description 90
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 title claims description 79
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 36
- 238000012216 screening Methods 0.000 title description 27
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title description 20
- 108010072135 Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 315
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 275
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 195
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 164
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 158
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 156
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 144
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 127
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 125
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 125
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 104
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 53
- 102000006818 Cell Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 claims description 48
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 44
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 38
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 claims description 37
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 claims description 37
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 33
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims description 31
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims description 31
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 27
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 26
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 24
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 24
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 20
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 5
- 238000007689 inspection Methods 0.000 claims description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 claims 2
- 102100024649 Cell adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 248
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 228
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 147
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 147
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 147
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 140
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 128
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 121
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 109
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 106
- 101150058540 RAC1 gene Proteins 0.000 description 97
- 102100022122 Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1 Human genes 0.000 description 96
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 85
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 80
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 71
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 68
- 230000003990 molecular pathway Effects 0.000 description 66
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 62
- 101100206736 Mus musculus Tiam1 gene Proteins 0.000 description 57
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 51
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 50
- 230000006870 function Effects 0.000 description 48
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 45
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 description 41
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 description 40
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 40
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 38
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 38
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 36
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 32
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 32
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 30
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 29
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 description 27
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 27
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 27
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 27
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 26
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 26
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 26
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 25
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 25
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 24
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 24
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 21
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 21
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 20
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 20
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 20
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 20
- 239000000047 product Substances 0.000 description 20
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 19
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 19
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 19
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 17
- 230000008859 change Effects 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 16
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 16
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 16
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 16
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 16
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 15
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 15
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 14
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 14
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 14
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 14
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 14
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 14
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 13
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 13
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 13
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 13
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 13
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 13
- 241000894007 species Species 0.000 description 13
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 13
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 13
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 12
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 12
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 12
- 108010001288 T-Lymphoma Invasion and Metastasis-inducing Protein 1 Proteins 0.000 description 11
- 102000002154 T-Lymphoma Invasion and Metastasis-inducing Protein 1 Human genes 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 11
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 11
- 108010014186 ras Proteins Proteins 0.000 description 11
- 102000016914 ras Proteins Human genes 0.000 description 11
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 11
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 11
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 11
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 11
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 11
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 11
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 10
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 10
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 10
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 10
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 10
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 9
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 9
- -1 Without limitation Chemical class 0.000 description 9
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 9
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 9
- 238000013461 design Methods 0.000 description 9
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 9
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 9
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 9
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 8
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 8
- 108091027967 Small hairpin RNA Proteins 0.000 description 8
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 8
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 8
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 8
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 8
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 8
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 8
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 8
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 8
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 8
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 8
- 239000004055 small Interfering RNA Substances 0.000 description 8
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 7
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 7
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 7
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 7
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 7
- 102100031952 Protein 4.1 Human genes 0.000 description 7
- 101710196266 Protein 4.1 Proteins 0.000 description 7
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 7
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 7
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 7
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 7
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 7
