JP5118699B2 - Ｉｌ−１７ａに対する抗体 - Google Patents

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Description

本発明は一般的にＩＬ−１７Ａ特異的結合化合物、例えば抗体、及びその使用に関する。より特定すれば、本発明は特に炎症、自己免疫及び増殖性の障害において、ヒトＩＬ−１７Ａを認識し、そしてその活性をモジュレートするキメラ及びヒト化抗体に関する。
免疫系は感染性物質、例えば細菌、多細胞の生物、及びウィルスから、並びに癌から、個体を保護する機能を有する。この系は数種の型のリンパ様及び骨髄様の細胞、例えば単球、マクロファージ、樹状細胞（ＤＣ）、好酸球、Ｔ細胞、Ｂ細胞及び好中球を包含する。これらのリンパ様及び骨髄様の細胞は頻繁にはサイトカインとして知られているシグナリング蛋白を生産する。免疫応答は炎症、即ち全身性の、又は身体内の特定の位置における免疫細胞の蓄積を包含する。感染性物質又は外来性物質に応答して、免疫細胞はサイトカインを分泌し、次にこれが免疫細胞の増殖、発生、分化、又は遊走をモジュレートする。免疫応答はそれが例えば自己免疫疾患の場合のように過剰な炎症を伴っている場合は、病理学的な帰結をもたらす場合がある（例えばＡｂｂａｓ等（編）（２０００）Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ；Ｏｐｐｅｎｈｅｉｍ ａｎｄ Ｆｅｌｄｍａｎｎ（編）（２００１）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｖｏｎ Ａｎｄｒｉａｎ ａｎｄ Ｍａｃｋａｙ（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１０２０−１０３４；Ｄａｖｉｄｓｏｎ ａｎｄ Ｄｉａｍｏｎｄ（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４５：３４０−３５０参照）。
インターロイキン−１７Ａ（ＩＬ−１７Ａ；細胞毒性Ｔリンパ球関連抗原８（ＣＴＬＡ８）、ＩＬ−１７としても知られている）は抗原認識後にメモリーＴ細胞により生産されるホモ２量体サイトカインである。そのようなＴ細胞の発生はインターロイキン−２３（ＩＬ−２３）により促進される。ＭｃＫｅｎｚｉｅ等（２００６）Ｔｒｅｎｄｓ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２７（１）：１７−２３；Ｌａｎｇｒｉｓｈ等（２００５）Ｊ，Ｅｘｐ，Ｍｅｄ．２０１（２）：２３３−４０。ＩＬ−１７Ａは２つの受容体、即ちＩＬ−１７ＲＡ及びＩＬ−１７ＲＣを介して作用し、好中球の生物学、炎症及び臓器の破壊に関与する多くの分子の生産を誘導する。このサイトカインは組織壊死因子（ＴＮＦ）及び／又はインターロイキン１β（ＩＬ−１β）と相乗作用してより大きな炎症促進性の環境を促進する。抗体又は抗体の抗原結合フラグメントでＩＬ−１７Ａの活性に拮抗することが種々の炎症性、免疫性及び増殖性の障害、例えば慢性関節リューマチ（ＲＡ）、変形性関節症、慢性関節リューマチ骨粗鬆症、炎症性線維症（例えば硬皮症、肺線維症、及び肝硬変）、歯肉炎、歯周炎、又は他の炎症性の歯周病、炎症性腸障害（例えばクローン病、潰瘍性結腸炎及び炎症性腸疾患）、喘息（例えばアレルギー性喘息）、アレルギー、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、多発性硬化症、乾癬、及び癌の治療のために提案されてきた（例えば、特許文献１、特許文献２、特許文献３及び特許文献４参照）。
インビボの治療薬として抗体を使用する場合の最も顕著な制約は、抗体の免疫原性である。大部分のモノクローナル抗体はげっ歯類から誘導されているため、ヒトにおける反復使用は治療用抗体、例えばヒトの抗マウス抗体、即ちＨＡＭＡに対する免疫応答の発生をもたらす。そのような免疫応答は最小でも治療効力の損失、そして最大には潜在的な致命的アナフィラキシー応答をもたらす。げっ歯類抗体の免疫原性を低減させるための初期の研究ではマウス可変領域（Ｆｖ）をヒト定常領域と融合させたキメラ抗体を製造していた。Ｌｉｕ等（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：３４３９−４３。しかしながら、ヒト可変領域及びマウス定常領域のハイブリッドを注射したマウスはヒト可変領域に対して指向された強力な抗抗体応答を発生させ、そのようなキメラ抗体における全げっ歯類Ｆｖ領域の保有が患者において望ましくない免疫原性をなお生じさせている可能性を示唆している。
一般的に可変ドメインの相補性決定領域（ＣＤＲ）ループは抗体分子の結合部位を含んでいると考えられている。従ってげっ歯類ＣＤＲループのヒトフレームワークへのグラフティング（即ちヒト化）がげっ歯類配列を更に最小化するために試みられている。Ｊｏｎｅｓ等（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ２３９：１５３４。しかしながら、ＣＤＲループの交換は残念なことにまだ元の抗体とおなじ結合特性を有する抗体をもたらしていない。ヒト化抗体におけるＣＤＲループの支持に関与している残基であるフレームワーク残基（ＦＲ）の変化もまた抗原結合親和性を温存するために必要となる場合が多い。Ｋａｂａｔ等（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：１７０９。ＣＤＲグラフティング及びフレームワーク残基温存の使用が多くのヒト化抗体コンストラクトにおいて報告されているものの、特定の配列が所望の結合特性、そして場合により生物学的特性を有する抗体をもたらすことになるかを予測することは困難である。例えばＱｕｅｅｎ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９，Ｇｏｒｍａｎ等（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：４１８１及びＨｏｄｇｓｏｎ（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＹ）９：４２１−５を参照できる。更に又、以前の研究の大部分は動物の軽鎖及び重鎖の可変配列に対して異なるヒト配列を使用しており、そのような研究の予測性を疑わしいものとしていた。既知抗体の配列、或いはより典型的には、抗体ＮＥＷ及びＫＯＬのような既知のＸ線結晶構造を有する抗体のものが使用されている。例えばＪｏｎｅｓ等、上出；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ等、上出；及びＧｏｒｍａｎ等、上出、を参照できる。厳密な配列の情報が数種のヒト化コンストラクトに関して報告されている。
米国特許出願公開第２００３／０１６６８６２号明細書 国際公開第０５／１０８６１６号パンフレット 国際公開第０５／０５１４２２号パンフレット 国際公開第０６／０１３１０７号パンフレット
炎症性、自己免疫性、及び増殖性の障害のようなヒト障害の治療における使用のための抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体のようなＩＬ−１７Ａの拮抗剤の必要性が存在している。そのような拮抗剤は好ましくはヒト対象において低い免疫原性を呈し、有害な免疫応答を伴うことなく反復投与を可能とする。
本発明はヒト対象において高い結合親和性、中和活性、良好な薬物動態、及び低い抗原性を包含する望ましい特性１つ以上を有する抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体に関する。本発明は又疾患の治療における本発明の抗体の使用に関する。
従って、１つの実施形態において、本発明は、結合化合物、例えばヒトＩＬ−１７Ａに結合し、そしてその活性を抑制する抗体分子又はその結合フラグメントを提供する。一部の実施形態においては、結合分子は少なくとも１つの抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン及び少なくとも１つの抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン又はこれらのドメインの結合フラグメントを含み、ここで、ＶＬドメインは配列番号１１〜１３から選択される配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも特定数を含み、そしてＶＨドメインは配列番号１４〜２０から選択される配列を有するＣＤＲの少なくとも特定数を含み、ここで特定数は１、２又は３である。ＣＤＲの特定数は何れかの所定の結合化合物における軽鎖及び重鎖の可変ドメインに関して同じかまたは異なっていてよい。別の実施形態においては、ＶＨドメインのＣＤＲは配列番号１４、１７及び２０から選択される。更に別の実施形態においては、ＶＨドメインのＣＤＲは配列番号１４、１６及び１９から選択される。別の実施形態においては、ＶＬ及びＶＨドメインの配列はそれぞれ配列番号５及び６の配列である。一部の実施形態においては、ＩＬ−１７Ａ結合化合物はヒトＩＬ−１７Ａの活性を抑制する。
別の実施形態においては、結合化合物は少なくとも１つのＶＬドメイン及び少なくとも１つのＶＨドメイン、又はこれらのドメインの結合フラグメントを含み、ここでＶＬドメインは配列番号２６〜２８から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含み、そしてＶＨドメインは配列番号２９〜３１から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含む。別の実施形態において、ＶＬ及びＶＨドメインの配列はそれぞれ配列番号２２及び２３の配列である。別の実施形態においては、結合化合物はＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−７７３９を有するハイブリドーマから生産される抗体と同じＣＤＲを有する（ラット３０Ｃ１０、２００６年７月２０日にＪＬ７−３０Ｃ１０．Ｃ３株として寄託）。
別の実施形態においては、結合化合物は少なくとも１つのＶＬドメイン及び少なくとも１つのＶＨドメイン、又はこれらのドメインの結合フラグメントを含み、ここでＶＬドメインは配列番号４８〜５０から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含み、そしてＶＨドメインは配列番号５１〜５３から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含む。
更に別の実施形態においては、結合化合物は少なくとも１つのＶＬドメイン及び少なくとも１つのＶＨドメイン、又はこれらのドメインの結合フラグメントを含み、ここでＶＬドメインは配列番号３４〜３６から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含み、そしてＶＨドメインは配列番号３７〜３９から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含むか、又は、ＶＬドメインは配列番号５６〜５８から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含み、そしてＶＨドメインは配列番号５９〜６１から選択される配列を有するＣＤＲ１、２又は３つを含む。
種々の他の実施形態において、本発明は配列番号５及び６の各配列と少なくとも９５％、９０％、８５％、８０％、７５％、又は５０％の配列相同性を有するＶＬ及びＶＨドメインを有するヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物を提供する。別の実施形態においては、本発明の結合化合物は配列番号５及び６の各配列を参照した場合に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれより多い保存的アミノ酸置換を有するＶＬ及びＶＨドメインを含む。別の実施形態において、本発明の結合化合物は配列番号２及び４の各配列の成熟形態を参照した場合に０、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０又はそれより多い保存的アミノ酸置換を有する軽鎖及び重鎖を有する抗体である。
１つの実施形態において、結合化合物は抗体又はその結合フラグメント、例えばＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、及びダイアボディー（ｄｉａｂｏｄｙ）よりなる群から選択される抗体フラグメントである。１つの実施形態において、本発明の結合化合物は配列番号２の成熟形態の配列を有する軽鎖（残基１〜２２０）、及び配列番号４の成熟形態の配列を有する重鎖（残基１〜４５４）を含む抗体ｈｕ１６Ｃ１０である。別の実施形態においては、結合化合物はＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−７６７５を有する発現ベクターから生産される抗体である（２００６年６月２８日に寄託されたプラスミドｐＡＩＬ１７ＡＶ１中のｈｕ１６Ｃ１０）。
１つの実施形態において、本発明の結合化合物は重鎖定常領域、例えばヒト定常領域、例えばγ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む。別の実施形態においては、結合化合物は軽鎖定常領域、例えばヒト軽鎖定常領域、例えばラムダ又はカッパヒト軽鎖領域又はその変異体を含む。
別の実施形態においては、本発明は例えばヒトＩＬ−１７Ａに結合する抗体（又はその結合フラグメント）のような本発明の結合化合物をコードする例えばＤＮＡのような単離された核酸に関する。１つの実施形態において、単離された核酸は少なくとも１つの抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメイン、及び少なくとも１つの抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメイン、又はこれらのドメインの結合フラグメントを含む結合化合物をコードし、ここで、ＶＬドメインは配列番号１１〜１３から選択される配列を有する相補性決定領域（ＣＤＲ）の少なくとも特定数を含み、そしてＶＨドメインは配列番号１４〜２０から選択される配列を有するＣＤＲの少なくとも特定数を含み、ここで特定数は１、２又は３である。
別の実施形態において単離された核酸はそれぞれ配列番号５及び６の軽鎖及び重鎖の可変領域配列の一方又は両方をコードする。更に別の実施形態においては、単離された核酸は配列番号２の成熟形態の配列を有する軽鎖及び配列番号４の成熟形態の配列番号を有する重鎖を含む抗体１６Ｃ１０をコードする。一部の実施形態においては、単離された核酸は配列番号１又は配列番号６２のヌクレオチド５８〜７１７を含み、そして別の実施形態においては単離された核酸は配列番号３又は配列番号６３のヌクレオチド５８〜１４１９を含む。更に別の実施形態においては、単離された核酸は配列番号１の配列及び配列番号３の配列を含む。又更に別の実施形態においては、単離された核酸は配列番号６２の配列及び配列番号６３の配列を含む。一部の実施形態においては、単離された核酸は単一の核酸分子上の軽鎖及び重鎖の両方をコードし、そして別の実施形態においては軽鎖及び重鎖は別個の核酸分子２つ以上にコードされる。
さらなる実施形態において、本発明は本発明の単離された核酸を含む発現ベクターに関し、ここで核酸は宿主細胞がベクターでトランスフェクトされた場合に宿主細胞により認識される制御配列に作動可能に連結している。１つの実施形態において、発現ベクターはＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−７５７６を有する（２００６年６月２８日に寄託されたプラスミドｐＡＩＬ１７ＡＶ１中のｈｕ１６Ｃ１０）。
別の実施形態において、本発明は本発明の発現ベクターを含む宿主細胞に関する。本発明は更に、培地中結合化合物をコードする発現ベクターを保有する宿主細胞を培養すること、及び宿主細胞又は培地から結合化合物を単離することを含む本発明の結合化合物を製造する方法に関する。
本発明は又、抗体１６Ｃ１０、４Ｃ３、３０Ｃ１０、１２Ｅ６、２３Ｅ１２、又は１Ｄ１０と同じヒトＩＬ−１７Ａ上エピトープに結合する抗体又はその結合フラグメント、例えば本発明のこれらの抗体の何れかの結合を交差ブロッキングすることができる抗体、又はヒトＩＬ−１７Ａのアミノ酸残基７４〜８５（配列番号４０）により定義されるエピトープ内で結合する抗体のような結合化合物に関する。
本発明は又、１０００、５００、１００、５０、２０、１０、５、２ｐＭ又はそれより低値の平衡解離定数（Ｋｄ）（即ちより高値の親和性）で結合する結合化合物のような抗体又はその結合フラグメントのような高親和性ヒトＩＬ−１７Ａ結合分子に関する。本発明は又、正常ヒト線維芽細胞、包皮線維芽細胞、又は滑膜細胞からのＩＬ−６のＩＬ−１７Ａ刺激生産のような、ＩＬ−１７Ａ刺激を１０００ｐＭ（１ｎＭ）の濃度において行う生物学的活性試験において計測した場合に５０００、２０００、１０００、５００ｐＭのＩＣ５０のような強力な生物学的活性を有する結合化合物に関する。本発明は又、Ｂａ／Ｆ３−ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲ増殖試験のようなＩＬ−１７Ａ刺激を１００ｐＭの濃度において行う生物学的活性試験において計測した場合に、１０００、５００、２００、１００、５０ｐＭ又はこれより低値のＩＣ５０を有する結合化合物に関する。一般的に本発明はＩＬ−１７Ａの濃度が例えば５、１０、５０、１００、５００又は１０００ｐＭ又はそれより高値である場合に、ＩＬ−１７Ａの濃度の１０×、５×、２×、１×、及び０．５×もの低値の範囲の濃度における生物学的試験においてヒトＩＬ−１７Ａの活性を抑制することができる結合化合物に関する。
本発明は又、５０、４０、３０、２０μｇ／ｍｌ又はそれより低値の結合化合物の血清中濃度をもたらすようにマウスに投与した場合に５０％以上まで肺へのＩＬ−１７Ａ誘導好中球リクルートメントを低減することができる結合化合物に関する。
１つの実施形態において、結合化合物は、ヒトＩＬ−１７Ａに対するその親和性（Ｋｄ）よりも５分の１、１０分の１、又は２０分の１以下の親和性でカニクイザルＩＬ−１７Ａに結合する。別の実施形態において、結合化合物は、マウス又はラットのＩＬ−１７Ａに対するその親和性（Ｋｄ）よりも１００、５００、１０００又は２０００倍高値である親和性でヒトＩＬ−１７Ａに結合する。
本発明は又本発明のヒトＩＬ−１７Ａ結合化合物を用いた治療が必要なヒト対象を包含する対象を治療する方法に関する。そのような対象は炎症性又は自己免疫性の障害、例えば慢性関節リューマチ、炎症性腸疾患、乾癬、多発性硬化症、慢性閉塞性肺疾患、嚢胞性線維症、全身硬皮症、自家移植片拒絶、自己免疫性心筋炎、又は腹膜癒着を有してよい。そのような治療方法は更に免疫抑制又は抗炎症剤のような追加的治療薬１つ以上を投与することを含む。１つの実施形態において、対象はＩＬ−１７Ａ媒介疾患を有すると診断されている。別の実施形態においては、対象は慢性関節リューマチを有すると診断されている。更に別の実施形態においては、対象は多発性硬化症を有すると診断されている。
別の実施形態においては、本発明は他の治療薬１つ以上と組み合わせた抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体又は結合フラグメントの治療有効量の投与を含む治療方法を提供する。１つの実施形態において、他の治療薬は抗ヒトＩＬ−２３抗体、又はその結合フラグメントである。種々の実施形態において、抗ヒトＩＬ−２３抗体、又はその結合フラグメントは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体又はフラグメントの前、同時、又は後に投与される。１つの実施形態において、抗ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−２３抗体は有害な免疫学的事象の急性期の最中に限定された時間だけ共に投与され、その後、抗ＩＬ−１７Ａ抗体による治療は中断するが、抗ＩＬ−２３抗体による治療は継続する。他の実施形態においては、他の１つ以上の薬剤はＩＬ−１β、ＩＬ−６、又はＴＧＦ−βの拮抗剤、例えば抗ＩＬ−６又は抗ＴＧＦ−β抗体、又はそのような拮抗剤の組み合わせを含む。
本発明は又、結合化合物及び製薬上許容しうる担体又は希釈剤、及び場合により１つ以上の免疫抑制剤又は抗炎症剤を含む、本発明の結合化合物の組成物及び製剤に関する。
したがって、本発明は、以下の項目を提供する：
（項目１）
配列番号１１〜１３よりなる群から選択されるＣＤＲ配列の少なくとも特定数を有する抗体軽鎖可変領域の少なくとも１つ又はその結合フラグメント、及び、
配列番号１４〜２０よりなる群から選択されるＣＤＲ配列の少なくとも特定数を有する抗体重鎖可変領域の少なくとも１つ又はその結合フラグメント、
を含むヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物であって、
ここで、この特定数が１である結合化合物。
（項目２）
上記特定数が２である項目１記載の結合化合物。
（項目３）
上記特定数が３である項目１記載の結合化合物。
（項目４）
上記軽鎖可変領域が配列番号１１〜１３のＣＤＲ配列を含み、
上記重鎖可変領域が配列番号１４、１７及び２０のＣＤＲ配列を含む、項目３記載の結合化合物。
（項目５）
上記軽鎖可変領域が配列番号１１〜１３のＣＤＲ配列を含み、
上記重鎖可変領域が配列番号１４、１６及び１９のＣＤＲ配列を含む、項目３記載の結合化合物。
（項目６）
上記軽鎖可変領域が保存的置換１０個までを有する配列番号５の配列を含み、そして上記重鎖可変領域が保存的アミノ酸置換１０個までを有する配列番号６の配列を含む、項目３記載の結合化合物。
（項目７）
上記結合化合物が、
配列番号５を含む軽鎖可変領域、及び、
配列番号６を含む重鎖可変領域、
を含む抗体である項目６記載の結合化合物。
（項目８）
上記軽鎖が保存的置換１０個までを含む配列番号２のアミノ酸１〜２２０より本質的になり、そして上記重鎖が保存的置換１０個までを含む配列番号４のアミノ酸１〜４５４より本質的になる、項目３記載の結合化合物。
（項目９）
上記軽鎖が本質的に配列番号２のアミノ酸１〜２２０よりなり、そして上記重鎖が本質的に配列番号４のアミノ酸１〜４５４よりなる、項目８記載の結合化合物。
（項目１０）
上記軽鎖が配列番号２のアミノ酸１〜２２０よりなり、そして上記重鎖が本質的に配列番号４のアミノ酸１〜４５４よりなる、項目９記載の結合化合物。
（項目１１）
配列番号５に少なくとも９０％の相同性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号６に少なくとも９０％の相同性を有する重鎖可変領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物。
（項目１２）
項目３の結合化合物の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の少なくとも１つをコードする単離された核酸。
（項目１３）
上記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号５であり、そして上記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号６である、項目１２記載の核酸。
（項目１４）
配列番号１及び３の配列、又は配列番号６２及び６３の配列を含む項目１３記載の核酸。
（項目１５）
項目１４記載の核酸を含む発現ベクターであって、この核酸は、宿主細胞がこのベクターでトランスフェクトされた場合にこの宿主細胞により認識される制御配列に作動可能に連結されている、発現ベクター。
（項目１６）
上記発現ベクターがＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−７６７５を有する項目１５記載の発現ベクター。
（項目１７）
項目１６記載のベクターを含む宿主細胞。
（項目１８）
核酸配列が発現される条件の下、培地中で項目１７に記載の宿主細胞を培養することにより軽鎖及び重鎖可変領域を含むポリペプチドを生成すること、及び、
この宿主細胞又は培地からこのポリペプチドを回収すること、
を含むポリペプチドの製造方法。
（項目１９）
抗体配列が項目１６記載の発現ベクターによりコードされる抗ヒトＩＬ−１７抗体ｈｕ１６Ｃ１０。
（項目２０）
交差ブロッキング試験においてヒトＩＬ−１７Ａへの項目１０に記載の結合化合物の結合を交差ブロッキングすることができる抗体。
（項目２１）
項目１９に記載の抗体１６Ｃ１０により結合されるエピトープと同じヒトＩＬ−１７Ａ上のエピトープに結合する抗体。
（項目２２）
配列番号４０のヒトＩＬ−１７Ａ蛋白配列のアミノ酸残基７４〜８５を含むエピトープにおいてヒトＩＬ−１７Ａに結合する抗体。
（項目２３）
配列番号２６〜２８のＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、及び、
配列番号２９〜３１のＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
を含むヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物。
（項目２４）
上記軽鎖可変領域が配列番号２２の配列を含み、そして上記重鎖可変領域が配列番号２３の配列を含む項目２３記載の結合化合物。
（項目２５）
上記結合化合物がモノクローナル抗体である項目２３記載の結合化合物。
（項目２６）
（ａ）配列番号４８〜５０のＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号５１〜５３のＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、又は、
（ｂ）配列番号５６〜５８のＣＤＲ配列を含む軽鎖可変領域、及び配列番号５９〜６１のＣＤＲ配列を含む重鎖可変領域、
を含むヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物。
（項目２７）
上記結合化合物がヒト化されたモノクローナル抗体である項目２６記載の結合化合物。
（項目２８）
上記結合化合物が更に以下の特性：
ａ）この結合化合物が１００ｐＭ以下の平衡解離定数（Ｋ ｄ ）でヒトＩＬ−１７Ａに結合する、
ｂ）この結合化合物がヒトＩＬ−１７Ａ刺激正常ヒト皮膚線維芽細胞におけるＩＬ−６生産の抑制に関する試験において５ｎＭ以下のＩＣ ５０ を有し、ここでこのヒトＩＬ−１７Ａ刺激は１ｎＭのヒトＩＬ−１７Ａで行う、
ｃ）この結合化合物がヒトＩＬ−１７Ａの生物学的活性のインビトロの試験において５００ｐＭ以下のＩＣ ５０ を有し、ここでこのインビトロの試験はヒトＩＬ−１７Ａの１００ｐＭの生物学的活性を測定する、
ｄ）この結合化合物が５０μｇ／ｍｌの血清中濃度においてマウスに投与した場合に５０％以上（ＢＡＬ好中球のパーセントとして計測）まで肺へのＩＬ−１７Ａ誘導好中球リクルートメントを低減することができる、
ｅ）この結合化合物がヒトＩＬ−１７Ａに対する親和性（Ｋ ｄ ）の２０分の１以下の親和性でカニクイザルＩＬ−１７Ａに結合し、ここでこの結合化合物は又カニクイザルＩＬ−１７Ａの活性を抑制する、及び、
ｆ）この結合化合物がマウス又はラットのＩＬ−１７Ａに対するその親和性（Ｋ ｄ ）の少なくとも１０００倍の親和性でヒトＩＬ−１７Ａに結合する、
の少なくとも１つを有する、ヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物。
（項目２９）
上記結合化合物が以下の特性：
ａ）この結合化合物が２０ｐＭ以下の平衡解離定数（Ｋ ｄ ）でヒトＩＬ−１７Ａに結合する、
ｂ）この結合化合物がヒトＩＬ−１７Ａ刺激正常ヒト皮膚線維芽細胞におけるＩＬ−６生産の抑制に関する試験において１ｎＭ以下のＩＣ ５０ を有し、ここでこのヒトＩＬ−１７Ａ刺激は１ｎＭのヒトＩＬ−１７Ａで行う、及び、
ｃ）この結合化合物がヒトＩＬ−１７Ａの生物学的活性のインビトロの試験において１００ｐＭ以下のＩＣ ５０ を有し、ここでこのインビトロの試験はヒトＩＬ−１７Ａの１００ｐＭの生物学的活性を測定する、
の少なくとも１つを有する項目２８記載の結合化合物。
（項目３０）
上記結合化合物がヒト化又は完全ヒト型のモノクローナル抗体である項目２８記載の結合化合物。
（項目３１）
ヒトＩＬ−１７Ａに結合し、そしてヒトＩＬ−１７Ａの活性を中和する結合化合物の治療有効量を、治療を要するヒト対象に投与することを含む、この対象の治療方法であって、ここでこの結合化合物は抗体軽鎖可変領域及び抗体重鎖可変領域を含み、ここでこの軽鎖可変領域は配列番号５を含み、そしてこの重鎖可変領域は配列番号６を含む、方法。
（項目３２）
上記結合化合物がモノクローナル抗体である項目３１記載の方法。
（項目３３）
上記ヒト対象が炎症性又は自己免疫性の障害を有する項目３２記載の方法。
（項目３４）
上記ヒト対象が慢性関節リューマチを有する項目３３記載の方法。
（項目３５）
上記ヒト対象が炎症性腸疾患を有する項目３３記載の方法。
（項目３６）
別の免疫抑制剤又は抗炎症剤を投与することを更に含む項目３１記載の方法。
（項目３７）
ヒトＩＬ−１７Ａに結合しヒトＩＬ−１７Ａ活性を中和する結合化合物であって、ここでこの結合化合物は抗体軽鎖可変領域及び抗体重鎖可変領域を含み、ここでこの軽鎖可変領域は配列番号５を含み、そしてこの重鎖可変領域は配列番号６を含む、結合化合物、ならびに、
製薬上許容しうる担体又は希釈剤、
を含む組成物。
（項目３８）
別の免疫抑制剤又は抗炎症剤を投与することを更に含む項目３７記載の組成物。
（項目３９）
重鎖定常領域を更に含み、ここでこの重鎖定常領域はγ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む、項目５記載の結合化合物。
（項目４０）
γ１ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む項目３９記載の結合化合物。
（項目４１）
γ４ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む項目３９記載の結合化合物。
（項目４２）
軽鎖定常領域を更に含み、ここでこの軽鎖定常領域はカッパヒト軽鎖定常領域を含む項目５記載の結合化合物。
（項目４３）
上記結合化合物がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’） ２ 、及びダイアボディーよりなる群から選択される抗体フラグメントである項目５記載の結合化合物。
（項目４４）
上記結合化合物がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’） ２ 、及びダイアボディーよりなる群から選択される抗体フラグメントである項目６記載の結合化合物。
（項目４５）
ヒトＩＬ−１７Ａ活性を抑制する、項目１、１１、２３、２６又は２８の何れかに記載の結合化合物。
本発明による数種の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の軽鎖可変ドメインのアライメントを示す。ラット１６Ｃ１０ＶＬ＝配列番号７；ヒト１６Ｃ１０ＶＬ＝配列番号５；ラット４Ｃ３ＶＬ＝配列番号２１；ヒト４Ｃ３ＶＬ＝配列番号５；ラット２３Ｅ１２ＶＬ＝配列番号４５；ラット３０Ｃ１０ＶＬ＝配列番号２４；ヒト３０Ｃ１０ＶＬ＝配列番号２２；ラット１２Ｅ６ＶＬ＝配列番号３２；ラット１Ｄ１０ＶＬ＝配列番号５４。ＣＤＲを示す（そして表３に提示する）。ナンバリングは本明細書においては「Ｋａｂａｔ等（１９９１）」と称するＫａｂａｔ等（１９９１）”Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ”，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ ａｎｄ Ｈｕｍａｎ Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ Ｐｕｂ．９１−３２４２、第５版に従う。 本発明による数種の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の重鎖可変ドメインのアライメントを示す。ラット１６Ｃ１０ＶＨ＝配列番号８；ヒト１６Ｃ１０ＶＨ＝配列番号６；ラット４Ｃ３ＶＨ＝配列番号８；ヒト４Ｃ３ＶＨ＝配列番号６；ラット２３Ｅ１２ＶＨ＝配列番号４７；ラット３０Ｃ１０ＶＨ＝配列番号２５；ヒト３０Ｃ１０ＶＨ＝配列番号２３；ラット１２Ｅ６ＶＨ＝配列番号３３；ラット１Ｄ１０ＶＨ＝配列番号５５。ＣＤＲを示す（そして表４に提示する）。ナンバリングはＫａｂａｔ等（１９９１）に従う。 本発明によるヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体１６Ｃ１０の軽鎖のアミノ酸配列を示す（配列番号２の成熟形態、即ち残基１〜２２０）。ＣＤＲを示す。 本発明によるヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体１６Ｃ１０の重鎖のアミノ酸配列を示す（配列番号４の成熟形態、即ち残基１〜４５４）。ＣＤＲを示す。 図３Ａ〜３Ｄは、慢性関節リューマチのＣＩＡマウスモデルにおける病理に対する抗ＩＬ−１７Ａ抗体治療の作用を示す。治療は抗ＩＬ−１７Ａ抗体１Ｄ１０の投与（２８、７及び２ｍｇ／ｋｇ）及びアイソタイプ対照の投与（７ｍｇ／ｋｇ）を包含する。図３Ａは、目視による疾患の重症度のスコア（ＤＳＳ）、即ち目視による足の浮腫及び紅斑を抗体治療の関数として示す。スコアは０＝足が対照（未投与）足と同様の外観を呈する；１＝１所定の足上の１指の炎症；２＝１所定の足の２指又は手掌の炎症；３＝１所定の足の手掌及び指の炎症とする。 図３Ａ〜３Ｄは、慢性関節リューマチのＣＩＡマウスモデルにおける病理に対する抗ＩＬ−１７Ａ抗体治療の作用を示す。治療は抗ＩＬ−１７Ａ抗体１Ｄ１０の投与（２８、７及び２ｍｇ／ｋｇ）及びアイソタイプ対照の投与（７ｍｇ／ｋｇ）を包含する。図３Ｂは、抗体治療の関数としての軟骨損傷（組織病理学による）を示す。スコア０＝正常；１＝最小限；２＝軽度；３＝中等度；４＝重度とする。 図３Ａ〜３Ｄは、慢性関節リューマチのＣＩＡマウスモデルにおける病理に対する抗ＩＬ−１７Ａ抗体治療の作用を示す。治療は抗ＩＬ−１７Ａ抗体１Ｄ１０の投与（２８、７及び２ｍｇ／ｋｇ）及びアイソタイプ対照の投与（７ｍｇ／ｋｇ）を包含する。図３Ｃは、抗体治療の関数としての骨侵食（組織病理学による）を示す。スコア０＝正常；１＝最小限；２＝軽度；３＝中等度；４＝重度とする。 図３Ａ〜３Ｄは、慢性関節リューマチのＣＩＡマウスモデルにおける病理に対する抗ＩＬ−１７Ａ抗体治療の作用を示す。治療は抗ＩＬ−１７Ａ抗体１Ｄ１０の投与（２８、７及び２ｍｇ／ｋｇ）及びアイソタイプ対照の投与（７ｍｇ／ｋｇ）を包含する。図３Ｄは、目視によるＤＳＳにおいて２又は３と採点されたＣＩＡマウスの足、即ち高度な炎症を有する足に関する骨侵食（組織病理学による）を示す。ｒＩｇＧ１をアイソタイプ対照抗体とした。スコア０＝正常；１＝最小限；２＝軽度；３＝中等度；４＝重度とする。 本発明の種々の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体（１Ｄ１０、１６Ｃ１０、４Ｃ３）及びアイソタイプ対照の血清中濃度の関数としてのヒトＩＬ−１７Ａを鼻内投与したマウスにおける％ＢＡＬ好中球（肺への好中球リクルートメントの尺度）を示す。黒三角形は抗ＩＬ−１７Ａ抗体を添加しなかった対照実験を示し、最も左側のデータポイント（白三角形）は未刺激の対照を示す。 ヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体１６Ｃ１０の軽鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号６２）を示す。 ヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体１６Ｃ１０の重鎖をコードするヌクレオチド配列（配列番号６３）を示す。