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 7
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 7
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 7
- 102000016731 rac GTP-Binding Proteins Human genes 0.000 description 7
- 108010092883 rac GTP-Binding Proteins Proteins 0.000 description 7
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 6
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 6
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 6
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 6
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 6
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 6
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 6
- 238000011532 immunohistochemical staining Methods 0.000 description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 6
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 6
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 6
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 6
- 108091008598 receptor tyrosine kinases Proteins 0.000 description 6
- 102000027426 receptor tyrosine kinases Human genes 0.000 description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 6
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 6
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 6
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 6
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 5
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 5
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 5
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102000013446 GTP Phosphohydrolases Human genes 0.000 description 5
- 108091006109 GTPases Proteins 0.000 description 5
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 5
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N Lactic Acid Natural products CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 5
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 5
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 5
- 238000005094 computer simulation Methods 0.000 description 5
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 5
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 5
- XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N doxycycline monohydrate Chemical compound O.O=C1C2=C(O)C=CC=C2[C@H](C)[C@@H]2C1=C(O)[C@]1(O)C(=O)C(C(N)=O)=C(O)[C@@H](N(C)C)[C@@H]1[C@H]2O XQTWDDCIUJNLTR-CVHRZJFOSA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 5
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 5
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 5
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 5
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 5
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 5
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 5
- 238000011160 research Methods 0.000 description 5
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 5
- 208000000649 small cell carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 5
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 4
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 4
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 4
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 101000760620 Homo sapiens Cell adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 4
- 101001115426 Homo sapiens MAGUK p55 subfamily member 3 Proteins 0.000 description 4
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100023260 MAGUK p55 subfamily member 3 Human genes 0.000 description 4
- 241000711408 Murine respirovirus Species 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 description 4
- KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N Phalloidin Chemical compound N1C(=O)[C@@H]([C@@H](O)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C[C@@](C)(O)CO)NC(=O)[C@H](C2)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H]3C[C@H](O)CN3C(=O)[C@@H]1CSC1=C2C2=CC=CC=C2N1 KPKZJLCSROULON-QKGLWVMZSA-N 0.000 description 4
- 108010014608 Proto-Oncogene Proteins c-kit Proteins 0.000 description 4
- 102000016971 Proto-Oncogene Proteins c-kit Human genes 0.000 description 4
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 4
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 4
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 4
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 4
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 4
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 4
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 4
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 4
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 4
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 4
- 108091006047 fluorescent proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000034287 fluorescent proteins Human genes 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 4
- BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N geneticin Chemical compound O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](C(C)O)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N BRZYSWJRSDMWLG-CAXSIQPQSA-N 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 229960002989 glutamic acid Drugs 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 4
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 4
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical class O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 4
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 4
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 4
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 4
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 4
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 201000008968 osteosarcoma Diseases 0.000 description 4
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 4
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 4
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 4
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 4
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 4
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 4
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 4
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 4
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 4
- 102100027123 55 kDa erythrocyte membrane protein Human genes 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 3
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 102100023046 Band 4.1-like protein 3 Human genes 0.000 description 3
- 108050002669 Band 4.1-like protein 3 Proteins 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 3
- 101800001318 Capsid protein VP4 Proteins 0.000 description 3
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 3
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 3
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 3
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 3
- 101000590691 Homo sapiens MAGUK p55 subfamily member 2 Proteins 0.000 description 3
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102100032498 MAGUK p55 subfamily member 2 Human genes 0.000 description 3
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 3
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 3
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 3
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 3
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 3
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 3
- 102100027609 Rho-related GTP-binding protein RhoD Human genes 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 3
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 3
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 3
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 3
- 102000044209 Tumor Suppressor Genes Human genes 0.000 description 3
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 3
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 3
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 3
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 3
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 3
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 3
- 238000004422 calculation algorithm Methods 0.000 description 3
- 239000006143 cell culture medium Substances 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N chembl402140 Chemical compound Cl.C1=2C=C(C)C(NCC)=CC=2OC2=C\C(=N/CC)C(C)=CC2=C1C1=CC=CC=C1C(=O)OCC VYXSBFYARXAAKO-WTKGSRSZSA-N 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 3
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 3
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 3
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 3
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 3
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 3
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 3
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 3
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000003125 immunofluorescent labeling Methods 0.000 description 3
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 3
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 3
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 3
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 3
- 208000003849 large cell carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000013610 patient sample Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 3
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 3
- 235000013930 proline Nutrition 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000006722 reduction reaction Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 3
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 3
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CZIHNRWJTSTCEX-UHFFFAOYSA-N 2 Acetylaminofluorene Chemical compound C1=CC=C2C3=CC=C(NC(=O)C)C=C3CC2=C1 CZIHNRWJTSTCEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 108060000903 Beta-catenin Proteins 0.000 description 2
- 102000015735 Beta-catenin Human genes 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000004366 CD4-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- QCMYYKRYFNMIEC-UHFFFAOYSA-N COP(O)=O Chemical class COP(O)=O QCMYYKRYFNMIEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000000905 Cadherin Human genes 0.000 description 2
- 108050007957 Cadherin Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000011068 Cdc42 Human genes 0.000 description 2
- 108050001278 Cdc42 Proteins 0.000 description 2
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 2
- 102100031048 Coiled-coil domain-containing protein 6 Human genes 0.000 description 2
- 241000938605 Crocodylia Species 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 208000000461 Esophageal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 2
- 108020004202 Guanylate Kinase Proteins 0.000 description 2
- 101000777370 Homo sapiens Coiled-coil domain-containing protein 6 Proteins 0.000 description 2
- 101000907578 Homo sapiens Forkhead box protein M1 Proteins 0.000 description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 108050007394 Kinesin-like protein KIF20B Proteins 0.000 description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 2
- 241000713869 Moloney murine leukemia virus Species 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 101100219376 Mus musculus Cadm1 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091061960 Naked DNA Proteins 0.000 description 2
- 206010029719 Nonspecific reaction Diseases 0.000 description 2
- 206010030155 Oesophageal carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 108091008606 PDGF receptors Proteins 0.000 description 2
- 102000000470 PDZ domains Human genes 0.000 description 2
- 108050008994 PDZ domains Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 108010009711 Phalloidine Proteins 0.000 description 2
- 102000011653 Platelet-Derived Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 2
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical compound CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108700020978 Proto-Oncogene Proteins 0.000 description 2
- 102000052575 Proto-Oncogene Human genes 0.000 description 2
- 238000004617 QSAR study Methods 0.000 description 2
- 108010016790 RNA-Induced Silencing Complex Proteins 0.000 description 2
- 102000000574 RNA-Induced Silencing Complex Human genes 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 208000021712 Soft tissue sarcoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 101710137500 T7 RNA polymerase Proteins 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102100035071 Vimentin Human genes 0.000 description 2
- 108010065472 Vimentin Proteins 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 2
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 2
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 2
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 2
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000560 biocompatible material Substances 0.000 description 2
- 239000003181 biological factor Substances 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 230000009087 cell motility Effects 0.000 description 2
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 230000017455 cell-cell adhesion Effects 0.000 description 2
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008045 co-localization Effects 0.000 description 2
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 2
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 2
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 2
- 201000004101 esophageal cancer Diseases 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002795 fluorescence method Methods 0.000 description 2
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 2
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 102000009543 guanyl-nucleotide exchange factor activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040001860 guanyl-nucleotide exchange factor activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000006638 guanylate kinase Human genes 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 2
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 2
- 239000007758 minimum essential medium Substances 0.000 description 2
- 238000012900 molecular simulation Methods 0.000 description 2
- 210000004412 neuroendocrine cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000002515 oligonucleotide synthesis Methods 0.000 description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 102000006271 p21-Activated Kinases Human genes 0.000 description 2
- 108010058266 p21-Activated Kinases Proteins 0.000 description 2
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 229920001451 polypropylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 238000000611 regression analysis Methods 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N serine phosphoethanolamine Chemical compound [NH3+]CCOP([O-])(=O)OCC([NH3+])C([O-])=O UQDJGEHQDNVPGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 2
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 2
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000005760 tumorsuppression Effects 0.000 description 2
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 2
- 108700026220 vif Genes Proteins 0.000 description 2
- 210000005048 vimentin Anatomy 0.000 description 2
- 229920003169 water-soluble polymer Polymers 0.000 description 2
- ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N (2s)-2-amino-4-benzylpentanedioic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ATCFYQUZTYQTJN-AXDSSHIGSA-N 0.000 description 1
- GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-azaniumyl-3-(4-nitrophenyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 GTVVZTAFGPQSPC-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 125000000027 (C1-C10) alkoxy group Chemical group 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N (S)-malic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- FVPXJPVSJNSJBL-UHFFFAOYSA-N 1h-pyrimidine-2,4-dione;1,3-thiazole Chemical compound C1=CSC=N1.O=C1C=CNC(=O)N1 FVPXJPVSJNSJBL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007445 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Human genes 0.000 description 1
- 108010086241 2',5'-Oligoadenylate Synthetase Proteins 0.000 description 1
- VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 2'-deoxyinosine Chemical group C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(N=CNC2=O)=C2N=C1 VGONTNSXDCQUGY-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- DJYVEBBGKNAHKE-UHFFFAOYSA-N 2-(azaniumylmethyl)-3-phenylpropanoate Chemical compound NCC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 DJYVEBBGKNAHKE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027962 2-5A-dependent ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010000834 2-5A-dependent ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YLTNWAQTQJRBKR-LURJTMIESA-N 2-methyl-L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@](N)(C)CCC(N)=O YLTNWAQTQJRBKR-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 238000005084 2D-nuclear magnetic resonance Methods 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybutyric acid Chemical compound OCCCC(O)=O SJZRECIVHVDYJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 5-prop-1-ynyl-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical class CC#CC1=CNC(=O)NC1=O UJBCLAXPPIDQEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 8-azaguanine Chemical compound NC1=NC(O)=C2NN=NC2=N1 LPXQRXLUHJKZIE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005508 8-azaguanine Drugs 0.000 description 1
- 208000010507 Adenocarcinoma of Lung Diseases 0.000 description 1
- 206010068873 Adenosquamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000000275 Adrenocorticotropic Hormone Substances 0.000 description 1
- 208000009746 Adult T-Cell Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000016683 Adult T-cell leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 1
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 241000701412 Baculoviridae Species 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001301278 Cerion Species 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 241000725101 Clea Species 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 1
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000003712 Complement factor B Human genes 0.000 description 1
- 108090000056 Complement factor B Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000218631 Coniferophyta Species 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 102400000739 Corticotropin Human genes 0.000 description 1
- 101800000414 Corticotropin Proteins 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 208000014311 Cushing syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229920001651 Cyanoacrylate Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- 230000005778 DNA damage Effects 0.000 description 1
- 231100000277 DNA damage Toxicity 0.000 description 1
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 108700019745 Disks Large Homolog 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100022264 Disks large homolog 4 Human genes 0.000 description 1
- 108700008847 Drosophila sdt Proteins 0.000 description 1
- 239000006145 Eagle's minimal essential medium Substances 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 240000008620 Fagopyrum esculentum Species 0.000 description 1
- 235000009419 Fagopyrum esculentum Nutrition 0.000 description 1