１．定義
本発明をより容易に理解するために、特定の専門技術用語を以下に特定的に定義する。本明細書において特段の記載が無い限り、本明細書において使用する全ての他の専門技術用語は本発明が属する分野の当業者により一般的に理解されている意味を有する。
添付請求項を包含する本明細書においては、文脈上明確に別様に推定されない限り、単数表記は相当する複数表記を包含するものとする。
細胞又は受容体に対して適用される場合の「活性化」、「刺激」及び「治療」とは、文脈上別様又は明示的に示されない限り、同様の意味、例えばリガンドによる細胞又は受容体の活性化、刺激又は治療であってよい。「リガンド」とは天然及び合成のリガンド、例えばサイトカイン、サイトカイン変異体、類縁体、ムテイン、及び抗体から誘導された結合化合物を包含する。「リガンド」とは又、小分子、例えばサイトカインのペプチドミメティック（ｐｅｐｔｉｄｅ ｍｉｍｅｔｉｃ）及び抗体のペプチドミメティックを包含する。「活性化」とは内部の機序により、並びに外部又は環境の要因により調節されている状態としての細胞の活性化を指す場合がある。例えば細胞、組織、臓器、又は生物の「応答」とは、生化学的又は生理学的な挙動、例えば生物学的コンパートメント内部における濃度、密度、接着、又は遊走、遺伝子発現の比率、又は分化の状態における変化を包含し、この場合、変化は活性化、刺激、又は治療、又は内部の機序、例えば遺伝子プログラミングに相関している。
分子の「活性」とはリガンド又は受容体に対する分子の結合、触媒活性；遺伝子発現又は細胞シグナリング、分化、又は成熟を刺激する能力；抗原活性、他の分子の活性化のモジュレーション等、を説明又は指す場合がある。分子の「活性」とは又、細胞−細胞の相互作用、例えば接着をモジュレート又は維持する場合の活性、又は細胞の構造、例えば細胞膜又は細胞骨格を維持する場合の活性を指すこともできる。「活性」とは又、比活性、例えば生物学的コンパートメントにおける［触媒活性］／［ｍｇ蛋白］、又は［免疫学的活性］／［ｍｇ蛋白］等を意味する場合もある。「活性」とは又、生得又は適応の免疫系の要素のモジュレーションをさす場合がある。「増殖活性」とは例えば正常な細胞分裂、並びに癌、腫瘍、形成異常、細胞形質転換、転移、及び血管形成を促進するか、それに必要であるか、又はそれに特異的に関連している活性を包含する。
「投与」及び「治療」とは、動物、ヒト、実験対象、細胞、組織、臓器、又は生物学的流体に適用する場合、動物、ヒト、対象、細胞、組織、臓器、又は生物学的流体への外来性の医薬品、治療薬、診断薬、又は組成物の接触を指す。「投与」及び「治療」とは施療、薬物動態、診断、研究及び実験の方法を指す場合がある。細胞の治療とは細胞への試薬の接触、並びに流体への試薬の接触を包含し、この場合、流体は細胞と接触している。「投与」及び「治療」は又、例えば細胞の、試薬、診断薬、結合化合物による、又は別の細胞によるインビトロ及びエクスビボの治療を意味する。ヒト、家畜又は研究対象に適用する場合の「治療」とは、施療的治療、予防的又は防止的な手段、研究及び診断上の適用を指す。ヒト、家畜又は研究対象、又は細胞、組織、又は臓器に適用する場合の「治療」とは、ヒト又は動物の対象、細胞、組織、生理学的コンパートメント、又は生理学的流体へのＩＬ−１７Ａアゴニスト又はＩＬ−１７Ａ拮抗剤の接触を包含する。「細胞の治療」とは又、例えば流体相又はコロイド相中でＩＬ−１７Ａアゴニスト又はＩＬ−１７Ａ拮抗剤がＩＬ−１７Ａ受容体に接触する状況、しかし更にはアゴニスト又は拮抗剤が細胞又は受容体には接触しない状況も包含する。
「治療する」又は「治療すること」とは、本発明の結合化合物の何れかを含有する組成物のような治療薬を、薬剤が既知の治療活性を有する対象となる疾患の症状１つ以上を有する患者に対し、内部又は外部から投与することを意味する。典型的には、薬剤は、治療された患者又は集団において疾患の症状１つ以上を、何れかの臨床的に計測できる程度までそのような症状の退行を誘導するか、又はその進行を抑制することにより軽減するために有効な量において投与される。何れかの特定の疾患の症状を軽減するために有効な治療薬の量（「治療有効量」とも称する）は疾患の状態、患者の年齢及び体重、及び患者において所望の応答を誘発する薬物の能力のような要因に応じて変動する場合がある。疾患の症状が軽減されているかどうかは、その症状の重症度又は進行度を評価するために医師又は他の医療専門家により典型的に使用されている何れかの臨床計測法により評価できる。本発明の実施形態（例えば治療方法又は製造物品）は如何なる患者においても標的疾患症状を軽減する場合に有効である必要はないが、それは当該分野で知られた何れかの統計学的試験、例えばＳｔｕｄｅｎｔのｔ検定、カイ自乗検定、Ｍａｎｎ ａｎｄ ＷｈｉｔｎｅｙのＵ検定、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓ検定（Ｈ検定）、Ｊｏｎｃｋｈｅｅｒｅ−Ｔｅｒｐｓｔｒａ検定及びＷｉｌｃｏｘｏｎ検定で測定した場合に、統計学的に有意な数の患者において標的疾患症状を軽減しなければならない。
本明細書ではヒトＩＬ−１７Ａ蛋白の４種の変異体に言及する。ｉ）本明細書においては、「ヒトＩＬ−１７Ａ」及び「ネイティブのヒトＩＬ−１７Ａ」（「ｈｕＩＬ−１７Ａ」及び「ｈｕｍＩＬ−１７Ａ」）とはヒトＩＬ−１７Ａ蛋白アクセッション番号ＮＰ＿００２１８１及びＡＡＴ２２０６４の成熟形態（即ち残基２４〜１５５）及びその天然に存在する変異体及び多形体を指す。ｉｉ）本明細書においては、「ｒｈＩＬ−１７Ａ」という用語は２つの追加的アミノ酸（ＬＥ）がネイティブのヒトＩＬ−１７Ａの成熟形態のＮ末端に付随しているネイティブヒトＩＬ−１７Ａの組み換え誘導体を指す。この命名法はＩＬ−１７Ａの種々の形態を指す場合に簡便のために採用しており、文献における使用法に合致しない場合がある。ｉｉｉ）本明細書においては、「ＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａ」という用語は付随したＮ末端ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドを有するネイティブのヒトＩＬ−１７Ａの変異体を指す。一部の実験においては、ＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａはビオチン化される。ｉｖ）Ｒ＆Ｄ ＳｙｓｔｅｍヒトＩＬ−１７Ａは本明細書においては追加的なＮ末端メチオニンを有するヒトＩＬ−１７Ａ蛋白アクセッション番号ＮＰ＿００２１８１及びＡＡＴ２２０６４の残基２０〜１５５である。表１は本明細書において参照するＩＬ−１７Ａ分子の変異体のＮ末端を総括したものである。
Figure 0005118699
 特段の記載が無い限り、アデノウィルスベクターを用いながら製造される本明細書に記載する実験において使用される何れのＩＬ−１７ＡもｒｈＩＬ−１７Ａである。「ＩＬ−１７Ａ」という用語は一般的にヒトＩＬ−１７Ａのネイティブ又は組み換えのもの、及びヒトＩＬ−１７Ａの非ヒト相同体を指す。特段の記載が無い限り、ＩＬ−１７Ａのモル濃度はＩＬ−１７Ａのホモ２量体の分子量を用いて計算される（例えばヒトＩＬ−１７Ａの場合は３０ｋＤａ）。
本明細書においては、「抗体」という用語は所望の生物学的活性を呈する抗体の何れかの形態を指す。即ち、それは最も広範な意味において使用され、そして特に、モノクローナル抗体（完全長モノクローナル抗体を包含する）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）を包含するがこれらに限定されない。本明細書においては、「ＩＬ−１７Ａ結合フラグメント」又は抗体（「親抗体」）の「結合フラグメント」という用語は、典型的には親抗体の結合特異性の少なくとも一部を保持している、親抗体の抗原結合又は可変領域（例えば１個以上のＣＤＲ）の少なくとも一部分を含む抗体のフラグメント又は誘導体を包含する。抗体結合フラグメントの例はＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディー；線状抗体；単鎖抗体分子、例えばｓｃ−Ｆｖ；及び抗体フラグメントから形成した多重特異性抗体を包含するがこれらに限定されない。典型的には、結合フラグメント又は誘導体はそのＩＬ−１７Ａ結合活性の少なくとも１０％を、その活性がモル基準で発現される場合に保持している。好ましくは結合フラグメント又は誘導体は親抗体の少なくとも２０％、５０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％又はそれより高値のＩＬ−１７Ａ結合親和性を保持している。ＩＬ−１７Ａ結合フラグメントは自身の生物活性を実質的に改変しない保存的アミノ酸置換（抗体の「保存的変異体」と称する）を包含することができることも意図している。「結合化合物」という用語は抗体及びその結合フラグメントの両方を指す。
「Ｆａｂフラグメント」という用語は１軽鎖及び１重鎖のＣＨ１及び可変領域を含む。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することはできない。
「Ｆｃ」領域は抗体のＣＨ１及びＣＨ２ドメインを含む２つの重鎖フラグメントを含有する。２つの重鎖フラグメントはジスルフィド結合２つ以上により、そしてＣＨ３ドメインの疎水性相互作用により、共に保持されている。
「Ｆａｂ’フラグメント」は軽鎖１つ、及びＶＨドメイン及びＣＨ１ドメイン、そして更にはＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の領域を含有する重鎖１つの一部分を含有しており、これにより鎖間ジスルフィド結合がＦａｂ’フラグメント２つの重鎖２つの間に形成されることができ、これによりＦ（ａｂ’）２分子が形成される。
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は軽鎖２つ、及びＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の定常領域の一部分を含有する重鎖２つを含有し、これにより重鎖２つの間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。即ちＦ（ａｂ’）２フラグメントは重鎖２つの間のジスルフィド結合により共に保持されているＦａｂ’フラグメント２つよりなる。
「Ｆｖ領域」とは重鎖及び軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが、定常領域は有さない。
「単鎖Ｆｖ」又は「ｓｃＦｖ」という用語は、抗体のＶＨ及びＶＬドメインを含む抗体フラグメントを指し、この場合これらのドメインは単一のポリペプチド鎖内に存在する。一般的にＦｖポリペプチドは更に抗原結合のための望ましい構造をｓｃＦｖが形成できるようにするＶＨとＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーを含む。ｓｃＦｖに関する考察はＰｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）ＴＨＥ ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＹ ＯＦ ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５を参照できる。更に又、国際特許出願公開ＷＯ８８／０１６４９及び米国特許４，９４６，７７８及び５，２６０，２０３も参照できる。
「ドメイン抗体」とは重鎖の可変領域又は軽鎖の可変領域のみを含有する免疫学的に機能性の免疫グロブリンフラグメントである。一部の場合においては、２つ以上のＶＨ領域はペプチドリンカーと共有結合して２価のドメイン抗体を形成する。２価のドメイン抗体の２つのＶＨ領域は同じか又は異なる抗原をターゲティングしてよい。
「２価の抗体」は抗原結合部位２つを含む。一部の場合においては、結合部位２つは同じ抗原特異性を有する。しかしながら、２価の抗体は二重特異性であってよい（後述参照）。
本明細書においては、特段の記載が無い限り「抗ＩＬ−１７Ａ」抗体は、ヒトＩＬ−１７Ａ又はその変異体、例えばｈｕＩＬ−１７Ａ、ｒｈＩＬ−１７Ａ、ＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａ、及びＲ＆ＤＩＬ−１７Ａ、又はその何れかの抗原性フラグメントに対して作製された抗体を指す。
「モノクローナル抗体」という用語は本明細書においては、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、即ち、集団を構成する個々の抗体は、少量存在するかもしれない、天然に存在する可能性のある突然変異を除き、同一である。モノクローナル抗体は高度に特異的であり、単一の抗原エピトープに対して施行される。これとは対照的に従来の（ポリクローナル）抗体の集団は典型的には異なるエピトープに対して指向された（又は特異的な）抗体を多数包含する。「モノクローナル」という修飾語は抗体の実質的に均質な集団から得られたという抗体の特徴を示しており、そして何れかの特定の方法による抗体の製造を要件としているとはみなしてはならない。例えば、本発明により使用されるモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒ等（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５により最初に報告されたハイブリドーマ法により製造してよく、或いは、組み換えＤＮＡ法により製造してよい（例えば米国特許４，８１６，５６７参照）。「モノクローナル抗体」とは又例えばＣｌａｃｋｓｏｎ等（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ３５２：６２４−６２８及びＭａｒｋｓ等（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７に記載の手法を用いながらファージ抗体ライブラリから単離してもよい。更に又、Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１も参照できる。
本明細書に記載するモノクローナル抗体は特に、重鎖及び／又は軽鎖の一部分が特定の種から誘導された、又は特定の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一又は相同であるが、鎖の残余は別の種から誘導された、又は別の抗体クラス又はサブクラスに属する抗体における相当する配列と同一又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）並びにそのような抗体のフラグメントを包含するが、ただし、それらは所望の生物活性を呈さなければならない（米国特許４，８１６，５６７；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ等（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１−６８５５）。
本明細書においては、「キメラ抗体」とは第１の抗体に由来する可変ドメイン及び第２の抗体に由来する定常ドメインを有する抗体であり、ここで第１及び第２の抗体は異なる種に由来する。典型的には、可変ドメインはげっ歯類のような実験動物に由来する抗体（「親抗体」）から得られ、そして定常ドメイン配列はヒト抗体から得られるものであり、これにより得られるキメラ抗体は親げっ歯類抗体よりもヒト対象において有害な免疫応答を呈する可能性が低下することになる。
本明細書におけるモノクローナル抗体は又ラクダ化された単一ドメイン抗体を包含する。例えばＭｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ等（２００１）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．２６：２３０；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ等（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ２３１：２５；ＷＯ９４／０４６７８；ＷＯ９４／２５５９１；米国特許６，００５，０７９を参照することができ、これらは参照により全体が本明細書に組み込まれる。１つの実施形態において、本発明は単一ドメイン抗体が形成されるように修飾を有するＶＨドメイン２つを含む単一ドメイン抗体を提供する。
本明細書においては、「ダイアボディー」という用語は抗原結合部位２つを有する小型の抗体フラグメントを指し、そのフラグメントは同じペプチド鎖内の軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む（ＶＨ−ＶＬ又はＶＬ−ＶＨ）。同じ鎖の上のドメイン２つの間の対形成を可能にするには短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインは強制的に別の鎖の相補ドメインと対形成させられ、そして２つの抗原結合部位を生じさせる。ダイアボディーは例えばＥＰ４０４，０９７；ＷＯ９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｇｅｒ等（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−６４４８により詳細に説明されている。操作された抗体変異体の考察については一般的にＨｏｌｌｉｇｅｒ ａｎｄ Ｈｕｄｓｏｎ（２００５）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２３：１１２６−１１３６を参照できる。
本明細書においては、「ヒト化抗体」という用語はヒト及び非ヒト（例えばネズミ、ラット）の抗体の両方に由来する配列を含有する抗体の形態を指す。一般的に、ヒト化抗体は少なくとも１つ、そして典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含むことになり、その場合、超可変ループの全て又は実質的に全てが非ヒト免疫グロブリンのものに相当し、そしてフレームワーク（ＦＲ）領域の全て又は実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列のものとなる。ヒト化抗体は場合によりヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部分（Ｆｃ）を含む。
本発明の抗体は又、改変されたエフェクター機能を与えるために修飾（又はブロック）されたＦｃ領域を有する抗体も包含する。例えば米国特許５，６２４，８２１；ＷＯ２００３／０８６３１０；ＷＯ２００５／１２０５７１；ＷＯ２００６／００５７７０２、を参照できる。そのような修飾は免疫系の種々の反応を増強又は抑制するために使用することができ、診断及び治療において有利な作用を有する可能性がある。Ｆｃ領域の改変はアミノ酸の変化（置換、欠失及び挿入）、グリコシル化又は脱グリコシル化、及び多数のＦｃの付加を包含する。Ｆｃの変化は又、治療用抗体における抗体の半減期を改変する場合があり、投薬頻度の低減を可能にし、これにより簡便性を向上させ、材料の使用を低減する。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１，ｐ．７３４−３５を参照できる。
「完全ヒト型抗体」という用語はヒト免疫グロブリン蛋白配列のみを含む抗体を指す。完全ヒト型抗体はマウス中、マウス細胞中、又はマウス細胞から誘導したハイブリドーマ中で生産されれば、ネズミ炭水化物鎖を含有する場合がある。同様に「マウス抗体」はマウス免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。或いは、完全ヒト型抗体はラット中、ラット細胞中、又はラット細胞から誘導したハイブリドーマ中で生産されれば、ラット炭水化物鎖を含有する場合がある。同様に「ラット抗体」はラット免疫グロブリン配列のみを含む抗体を指す。
本明細書においては、「超可変領域」という用語は抗原結合を担っている抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は「相補性決定領域」即ち「ＣＤＲ」に由来するアミノ酸残基（即ち軽鎖可変ドメイン中の残基２４〜３４（ＣＤＲＬ１）、５０〜５６（ＣＤＲＬ２）及び８９〜９７（ＣＤＲＬ３）、及び、重鎖可変ドメイン中の残基３１〜３５（ＣＤＲＨ１）、５０〜６５（ＣＤＲＨ２）及び９５〜１０２（ＣＤＲＨ３）；Ｋａｂａｔ等（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．）及び／又は「超可変ループ」に由来する残基（即ち軽鎖可変ドメイン中の残基２６〜３２（ＣＤＲＬ１）、５０〜５２（ＣＤＲＬ２）及び９１〜９６（ＣＤＲＬ３）及び重鎖可変ドメイン中の２６〜３２（ＣＤＲＨ１）、５３〜５５（ＣＤＲＨ２）及び９６〜１０１（ＣＤＲＨ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む。本明細書においては、「フレームワーク」即ち「ＦＲ」残基という用語は、本明細書においてＣＤＲ残基として定義される超可変領域の残基以外の可変ドメイン残基を指す。
「結合物質」とは標的に結合することができる分子、小分子、巨大分子、抗体、そのフラグメント又は類縁体、又は可溶性受容体を指す。「結合物質」とは又、標的に結合することができる、分子の複合体、例えば非共有結合複合体、イオン化された分子、及び、例えばホスホリル化、アシル化、交差結合、環化、又は制限切断により修飾された共有結合又は非共有結合的に修飾された分子を指してよい。「結合物質」は又、安定化剤、賦形剤、塩、緩衝液、溶媒、又は添加剤と組み合わせて標的に結合することができる分子を指す場合がある。「結合」とは標的との結合物質の会合として定義してよく、この場合、会合は、結合物質を溶液中に溶解又は懸濁できる場合は、結合物質の正常なブラウン運動の低減をもたらす。
「保存的に修飾された変異体」又は「保存的置換」とは、蛋白中のアミノ酸の、同様の特性（例えば電荷、側鎖の大きさ、疎水性／親水性、骨格のコンフォメーション及び剛性等）を有する別のアミノ酸との置換を指し、その場合、往々にして蛋白の生物活性を改変することなく変化を生じさせることができる。当業者の知る通り、一般的に、ポリペプチド中の非必須領域における単一のアミノ酸の置換は生物活性を実質的に改変しない（例えばＷａｔｓｏｎ等（１９８７）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ ｔｈｅ Ｇｅｎｅ，Ｔｈｅ Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ Ｐｕｂ．Ｃｏ．，ｐ．２２４（４ｔｈ Ｅｄ）参照）。更に又、構造的又は機能的に同様であるアミノ酸の置換は生物活性を破壊する可能性は低い。本発明の結合化合物の種々の実施形態は、本明細書に開示する特定のアミノ酸配列、例えば配列番号２、４、５又は６と比較した場合に０（無変化）、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１２、１５、２０個以上までの保存的アミノ酸置換を包含する配列を有するポリペプチド鎖を包含する。本明細書においては、「Ｘ個まで」の保存的アミノ酸置換という表現は、０個の置換及びＸを含むＸ個までの何れかの数量の置換を包含する。そのような例示される置換は好ましくは以下の表２に示すものに従って行われる。
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 「本質的に〜よりなる」又はその変形「本質的に〜よりなる」又は「本質的に〜よりなっている」という用語は、明細書及び請求項を通じて使用する場合、何れかの言及された要素又は要素の群の包含、及び、特定される投薬の計画、方法又は組成物の基本的又は新規な特性を現実上変化させないような、言及した要素と同様又は異なる性質の別の要素の任意の包含を示す。非限定的な例として、本質的に言及したアミノ酸配列よりなる結合化合物は、結合化合物の特性に現実上影響しないアミノ酸１個以上を包含してよい。
「有効量」とは医学的状態の症状又は兆候を改善又は防止するために十分な量を包含する。有効量は又診断を可能にするか容易にするために十分な量を意味する。特定の患者又は家畜対象に対する有効量は治療すべき状態、患者の全身状態、投与の方法経路及び用量、及び副作用の重症度のような要因に応じて変動してよい（例えばＮｅｔｔｉ等への米国特許５，８８８，５３０参照）。有効量は顕著な副作用又は毒性作用を回避する最大用量又は投薬プロトコルであることができる。作用は、診断尺度又はパラメーターの改善を、正常対象により示される診断パラメーターを１００％と定義する場合に少なくとも５％、通常は少なくとも１０％、より通常には少なくとも２０％、最も通常には少なくとも３０％、好ましくは少なくとも４０％、より好ましくは少なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも６０％、理想的には少なくとも７０％、より理想的には少なくとも８０％、そして最も理想的には少なくとも９０％とするものである（例えばＭａｙｎａｒｄ等（１９９６）Ａ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ＳＯＰｓ ｆｏｒ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｉｎｔｅｒｐｈａｒｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ；Ｄｅｎｔ（２００１）Ｇｏｏｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ａｎｄ Ｇｏｏｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｕｒｃｈ Ｐｕｂｌ．，Ｌｏｎｄｏｎ，ＵＫ参照）。
「外因性」とは、文脈に応じて、生物、細胞、又はヒト身体の外部で生産される物質を指す。「内因性」とは、文脈に応じて、細胞、生物、又はヒト身体の内部で生産される物質を指す。
「相同性」とは２つのポリヌクレオチド配列の間、又は２つのポリペプチド配列の間の配列の類似性を指す。２つの比較された配列の両方におけるある位置が同じ塩基又はアミノ酸の単量体サブユニットで占有されている場合、例えば２つのＤＮＡ分子の各におけるある位置がアデニンで占有されている場合、分子はその位置において相同である。２配列間の相同性のパーセントは２配列により共有されるマッチング又は相同な位置の数を比較する位置の数で割ったものに１００をかけた関数である。例えば、配列を最適にアラインした場合に２配列の位置１０個のうち６個がマッチしているか相同であれば、２配列は６０％相同である。一般的に、最大パーセント相同性となるように２配列をアラインさせながら比較を行う。
「免疫状態」又は「免疫障害」とは例えば病理学的な炎症、炎症性障害、及び自己免疫性の障害又は疾患を包含する。「免疫状態」とは又、感染症、難治性の感染症、及び増殖性の状態、例えば癌、腫瘍、及び血管形成、例えば免疫系による根絶に抵抗する感染症、腫瘍、及び癌を指す。「癌性の状態」とは例えば癌、癌細胞、腫瘍、血管形成、及び前癌性の状態、例えば形成異常を包含する。
「炎症性障害」とは、病理学的特徴が全体として、又は部分的に、例えば免疫系細胞の数の変化、遊走速度の変化、又は活性化の変化に起因する、障害又は病理学的状態を意味する。免疫系細胞は例えばＴ細胞、Ｂ細胞、単球又はマクロファージ、抗原提示細胞（ＡＰＣ）、樹状細胞、小神経膠細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞、好中球、好酸球、肥満細胞、又は免疫学に特に関連する何れかの他の細胞、例えばサイトカイン生産性の内皮又は上皮細胞を包含する。
「単離された結合化合物」とは結合化合物の精製状態を指し、そしてそのような文脈においては分子が他の生物学的分子、例えば核酸、蛋白、脂質、炭水化物、又は他の物質、例えば細胞破砕物及び生育培地を実質的に含有しないことを意味する。一般的に、「単離された」という用語は、本明細書に記載した結合化合物の実験上又は治療上の使用を実質的に妨害する量において存在するのではない限り、そのような物質の完全な非存在、又は水、緩衝液、又は塩の非存在を指すことを意図するわけではない。
「単離された核酸分子」とは、単離されたポリヌクレオチドが天然に存在するポリヌクレオチドの全て又は一部分と会合していない、又はそれが天然には連結されていないポリヌクレオチドに連結している、ゲノムのＤＮＡ又はＲＮＡ、ｍＲＮＡ、ｃＤＮＡ、又は合成起源のもの又はそれらの何らかの組み合わせを意味する。本開示の目的のためには、特定のヌクレオチド配列「を含む核酸分子」は未損傷の染色体を包含しないと理解すべきである。特定の核酸配列を「含む」単離された核酸分子は特定の配列に加えて、１０個まで、又は更には２０個まで、又はそれより多い他の蛋白又はその部分に関するコーディング配列を包含してよく、或いは、言及されている核酸配列のコーディング領域の発現を制御する作動可能に連結した調節配列を包含してよく、及び／又はベクター配列を包含してよい。
「制御配列」という表現は特定の宿主生物の作動可能に連結したコーディング配列の発現のために必要なＤＮＡ配列を指す。例えば原核生物に適する制御配列はプロモーター、場合によりオペレーター配列、及びリボソーム結合部位を包含する。真核生物の細胞はプロモーター、ポリアデニル化シグナル、及びエンハンサーを使用することが知られている。
核酸は別の核酸配列と機能的な関係となるように置かれている場合に「作動可能に連結されている」ことになる。例えば、プレ配列又は分泌リーダーに関するＤＮＡは、それがポリペプチドの分泌に関与するプレ蛋白として発現されれば、そのポリペプチドに関するＤＮＡに作動可能に連結していることになり、プロモーター又はエンハンサーはそれが配列の転写に影響すればコーディング配列に作動可能に連結しており、或いはリボソーム結合部位はそれが翻訳を促進するように位置づけられていればコーディング配列に作動可能に連結していることになる。一般的に、「作動可能に連結している」とは連結しているＤＮＡ配列が隣接していること、そして分泌リーダーの場合は隣接し、そして読み取り相にあることを意味している。しかしながらエンハンサーは隣接する必要はない。連結は好都合な制限部位におけるライゲーションにより達成される。そのような部位が存在しない場合は、合成のオリゴヌクレオチドアダプター又はリンカーを慣行通り使用する。
本明細書においては、「細胞」、「細胞系統」及び「細胞培養物」という表現は互換的に使用され、そして全てのそのような表記は子孫細胞を包含する。即ち、「形質転換体」及び「形質転換した細胞」という単語は一次的な対象細胞及び転移数に無関係にそれより誘導された培養物を包含する。更に又、全ての子孫細胞は、意図的又は偶然による突然変異のために、ＤＮＡ含量において厳密に同一である必要はない。元の形質転換細胞においてスクリーニングの対象とされたものと同じ機能又は生物学的活性を有する突然変異子孫細胞も包含される。区別可能な表記が意図される場合は、それは文脈から明確になる。