- 108010003471 Fetal Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004641 Fetal Proteins Human genes 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 201000005569 Gout Diseases 0.000 description 1
- 102000016285 Guanine Nucleotide Exchange Factors Human genes 0.000 description 1
- 108010067218 Guanine Nucleotide Exchange Factors Proteins 0.000 description 1
- 101710188892 Guanylate kinase homolog Proteins 0.000 description 1
- 208000033855 HTLV-1 carrier Diseases 0.000 description 1
- 101000691214 Haloarcula marismortui (strain ATCC 43049 / DSM 3752 / JCM 8966 / VKM B-1809) 50S ribosomal protein L44e Proteins 0.000 description 1
- 206010019842 Hepatomegaly Diseases 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101001053980 Homo sapiens Disks large homolog 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000637411 Homo sapiens Rho guanine nucleotide exchange factor TIAM2 Proteins 0.000 description 1
- 101000891649 Homo sapiens Transcription elongation factor A protein-like 1 Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100029098 Hypoxanthine-guanine phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010050332 IQ motif containing GTPase activating protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N L-Homoarginine Natural products OC(=O)C(N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- FSBIGDSBMBYOPN-VKHMYHEASA-N L-canavanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCONC(N)=N FSBIGDSBMBYOPN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N L-cystine Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])CSSC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LEVWYRKDKASIDU-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N L-ethionine Chemical compound CCSCC[C@H](N)C(O)=O GGLZPLKKBSSKCX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N L-homoarginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCCNC(N)=N QUOGESRFPZDMMT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N L-homophenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC1=CC=CC=C1 JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 241000270322 Lepidosauria Species 0.000 description 1
- 239000000232 Lipid Bilayer Substances 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 238000000719 MTS assay Methods 0.000 description 1
- 231100000070 MTS assay Toxicity 0.000 description 1
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 1
- 108010058398 Macrophage Colony-Stimulating Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010085220 Multiprotein Complexes Proteins 0.000 description 1
- 102000007474 Multiprotein Complexes Human genes 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 description 1
- 206010060860 Neurological symptom Diseases 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 108091093105 Nuclear DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 230000004989 O-glycosylation Effects 0.000 description 1
- FSBIGDSBMBYOPN-UHFFFAOYSA-N O-guanidino-DL-homoserine Natural products OC(=O)C(N)CCON=C(N)N FSBIGDSBMBYOPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 102000043276 Oncogene Human genes 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000712464 Orthomyxoviridae Species 0.000 description 1
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241000711504 Paramyxoviridae Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010067902 Peptide Library Proteins 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 1
- 241000150350 Peribunyaviridae Species 0.000 description 1
- 102100038634 Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate-dependent Rac exchanger 1 protein Human genes 0.000 description 1
- 101710178012 Phosphatidylinositol 3,4,5-trisphosphate-dependent Rac exchanger 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920002732 Polyanhydride Polymers 0.000 description 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700625 Poxviridae Species 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 102100034053 Protein PALS2 Human genes 0.000 description 1
- 101710191290 Protein PALS2 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 description 1
- 230000004570 RNA-binding Effects 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- 102100034419 Ras GTPase-activating-like protein IQGAP1 Human genes 0.000 description 1
- 101710156978 Ras-like protein Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 241000712907 Retroviridae Species 0.000 description 1
- 241000711931 Rhabdoviridae Species 0.000 description 1
- 102100032206 Rho guanine nucleotide exchange factor TIAM2 Human genes 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 108010019965 Spectrin Proteins 0.000 description 1
- 102000005890 Spectrin Human genes 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N Sulphide Chemical compound [S-2] UCKMPCXJQFINFW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010034949 Thyroglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000009843 Thyroglobulin Human genes 0.000 description 1
- 241000710924 Togaviridae Species 0.000 description 1
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N Tunicamycin II Natural products O1C(CC(O)C2C(C(O)C(O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)C(O)C(O)C(NC(=O)C=CCCCCCCCCC(C)C)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1NC(C)=O YJQCOFNZVFGCAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 101150042678 VAV1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 1
- 108010004977 Vasopressins Proteins 0.000 description 1
- 102000002852 Vasopressins Human genes 0.000 description 1
- 244000195452 Wasabia japonica Species 0.000 description 1
- 235000000760 Wasabia japonica Nutrition 0.000 description 1
- HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N [3-[hydroxy(2-hydroxyethoxy)phosphoryl]oxy-2-[(e)-octadec-9-enoyl]oxypropyl] (e)-octadec-9-enoate Chemical compound CCCCCCCC\C=C\CCCCCCCC(=O)OCC(COP(O)(=O)OCCO)OC(=O)CCCCCCC\C=C\CCCCCCCC HMNZFMSWFCAGGW-XPWSMXQVSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 201000008395 adenosquamous carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 1
- 201000006966 adult T-cell leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 125000003172 aldehyde group Chemical group 0.000 description 1
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N alpha-hydroxysuccinic acid Natural products OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 1
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005576 amination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000006229 amino acid addition Effects 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000011091 antibody purification Methods 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 230000004596 appetite loss Effects 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 1
- 125000004104 aryloxy group Chemical group 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001815 biotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000006664 bond formation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000013276 bronchoscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 239000004067 bulking agent Substances 0.000 description 1
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N butyric aldehyde Natural products CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 239000003560 cancer drug Substances 0.000 description 1
- 230000005907 cancer growth Effects 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 208000035269 cancer or benign tumor Diseases 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000021523 carboxylation Effects 0.000 description 1
- 238000006473 carboxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 238000002783 cell motility assay Methods 0.000 description 1
- 238000002737 cell proliferation kit Methods 0.000 description 1
- 230000010307 cell transformation Effects 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 102000008373 cell-cell adhesion mediator activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040002566 cell-cell adhesion mediator activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 230000027288 circadian rhythm Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012411 cloning technique Methods 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000004040 coloring Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N corticotropin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1NC=NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO)C1=CC=C(O)C=C1 IDLFZVILOHSSID-OVLDLUHVSA-N 0.000 description 1
- 229960000258 corticotropin Drugs 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 208000031513 cyst Diseases 0.000 description 1
- 150000001944 cysteine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 210000005220 cytoplasmic tail Anatomy 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- 238000006471 dimerization reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 230000001882 diuretic effect Effects 0.000 description 1
- 101150069842 dlg4 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000036267 drug metabolism Effects 0.000 description 1
- 238000007877 drug screening Methods 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002124 endocrine Effects 0.000 description 1
- 210000003372 endocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000003239 environmental mutagen Substances 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000007705 epithelial mesenchymal transition Effects 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000034964 establishment of cell polarity Effects 0.000 description 1
- 125000004185 ester group Chemical group 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethanethiol Chemical compound CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 210000003499 exocrine gland Anatomy 0.000 description 1