本明細書においては、「ポリメラーゼ連鎖反応」即ち「ＰＣＲ」とは核酸、ＲＮＡ及び／又はＤＮＡの特定の小片の極少量を例えば米国特許４，６８３，１９５に記載の通り増幅させる操作法又は手法を指す。一般的に、オリゴヌクレオチドプライマーが設計可能であるためには目的の領域の末端又はそれ以降に由来する配列情報が入手可能である必要があり、そのようなプライマーは増幅されるべき鋳型と対向する鎖と配列において同一又は類似となる。２つのプライマーの５’末端は増幅産物の末端と合致するはずである。ＰＣＲを用いて特定のＲＮＡ配列、全ゲノムＤＮＡ由来の特定のＤＮＡ配列、及び全細胞ＲＮＡから転写されたｃＤＮＡ、バクテリオファージ、又はプラスミド配列等を増幅することができる。一般的にＭｕｌｌｉｓ等（１９８７）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５１：２６３；Ｅｒｌｉｃｈ編（１９８９）ＰＣＲ ＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ（Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ）を参照できる。本明細書においては、ＰＣＲは核酸の特定の小片を増幅又は形成するためにプライマーとしての既知核酸及び核酸ポリメラーゼの使用を含む核酸被験試料を増幅するための核酸ポリメラーゼ反応法の一例であって、唯一のものではないとみなされる。
本明細書においては、「生殖細胞系統配列」という用語は再配列されていない免疫グロブリンＤＮＡ配列を指す。再配列されていない免疫グロブリンの任意の適当な原料を使用してよい。
「抑制剤」及び「拮抗剤」又は「活性化剤」及び「アゴニスト」とは、例えばリガンド、受容体、コファクター、遺伝子、細胞、組織、又は臓器の活性化に関して、それぞれ抑制性又は活性化性である分子を指す。例えば遺伝子、受容体、リガンド、又は細胞のモジュレーターは遺伝子、受容体、リガンド、又は細胞の活性を改変する分子であり、その場合、活性は活性化、抑制、又はその調節特性において改変されることができる。モジュレーターは単独で機能してよく、或いはコファクター、例えば蛋白、金属イオン、又は小分子を使用してよい。抑制剤は例えば遺伝子、蛋白、リガンド、受容体、又は細胞を低減、ブロック、防止、活性化遅延、不活性化、脱感作、又はダウンレギュレートする化合物である。活性化剤は例えば遺伝子、蛋白、リガンド、受容体、又は細胞を増大、活性化、促進、活性増強、感作、又はアップレギュレートする化合物である。抑制剤は又、構成的活性を低減、ブロック、又は不活性化する化合物として定義してもよい。「アゴニスト」とは標的の活性化の増大を誘発又は促進するように標的と相互作用する化合物である。「拮抗剤」とはアゴニストの作用に対抗する化合物である。拮抗剤はアゴニストの活性を防止、低減、抑制、又は中和する。拮抗剤は又、アゴニストが発見されない場合であっても、標的、例えば標的受容体の構成的活性を防止、抑制、又は低減する場合がある。
抑制の程度を調べるためには、例えば所定の、例えば蛋白、遺伝子、細胞、又は生物を含む試料又は検体を潜在的な活性化剤又は抑制剤で処理し、そして抑制剤非存在下の対照試料と比較する。対照試料、即ち拮抗剤で処理されていない試料には相対的活性値１００％を割りつける。抑制は対照と相対比較した場合の活性値が約９０％以下、典型的には８５％以下、より典型的には８０％以下、最も典型的には７５％以下、一般的には７０％以下、より一般的には６５％以下、最も一般的には６０％以下、典型的には５５％以下、通常には５０％以下、より通常には４５％以下、最も通常には４０％以下、好ましくは３５％以下、より好ましくは３０％以下、更により好ましくは２５％以下、そして最も好ましくは２５％未満の場合に達成されたものとする。活性化は対照と相対比較した場合の活性値が約１１０％、一般的には少なくとも１２０％、より一般的には少なくとも１４０％、より一般的には少なくとも１６０％、頻繁には少なくとも１８０％、より頻繁には少なくとも２倍、最も頻繁には少なくとも２．５倍、通常には少なくとも５倍、より通常には少なくとも１０倍、好ましくは少なくとも２０倍、より好ましくは少なくとも４０倍、そして最も好ましくは４０倍超となる場合に達成されたものとする。
活性化又は抑制の終点は以下の通りモニタリングできる。例えば細胞、生理学的流体、組織、臓器、及び動物又はヒト対象の活性化、抑制、及び治療への応答は、終点によりモニタリングできる。終点は例えば炎症、腫瘍形成性、又は細胞の脱顆粒化又は分泌、例えばサイトカイン、毒性酸素、又はプロテアーゼの放出の兆候の所定の量又はパーセントを含んでよい。終点は、例えばイオンの流出又は輸送；細胞遊走；細胞接着；細胞増殖；転移可能性；細胞分化；及び表現型の変化、例えば炎症、アポトーシス、形質転換、細胞周期、又は転移に関連する遺伝子の発現の変化の所定量を含んでよい（例えばＫｎｉｇｈｔ（２０００）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｓｃｉ．３０：１４５−１５８；Ｈｏｏｄ ａｎｄ Ｃｈｅｒｅｓｈ（２００２）Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖ．Ｃａｎｃｅｒ２：９１−１００；Ｔｉｍｍｅ等（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ４：２５１−２６１；Ｒｏｂｂｉｎｓ ａｎｄ Ｉｔｚｋｏｗｉｔｚ（２００２）Ｍｅｄ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ Ａｍ．８６：１４６７−１４９５；Ｇｒａｄｙ ａｎｄ Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ（２００２）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．３：１０１−１２８；Ｂａｕｅｒ等（２００１）Ｇｌｉａ３６：２３５−２４３；Ｓｔａｎｉｍｉｒｏｖｉｃ ａｎｄ Ｓａｔｏｈ（２０００）Ｂｒａｉｎ Ｐａｔｈｏｌ．１０：１１３−１２６参照）。
抑制の終点は一般的に対照の７５％以下、好ましくは対照の５０％以下、より好ましくは対照の２５％以下、そして最も好ましくは対照の１０％以下である。一般的に活性化の終点は対照の少なくとも１５０％、好ましくは対照の少なくとも２倍、より好ましくは対照の少なくとも４倍、そして最も好ましくは対照の少なくとも１０倍である。
「リガンド」とは受容体のアゴニスト又は拮抗剤として作用することができる小分子、ペプチド、ポリペプチド、及び膜関連の又は膜結合の分子、又はそれらの複合体を指す。「リガンド」とは又、アゴニストや拮抗剤ではないが、受容体に結合できる物質も包含する。更に又、「リガンド」とは例えば化学的又は組み換えの方法により膜結合リガンドの可溶性型に変化している膜結合リガンドを包含する。簡便のために、第１の細胞上で膜結合している場合、受容体は通常は第２の細胞上に存在する。第２の細胞は第１の細胞と同じか異なる実体を有してよい。リガンド又は受容体は完全に細胞内であってよく、即ちそれは細胞質、核、又は何らかの他の細胞内コンパートメント内に存在してよい。リガンド又は受容体は例えば細胞内コンパートメントから原形質膜の外面にその位置を変えてよい。リガンドと受容体の複合体は「リガンド受容体複合体」と称する。リガンド及び受容体がシグナリング経路に関与する場合、リガンドはシグナリング経路の上流の位置に存在し、そして受容体は下流の位置に存在する。
「小分子」とは１０ｋＤａ未満、典型的には２ｋＤａ未満、好ましくは１ｋＤａ未満、そして最も好ましくは約５００Ｄａ未満の分子量を有する分子として定義される。小分子は無機の分子、有機の分子、無機成分を含有する有機の分子、放射性原資を含む分子、合成の分子、ペプチドミメティック、及び抗体ミメティックを包含するがこれらに限定されない。治療薬としては、小分子はより大きい分子よりも、細胞に対してより浸透性であり、分解されにくく、そして免疫応答を誘発しにくい。抗体及びサイトカインのペプチドミメティックのような小分子、並びに小分子毒素が報告されている（例えばＣａｓｓｅｔ等（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．３０７：１９８−２０５；Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．７４：２７７−３０２；Ｌｉ（２０００）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１８：１２５１−１２５６；Ａｐｏｓｔｏｌｏｐｏｕｌｏｓ等（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．９：４１１−４２０；Ｍｏｎｆａｒｄｉｎｉ等（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｄｅｓ．８：２１８５−２１９９；Ｄｏｍｉｎｇｕｅｓ等（１９９９）Ｎａｔ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．６：６５２−６５６；Ｓａｔｏ ａｎｄ Ｓｏｎｅ（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３７１：６０３−６０８；Ｓｔｅｗａｒｔ等への米国特許６，３２６，４８２参照）。
リガンド／受容体、抗体／抗原、又は他の結合対に言及する場合の「特異的に」又は「選択的に」結合するとは、蛋白及び他の生体物質の非均質な集団中の蛋白の存在を決定づける結合反応を指す。即ち、所定の条件下において、特定のリガンドは特定の受容体に結合し、そして試料中に存在する他の蛋白には有意な量においては結合しない。意図する方法の抗体又は抗体の抗原結合部位から誘導された結合化合物は、その抗原、又はその変異体又はムテインに対し、何れかの他の抗原との親和性よりも少なくとも２倍高値、好ましくは少なくとも１０倍高値、より好ましくは少なくとも２０倍高値、そして最も好ましくは少なくとも１００倍高値の親和性で結合する。好ましい実施形態においては、抗体は例えばＳｃａｔｃｈａｒｄ分析により求めた場合、約１０９Ｍ−１より高値の親和性を有することになる（Ｍｕｎｓｅｎ等（１９８０）Ａｎａｌｙｔ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０−２３９）。
本明細書においては、「免疫モジュレート剤」という用語は免疫応答を抑制又はモジュレートする天然又は合成の薬剤を指す。免疫応答は体液性、又は細胞性の応答であることができる。免疫モジュレート剤は免疫抑制性又は抗炎症性の薬剤を包含する。
「免疫抑制剤」、「免疫抑制性の薬物」又は「免疫抑制物質」とは本明細書においては免疫系の活性を抑制又は防止するために免疫抑制療法において使用される治療薬である。臨床的には、それらは移植された臓器又は組織（例えば骨髄、心臓、腎臓、肝臓）の拒絶を防止するため、及び／又は、自己免疫疾患又は自己免疫起源の可能性が最も高い疾患（例えば慢性関節リューマチ、重症筋無力症、全身エリテマトーデス、潰瘍性結腸炎、多発性硬化症）の治療において使用される。免疫抑制性の薬物は糖質コルチコイド；細胞増殖抑制剤；抗体（生物学的応答モディファイアー）；イムノフィリンに作用する薬物；増殖性障害の治療に使用されている既知化学療法剤を包含する他の薬物、として分類される。多発性硬化症に関しては、特に、本発明の抗生物質はコパキソン（ｃｏｐａｘｏｎｅ）として知られている新しいクラスのミエリン結合蛋白様治療薬と組み合わせて投与できる。
「抗炎症剤」又は「抗炎症性の薬物」とはステロイド系及び非ステロイド系の治療薬の両方を指す。コルチコステロイドとしても知られているステロイドは副腎により天然に生産されるホルモンであるコルチゾールに近似した薬物である。ステロイドは特定の炎症状態、例えば全身血管炎（血管の炎症）；及び筋炎（筋肉の炎症）の主要な治療として使用される。ステロイドは又、炎症性の状態、例えば慢性関節リューマチ（身体の両側の関節において生じる慢性炎症性関節炎）；全身エリテマトーデス（異常な免疫系の機能により生じる広汎性疾患）；シェーグレン症候群（乾燥眼（ｄｒｙ ｅｙｅ）及び乾燥口（ｄｒｙ ｍｏｕｔｈ）を誘発する慢性障害）を治療するために選択的に使用される。
非ステロイド性の抗炎症薬、通常はＮＳＡＩＤと略されるものは、鎮痛、解熱、及び抗炎症作用を有する薬物であり、それらは、疼痛、熱及び炎症を低減する。「非ステロイド」という用語は（広範な他の作用の中でも）同様のエイコサノイド抑制性抗炎症作用を有するステロイドからこれらの薬物を区別するために使用される。ＮＳＡＩＤは以下の状態、即ち、慢性関節リューマチ；変形性関節症；炎症性関節症（例えば強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、ライター症候群）；急性痛風；月経困難症；転移性骨疼痛；頭痛及び片頭痛；術後疼痛；炎症及び組織傷害に起因する軽度〜中等度の疼痛；発熱；及び腎仙痛の症候的緩解に適応される。ＮＳＡＩＤはサリチル酸塩、アリールアルカン酸、２−アリールプロピオン酸（プロフェン類）、Ｎ−アリールアントラニル酸（フェナム酸）、オキシカム、コキシブ、及びスルホンアニリドを包含する。
疾患変調性抗リューマチ薬（ＤＭＡＲＤ）は往々にしてＮＳＡＩＤと組み合わせて投与してよい。一般的に処方されているＤＭＡＲＤにはヒドロキシクロロキン／クロロキン、メトトレキセート、金治療薬、スルファサラジン、及びアザチオプリンが包含される。
ＩＩ．ヒトＩＬ−１７Ａに特異的な抗体
本発明は操作された抗ＩＬ−１７Ａ抗体、及び種々の炎症性、免疫性、及び増殖性の障害、例えば慢性関節リューマチ（ＲＡ）、変形性関節症、慢性関節リューマチ性骨粗鬆症、炎症性線維症（例えば硬皮症、肺線維症、及び肝硬変）、炎症性腸障害（例えばクローン病、潰瘍性結腸炎、及び炎症性腸疾患）、喘息（例えばアレルギー性喘息）、アレルギー、ＣＯＰＤ、多発性硬化症、乾癬及び癌を治療するためのその使用を提供する。
モノクローナル抗体を作製するための任意の適当な方法を用いて本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体を作製してよい。例えばレシピエント動物をＩＬ−１７Ａホモ２量体の連結又は未連結の（例えば天然に存在する）形態又はそのフラグメントで免疫化してよい。免疫化の任意の適当な方法を使用できる。そのような方法はアジュバント、他の免疫刺激物質、反復ブースター免疫化、及び免疫化経路の１つ以上の使用を包含できる。
ＩＬ−１７Ａの何れかの適当な形態をＩＬ−１７Ａに特異的な非ヒト抗体の作製のための免疫原（抗原）として使用することができ、その抗体を生物学的活性に関してスクリーニングできる。誘導免疫原は完全長の成熟ヒトＩＬ−１７Ａ、例えば連結した、及び天然に存在するホモ２量体、単一のエピトープ又は多数のエピトープを包含するそのペプチドであってよい。免疫原は単独で、又は、当該分野で知られた免疫原性増強剤１つ以上と組み合わせて使用してよい。免疫原は天然原料から精製するか、又は遺伝子的に修飾された細胞中で生産してよい。免疫原をコードするＤＮＡはゲノム又は非ゲノム（例えばｃＤＮＡ）起源であってよい。免疫原コードＤＮＡは適当な遺伝子ベクター、例えば限定しないがアデノウィルスベクター、アデノ関連ウィルスベクター、バキュロウィルスベクター、プラスミド、及び非ウィルス性のベクター、例えばカチオン性脂質を用いて発現してよい。
任意の適当な方法を用いて、例えばＩＬ−１７Ａのその受容体への結合を抑制するために所望の生物学的特性を有する抗体応答を誘発することができる。一部の実施形態においては、抗体を哺乳類宿主、例えばマウス、げっ歯類、霊長類、ヒト等において発生させる。モノクローナル抗体を製造するための手法は例えばＳｔｉｔｅｓ等（編）ＢＡＳＩＣ ＡＮＤ ＣＬＩＮＩＣＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（第４版）Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｌｏｓ Ａｌｔｏｓ，ＣＡ及びその引用文献；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＰＲＩＮＣＩＰＬＥＳ ＡＮＤ ＰＲＡＣＴＩＣＥ（第２版）Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹに記載されている。即ち、モノクローナル抗体は当該分野で良く知られている種々の手法により得てよい。典型的には、所望の抗原で免疫化した動物に由来する脾細胞を、一般的には骨髄腫細胞と融合することにより不朽化する。Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ（１９７６）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：５１１−５１９。不朽化の別の方法はエプスタイン・バーウィルス、癌遺伝子、又はレトロウィルスを用いた形質転換、又は当該分野で知られた他の方法を包含する。例えばＤｏｙｌｅ等（編）（１９９４及び定期補遺）ＣＥＬＬ ＡＮＤ ＴＩＳＳＵＥ ＣＵＬＴＵＲＥ：ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＰＲＯＣＥＤＵＲＥＳ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹを参照できる。単一の不朽化細胞から生じたコロニーを抗原に対する所望の特異性及び親和性を有する抗体の生産に関してスクリーニングする。そのような細胞により生産されるモノクローナル抗体の収率は種々の手法、例えば脊椎動物の腹腔内への注射により、増強してよい。
他の適当な手法ではファージ又は同様のベクターにおける抗体のライブラリの選択を行う。例えばＨｕｓｅ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４６：１２７５−１２８１（１９８９）；及びＷａｒｄ等、Ｎａｔｕｒｅ３４１：５４４−５４６（１９８９）を参照できる。本発明の抗体は修飾することなく例えば非経腸げっ歯類抗体として、又はキメラ又はヒト化抗体のようにヒト対象における治療薬としてのその使用を容易にするために修飾して使用してよい。一部の実施形態においては、抗体は検出可能なシグナルを与える物質で、共有結合又は非共有結合的に標識される。広範な種類の標識及びコンジュゲーションの手法が知られており、学術文献及び特許文献の両方において広範に報告されている。適当な標識は放射性核種、酵素、基質、コファクター、抑制剤、蛍光部分、ケミルミネセントネセント部分、磁性粒子などを包含する。そのような標識の使用を記載している特許は米国特許３，８１７，８３７；３，８５０，７５２；３，９３９，３５０；３，９９６，３４５；４，２７７，４３７；４，２７５，１４９；及び４，３６６，２４１を包含する。更に又、組み換え免疫グロブリンを製造してよく、Ｃａｂｉｌｌｙの米国特許４，８１６，５６７；及びＱｕｅｅｎ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３を参照でき；或いはトランスジェニックマウス中に製造してよく、Ｍｅｎｄｅｚ等（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ１５：１４６−１５６を参照でき、そして同様にＡｂｇｅｎｉｘ ａｎｄ Ｍｅｄａｒｅｘの技術も参照できる。
ＩＬ−１７Ａの所定のフラグメントに対する抗体は、担体蛋白とのＩＬ−１７Ａの所定のフラグメントのコンジュゲートで動物を免疫化することにより発生させることができる。モノクローナル抗体は所望の抗体を分泌する細胞から製造する。これらの抗体は正常又は欠損性ＩＬ−１７Ａへの結合に関してスクリーニングできる。これらのモノクローナル抗体は通常は少なくとも約１μＭ、より通常は少なくとも約３００、３０、１０、又は３ｎＭ、好ましくは少なくとも約３００、１００、３０、１０、３又は１ｐＭのＫｄで結合することになる。Ｋｄ値と親和性が逆比例関係にあることから、所定のＫｄ「以下」での結合に言及する場合、少なくとも提示数値程度に高値である親和性において、即ち少なくとも記載数値程度に低値であるＫｄにおいて結合することを指す。結合親和性はＥＬＩＳＡ（後述する実施例５〜６参照）により、又はＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴スペクトル分析、ＫｉｎＥｘＡ又はＥＣＬ法（後述する実施例７参照）により測定してよい。適当な非ヒト抗体は又、後述する実施例８〜１１及び１６〜１７に記載する生物学的試験を用いて発見することもできる。
本発明の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体を製造する方法の例は実施例２に記載する。
ＩＩＩ．ＩＬ−１７Ａ特異的抗体のヒト化
任意の適当な非ヒト抗体を本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の超可変領域のための原料として使用できる。非ヒト抗体の原料は例えば、限定しないが、げっ歯類（例えばマウス、ラット）、ウサギ目（例えばウサギ）、ウシ、及び非ヒト霊長類を包含する。大部分においては、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域残基が、所望の特異性及び親和性を有するマウス、ラット、ウサギ又は非ヒト霊長類のような非ヒト種（ドナー抗体）由来の超可変領域残基で置き換えられているヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。更に又、ヒト化抗体は所望の生物活性の抗体性能を更に明確化するために行われる修飾のような、レシピエント抗体において、又はドナー抗体においては存在しない残基を含んでよい。更に詳細な説明はＪｏｎｅｓ等（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ３２１：５２２−５２５；Ｒｅｉｃｈｍａｎｎ等（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ３３２：３２３−３２９；及びＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ，Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６を参照できる。
抗体を組み換えにより操作及び製造するための方法は、例えばＢｏｓｓ等（米国特許４，８１６，３９７）、Ｃａｂｉｌｌｙ等（米国特許４，８１６，５６７）、Ｌａｗ等（欧州特許出願公開４３８３１０）及びＷｉｎｔｅｒ（欧州特許出願公開２３９４００）に記載されている。
本発明のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体のアミノ酸配列変異体はヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体のＤＮＡ内に適切なヌクレオチド変化を導入することによるか、又はペプチド合成により、製造してよい。欠失、挿入、及び置換の何れの組み合わせも最終コンストラクトに到達するように行ってよいが、ただし最終コンストラクトは所望の特性を保有しなければならない。アミノ酸変化は又、グリコシル化部位の数又は位置を変化させる場合のように、ヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体の翻訳後プロセシングを改変してよい。
突然変異誘発のための好ましい位置であるヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体の残基又は領域を同定するための１つの有用な方法は、「アラニンスキャニング突然変異誘発」と称される。Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ２４４：１０８１−１０８５。標的残基の群を同定し（例えばＡｒｇ、Ａｓｐ、Ｈｉｓ、Ｌｙｓ及びＧｌｕのような荷電残基）、そして中性又は負荷電のアミノ酸（最も好ましくはアラニン又はポリアラニン）で置き換えることにより、ＩＬ−１７Ａとのアミノ酸の相互作用を改変する。次にアラニン置換に対する機能的感受性を示す残基を、別のアミノ酸置換を導入することにより明確化する。１つの実施形態においては、所定の標的コドンにおける突然変異の作用は、アラニンスキャニング又はランダム突然変異誘発、次いで、得られたヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体変異体の活性及び結合の分析により調べる。
アミノ酸配列挿入は長さにおいて１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでの範囲に渡るアミノ−及び／又はカルボキシ末端融合、並びに単一又は多数のアミノ酸残基の配列内挿入を包含する。末端挿入の例はＮ末端メチオニル残基を有するヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体、又はエピトープタグに融合した抗体を包含する。他の変異体は抗体の血清中半減期を増大させる酵素又はポリペプチドのＮ又はＣ末端への融合を包含する。変異体の他の型はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体ではヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体分子の少なくとも１つのアミノ酸残基が除去され、その位置に異なる残基が挿入されている。置換突然変異誘発に関して最も有利な部位は超可変ループを包含するが、ＦＲ改変もまた意図される。抗原結合に関与する超可変領域残基又はＦＲ残基は一般的に比較的保存的な態様において置換される。
抗体の他のアミノ酸変異体は例えば１つ以上の炭水化物部分を排除すること、及び／又は１つ以上のグリコシル化部位を付加することにより、抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。抗体のグリコシル化は典型的にはＮ連結又はＯ連結である。Ｎ連結とはアスパラギン残基の側鎖への炭水化物部分の結合を指す。トリペプチド配列アスパラギン−Ｘ−セリン及びアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ただし式中Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）はアスパラギン側鎖への炭水化物部分の酵素的結合のための認識配列である。これらのトリペプチド配列の何れかがポリペプチド内に存在することで潜在的グリコシル化部位が生じる。Ｏ連結グリコシル化はヒドロキシアミノ酸、最も一般的にはセリン又はスレオニンへのＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース又はキシロースの結合を包含するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシセリンも使用してよい。
グリコシル化部位は上記したトリペプチド配列１つ以上の挿入（Ｎ連結グリコシル化部位の場合）又はセリン又はスレオニン残基１つ以上の付加（Ｏ連結グリコシル化部位の場合）により本発明の抗体に付加させることができる。ヒト化ＩＬ−１７Ａ特異的抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は当該分野で知られた種々の方法により製造される。これらの方法は例えば、限定しないが天然の原料からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）、又はオリゴヌクレオチド媒介（又は部位指向性）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、又はカセット突然変異誘発によるものを包含する。
通常は、ヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体のアミノ酸配列変異体は、重鎖又は軽鎖の何れかの元のヒト化抗体アミノ酸配列とのアミノ酸配列同一性が、少なくとも５０％、好ましくは少なくとも７０％、８０％、８５％、９０％、そして最も好ましくは少なくとも９５％であるアミノ酸配列を有することになる。この配列に関する同一性又は相同性は、配列を最適にアラインし（即ち配列をアラインし、そして必要に応じてギャップを導入することにより最大パーセント配列同一性を達成した後）、そして如何なる保存的置換も配列同一性の部分とみなさない場合に、ヒト化抗ＩＬ−１７Ａ残基と同一である候補配列におけるアミノ酸残基のパーセンテージとして本明細書においては定義される。抗体配列へのＮ末端、Ｃ末端又は内部の伸長、欠失、又は挿入の何れも、配列同一性又は相同性に影響するものとみなさない。
ヒト化抗体はＩｇＭ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＡ及びＩｇＥを包含する免疫グロブリンの任意のクラスから選択できる。１つの実施形態において、抗体はＩｇＧ抗体である。ＩｇＧの何れかのアイソタイプ、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４を使用できる。ＩｇＧアイソタイプの変異体も意図される。ヒト化抗体は１つより多いクラス又はアイソタイプに由来する配列を含んでよい。所望の生物活性を生じさせるために必要な定常ドメイン配列の最適化は実施例において後述する生物学的試験において抗体をすりすることにより容易に達成される。
同様に、軽鎖の何れかのクラスを本明細書に記載した化合物及び方法において使用できる。特に、カッパ、ラムダ、又はその変異体が本発明の化合物及び方法において有用である。
非ヒト抗体由来のＣＤＲ配列の何れかの適当な部分を用いて本発明のヒト化抗体を作製することができる。ＣＤＲ配列は置換、挿入又は欠失により突然変異誘発してよいが、そのような突然変異はＩＬ−１７Ａの結合親和性及び特異性を維持することが必要であるため最小限となる。典型的には、ヒト化抗体ＣＤＲ残基の少なくとも７５％が非ヒトＣＤＲ残基のものに相当することになり、より多くの場合９０％、そして最も好ましくは９５％超、そして頻繁には１００％となる。ヒト抗体由来のＦＲ配列の任意の適当な部分が使用できる。ＦＲ配列は、ＦＲ配列が使用するヒト及び非ヒトの抗体の配列と区別可能となるように少なくとも１つの残基の置換、挿入又は欠失により突然変異誘発できる。そのような突然変異は最小限であることを意図している。典型的には、ヒト化抗体残基の少なくとも７５％がヒトＦＲ残基のものに相当し、より多くの場合９０％、そして最も好ましくは９５％超となる。
所望の生物活性を呈する限りにおいてキメラ抗体又はそのフラグメントも同様に意図される（米国特許４，８１６，５６７；及びＭｏｒｒｉｓｏｎ等（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８１：６８５１−６８５５）。上記した通り、典型的なキメラ抗体は、ある種の抗体に由来する定常ドメイン配列を、異なる種から得られた抗原特異的抗体の可変ドメインに連結した状態で含んでいる。
本発明の結合化合物は二重特異性抗体を含んでよい。本明細書においては、「二重特異性抗体」という用語は、少なくとも２つの異なる抗原性エピトープに対して結合特異性を有する抗体、典型的にはモノクローナル抗体を指す。１つの実施形態において、エピトープは同じ抗原に由来する。別の実施形態においては、エピトープは２つの異なる抗原に由来する。二重特異性抗体を作製するための方法は当該分野で知られている。例えば、二重特異性抗体は２つの免疫グロブリン重鎖／軽鎖対の同時発現を用いて組み換えにより製造できる。例えばＭｉｌｓｔｅｉｎ等（１９８３）Ｎａｔｕｒｅ３０５：５３７−３９を参照できる。或いは、二重特異性抗体は化学的連結部を用いて製造できる。例えばＢｒｅｎｎａｎ等（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１を参照できる。二重特異性抗体は二重特異性抗体フラグメントを包含する。例えばＨｏｌｌｉｎｇｅｒ等（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：６４４４−４８；Ｇｒｕｂｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８（１９９４）を参照できる。
本発明の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体をヒト化する方法の例は実施例３に記載する。
ＩＶ．ＩＬ−１７Ａ特異的抗体の特性化
実施例２及び３においてより詳細に説明する通り、本明細書に記載した方法を用いてヒトＩＬ−１７Ａに対して免疫反応性のモノクローナル抗体を作製した。図１Ａ及び１Ｂはそれぞれ、本発明の種々の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の軽鎖及び重鎖の可変領域の配列アライメントを示す。ＣＤＲ領域を示し、そしてナンバリングはＫａｂａｔ等（１９９１）に従った。
ヒト化１６Ｃ１０軽鎖及び重鎖をコードする核酸配列を含有するプラスミドはアクセッション番号ＰＴＡ−７６７５の下にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ−Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）に２００６年７月２８日にブダペスト条約に準拠して寄託されている。抗体３０Ｃ１０及び２３Ｅ１２を発現するハイブリドーマはアクセッション番号ＰＴＡ−７７３９及びＰＴＡ−７７４０の下にＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ−Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）に２００６年７月２０日にブダペスト条約に準拠してそれぞれＪＬ７−３０Ｃ１０．Ｃ３及びＪＬ７−２３Ｅ１２．Ｂ１０として寄託されている。
本発明の種々のヒト化抗体の軽鎖及び重鎖のＣＤＲはそれぞれ表３及び４に示す通りである。更に、表４は、１つより多いアミノ酸を使用できる可変位置を有するｈｕ１６Ｃ１０のＶＨに関する追加的ＣＤＲを示す。
Figure 0005118699
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 一般的に、ヒト化抗体にかかわるＣＤＲは親ラット抗体のＣＤＲと同一であるが、ｈｕｍ１６Ｃ１０及びｈｕｍ４Ｃ３のＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３は例外であり、これらは各々対応するラットＣＤＲからの単一のアミノ酸変化を有する。それらは独立したクローンとして得られたが、親ラット抗体１６Ｃ１０及び４Ｃ３はＶＨ領域の配列は同一であり、そしてＶＬ領域はフレームワーク置換のみ異なっている（１６Ｃ１０の１５位のイソロイシンは４Ｃ３ではバリンである）。その結果、ＣＤＲはこれらの２つの親ラット抗体に関して、従ってそれらのヒト化型に関しても同一である。
それぞれ配列番号５及び２２において抗体１６Ｃ１０／４Ｃ３及び３０Ｃ１０のヒト化ＶＬ領域に関する配列を示す。それぞれ配列番号６及び２３において抗体１６Ｃ１０／４Ｃ３及び３０Ｃ１０のヒト化ＶＨ領域に関する配列を示す。これらのヒト化可変ドメインは、適切な定常ドメイン配列を付加することにより完全長のキメラ又はヒト化の抗体を生じさせるために使用してよい。他の実施形態は例えば表４に示す１６Ｃ１０重鎖中のＣＤＲアミノ酸残基における種々の他の改変を包含する。図１Ｂの残基のナンバリングを参照すれば、表４に記載した（そして配列番号１７及び２０中の）改変はＮ５４Ａ、Ｎ５４Ｑ、Ｎ６０Ａ、Ｎ６０Ｑ、Ｍ９６Ｌ、Ｍ９６Ａ、Ｍ９６Ｋ、Ｍ９６Ｆ、Ｍ１００ｈＦ、Ｍ１００ｈＬである。
本発明の１つの実施形態において、抗体１６Ｃ１０のキメラ軽鎖及び重鎖は、ヒト化ＶＬ（配列番号５）及びＶＨ領域（配列番号６）のＣ末端にヒト定常ドメイン（それぞれヒトカッパ軽鎖及びヒトＩｇＧ１定常ドメイン）を付加させることにより作製される。キメラ１６Ｃ１０軽鎖及び重鎖の配列は配列番号９及び１０に示す。他の実施形態においては、抗体３０Ｃ１０及び４Ｃ３のキメラ形態はキメラ１６Ｃ１０由来の同じ定常ドメインをそれらの対応するヒト化ＶＬ及びＶＨ領域（３０Ｃ１０の場合は配列番号２２及び２３；４Ｃ３の場合は配列番号５及び６）に融合させることにより作製する。ヒト化４Ｃ３のキメラ形態は当然ながらヒト化１６Ｃ１０のキメラ形態と同一である。
別の実施形態において、完全長のヒト化抗体は実施例３により詳細に説明する通り、キメラ形態の抗体のフレームワーク残基（即ちＣＤＲの部分ではない可変ドメイン中のアミノ酸残基）をヒト生殖細胞系統フレームワーク配列と置換することにより作製する。得られた抗体はラット抗体に由来するＣＤＲ配列のみを保持しており、定常ドメイン及びフレームワーク配列はヒト誘導配列により置き換えられている。シグナル配列を包含するヒト化抗体１６Ｃ１０に関する完全長の軽鎖及び重鎖はそれぞれ配列番号２及び４に示す。他の実施形態においては、抗体４Ｃ３及び２３Ｅ１２のヒト化された形態は１６Ｃ１０に関して記載した方法に準じて、即ち適切なヒトフレームワーク配列をこれらの抗体のキメラ型の配列となるように置換することにより作製する（上記）。実施例３を参照できる。
更に別の実施形態においては、本発明のヒト化抗体の完全長の軽鎖及び重鎖はそれらのＮ末端においてシグナルペプチドを有するようにクローニングすることにより抗体生産時の細胞からの分泌を促進する。１つの実施形態において、１９アミノ酸シグナル配列をヒト化１６Ｃ１０抗体の軽鎖及び重鎖の両方に付加させる（配列番号２及び４の残基−１９〜−１）。シグナル配列を付加させたヒト化１６Ｃ１０の完全長の軽鎖及び重鎖のＤＮＡ配列は、配列番号１及び３に示す。そのようなＤＮＡ配列は本発明のヒト化抗体の生産のための任意の適当な発現ベクターにおいてクローニングし、発現させることができる。他の実施形態においては、シグナル配列は、抗体１６Ｃ１０に関して記載したとおり、ヒト化抗体３０Ｃ１０及び４Ｃ３の軽鎖及び重鎖に付加させてよい。別の実施形態においては、シグナル配列ペプチドとしては、抗体の生産の意図する方法に応じて、配列番号１〜４に示す特定のシグナル配列とは異なるものを付加させる。そのようなシグナル配列は学術文献、例えばＣｈｏｏ等（２００５）”ＳＰｄｂ−ａ ｓｉｇｎａｌ ｐｅｐｔｉｄｅ ｄａｔａｂａｓｅ”，ＢＭＣ Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ６：２４９から得てよい。
更に別の実施形態においては、本明細書に示すヒト化ＶＬ及びＶＨ領域に異なる定常ドメインを付加させてよい。例えば、本発明の抗体（又はふぐ）の特定の意図される使用が改変されたエフェクター機能を求めることであれば、ＩｇＧ１以外の重鎖定常ドメインを使用してよい。ＩｇＧ１抗体は長い半減期及びエフェクター機能、例えば補体活性化及び抗体依存性細胞性細胞毒性をもたらすが、そのような活性は抗体の全ての使用にとって望ましいわけではない場合がある。そのような場合は、例えばＩｇＧ４定常ドメインを使用してよい。
Ｖ．ヒト化抗ＩＬ−１７Ａの親和性及び生物学的活性
本明細書でヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体において望ましいものとして同定された特性を有する抗体は、インビトロ、インビボにおいて、又は結合親和性を測定することにより、抑制性の生物活性に関してスクリーニングすることができる。目的の抗体（例えばサイトカインのその受容体への結合をブロックするもの）により結合される、ヒトＩＬ−１７Ａ上のものと同じエピトープに結合する抗体をスクリーニングにより得るためには、定型的な交差ブロッキング試験、例えばＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載のものを実施することができる。或いは、例えばＣｈａｍｐｅ等（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：１３８８−１３９４に記載の通り、目的のエピトープに抗体が結合するかどうかを調べるためにエピトープのマッピングを実施することができる。抗体の親和性（例えばヒトＩＬ−１７Ａに対する）は実施例７に記載するものを包含する標準的な方法を用いて測定してよい。好ましいヒト化抗体は約１００ｎＭ（１×１０−７Ｍ）以下、好ましくは約１０ｎＭ以下、より好ましくは約１ｎＭのＫｄ値でヒトＩＬ−１７Ａに結合するものである。更に好ましいものは、約２００ｐＭ（２×１０−１０Ｍ）、１００ｐＭ、５０ｐＭ、２０ｐＭ、１０ｐＭ、５ｐＭ、又更には２ｐＭ以下のＫｄ値を抗体が有する実施形態である。
本発明の化合物及び方法において有用な抗体及びそのフラグメントは、例えば、限定しないが生物学的に活性な抗体及びフラグメントを包含する。本明細書において「生物学的に活性な」という用語は、所望の抗原性エピトープに結合し、そして直接又は間接的に生物学的作用を発揮することができる抗体又は抗体フラグメントを指す。典型的には、これらの作用はＩＬ−１７Ａがその受容体に結合することができないことに起因する。本明細書においては、「特異的」という用語は標的抗原エピトープへの抗体の選択的結合を指す。抗体は所定設定条件下におけるＩＬ−１７Ａへの結合を無関連抗原又は抗原混合物への結合と比較することにより結合特異性に関して試験できる。抗体は無関連抗原又は抗原混合物に対するその親和性よりも少なくとも１０倍、好ましくは５０倍高値の親和性でそれがＩＬ−１７Ａに結合する場合に、特異的であるとみなす。ＩＬ−１７Ａ（又はそのフラグメント）を含む蛋白に「特異的に結合する」抗体はＩＬ−１７Ａ誘導配列を含まない蛋白には結合せず、即ち、「特異性」とは本明細書においては、ＩＬ−１７Ａ特異性に関するものであり、懸案の蛋白中に存在する可能性のある如何なる他の配列でもない。例えば、本明細書においては、ＩＬ−１７ＡとＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドを含む融合蛋白であるＦＬＡＧ−ｈＩＬ−１７Ａに「特異的に結合する」抗体はＦＬＡＧ（登録商標）ペプチド単独には、又はそれがＩＬ−１７Ａ以外の蛋白に融合している場合には結合しない。
後述する実施例（例えば実施例７）に示したデータは、ヒト化抗体１６Ｃ１０（親ラット重鎖ＣＤＲと相対比較してＮ５４Ｑ及びＭ９６Ａ置換を包含する）はヒトＩＬ−１７Ａへの結合に関する高い親和性を有し、ＫｉｎＥｘＡ分析により測定した場合１〜１０ｐＭ範囲のＫｄを有することを示す。インビトロ活性試験、例えばＢａ／Ｆ３ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ＧＣＳＦＲ細胞増殖試験（実施例１１）、正常ヒト皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）試験（実施例９）、及びヒト慢性関節リューマチ（ＲＡ）滑膜細胞試験（実施例８）によれば、ｈｕ１６Ｃ１０は、観察されたＩＣ５０値が典型的には試験中に存在するｈＩＬ−１７Ａの濃度（３試験においてそれぞれ１００ｐＭ、１０００ｐＭ及び１０００ｐＭ）の５０％以下であったことから、高親和性抗体であることが確認されている。実験で使用した抗体の２価の特性、及びＩＬ−１７Ａの２量体形成の可能性は、抗体０．５モル等量未満でＩＬ−１７Ａの所定濃度の５０％抑制を達成可能としている。インビボ活性試験、例えばコラーゲン誘導関節炎を呈しているマウスへの投与（実施例１６）及びＢＡＬ好中球リクルートメント試験（実施例１７）によれば、動物における本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体数種の活性が確認されている。インビトロ及びインビボの活性試験は又、ヒト化抗体１６Ｃ１０が中和抗体であることを確認しており、これは結合実験単独からは知られていなかった。
本発明の抗体数種がカニクイザルＩＬ−１７Ａ並びにヒトＩＬ−１７Ａに結合する能力が好都合である理由は、そのような潜在的治療抗体は、毒性学的試験のために別個のカニクイザル特異的抗体を開発する必要を生じさせることなくカニクイザルにおけるそのような試験に直接使用できるためである。本発明の抗体の数種の高親和性は又、ヒト（及び他の）対象における所要用量を低減する場合があり、これにより特定の有害反応の可能性も低減する点においても好都合である。更に又、高親和性は対象に投与すべき容量を低減し、そして治療経費を低減する場合がある。
ｈｕ１６Ｃ１０の血清中半減期はマウス及びカニクイザルにおいて計測されている。カニクイザルにおいては、静脈内（ｉｖ）投与後の半減期を０．４、４．０及び４０ｍｇ／ｋｇの投薬量を用いた用量範囲試験において評価した。薬物の血清中濃度は４２日間周期的に計測した。カニクイザルにおける皮下（ｓｃ）投与に関する半減期は４ｍｇ／ｋｇの投薬量で測定し、やはり４２日間追跡した。カニクイザルにおける半減期は薬物濃度ｖｓ時間のプロファイルの終末期の傾きにより計測した場合、ｉｖで１０〜１９日、ｓｃで２８日であった。より高用量における特定の変則的なデータポイントは分析から除外した。マウスにおける同様の実験はｈｕ１６Ｃ１０抗体がｉｖで１３〜２５日、ｓｃで１２〜２２日の半減期を有することを示していた。
実施例１９は本発明の例示される抗ＩＬ−１７Ａ抗体（１６Ｃ１０）により結合されたエピトープ、即ちヒトＩＬ−１７ＡのＬ７４−Ｙ８５の領域（配列番号４０）における残基を測定するために使用される方法を説明している。本明細書に提示する生物学的試験データは抗体１６Ｃ１０が高親和性中和抗体であることを明らかにしているため、同じエピトープに結合する他の抗体も又中和抗体であり、そしておそらくは同様に高結合親和性を有することが期待される。本明細書において測定したエピトープは構造決定ではなくむしろ機能的計測により得られるものであり、そして本明細書において報告しているエピトープは、詳細においては構造的方法により決定されたエピトープとは異なる場合がある。本明細書に報告するエピトープは抗体１６Ｃ１０の結合のために重要であるアミノ酸残基の全てではなくともよいが、少なくとも一部を包含する。本発明の抗体により結合されるエピトープは又、他の方法、例えば交差ブロッキング実験（実施例１２参照）により、或いは、Ｘ線結晶構造測定のような構造的方法により調べてもよい。抗体１６Ｃ１０と同じエピトープに結合する追加的抗体は例えばｈＩＬ−１７Ａに対して作製された抗体のスクリーニングによるか、又はエピトープ配列を含むペプチドによる動物の免疫化により得てよい。
Ｖ．抗体生産
抗体の組み換え生産のためには、それをコードする核酸を単離し、そして、その後のクローニング（ＤＮＡ増幅）のため、又は発現のための複製可能なベクター内に挿入する。モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは従来の操作法を用いて容易に単離され、配列決定される（例えば抗体の重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによる）。多くのベクターを使用できる。ベクター成分は一般的に以下のもの、即ち、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終止配列の１つ以上を包含するがこれらに限定されない。１つの実施形態において、本発明のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体の軽鎖及び重鎖の両方が同じベクター、例えばプラスミド又はアデノウィルスベクターから発現される。
本発明の抗体は当該分野で知られている任意の方法により生産してよい。１つの実施形態において、抗体は培養物中の哺乳類又は昆虫の細胞、例えばチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト胚性腎（ＨＥＫ）２９３細胞、マウス骨髄腫ＮＳＯ細胞、ベビーハムスター腎（ＢＨＫ）細胞、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ卵巣（Ｓｆ９）細胞において発現される。１つの実施形態においては、ＣＨＯ細胞から分泌された抗体を回収し、そして標準的なクロマトグラフィー法、例えばプロテインＡ、カチオン交換、アニオン交換、疎水性相互作用、及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーにより精製する。得られた抗体を濃縮し、２０ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ５．５中に保存する。
別の実施形態においては、本発明の抗体はＷＯ２００５／０４０３９５に記載の方法に従って酵母中で生産する。手短にいえば、目的の抗体の個々の軽鎖又は重鎖をコードするベクターを、異なる酵母の一倍体細胞、例えば酵母の一倍体細胞が場合により補充栄養要求性である酵母Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓの異なる交配型内に導入する。次に形質転換された一倍体酵母細胞を交配又は融合させることにより、重鎖及び軽鎖の両方を生産できる二倍体の酵母細胞を得る。ここで二倍体の菌株は完全に組み立てられた生物学的に活性な抗体を分泌することが可能となる。２つの鎖の相対的発現レベルは、例えば異なるコピー数のベクターを使用すること、異なる強度の転写プロモーターを使用すること、又は一方又は両方の鎖をコードする遺伝子の転写を駆動する誘導プロモーターから発現を誘導することにより最適化できる。
１つの実施形態において、複数の異なる抗ＩＬ−１７Ａ抗体（「元」の抗体）のそれぞれの重鎖及び軽鎖を酵母一倍体細胞内に導入することにより、軽鎖複数を発現する１つの交配型の一倍体酵母菌株のライブラリ、及び、重鎖複数を発現する異なる交配型の一倍体酵母菌株のライブラリを作製する。一倍体菌株のこれらのライブラリを交配（又はスフェロプラストとして融合）させることにより軽鎖及び重鎖の種々の可能な順列よりなる抗体のコンビナトリアルなライブラリを発現する一連の二倍体酵母細胞が得られる。次に抗体のコンビナトリアルなライブラリをスクリーニングすることにより、抗体の何れかが元の抗体の特性よりも優秀な特性（例えばＩＬ−１７Ａに対するより高い親和性）を有するかどうかを調べることができる。例えばＷＯ２００５／０４０３９５を参照できる。
別の実施形態においては、本発明の抗体は、分子量約１３ｋＤａのポリペプチド中で抗体可変ドメインの部分が連結しているヒトドメイン抗体である。例えば米国特許公開２００４／０１１０９４１を参照できる。そのような単一ドメインの低分子量の薬剤は、合成が容易であること、安定性、及び投与経路、という観点から多くの利点をもたらす。
ＶＩ．医薬組成物及び投与
本発明の抗ｈｕＩＬ−１７Ａ抗体の医薬品又は滅菌組成物を製造するためには、抗体を製薬上許容しうる担体又は賦形剤と混合する。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ及び米国薬局方：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｆｏｒｍｕｌａｒｙ，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８４）を参照できる。
治療用及び診断用の薬剤の製剤は、生理学的に許容される担体、賦形剤、又は安定化剤を、例えば凍結乾燥粉末、スラリー、水性の溶液又は懸濁液の形態において混合することにより製造してよい（例えばＨａｒｄｍａｎ等（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇｅｎｎａｒｏ（２０００）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ａｖｉｓ等（編）（１９９３）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ等（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ等（編）（１９９０）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｗｅｉｎｅｒ ａｎｄ Ｋｏｔｋｏｓｋｉｅ（２０００）Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔ Ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ Ｓａｆｅｔｙ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ参照）。１つの実施形態において、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はｐＨ５〜６の酢酸ナトリウム溶液中に適切な濃度にまで希釈し、そして浸透圧調節用にＮａＣｌ又はスクロースを添加する。追加的な物質、例えばポリソルベート２０又はポリソルベート８０を添加することにより安定性を増強してよい。
単独又は他剤との組み合わせにおいて投与される抗体組成物の毒性及び治療効果は、例えばＬＤ５０（集団の５０％に対して致命的な用量）及びＥＤ５０（集団の５０％において治療上有効である用量）を測定するための細胞培養物又は実験動物における標準的な薬学的操作法により測定できる。毒性及び治療作用の間の用量比が治療指数である（ＬＤ５０／ＥＤ５０）。高い治療指数を示す抗体が好ましい。これらの細胞培養試験及び動物実験から得られるデータは、ヒトにおいて使用するための用量の範囲を設定する場合に使用できる。そのような化合物の用量は毒性を殆ど又は全く伴わないＥＤ５０を包含する循環系中濃度の範囲内にあることが好ましい。用量は使用する剤型及び投与経路に応じてこの範囲内で変動してよい。
投与の様式は特に重要ではない。適当な投与経路は、経口、直腸内、経粘膜、又は腸内投与；非経腸送達、例えば筋肉内、皮下、骨髄内注射、並びに髄腔内、直接脳室内、静脈内、腹腔内、鼻内、又は眼内の注射を包含する。投与は種々の従来の態様において、例えば経口摂取、吸入、吸収、局所適用、又は皮膚、経皮、皮下、腹腔内、非経腸、動脈内、又は静脈内注射において行うことができる。患者への静脈内投与が好ましい。
或いは、全身投与ではなく局所投与において抗体を投与することができ、例えば免疫病理学的に特徴づけられる関節炎性の関節又は病原体に誘導された病変内に、頻繁には蓄積注射又は除放性製剤において直接抗体を注射することが挙げられる。更に又、例えば免疫病理学的に特徴づけられる関節炎性の関節又は病原体に誘導された病変をターゲティングする組織特異性抗体でコーティングされたリポソーム中の、ターゲティングされた薬物送達システムにおいて抗体を投与してよい。リポソームは罹患組織にターゲティングされ、そしてこれにより選択的に取り込まれることになる。
投与様式は数種の要因、例えば治療用抗体の血清中又は組織中のターンオーバー速度、症状のレベル、治療用抗体の免疫原性、及び生物学的マトリックス中の標的細胞への接近し易さに依存する。好ましくは、投与様式は標的疾患状態の改善をもたらすために十分な治療用抗体を送達しつつ、同時に望ましくない副作用を最小限にする。従って、送達される生物薬剤の量は部分的には特定の治療用抗体及び治療すべき状態の重症度に依存している。治療用抗体の適切な用量を選択する場合の指針は入手可能である（例えばＷａｗｒｚｙｎｃｚａｋ（１９９６）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｂｉｏｓ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂ．Ｌｔｄ，Ｏｘｆｏｒｄｓｈｉｒｅ，ＵＫ；Ｋｒｅｓｉｎａ（編）（１９９１）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ａｎｄ Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｃｈ（編）（１９９３）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ｉｎ Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｂａｅｒｔ等（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：６０１−６０８；Ｍｉｌｇｒｏｍ等（１９９９）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１９６６−１９７３；Ｓｌａｍｏｎ等（２００１）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４４：７８３−７９２；Ｂｅｎｉａｍｉｎｏｖｉｔｚ等（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４２：６１３−６１９；Ｇｈｏｓｈ等（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４８：２４−３２；Ｌｉｐｓｋｙ等（２０００）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４３：１５９４−１６０２参照）。
適切な用量の決定は、例えば当該分野で治療に影響すると知られているかもしくは考えられているパラメーター又は要因を用いて医師により行われる。一般的に、用量は最適用量より幾分低値の量で始まり、そしてその後任意の望ましくない副作用と相対比較しながら所望又は最適な作用が達成されるまで少量ずつ漸増させる。重要な診断尺度には例えば炎症の症状の尺度、又は生産される炎症性サイトカインのレベルが包含される。好ましくは、使用されることになる生物薬剤は治療のためにターゲティングされる動物と同じ種から誘導されることにより、試薬への炎症性、自己免疫性、又は増殖性の応答を最小限にする。ヒト対象の場合は、例えばキメラ、ヒト化、及び完全ヒト型抗体が好ましい。
抗体、抗体フラグメント、及びサイトカインは連続注入によるか、又は例えば毎日、週１〜７回、毎週、隔週、毎月、隔月などで投与される用量により、提供することができる。用量は静脈内、皮下、局所、経口、経鼻、直腸、筋肉内、脳内、脊髄内、又は吸入により提供してよい。週当たり全用量は一般的に少なくとも０．０５μｇ／ｋｇ体重、より一般的には少なくとも０．２μｇ／ｋｇ、０．５μｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ、０．２５ｍｇ／ｋｇ、１．０ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、５．０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、又はそれより高値である（例えばＹａｎｇ等（２００３）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９：４２７−４３４；Ｈｅｒｏｌｄ等（２００２）Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４６：１６９２−１６９８；Ｌｉｕ等（１９９９）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．Ｐｓｙｃｈ．６７：４５１−４５６；Ｐｏｒｔｉｅｌｊｉ等（２００３）Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．５２：１３３−１４４参照）。用量は又例えば０．１、０．３、１、３、１０、３０、１００、３００μｇ／ｍｌ又はそれより高値のような対象の血清中の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の所定標的濃度を達成するように提供してもよい。別の実施形態においては、本発明のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体は１０、２０、５０、８０、１００、２００、５００、１０００、又は２５００ｍｇ／対象において毎週、隔週、又は「４週毎」で皮下又は静脈内投与される。
本明細書においては、「抑制する」又は「治療する」又は「治療」とは障害に関連する症状の発症の遅延化、及び／又はそのような障害の症状の重症度の低減を包含する。用語は更に既存の制御不可能な症状又は望ましくない症状を改善すること、追加的症状を防止すること、及びそのような症状の伏在原因を改善又は防止することを包含する。即ち用語は、障害、疾患又は症状を有するか、又はそのような障害、疾患又は症状を発症する潜在性を有する脊椎動物の対象に対し、有益な結果がもたらされていることを指す。
本明細書においては、「治療有効量」、「治療有効用量」及び「有効量」という用語は単独又は別の治療薬と組み合わせて細胞、組織、又は対象に投与された場合に疾患又は状態の症状１つ以上又はそのような疾患又は状態の進行を防止又は改善するために効果的である本発明のＩＬ−１７Ａ結合化合物の量を指す。治療有効用量は更に症状の改善、例えば該当する医学的状態の治療、治癒、防止、又は改善、又はそのような状態の治療、治癒、防止、又は改善の速度の上昇をもたらすために十分な結合化合物の量を指す。単独で投与される個々の活性成分に適用する場合は、治療有効用量はその成分単独を指す。組み合わせて適用する場合は、治療有効用量は、組み合わせ、逐次的、又は同時の何れにより投与されるかに関わらず、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせた量を指す。治療薬の有効量は、少なくとも１０％、通常は少なくとも２０％、好ましくは少なくとも３０％、より好ましくは少なくとも４０％；そして最も好ましくは少なくとも５０％まで、診断の尺度又はパラメーターを改善させることになる。
第２の治療薬、例えばサイトカイン、別の治療用抗体、ステロイド、化学療法剤、又は抗生物質の同時投与のための方法は当該分野で良く知られている。例えばＨａｒｄｍａｎ等（編）（２００１）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ’ｓ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第１０版、ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｐｏｏｌｅ ａｎｄ Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（編）（２００１）Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ｆｏｒ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｃｈａｂｎｅｒ ａｎｄ Ｌｏｎｇｏ（編）（２００１）Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ ａｎｄ Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡを参照できる。本発明の医薬組成物は又免疫抑制剤又は免疫調節剤を含有してよい。任意の適当な免疫抑制剤を使用することができ、例えば抗炎症剤、コルチコステロイド、シクロスポリン、タクロリムス（即ちＦＫ−５０６）、シロリムス、インターフェロン、可溶性サイトカイン受容体（例えばｓＴＮＲＦ及びｓＩＬ−１Ｒ）、サイトカイン活性を中和する薬剤（例えばインフリキシマブ、エタネルセプト）、ミコフェノレートモフェチル、１５−デオキシスペルグアリン、サリドマイド、グラチラマー、アザチオプリン、レフルノミド、シクロホスファミド、メトトレキセート等を挙げられるがこれらに限定されない。医薬組成物は又、光療法及び放射線のような他の治療手段とともに使用することもできる。
本発明のＩＬ−１７Ａ結合化合物は又、例えば、限定しないがＩＬ−２３、ＩＬ−１β、ＩＬ−６及びＴＧＦ−βのような他のサイトカインの拮抗剤（例えば抗体）１つ以上と組み合わせて使用することもできる。例えばＶｅｌｄｈｏｅｎ（２００６）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ２４：１７９−１８９；Ｄｏｎｇ（２００６）Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６（４）：３２９−３３３を参照できる。種々の実施形態において、本発明のＩＬ−１７Ａ結合化合物は他の拮抗剤の投与の前、同時、又は後に投与される。１つの実施形態において、本発明のＩＬ−１７Ａ結合化合物は単独で、又はＩＬ−２３拮抗剤と組み合わせて、有害免疫応答（例えばＭＳ、クローン病）の急性初期の治療において使用される。後者の場合においては、ＩＬ−１７Ａ結合化合物は漸減させてよく、そして、ＩＬ−２３の拮抗剤のみによる治療を継続することにより有害応答の抑制を維持する。或いは、ＩＬ−１β、ＩＬ−６及び／又はＴＧＦ−βに対する拮抗剤を、本発明のＩＬ−１７Ａ結合化合物と同時、その前、又は後に投与してよい。Ｃｕａ ａｎｄ Ｋａｓｔｅｌｅｉｎ（２００６）Ｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：５５７−５５９；Ｔａｔｏ ａｎｄ Ｏ’Ｓｈｅａ（２００６）Ｎａｔｕｒｅ４４１：１６６−１６８；Ｉｗａｋｕｒａ ａｎｄ Ｉｓｈｉｇａｍｅ（２００６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１６：１２１８−１２２２を参照できる。
典型的な獣医科用、実験用、又は研究用の対象には、サル、イヌ、ネコ、ラット、マウス、ウサギ、モルモット、ウマ、及びヒトが包含される。
ＶＩＩ．使用
本発明は炎症性の障害及び状態、並びに自己免疫性及び増殖性の障害の治療及び診断のために操作された抗ＩＬ−１７Ａ抗体を使用するための方法を提供する。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、多発性硬化症（ＭＳ）、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、嚢胞性線維症（ＣＦ）、乾癬、全身硬皮症、自家移植片拒絶、自己免疫性心筋炎、及び腹膜癒着の診断、防止又は治療のための方法を提供する（例えばＣｈｕｎｇ等（２００２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９５：１４７１−７８参照）。
乾癬
皮膚は潜在的に有害な抗原との接触を防止しながら、内部ミリューと環境との間の重要な境界線として機能している。抗原／病原体の浸透時には、抗原を排除するために炎症応答が誘導される。この応答は主にＴ細胞、多形核細胞、及びマクロファージよりなる皮膚浸潤をもたらす（例えばＷｉｌｌｉａｍｓ ａｎｄ Ｋｕｐｐｅｒ（１９９６）Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．，５８：１４８５−１５０７参照）。通常では、病原体によりトリガーされるこの炎症応答は厳密な制御下にあり、病原体の排除時に停止することになる。
特定の場合において、この炎症応答は外的刺激の非存在下及び適切な制御の非存在下で生じ、皮膚の炎症をもたらす。本発明は皮膚の炎症を治療及び診断するための方法を提供する。皮膚の炎症、即ち上記した細胞浸潤並びにこれらの細胞からの分泌サイトカインの結果であるものは、数種の炎症性障害、例えば、瘢痕性類天疱瘡、硬皮症、化膿性汗腺炎、毒性表皮壊死、挫瘡、骨炎、対宿主性移植片病（ＧｖＨＤ）、壊疽性膿皮症、及びベーチェット症候群を包含する（例えばＷｉｌｌａｍｓ ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．，２７：５８５−５９０参照）。皮膚炎症の大部分の共通した形態は乾癬である。