- 239000013613 expression plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 description 1
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000004345 fruit ripening Effects 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N gamma-carboxy-L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(C(O)=O)C(O)=O UHBYWPGGCSDKFX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 230000004545 gene duplication Effects 0.000 description 1
- 102000034356 gene-regulatory proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000007429 general method Methods 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000026030 halogenation Effects 0.000 description 1
- 238000005658 halogenation reaction Methods 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N helium neon Chemical compound [He].[Ne] CPBQJMYROZQQJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019691 hematopoietic and lymphoid cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 102000054903 human CADM1 Human genes 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000033444 hydroxylation Effects 0.000 description 1
- 238000005805 hydroxylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000000937 inactivator Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 150000002496 iodine Chemical class 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010024378 leukocytosis Diseases 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 238000001638 lipofection Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 235000021266 loss of appetite Nutrition 0.000 description 1
- 208000019017 loss of appetite Diseases 0.000 description 1
- 201000005249 lung adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000004324 lymphatic system Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000001630 malic acid Substances 0.000 description 1
- 235000011090 malic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 206010027191 meningioma Diseases 0.000 description 1
- 239000002923 metal particle Substances 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000007431 microscopic evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000006740 morphological transformation Effects 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000002894 multi-fate stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003471 mutagenic agent Substances 0.000 description 1
- 231100000707 mutagenic chemical Toxicity 0.000 description 1
- 230000003505 mutagenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013188 needle biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 108010058731 nopaline synthase Proteins 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000011368 organic material Substances 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000003076 paracrine Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000002974 pharmacogenomic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 150000008298 phosphoramidates Chemical class 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000010399 physical interaction Effects 0.000 description 1
- 229920000191 poly(N-vinyl pyrrolidone) Polymers 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001583 poly(oxyethylated polyols) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000058 polyacrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000193 polymethacrylate Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 229920000131 polyvinylidene Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 201000009395 primary hyperaldosteronism Diseases 0.000 description 1
- 108010061031 pro-gastrin-releasing peptide (31-98) Proteins 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 108060006633 protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004043 responsiveness Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000033764 rhythmic process Effects 0.000 description 1
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 210000000717 sertoli cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 238000012868 site-directed mutagenesis technique Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 1
- 102000030938 small GTPase Human genes 0.000 description 1
- 108060007624 small GTPase Proteins 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- ILXAOQAXSHVHTM-UHFFFAOYSA-M sodium;2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OCC(N)(CO)CO ILXAOQAXSHVHTM-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000006104 solid solution Substances 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000920 spermatogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 208000017572 squamous cell neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 description 1
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000006491 synthase reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000006177 thiolation reaction Methods 0.000 description 1
- ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M thionine Chemical compound [Cl-].C1=CC(N)=CC2=[S+]C3=CC(N)=CC=C3N=C21 ANRHNWWPFJCPAZ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 208000008732 thymoma Diseases 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960002175 thyroglobulin Drugs 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011426 transformation method Methods 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 239000000225 tumor suppressor protein Substances 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N tunicamycin Chemical compound O([C@H]1[C@@H]([C@H]([C@@H](O)[C@@H](CC(O)[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C(NC(=O)C=C2)=O)O)O1)O)NC(=O)/C=C/CC(C)C)[C@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O ZHSGGJXRNHWHRS-VIDYELAYSA-N 0.000 description 1
- MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N tunicamycin Natural products CC(C)CCCCCCCCCC=CC(=O)NC1C(O)C(O)C(CC(O)C2OC(C(O)C2O)N3C=CC(=O)NC3=O)OC1OC4OC(CO)C(O)C(O)C4NC(=O)C MEYZYGMYMLNUHJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000011179 visual inspection Methods 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- 238000002424 x-ray crystallography Methods 0.000 description 1
- 229910052727 yttrium Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
- G01N33/57407—Specifically defined cancers
- G01N33/57423—Specifically defined cancers of lung
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/158—Expression markers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2400/00—Assays, e.g. immunoassays or enzyme assays, involving carbohydrates
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2500/00—Screening for compounds of potential therapeutic value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
Chute,J.P.et al.(1999)J.Clin.Oncol.17:1794−801 Chute,J.P.et al.(1997)Mayo Clin.Proc.72:901−12 Salgia,R.(1996)Adv.Oncol.12:8−15 Gibbs,J.B.and Oliff,A.(1994)Cell 79:193−8 Levitzki,A.and Gazit,A.(1995)Science 267:1782−8 Hibi,K.et al.(1991)Oncogene 6:2291−6 Yamanishi,Y.et al.(1996)Jpn.J.Cancer Res.87:534−42
(1)がんの診断方法であって、
A) 被験体におけるTSLC1 の発現の増加または糖鎖の変化を観察する工程であって、正常個体と比較して増大した該発現または変化した糖鎖の存在は、該被験体におけるがんの発現を示す、工程、
を包含する、方法。
(2)前記発現の増加は、mRNA またはタンパク質レベルで生じることを特徴とする、前項1に記載の診断方法。
(3)前記発現の増加は、mRNA レベルが、正常値の2倍以上になることである、前項1に記載の方法。
(4)前記発現の増加は、タンパク質レベルが、正常値の2倍以上になることである、前項1 に記載の方法。
(5)前記糖鎖の変化は、タンパク質の糖鎖パターンが正常パターンとは異なることであり、O−型またはN−型の糖鎖修飾の増加が認められることである、前項1に記載の方法。
(6)前記発現の増加は、8A+8B型スプライシング変異体の発現の増加を含む、前項1に記載の方法。
(7)前記8A+8B型スプライシング変異体は、配列番号1(塩基配列)または配列番号2(アミノ酸配列)により同定される、前項6に記載の方法。
(8)前記がんは、小細胞肺がんを含む、前項1に記載の方法。
(9)がんの診断方法であって、
A) 被験体におけるRacの活性化を観察する工程であって、正常個体と比較したときの発現の増加または活性の増加は、該被験体におけるがんの発現を示す、工程、
を包含する、方法。
(10)前記発現の増加は、mRNA またはタンパク質レベルで生じることを特徴とする、前項9に記載の診断方法。
(11)前記発現の増加は、mRNA レベルが、正常値の2倍以上になることである、前項9 に記載の方法。
(12)前記発現の増加は、タンパク質レベルが正常値の2倍以上になることである、前項9に記載の方法。
(13)前記活性の増加は、p21活性化キナーゼのRac 結合ドメインと結合可能なRacタンパク質の、細胞内全Rac タンパク質に占める割合として測定できるRacタンパク質の活性レベルが正常値の2倍以上になることである、前項9に記載の方法。
(14)前記がんは、小細胞肺がんを含む、前項9に記載の方法。
(15)前記レベルは、前記因子の特異的因子によって測定される、前項1または9に記載の方法。
(16)前記特異的因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される、前項15に記載の方法。
(17)前記特異的因子は、標識されまたは標識され得る、前項15に記載の方法。
(18)前記特異的因子は、配列番号1または配列番号5に示す配列の核酸分子に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を有する核酸分子である、前項15に記載の方法。
(19)前記特異的因子は、配列番号2または配列番号6に示す配列のポリペプチドに対する抗体である、前項15 に記載の方法。
(20)前記検出は、配列番号1または配列番号5に示す配列の核酸分子の全部または一部を増幅するように設計されたプライマーを含む試薬を用いて行われる、前項15に記載の方法。
(21)前記検出は、配列番号1または配列番号5に示す配列の核酸分子の全部または一部に相補的な配列となるように設計されたプローブを含む試薬を用いて行われる、前項15に記載の方法。
(22)前記検出は、配列番号2または配列番号6に示す配列のポリペプチドを特異的に認識する抗体を含む試薬を用いて行われる、前項15に記載の方法。
(23)前記検出は、活性化型Rac1を特異的に認識する抗体を含む試薬を用いて行われる、前項15 に記載の方法。
(24)がんの診断薬であって、TSLC1またはRac1のレベルを測定する手段を備える、診断薬。
(25)前記診断薬は、小細胞肺がんの診断薬である、前項24に記載の診断薬。
(26)前記手段は、前記TSLC1の分子経路の因子の特異的因子である、前項24に記載の診断薬。
(27)前記特異的因子は、核酸分子、ポリペプチド、脂質、糖鎖、有機低分子およびそれらの複合分子からなる群より選択される、前項24に記載の診断薬。
(28)前記特異的因子は、標識されまたは標識され得る、前項24 に記載の診断薬。
(29)前記特異的因子は、配列番号1または配列番号5に示す配列の核酸分子に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を有する核酸分子である、前項24に記載の診断薬。
(30)前記特異的因子は、配列番号2または配列番号6に示す配列のポリペプチドに対する抗体
である、前項24に記載の診断薬。
(31)前記手段は、該Rac1の活性化を同定する手段である、前項24に記載の診断薬。
(32)前記手段は、細胞または血清においてRac1遺伝子の転写産物またはRac1タンパク質の有無を検出する手段である、前項24に記載の診断薬。
(33)前記手段は、配列番号1 または配列番号5 に示す配列の核酸分子の全部または一部を増幅するように設計されたプライマーを含む、前項24 に記載の診断薬。
(34)前記手段は、配列番号1 または配列番号5 に示す配列の核酸分子の全部または一部に相補的な配列となるように設計されたプローブを含む、前項24 に記載の診断薬。
(35)前記手段は、配列番号2 または配列番号6 に示す配列のポリペプチドを特異的に認識する抗体を含む、前項24 に記載の診断薬。
(36)前記手段は、活性化型Rac1 を特異的に認識する抗体を含む、前項24 に記載の診断薬。
(37)がんの診断薬をスクリーニングする方法であって、該方法は:
A) 正常被験体とがん患者とにおけるTSLC1またはRac1のレベルの相違を観察し、相違が見出される正常被験体とがん患者とを選択する工程;および
B) 選択された正常被験体とがん患者とにおいてTSLC1またはRac1のレベルと相関する因子を同定する工程
を包含する、方法。
(38)前項37に記載のスクリーニング方法で同定されたがんの診断薬。
(39)がんの診断薬をスクリーニングするシステムであって、該システムは:
A) 正常被験体とがん患者とにおけるTSLC1またはRac1のレベルの相違を観察し、相違が見出される正常被験体とがん患者とを選択する手段; および