乾癬は炎症性浸潤と合併したケラチノサイトのＴ細胞媒介増殖亢進を特徴とする。疾患は特定の区別可能な重複した臨床的表現型、例えば慢性の斑状患部、皮膚発疹、及び膿疱性の患部を有している（例えばＧｕｄｊｏｎｓｓｏｎ等（２００４）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３５：１−８参照）。乾癬患者の約１０％が関節炎を発症する。疾患は強力であるが複雑な遺伝子的素因を有し、一卵性双生児と６０％合致している。
典型的な乾癬患部は肥厚した銀色の鱗片に被覆された明確な境界線を有する紅斑様のプラークである。乾癬組織の炎症及び増殖亢進は、正常な皮膚とは異なる組織学的な抗原性及びサイトカインのプロファイルを伴う。乾癬に関連するサイトカインに属するものとしてはＴＮＦα、ＩＬ−１９、ＩＬ−１８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１２、ＩＬ−７、ＩＮＦγ、ＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−２３が挙げられる（Ｇｕｄｊｏｎｓｓｏｎ等参照、上出）。ＩＬ−１７Ａは乾癬性の皮膚に検出されている。
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体は単独又は他剤と組み合わせて乾癬の突発的悪化の防止、治療、診断、及び予測において使用してよい。乾癬の拡大の予測及び治療における抗ＩＬ−１７Ａ抗体の使用は共通に譲渡された米国特許出願公開２００５／０２８７５９３及びＰＣＴ特許公開ＷＯ２００５／１０８６１６に記載されており、その開示内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。
慢性関節リューマチ（ＲＡ）
ＲＡは世界人口の約０．５％が罹患している滑膜性の関節の炎症を特徴とする進行性の全身性疾患である。Ｅｍｅｒｙ（２００６）ＢＭＪ３３２：１５２−１５５を参照できる。関節の炎症は変形、疼痛、硬直及び浮腫、そして究極的には関節の不可逆的な劣化をもたらす場合がある。罹患関節は、膝、肘、頸部及び手掌及び脚部の関節を包含する。従来の治療では症状を軽減するためにＮＳＡＩＤを使用し、その後、疾患修飾性抗リューマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、例えば金、ペニシラミン、スルファラジン及びメトトレキセートを投与する。最近の進歩はＴＮＦ−α抑制剤、例えばモノクローナル抗体、例えばインフリキシマブ、アダルミマブ及びゴリムマブ、及び受容体融合蛋白、例えばエタネルセプトを用いた治療を包含する。このようなＴＮＦ−α抑制剤を用いた治療は疾患に起因する構造的損傷を劇的に低減する。
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はＲＡを治療するためにそのような治療を必要とする対象において使用してよい。実施例１６はＲＡのコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルを用いた実験を説明しており、それに関するデータは図３Ａ〜３Ｄ及び表１５に示す。結果は、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体により治療された動物において、希釈剤及びアイソタイプの対照と比較して高い疾患重症度スコアを有する足の割合が低減されたことを示している。
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はＲＡの他の治療、例えばメトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、ステロイド、ミコフェノレートモフェチル、ＮＳＡＩＤ、又はＴＮＦ−α抑制剤（抗体又は受容体フラグメント）と組み合わせてもよい。
１つの実施形態において、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はＤＭＡＲＤ単独による治療に対し過去に十分な応答を示さなかったヒト対象を治療するために使用される。別の実施形態においては、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いた治療はＤＭＡＲＤ療法の過去の失敗を必要とすることなく、疾患の経過における早期に開始される。そのような早期の介入は例えば抗体療法の安全性が堅固に確立されれば適切であるといえる。
臨床的改善は実施例１８でより詳細に説明する通り、ＡＣＲスコアを測定することにより計測される。種々の実施形態において、２０、５０及び７０のＡＣＲスコアが望ましい終点であり、そしてこれらの終点は治療の過程の何れかの適切な時点、例えば５、１０、１５、２４、４０、５０週目、又はそれより後に評価してよい。
多発性硬化症（ＭＳ）
ＭＳは神経線維からのミエリンの損失が起こり、プラーク又は患部が生じる中枢神経系（ＣＮＳ）の自己免疫性の疾患であると考えられている。最も一般的な形態は回帰性／弛張性ＭＳであり、その場合、明確な境界線を有する症候性の突発的悪化が起こり、その後、部分的又は完全な弛張の時期となる。従来の治療の選択肢はインターフェロン−β−１ａ及び−１ｂ、ミトキサントロン、テトラペプチドグラチラマーアセテート、治療用アルファ−４−インテグリン特異性抗体（ナタリズマブ）、又はアルファ−４−インテグリンの小分子拮抗剤（例えばＷＯ２００３／０８４９８４に開示されているもの）を包含する。
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はＭＳを治療するためにそのような治療が必要な対象において使用してよい。抗ＩＬ−１７Ａ抗体は又、ＭＳの他の治療法、例えばインターフェロン−β、インターフェロン−α、ステロイド、又はアルファ−４−インテグリン特異的抗体と組み合わせてもよい。
炎症性腸疾患（ＩＢＤ）
ＩＢＤは腸が炎症を起こして腹部の痙攣及び疼痛、下痢、体重減少及び腸内出血がもたらされる障害（例えばクローン病及び潰瘍性結腸炎）群の名称である。ＩＢＤには６００，０００人超の米国人が罹患している。従来の治療の選択肢としてはスルファサラジン、コルチコステロイド（例えばプレドニソン）、免疫系の抑制剤、例えばアザチオプリン及びメルカプトプリン、或いは抗生物質（例えばメトロニダゾール）をクローン病に対して使用している。治療用モノクローナル抗体はエタネルセプト、ナタリズマブ及びインフリキシマブを包含する。
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はＩＢＤを治療するためにそのような治療を必要とする対象において使用してよい。Ｙｅｎ等（２００６）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１６：１３１０−１３１６；Ｆｕｊｉｍｏ等（２００３）Ｇｕｔ５２：６５−７０）。本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はＩＢＤに対する他の治療、例えばＩＬ−１０（米国特許５，３６８，８５４、７，０５２，６８６）、ステロイド及びスルファサラジンと組み合わせてもよい。
他の実施形態においては、ＩＬ−１７Ａのその受容体に対する結合をブロックしない本発明の抗体（例えば非中和抗体１２Ｅ６）を長期のＩＬ−１７Ａ活性を必要とする対象においてＩＬ−１７Ａを安定化させるために治療上使用する。そのような対象は感染症又は癌に罹患した患者を包含する。
本発明の多くの変更及び変形は、当業者には明らかとなる通り、その精神及び範囲から逸脱することなく行うことができる。本発明は添付請求項及びそのような請求項の該当する等価物の完全な範囲の観点により定義される。後述する実施例を包含する本明細書に記載した特定の実施形態は例示のために示しており、その詳細により本発明の範囲を限定するものではない。
（実施例１）
一般的方法
分子生物学における標準的方法は記載されている（Ｍａｎｉａｔｉｓ等（１９８２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ（２００１）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，第３版，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｗｕ（１９９３）Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ，Ｖｏｌ．２１７，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．）。標準的な方法は又Ａｕｓｂｅｌ等（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．１−４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹにも記載されており、これは細菌細胞におけるクローニング及びＤＮＡ突然変異誘発（第１巻）、哺乳類細胞及び酵母におけるクローニング（第２巻）、グリココンジュゲート及び蛋白発現（第３巻）及びバイオインフォマティックス（第４巻）を記載している。
免疫沈降、クロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、及び結晶化を包含する蛋白精製のための方法は記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ等（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。化学分析、化学修飾、翻訳後修飾、融合蛋白の製造、蛋白のグリコシル化は記載されている（例えばＣｏｌｉｇａｎ等（２０００）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ａｕｓｕｂｅｌ等（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．３，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，ＮＹ，ＮＹ，ｐｐ．１６．０．５−１６．２２．１７；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．（２００１）Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｆｏｒ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ．；ｐｐ．４５−８９；Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ（２００１）ＢｉｏＤｉｒｅｃｔｏｒｙ，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ，ｐｐ．３８４−３９１参照）。 ポリクローナル及びモノクローナル抗体の製造、精製、及びフラグメント化は記載されている（Ｃｏｌｉｇａｎ等（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９９９）Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，上出）。リガンド／受容体相互作用を特性化するための標準的手法を使用できる（例えばＣｏｌｉｇａｎ等（２００１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．４，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ参照）。
モノクローナル、ポリクローナル、及びヒト化抗体を製造できる（例えばＳｈｅｐｅｒｄ ａｎｄ Ｄｅａｎ（ｅｄｓ．）（２０００）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖ．Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ ａｎｄ Ｄｕｂｅｌ（ｅｄｓ．）（２００１）Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ｐｐ．１３９−２４３；Ｃａｒｐｅｎｔｅｒ等（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：６２０５；Ｈｅ等（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：１０２９；Ｔａｎｇ等（１９９９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：２７３７１−２７３７８；Ｂａｃａ等（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８−１０６８４；Ｃｈｏｔｈｉａ等（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４２：８７７−８８３；Ｆｏｏｔｅ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２４：４８７−４９９；Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．６，３２９，５１１参照）。ヒト化の代替法はファージ上にディスプレイされたヒト抗体ライブラリ又はトランスジェニックマウス中のヒト抗体ライブラリの使用である（Ｖａｕｇｈａｎ等（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３０９−３１４；Ｂａｒｂａｓ（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ １：８３７−８３９；Ｍｅｎｄｅｚ等（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｃｈａｍｅｓ（２０００）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ２１：３７１−３７７；Ｂａｒｂａｓ等（２００１）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；Ｋａｙ等（１９９６）Ｐｈａｇｅ Ｄｉｓｐｌａｙ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ．；ｄｅ Ｂｒｕｉｎ等（１９９９）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１７：３９７−３９９）。
単鎖抗体及びダイアボディーが記載されている（例えばＭａｌｅｃｋｉ等（２００２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９９：２１３−２１８；Ｃｏｎｒａｔｈ等（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：７３４６−７３５０；Ｄｅｓｍｙｔｅｒ等（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２６２８５−２６２９０；Ｈｕｄｓｏｎ ａｎｄ Ｋｏｒｔｔ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２３１：１７７−１８９；ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏ．４，９４６，７７８参照）。２官能性抗体が報告されている（例えばＭａｃｋ等（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９２：７０２１−７０２５；Ｃａｒｔｅｒ（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：７−１５；Ｖｏｌｋｅｌ等（２００１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ １４：８１５−８２３；Ｓｅｇａｌ等（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２４８：１−６；Ｂｒｅｎｎａｎ，ｅｔ ａｌ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：８１−８３；Ｒａｓｏ等（１９９７）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：２７６２３；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２２９：１２０２−１２０７；Ｔｒａｕｎｅｃｋｅｒ等（１９９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：３６５５−３６５９；ａｎｄ Ｕ．Ｓ．Ｐａｔ．Ｎｏｓ．５，９３２，４４８，５，５３２，２１０，ａｎｄ ６，１２９，９１４参照）。
二重特異性抗体も報告されている（例えば Ａｚｚｏｎｉ等（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３４９３；Ｋｉｔａ等（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：６９０１；Ｍｅｒｃｈａｎｔ等（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．７４：９１１５；Ｐａｎｄｅｙ等（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３８６３３；Ｚｈｅｎｇ等（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：１２９９９；Ｐｒｏｐｓｔ等（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５：２２１４；Ｌｏｎｇ（１９９９）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８７５参照）。
抗原の精製は抗体の作製のためには必要ではない。動物は目的の抗原を保有する細胞で免疫化できる。次に脾細胞を免疫化動物から単離し、そして脾細胞を骨髄腫細胞系統と融合することによりハイブリドーマを製造することができる（例えばＭｅｙａａｒｄ等（１９９７）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ７：２８３−２９０；Ｗｒｉｇｈｔ等（２０００）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ １３：２３３−２４２；Ｐｒｅｓｔｏｎ等，上出；Ｋａｉｔｈａｍａｎａ等（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３：５１５７−５１６４参照）。抗体は通常は少なくとも約１０−６Ｍ、典型的には少なくとも約１０−７Ｍ、より典型的には少なくとも約１０−８Ｍ、好ましくは少なくとも約１０−９Ｍ、そしてより好ましくは少なくとも約１０−１０Ｍ、そして最も好ましくは少なくとも約１０−１１ＭのＫｄで結合することになる（例えばＰｒｅｓｔａ等（２００１）Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．８５：３７９−３８９；Ｙａｎｇ等（２００１）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｌ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３８：１７−２３；Ｃａｒｎａｈａｎ等（２００３）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．（Ｓｕｐｐｌ．）９：３９８２ｓ−３９９０ｓ参照）。
抗体は例えば小分子薬物、酵素、リポソーム、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコンジュゲートできる。抗体は治療、診断、キット又は他の目的のために有用であり、そして例えば染料、放射性同位体、酵素、又は金属、例えばコロイド状金にカップリングさせた抗体を包含する（例えばＬｅ Ｄｏｕｓｓａｌ等（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１６９−１７５；Ｇｉｂｅｌｌｉｎｉ等（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：３８９１−３８９８；Ｈｓｉｎｇ ａｎｄ Ｂｉｓｈｏｐ（１９９９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６２：２８０４−２８１１；Ｅｖｅｒｔｓ等（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：８８３−８８９参照）。
フローサイトメトリー、例えば蛍光活性化細胞ソーティング（ＦＡＣＳ）のための方法を使用できる（例えばＯｗｅｎｓ等（１９９４）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｆｏｒ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｇｉｖａｎ（２００１）Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，第２版；Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪ；Ｓｈａｐｉｒｏ（２００３）Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ，Ｈｏｂｏｋｅｎ，ＮＪを参照できる。例えば診断薬としての使用のための核酸、例えば核酸プライマー及びプローブ、ポリペプチド、及び抗体を修飾するために適する蛍光試薬を使用できる（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ；Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ（２００３）Ｃａｔａｌｏｇｕｅ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）。
免疫系の組織学的検討の標準的方法は記載されている（例えばＭｕｌｌｅｒ−Ｈａｒｍｅｌｉｎｋ（ｅｄ．）（１９８６）Ｈｕｍａｎ Ｔｈｙｍｕｓ： Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｈｉａｔｔ等（２０００）Ｃｏｌｏｒ Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ，ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａ，ＰＡ；Ｌｏｕｉｓ等（２００２）Ｂａｓｉｃ Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ：Ｔｅｘｔ ａｎｄ Ａｔｌａｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ参照）。
例えば抗原フラグメント、リーダー配列、蛋白折り畳み、機能的ドメイン、グリコシル化部位、及び配列アライメントを調べるためのソフトウエアパッケージ及びデータベースを使用できる（例えばＧｅｎＢａｎｋ，Ｖｅｃｔｏｒ ＮＴＩ（登録商標） Ｓｕｉｔｅ（Ｉｎｆｏｒｍａｘ，Ｉｎｃ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ）；ＧＣＧ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｐａｃｋａｇｅ（Ａｃｃｅｌｒｙｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）；ＤｅＣｙｐｈｅｒ（登録商標）（ＴｉｍｅＬｏｇｉｃ Ｃｏｒｐ．，Ｃｒｙｓｔａｌ Ｂａｙ，Ｎｅｖａｄａ．）；Ｍｅｎｎｅ等（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ １６： ７４１−７４２；Ｍｅｎｎｅ等（２０００）Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ｎｏｔｅ １６：７４１−７４２；Ｗｒｅｎ等（２００２）Ｃｏｍｐｕｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｐｒｏｇｒａｍｓ Ｂｉｏｍｅｄ．６８：１７７−１８１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３３：１７−２１；ｖｏｎ Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１４：４６８３−４６９０参照）。
（実施例２）
ラット抗ヒトＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体
以下のようにしてヒトＩＬ−１７Ａに対するモノクローナル抗体を得た。８週齢の雌性Ｌｅｗｉｓラット（Ｈａｒｌａｎ Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ， Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄｉａｎａ，ＵＳＡ）にＨＥＫ２３９細胞中アデノウィルスベクターから発現させておいた組み換えヒトＩＬ−１７Ａ（ｒｈＩＬ−１７Ａ）の一連の注射を行った。注射は第０、１４、３２、４６及び８３日に行った。
第０日の注射はフロイント完全アジュバントの腹腔内（ｉｐ）注射を伴った５０μｇのｒｈＩＬ−１７Ａの皮下注射とした。第１４、３２及び４６日の２５μｇｒｈＩＬ−１７Ａｓｃ注射にはフロイント不完全アジュバントのｉｐ注射を伴わせた。第８３日の注射はフロイント不完全アジュバント中の２０μｇｒｈＩＬ−１７Ａのｉｐ注射と食塩水中のｒｈＩＬ−１７Ａの静脈内（ｉｖ）尾部静脈注射の組み合わせとした。
被験採血は第５３日に行った。ラット脾細胞の融合は第８７日に、１．６×１０８脾細胞及び１．８×１０８骨髄腫細胞を用いながら、３０枚の９６穴プレートに分割し、合計１．１３×１０５のウェル当たり総細胞数とした。
得られたモノクローナル抗体（数千個）の一次スクリーニングは間接的ｒｈＩＬ−１７Ａ ＥＬＩＳＡにより実施した（実施例５参照）。得られた抗体に対する二次スクリーニングではＳＴ２（マウス間質）細胞によるネズミＩＬ−６のｒｈＩＬ−１７Ａ誘導発現の中和及びＢａ／Ｆ３ ｈＩＬ−１７Ｒｃ：ｍＧＣＳＦＲ細胞のｒｈＩＬ−１７Ａ誘導増殖の中和を行った。約１１個のモノクローナル抗体を第１及び２回目のスクリーニングの後に更に検討した。その後の実験は候補抗体がネイティブのｈｕＩＬ−１７Ａに結合できることを確認することにより、それらが種々の治療、診断、及び／又は研究目的において有用であることを確認するために行った。そのようなスクリーニングはインビトロの活性試験による、又はインビボの活性試験による結合試験（例えば間接的ＥＬＩＳＡ又はサンドイッチＥＬＩＳＡ）を用いながらおこなってよく、その例は本明細書に記載する通りであり。
（実施例３）
ラット抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体のヒト化
ラット抗ヒトＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体１６Ｃ１０のヒト化は本質的にＷＯ２００５／０４７３２４及びＷＯ２００５／０４７３２６に記載の通り実施し、その開示内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。手短にいえば、後により詳細に説明する通り、ヒト定常ドメインを用いて親（ラット）定常ドメインを置き換え、そしてラット可変ドメイン配列に相同であるヒト生殖細胞系統配列を選択して使用することにより、ラットＣＤＲに対するヒトフレームワークを得た。
ヒト生殖細胞系統フレームワーク配列の選択のための操作法
本発明の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体をヒト化する場合の適切な生殖細胞系統フレームワーク配列を選択する場合に以下の工程を使用した。
１）非ヒトＶＬ及びＶＨドメインをクローニングして配列決定し、そしてアミノ酸配列を決定する。
重鎖
２）非ヒトＶＨ配列を５つのヒトＶＨ生殖細胞系統アミノ酸配列のグループ、即ちサブグループＩＧＨＶ１及びＩＧＨＶ４の１代表、及びサブグループＩＧＨＶ３の３代表と比較する。ＶＨサブグループはＭ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ（２００１）“Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｅａｖｙ（ＩＧＨ）Ｇｅｎｅｓ”、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８：１００−１１６に記載されている。５つの生殖細胞系統の配列に対する比較は以下の通り実施する。
Ａ）Ｋａｂａｔ等（１９９１）に従って非ヒトＶＨ配列残基番号を割り付ける。
Ｂ）非ヒトＶＨ配列を５つのヒト生殖細胞系統配列の各々とアラインする。Ｖ遺伝子はＶＨ残基１〜９４を含むのみであるため、これらの残基のみをアライメントにおいては考慮する。
Ｃ）配列内の相補性決定（ＣＤＲ）及びフレームワーク（ＦＲ）領域を明確化する。ＣＤＲ及びＦＲはＫａｂａｔ等（１９９１）（上出）及びＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）”Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６：９０１−９１７に記載されている定義の組み合わせとして定義する。即ち定義は、ＶＨＣＤＲ１＝２６〜３５、ＣＤＲ２＝５０〜６５、ＣＤＲ３＝９５〜１０２である。
Ｄ）以下（表１）の記載残基位置の各々に関し、非ヒト及びヒト配列が同一（ＩＤＥＮＴＩＣＡＬ）となる各残基位置において数値スコアを割り付ける。
Figure 0005118699
Figure 0005118699
 ＊Ｃ．Ｃｈｏｔｈｉａ等（１９８９）”Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ”，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３においてＣＤＲコンフォメーションに影響すると記載されている。
Ｅ）全ての残基の位置のスコアを付加する。アクセプター生殖細胞系統配列は最高総スコアを有するものである。２つ以上の生殖細胞系統配列が同じスコアを有する場合は、以下の通りとする。
１）以下の残基位置のうち、非ヒト及びヒト配列がＩＤＥＮＴＩＣＡＬであれば各位置に関する総スコアに１を付加する：１、３、５〜２３、２５、３６、３８、４０〜４３、４６、６６、６８、７０、７２、７４、７５、７７、７９〜９０、９２（最大４９）。
２）アクセプター生殖細胞系統配列は最高総スコアを有するものである。２つ以上の生殖細胞系統配列が同一のスコアをなお有する場合は、何れもアクセプターとして許容される。
軽鎖
ＩＩＩ）ＶＬ配列がＶＬのカッパサブクラスのメンバーである場合は、非ヒトＶＬ配列を４つのヒトＶＬカッパ生殖細胞系統アミノ酸配列のグループと比較する。４つからなるグループは、Ｂａｒｂｉｅ ａｎｄ Ｌｅｆｒａｎｃ（１９９８）”Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｋａｐｐａ Ｖａｒｉａｂｌｅ（ＩＧＫＶ）Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｊｏｉｎｉｎｇ（ＩＧＫＪ）Ｓｅｇｍｅｎｔｓ”，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１７１−１８３及びＭ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ（２００１）“Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｋａｐｐａ（ＩＧＫ）Ｇｅｎｅｓ”，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８：１６１−１７４に記載されている４つの確立されたヒトＶＬサブグループの各々の１代表よりなる。４サブグループは又、Ｋａｂａｔ等（１９９１）ｐｐ．１０３−１３０に記載されている４サブグループに相当する。４つの生殖細胞系統の配列に対する比較は以下の通り実施する。
Ａ）Ｋａｂａｔ等（１９９１）に従って非ヒトＶＬ配列残基番号を割り付ける。
Ｂ）非ヒトＶＬ配列を４つのヒト生殖細胞系統配列の各々とアラインする。Ｖ遺伝子はＶＬ残基１〜９５を含むのみであるため、これらの残基のみをアライメントにおいては考慮する。
Ｃ）配列内の相補性決定（ＣＤＲ）及びフレームワーク（ＦＲ）領域を明確化する。ＣＤＲ及びＦＲはＫａｂａｔ等（１９９１）及びＣｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ（１９８７）”Ｃａｎｏｎｉｃａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎｓ”，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９６：９０１−９１７に記載されている定義の組み合わせとして定義する。即ち定義は、ＶＬＣＤＲ１＝２４〜３４、ＣＤＲ２＝５０〜５６、ＣＤＲ３＝８９〜９７である。
Ｄ）以下（表２）の記載残基位置の各々に関し、非ヒト及びヒト配列が同一（ＩＤＥＮＴＩＣＡＬ）となる各残基位置に置いて数値スコアを割り付ける。
Figure 0005118699
Figure 0005118699
 ＊Ｃ．Ｃｈｏｔｈｉａ等（１９８９）”Ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ”，Ｎａｔｕｒｅ３４２：８７７−８８３，１９８９においてＣＤＲコンフォメーションに影響すると記載されている。
Ｅ）全ての残基の位置のスコアを付加する。アクセプター生殖細胞系統配列は最高総スコアを有するものである。２つ以上の生殖細胞系統配列が同じスコアを有する場合は、以下の通りとする。
１）以下の残基位置のうち、非ヒト及びヒト配列がＩＤＥＮＴＩＣＡＬであれば各位置に関する総スコアに１を付加する：１、３、５〜２３、３５、３７、３９〜４２、５７、５９〜６１、６３、６５〜７０、７２〜８６、８８。
２）アクセプター生殖細胞系統配列は最高総スコアを有するものである。それでも２つ以上の生殖細胞系統配列が同一のスコアを有する場合は、何れもアクセプターとして許容される。ＶＬ配列がＶＬのラムダサブクラスのメンバーである場合は、上記引用した文献情報源に由来するヒトＶＬラムダ生殖細胞系統アミノ酸配列を用いて同様の操作法を実施する。
抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体のヒト化
定常ドメインの修飾に関しては、抗体１６Ｃ１０（ラット抗ヒトＩＬ−１７ＡＩｇＧ１）の可変軽鎖及び重鎖ドメインをクローニングし、そしてヒトカッパ軽鎖（ＣＬドメイン）及びヒトＩｇＧ１重鎖（ＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３）にそれぞれ融合させた。ラット可変ドメインとヒト定常ドメインのこの組み合わせは抗体１６Ｃ１０のキメラ型を含む。このキメラ１６Ｃ１０の軽鎖及び重鎖の配列はそれぞれ配列番号９及び１０に示す。
可変ドメインのフレームワーク領域の修飾に関しては。抗体１６Ｃ１０のＶＨドメインのアミノ酸配列を５つのヒトＶＨ生殖細胞系統アミノ酸配列のグループ、即ちサブグループＩＧＨＶ１及びＩＧＨＶ４の１代表、及びサブグループＩＧＨＶ３の３代表と比較した。ＶＨサブグループはＭ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ “Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｈｅａｖｙ（ＩＧＨ）Ｇｅｎｅｓ”、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８：１００−１１６，２００１に記載されている。抗体１６Ｃ１０はサブグループＩＶにおいてヒト重鎖生殖細胞系統ＤＰ−７１に対して最高のスコアとされた。
１６Ｃ１０のＶＬ配列はカッパサブクラスのものであった。この配列を４つのヒトＶＬカッパ生殖細胞系統アミノ酸配列のグループと比較した。４つからなるグループは、Ｂａｒｂｉｅ ａｎｄ Ｍ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ（１９９８）”Ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｋａｐｐａ Ｖａｒｉａｂｌｅ（ＩＧＫＶ）Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｊｏｉｎｉｎｇ（ＩＧＫＪ）Ｓｅｇｍｅｎｔｓ”，Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１５：１７１−１８３、１９９８及びＭ．−Ｐ．Ｌｅｆｒａｎｃ“Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ ｏｆ ｔｈｅ Ｈｕｍａｎ Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｋａｐｐａ（ＩＧＫ）Ｇｅｎｅｓ”、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｅｔｉｃｓ，１８：１６１−１７４，２００１に記載されている４つの確立されたヒトＶＬサブグループの各々の１代表よりなる。４サブグループは又、Ｋａｂａｔ等（１９９１）ｐｐ。１０３−１３０に記載されている４サブグループに相当する。抗体１６Ｃ１０はサブグループＩＩにおいてヒト軽鎖生殖細胞系統Ｚ−Ａ１９に対して最高のスコアとされた。
所望の生殖細胞系統フレームワーク配列が求められた後、完全長ヒト化可変重鎖及び軽鎖をコードするプラスミドを作製した。親ラット抗体１６Ｃ１０のフレームワーク残基の代わりにヒトフレームワーク残基を置換することは、ヒトフレームワーク配列上へのラット１６Ｃ１０ＣＤＲのグラフティングと等しいものとみなすことができる。得られた抗体は本明細書においては「１６Ｃ１０ｗｔ」と称し、「ｗｔ」は親ラット１６Ｃ１０と同じＣＤＲの存在を示しており、これは後述する最適化されたＣＤＲ（単一アミノ酸改変２か所を有する）とは区別可能である。重鎖及び軽鎖の可変ドメインの両方をコドン最適化し、合成し、そして定常ドメイン上に挿入することにより潜在的に最適な発現を可能にした。クローニングされた抗体の発現を向上させる場合があるコドン最適化は純粋に任意である。
ヒト化１６Ｃ１０ｗｔ抗体は、ヒト定常ドメイン及びフレームワーク配列の置換に加えて、２つのＣＤＲ残基においても修飾することにより最終ヒト化抗体のより大きい化学的安定性を達成した。２つの変化は図１Ｂに示す「ｈｕ１６Ｃ１０」ＶＨ配列において太字のアミノ酸残基により示す。図１Ｂにおいて示したＫａｂａｔのナンバリングを参照すれば、ＣＤＲ２の残基５４はラット抗体におけるＮ（アスパラギン）からヒト化抗体におけるＱ（グルタミン）に変化しており、これにより残基５４〜５５のＮＧ配列におけるイソアスパルテートの形成の可能性が低減できる。イソアスパルテートの形成は抗体のその標的抗原への結合を減衰させるか、又は完全に排除する場合がある。Ｐｒｅｓｔａ（２００５）Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１６：７３１−７３４。更に又、ＣＤＲ３の残基９６はラット抗体におけるＭ（メチオニン）からヒト化抗体におけるＡ（アラニン）に変化しており、これにより、抗原結合親和性を低減して最終抗体調製品中の分子の異種性に寄与する可能性があるメチオニンのイオウの酸化の可能性が低減されている。上記参照。これらの１残基修飾はＮ５４Ｑ及びＭ９６Ａと表すことができる。本明細書に開示した最終的なヒト化１６Ｃ１０抗体は親ラット１６Ｃ１０ＣＤＲと相対比較したこれらの２つの置換を含む。
本発明の別の実施形態においては、ヒト化型に関して上記した単一残基修飾２つ、即ちＮ５４Ｑ及びＭ９６Ａを取り込むために、キメラ（非ヒト化）１６Ｃ１０抗体を改変することができる。
ヒト化抗体１６Ｃ１０（ｈｕ１６Ｃ１０）の軽鎖及び重鎖のアミノ酸配列をそれぞれ図２Ａ及び２Ｂに、そして配列番号２及び４（シグナル配列を包含）に示す。ｈｕ１６Ｃ１０の軽鎖及び重鎖をコードするヌクレオチド配列の１つの実施形態を配列番号１及び３に示す。ｈｕ１６Ｃ１０の軽鎖及び重鎖をコードするヌクレオチド配列の別の実施形態を図５Ａ（配列番号６２）及び図５Ｂ（配列番号６３）に示す。
命名法に関する明確化の目的のためには、種々の抗体の間でのＣＤＲ及びフレームワーク領域の長さにおける変動に対応するためにＫａｂａｔのナンバリングシステムが非数値化アミノ酸残基の標記（例えばＶＨ残基８３ａ、８３ｂ、８３ｃ）を包含することを認識することが重要である。このナンバリングシステムは異なる長さのＣＤＲを有する種々の抗体の間での相当するアミノ酸残基の参照が容易になる点において好都合であるが、厳密な連続数字による配列のナンバリング（例えば配列表）と比較する場合には特定のアミノ酸残基に関して矛盾する標記が生じる場合がある。本明細書におけるアミノ酸残基の標記は特段の記載が無い限り該当する配列表を参照しながら、例えば「Ｋａｂａｔナンバリング」を参照することにより行う。
命名法に関する明確化の別の点として、配列番号２及び４（ヒト化１６Ｃ１０）はＮ末端シグナルペプチドの配列（各々の最初の１９残基）を包含し、これらのアミノ酸は抗体の成熟型においては除去される。配列番号１、３、６２及び６３はシグナル配列をコードする５７ヌクレオチドを包含する。本明細書においては、蛋白の「成熟」型とはシグナル配列を有さない蛋白を指す。
ヒト化抗体４Ｃ３は抗体１６Ｃ１０に関して上記したものと類似の方法により作製する。親ラット４Ｃ３抗体は軽鎖のフレームワーク領域の単一のアミノ酸残基においてのみ異なっており、そしてそのようなフレームワーク領域はヒト化の間にヒト生殖細胞系統フレームワーク配列で置き換えられるため、最終的なヒト化４Ｃ３抗体配列はヒト化１６Ｃ１０抗体の配列と同一になる。
ヒト化抗体３０Ｃ１０も又、抗体１６Ｃ１０に関して上記したものと類似の方法により作製する。使用すべき適切なヒトフレームワーク配列を決定する場合、親ラット３０Ｃ１０抗体はサブグループＩＩＩにおけるヒト重鎖生殖細胞系統ＤＰ−４６及びサブグループＩＩにおけるヒト軽鎖生殖細胞系統Ｚ−Ａ１９に対して最高値のスコアを有するため、これらのフレームワーク配列をラットフレームワーク配列に対して置換する。ヒト化３０Ｃ１０ＶＬ及びＶＨ配列をそれぞれ配列番号２２及び２３に示す。他の実施形態においては、ラット３０Ｃ１０のＣＤＲのメチオニン残基１つ以上を突然変異させることによりヒト１６Ｃ１０抗体におけるメチオニンイオウの酸化の潜在性を回避する。特に、重鎖残基３４（ＣＤＲＨ１中）及び／又は軽鎖残基３０ｆ（Ｋａｂａｔナンバリング、図１Ａ参照）をメチオニンから別のアミノ酸、例えばアラニンに変化させる。そのような抗体はその後、メチオニン置換がＩＬ−１７Ａ結合親和性を望ましくないレベルにまで低下させないことを確認するためにスクリーニングする。
抗体１２Ｅ６のキメラ、ヒト化、及びシグナル配列含有型は、親ラット抗体１６Ｃ１０に基づいてそのような抗体を製造する場合と類似させながら、本明細書に記載した方法を用いて作製する。親ラット抗体１２Ｅ６に関する軽鎖及び重鎖のＣＤＲを配列番号３４〜３６及び３７〜３９に示す。ヒト定常ドメイン及び可変ドメインフレームワーク配列は上記の通りに導入する。１つの実施形態において、重鎖残基３４（ＣＤＲＨ１中）をメチオニンから別のアミノ酸、例えばアラニンに変化させることによりヒト化１２Ｅ６抗体におけるメチオニンイオウの酸化の潜在性を回避する。得られた抗体はその後、メチオニン置換がＩＬ−１７Ａ結合親和性を望ましくないレベルにまで低下させないことを確認するためにスクリーニングする。
抗体２３Ｅ１２のキメラ、ヒト化、及びシグナル配列含有型は、親ラット抗体１６Ｃ１０に基づいてそのような抗体を製造する場合と類似させながら、本明細書に記載した方法を用いて作製する。親ラット抗体２３Ｅ１２に関する軽鎖及び重鎖の可変ドメイン配列を配列番号４４及び４６（ＤＮＡ）及び４５及び４７（アミノ酸）に示す。親ラット抗体２３Ｅ１２に関するＣＤＲは配列番号４８〜５０（軽鎖）及び５１〜５３（重鎖）に示す。ヒト定常ドメイン及び可変ドメインフレームワーク配列は上記した通り親ラット抗体内に導入する。
（実施例４）
完全ヒト型抗ＩＬ−１７Ａ抗体
完全ヒト型抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体はマウス系ではなくヒトの免疫系の部分を担持しているトランスジェニックマウスを用いて作製する。これらのトランスジェニックマウスは、本明細書においては「ＨｕＭＡｂ」と称し、再配列されていないヒト重鎖（μ及びγ）及びκ軽鎖免疫グロブリン配列をコードするヒト免疫グロブリン遺伝子のミニ遺伝子座を内因性のμ及びκ鎖遺伝子座を不活性化するターゲティングされた突然変異と共に含有する（Ｌｏｎｂｅｒｇ等（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ３６８（６４７４）：８５６−８５９）。従って、マウスはマウスＩｇＭ又はκの低減された発現を示し、そして免疫化に応答して導入されたヒト重鎖及び軽鎖のトランスジーンはクラス切り替え及び体細胞突然変異を起こし、高親和性のヒトＩｇＧκモノクローナル抗体を形成する（Ｌｏｎｂｅｒｇ等（１９９４），上出；考察文献はＬｏｎｂｅｒｇ（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９−１０１；Ｌｏｎｂｅｒｇ等（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３，及びＨａｒｄｉｎｇ等（１９９５）Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ７６４：５３６−５４６）。ＨｕＭａｂマウスの作製は一般的に当該分野で知られており、そして例えばＴａｙｌｏｒ等（１９９２）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２０：６２８７−６２９５；Ｃｈｅｎ等（１９９３）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ５：６４７−６５６；Ｔｕａｉｌｌｏｎ等（１９９３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９０：３７２０−３７２４；Ｃｈｏｉ等（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ４：１１７−１２３；Ｃｈｅｎ等（１９９３）ＥＭＢＯ Ｊ．１２：８２１−８３０；Ｔｕａｉｌｌｏｎ等（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：２９１２−２９２０；Ｌｏｎｂｅｒｇ（１９９４）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ １１３：４９−１０１；Ｔａｙｌｏｒ等（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ６：５７９−５９１；Ｌｏｎｂｅｒｇ等（１９９５）Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３；及びＦｉｓｈｗｉｌｄ等（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ１４：８４５−８５１に記載されており、それらの内容は参照により全体が本明細書に組み込まれる。更に又、米国特許５，５４５，８０６；５，５６９，８２５；５，６２５，１２６；５，６３３，４２５；５，７８９，６５０；５，８７７，３９７；５，６６１，０１６；５，８１４，３１８；５，８７４，２９９；５，７７０，４２９及び５，５４５，８０７；及び国際特許出願公開ＷＯ９８／２４８８４；ＷＯ９４／２５５８５；ＷＯ９３／１２２７；ＷＯ９２／２２６４５；及びＷＯ９２／０３９１８も参照することができ、これらは全て参照により全体が本明細書に組み込まれる。
ＩＬ−１７Ａに対する完全ヒト型モノクローナル抗体を作製するためには、ＨｕＭａｂマウスをＬｏｎｂｅｒｇ等（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ等（１９９６）及びＷＯ９８／２４８８４に記載された抗原性ＩＬ−１７Ａポリペプチドで免疫化する。好ましくは、マウスは初回免疫化時には６〜１６週齢とする。例えば、ＩＬ−１７Ａの精製調製品を使用してＨｕＭａｂマウスを腹腔内で免疫化することができる。マウスは又、ＩＬ−１７Ａ遺伝子で安定に形質転換又はトランスフェクトされる全ＨＥＫ２９３細胞を用いて免疫化することもできる。「抗原性ＩＬ−１７Ａポリペプチド」とはＨｕＭａｂマウスにおいて抗ＩＬ−１７Ａ免疫応答を誘発するＩＬ−１７Ａポリペプチド又はその何れかのフラグメントを指す場合がある。
一般的に、ＨｕＭＡｂトランスジェニックマウスは、先ず完全フロイントアジュバント中の抗原で腹腔内（ＩＰ）免疫化し、その後、不完全フロイントアジュバント中の抗原で隔週ＩＰ免疫化（通常は合計６回）を行う場合に、最も良好に応答する。マウスを先ずＩＬ−１７Ａを発現する細胞（例えば安定に形質転換されたＨＥＫ２９３細胞）で、次にＩＬ−１７Ａの可溶性フラグメントで免疫化し、その後２抗原による交互免疫化を行う。免疫応答は眼窩後方出血により血漿試料を得ながら免疫化プロトコルの過程に渡ってモニタリングする。血漿は例えばＥＬＩＳＡにより抗ＩＬ−１７Ａ抗体の存在に関してスクリーニングし、そして免疫グロブリンの十分な抗体価を有するマウスを融合のために使用する。マウスは屠殺及び脾臓摘出の前３日に抗原で静脈内ブーストする。各抗原に対して２〜３融合が必要である場合がある。数種のマウスは各抗原で免疫化する。例えば、ＨＣＯ７及びＨＣＯ１２系統の合計１２ＨｕＭＡｂマウスを免疫化する。
モノクローナルの完全ヒト型抗ＩＬ−１７Ａ抗体を生産するハイブリドーマ細胞はＫｏｈｌｅｒ等（１９７５）（Ｎａｔｕｒｅ２５６：４９５−４９７）により元来開発されたハイブリドーマ手法；トリオーマ手法（Ｈｅｒｉｎｇ等（１９８８）Ｂｉｏｍｅｄ．Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ａｃｔａ．４７：２１１−２１６及びＨａｇｉｗａｒａ等（１９９３）Ｈｕｍ．Ａｎｔｉｂｏｄ．Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ ４：１５）；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ手法（Ｋｏｚｂｏｒ等（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｔｏｄａｙ ４：７２及びＣｏｔｅ等（１９８３）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８０：２０２６−２０３０）；及びＥＢＶハイブリドーマ手法（Ｃｏｌｅ等（１９８５）、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ７７−９６）のような一般的に当該分野で知られた方法により作製する。好ましくは、マウス脾細胞を単離し、標準的プロトコルに基づいてマウス骨髄腫細胞系統にＰＥＧを用いて融合させる。得られたハイブリドーマを次に抗原特異的抗体の生産に関してスクリーニングしてよい。１つの実施形態においては、免疫化マウスに由来する脾リンパ球の単細胞懸濁液を、５０％ＰＥＧを用いながらＰ３Ｘ６３−Ａｇ８．６５３非分泌マウス骨髄腫細胞（ＡＴＣＣ、ＣＲＬ１５８０）の数量の６分の１に融合させる。細胞は平底マイクロプレート中約２×１０５個／ｍＬでプレーティングし、その後２０％胎児クローン血清、１８％「６５３」コンディショニング培地、５％オリゲン、４ｍＭＬ−グルタミン、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、５ｍＭＨＥＰＥＳ、０．０５５ｍＭ２−メルカプトエタノール、５０単位／ｍＬペニシリン、５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン、５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシン及び１×ＨＡＴ（Ｓｉｇｍａ；ＨＡＴは融合後２４時間に添加する）を含有する選択培地中２週間インキュベートする。２週間後、ＨＡＴをＨＴで置き換えた培地中で培養する。次に個々のウェルをヒト抗ＩＬ−１７ＡモノクローナルＩｇＧ抗体に関してＥＬＩＳＡによりスクリーニングする。旺盛なハイブリドーマの生育があった場合は、通常は１０〜１４日後に培地を観察する。抗体分泌ハイブリドーマを再プレーティングし、再度スクリーニングし、そしてヒトＩｇＧに関してなお陽性である場合は、抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体を限界希釈法により少なくとも２回サブクローニングする。次に安定なサブクローンをインビトロで培養することにより特性化のための組織培地中の抗体少量を得る。
別の実施形態においては本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体分子は組み換えにより製造する（例えばＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７発現系において）。本実施形態においては、本発明の抗体分子（ＶＨ又はＶＬ）をコードする核酸をｐＥＴ系プラスミドに挿入し、そしてＥ．ｃｏｌｉ／Ｔ７系において発現させる。当該分野で知られた組み換え抗体を製造するための数種の方法が存在しており、例えば参照により本明細書に組み込まれる米国特許４，８１６，５６７が挙げられる。抗体分子は又、ＣＨＯ又はＮＳＯ細胞において組み換え生産してもよい。
（実施例５）
抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体の間接的ＥＬＩＳＡ
ｒｈＩＬ−１７Ａへの抗ヒトＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体の結合は間接的酵素結合免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ）を用いて評価する。手短にいえば、固定濃度のｒｈＩＬ−１７Ａをマイクロプレートのウェルに直接結合させる。次に試験すべきモノクローナル抗ＩＬ−１７ＡをｒｈＩＬ−１７Ａコーティングプレートに添加し、ここで抗体を捕捉させ、定量する。より詳細なプロトコルは以下の通りである。
９６穴のＵ型底のＭａｘＳｏｒｐプレートを炭酸塩コーティング緩衝液中のｒｈＩＬ−１７Ａ（０．５μｇ／ｍｌ）５０μｌ／ウェルでコーティングする（「試験プレート」）。炭酸塩コーティング緩衝液は２．９ｇ／Ｌ ＮａＨＣＯ３、１．６ｇ／Ｌ Ｎａ２ＣＯ３、ｐＨ９．４とする。プレートは４℃で一夜被覆してインキュベートする。スクリーニングすべきモノクローナル抗体を終容量が６０μｌ／ウェルとなるようにＶ型底プレートの列に渡って２連で連続希釈する（「連続希釈プレート」）。試験プレートをプレート洗浄機（ＳｋａｎＷａｓｈｅｒ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）中でＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎを用いて３回洗浄し、そして乾燥ブロッティングする。ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎは１×ＰＢＳに０．５ｍｌ／Ｌ Ｔｗｅｅｎ２０を添加することにより得る。連続希釈プレートの各ウェル由来の５０μＬを試験プレートに移し、１時間２５℃でインキュベートする。二次抗体を希釈液（ＰＢＳ−ＢＳＡ−Ｔｗｅｅｎ、即ち１ｇ／ＬのＢＳＡを含有するＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）中１／２０００に希釈する。ラットモノクローナル抗体に対する二次抗体はヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ）とする。キメラ及びヒト化モノクローナル抗体に対する二次交代はＦ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトＩｇＧＦｃγ−ＨＲＰ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）とする。試験プレートを前の通り洗浄する。希釈した二次抗体（１００μｌ／ウェル）を試験プレート中の適切なウェルに添加し、そしてプレートを４５分間２５℃でインキュベートする。試験プレートを前の通り洗浄する。ＡＢＴＳ（１００μｌ／ウェル）（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）を添加し、そしてプレートを５〜１０分間２５℃でインキュベートした後、吸光度をプレートリーダー（Ｖｅｒｓａｍａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）上４０５ｎｍにおいて、読み取り前に５秒間振とうさせながら読み取る。
本発明の抗１６Ｃ１０の種々の形態に関する間接的ＥＬＩＳＡの結果を表５に示す。結合はＥＣ５０（最大シグナルの半分を得るために必要な抗体の濃度）として報告する。結果は１６Ｃ１０の全ての形態で結合が検出されることを示している。このような間接的ＥＬＩＳＡ試験は抗ＩＬ−１７Ａ抗体の有無の迅速な測定において有用であるが、得られたＥＣ５０の数値は試験依存性であり、典型的には何れかの所定の抗体に関する絶対的な結合親和性を評価するためには使用されない。
Figure 0005118699
 （実施例６）
抗ＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体のＥＬＩＳＡ
ｒｈＩＬ−１７Ａへの抗ヒトＩＬ−１７Ａモノクローナル抗体の結合を以下の通りＥＬＩＳＡを用いて試験する。手短にいえば、捕捉抗体をマイクロプレートのウェルに結合させ、その後固定濃度のｒｈＩＬ−１７Ａを添加する。次に試験すべきモノクローナル抗ＩＬ−１７Ａをプレート上の結合ｒｈＩＬ−１７Ａに対して滴定することにより最大の結合の半分を達成するために必要な抗体の濃度を求める。より詳細なプロトコルは以下の通りである。
９６穴のマイクロプレートを炭酸塩コーティング緩衝液ｐＨ９．５中の捕捉抗体（ラット抗ｈＩＬ−１７Ａ１２Ｅ６、０．５μｇ／ｍｌ）１００μｌ／ウェルでコーティングする（「試験プレート」）。プレートを２４〜４８時間４℃で被覆してインキュベートする。試験プレートをプレート洗浄機（ＳｋａｎＷａｓｈｅｒ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）中で３回洗浄し、そして乾燥ブロッティングする。次にプレートを軌道振とう機上２５℃で１時間、ＥＬＩＳＡ試験緩衝液（２０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．１５Ｍ ＮａＣｌ、ｐＨ７．４、０．５％ＢＳＡ、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０、２ｍＭ ＥＤＴＡ）２００μｌ／ウェルでブロッキングする。プレートを洗浄し、アデノウィルス誘導ｒｈＩＬ−１７Ａ又はＥ．ｃｏｌｉ誘導ヒトＩＬ−１７（ＩＬ−１７Ａ）（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ，ＵＳＡ）（０．１μｇ／ｍｌ）の何れか１００μｌ／ウェルをＥＬＩＳＡ試験緩衝液に添加し、軌道振とう機上２５℃で２時間インキュベートする。プレートを洗浄し、スクリーニングすべきモノクローナル抗体を、４倍連続希釈を用いながら１０００ｎｇ／ｍｌ〜０．０８１３ｎｇ／ｍｌの範囲で７ウェルの列に渡って連続希釈する。プレートを軌道振とう機上２５℃で１．５時間インキュベートする。プレートを洗浄し、１００μｌ／ウェルの二次抗体（Ｆ（ａｂ’）２ヤギ抗ヒトカッパ軽鎖−ＨＲＰ、１：２０，０００希釈物、ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ、Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を、試験ブランクウェルを除いて添加する。プレートはサイクル間プレート回転により２回洗浄する（即ちサイクル当たり３洗浄を２サイクル）。ＴＭＢ基質（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ＆Ｐｅｒｒｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）を１００μｌ／ウェルで添加し、そして軌道振とう機上で３〜５分間インキュベートする。停止溶液を添加し（１００μｌ／ウェル）、そしてプレートの吸光度をプレートリーダー（Ｖｅｒｓａｍａｘ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ，Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）上４５０〜５７０ｎｍにおいて読み取る。
本発明の抗体１６Ｃ１０の種々の形態のＥＬＩＳＡの結果を表６に示す。結合はＥＣ５０（最大シグナルの半分を得るために必要な抗体の濃度）として報告する。結果は１６Ｃ１０の全ての形態で結合が検出されることを示している。誤差範囲とともに示した値は標準偏差を伴った多数回の測定の平均を示す。
Figure 0005118699
Figure 0005118699
 （実施例７）
抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の結合試験
電気ケミルミネセンス（ＥＣＬ）試験を用いたラット及びキメラ抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の結合の測定
ＩＧＥＮ，Ｉｎｃ．（Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）により開発されたオリゲン電気ケミルミネセンス技術を用いてＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａに対するラット抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体（及び１つのキメラ抗体）の結合を計測した。Ｅｌｅｃｓｙｓ（登録商標）イムノアッセイシステム、Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，Ｉｎｄｉａｎａ，ＵＳＡ）を参照できる。電気ケミルミネセンス技術は安定なルテニウムの金属キレート（Ｏｒｉ−ＴＡＧ）を使用し、これはトリプロピルアミン（ＴＰＡ）の存在下で、電圧適用時に電気ケミルミネセンスを発生する。直径ミクロン単位の常磁性ビーズが固相として機能し、急速な試験動態を促進する。ビーズ／複合体はフローセル中でチャネリングさせ、そして磁気の適用により電極において捕捉する。電圧を適用し、そして生じた電気ケミルミネセンスを計測する。
ＥＣＬ試験は以下のとおり実施する。試験緩衝液５０μｌ中の抗ヒトＩＬ−１７ＡｍＡｂの３倍連続希釈物を９６穴マイクロプレート中に作製し、第１のウェルにおいて１〜３μｇ／ｍｌの終濃度を得る。試験緩衝液５０μｌ及び５０ｎｇ／ｍｌのビオチン化ＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａ５０μｌを各ウェルに添加し、その後ＯｒｉＴａｇ標識ヤギ抗ラットＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）ｐＡｂ（４５０ｎｇ／ｍｌで５０μｌ）又は抗ｈＩｇＧｍＡｂ（５００ｎｇ／ｍｌで５０μｌ）の何れかを添加する。最後に、オリゲンストレプトアビジン−ダイナビーズ５０μｌを０．１ｍｇ／ｍＬで各ウェルに添加する。２５℃で１時間インキュベートした後、プレートをオリゲンＭシリーズＭ８／３８４分析器で処理する。ＧｒａｐｈＰａｄプリズムソフトウエア（ＧｒａｐｈＰａｄ Ｓｏｆｔｗａｒｅ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を用いてデータをプロットし、そして計算された曲線下部面積が結合の概ねの尺度となる。
結果を表７に示す（これは一部２連の測定を包含する）。ＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａへのラット１６Ｃ１０の結合を示す２列は２連の測定を示す。表中の全てのラット抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体（１Ｄ１０、１６Ｃ１０、３０Ｃ１０、２３Ｅ１２）はキメラ１６Ｃ１０の場合と同様にＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａに結合した。４抗体全てがカニクイザルＩＬ−１７Ａにも結合していた。抗体１６Ｃ１０及び３０Ｃ１０はこの試験の条件下ではマウスＩＬ−１７Ａには結合しなかったのに対し、抗体１Ｄ１０及び２３Ｅ１２は結合した。
Figure 0005118699
 ＫｉｎＥｘＡ技術を用いたラット及びヒト化抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体に関する平衡解離定数（Ｋｄ）の測定
抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体に関する平衡解離定数（Ｋｄ）をＫｉｎＥｘＡ３０００機材（Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｉｓｅ，Ｉｄａｈｏ，ＵＳＡ）を用いて測定した。ＫｉｎＥｘＡは抗体、抗原及び抗体−抗原複合体の混合物中の未複合体化抗体の濃度の計測に基づいた速度論的排除試験法の原理を使用する。例えばＤａｒｌｉｎｇ ａｎｄ Ｂｒａｕｌｔ（２００４）Ａｓｓａｙ Ｄｒｕｇ Ｄｅｖ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．２（６）：６４７−５７を参照できる。遊離抗体の濃度は極めて短時間固相固定化抗原に混合物を曝露することにより計測する。実際は、これは、フローセル中に捕獲された抗原コーティング粒子を通過して液相の抗原−抗体混合物を流動させることにより達成される。機材により発生したデータは専用ソフトウエアを用いて分析する。平衡定数は以下の仮定に基づいた数学的理論を用いて計算する。
１．結合は以下の平衡に関する可逆的結合式に従う。
ｋｏｎ［Ａｂ］［Ａｇ］＝ｋｏｆｆ［ＡｂＡｇ］、式中Ｋｄ＝ｋｏｆｆ／ｋｏｎ
２．抗体（Ａｂ）及び抗原（Ａｇ）は１：１で結合し、そして総抗体は抗原−抗体複合体（ＡｂＡｇ）＋遊離抗体に等しい。
３．機材のシグナルは遊離の抗体濃度に対して直線関係にある。
ＫｉｎＥｘＡ分析は数種のラット抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体、そのヒト化変異体、及びこれらのヒト化抗体の配列変異体に対して実施した。ＩＬ−１７Ａはヒト（「ｈｕ」）、カニクイザル（「ｃｙｎｏ」）又はマウス（「ｍｕ」）の何れかより誘導した。同じ種に由来するＩＬ−１７Ａを各ＫｉｎＥｘＡ測定に関する固定化及び溶液相の両方において使用した。ポリ（メチルメタクリレート）（ＰＭＡＡ）粒子（９８ミクロン）をＳａｐｉｄｙｎｅ”Ｐｒｏｔｏｃｏｌ ｆｏｒ ｃｏａｔｉｎｇ ＰＭＭＡ ｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｗｉｔｈ ｂｉｏｔｉｎｙｌａｔｅｄ ｌｉｇａｎｄｓ ｈａｖｉｎｇ ｓｈｏｒｔ ｏｒ ｎｏｎｅｘｉｓｔｅｎｔ ｌｉｎｋｅｒ ａｒｍｓ”に従ってヒト、カニクイザル、又はマウスのＩＬ−１７Ａでコーティングした。全ての実験の操作法はＫｉｎＥｘＡ３０００マニュアルに従って実施した。全ての試行は２連で実施した。ＫｉｎＥｘＡの条件を表８に示す。
Figure 0005118699
 抗原の２倍連続希釈物を製造し、一定濃度において抗体と混合した。混合物を２５℃で２時間インキュベートすることにより平衡化させた。
表９はＫｉｎＥｘＡ分析の結果を示す。ＫｉｎｅｘＡ分析に関するモル濃度は、抗体上の結合部位２つの存在及びＩＬ−１７Ａの２量体としての性質を考慮するために、抗体については７５ｋＤａ、そしてＩＬ−１７Ａについては１５ｋＤａの分子量に基づいて計算した。一部の抗体の場合は、抗体及び／又は抗原の異なるバッチを用いて重複実験を実施し、その場合には平均値を標準偏差とともに表９に示した。ヒト化１６Ｃ１０ｗｔ抗体及び親ラット１６Ｃ１０抗体に関する結合定数は約５〜１０ｐＭで同様であり、ヒト化がヒトＩＬ−１７Ａに対する親ラット１６Ｃ１０の高親和性を有意に低減しなかったことを示していた。最終ヒト化１６Ｃ１０抗体（ラット１６Ｃ１０と比較してＮ５４Ｑ及びＭ９６Ａ置換を有する）を包含する種々のアミノ酸置換（Ｎ５４Ｑ、Ｍ９６Ａ、Ｍ１００ｈＦ）を取り込んだヒト化１６Ｃ１０も試験したところ、１〜１０ｐＭ範囲の同様に高い結合定数を有していることがわかった。結合ｈｕ１６Ｃ１０のＦａｂフラグメントは完全な抗体と比較して高い親和性（１６ｐＭ）を保持していた。本発明の他の抗体（ラット１Ｄ１０、ラット２３Ｅ１２、ラット３０Ｃ１０）も又、高い親和性でＦＬＡＧ−ｈｕＩＬ−１７Ａに、そしてカニクイザルＩＬ−１７Ａに結合していた。ラット１Ｄ１０はヒト及びカニクイザルのＩＬ−１７Ａに対する親和性と同様に１０ｐＭの親和性でマウスに結合したが、ラット２３Ｅ１２はマウスＩＬ−１７Ａに対して２００〜２０００低値の親和性を有していた（７０００ｐＭ）。抗体１６Ｃ１０及び３０Ｃ１０はマウスＩＬ−１７Ａに結合しなかった（データ示さず）。
Figure 0005118699
 当該分野で知られた別の方法、例えばＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）表面プラズモン共鳴スペクトル分析も本発明の抗体の親和性を計測するために使用してよい。Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）分析を本発明の抗体の数種に対して実施したが、結合親和性が一般的に高値すぎるため正確に計測することができず、特に、解離速度はこの方法での計測には緩徐過ぎるものであった。しかしながらそのような分析は、より低い親和性の抗ＩＬ−１７Ａ抗体又はより速い解離速度定数を有する抗ＩＬ−１７Ａ抗体の分析においては有用である場合がある。
（実施例８）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体に関する滑膜細胞試験
ＩＬ−１７Ａ（ｒｈＩＬ−１７Ａ又はネイティブｈｕＩＬ−１７Ａの何れか）の生物学的活性をブロックする本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の能力は以下の通り、ヒト滑膜細胞の一次培養物中ＩＬ−６及びＩＬ−８のＩＬ−１７Ａ誘導発現をモニタリングすることにより計測する。滑膜細胞は膝置換患者から得た慢性関節リューマチ滑膜のコラゲナーゼ消化により単離する。滑膜細胞は生育培地（ＤＭＥＭ、１０％ＢＣＳ、１×Ｐｅｎ−Ｓｔｒｅｐ（５０ＩＵ／ｍｌペニシリン、５５μｇ／ｍｌストレプトマイシン）、１×ベータメルカプトエタノール（５０μＭ）、１×グルタミン（２０ｍＭ）、２５ｍＭＨＥＰＥＳ）中で連続継代することにより富化し、継代数３で凍結し、そして液体窒素中に保存する。試験で使用する準備ができた時点で、細胞のバイアルを解凍し、プレーティングし、そして細胞をほぼコンフルエントとなるまで生育させる。次に細胞をトリプシン／ＥＤＴＡを用いながらより大きいフラスコ中に１：２で継代する。十分な細胞が増殖した時点で、細胞をトリプシン処理し、９６穴又は４８穴プレートにプレーティングし、そしてそれらを完全コンフルエントとなるまで生育させることにより実験を開始する。
ＩＬ−１７Ａを１２０ｎｇ／ｍｌ、即ち３０ｎｇ／ｍｌ（１ｎＭ）の終濃度の４×となるまで希釈する。ＩＬ−１７Ａはヒト型（ｒｈＩＬ−１７Ａ及びネイティブのｈｕＩＬ−１７Ａ）であるか、非ヒト霊長類、この場合はカニクイザルに由来する。４×ＩＬ−１７Ａ保存液の１００及び３００μｌのアリコートずつを空の９６穴及び４８穴のプレートにそれぞれ添加する。
試験すべき抗ＩＬ−１７Ａ抗体は、実験において試験するべき最大濃度の４×となるまで生育培地で希釈する。４×の抗ＩＬ−１７Ａ保存液を１：２で連続希釈することにより試験の抑制ダイナミックレンジが包含されるようにする。連続希釈抗体試料の各々（全てその終濃度の４×である）を空プレート中４×ＩＬ−１７Ａ溶液と１：１混合することによりＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ａ抗体の両方の２×濃度を有する混合物を形成する。これらの混合物を、４時間を超える時間、組織培養インキュベーター中で３７℃において平衡化させる。
培地を接着したコンフルエントの滑膜細胞から除去し、そして１００μｌ（９６穴プレート）又は２００μｌ（４８穴プレート）の生育培地と交換する。等しい容量の２×リガンド／２×抗体溶液を滑膜細胞に添加して１×ＩＬ−１７Ａ（最終３０ｎｇ／ｍｌ）及び１×抗体とする。各ウェル（データポイント）は２連で試行する。滑膜細胞を３日間活性化（即ちＩＬ−１７Ａ／抗体混合物に曝露）し、この時点で上澄みを９６穴プレートに移し、場合により凍結し、そして分析時まで−８０℃で保存する。上澄みの入ったマイクロプレートを解凍し、各溶液を、生育培地を用いて１：１０希釈する。上澄みを、ＩＬ−６及びＩＬ−８について、Ｌｕｍｉｎｅｘビーズペア（Ｕｐｓｔａｔｅ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ，ＵＳＡ）を用いながら製造元の説明書に従って分析する。
結果を表１０（ＩＬ−６）及び１１（ＩＬ−８）に示す。誤差範囲を伴って示した数値は標準偏差と共に多数回の測定の平均を示す。種々の型の抗体１６Ｃ１０、例えば元のラットＣＤＲを有する１６Ｃ１０のヒト化形態（「ｈｕ１６Ｃ１０（ｗｔ）」）、並びに重鎖ＣＤＲにおいて１、２又は３つの変化を有する数種の変異体（一般的に「ｈｕ１６Ｃ１０Ｘ＃＃Ｚ」、ここでＸはｈｕ１６Ｃ１０（ｗｔ）の重鎖における残基＃＃におけるアミノ酸であり、そしてＺは新しいアミノ酸である）に関する結果を示す。「ＮＨＰＩＬ−１７Ａ」は非人霊長類誘導ＩＬ−１７Ａ、この場合はカニクイザルＩＬ−１７Ａである。「ネイティブのｈｕＩＬ−１７Ａ」とは天然のシグナル配列を使用して前駆体蛋白を製造する場合に生成する成熟ｈｕＩＬ−１７Ａを指し、そして２つのＮ末端アミノ酸の非存在によりｒｈＩＬ−１７Ａとは異なっている。濃度及びＩＣ５０の値はｎｇ／ｍｌで表示するが、ｐＭ単位で表示する場合もある。例えば３０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−１７Ａは１０００ｐＭ（ＭＷ＝３０ｋＤａ）に相当し、そして７０ｎｇ／ｍｌの抗ＩＬ−１７Ａ抗体は約４７０ｐＭ（ＭＷ＝１５０ｋＤａ）に相当する。
Figure 0005118699
Figure 0005118699
 （実施例９）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体に関するＮＨＤＦ試験
ＩＬ−１７Ａの生物学的活性をブロックする本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の能力は、正常ヒト（成人）皮膚線維芽細胞（ＮＨＤＦ）初代細胞系統におけるＩＬ−６のｒｈＩＬ−１７Ａ誘導発現をモニタリングすることにより計測される。手短にいえば、種々の濃度の試験すべき抗ＩＬ−１７Ａ抗体をｒｈＩＬ−１７Ａとともにインキュベートし、そして得られた混合物を次にＮＨＤＦ細胞培養物に添加する。その後ＩＬ−１７Ａ活性を阻害する対象抗体の能力の尺度としてＩＬ−６生産を測定する。より詳細なプロトコルを以下に示す。
目的の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の２倍連続希釈物を４０μｇ／ｍｌの保存溶液から出発して製造する（２連）。ｒｈＩＬ−１７Ａの保存溶液は１２０ｎｇ／ｍｌで製造する。ｒｈＩＬ−１７Ａ保存溶液７０μｌをマイクロプレートのウェル中の抗ＩＬ−１７Ａ抗体希釈物７０μｌと混合し、２０分間室温でインキュベートする。次にこの混合物各々の１００μｌを、前夜１×１０４ＮＨＤＦ細胞／ウェル（１００μＬ）を播種しておいたマイクロプレートのウェルに添加し、３７℃でインキュベートする。ＮＨＤＦ細胞（第４継代）をＣａｍｂｒｅｘ Ｂｉｏ Ｓｃｉｅｎｃｅ（Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）から入手する。ｒｈＩＬ−１７Ａの終濃度は３０ｎｇ／ｍｌ（１ｎＭ）とし、そして抗体は１０μｇ／ｍｌから２分の１の間隔で低下する濃度範囲とする。プレートを２４時間３７℃でインキュベートした後、上澄みを回収し、ＩＬ−６ＥＬＩＳＡで使用するために５０μＬを採取する。
ヒトＩＬ−６の検出のためのＥＬＩＳＡは以下の通り実施する。試薬は一般的にＲ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ，ＵＳＡ）より入手する。ｈＩＬ−６捕捉抗体（４μｇ／ｍｌ溶液を５０μｌ／ウェル）をマイクロプレートのウェルに移し、これをシールして４℃で一夜インキュベートする。プレートを３回洗浄し、次に１時間以上ブロッキング緩衝液１００μｌ／ウェルでブロックする。次にプレートを再度３回洗浄する。実験試料（培養上澄み５０μｌ）及び対照（ＩＬ−６蛋白の連続希釈物）を５０μｌでウェルに添加し、２時間インキュベートする。プレートを３回洗浄し、５０μｌ／ウェルのビオチン化抗ＩＬ−６検出抗体（３００ｎｇ／ｍｌ）を添加する。プレートを２時間室温でインキュベートし、３回洗浄し、ストレプトアビジンＨＲＰ１００μｌ／ウェルを添加し、２０分間インキュベートする。プレートを再度洗浄し、ＡＢＴＳ（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）を添加（１００μｌ／ウェル）し、そして２０分間インキュベートする。停止溶液を添加（１００μｌ／ウェル）し、４０５ｎｍにおける吸光度を計測する。
目的の抗ＩＬ−１７Ａ抗体に関するＩＣ５０はｒｈＩＬ−１７Ａ誘導ＩＬ−６生産のレベルを添加抗ＩＬ−１７Ａ抗体の非存在下で観察されるレベルの５０％まで低減するために必要な抗体の濃度である。
結果を表１２に示す。
Figure 0005118699
 （実施例１０）
包皮線維芽細胞試験抗ＩＬ−１７Ａ抗体
ＩＬ−１７Ａの生物学的活性をブロックする本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の能力をＨＳ６８包皮線維芽細胞系統のｒｈＩＬ−１７Ａ誘導発現をモニタリングすることにより計測する。ｒｈＩＬ−１７Ａに応答したＩＬ−６の生産の低減を、本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体によるブロッキング活性の尺度として使用する。
線維芽細胞系統のパネルにおけるＩＬ−１７ＲＣ（ＩＬ−１７Ａ受容体）の発現の分析は、潜在的ＩＬ−１７Ａ応答性細胞系統としてヒト包皮線維芽細胞系統ＨＳ６８（ＡＴＣＣ ＣＲＬ１６３５）を同定している。これはポリクローナルヤギ抗ヒトＩＬ−１７Ｒ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ，ＵＳＡ）、次いでフィコエリスリン（ＰＥ）−Ｆ（ａｂ’）２ロバ抗ヤギＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，Ｗｅｓｔ Ｇｒｏｖｅ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ＵＳＡ）による間接的免疫蛍光染色、及びフローサイトメーター上でのＰＥ免疫蛍光シグナルの分析（ＦＡＣＳｃａｎ、Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）により確認されている。モデルをさらに有効化するものとして、ＩＬ−１７Ａ（アデノウィルス誘導ｒｈＩＬ−１７Ａ及び市販のＥ．ｃｏｌｉ誘導ＩＬ−１７Ａの両方、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）は５〜１０ｎｇ／ｍｌのＥＣ５０でＨＳ６８細胞におけるＩＬ−６の用量応答性の誘導を誘導しており、この誘導は市販のポリクローナル及びモノクローナル抗ＩＬ−１７Ａ抗体（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ）と共に予備インキュベートすることによりブロックされている。
ＩＬ−１７Ａ抑制試験は以下の通り実施する。ＨＳ６８細胞のコンフルエントのＴ−７５フラスコ（約２×１０６細胞）をＣａ＋＋及びＭｇ＋＋非含有のＤｕｌｂｅｃｃｏのＰＢＳで洗浄し、次に５％ＣＯ２においてインキュベーター中３７℃で２〜５分細胞解離培地（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）５ｍｌとともにインキュベートした。次に細胞を組織培養（ＴＣ）培地５ｍｌで回収し、１０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。ＴＣ培地の組成はＤｕｌｂｅｃｃｏ変性Ｅａｇｌｅ培地（グルタミン添加）、１０％熱不活性化ウシ胎児血清（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１０ｍＭＨｅｐｅｓ、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、ペニシリン、及びストレプトマイシンとする。細胞を２ｍｌのＴＣ培地に再懸濁し、トリパンブルーで１：１希釈し、計数した。細胞の濃度はＴＣ培地中１×１０５細胞／ｍｌに調節し、そして０．１ｍｌ／ウェルのアリコートずつを０．１ｍｌＴＣ培地の入った平底プレートのウェルに分注する。細胞を一夜生育させ、そして上澄みを吸引し、細胞を新鮮ＴＣ培地０．２ｍｌで洗浄する。
試験すべき抗ＩＬ−１７Ａを２倍または３倍の段階で連続希釈することにより、ＩＬ−１７Ａ抑制試験において１〜０．００１μｇ／ｍｌの最終抗体濃度が得られるように使用しうる一連の保存溶液を得る。ラットＩｇＧ対照を各試験において使用し、並びに培地のみの試料も対照として使用することによりＨＳ６８細胞における自発的ＩＬ−６生産を計測する。ＴＣ培地をＨＳ６８細胞の入ったプレートのウェルから吸引する。種々の濃度の抗ＩＬ−１７Ａ抗体のアリコートずつ（各０．１ｍｌ）を５分間３７℃でＨＳ６８細胞とともにウェル中で予備インキュベートした後に、０．１ｍｌの２０ｎｇ／ｍｌｒｈＩＬ−１７Ａを添加することにより、１０ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ−１７Ａの終濃度を得る（ＩＬ−１７Ａ２量体約３３０ｐＭ）。細胞を３７℃で２４時間インキュベートし、上澄み（５０〜１００μｌ）を回収し、例えばＰｈａｒｍｉｎｇｅｎより入手可能なヒトＩＬ−６ＥＬＩＳＡキット（ＯｐｔＥＩＡ−ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｆｒａｎｋｌｉｎ Ｌａｋｅｓ，Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ，ＵＳＡ）を用いながらＩＬ−６に関して試験する。
包皮線維芽細胞ＩＬ−１７Ａ抑制試験における本発明の数種のラット抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体に関する結果を表１３に示す。
Figure 0005118699
 （実施例１１）
Ｂａ／Ｆ３−ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲ増殖試験
ＩＬ−１７Ａの生物学的活性をブロックする本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の能力を、ＩＬ−１７Ａ刺激に応答して増殖するように操作された細胞系統のｒｈＩＬ−１７Ａ誘導増殖をモニタリングすることにより計測する。特に、マウス顆粒球コロニー刺激因子受容体（ＧＣＳＦＲ）の膜貫通ドメイン及び細胞質領域に融合したヒトＩＬ−１７Ａ受容体（ｈＩＬ−１７ＲＣ）の細胞外ドメインを含む融合蛋白を発現するようにＢａ／Ｆ３細胞系統（ＩＬ−３依存性ネズミプロＢ細胞）を修飾した。得られた細胞系統は本明細書においてはＢａ／Ｆ３ ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲと称する。細胞外ＩＬ−１７ＲＣドメインへのホモ２量体ＩＬ−１７Ａの結合はｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲ融合蛋白受容体の２量化をもたらし、これはＢａ／Ｆ３細胞の増殖を、それらのｍＧＣＳＦＲ細胞質ドメインを介してシグナルする。そのような細胞はＩＬ−１７Ａに応答して増殖し、抗ＩＬ−１７Ａ抗体のようなＩＬ−１７Ａ抑制剤に関する、好都合な試験法をもたらす。
ＩＬ−１７Ａ刺激に対するＢａ／Ｆ３−ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲ増殖試験の感度により、他の試験と比較して相対的に低い濃度のｒｈＩＬ−１７Ａ（例えば３ｎｇ／ｍｌ、１００ｐＭ）で実験を実施することが可能となるが、それでなお、頑健で容易に計測可能な増殖応答が維持されている。このことは、試験においてｒｈＩＬ−１７Ａを上回るモル過剰量を達成するために必要な抗ＩＬ−１７Ａ抗体の濃度がより低値となることを意味している。より低い抗体濃度で実施される実験は、別様には区別不可能である高親和性抗体の間の判別を可能とする（即ち実験は抗体ＩＬ−１７Ａ結合曲線における定常状態部分ではなく直線部分に近似するように実施できる）。
抗体及びＩＬ−１７Ａを、ワーキング濃度までの希釈後であるが実験試料への添加の前に、０．２２μｍフィルターを通して濾過した。試料の４セットを、９６穴の平底組織培養プレートの列に渡って２連で製造した。本実施例においては、生育培地はＲＰＭＩ１６４０ｗ／Ｇｌｕｔａｍａｘ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）、５５μＭ ２−メルカプトエタノール、１０％配合飼料給餌ウシ胎児血清（Ｉｒｖｉｎｅ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｓａｎｔａ Ａｎａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）、５０μｇ／ｍｌゲンタマイシン、２μｇ／ｍｌピューロマイシン、及び１０ｎｇ／ｍｌ ｍＩＬ−３とする。バイオアッセイ培地はピューロマイシン及びｍＩＬ−３を含有しない以外は生育培地と同様である。本実施例における全ての連続希釈はＢｉｏＡｓｓａｙ Ｍｅｄｉｕｍ中に行った。
以下の実験試料（７５μｌ）、即ち、１）生育培地の連続希釈（１０ｎｇ／ｍｌのｍＩＬ−３含有）、２）ｒｈＩＬ−１７Ａの連続希釈、３）「無抗体」対照を包含する３ｎｇ／ｍｌＩＬ−１７Ａ（細胞添加後の終濃度）と混合した本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の連続希釈、及び４）ＩＬ−１７Ａ又はｍＩＬ−３の抗体無添加の「細胞のみ」の対照、を製造した。次にＢａ／Ｆ３ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲ細胞（７５００細胞／ウェル）を添加することにより総容量を１００μｌ／ウェルとし、そしてプレートを約４０時間３７℃／５％ＣＯ２においてインキュベートした。ＡｌａｍａｒＢｌｕｅ（登録商標）指示薬染料（１１μｌ／ウェル）を添加し、プレートを６〜８時間３７℃／５％ＣＯ２においてインキュベートした。次にプレートを５７０ｎｍ及び６００ｎｍにおける吸光度の相違に関して読み取った。ＩＣ５０値を非直線フィット／ジグモイド用量応答／変数傾きを用いて求めた。
Ｂａ／Ｆ３ ｈＩＬ−１７Ｒｃ−ｍＧＣＳＦＲ増殖試験の結果を表１４に示す。
Figure 0005118699
Figure 0005118699
 （実施例１２）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体の交差ブロッキング
本発明の異なる種類の抗ＩＬ−１７Ａ抗体は同じエピトープ、オーバーラップするエピトープ、又はオーバーラップしないエピトープ、例えば２つ以上の抗体が同時に１つのＩＬ−１７Ａ単量体に結合しうるに足ほど区別できるエピトープに結合する場合がある。受容体結合のために重要であるＩＬ−１７Ａの部分に結合する抗体はＩＬ−１７Ａの受容体媒介生物学的活性をブロックすることになる。そのような抗体は本明細書においては、「中和抗体」と称する。結合するが受容体結合をブロックしない抗体は非中和抗体と称する。
ＩＬ−１７Ａ及び抗ＩＬ−１７Ａ抗体に対する実験を実施する場合、サンドイッチＥＬＩＳＡによるなどして、試料中のＩＬ−１７Ａ（又は抗ＩＬ−１７Ａ）のレベルを調べられることは有用である。例えば実施例６を参照できる。１つのフォーマットにおいて、ＩＬ−１７Ａ ＥＬＩＳＡでは、捕捉抗体でマイクロプレートのウェルをコーティングすること、ＩＬ−１７Ａを含有すると考えられる実験試料を添加すること、及び検出抗体を結合することを行う。捕捉抗体及び検出抗体は同時にＩＬ−１７Ａに結合できなければならない。
同様の試験を用いて抗ＩＬ−１７Ａ抗体のレベルを測定してよく、その場合、ＩＬ−１７Ａの標準溶液を捕捉抗体でコーティングされたウェルに結合させ、その後ＩＬ−１７Ａを含有すると考えられる実験試料を添加し、そして二次検出抗体を結合させる（例えば本発明のＩｇＧヒト化抗体の場合は抗ヒトＩｇＧ抗体）。ＩＬ−１７ＡサンドイッチＥＬＩＳＡの場合と同様、捕捉抗体は試験すべき抗体の結合を妨害できない。
本実施例において概説するＥＬＩＳＡ実験における使用のための好ましい抗体対は、交差ブロッキング実験を実施することにより求めることができる。交差ブロッキング実験において、第１の抗体をマイクロプレートのウェル上にコーティングする。次にビオチン化した第２の抗体をＩＬ−１７Ａと混合し、そして結合させたのち、混合物をコーティングされたウェルに添加してインキュベートする。ビオチン化第２抗体は種々の濃度で添加（即ち滴定）することにより、少なくとも一部の試料においては抗体がホモ２量体ＩＬ−１７Ａよりも二倍（又はそれより高値）モル過剰において存在することを確保してよい。次にプレートを洗浄し、ウェル中に結合しているビオチン化第２抗体の存在又は非存在を標準的な方法により測定する。
２抗体が交差ブロッキングする場合、第２の抗ＩＬ−１７Ａ抗体を含有しない（又はアイソタイプ対照を含有する）対照試料と比較して、第２抗ＩＬ−１７Ａ抗体の存在下のプレートにはシグナル（ＩＬ−１７Ａ結合）の低下が生じる。交差ブロッキングしない抗体の対はサンドイッチＥＬＩＳＡのような試験において共に使用できる。ＩＬ−１７Ａの２量体の性質により特定のフォーマット（例えばＩＬ−１７Ａが検出抗体の添加よりも前にプレート上の捕捉抗体に結合する場合）においてはＥＬＩＳＡにおける交差ブロッキング抗体の対を使用することが可能であるが、抗体の非交差ブロッキング対が一般的には好ましい。
本発明の数種の抗ＩＬ−１７Ａ抗体（クローン４Ｃ３、６Ｃ３、８Ｇ９、１２Ｅ６，１６Ｃ１０、１８Ｈ６、２３Ｅ１２、２９Ｈ１、３０Ｃ１０、１Ｄ１０、２１Ｂ１２、２９Ｇ３）を交差ブロッキングのために対として使用した。２９Ｇ３／１Ｄ１０と２９Ｇ３／２１Ｂ１２を除いて全ての対が交差ブロッキングし、従ってこれらの抗体対をＥＬＩＳＡで使用することができた。ＥＬＩＳＡで使用できる抗ＩＬ−１７Ａ抗体の対を同定することのほかに、これらの結果は、抗体２９Ｇ３により結合されるエピトープが抗体１Ｄ１０及び２１Ｂ１２により結合されるエピトープとは機能的又は物理的に区別可能であることを示している。これらのデータは又、１Ｄ１０及び２１Ｂ１２に対するエピトープは１６Ｃ１０に対するエピトープとオーバーラップしているが同一ではないことも明らかにしている。
機能的に区別可能なエピトープに結合する抗ＩＬ−１７Ａ抗体のこのような対は、例えば抗ＩＬ−１７Ａ免疫組織化学（ＩＨＣ）を有効化する場合において有用である。例えば、組織試料が機能的に区別可能なエピトープに結合する２つの異なる抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いて実施したＩＨＣにおいてＩＬ−１７Ａ発現の同じパターンを示す場合、試験は、組織試料中の一部の他の擬似的な交差反応蛋白ではなくＩＬ−１７Ａを検出しているという可能性がさらに高くなる。
そのような非交差ブロッキング抗体対はまた例えば抗ＩＬ−１７Ａ抗体療法を受けている患者由来の試料における治療用抗ＩＬ−１７Ａ抗体の存在下のＩＬ−１７Ａの検出のためのＥＬＩＳＡを設計する場合に有用であり、その場合、治療用抗ＩＬ−１７Ａ抗体の過剰量の存在は、ＥＬＩＳＡ抗体が治療用抗体と非交差ブロッキング性でなければ抗ＩＬ−１７Ａ ＥＬＩＳＡによる検出をブロックすることになる。
（実施例１３）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いた遺伝子療法
本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体はまた遺伝子療法により対象に投与してよい。遺伝子療法の研究法においては、対象の細胞を本発明の抗体をコードする核酸で形質転換する。次に核酸を含む対象が内因性に抗体分子（イントラボディー）を生産する。例えば、Ａｌｖａｒｅｚ等は遺伝子療法の研究法を用いて対象に単鎖抗ＥｒｂＢ２抗体を導入している。Ａｌｖａｒｅｚ等（２０００）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ６：３０８１−３０８７。Ａｌｖａｒｅｚ等により開示された方法は対象への本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体分子をコードする核酸の導入に容易に適合させてよい。１つの実施形態において、遺伝子療法により導入される抗体分子は完全ヒト型の単鎖抗体である。
本明細書に記載した遺伝子療法の研究法は、長期の遺伝子発現が達成されれば治療を僅か１回のみ、或いは多くとも限定回数のみ実施すればよいという潜在的利点を有している。このことは対象における適切な治療レベルを維持するためには周期的に反復しなければならない抗体投与とは対照的である。
核酸は当該分野で知られた何れかの手段により対象の細胞に導入してよい。一部の実施形態においては、核酸はウィルスベクターの部分として導入される。ベクターの誘導元としてよいウィルスの例は、レンチウィルス、ヘルペスウィルス、アデノウィルス、アデノ関連ウィルス（ＡＡＶ）、ワクシニアウィルス、バキュロウィルス、アルファウィルス、インフルエンザウィルス、及び所望の細胞向性を有する他の組み換えウィルスを包含する。種々の企業が市販のウィルスベクターを製造しており、例えばＡｖｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．（Ａｌａｍｅｄａ，ＣＡ；ＡＡＶベクター）；Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｓｙｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ；レトロウィルス、アデノウィルス、ＡＡＶのベクター、及びレンチウィルスベクター）；Ｃｌｏｎｔｅｃｈ（レトロウィルス及びバキュロウィルスベクター）；Ｇｅｎｏｖｏ，Ｉｎｃ．（Ｓｈａｒｏｎ Ｈｉｌｌ，ＰＡ；アデノウィルス及びＡＶＶのベクター）；Ｇｅｎｖｅｃ（アデノウィルスベクター）；ＩｎｔｒｏＧｅｎｅ（Ｌｅｉｄｅｎ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ；アデノウィルスベクター）；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ（レトロウィルス、アデノウィルス、ＡＡＶ、及びヘルペスウィルスベクター）；Ｎｏｒｇｅｎ（アデノウィルスベクター）；Ｏｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ（Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ；レンチウィルスベクター）；及びＴｒａｎｓｇｅｎｅ（Ｓｔｒａｓｂｏｕｒｇ，Ｆｒａｎｃｅ；アデノウィルス、ワクシニア、レトロウィルス、及びレンチウィルスベクター）が挙げられる。
ウィルスベクターを構築して使用する方法は当該分野で知られている（例えばＭｉｌｌｅｒ等（１９９２）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ７：９８０−９９０参照）。好ましくは、ウィルスベクターは複製欠損性（自律複製不可能）であり、従って標的細胞において感染性ではない。好ましくは複製欠損性ウィルスは、ウィルス粒子を製造するために自身のゲノムをカプシド化するのに必要であるそのゲノムの配列のみを保持している最小限のウィルスである。ウィルス遺伝子を完全に、又はほぼ完全に欠いている欠損性ウィルスが最も好ましい。欠損性ウィルスベクターの使用は、ベクターが他の細胞に感染することができるという懸案を伴うことなく特定の局所的区域における細胞への投与を可能にし、これにより組織特異的ターゲティングが可能となる。例えばＫａｎｎｏ等（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ Ｇｅｎ．Ｔｈｅｒ．６：１４７−１５４；Ｋａｐｌｉｔｔ等（１９９７）Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｍｅｔｈ．７１：１２５−１３２；及びＫａｐｌｉｔｔ等（１９９４）Ｊ．Ｎｅｕｒｏ−Ｏｎｃ．１９：１３７−１４２を参照できる。
アデノウィルスは種々の細胞片に本発明の核酸を効率的に送達するために修飾できる真核生物ＤＮＡウィルスである。弱毒化されたアデノウィルスベクター、例えばＳｔｒａｔｆｏｒｄ−Ｐｅｒｒｉｃａｕｄｅｔ等（１９９２）（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９０：６２６−６３０）により記載されたベクターが一部の例において望ましい。種々の複製欠損性のアデノウィルス及び最小限のアデノウィルスベクターが報告されている（ＰＣＴ公開ＷＯ９４／２６９１４、ＷＯ９４／２８９３８、ＷＯ９４／２８１５２、ＷＯ９４／１２６４９、ＷＯ９５／０２６９７、及びＷＯ９６／２２３７８）。本発明の複製欠損性組み換えアデノウィルスは当該分野で知られた何れかの手法により製造できる（Ｌｅｖｒｅｒｏ等（１９９１）Ｇｅｎｅ１０１：１９５；ＥＰ１８５５７３；Ｇｒａｈａｍ（１９８４）ＥＭＢＯ Ｊ．３：２９１７；Ｇｒａｈａｍ等（１９７７）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．３６：５９参照）。
アデノ関連ウィルス（ＡＡＶ）は安定した部位特異的な態様においてそれらが感染する細胞のゲノム内に組み込まれることができる比較的小型のＤＮＡウィルスである。それらは細胞の生育、形態又は分化に対する如何なる作用も誘導することなく、広範なスペクトルの細胞を感染させることができ、そしてそれらはヒトの病理には関与しないと考えられる。インビトロ及びインビボで遺伝子を転移させるためのＡＡＶ誘導ベクターの使用が報告されている（例えばＤｏｎｓａｎｔｅ等（２００１）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８：１３４３−１３４６；Ｌａｒｓｏｎ等（２００１）Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏ．４８９．４５−５７；ＰＣＴ公開ＷＯ９１／１８０８８及びＷＯ９３／０９２３９；米国特許４，７９７，３６８及び５，１３９，９４１；及びＥＰ４８８５２８Ｂ１参照）。
別の実施形態においては、遺伝子は例えば米国特許５，３９９，３４６、４，６５０，７６４、４，９８０，２８９、及び５，１２４，２６３；Ｍａｎｎ等（１９８３）Ｃｅｌｌ３３：１５３；Ｍａｒｋｏｗｉｔｚ等（１９８８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２：１１２０；ＥＰ４５３２４２及びＥＰ１７８２２０に記載の通りレトロウィルスベクター中に導入できる。レトロウィルスは分裂中の細胞に感染する組み込み型のウィルスである。
レンチウィルスベクターは数種の組織型、例えば脳、網膜、筋肉、肝臓及び血液における本発明の抗体分子をコードする核酸の直接送達及び持続性発現のための薬剤として使用できる。ベクターはこれらの組織における分裂中及び非分裂の細胞を効率的に形質導入し、そして抗体分子の長期の発現を維持することができる。考察についてはＺｕｆｆｅｒｅｙ等（１９９８）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２：９８７３−８０及びＫａｆｒｉ等（２００１）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．３：３１６−３２６を参照できる。レンチウィルスパッケージング細胞系統が当該分野で入手可能であり、そして一般的に知られており、遺伝子療法のための高い力価のレンチウィルスベクターの製造を容易にしている。例としては、少なくとも３〜４日間１０６ＩＵ／ｍｌより高値でウィルス粒子を生成することができるテトラサイクリン誘導性ＶＳＶ−Ｇ疑似型レンチウィルスパッケージング細胞系統が挙げられ、Ｋａｆｒｉ等（１９９９）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７３：５７６−５４８を参照できる。誘導性の細胞系統により生産されるベクターはインビトロ及びインビボで非分裂中の細胞を効率的に形質導入するために必要に応じて濃縮することができる。
シンドビスウィルスは１９５３年に世界中の種々の地域でそれが発見されて以来広範に研究されているアルファウィルス属のメンバーである。アルファウィルス、特にシンドビスウィルスを基にした遺伝子形質導入はインビトロで十分研究されている（Ｓｔｒａｕｓ等（１９９４）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５８：４９１−５６２；Ｂｒｅｄｅｎｂｅｅｋ等（１９９３）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６７；６４３９−６４４６；Ｉｉｊｉｍａ等（１９９９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ８０：１１０−１１８；及びＳａｗａｉ等（１９９８）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．２４８：３１５−３２３参照）。アルファウィルスベクターは、発現コンストラクトの迅速な操作、感染性粒子の高い力価の保存用液の製造、非分裂細胞の感染、及び高レベルの発現といった多くの特性により、開発すべき他のウィルス誘導ベクター系の望ましい代替品とされる（Ｓｔｒａｕｓｓ等（１９９４）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．５８：４９１−５６２）。遺伝子療法のためのシンドビスウィルスも報告されている。（Ｗａｈｌｆｏｒｓ等（２０００）Ｇｅｎｅ．Ｔｈｅｒ．７：４７２−４８０及びＬｕｎｄｓｔｒｏｍ（１９９９）Ｊ．Ｒｅｃｅｐ．Ｓｉｇ．Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１９（１−４）：６７３−６８６）。
別の実施形態においては、ベクターはリポフェクションによるか、又は他のトランスフェクション促進剤（ペプチド、重合体など）を用いて細胞内に導入できる。マーカーをコードする遺伝子のインビボ及びインビトロのトランスフェクションのためのリポソームを製造するために合成カチオン性脂質を使用できる（Ｆｅｌｇｎｅｒ等（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８４：７４１３−７４１７及びＷａｎｇ等（１９８７）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８４：７８５１−７８５５）。核酸の転移のための有用な脂質の化合物及び組成物はＰＣＴ公開ＷＯ９５／１８８６３及びＷＯ９６／１７８２３及び米国特許５，４５９，１２７に記載されている。
ネイキッドのＤＮＡプラスミドとしてインビボでベクターを導入することも可能である。遺伝子療法用のネイキッドＤＮＡベクターは当該分野で知られた方法、例えばエレクトロポレーション、マイクロインジェクション、細胞融合、ＤＥＡＥデキストラン、リン酸カルシウム沈澱、遺伝子銃の使用、又はＤＮＡベクタートランスポーターの使用により所望の宿主細胞内に導入できる（例えばＷｉｌｓｏｎ等（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：９６３−９６７；Ｗｉｌｌｉａｍｓ等（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８８：２７２６−２７３０参照）。受容体媒介ＤＮＡ送達の研究法もまた使用できる（Ｗｕ等（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１４６２１−１４６２４）。米国特許５，５８０，８５９及び５，５８９，４６６は哺乳類におけるトランスフェクション促進剤を使用しない外因性ＤＮＡ配列の送達を開示している。エレクトロトランスファーと称される比較的低電圧の高効率のインビボのＤＮＡ転移手法もまた報告されている（Ｖｉｌｑｕｉｎ等（２００１）Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．８：１０９７；Ｐａｙｅｎ等（２００１）Ｅｘｐ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２９：２９５−３００；Ｍｉｒ（２００１）Ｂｉｏｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ５３：１−１０；ＰＣＴ公開ＷＯ９９／０１１５７、ＷＯ９９／０１１５８及びＷＯ９９／０１１７５）。
本明細書に概説する遺伝子療法法はインビボで実施してよく、或いはそれらはエクスビボで実施してよく、その場合、細胞を対象から取り出し、インビトロの遺伝子療法の方法で形質転換し、そしてその後対象内に再導入する。例えばＷｏｒｇａｌｌ（２００５）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．２０（２）：１１８−２４を参照できる。
（実施例１４）
親抗体のＣＤＲのカセット突然変異誘発
本発明の抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体（例えば１６Ｃ１０）のＣＤＲ配列の最適化を、ショットガンスキャニング突然変異誘発を用いて実施する。ＣＤＲ内のどの残基がＩＬ−１７Ａ結合のために最も重要であるかを調べるためにアラニンスキャニング突然変異誘発を用いる（実施例１９参照）。ＣＤＲ１つ以上の内部の残基１つ以上に対するコドンをアラニンコドンと置き換えるか、又はアラニンコドンをグリシンコドンと置き換え、そして得られた抗体を該当する活性（例えば本明細書の種々の他の実施例に示すようなＩＬ−１７Ａ結合親和性、競合試験における受容体ブロッキングに関するＩＣ５０、バイオアッセイ）に関して試験する。コドン置換は例えば、限定しないが部位指向性突然変異誘発（例えばＫｕｎｋｅｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ（１９８５）８２：４８８）及びＰＣＲ突然変異誘発を包含する当該分野で知られた何れかの方法により行ってよい。ＩＬ−１７Ａ結合に重要な残基は又、ＩＬ−１７Ａ抗体複合体の構造、例えばＸ線結晶構造を検査することにより決定してもよい。ＩＬ−１７Ａの接触距離内にあるか、又はＩＬ−１７Ａ抗体複合体の形成において実質的に埋没している抗体ＣＤＲ残基が、更に最適化するための候補となる。
次に突然変異に対して最大の感受性を有する残基を例えば相同体スキャニング突然変異誘発によりさらに検討する。本実施例においては、相同アミノ酸による保存的アミノ酸置換を標的残基において実施することにより、優れた品質を有する抗体を検索する。非保存的突然変異もまた、ＩＬ−１７Ａ結合を同時に崩壊させる可能性があるものの、可能である。
或いは、進歩した抗体配列は親和性突然変異を用いて形成してもよく、その場合、ＣＤＲ中の選択された残基は、その位置における全ての可能なアミノ酸置換が生じるように突然変異される。別の実施形態においては、ＷＯ２００５／０４４８５３に記載の通り、全２０種の可能性のある天然のアミノ酸より少ない数を置換に用いることにより、潜在的な配列の数をより管理しやすいレベルにまで低減しつつ、各位置における化学的多様性はなお、最適に多様であるように選択される限定数のアミノ酸を用いながら与えられるのである（例えば代表的な疎水性の、電荷をもたない極性の、塩基性および酸性アミノ酸）。そのような親和性成熟は、非標準又は修飾されたアミノ酸を包含させる場合は、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれより多くを包含する、何れかの数量のアミノ酸による目的の位置における置換により実施できる。
（実施例１５）
ヒト組織との交差反応性
ヒト対象における非標的組織との交差反応性に対するヒト化抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体ｈｕ１６Ｃ１０の傾向を以下の通り試験した。ｈｕ１６Ｃ１０をビオチン化二次抗体とともに予備インキュベートすることにより予備複合体を形成した後に組織試料に曝露した。次に抗体複合体（抗体２０μｇ／ｍｌ）を組織又は他の試料と混合し、そしてインキュベートすることにより結合させた。次に結合した二次抗体を、ＡＢＣイムノパーオキシダーゼ検出を用いて検出した（Ｖｅｃｔｏｒ Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，ＵＳＡ）。Ｔｕｓｏｎ等（１９９０）Ｊ．Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ Ｃｙｔｏｃｈｅｍ．３８（７）：９２３−６。未関連のヒトＩｇＧ１抗体を用いた試料を陰性対照として使用した。
免疫組織化学（ＩＨＣ）染色はＵＶ樹脂スライド上のｒｈＩＬ−１７Ａ蛋白スポット（Ａｄｈｅｓｉｖｅ Ｃｏａｔｅｄ Ｓｌｉｄｅｓ，Ｉｎｓｔｒｕｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）、ＩＬ−１７Ａをコードするアデノウィルスを感染させたマウス肝細胞、及びヒト慢性関節リューマチ組織を包含する数種の陽性対照標的組織に対してｈｕ１６Ｃ１０を用いて実施した。ＩＨＣによれば３種全ての陽性対照において結合が明らかになった（＋＋＋）。
次にＩＨＣをヒト組織のパネル（全３２検体）に対して実施することにより交差反応性を調べた。これらのヒト組織試料は全てＵＶ樹脂スライド上に搭載した。試料は各組織について３ドナーより得た。スクリーニングしたヒト組織は、副腎、膀胱、小脳、大脳皮質、結腸、ファロピアン管、心筋、腎臓、肝臓、肺、リンパ節、乳腺、卵巣、膵臓、上皮小体、脳下垂体、胎盤、前立腺、網膜、骨格筋、皮膚、小腸、脊髄、脾臓、胃、精巣、胸腺、甲状腺、尿管、子宮、及び頸部（子宮）であった。ＩＨＣは３２組織全てにおいて陰性であった。
このように交差反応性がないことは本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の治療上の使用において幾つかの潜在的利点を有しており、他の組織への非特異的結合に起因する抗体の損失（その結果としての治療効果の低減）を低下させること、及び望ましくない組織への結合に関連する有害作用の可能性を低減することが挙げられる。
（実施例１６）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いたコラーゲン誘導関節炎の治療
コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）はヒトにおける慢性関節リューマチに関する広く許容されたマウスモデルである。本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体１Ｄ１０（親ラット抗体であって、そのヒト化型ではない）を、ＣＩＡを発現しているマウスに投与することにより、慢性関節リューマチを治療する抗ＩＬ−１７Ａ療法の能力を評価する。
操作法は以下の通りとした。第０日において、雄性Ｂ１０．ＲＩＩＩマウスを完全フロイントアジュバント中に乳化したウシＩＩ型コラーゲンで尾部の基部において皮内免疫化した。第２１日において、マウスを尾部の基部において送達した不完全フロイントアジュバント中に乳化したウシＩＩ型コラーゲンで皮内攻撃した。免疫化群における重度の関節炎の初回兆候が生じた時点で（第２１日後）、全ての残余の免疫化マウスを種々の投与群に無作為に割りつけた。動物には８００μｇ、２００μｇ、又は５０μｇの抗ＩＬ−１７Ａ抗体１Ｄ１０；２００μｇのアイソタイプ対照抗体；又は希釈剤の何れかで処理した。治療は免疫化マウスにおける疾患発症の初日に皮下に行い、そしてその後は週１回で更に４回行った。マウスは第３５日に屠殺し、そして肢を１０％中性緩衝ホルマリン中に固定し、組織の処理及び切片化に付した。肢は以下の組織病理学的パラメーター、即ち反応性滑膜、炎症、パンヌス形成、軟骨破壊、骨侵食、及び骨形成に関して病理学者が分析した。各パラメーターは以下の疾患尺度、即ち０＝疾患無し、１＝最小、２＝軽度、３＝中等度、４＝重度、を用いて等級付けした。更に又、肢は目視による疾患重症度スコア（ＤＳＳ）を用いて評価し、これは０〜３の尺度上で浮腫と紅斑を計測するものであり、０は正常な肢であり、１は肢中１指が炎症を有し、２は２指又はその肢の手掌が炎症を有し、そして３は肢の手掌及び指が炎症を有するものとする。２及び３のスコアは本明細書においては重度又は高度な炎症を有する肢と称する。
結果を図３Ａ〜３Ｃに示す。各データポイントはある動物に関する全４肢の平均又は全動物に渡る平均ではなく、１つの肢を示している。高い病理学的スコアを示す肢の数の低減は、試験濃度より高い抗ＩＬ−１７Ａ１Ｄ１０濃度（２８及び７ｍｇ／ｋｇ）を用いた場合に病理学の３尺度（目視ＤＳＳ、肢浮腫及び紅斑、軟骨損傷及び骨侵食）で統計学的に有意であった。最低濃度（２ｍｇ／ｋｇ）による結果は骨侵食について統計学的に有意であり、目視ＤＳＳ及び軟骨損傷に関して低減していた。同様の利益が炎症肢内の軟骨破壊性酵素（マトリックスメタロプロテアーゼＭＭＰ−２、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−１３）の生産の低減においても観察された。
しかしながら肢の炎症の目視による評価は、例えば低下した骨侵食等、ＣＩＡマウスの抗ＩＬ−１７Ａ治療の治療上の利点を過小評価する場合がある。別の実験において、ＣＩＡマウス由来の高度な炎症を有する肢（ＤＳＳスコア２又は３）を組織病理学又はマイクロコンピューター断層撮影（マイクロＣＴ）を用いて骨侵食に関して分析した。この試験は、抗ＩＬ−１７Ａ治療動物が高度な炎症を有する肢の極度に低減したパーセントを有していた（例えば図３Ａ参照）にも関わらず、高度な炎症を有する肢がなお多数残存しており、そして無抗体対照を包含する全ての投与群の高度な炎症を有する肢（ＤＳＳ＝２又は３）を比較することができたため、可能であった。図３Ｄは希釈剤投与、アイソタイプ対照（ｒＩｇＧ１）投与、及び抗ＩＬ−１７Ａ抗体投与動物から得た、高度な炎症を有する肢に関する骨侵食のプロットを示す。組織病理学的に計測した骨侵食は、ＤＳＳスコアが同様であったにもかかわらず、無抗体対照と比較して抗ＩＬ−１７Ａ投与動物の肢で有意に低減していた。結果は、骨侵食の低下は、ＤＳＳスコアで計測した場合に炎症の見かけの改善がなかった肢においても抗ＩＬ−１７Ａ治療により達成されることを示している。
同様の結果は、ＣＩＡマウスにおける高度な炎症を有する肢における関節に関する骨無機質密度（ＢＭＤ）を計測するためにマイクロＣＴを使用した場合にも観察されている。表１５は本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体（１Ｄ１０）又はアイソタイプ対照（２５Ｄ２）の何れかを投与したＣＩＡ動物の、０〜３の疾患重症度スコアを有する肢のＢＭＤを示す。同じ目視による疾患重症度を有する関節の場合であっても、１Ｄ１０抗体投与群はアイソタイプ対照投与動物で観察された骨無機質密度の低下の約半分を有するのみであった。
Figure 0005118699
 骨侵食の場合と同様、軟骨破壊及びパンヌス形成（炎症組織の過剰な折り畳みを形成する滑膜管壁の増殖）もまた抗ｈＩＬ−１７Ａ（１Ｄ１０）投与ＣＩＡマウスにおいて低減していた。組織病理学的検討によれば、抗ＩＬ−１７Ａ抗体投与は、希釈剤又はアイソタイプ投与対照と比較した場合に、重度の病理学的状態を示す肢の数を低減したのみならず、目視による検査に基づいて等しく炎症を有する外観を呈していた（ＤＳＳスコア２又は３）肢における病理学的状態をも低減したことを示している。
抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いた治療は関節の炎症のＣＩＡモデルにおける骨侵食を有意に低減したという観察結果は、そのような療法がヒトにおけるＲＡの最も消耗性で不可逆の作用の１つを防止する場合に有用であることを示唆している。更に又、高度な炎症を有する肢においてさえも骨侵食が低減されたという観察結果は、実験室、又は究極的には病院においても、関節炎症の単純な目視による評価が治療効果を正確に計測しない場合があることを示唆している。骨侵食の計測は治療処置の作用を追跡するために必要である。そのような方法は限定しないが例えば標準的な２−ＤＸ線検出、コンピューター断層撮影（ＣＴ）、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、超音波（ＵＳ）、及びシンチグラフィーを包含する。例えばＧｕｅｒｍａｚｉ等（２００４）Ｓｅｍｉｎ．Ｍｕｓｃｕｌｏｓｋｅｌｅｔ．Ｒａｄｉｏｌ．８（４）：２６９−２８５を参照できる。
（実施例１７）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体のＢＡＬ好中球リクルートメント試験
インビボでＩＬ−１７Ａの活性をブロックする本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体の能力を、気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）好中球リクルートメント試験において評価した。手短にいえば、第−４日において、５週齢の雌性ＢＡＬＢ／ｃＡｎＮマウス（Ｔａｃｏｎｉｃ Ｆａｒｍｓ，Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ）に本発明の抗ＩＬ−１７Ａ抗体又はアイソタイプ対照をマウス当たり抗体０、１０、３０、４０、６０、１００μｇの皮下注射により投与した。第−１日において、軽度のイソフラン麻酔下にＰＢＳ５０μｌ中のｒｈＩＬ−１７Ａ１μｇ（又はＰＢＳ単独対照）の鼻内投与によりマウスを刺激した。
第０日において、ＢＡＬ液中に存在する好中球のレベルを以下の通り測定した。マウスをＣＯ２で安楽死させ、血液試料を採取し、これから抗ＩＬ−１７Ａ抗体の濃度を測定した。針を気管切開により上頸部気管内に挿入し、３回ＰＢＳ０．３ｍｌを導入及び排出することによりＢＡＬ液を収集した。ＢＡＬ液を遠心分離（４００ｘｇ、４℃１０分間）し、細胞ペレットをＰＢＳ中に再懸濁した。総細胞数はトリパンブルー溶液を用いながら血球計において測定した。血球分画は油脂浸積顕微鏡を用いながら（元倍率×１０００）標準的な形態学的基準に従ってＷｒｉｇｈｔ−Ｇｉｅｍｓａ染色（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉ，ＵＳＡ）によりサイトスピンプレパレーション上で行った。細胞計数はパーセントＢＡＬ好中球を求めるために２００又は３００細胞（リンパ球、単球、好中球、好酸球）に対して実施した。
結果を図４に示す。データは本発明の３種の抗ＩＬ−１７Ａ抗体（１Ｄ１０、１６Ｃ１０、及び４Ｃ３）並びに対照に関して示す。個体別の実験動物に関する全白血球のパーセントとしてのＢＡＬ液中の好中球のパーセントを血清中抗体濃度の関数としてプロットし、凡例に示す通り横軸の左側セグメント（０から１）を対照とした。対照はアイソタイプ対照抗体（抗ＩＬ−１７Ａ抗体と同じレベルで投与）の投与により低減されない有意な好中球リクルートメントをｒｈＩＬ−１７Ａ刺激が誘導することを示している。これとは対照的に、抗ＩＬ−１７ＡデータはｒｈＩＬ−１７Ａ誘導好中球リクルートメントの用量依存的低減を示しており、好中球リクルートメントは４０〜６０μｇ／ｍｌ超の血清中抗体濃度において本質的にブロックされた。
（実施例１８）
抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いた慢性関節リューマチ（ＲＡ）の治療
ＤＭＡＲＤ１つ以上に対して不十分な応答を有していたＲＡと診断されたヒト対象が、本発明のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体を用いた治療のために選択される。対象はメトトレキセート（１０ｍｇ／週）で維持し、そして場合により２週間プレドニソンで治療する。対象には皮下投与により抗ＩＬ−１７Ａ抗体５０又は１００ｍｇを毎月投与する。用量は標準的な臨床基準に従って、そして臨床応答に基づいて、特定の対象に対して調節する。
治療への応答はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙにより開発された基準に基づいたＡＣＲスコアを測定することにより評価する。ＡＣＲスコアは腫脹及び圧痛状態の関節の数の低減、患者の全般的評価、医師の全般的評価、疼痛尺度、自己評価による障害、及び急性期の反応体（赤血球沈降速度又はＣ反応性蛋白）のような多数の臨床パラメーター及び放射線的スコアを統合する複合スコアである。Ｆｅｌｓｏｎ等（１９９５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ＆Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ３８；７２７−７３５を参照できる。対象は治療２４週でＡＣＲ２０以上のスコアを示せば改善されたとみなす。更に又、種々のＡＣＲスコア（例えばＡＣＲ２０、ＡＣＲ５０及びＡＣＲ７０）を達成した対象の集団を用いて臨床治験において投与群とプラセボ群の比較を行うことにより、本発明のヒト化抗ＩＬ−１７Ａ抗体の臨床薬効を評価できる。
（実施例１９）
エピトープ決定
本発明の抗体、例えばラット１６Ｃ１０の結合のために重要であるアミノ酸残基を以下のとおり決定した。
第１のセットの実験は、ラット抗体１６Ｃ１０はヒトＩＬ−１７Ａ（ｈＩＬ−１７Ａ）には結合できるがマウスＩＬ−１７Ａ（ｍＩＬ−１７Ａ）又は関連のサイトカインであるヒトＩＬ−１７Ｆには結合できないという観察結果に基づくものとした。これらの３蛋白の各々をＮ末端ＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドタグに連結させた（配列番号４２の残基１〜９参照）。１６Ｃ１０結合のために重要なアミノ酸残基を同定するために、ＦＬＡＧタグ付けされたｈＩＬ−１７Ａ、ｍＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆの種々のペプチドサブ配列を、該当する遺伝子の制限フラグメントを混合することにより組み合わせ、ハイブリッドポリペプチドを形成した。これらのハイブリッドポリペプチドの抗１６Ｃ１０への結合をＡｍｐｌｉｆｉｅｄ Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ｈｏｍｏｇｅｎｅｏｕｓ Ａｓｓａｙ（ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ，Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ，Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）において測定することによりｈＩＬ−１７Ａのどのセグメントが結合に重要であるかを調べた。ビオチン化抗体１６Ｃ１０をストレプトアビジンドナービーズに結合させ、そしてハイブリッドポリペプチドを抗ＦＬＡＧ（登録商標）抗体を有するアクセプタービーズに結合させた（Ｐａｃｋａｒｄ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅ）。ドナー及びアクセプターのビーズを混合し、６８０ｎｍで照明し、そして発光を５２０〜６２０ｎｍで測定した。アクセプタービーズはドナービーズの近接部に保持されており、そして励起されたドナービーズから一重項の酸素がアクセプタービーズに拡散した時に光を発射しているため、抗体１６Ｃ１０に結合したハイブリッドポリペプチドを含有する試料中の増強蛍光として結合を計測した。
結果はｈＩＬ−１７Ａのアミノ酸残基５０〜１３２、６３〜１３２、１〜８７、１〜１１２及び６３〜８７を含むハイブリッドポリペプチドに抗１６Ｃ１０が結合することを示しており、１６Ｃ１０の結合に重要な残基はｈＩＬ−１７Ａの残基６３〜８７に存在することを明らかにしている（ＰＳＶＩＷＥＡＫＣＲＨＬＧＣＩＮＡＤＧ ＮＶＤＹＨＭ）。この例における全ての残基のナンバリングはｈＩＬ−１７Ａの配列を参照にしている（配列番号４０）。例えばｈＩＬ−１７Ａの残基６３〜８７で置換されたｍＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆポリペプチドは抗体１６Ｃ１０に結合できたが、未損傷のｍＩＬ−１７Ａ及びＩＬ−１７Ｆはできなかった。
点突然変異も又、ｈＩＬ−１７Ａに導入することによりどのアミノ酸残基が抗体１６Ｃ１０結合に重要であるかを調べた。１つの実験においては、数種の残基（４５、４６、５１、５２、５４、５５、５６、５７、５８、６０、６１、６２、６７、６８、７０、７２、７３、７８、８０、８２、８４、８５、８６、８８、９３、９４、９５、１００、１０１、１０２、１０５、１０８、１１０、１１１、１１３、１１４）においてネイティブのアミノ酸の代わりにアラニンコドンが導入されているアラニンスキャニング突然変異誘発を実施した。ｈＩＬ−１７Ａの突然変異体をコードする遺伝子を有する哺乳類発現プラスミドをヒト胚性腎（ＨＥＫ）２９３細胞に一過性にトランスフェクトした。上澄みをＦＬＡＧ（登録商標）ペプチドタグ定量に関して、そして、抗１６Ｃ１０結合に関して、上記した通りＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎにより分析した。単アミノ酸置換の何れも抗体１６Ｃ１０の結合を有意に低減しなかった。ヒトＩＬ−１７Ｆ又はマウスＩＬ−１７Ａ残基が６３〜８７フラグメント内の種々の位置、即ちＬ７４Ｑ、Ｇ７５Ｒ、Ｖ８３Ｅ、Ｙ８５Ｈで置換されている、他の点突然変異を作製した。これらの個々の点突然変異の何れも抗体１６Ｃ１０結合を抑制しなかったが、４種の変化の全てを有するｈＩＬ−１７Ａは実質的に低下した結合を示し、ｈＩＬ−１７Ａの６３〜８７フラグメントにおける残基、そしてより特記すれば７４〜８５フラグメントにおける残基（ＬＧＣＩＮＡＤＧＮＶＤＹ）が１６Ｃ１０結合のために重要であることが確認された。
Figure 0005118699
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 上記した出版物又は文書の引用は上記の何れも該当する従来技術としての認容を意味するわけではなく、また、これらの出版物又は文書の内容又は日付に関して如何なる認容を構成するものでもない。本明細書において引用した全ての参考文献は、各々個々の出版物、特許出願、又は特許が、特定的及び個別に参照により本明細書に組み込まれる場合と同じ程度まで参照により本明細書に組み込まれる。

Claims (34)

  1. 配列番号１１〜１３のＣＤＲＬ１〜３配列を有する抗体軽鎖可変領域の少なくとも１つ又はその結合フラグメント、及び、
    （ｉ）配列番号１４、１７及び２０、または、（ｉｉ）配列番号１４、１６及び１９のＣＤＲＨ１〜３配列を有する抗体重鎖可変領域の少なくとも１つ又はその結合フラグメント、
    を含むヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物。
  2. 前記軽鎖可変領域が配列番号１１〜１３のＣＤＲＬ１〜３配列を含み、
    前記重鎖可変領域が配列番号１４、１７及び２０のＣＤＲＨ１〜３配列を含む、請求項１記載の結合化合物。
  3. 前記軽鎖可変領域が配列番号１１〜１３のＣＤＲＬ１〜３配列を含み、
    前記重鎖可変領域が配列番号１４、１６及び１９のＣＤＲＨ１〜３配列を含む、請求項１記載の結合化合物。
  4. 前記結合化合物が、
    配列番号５を含む軽鎖可変領域、及び、
    配列番号６を含む重鎖可変領域、
    を含む抗体である請求項１記載の結合化合物。
  5. 前記軽鎖が配列番号２のアミノ酸１〜２２０に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸よりなり、そして前記重鎖が配列番号４のアミノ酸１〜４５４に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸よりなる、請求項１記載の結合化合物。
  6. 前記軽鎖が配列番号２のアミノ酸１〜２２０よりなり、そして前記重鎖が配列番号４のアミノ酸１〜４５４よりなる、請求項５記載の結合化合物。
  7. 配列番号５に少なくとも９５％の同一性を有する軽鎖可変領域、及び配列番号６に少なくとも９５％の同一性を有する重鎖可変領域を含む、ヒトＩＬ−１７Ａに結合する結合化合物。
  8. 請求項１の結合化合物の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域の少なくとも１つをコードする単離された核酸。
  9. 前記軽鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号５であり、そして前記重鎖可変領域のアミノ酸配列が配列番号６である、請求項８記載の核酸。
  10. 配列番号１及び３の配列、又は配列番号６２及び６３の配列を含む請求項９記載の核酸。
  11. 請求項１０記載の核酸を含む発現ベクターであって、該核酸は、宿主細胞が該ベクターでトランスフェクトされた場合に該宿主細胞により認識される制御配列に作動可能に連結されている、発現ベクター。
  12. 前記発現ベクターがＡＴＣＣアクセッション番号ＰＴＡ−７６７５を有する請求項１１記載の発現ベクター。
  13. 請求項１２記載のベクターを含む宿主細胞。
  14. 核酸配列が発現される条件の下、培地中で請求項１３に記載の宿主細胞を培養することにより軽鎖及び重鎖可変領域を含むポリペプチドを生成すること、及び、
    該宿主細胞又は培地から該ポリペプチドを回収すること、
    を含むポリペプチドの製造方法。
  15. 抗体配列が請求項１２記載の発現ベクターによりコードされる抗ヒトＩＬ−１７抗体ｈｕ１６Ｃ１０。
  16. 交差ブロッキング試験においてヒトＩＬ−１７Ａへの請求項６に記載の結合化合物の結合を交差ブロッキングすることができる抗体。
  17. 請求項１５に記載の抗体１６Ｃ１０により結合されるエピトープと同じヒトＩＬ−１７Ａ上のエピトープに結合する抗体。
  18. 配列番号４０のヒトＩＬ−１７Ａ蛋白配列のアミノ酸残基７４〜８５を含むエピトープにおいてヒトＩＬ−１７Ａに結合する抗体。
  19. 前記結合化合物がヒト化抗体である請求項１記載の結合化合物。
  20. ヒトＩＬ−１７Ａに結合し、そしてヒトＩＬ−１７Ａの活性を中和する結合化合物の治療有効量を含む、ヒト対象を治療するための組成物であって、ここで該結合化合物は抗体軽鎖可変領域及び抗体重鎖可変領域を含み、ここで該軽鎖可変領域は配列番号５を含み、そして該重鎖可変領域は配列番号６を含む、組成物。
  21. 前記結合化合物がモノクローナル抗体である請求項２０記載の組成物。
  22. 前記ヒト対象が炎症性又は自己免疫性の障害を有する請求項２１記載の組成物。
  23. 前記ヒト対象が慢性関節リューマチを有する請求項２２記載の組成物。
  24. 前記ヒト対象が炎症性腸疾患を有する請求項２２記載の組成物。
  25. 別の免疫抑制剤又は抗炎症剤を更に含む請求項２０記載の組成物。
  26. ヒトＩＬ−１７Ａに結合しヒトＩＬ−１７Ａ活性を中和する結合化合物であって、ここで該結合化合物は抗体軽鎖可変領域及び抗体重鎖可変領域を含み、ここで該軽鎖可変領域は配列番号５を含み、そして該重鎖可変領域は配列番号６を含む、結合化合物、ならびに、
    製薬上許容しうる担体又は希釈剤、
    を含む組成物。
  27. 別の免疫抑制剤又は抗炎症剤を更に含む請求項２６記載の組成物。
  28. 重鎖定常領域を更に含み、ここで該重鎖定常領域はγ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む、請求項４記載の結合化合物。
  29. γ１ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む請求項２８記載の結合化合物。
  30. γ４ヒト重鎖定常領域又はその変異体を含む請求項２８記載の結合化合物。
  31. 軽鎖定常領域を更に含み、ここで該軽鎖定常領域はカッパヒト軽鎖定常領域を含む請求項４記載の結合化合物。
  32. 前記結合化合物がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、及びダイアボディーよりなる群から選択される抗体フラグメントである請求項４記載の結合化合物。
  33. 前記結合化合物がＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’−ＳＨ、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆ（ａｂ’）２、及びダイアボディーよりなる群から選択される抗体フラグメントである請求項５記載の結合化合物。
  34. ヒトＩＬ−１７Ａ活性を抑制する、請求項１又は７の何れかに記載の結合化合物。
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