B) 選択された正常被験体とがん患者とにおいてTSLC1またはRac1のレベルと相関する因子を同定する手段とをそなえる、システム。
以下に本明細書において特に使用される用語の定義を列挙する。
いる。
(a)配列番号1に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド;
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド;
(c)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド;
(d)配列番号1に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド;
(e)配列番号2に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド;
(f)(a)〜(e)のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド;または
(g)(a)〜(e)のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70%である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
(a)配列番号2に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド;
(b)配列番号2に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加およ
び欠失からなる群より選択される1の変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリ
ペプチド;
(c)配列番号1に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によっ
てコードされる、ポリペプチド;
(d)配列番号2に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド;または
(e)(a)〜(d)のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70 % であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
であり得る。
(a)配列番号5に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド;
(b)配列番号6に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド;
(c)配列番号6に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド;
(d)配列番号5に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド;
(e)配列番号6に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド;
(f)(a)〜(e)のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド;または
(g)(a)〜(e)のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70%である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
であり得る。
(a)配列番号6に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド;
(b)配列番号6に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド;
(c)配列番号5に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド;
(d)配列番号6に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド;または
(e)(a)〜(d)のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70%であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
であり得る。
(a)配列番号3に記載の塩基配列またはそのフラグメント配列を有するポリヌクレオチド;
(b)配列番号4に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするポリヌクレオチド;
(c)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が、置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有する改変体ポリペプチドまたはそのフラグメントであって、生物学的活性を有する改変体ポリペプチドをコードする、ポリヌクレオチド;
(d)配列番号3に記載の塩基配列のスプライス変異体もしくは対立遺伝子変異体またはそのフラグメントである、ポリヌクレオチド;
(e)配列番号4に記載のアミノ酸配列からなるポリペプチドの種相同体またはそのフラグメントをコードする、ポリヌクレオチド;
(f)(a)〜(e)のいずれか1つのポリヌクレオチドにストリンジェント条件下でハイブリダイズし、かつ生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド;または
(g)(a)〜(e)のいずれか1つのポリヌクレオチドまたはその相補配列に対する同一性が少なくとも70%である塩基配列からなり、かつ、生物学的活性を有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド、
であり得る。
(a)配列番号4に記載のアミノ酸配列またはそのフラグメントからなる、ポリペプチド;
(b)配列番号4に記載のアミノ酸配列において、1以上のアミノ酸が置換、付加および欠失からなる群より選択される1つの変異を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド;
(c)配列番号3に記載の塩基配列のスプライス変異体または対立遺伝子変異体によってコードされる、ポリペプチド;
(d)配列番号4に記載のアミノ酸配列の種相同体である、ポリペプチド;または
(e)(a)〜(d)のいずれか1つのポリペプチドに対する同一性が少なくとも70%であるアミノ酸配列を有し、かつ、生物学的活性を有する、ポリペプチド、
であり得る。
Tm(℃)=81.5+16.6(log[Na+])+0.41(%G+C)−600/N−0.72(% ホルムアミド)
ここで、Nは、形成される二重鎖の長さであり、[Na+]は、ハイブリダイゼーション溶液または洗浄溶液中のナトリウムイオンのモル濃度であり、%G+Cは、ハイブリッド中の(グアニン+シトシン)塩基のパーセンテージである。不完全に一致したハイブリッドに関して、融解温度は、各1%不一致(ミスマッチ)に対して約1℃ずつ減少する。
Tm=(1つのA−T 塩基につき2℃)+(1つのG−C 塩基対につき4℃)
によって提供される。なお、6×クエン酸ナトリウム塩(SSC)におけるナトリウムイオン濃度は、1Mである(Suggsら、Developmental Biology Using Purified Genes、683頁、BrownおよびFox(編)(1981)を参照のこと)。
(2)BLASTNでヌクレオチドのクエリ配列をヌクレオチド配列データベースと比較;
(3)BLASTXでヌクレオチドのクエリ配列(両方の鎖)を つの読み枠で変換した概念的翻訳産物をタンパク質配列データベースと比較;
(4)TBLASTNでタンパク質のクエリ配列を6つの読み枠(両方の鎖)すべてで変換したヌクレオチド配列データベースと比較;
(5)TBLASTXでヌクレオチドのクエリ配列を6つの読み枠で変換したものを、6つの読み枠で変換したヌクレオチド配列データベースと比較。
診断対象から採取した細胞におけるTSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など)の遺伝子転写産物を検出する手法としては、特に限定されないが、以下の方法を採用することができる。
本明細書において、RT−PCRを適用する際には、例えば、先ず、診断対象の患者よりヘパリン化末梢血を採取する。このヘパリン化末梢血を比重遠心分離にかけ単核球を分離する。分離した単核球を患者検体とする。一方、コントロール検体としては、健常人のCD4陽性Tリンパ球を使用する。健常人のCD4陽性Tリンパ球は、健常人より採取したヘパリン化末梢血をCD8化、抗体混合物を用いて不要な細胞を沈降させた後、分離することができる。
プライマー1;ATGATCGATATCCAGAAAGACACT(配列番号7)
プライマー2;GTACTTCTAGATACCGCTGGG(配列番号8)
なお、TSLC1特異的プライマーは、上述の配列からなるオリゴヌクレオチドに限定されず、TSLC1遺伝子の塩基配列に基づいて適宜設計することができる。例えば、配列番号2に示したTSLC1遺伝子の塩基配列において、445〜721番目の領域を増幅できるようにTSLC1特異的プライマーを設計することが好ましい。445〜721番目の領域を増幅する場合には、非特異的な核酸断片の増幅を防ぐことができるために好ましいこれに限定されない。また、他のTSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など) もまた、同様にしてプライマーを設計することができる。
上記「RT−PCR」と同様の方法により、患者検体、コントロール検体を採取し、同様にRNAを分離、cDNAを合成する。蛍光ラベルした特異的合成オリゴヌクレオチドにより、同様にRealtime PCR 装置によりDNA合成を行う。
列番号9)
なお、特異的合成オリゴヌクレオチドは、上述の配列からなるものに限定されず、TSLC1遺伝子の塩基配列に基づいて適宜設計することができる。例えば、配列番号2に示したTSLC1遺伝子の塩基配列において、1159−1180番目の領域とハイブリダイズするように特異的合成オリゴヌクレオチドを設計することが好ましい。1159−1180番目の領域とハイブリダイズする場合には、特異的合成オリゴヌクレオチドの非特異的なハイブリダイズを防ぐことができるために好ましい。TSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など)についてもまた、同様に任意の設計することができることが理解される。
診断対象から採取した細胞におけるTSLC1遺伝子転写産物を検出する手法としては、上記「RT−PCR」と同様の方法により、患者検体、コントロール検体を採取し、同様にRNAを分離した後、TSLC1遺伝子のmRNAに特異的にハイブリダイズするオリゴヌクレオチドを用いて、TSLC1遺伝子転写産物を検出してもよい。また、上記「RT−PCR」と同様の方法によりRNAを分離してcDNAを合成し、合成したcDNAに特異的にハイブリダイズするプローブを用いて、TSLC1遺伝子転写産物を検出してもよい。
細胞または血清に含まれるTSLC1タンパク質を検出する際には、TSLC1タンパク質を特異的に認識する抗体(以下、TSLC1抗体と呼ぶ)を作製する。TSLC1抗体は、従来公知の手法を用いて作製することができる。なお、TSLC1抗体は、モノクローナル抗体であっても、ポリクローナル抗体であっても良い。他のTSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など)についても、同様に抗体を作製することができる。
以上のように調製したTSLC1モノクローナル抗体を用いて、診断対象の細胞の表面に存在するTSLC1タンパク質の有無をFACSスキャンにより検出することができる。この方法では、TSLC1モノクローナル抗体としては、配列番号1に示したTSLC1タンパク質のアミノ酸配列における232〜247番目のアミノ酸配列からなるペプチドを抗原として使用して得られたものを使用する。他のTSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など)についても、同様に抗原を設計することができる。
また、以上のように調製したTSLC1モノクローナル抗体を用いて、診断対象の血中に存在するTSLC1タンパク質を検出することができる。この方法では、TSLC1モノクローナル抗体としては、配列番号1に示したTSLC1タンパク質のアミノ酸配列における315〜331番目のアミノ酸配列からなるペプチドを抗原として使用して得られたものを使用する。他のTSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など)についても可溶性形態がある場合は、同様に抗原を設計することができることが理解される。
あるアミノ酸は、相互作用結合能力の明らかな低下または消失なしに、例えば、カチオン性領域または基質分子の結合部位のようなタンパク質構造において他のアミノ酸に置換され得る。あるタンパク質の生物学的機能を規定するのは、タンパク質の相互作用能力および性質である。従って、特定のアミノ酸の置換がアミノ酸配列において、またはそのDNAコード配列のレベルにおいて行われ得、置換後もなお、もとの性質を維持するタンパク質が生じ得る。従って、生物学的有用性の明らかな損失なしに、種々の改変が、本明細書において開示されたペプチドまたはこのペプチドをコードする対応するDNAにおいて行われ得る。
本明細書において用いられる分子生物学的手法、生化学的手法、微生物学的手法は、当該分野において周知であり慣用されるものであり、例えば、Sambrook J.et al.(1989).Molecular Cloning:A Laboratory Manual,Cold Spring Harborおよびその3rd Ed.(2001);Ausubel,F.M.(1987).Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley−Interscience;Ausubel,F.M.(1989).Short Protocols in Molecular Biology:A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates and Wiley−Interscience;Innis,M.A.(1990).PCR Protocols:A Guide to Methods and Applications,Academic Press;Ausubel,F.M.(1992).Short Protocols in Molecular Biology:A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates;Ausubel,F.M.(1995).Short Protocols in Molecular Biology:A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Greene Pub.Associates;Innis,M.A.et al.(1995).PCR Strategies,Academic Press;Ausubel,F.M.(1999).Short Protocols in Molecular Biology:A Compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology,Wiley,and annual updates;Sninsky,J.J.et al.(1999).PCR Applications:Protocols for Functional Genomics,Academic Press、別冊実験医学「遺伝子導入&発現解析実験法」羊土社、1997などに記載されており、これらは本明細書において関連する部分(全部であり得る)が参考として援用される。
本発明において用いられるTSLC1の分子経路における任意の因子(例えば、TSLC1、Tiam1、Rac1など)などならびにそのフラグメントおよび改変体は、遺伝子工学技術を用いて生産することができる。
本発明では、本発明の開示をもとに、コンピュータモデリングによる薬物が提供されることも企図される。
本発明の因子によって調製された組成物は、生物への移入に適した形態であれば、任意の製剤形態で提供され得る。そのような製剤形態としては、例えば、液剤、注射剤、徐放剤が挙げられる。投与経路としては経口投与、非経口投与、患部への直接投与などが挙げられる。
れる。
のような形態を採っていてもよい。
このようにして調製した二本鎖ポリヌクレオチドを導入する被導入体としては、標的遺伝子がその細胞内でRNAに転写、またはタンパク質に翻訳され得るものであれば如何なるものであってもよい。具体的には、本発明で用いる被導入体は、細胞、組織、あるいは個体を意味する。本発明に用いられる細胞としては、生殖系列細胞、体性細胞、分化全能細胞、多分化能細胞、分割細胞、非分割細胞、実質組織細胞、上皮細胞、不滅化細胞、または形質転換細胞等何れのものであってもよい。具体的には、例えば、幹細胞のような未分化細胞、器官または組織由来の細胞あるいはその分化細胞等が挙げられる。組織としては、単一細胞胚ま たは構成性細胞、または多重細胞胚、胎児組織等を含む。また、上記分化細胞としては、例えば、脂肪細胞、繊維芽細胞、筋細胞、心筋細胞、内皮細胞、神経細胞、グリア、血液細胞、巨核球、リンパ球、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、マスト細胞、白血球、顆粒球、ケラチン生成細胞、軟骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞、肝細胞および内分泌線または外分泌腺の細胞等が挙げられる。このような細胞の具体例としては、CHO−KI細胞(RIKEN Cell bank)、ショウジョウバエS2細胞(Schneider,I.,et al.,J.Embryol.Exp.Morph.,27,353−365(1972))、ヒトHeLa細胞(ATCC:CCL−2)、あるいはヒトHEK293細胞(ATCC:CRL−1573)等が好ましく用いられる。さらに、本発明で被導入体として用いられる個体として、具体的には、植物、動物、原生動物、ウイルス、細菌、または真菌種に属するもの等が挙げられる。植物は単子葉植物、双子葉植物または裸子植物であってよく、動物は、脊椎動物または無脊椎動物であってよい。本発明の被導入体として好ましい微生物は、農業で、または工業によって使用されるものであり、そして植物または動物に対して病原性のものである。真菌には、カビおよび酵母形態両方での生物体が含まれる。脊椎動物の例には、魚類、ウシ、ヤギ、ブタ、ヒツジ、ハムスター、マウス、ラット、サルおよびヒトを含む哺乳動物が含まれ、無脊椎動物には、線虫類および他の虫類、キイロショウジョウバエ(Drosophila)、および他の昆虫が含まれる。上記培養細胞として、具体的には、例えば、CHO−KI細胞(RIKEN Cell bank)、ショウジョウバエS2細胞(Schneider,I.,et al.,J.Embryol.Exp.Morph.,27,353−365(1972))、ヒトHeLa細胞(ATCC:CCL−2)、あるいはヒトHEK293細胞(ATCC:CRL−1573)等が好ましく用いられる。
(RNAi 技術を用いた体内の遺伝子の発現阻害による遺伝子機能解析方法)
本発明の二本鎖ポリヌクレオチドによる導入体内の遺伝子の発現阻害の結果、該導入体に現れる表現型の変化を解析することにより導入した二本鎖ポリヌクレオチドが標的とする遺伝子の機能を同定することができる。
本発明の二本鎖ポリヌクレオチドを用いた標的遺伝子の発現阻害により、細胞、組織、あるいは個体に特定の性質を付与することができる。特定の性質とは、標的遺伝子の発現阻害の結果、該導入体に現れるものをさす。ここでの標的遺伝子としては、その発現の阻害が導入体に与える性質がすでに判明しているものでもよいし、機能、もしくは導入体内での機能が未知のものでもよい。機能が未知の標的遺伝子については、これに対する二本鎖ポリヌクレオチドを導入した後に、該導入体が示す表現型のうち所望のものを選択することにより、該導入体に所望の性質を付与することができる。
本明細書において上記したRNAi技術は、被導入体に標的遺伝子の少なくとも一部の塩基配列と実質的に同一の配列を有するDNAとRNAからなる二本鎖ポリヌクレオチドを導入する方法であるが、本発明の方法では、さらに(a)指標タンパク質をコードするDNAを含む発現ベクター、(b)該指標タンパク質をコードする塩基配列の少なくとも一部の塩基配列と実質的に同一の配列を有するDNAとRNAからなる二本鎖ポリヌクレオチドを導入し、該指標タンパク質から発せられる信号量を指標として導入体を一次スクリーニングすることにより、導入体内での遺伝子の発現阻害がかかった導入体のみを解析することができ、効率的な解析を行うことができる。
本明細書において記載したRNAi技術実施するためのキットとしては、二本鎖ポリヌクレオチド、指標タンパク質をコードするDNAを含むベクター、指標遺伝子の少なくとも一部の塩基配列と実質的に同一の配列を有するDNAとRNAからなる二本鎖ポリヌクレオチド、酵素、バッファー等の試薬類、ポリヌクレオチオド導入のための試薬類等が含まれる。本発明のキットは、これら全ての試薬類等を含む必要はなく、上記した本発明の方法に用いられるキットであればいかなる試薬類等の組み合わせであってもよい。
以下に本発明の好ましい実施形態を説明する。以下に提供される実施形態は、本発明のよりよい理解のために提供されるものであり、本発明の範囲は以下の記載に限定されるべきでないことが理解される。従って、当業者は、本明細書中の記載を参酌して、本発明の範囲内で適宜改変を行うことができることは明らかである。
を包含する、方法を提供する。
を包含し得る。ここで、対象となるがんは、小細胞肺がんであり得る。1つの実施形態では、小細胞肺がんでは、TSLC1の分子経路の因子は、TSLC1、Tiam1およびRac1 であってもよい。
別の局面において、本発明は、TSLC1の分子経路を調節する因子の、がんの診断のための組成物の製造における、使用を提供する。ここで、対象となるがんは、小細胞肺がんであり得る。1つの実施形態では、小細胞肺がんでは、TSLC1の分子経路の因子は、TSLC1、Tiam1およびRac1であってもよい。他の好ましい実施形態では、本明細書において上記組成物、方法、システムにおいて説明されるのと同様の任意の好ましい形態を採ることができることが理解される。
本実施例では、小細胞肺がんにおけるTSLC1の過剰発現を確認し、TSLC1の過剰発現は、小細胞肺がんの指標と成り得ることを確認した。
ヒトTSLC1タンパク質に対するポリクローン性抗体CC2は、TSLC1タンパク質のカルボキシル末端の18アミノ酸からなるポリペプチドをKLH(キーホールリンペットヘモシニアン)と融合したタンパク質を抗原とし、ウサギを免疫して得た抗血清から、抗原の親和性カラムにより精製して作製した。ヒト小細胞肺がん組織をホルマリンで固定し、パラフィンで包埋し、5μm厚さの連続切片として切り出した。この切片を脱パラフィン、脱水した後、1mM EDTA溶液中で120℃、5分間加熱した。非特異的反応は、切片を5% 正常ロバ血清を含むTBS(Tris−NaCl,pH7.5;終濃度 25mM Tris、150mM NaCl)溶液に浸すことで阻止した。これらの切片を抗TSLC1抗体CC2を含む溶液(1%NDS(normal donkey serum;正常ロバ血清)を含むTBS溶液で2,000:1に希釈した溶液)に浸し、4℃で一晩反応させた。次に、切片を標識したポリマー、並びにわさび由来ペルオキシダーゼとともに室温で1時間反応させ、TBS溶液で緩徐に洗い、3,3’−ジアミノベントジンで覆って、3 分間反応させた。この切片を光学顕微鏡により観察した。
KLHと融合したTSLC1のカルボキシル末端の18アミノ酸の合成ポリペプチドN−INAEGGQNNSEEKKEYFI−C(配列番号10)を、免疫原として使用して、ウサギ抗TSLC1ポリクローナル抗体である、CC2を惹起した。TSLC1(CC2)のC末端またはTSLC1のエクトドメイン(EC)に対するウサギポリクローナル抗体(pAb) は、周知の手段により調製され得る。
ポリ(A)RNAは、Invitrogen社のFastTrack2.0のような市販のキットを用いて、培養細胞から抽出した。正常肺、並びに正常脳由来のポリ(A)RNAは、Clontech社から購入した。1μgのポリ(A)RNAを1%アガロース・ホルムアルデヒド・ゲルによる電気泳動により分離し、Amersham社のハイボンドN+にトランスファーした。TSLC1の検出には、TSLC1 cDNAを含むプラスミドを鋳型としPCRにより増幅して得た961塩基対の断片(TSLC1cDNAの翻訳開始コドンの第1塩基から数えて411−1,371塩基までに相当する断片の相補的塩基配列)をプローブとして用い、これを[32P]dCTP を用いてAmersham Bioscince 社のマルチプライム DNA ラベリングシステムを用いて放射線標識した。
全細胞RNAはQiagen社のRNeasy Mini Kitにて抽出した。1μgの全細胞RNAを鋳型として、RNase阻害剤の存在下にInvitrogen社のSuperScriptIIなどの酵素により逆転写酵素反応を行った。その反応液の一部を鋳型として、TAKARA社のExTaq DNAポリメラーゼなどのDNAポリメラーゼを用いてPCRを行い、TSLC1cDNAのエクソン7−9の領域を増幅した。PCRのプライマーとしては、5’−GTGATGGTAACTTGGGTGAGAGTC−3’(配列番号11);5’−CCAGAATGATGAGCAAGCACAG−3’(配列番号12)を用い、前者の5’末端をテキサスレッドで標識した。得られた断片をポリアクリルアミドゲル電気電子泳動にて分離し、蛍光標識を検出した。
図1 に小細胞肺がんにおけるTSLC1の過剰発現を示す。図1A には.TSLC1 特異抗体を用いた免疫組織染色が示される。小細胞肺がんにおけるTSLC1タンパク質の過剰発現が認められる。図1Bには、TSLC1のノーザン・ブロット解析が示される。小細胞肺がんでTSLC1の過剰発現が高頻度に認められる。
本実施例では、小細胞肺がんでは、TSLC1の変異体が発現され、糖鎖修飾が異なることを実証する。
がん細胞から抽出した全細胞RNAを鋳型とし、オリゴdTプライマーを用いてSuper Script 2等の逆転写酵素反応によりcDNA を作成する。次にこれを鋳型としてTSLC1遺伝子エクソン7,9に相当する以下のプライマーを用いて、Taq DNAポリメラーゼによりPCRを行う。この際、F−プライマーの5’末端を蛍光色素テキサスレッドで標識する。
F−プライマー:5’−GTGATGGTAACTTGGGTGAGAGTC−3’(配列番号11)
R−プライマー:5’−CCAGAATGATGAGCAAGCACAG−3’(配列番号12)
増幅産物を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動により自動塩基配列決定機を用いて分離し、蛍光色素を検出、定量する。コントロールとして、PCRにより合成した塩基配列既知のスプライシングバリアントに相当するDNA断片を電気泳動した。
N−型糖鎖付加を阻害するためには、細胞培養液を5μg/mlのツニカマイシンを含む新鮮な培養液に交換して2日間培養した後、細胞を溶解し、TSLC1−GFPを検出するために抗GFP抗体を加えて反応させた。一方、N−型オリゴサッカライドを分解するためには、細胞溶解物を抗GFP抗体で免疫沈降し、沈降物を溶解液で3回洗い、150mM クエン酸ナトリウム(pH5.5)、0.6%SDS、1.5%β−メルカプトタノールを含む溶液の中で5分間煮沸した。続いて溶解したサンプルに1.5単位のN−グリコシダーゼF(Roche Diagnostics)を加え、37℃で一晩反応させた。最後にこのサンプルを、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて分離し、GFPを付加したTSLC1タンパク質を免疫ブロット法にて検出した。
O−型糖鎖付加を分解するためには、細胞を溶解して17,000×Gで20分間遠心分離し、上清を、O−glycosydase(Roche Applied Science)を加えたリン酸緩衝液(pH7.2)(最終濃度9.6mM、Nonidet P−40(最終濃度1%)を含む) に加え、37℃で24時間反応させた。最後にこのサンプルを、SDS−ポリアクリルアミドゲル電気泳動にて分離し、GFPを付加したTSLC1タンパク質を免疫ブロット法にて検出した。
図2に小細胞肺がんで高発現するTSLC1は特異的なスプライシング・バリアントであることを示す結果を示す。図3にTSLC1タンパク質の糖鎖修飾を実証する結果を示す。図2.小細胞肺がんで高発現するTSLC1は特異的なスプライシング・バリアントである。A.TSLC1遺伝子の臓器、病態特異的なスプライシングとO−型糖鎖修飾の違いを示す結果である。B.小細胞肺がんで認められるスプライシング・バリアントを示す結果である。B.小細胞肺がんで特異的に認められる 8A+8Bスプライシング・バリアント(赤字)。青字は正常肺をはじめ大部分の上皮組織で発現する8A型転写物である。 図3.TSLC1タンパク質の糖鎖修飾。A.TSLC1タンパク質のウエスタン・ブロット解析を示す。TSLC1タンパク質の分子量は、小細胞肺がん、ATL 細胞、上皮でそれぞれ異なる。B.N−型糖鎖、O−型糖鎖特異的な消化により、小細胞肺がんのTSLC1タンパク質は分子量が減少する。
TSLC1またはRac1の特異的因子を用いて小細胞肺がんの診断に用いることがで
きるかを確認する。
小細胞肺がんに特異的なTSLC1スプライス・バリアントのRT−PCR法を用いた検出により、小細胞肺がんを診断することが可能である。TSLC1スプライス・バリアント8A+8Bは培養小細胞肺がんに特異的に発現するが、正常肺組織や非小細胞肺がん、その他の組織には、精巣、脳(ごく少量)を除いて認められない。そこで、喀痰や末梢血液中に混在する小細胞肺がん細胞をこの方法で検出するモデル系を作成した。すなわち、小細胞肺がん細胞を正常リンパ球細胞で段階的に希釈した後、全細胞RNAを抽出し、逆転写酵素反応を行った後、スプライス・バリアント8A+8Bに特異的なプライマーを用いてPCR反応を行い、増幅産物をアガロースゲル電気泳動を用いて分離した。この結果、10−7まで希釈した場合でも、特異的スプライス・バリアントを検出することができた。この結果は、喀痰や抹消血に微量混在する小細胞肺がん細胞を検出することが可能であることを示す。抹消血中に小細胞肺がん細胞が相当量混入することは、がんの極く初期に考えにくいが、喀痰中への混入は初期からでも想定され、診断に応用することが可能と考えられる。
正常肺由来全細胞RNAはClontech社より購入した。培養細胞からの全細胞RNAの抽出は、Clontech社などの市販のキットを用いた。次に全細胞RNA 1μgを鋳型として市販のキットを用いた逆転写酵素反応により、cDNAを作成した。TSLC18A+8Bスプライス・バリアントの検出は、Advantage Klen TaqDNAポリメラーゼを用いたPCRにより行った。プライマーとしては、たとえば以下の塩基配列をもつオリゴヌクレオチドを用いる:5’−GTGATGGTAACTTGGGTGAGAGTC−3’(配列番号11);5’−CCAGAATGATGAGCAAGCACAG−3’(配列番号12)。増幅断片を4%アガロースゲル電気泳動により分離し、増幅産物をエチジウム・ブロミドを加えた後、紫外線照射により検出した。レーンの最左端に泳動した分子量マーカーにより、増幅産物を確認した。
(TSLC1発現誘導がん細胞の樹立)
Tet−Offコントロールを有する細胞株を構築し、イーグル最小必須培地(Sigma,St.Louis,MO)中で維持した。この最小培地には、0.1mM非必須アミノ酸(Invitrogen,Carlsbad,CA)、1.0mMピルビン酸ナトリウム(Invitrogen)、10% Tet system approved FBS(BD Biosciences)、100単位/mlペニシリン、および100μg/mlストレプトマイシン(Invitrogen)が、添加されていた。その関連遺伝子の発現を抑制するために、100μg/mlのドキシサイクリン(Dox)を、この培地に添加した。
製造業者のプロトコールに従って、Cell Titer 96 Aqueous Non−Radioactive Cell Proliferation Assay kit(Promega,Madison,WI)を使用するMTSアッセイによって、細胞増殖を調べた。
運動性を、マイクロポアチャンバアッセイによって決定した。細胞(4×105)を、8μmポアを有する6ウェルサイズのマイクロポアポリカーボネートメンブレンフィルタ(Becton Dickinson Labware,Lincoln Park,NJ)の頂部チャンバに播いた。そして、その底部チャンバは、化学誘引物質として2%のウシ胎仔血清を含む、RPMI1640およびHam’s F12の混合培地で満たした。37℃のインキュベーションの16時間後に、そのメンブレンを固定して、そして、Diff Quik試薬(International Reagents,Inc,Kobe,Japan)で染色して、そして、そのメンブレンを通過して移動した細胞の全てを、光学顕微鏡で計数した。各実験は、三連のウェルで、実施し、3回反復した。
その浸潤能力を、浸潤チャンバアッセイによって決定した。細胞(3×104)を、8μmポアを有する14ウェルサイズのMatrigel被覆マイクロポアメンブレンフィルタ(Becton Dickinson Labware)の底部チャンバに播き、そして、その底部チャンバを、化学誘引物質として2%のウシ胎仔血清を含む、RPMI1640およびHam’s F12の混合培地で満たした。37℃のインキュベーションの22時間後に、そのメンブレンを固定して、そして、Diff Quik試薬(International Reagents,Inc,Kobe,Japan)で染色した。次いで、そのメンブレンを介して浸潤した細胞の全てを、光学顕微鏡のもとで計数した。実験の各々は、三連で実行し、そして、3 回反復した。
(動物)
雄性SCDマウス(6〜8週齢)を、CLEA(Tokyo,Japan)から得て、そして、この研究を通して、特定の病原体を含まない条件下で維持した。
FBSを、M.A.Biopoducts(Walkersville,MD)から購入した。抗アシアロGM1血清を、Wako(Osaka,Japan)から取得した。
TM−β1 Ab(1mg/0.3ml PBS/マウス)また抗アシアロGM1血清(20μl/0.3ml PBS/マウス)を、腫瘍接種の2日前にSCIDの側尾静脈に注入した。腫瘍細胞を、Ca2+およびMg2+を含まないPBSで洗浄して、そして、所望の細胞濃度でそれと同じ溶液中に懸濁した。トリパンブルー排除法によって決定される細胞の生存率は、90%を超えるものであった。体積にして0.3mlの腫瘍細胞懸濁液を、麻酔をかけていない側尾静脈に注入した。示した期間の後に、そのマウスを屠殺し、そして、転移性のリンパ節の数を、計数した。それらの肝臓および腎臓における小瘤を、解剖顕微鏡を用いて計数した。
(免疫沈降、免疫ブロット法: 免疫沈降ウエスタンブロティング)
トランスフェクションの24時間、60mmディッシュ中の細胞を洗浄し、そして、氷上で10分間に亘って、500μlの溶解溶液(50mM Tris−HCl 、pH7 .5、150mM NaCl、5mM EDTA、1% Triton−X 100、1mM NaF、1mM Na3VO5、プロテアーゼインヒビターカクテル(Calbiochem,San Diego,CA))で処理した。上清を、4℃での15分間に亘る遠心分離を行った後に単離し、そして、そのタンパク質含量、タンパク質アッセイ試薬(Bio−Rad Labolatories,Hercules,CA)を使用して決定した。次いで、1μgの抗体を、500μgの細胞溶解物に添加して、4℃にて一晩にでインキュベートした。30μlの、プロテインA−セファロース 6MBの50%懸濁液(Amersham Biosciences)を、添加して、そして、室温で、1時間に亘ってインキュベートした。インキュベーション後に、ビーズを、5回、500μlの溶解緩衝液で洗浄し、そして、NuPAGEサンプル緩衝液中に再懸濁した。サンプルを、4〜12%NuPAGEminigels(Invitrogen)上で電気泳動して、そして、XCell SureLock Mini−Cell Apparatus(Invitrogen)を使用して、ポリビニレンジスルフィド(PVDF)メンブレン(Millipore,Bedford,MA)に移した。30分間に亘って、1%Tween 20および5%スキムミルクを含むTBSでブロッキングした後に、これらのフィルターを、1時間に亘って一次抗体とともにインキュベートし、洗浄し、そして、適切なHRP標識二次抗体(Amersham Pharmacia)とともにインキュベートした。特異的なタンパク質を、増強化学発光システム(Lumi−LightPLUS; Roche)を用いて検出した。
KLHと融合したTSLC1のカルボキシル末端の18アミノ酸の合成ポリペプチドN−INAEGGQNNSEEKKEYFI−C(配列番号10)を、免疫原として使用して、ウサギ抗TSLC1ポリクローナル抗体である、CC2を惹起した。TSLC1(CC2)のC末端またはTSLC1のエクトドメイン(EC)に対するウサギポリクローナル抗体(pAb)は、周知の手段により調製され得る。
安定に、TSLC1−GFP(MDCK/TSLC1−GFP)を発現する癌細胞を調製する為に、MDCK細胞を、製造業者のプロトコ−ルに従ってLipofectamine Plus試薬(Invitrogen)を用いて、pTSLC1−GFPでトランスフェクションした。安定なクローンを、500mg/mlのGeneticin(G418)(Invitrogen)を含む培地中で選択した。安定にトランスフェクションされたクローンを、300mg/mlのG418 の存在下で維持した。癌細胞を、上述のように、pTSLC1−GFPおよび/またはpTSLC1−HAを用いて、一過的にトランスフェクトした。
E.coli中で発現されるGST−TSLC1融合タンパク質を、製造者のプロトコルに従ってグルタチオンセファロース4B(Amersham Biosciences)を使用して精製した。[35S]メチオニン標識MPPs−HAタンパク質を、TNT T7 Quick Coupled transcription/translation system(Promega,Madison,WI)を使用して合成した。GST融合タンパク質に対する放射性標識したMPPの結合は、以前に記載されている(Yageta et al.,2002)。結合タンパク質のシグナル強度およびGST融合タンパク質の量を、ソフトウェアNIH Image versio 1.62 を使用して定量化し、そして、その結合親和性を、GST融合タンパク質の量に関して調節した。
それらの2次元極性実験について、細胞を、24mm Trans−well−COLコラーゲン被覆フィルター不活性体(Costar,Cambridge,MA)につき105細胞の密度で播いた。そして、5〜6日間に亘ってコンフルエンスになるまで増殖させた。これらの細胞を、固定し、免疫染色し、そして、上述のように、共焦点顕微鏡によって調べた。核DNAを染色する際に、TOTO−3 iodide(Invitrogen)TM(これ全体で商品名)、二次抗体を含む溶液に添加した。コラーゲンI型ゲル中のシストの免疫蛍光染色を、前掲したよう実施した。
BIOCOATコラーゲン被覆した8ウェルの培養スライド(Becton Dickinson Labware,Bedford,MA)上に播いて、その2日後に固定した。極性実験のために、MDCK/TSLC1−GFP細胞またはCaco−2細胞を、Trans−well−COLコラーゲン被覆フィルター不活性体(Costar,Cambridge,MA)につき105細胞の密度で播いて、そして、コンフルエンスになるまで3〜4日間に亘って増殖させた。これらの細胞を、PBS(pH7.2)で2回洗浄して、PBS中の4%パラホルムアルデヒドを用いて20分間に亘って、室温で固定した。
(発現ベクターおよびトランスフェクション)
pTRE2/TSLC1を得るために、TSLC1 cDNAを、pTRE2hygroベクター(BD Biosciences)にクローニングした。短縮化したTSLC1フラグメントを、テンプレートとしてpTSLC1−HAまたはpcTSLC1を使用して、PCRによって作製して、pTREhygroベクターにクローニングした。TSLC1(ΔC−HA)の細胞質性テイルを欠く変異体を作製するために、397〜422に位置するアミノ酸(aa)残基を取り除き、そして、396の残基を、HAエピトープタグと融合させた。この短縮化変異体である、プロテイン4.1−BMおよびプロテインPDZ−BMを、それぞれ、タンパク質である4.1−BMを含む11アミノ酸(400〜410)、ならびにPDZ−BM(439〜422)を含む4アミノ酸を取り除くように設計した。これらの構築物を、製造者のプロトコルに従って、Fugene 6 reagent(Roche Applied Science)で、上述の細胞にトランスフェクトした。安定なクローンを、300μg/mlのハイグロマイシン(Invitrogen)を含む培地中で選択した。
3次元(3D)培養を、製造者(Nitta Gelatin,Osaka,Japan)のプロトコールに従って実施した。細胞を、コラーゲンI混合物に添加して、穏かに混合し、そして、5×103細胞/ウェルで12ウェルプレートにプレーティングした。5日齢シストを、一般的なシスト構造およびTSLC1の細胞内局在ならびに欠失変異体について調べた。管腔形成の誘導のために、4日齢のシストを、40ng/mlのHGF(Sigma)を含む新鮮な培地で刺激して、さらに4日間に亘ってインキュベートし、そして、位相差顕微鏡によって調べた。
細胞を、6ウェルプレート中に1×104細胞/ウェルで播いた。次の日に、それらの細胞に、40ng/ml HGFの存在下または非存在下の、新鮮な培地を供給して、そして、さらに17時間に亘ってインキュベートした。細胞分散を、位相差顕微鏡で調べた。
Rac1およびRhoの活性化を、それぞれ、Rac1活性化アッセイキットおよびRho活性化キット(Upstate)を使用して、その製造者のプロトコルに従って、GST−プルダウンアッセイによって決定した。簡潔には、細胞を、100mm培養プレートあたり1×105細胞で播き、血清飢餓状態にして一晩置いた。次いで、それらの細胞を、種々の時間期間に亘って、40ng/ml HGFで刺激して、そして、MLB溶解緩衝液中で溶解した。Rac1−GTPおよびRho−GTPを、それぞれ、グルタチオン−アガロースビーズ上に固定された、グルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)タグ化p21活性化キナーゼ(PAK)−Rac1結合ドメイン(RBD)およびGSTタグ化Rhotekin−Rho結合ドメイン(RBD)を用いて、それらの溶解物から沈降させた。総溶解物および総沈降物を、免疫ブロッティングによって分析した。濃度計分析を、NIH イメージソフトウェアを用いて実施した。
実施例6に準じて、TSLC1タンパク質を用いてRac1の活性化が行われるかどうかを確認することができる。
まず、TSLC1の分子経路の因子を活性化する可能性のある物質を、レポータージーンアッセイを用いてスクリーニングする。
(方法)
リン酸緩衝化生理食塩水(PBS;10 mM リン酸塩;150mM 塩化ナトリウム, pH7.2−7.3)
ルシフェラーゼレポーターアッセイキット:
溶解溶液:25mM Tris(7.5)、2mM ジチオスレイトール(DTT),10%グリセロール、1% TritonX−100;ルシフェリンミックス:20mMトリシン(Tricine)/1.07mM(MgCO3)4Mg(OH)2−5H2O/2.67mMMgSO4/0.1mM EDTA/33.3mM DTT/270μM コエンザイム(Coenzyme)A/470μMルシフェリン/530μMATP(ニッポンジーンのピッカジーン(Code No.PGK−L100)を使用することができる)。
小細胞肺がん細胞(初代)、MDCK2細胞など。
これらの細胞は、適宜Dulbecco改変Eagle培地に10%ウシ胎仔血清などを用いて培養する。
ルシフェラーゼは、蛍光(約560nm)作る酵素である。細胞内に、アッセイするタンパク質をコードした核酸配列を含むプラスミドとレポータープラスミド(ルシフェラーゼレポーター)を同時に細胞に強制発現し、レポーター活性を測定する。ルシフェラーゼ遺伝子産物の発現による蛍光を測定することにより、遺伝子発現を測定することができる。
(1)上記プラスミドを用いて上記各々の細胞のトランスフェクションを行う。
(2)48〜72 時間、上記細胞を培養する。
(3)培養上清を除去する。
(4)培養に使用されているウェルまたはディッシュを洗浄する。
(5)細胞の溶解(24穴プレートの場合、溶解溶液200μl/ウェル)。
(6)ライゼートをEppendorfチューブへうつす。
(7)脱核(遠心分離15Krpm、3分、4℃)する。
(8)上清を別のEppendorfチューブへうつす
(9)液体シンチレーションカウンターにサンプルを挿入する。
(10)ルシフェリンミックスにサンプル上清を0.5μl加える。
(11)蛍光に起因するカウントを測定する。
実施例8において、がん細胞以外の細胞を用いて(株化細胞または初代培養細胞)、同様の実験を行う。ここで、がん細胞以外の細胞では、TSLC1の分子経路の因子の活性化効果がないか低いものを、好ましいヒットとして選択する。
次に、別のスクリーニングの系として、小細胞肺がん初代細胞、3T3−L1、3T3−F442または他の初代培養細胞を用いて、候補薬物ライブラリーの(種々の濃度での)存在下または非存在下で、これらの細胞を培養する。
実施例9〜11などで実施するスクリーニングは、ロボットを用いて自動化することができる。この場合、例えば、ベックマンコールターのBiomekシリーズを用いて、マイクロプレートを用いたシステムを構築するか、またはZymarkのStaccato Mini−Systemシリーズを用いてシステムを構築することができる。
実施例13〜16などで、小細胞肺がん特異的にTSLC1の分子経路の因子を活性化する可能性があることが判明した化合物について、マウス、ラットまたはサルなどの動物に投与してがん組織特異的にTSLC1の分子経路の因子mRNA発現量またはタンパク質量を低下させる化合物をスクリーニングする。
配列番号1は、TSLC1をコードする核酸配列(TSLC1 8A+8B型 cDNA の塩基配列)である。
配列番号2は、TSLC1のアミノ酸配列(TSLC1 8A+8Bのアミノ酸配列)である。
配列番号3は、Tiam1をコードする核酸配列(TIAM1 cDNAの塩基配列;アクセッション番号NM 003253)である。
配列番号4は、Tiam1のアミノ酸配列(アクセッション番号NM_003253)である。
配列番号5は、Rac1をコードする核酸配列(アクセッション番号NM_006908)である。
配列番号7および配列番号8は、TSLC1のsiRNAの、それぞれセンス配列およびアンチセンス配列の例である。
配列番号9は、TSLC1の特異的合成オリゴヌクレオチド配列である(TTCGCCATGCTGTGCTTGCTCA)。
配列番号10は、KLHと融合したTSLC1のカルボキシル末端の18アミノ酸の合成ポリペプチドN−INAEGGQNNSEEKKEYFI−C
配列番号11:TSLC1 8A+8B スプライス・バリアントの検出のためのプライマー5’−GTGATGGTAACTTGGGTGAGAGTC−3’
配列番号12:TSLC1 8A+8B スプライス・バリアントの検出のためのプライマー5’−CCAGAATGATGAGCAAGCACAG−3’
Claims (25)
- 小細胞肺がんの検査方法であって、
A) 被験体から採取された検体におけるTSLC1の発現の増加または糖鎖修飾の増加を観察する工程であって、正常検体と比較して増大した該発現または増加した糖鎖修飾の存在は、該被験体における小細胞肺がんの発現を示す、工程、
を包含する、方法。 - 前記発現の増加は、mRNAまたはタンパク質レベルで生じることを特徴とする、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記発現の増加は、mRNAレベルが、正常値の2倍以上になることである、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記発現の増加は、タンパク質レベルが、正常値の2倍以上になることである、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記糖鎖修飾の増加は、タンパク質の糖鎖パターンが正常パターンとは異なることであり、O−型またはN−型の糖鎖修飾の増加が認められることである、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記発現の増加は、8A+8B型スプライシング変異体の発現の増加を含む、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記工程は、被験体から採取された検体におけるTSLC1の発現の増加を観察する工程であって、ここで該発現の増加の観察を8A+8B型スプライシング変異体の発現の増加の観察により行い、正常検体と比較して増大した該発現の存在は、該被験体における小細胞肺がんの発現を示す、工程である、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記8A+8B型スプライシング変異体は、配列番号1(塩基配列)または配列番号2(アミノ酸配列)により同定される、請求項6または7に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- TSLC1の発現の増加は、TSLC1の特異的因子によって測定される、請求項1に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記特異的因子は、核酸分子、ポリペプチド、およびそれらの複合分子からなる群より選択される、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記特異的因子は、標識されたまたは標識されていない特異的因子である、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記特異的因子は、配列番号1に示す配列の核酸分子に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を有する核酸分子である、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記特異的因子は、配列番号2に示す配列のポリペプチドに対する抗体である、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記測定は、配列番号1に示す配列の核酸分子の全部または一部を増幅するように設計されたプライマーを含む試薬を用いて行われる、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記測定は、配列番号1に示す配列の核酸分子の全部または一部に相補的な配列となるように設計されたプローブを含む試薬を用いて行われる、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 前記測定は、配列番号2に示す配列のポリペプチドを特異的に認識する抗体を含む試薬を用いて行われる、請求項9に記載の小細胞肺がんの検査方法。
- 小細胞肺がんの診断薬であって、TSLC1の発現の増加を測定する試薬を含み、ここで該試薬は、TSLC1の核酸分子に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を有する核酸分子または、TSLC1タンパク質に対する抗体である、診断薬。
- 前記試薬は、標識されたまたは標識されていない試薬である、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
- 前記試薬は、配列番号1に示す配列の核酸分子に対してストリンジェントな条件下でハイブリダイズする配列を有する核酸分子である、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
- 前記試薬は、配列番号2に示す配列のポリペプチドに対する抗体である、請求項17に記載の診断薬。
- 前記試薬は、配列番号1に示す配列の核酸分子の全部または一部を増幅するように設計されたプライマーである、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
- 前記試薬は、配列番号1に示す配列の核酸分子の全部または一部に相補的な配列となるように設計されたプローブである、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
- 前記試薬は、配列番号11および配列番号12に示す配列の核酸分子である、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
- 前記試薬は、配列番号1に記載の塩基配列の第411番目から第1371番目の塩基配列の相補的塩基配列で示される核酸分子である、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
- 前記試薬は、配列番号9に示す配列の核酸分子である、請求項17に記載の小細胞肺がんの診断薬。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2007551990A JP5131751B2 (ja) | 2005-12-28 | 2006-12-26 | 小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005380332 | 2005-12-28 | ||
JP2005380332 | 2005-12-28 | ||
PCT/JP2006/325937 WO2007074832A1 (ja) | 2005-12-28 | 2006-12-26 | 小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 |
JP2007551990A JP5131751B2 (ja) | 2005-12-28 | 2006-12-26 | 小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2007074832A1 JPWO2007074832A1 (ja) | 2009-06-04 |
JP5131751B2 true JP5131751B2 (ja) | 2013-01-30 |
Family
ID=38218052
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2007551990A Expired - Fee Related JP5131751B2 (ja) | 2005-12-28 | 2006-12-26 | 小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP5131751B2 (ja) |
WO (1) | WO2007074832A1 (ja) |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2069793B9 (en) | 2006-08-29 | 2017-08-16 | Oxford BioTherapeutics Ltd | Identification of protein associated with hepatocellular carcinoma, glioblastoma and lung cancer |
AU2008298888A1 (en) * | 2007-09-11 | 2009-03-19 | Cancer Prevention And Cure, Ltd. | Identification of proteins in human serum indicative of pathologies of human lung tissues |
ES2639026T3 (es) | 2009-03-05 | 2017-10-25 | Oxford Biotherapeutics Ltd. | Anticuerpos totalmente humanos específicos para CADM1 |
-
2006
- 2006-12-26 JP JP2007551990A patent/JP5131751B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2006-12-26 WO PCT/JP2006/325937 patent/WO2007074832A1/ja active Application Filing
Non-Patent Citations (4)
Title |
---|
JPN6012019337; J.Biol.Chem., Dec.23,2005, Vol.280, No.51, p.42164-42171 * |
JPN6012019338; 第28回日本分子生物学会年会 講演要旨集,2005.11.25,p.498(2P-0898) * |
JPN6012019339; Mol.Cancer, Aug 2005, Vol.4:28 * |
JPN6012019342; 第28回日本分子生物学会年会 講演要旨集,2005.11.25,p.73(W2N-1) * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2007074832A1 (ja) | 2007-07-05 |
JPWO2007074832A1 (ja) | 2009-06-04 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5131946B2 (ja) | がんの診断、処置および/または予防、および/または浸潤・転移の抑制のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 | |
JP6223822B2 (ja) | 未分化リンパ腫キナーゼ(alk)キナーゼ阻害剤に耐性である癌の診断および治療のための方法および組成物 | |
JP4299886B2 (ja) | アポトーシス関連ペプチドをコードする遺伝子ファミリー、それによってコードされるペプチド、およびそれらの使用方法 | |
WO2014152777A2 (en) | Methods and compositions for the diagnosis and treatment of cancers resistant to ros1 inhibitors | |
KR20060069207A (ko) | 간세포암 또는 결장암에 관련된 유전자 및 폴리펩티드 | |
CN106460054A (zh) | 癌症中的融合基因 | |
US20020173461A1 (en) | Methods for enhancing the efficacy of cancer therapy | |
JP2007507206A (ja) | 幹細胞の増幅調節のための方法および組成物 | |
TW201243330A (en) | Method for analyzing sectretome, biomarker for lung cancer metastasis, and siRNA compound for inhibiting lung cancer metastasis | |
JP5131751B2 (ja) | 小細胞肺がんの診断のための方法、システムおよび組成物ならびに関連するスクリーニング方法 | |
EP1666600B1 (en) | Methods for enhancing the efficacy of cancer therapy | |
WO2008038832A1 (fr) | Agent thérapeutique, procédé de détection et kit de détection pour cancer du sein et cancer ovarien | |
TW201204393A (en) | Diagnostic agent and therapeutic agent of cancer | |
WO2008024459A2 (en) | Compositions and methods for modifying cellular properties | |
Tophkhane et al. | DVL1 variants and C-terminal deletions have differential effects on craniofacial development and WNT signaling | |
EP1682573B1 (en) | The use of eukaryotic genes affecting cell cycle control or cell cycle progression for diagnosis and treatment of proliferattive diseases | |
KR100865801B1 (ko) | 암 치료의 효능을 증진시키는 방법 | |
JP2010057497A (ja) | 抗癌剤の開発および癌の診断のための、腫瘍の発生に関与することが同定されたマウスゲノム領域の使用 | |
AU2004272737A1 (en) | The use of eukaryotic genes affecting spindle formation or microtubule function during cell division for diagnosis and treatment of proliferative diseases | |
JP4412734B2 (ja) | 脊椎動物の初期発生における中胚葉形成を支配する新規遺伝子BrachyuryExpressionNuclearInhibitor,BENI | |
WO2005090580A1 (ja) | 非ヒト動物モデルにおける転写活性測定方法、細胞数の測定方法及び腫瘍体積の測定方法 | |
Gariboldi et al. | Resistance of human leukemic cell lines to 1-β-D-arabinofuranosylcytosine: characterization of an experimental model | |
Katsman et al. | N-VEGF, the forgotten isoform of VEGF-A, activate cellular stress survival circuits | |
WO2004074430A2 (en) | Compositions, splice variants and methods relating to lung specific genes and proteins | |
JP2006298848A (ja) | リンパ球分化または増殖調節剤、およびそのスクリーニング方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20091117 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091209 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120417 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20120611 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120614 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20120611 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120913 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120920 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20121011 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20121031 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20151116 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5131751 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |