JP5069125B2 - 新規なタンパク質配合物 - Google Patents
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Description
Gestrelius S、Lyngstadaas SP、Hammarstrom L.Emdogain−periodontal regeneration based on biomimicry.Clin Oral Invest、4:120〜125(2000) Hammarstrom他、1997、Journal of Clinical Periodontology、24、658〜668 Lyngstadaas他、2001、Journal of Clinical Periodontology、28、181〜188
エナメルマトリックスはエナメルの前駆体であり、任意の関連する天然源、すなわち、歯が発生中の哺乳動物から得られ得る。適切な由来源は、例えば子ウシ、ブタまたは子ヒツジなどの屠殺した動物からの発生中の歯である。別の由来源は、例えば魚の皮膚である。本発明の文脈では、用語「活性エナメル物質」とは、その由来源を区別せずにエナメルマトリックス、エナメルマトリックス誘導体および/またはエナメルマトリックスタンパク質を包含するために用いる。
フィブリンとは、いくつかの生物医学の適用が報告されている天然材料である。フィブリンは、Hubbell他の米国特許第6,331,422号に細胞内殖マトリックスの材料として記載されている。フィブリンゲルは、多くの組織に結合するその能力および創傷治癒における天然の役割が理由で、以前にシーラントして用いられている。一部の具体的な適用には、血管移植片の付着、心臓弁の付着、骨折および腱の修復での骨の配置におけるシーラントとしての使用が含まれる(Sierra,D.H.、Journal of Biomaterials Applications、7:309〜352(1993))。さらに、これらのゲルは、薬物送達デバイスとして、および神経の再生用に用いられている(Williams他、Journal of Comparative Neurobiology、264:284〜290(1987))。
身体内に施用する合成マトリックスを形成するための架橋結合反応には、(i)Hem他、J.Biomed.Mater.Res.、39:266〜276(1998)に記載のように、不飽和二重結合を含む2つまたはそれ以上の前駆体間のフリーラジカル重合、(ii)Rhee他の米国特許第5,874,500号に開示されているように、例えばアミン基を含む前駆体とスクシンイミジル基を含む前駆体との間の求核置換反応、(iii)縮合および付加反応、ならびに(iv)強力な求核剤とコンジュゲートした不飽和基または結合(強力な求電子剤など)とのマイケル型付加反応が含まれる。求核基としてチオールまたはアミン基を有する前駆体分子と求電子基としてアクリル基またはビニルスルホン基を含む前駆体分子との間の反応が特に好ましい。求核基として最も好ましいのはチオール基である。マイケル型付加反応はWO00/44808号(Hubbell他)に記載されている。マイケル型付加反応は、敏感な生体物質の存在下においても、生理的条件下で、自己選択的な様式で少なくとも第1および第2の前駆体成分のin situ架橋結合を可能にする。前駆体成分の1つが少なくとも2つの官能性を有し、残りの前駆体成分のうちの少なくとも1つが2つを超える官能性を有する場合は、この系は自己選択的に反応して架橋結合した三次元生体材料を形成する。
本発明の別の同等に好ましい実施形態は、特に、高分子マトリックスと共有もしくは非共有結合によって前記マトリックスに連結した活性エナメル物質とを含む、活性エナメル物質を投与するための低濃度薬剤配合物および/または治療配合物に関する。具体的には、前記活性エナメル物質は、タンパク質、ポリペプチドまたはその細断片であることができる前記活性エナメル物質中の少なくとも1つのシステイン残基と、マトリックスの成分のうち少なくとも1つのコンジュゲートした不飽和基との求核付加反応によって、前記マトリックスに連結することができ、前記少なくとも1つのシステイン残基は前記タンパク質、ポリペプチドまたはその細断片のC末端もしくはN末端のどちらかに位置する。この実施形態は、前記高分子マトリックスが、マトリックス内への細胞の成長、内殖および/または遊走を可能にするために十分なポリマー間間隔を有する高分子ネットワークを形成する場合に、特に好ましい。典型的には、この特定の実施形態では、架橋結合した高分子マトリックスはゲルを形成する。
一般に、本発明の薬剤配合物および/または治療配合物からの活性エナメル物質の徐放性により、必要な活性エナメル物質の総量が低下する。特に、この効果は、その放出が細胞工程によって制御される場合にさらに最適化される。活性エナメル物質の保存およびその生体利用度は、初期バースト放出によって顕著な量の活性エナメル物質の損失を特徴的にもたらす拡散徐放性デバイスの使用に勝る、細胞特異的タンパク質分解活性を開拓することの明確な利点である。マトリックスに共有結合した活性エナメル物質を用いた骨欠損の強力な治癒の1つの潜在的な説明では、活性エナメル物質を局所的に長時間かけて投与するが(すなわち、単一のパルス用量だけではない)、これを連続的な様式で行うことが重要であると考えられている。これは、マトリックスの酵素切断または加水分解切断のどちらかによるゆっくりとした分解によって達成される。このようにして、その後に分子が持続的な一定期間をかけて起こる偽パルス効果によって送達される。例えば、前駆細胞がマトリックスを浸潤する際、これは活性エナメル物質分子に遭遇し、そこで前骨芽細胞へと分化することができる。しかし、特定のその細胞が結合した活性エナメル物質をマトリックスから解放し続けない場合、これは有効に骨芽細胞へと変換されて骨マトリックスを産生し始める。最後に、活性エナメル物質の治療効果は欠損領域に局在化しており、したがって次いで増幅される。
酵素分解はさらに、ヘパリナーゼ、ヘパリチナーゼ、およびコンドロイチナーゼABCなどの酵素の多糖基質で起こることができる。これらの酵素のそれぞれが多糖基質を有する。ヘパリン結合系のすべてにヘパリンが存在するおかげで、ヘパリナーゼの基質はこれらの系に既に組み込まれている。
本発明による高分子マトリックスは、ヘパリンおよび/またはヘパリンに結合するタンパク質に直接もしくは間接的に結合するヘパリン結合断片を含めることによって、さらに改変することができる。後者の場合、タンパク質がヘパリンに結合することができ、その後、これがヘパリン結合部位を含む活性エナメル物質への結合に利用可能となるか、または、活性エナメル物質自体が、特定のヘパリン結合活性エナメル物質によって結合されているヘパリン部分を含むことができる。これらは、以下にさらに詳細に記載するように標準の技術を用いて、マトリックス材料に付着させることができる。
細胞は、細胞表面におけるタンパク質−タンパク質、タンパク質−オリゴ糖およびタンパク質−多糖の相互作用を介してその環境と相互作用する。細胞外マトリックスタンパク質は、細胞に大量の生物活性シグナルを提供する。この密なネットワークが細胞の支援に必要であり、マトリックス中の多くのタンパク質が細胞の接着、拡大、遊走および分化を調節することが示されている(Carey、Annual Review of Physiology、53:161〜177、1991)。とりわけ活性があることが示されている特異的タンパク質の一部には、ラミニン、ビトロネクチン、フィブロネクチン、フィブリン、フィブリノーゲンおよびコラーゲンが含まれる(Lander、Journal of Trends in Neurological Science、12:189〜195、1989)。ラミニンの研究が数多く実施されており、ラミニンが、in vivoでの神経およびin vitroでの神経細胞の発生および再生(Williams、Neurochemical Research、12:851〜869、1987)、ならびに血管形成にも重要な役割を果たすことが示されている。
本発明は、放出可能に取り込ませたかつ/もしくは内部に封入した活性エナメル物質を有する天然および/または合成マトリックスを用いて、硬組織ならびに軟組織の修復、再生または再構築、特に骨および歯の成長を行うための、活性エナメル物質の低濃度配合物を提供する。マトリックスは生体適合性かつ/または生分解性であり、移植時にin vitroまたはin vivoで形成されることができる。活性エナメル物質をマトリックス内に取り込ませるかつ/または封入することができ、これはその完全な生物活性を保持している。さらに、概要を上述した通り、どのようにして、いつ、およびどの程度の活性エナメル物質が放出されるかの制御をもたらす技術を用いて、活性エナメル物質を放出可能に取り込ませることができ、これにより、マトリックスを徐放性ビヒクルとして用いてマトリックスを直接または間接的な組織修復に用いることができる。
高分子マトリックスと活性エナメル物質とを含む本発明の薬剤配合物および/または治療配合物は持続放出配合物として用いることができる。タンパク質/ポリペプチドの生物学的半減期は多くの場合短く、したがって、身体に投与した場合はそれらの生物活性が迅速に失われる。また、一般的な配合物では、本明細書中に記載の持続放出配合物とは対照的に、投与後に最初に放出される大量の物質が原因で最初に物質の活性のバーストがあり、その後、生物活性は経時的に低下する。対照的に、本発明の薬剤配合物および/または治療配合物を用いることによって、放出時間および濃度放出のどちらに関しても活性エナメル物質の放出を制御することができる。また、本発明の薬剤配合物および/または治療配合物を用いることによって、活性エナメル物質の放出は局在化された放出であり、放出は所望の身体部位で制御された様式で起こる。本発明の配合物はまた、均一な量の活性エナメル物質が持続した期間、望ましい場合は数日間および数週間にさえわたって放出されることも可能にする。したがって、創傷治癒方法が改善される。
一実施形態では、薬剤配合物および/または治療配合物を、身体内のin situもしくは身体上でゲル化させる。別の実施形態では、薬剤配合物および/または治療配合物を身体外で事前に形成し、その後、事前に形成した形状で施用することができる。
本明細書中で一般的に用いる「生体材料」とは、生物学系と作用を及ぼしあって、身体の任意の組織、器官もしくは機能の評価、処置、増強、または置換を、材料に応じて持続的あるいは一時的に行うことを意図する材料をいう。用語「生体材料」および「マトリックス」は本明細書中では同義で用いられ、マトリックスの性質に応じて、水で膨潤させることができるが水に溶解しない、すなわち、特定の一定期間の間身体内に留まって外傷または欠損した軟組織および/もしくは硬組織の特定の支援機能を満たすヒドロゲルを形成することができる、架橋結合した高分子ネットワークを意味する。
本明細書中で一般的に用いる「天然に存在する前駆体成分またはポリマー」とは、天然に見つけることができる分子をいう。
本明細書中で一般的に用いる「分岐点の官能性」とは、分子中の1点から伸びるアームの数をいう。
実験セクション
サルにおける歯支持組織の再生
本研究の目的は、ビヒクルのアルギン酸プロピレングリコールと混合した様々な濃度のエナメルマトリックス誘導体の、歯支持組織の再生に対する効果を評価すること、およびその生物学的安全性を評価することであった。本発明で用いたエナメルマトリックス誘導体は、標準のエナメルマトリックス調節物の低分子量タンパク質画分からなっていた。
試験物質:エナメルマトリックス誘導体、バッチPEU801。
由来源;エナメルマトリックスをブタの歯胚から単離し、ホモジナイズし、低分子量タンパク質画分を抽出した。
ビヒクル;アルギン酸プロピレングリコール溶液2.5%w/v、バッチPGA803。
試験物質およびビヒクルの保管;試験物質およびビヒクルは−18℃で保管した。物質およびビヒクルを含む瓶は、使用前に室温と平衡化させた。
温度:18〜22℃
相対湿度:40〜70%
光:午前6時〜午後6時
動物には標準のサル用食餌(R3、Ewos AB、スウェーデンSodertaelje)および水道水を無制限に与えた。食餌には毎日新鮮な果実を補足した。
2.ペントバルビタールナトリウムを用いて動物に麻酔を行い、手術用に選択した領域に局所麻酔を行って消毒した。歯の口および顔側の全層皮弁(粘膜骨膜弁)を持ち上げた。
3.大きな円形バー(burr)を用いて、滅菌生理食塩水で常に洗浄しながら頬側骨板を取り除いた。この領域を滅菌生理食塩水で十分にすすぎ、暴露した歯根を30秒間、37%のオルトリン酸またはクエン酸(pH1)でエッチングした。最後に滅菌生理食塩水ですすいだ。過剰の液体はスワブで拭き取った。
4.試験製剤をすぐに施用し、骨欠損の最も先端部分から開始して暴露した根表面全体を被覆した。
5.皮弁を再配置し、縫合した。歯周部の包帯剤は用いなかった。
6.対照および実験歯の周辺の局所的な臨床的所見ならびにサルの一般的な挙動を毎日記録した。
1.NS 有意ではない
2.* p<0.05
3.** p<0.01
4.*** p<0.001
関連参考文献:BIORA Scientific Report 9/88。
臨床観察:すべての動物は試験期間の間中健康を保っており、注目すべき有害な副作用はなかった。試験歯および対照歯のどちらの治癒も平穏であった。
一般的な挙動:すべての動物が通常通りの挙動であり、個々の動物間で明らかな差異はなかった。
食物消費:食物および水の消費は通常通りに見受けられ、個々の動物間で明らかな差異はなかった。
巨視的検査:全体の外見から、すべての試験歯の周辺の歯肉が健康であったことが明らかとなり、明らかな歯肉炎症はなかった。注目すべき有害な副作用もなかった。すべての対照歯の頬側歯肉が、歯肉縁部がもたれかかった中等度の炎症を示した。
顕微鏡検査;顕微鏡検査および形態計測検査により、試験歯および対照歯の群の間で有意な差異が明らかとなった(表4および5)。
装着した根表面にしっかりと付着した新しいセメント質は、試験歯中で様々な度合まで形成されていた。偏光顕微鏡観察に明らかになったように、セメント質層は、歯周部膜に関連する機能的に方向づけられた歯周部線維を含んでいた。さらに、歯周部膜に付着した歯槽骨は、暴露された実験根表面上に様々な度合で存在していた(表4および5)。接合部上皮は新しく形成されたセメント質層よりも遠くまで増殖しておらず、歯肉炎症は事実上存在していなかった。
対照歯では、新しい歯槽骨も任意の有意な新しいセメント質も、どちらも形成されていなかった。最初に暴露した根表面は、根の約半分まで退縮した長い接合部上皮によって被覆されていた。中等度の歯肉炎症が頬側口腔粘膜中に存在していた。
統計的解析;試験歯および対照歯の群の間の差異は、様々なレベルで有意であることが判明した(表4および5)。
本研究の目的は、ビヒクルのアルギン酸プロピレングリコールと混合した様々な濃度のエナメルマトリックス誘導体の、歯支持組織の再生に対する効果を評価すること、およびその生物学的安全性を評価することであった。本研究で用いたモデルは、エナメルマトリックス誘導体の臨床的使用を意図した臨床設定とほぼ同一である。試験製剤を、手術の補助剤として、従来の歯周部手術中に投与した。投与した用量は、体重に基づいて、ヒトでの使用を意図する用量である同等の大きさの単一の施用中にタンパク質7.5mgより、低いものも高いものもあった。擬似手術が対照として用いられた。
対照群と実験群との統計的比較
試験群
試験部位の数:20
対照部位の数:8
周辺骨の平均増加:0.0%
セメント質の平均増加:1.1%
非パラメトリック統計的方法、マン−ホイットニーU試験を用いて、試験および対照部位間の差異の有意性を評価した。セメント質および周辺骨の両方の回復に関して、試験群と対照群とを比較した場合の有意性のレベルは以下であることが判明した。
ラットの危険な大きさの頭蓋欠損
ラット頭蓋手術
この動物実験プロトコルは、スイス連邦法に従って(Nr.152/1997号)、チューリッヒ州の獣医学当局によって評価および許可されている。Sprague−Dawleyシロネズミを用いた(84〜92日齢、すべて雌)。これらは、4匹以下の動物の群で収容し、標準の食餌を維持した。
すべての工程において、手術者は欠損の治療に関して盲検であった。
EMDを0.10%の酢酸に溶かし、最終ゲルの所望するEMD含有量に応じて様々な濃度のストック溶液を得た。システイン−RGD、PEG−ジチオール3.4k、および4本のアームのPEG−アクリレート15kを、0.30Mのトリエタノールアミン/HCl緩衝液、pH8.5に溶かした。すべての溶液を混合して、等モル数のアクリル基およびチオール基、システイン−RGD8μgおよび0〜250μgのEMDを有する約15質量%のPEGを含む20μlの溶液を得ることによって、PEG−EMDゲルを注型した。溶液を1時間37℃でゲル化させ、その後、ゲルをPBS、pH7.4に移した。数時間後、これらは100μlの体積および8mmの直径まで膨潤していた。
屠殺および周囲5mmの連続的な骨を有する欠損部位の除去後に得られた標本を、歯科用X線撮影ユニットを用いて、超高速歯科用フィルムで画像撮影した(Eastman Kodak Company、米国NY)。その後、X線像のスキャニングを行い、デジタル画像を画像解析プログラムで処理した(Leica(登録商標)Q−Win)。欠損の内部および外部に形成された新しい骨の面積を、異なる配合物の治癒速度と比較した最初の欠損面積の割合として計算した(図2参照)。
ブタにおける歯支持組織の再生
目的:
擬似対照歯と比較して、顎における治癒および再生方法に対するエナメルマトリックス誘導体および/または移植材料、PEGゲルを用いた治療の局所効果を臨床的、定量的ならびに組織学的に比較するために、裂開モデルを用いることである。
動物:
ミニブタSus scrofaの成体(>18カ月)、雌。手術前に動物を環境馴化させ、地域の動物施設内で観察した。
1.動物を麻酔下で維持する(筋肉内のKetalar+静脈内のPentotalおよびDormicum)。キシロカイン−アドレナリンを用いた局所麻酔(歯科用)。
2.動物を検査した。
3.必要な場合、ブタの口の周りを剪毛し、その後、皮膚をクロルヘキシジン(登録商標)で洗浄した(60%のEtOH中5mg/ml)。手術領域を写真撮影した。
4.Q1から開始する:浸潤麻酔を頬粘膜ひだに施用した。歯間乳頭および周辺歯肉領域への注入は避けるべきである。
5.炎症の度合を評価し、歯垢および歯石を除去した。
6.第1小臼歯から第1臼歯まで、末端を垂直な解放切開として周辺切開を行った。歯槽骨を暴露するために粘膜骨膜弁を持ち上げた。
7.バーおよび手動装置を用いて、それぞれの歯根から頬側骨を注意深く取り除き、深さ約6mmおよび幅2mmの裂開欠損を作製した。滅菌生理食塩水で常に洗浄しながら、第2小臼歯から第4小臼歯まで、CEJから6mmの距離まで、暴露した根表面から歯根膜およびセメント質を除去した。欠損の先端部(AED)を、切痕で印つけた。それぞれの四半部について合計で6つの欠損を作製した(すなわちそれぞれの顎/動物で12個)。
8.靱帯およびセメント質を取り除いたあと、歯の表面をPrefGel(登録商標)(BIORA、スウェーデン)で2分間処理し、その後、十分な量の滅菌生理食塩水で洗浄した。
9.CEJからAEDの距離を測定し、記録し、そして写真撮影によって文書化した。
10.試験材料(治療リスト参照、擬似=無し)を欠損に施用し、写真撮影によって文書化した。
11.皮弁をすぐに再配置し、vicryl縫合糸で閉じた。皮弁は骨欠損を完全に被覆し、皮弁は徹底的に再配置および修復されており、これを再度写真撮影によって文書化した。
12.第4〜14項に従って、手順をQ2用に繰り返した。
動物には手術後1週間、軟い食餌を与えた。抗生物質(ストレプトシリン(Streptocillin)、5ミリ単位/日)を手術から2日間投与した。鎮痛剤(ボルタレン、手術後に25mg)。
4、6および8週間目に、動物を鎮静させ、実験的欠損の治癒を検査した。標準のポケットプローブ(ヒトの臨床)を用いて欠損の深さの調査を行い、それぞれの欠損について「ポケットプローブでの深度」をミリメートルで、歯肉退縮の程度(存在する場合)と一緒に記録した。治癒を写真撮影によって文書化した。すべての有害事象を記録した。
実験を終わらせ、8週間の観察ののちに動物を屠殺した:
1.290g/1000mlの強アルコール中の40mlのペントバルビタールナトリウム100mg/mlを、食間に、試験スキームに従って手術後8週間、動物に与えた。
2.完全な根を有する実験歯のみが含まれる区域をそれぞれの実験顎から切り出した。
3.分離された区域は、すぐに大量の(200ml)新しく製造した、冷蔵した(4℃)リン酸緩衝ホルマリン、pH7.4に浸した。容器には、動物番号、四半部番号、手術者および日付を注意して標識しなければならない。良好な固定を保証するために、ホルマリンを4時間に1回交換した。
4.試料は、可能な限り速くエポキシ中への包埋および粉砕による切片形成のために処理する。処理が可能となるまでは、ホルマリンで固定した試料は冷蔵庫で保管した。
すべての材料は無菌的条件下で取り扱った。
4本アームのPEG−チオール2k(Nektar)1.20gを滅菌した0.05%酢酸水溶液20mlに溶かした。この溶液を濾過によって滅菌した。滅菌EMD0.520gを滅菌した0.05%酢酸水溶液10mlに溶かした。両方の溶液を合わせ、滅菌したガラス製シリンジをそれぞれPEG−チオール/EMD溶液300μlで満たした。(シリンジ1個あたり4本アームのPEG−チオール2k12mgおよびEMD5.2mg)
トリエタノールアミン1.865g(Merck、PhEur)をWFI250mlに溶かし(0.050M)、HClを用いて溶液のpHをpH8.6に調節した。
4本アームのPEG−アクリレート15k(Nektar)3.6gをWFI35mlに溶かした。クリーンルーム内で、この溶液の0.70mlのアリコートをバイアルに満たし、凍結乾燥した。凍結乾燥後、バイアルに窒素を満たして閉じた。(バイアル1個あたり4本アームのPEG−アクリレート15k72mg)
施用の直前に、凍結乾燥したPEG−アクリレートをPEG−チオール/EMD溶液で再構成し、生じた溶液をガラス製シリンジに移して戻し、その後、これを活性化剤のシリンジと連結した。プランジャーを約15回往復移動させることによって両シリンジの内容物を混合した。混合後、生成物を約2分間、完全にゲル化する前に施用することができる。
PrefGel ロット1008
Emdogain 30mg/ml ロットETP3102
PGA ロットFoU 2113、1.5mlのバイアル中
EMD9.5mg/バイアル ロット9102
骨セラミック ロットLK 040109
表7から明らかに見られるように、GLP41/47中の4.9mg/mlの濃度の活性エナメル物質誘導体(EMD)は、実験的欠損の治癒に対して、30mg/mlのEmdogainと同等の、またはさらにはより明白な効果を有していた。結果を図3に要約した。また、図3で推論できるように、空、EmdogainおよびKeltoneまたはCelcoゲルのどちらか中の4.9mg/mlの濃度のEMDを比較すると、4週間後に、EmdogainはKeltoneまたはCelcoのゲルのどちらか中の4.9mg/mlの濃度のEMDよりも幾分か良好な性能を示したが、6週間後にはこれらは概ね同等の性能を示し、8週間後には、KeltoneまたはCelcoゲルのどちらか中の4.9mg/mlの濃度のEMDの方がより良好な性能を示した。これは、in vitroでのこの種のゲルについて判明した(37℃、pH7.4)、4週間の分解時間に非常によく対応していた。PEGゲルが存在している限りは、それが一定の度合まで、骨の欠損の充填を妨害することが予測された。
ウサギ頭蓋円柱状ドリル欠損
この実験の結果は、誘導骨再生に対する新しい生物活性骨の代用品の効果に関する情報を提供するものである。
活性エナメル物質と最適化された細胞内殖能力を有する新しく発生したマトリックスとを結合させることの効果は、標準の移植手順(正の対照)および自発性治癒(負の対照)と比較して骨組織の再生が増強したことである。
動物
24匹の体重3〜4kのニュージーランドホワイトウサギの成体を本研究で用いた。動物は目的に合うように設計した実験動物用の部屋に保ち、標準の実験用の食餌を与えた。
直線状の切開を24匹のニュージーランドホワイトウサギの前頭部(頭蓋冠)に施し、2つの皮膚弁を持ち上げ、外側に折り返した。同様に、骨膜を切断して折り返し、頭蓋骨の最上部を暴露した。右および左の頭頂骨ならびに前頭骨の領域に、1mmのドリルの深さしか許容しないスリーブを備えたトレフィンドリルを用いて、円形の溝を製造した。この円形内の外部皮質板が絶対に除去されないように注意を払った。チャンバ中の骨髄により良好に接近できるように、5つの小さな円形ドリル欠損を最上部皮質板の円形内に作製した。次いで、一次安定性のために、深さ1mmの糸模様の切痕を有するチタンからなる円柱状の管を溝のそれぞれに配置した。4本の管が、その内部に機械加工の表面を示した。管の測定値は、高さ6mmおよび外径6mmであった。
基本的に、2つの異なるマトリックスをこの治験で用いた。ヒトフィブリノーゲンに由来するフィブリンマトリックスおよび合成系のPEGゲルは、どちらも高い細胞内殖能力を有するように特異的に改変した。ゲルは、特異的活性エナメル物質を含んでおり、活性エナメル物質がその送達マトリックスと相互作用(共有結合)して、移植後に特異的な放出プロフィールを達成した。あるいは、ゲルを合成リン酸カルシウム顆粒と混合した。用いた顆粒は、ヒトの手術において、移植手順でパテ様の再構築材料を達成するために幅広く使用されている多孔性のリン酸三カルシウム/ヒドロキシアパタイトの混合物からなっていた(比40:60)。
PEG+100μg/mlのEMDおよびPEG+500μg/mlのEMDデータおよびPEG/RGD+500μg/mlのEMD
脱石灰化しない粉砕した切片の標準の手順に従って標本を加工した。標準の組織形態計測技術を適用して管内および管壁に沿った骨密度を定量的に評価した。
ボンフェローニ調整ずみ一元配置分散分析試験を用いて、試験および対照の差異、ならびに試験または対照に関する経時的差異を検出した。すべての統計的検定における有意性レベルはα=0.05を選択した。
図4および5は、PEG/RGD+500μg/mlのEMDが骨の再成長に対して最良の効果を有することを明確に実証している。したがって、活性エナメル物質と最適化された細胞内殖能力を有する新しく発生したマトリックスとを結合させることにより、骨組織の再生が増強される。
ミニブタの歯周部裂開モデル
1.導入および理論的根拠
本調査では、2つの新規担体(アルギン酸またはカルボキシメチルセルロースを有するPEG)を用いて製造したエナメルマトリックス誘導体(EMD)を試験した。ミニブタ裂開モデルは、歯周部組織の治癒および再生方法に関してエナメルマトリックス誘導体(EMD)を用いた治療の局所効果の臨床的、定量的ならびに組織学的な比較において、歴史上の記述である。
追及すべき主な目的は、Emdogain(登録商標)および2つの新規担体(アルギン酸またはカルボキシメチルセルロースを有するPEG)を用いて製造したエナメルマトリックス誘導体(EMD)の、歯周部再生の比較評価からなっていた。
4.1.一次変数
・一次変数は、歯周部のポケットプローブでの深度の減少の臨床評価からなっていた。
・骨欠損の深さの減少、セメントの高さ、歯根膜の存在、骨面積の評価に基づいた記述的組織学および組織形態計測が、二次変数の第1の群を形成していた。
5.1.動物
ミニブタSus scrofaの成体(>18カ月)、雌。手術前に動物を環境馴化させ、地域の動物施設内で観察した。
5.2.1.手術
動物を全身麻酔下で維持した(筋肉内のKetalar+静脈内のDormicum)。さらに、キシロカイン−アドレナリンを用いた局所麻酔を局所的に行った。
−動物の検査および記録用紙の1ページ目に記録した。
−ブタの口の周りを剪毛し、その後、皮膚をクロルヘキシジン(登録商標)で洗浄した(60%のEtOH中5mg/ml)。
−Q1から開始:頬粘膜ひだの浸潤麻酔は、歯間乳頭および周辺歯肉領域への注入を回避することによって行った。
炎症の度合を評価し、歯垢および歯石を除去した。
−第1小臼歯から第1臼歯まで、末端を垂直な解放切開として周辺切開を行ったあと、上顎の歯槽骨を暴露するために粘膜骨膜弁を持ち上げた。
−バーおよび手動装置の助けによって、滅菌生理食塩水で常に洗浄しながら、頬側骨板ならびに歯根膜およびセメント質の「窓」を、第2小臼歯から第4小臼歯まで取り除いた。それぞれの歯の根の主軸中に、CEJから5〜6mmの距離まで垂直方向の欠損を作製した。欠損の先端部(AED)を、切痕で印つけた。
欠損の平均最終寸法は、高さ=6mm、幅=2mm、深さ=3mmであった。
−靱帯およびセメント質を取り除いたあと、歯の表面をPrefGelで2分間処理し、その後、十分な量の滅菌生理食塩水で洗浄した。
−CEJからAEDの距離を測定して記録した。
−試験材料(擬似=無し)を欠損内に施用した。
−皮弁を再配置したあと、手術部位をvicryl縫合糸で閉じた。皮弁が骨欠損を完全に被覆し、それが徹底的に再配置および修復されていることを確実にするために特に注意を払った。
−同じ手順を第2の四半部について繰り返した。
図6は典型的な手術創傷を示す。
動物には手術後1週間、軟食を与えた。抗生物質(ストレプトシリン、5ミリ単位/日)を手術から2日間投与し、鎮痛剤(ボルタレン、25mg)を手術後に投与した。
5.3.試験および対照の群
合計10匹の動物をこの研究に含めたが、1匹は試験材料の1つの移植とは関連しない理由により死亡した。
それぞれの上顎骨歯に2つの欠損を製造し、それぞれの動物で6本の歯を用いたので、それぞれの動物における欠損の合計数は12であった。
5.3.1.試験群
PEG−Ec=PEG(CMCを有する)+EMD(4.9mg/mlの濃度):4匹の動物
PEG−Ek=PEG(Algを有する)+EMD(4.9mg/mlの濃度):3匹の動物
5.3.2.正の対照群
Emdogain(登録商標)(市販、EMDの濃度は30mg/ml):1匹の動物5.3.3.負の対照群
Straumann−Biora(Malmo)で入手可能な以前のデータによると、臨床的状態を評価し、4、6および8週間後に歯周部の測定を行うことは予測されていた。さらに、組織学的な評価(定性的および定量的)を8週間の治癒期間後に実施した。
5.5.終止
290g/1000mlの強アルコール中の40mlのペントバルビタールナトリウム
100mg/mlの注入を、食間に、試験スキームに従って手術後8週間、動物に与えた。
完全な根を有する実験歯のみが含まれる区域を、実験のそれぞれの上顎から切り出した。
5.6.分析方法
5.6.1.歯周部のプロービング
プローブを用いて行った歯周部のプロービングは、手術の日ならびに4、6および8週間後にポケットの深度を評価することを意図していた。これらの測定は、「盲験方法」の標準的な規則に従って行った。検査官は、検査中の動物がどの群に属していたかを知らなかった。
5.6.2.組織学
分離された区域は、すぐに大量の(200ml)新しく製造した、冷蔵した(4℃)リン酸緩衝ホルマリン、pH7.4に浸した。良好な固定を保証するために、ホルマリンを4時間に1回交換した。
試料をエポキシ中への包埋および粉砕による切片形成(約25μmの厚さ)用に加工した。
試料は、標準的な非脱石灰化製造方法、次いでメチルメタクリレートへの包埋、切片形成(Polycut−S、Reichert−Jung、Leica Microsystems Switzerland)およびトルイジンブルーを用いた染色によって加工した。
組織学切片は、移植した部位内の歯根膜の存在を定義することを意図した定性的および半定量的分析に用いた。
5.6.3.マイクロラジオグラフィー
骨の高さおよび面積を評価するために最終粉砕を試みて(厚さ50μm)光学顕微鏡観察下で定量的に分析する前に、X線発生器を用いて組織学的切片のミクロX線撮影を行った。
6.1.臨床的歯周部プロービングおよび退縮の測定
ポケットの深度の測定に関連する結果のみをここに要約する。
6.1.1.臨床的な歯周部プロービング
これらの臨床的測定により、それぞれの治療がそれ自体で、ポケットの深度の減少に関して有益であることが実証された。これは、それぞれの群内で、手術日から第8週目まで、第6週および第4週にわたって、進行性のポケットの深度の減少を存在する。それぞれの群内で、これらの異なる時点間において、差異は統計的に有意である。唯一の例外は、Emdogain群の第4週から第8週の定常期の存在である。
一部の例では、差異は、1つの群と別の群との対応する時点を比較する場合にも統計的に有意である。
定性的には、Emdogain(登録商標)群は、よく器質化された歯根膜によって新しいセメントから分離された成熟骨および層状骨の再生を示した。
一般に、PEG−EkおよびPEG−Ecの群により、手術中2PEGマトリックスが位置づけられていた位置を保持していると考えられた成熟していない、かつ密な血管新生化した新しい骨の存在が実証された(図7および8参照)。
PEG−Ec(CMC)の場合、歯根膜の存在が、Emdogain(登録商標)群中に見つかるものと同等であることが観察された(図9および10参照)。
骨の高さ
すべての群が、少なくとも2mmの有意な骨の増加を経験した。Emdogain(登録商標)が最も高い性能に達し(約4mm)、統計的有意性は2つのEmdogainGeneration2群に匹敵する(p<0.005)。
擬似群は、性能がEmdogain(登録商標)よりも低かったが、PEG−EcまたはPEG−Ek群よりも高かった。図11も参照されたい。
骨の面積
4つの群において、その4つの条件に統計的な差異なしに相当量の骨が再生された(約3mm2)。
骨の高さに関して、Emdogain(登録商標)の性能は既存かつ既に公開された文献の結果の通りであった。偽群はsEmdogainGeneration2よりも良好な結果を示した。
PEG−Ecは、Emdogain(登録商標)と同等であるが、約2mmと概算を推定することしかできない長さの歯根膜の存在を示した。
再生された骨構造の形態学は、PEG−EcまたはPEG−Ekの2つで異なっていたが(例えば図12参照)、PEG−EcおよびPEG−Ekの使用により、Emdogain(登録商標)によって再生された量と同様の骨量の形成がもたらされたと考えられた。この新しく形成された骨の再生は、EMDを添加した2つのPEGマトリックス内で実際起こったという仮説が立てられている。その場合、移植日のこれらのマトリックスの体積および位置が対応する骨再生の体積ならびに高さに作用することができる。
歯周部再生用の新規活性エナメル誘導体配合物(PEG−EMD)の評価。犬におけるクラス3歯根分岐部欠損の実験的研究。
1.技術水準および理論的根拠
本研究は、以下のことが報告されているパイロット研究に続くことを意図する(「Emdogain(登録商標)Generation2の評価:ミニブタの歯周部裂開モデルのパイロット研究」)。
「再生された骨構造の形態学は、Emdogain(登録商標)Generation2およびEmdogain(登録商標)の2種類で異なっていたが、PEG−EcおよびPEG−Ek(どちらもPEG−EMDと呼ばれる)の使用により、Emdogain(登録商標)によって再生された量と同様の骨量の形成がもたらされたと考えられた。
この新しく形成された骨の再生は、EMDを添加した2つのPEGマトリックス内で実際起こったという仮説が立てられている。その場合、移植日のこれらのマトリックスの体積および位置が対応する骨再生の体積および高さに作用することができる」。
PEG−EMDは、歯根分岐部(クラス3Hamp)欠損の治療において施用した場合に、Emdogain(登録商標)の使用によって得られた歯周部再生に劣らない歯周部再生(骨、靱帯)を誘導する。
3.1.主要目的
本研究の主な目的は、犬モデルにおいて、クラス3歯根分岐部欠損の治療に用いた場合、PEG−EMDがEmdogain(登録商標)よりも定量的により高い骨再生を誘導することを実証することであろう。
3.2.補助目的
第2の目的としては、PEG−EMDを施用したあとの歯根膜の再生は、上述のモデルにおいてEmdogain(登録商標)を用いることによって得られたものに劣らないことを示すことであろう。
4.1.一次変数
ベースラインと終点との間に、および比較的試験対照(PEG−EMD)群と正の対照(Emdogain(登録商標))群との間に積み上げられた、新しい骨の高さの差異。4.2.二次変数
歯根分岐部の周辺の少なくとも1つの根上の表面を裏打ちする歯根膜の存在。
4.3.三次変数
一緒にすると骨、歯根膜、セメント質および軟組織の構造の完全な説明を与える定性的データ。
5.1.動物モデル
ハウンドドッグ、年齢約16カ月、体重約25kg
P1ならびにM1、P2およびP3の抜歯はそのままである。
3カ月後:P2およびP3に高さ5mmの歯根分岐部欠損を作製(Koo他、2004)。(典型的な手術の設定には図13を参照されたい。図では、それぞれの矢印は5mmに対応している。)
5.2.動物の管理
動物の小屋、外科的処置および経過観察は、以下の実験手術施設でのGLP規則に従って実施する:
BiomatechNAMSA、Chasse sur Rhone(Lyon)、フランス。
文献では、ベースラインにおけるクラス3歯根分岐内の欠損の平均の高さは4.7mm(+/−0.2)であることを報告している。4週間後の自発性治癒が、1.8mm(+/−0.3)の骨の高さの増加をもたらすことが予測される。(Koo他、2004)→負
の対照群:ブランクおよびPEG
同様の結果が対照群(Emdogain(登録商標))から、4週間後に予想される。2カ月後および4カ月後、増加は限定されたままであるはずであった、約1.5mm(+/−0.5)
試験群(PEG−EMD)は、4週間後に2.0mm(+/−0.5)、2カ月後に2.5mm(+/−0.5)および4カ月後に3.0mm(+/−1.0)の骨増加を示すはずである。
7.1.材料
7.1.1.試験材料
PEG−EMD:
72mgの凍結乾燥した4本アームのPEG−アクリレート15kを含むバイアル
12mgの4本アームのPEG−チオール2kの300μl溶液および0.05wt%の酢酸水溶液中の5.2mgのEMDを含むシリンジ。
680±10mgの0.05Mの水性トリエタノールアミン/HClを含むシリンジ、
Cekol 10'000を3.6質量%含むpH8.5±0.1
PEG中のEMDの最終濃度:4.9mg/ml
7.1.2.正の対照
Emdogain(登録商標)
PGA中のEMDの濃度:30mg/ml
7.1.3.負の対照
空
PEG
7.1.4.補助材料
補助材料なし
7.2.方法
7.2.1.研究設計およびスケジュール
t0:
P1およびM1の抜歯
t3カ月:歯槽隆起の粉砕、P2およびP3でクラス3歯根分岐部欠損の作製
t4カ月:1カ月の観察時間後に屠殺
t5カ月:2カ月の観察時間後に屠殺
t7カ月:4カ月の観察時間後に屠殺
7.2.2.手術前段階
歯の抜歯、
治癒時間:3カ月
7.2.3.手術段階
動物1匹あたりそれぞれの下顎側面に2つのクラス3歯根分岐部欠損の作製。
歯根分岐部欠損を試験または対照材料で充填。
縫合は重要である
7.2.4.手術後段階
14日間の治癒後に縫合糸を除去。
手術の6週間後に、手術後のプラー久コントロールを行う。
7.2.5.観察および分析
ミクロで計算した断層撮影、組織学および組織形態計測
8.終点および最終手順
動物を手術の1、2および4カ月後に屠殺する。
1. Altschul, S.F. et al (1990)
2. Aoki, et al., Thrombosis and Haemostasis, 39:22-31, 1978
3. Aoki, N., Progress in Cardiovascular Disease, 21:267-286, 1979
4. Besson et al., (1996) Anal. Biochem. 237:216-223
5. Carey, Annual Review of Physiology, 53:161-177, 1991
6. Coombs et al., (1998) J. Biol. Chem. 273-4323-4328
7. Devereux, J et al (1994)
8. Edelman et al. (Biomaterials 1991 September; 12(7):619-26)
9. EP-B-0 263 086
10. EP-B-0 337 967
11. EP-1059934
12. EP-01201915.4
13. Francis, et al., Blood Cells, 19:291-307, 1993
14. Gestrelius S, Lyngstadaas SP, Hammarstrom L. Emdogain - periodontal regeneration based on biomimicry. Clin Oral Invest 4:120-125 (2000).
15. Graf, et al., Cell, 48:989-996, 1987;
16. Hammarstroem et al.,1997, Journal of Clinical Periodontology 24, 658-668).
17. Hata, et al., J. Biol. Chem. 268: 8447-8457
18. Haugen, et al., (1992). J. Neurosci. 12: 2034-2042
19. Hem et al., J. Biomed. Mater. Res. 39:266-276 (1998)
20. Ignatius, et al., J. of Cell Biology, 111:709-720, 1990
21. Kallapur, et al, Adhesion Molecule (1992) J. Neurosci. Res. 33: 538-548
22. Kleinman, et al., Archives of Biochemistry and Biophysics, 272:39-45, 1989
23. Liesi, et al., FEBS Letters, 244:141-148, 1989
24. Lyngstadaas et al., 2001, Journal of Clinical Periodontology 28, 181-188
25. Lyngstadaas et al., 2000, Journal of Clinical Periodontology 27, 1-8
26. Martin, Annual Review of Cellular Biology, 3:57-85, 1987
27. Massia, et al, J. of Biol. Chem., 268:8053-8059, 1993
28. Netzel-Amett et al., (1991) J. Biol. Chem., 266:6747-6755
29. Sakata, et al., Journal of Clinical Investigation, 65:290-297, 1980
30. Sambrook, J. et al.: Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.
31. Schense, J. C., et al. (1999) Bioconj. Chem. 10:75-81
32. Sierra, D. H., Journal of Biomaterials Applications, 7:309-352 (1993)
33. Smith et al., (1995). J. Biol. Chem. 270:6440-6449
34. Stryer, L. In Biochemistry, W. H. Freeman & Company, NY, 1975
35. Takagi and Doolittle (1975) Biochem. 14:5149-5156
36. Tashiro, et al., J. of Biol. Chem., 264:16174-16182, 1989
37. Ten Cate: Oral Histology, 1994; Robinson: Eur. J. Oral Science, Jan. 1998, 106 Suppl. 1:282-91
38. Tyler-Cross, R., et. Protein Science. 3: 620-627
39. U.S. Pat. No. 5,874,500
40. U.S. Pat. No. 6,331,422
41. US 2003/0166833
42. US 2003/0187232
43. US Patent No.4,672,032 (Slavkin)
44. Williams, et al., Journal of Comparative Neurobiology, 264:284-290 (1987).
45. Williams, Neurochemical Research, 12:851-869, 1987
46. WO 00/44808
47. WO 00/53196
48. WO 01/97834
49. WO 02/080994
50. Zucker and Katz, (1991). Exper. Biol. Med.: 693-702
Claims (40)
- 細胞閉塞性である高分子マトリックスとエナメルマトリックスタンパク質とを含み、該高分子マトリックスが第1および第2の前駆体を含み、第1および第2の前駆体は両方ともポリエチレングリコールを含み、第1および第2の前駆体の鎖の合計が5またはそれ以上である、エナメルマトリックスタンパク質を投与するための薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 高分子マトリックスが、強力な求核基を有する第1前駆体と、強力な求電子基を有する第2前駆体との間の反応により生成される、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 第1および第2の前駆体の鎖の合計が6またはそれ以上である、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 第1および第2の前駆体の鎖の合計が8またはそれ以上である、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 第1および第2の前駆体が、ポリエチレングリコール−アクリレートおよびポリエチレングリコール−チオールから成る群から選ばれる、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 第1および第2の前駆体が、アクリル化4本アームポリエチレングリコール(4本アームPEG−アクリレート)および4本アームポリエチレングリコール−チオール(4本アームPEG−チオール)から成る群から選ばれる、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質の濃度が5mg/ml未満である、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質の濃度が250μg/ml未満である、請求項1に記
載の薬剤配合物および/または治療用配合物。 - エナメルマトリックスタンパク質の濃度が1μg/ml〜5mg/mlである、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質がマトリックスと共有結合または非共有結合によって連結された、請求項1に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが細胞の内殖または遊走に適している、請求項1〜10のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが非骨原性の軟組織細胞に関して細胞閉塞性である、請求項11に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが2またはそれ以上の前駆体の反応により得られ、前駆体の鎖の隣接する交差点が10000個未満の原子を有する鎖により結合されている、請求項11に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが2またはそれ以上の前駆体の反応により得られ、2つの隣接する交差点の間の原子の数が330個未満の原子である、請求項11に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが2またはそれ以上の前駆体の反応により得られ、2つの隣接する交差点の間の原子の数が30〜120個の原子である、請求項11に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが2またはそれ以上の前駆体の反応により得られ、マトリックスのネットワークの網目構造が10nm〜100μmである、請求項11に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスが2またはそれ以上の前駆体の反応により得られ、マトリックスの孔が平均して1μmよりも小さい、またはそれより大きくない、請求項11に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスを事前に形成する、請求項1〜17のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- マトリックスをin situで形成する、請求項1〜18のいずれか1項に記載の薬
剤配合物および/または治療用配合物。 - エナメルマトリックスタンパク質がアメロゲニンである、請求項1〜19のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質が少なくともアメロゲニンの断片を含む、請求項1〜20のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質が、少なくとも1つのシステイン残基とマトリックスの成分のうち少なくとも1つのコンジュゲートした不飽和基との求核付加反応によって該マトリックスに連結している、請求項1〜21のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 少なくとも1つのシステイン残基がエナメルマトリックスタンパク質のC末端中に位置する、請求項21に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 少なくとも1つのシステイン残基がエナメルマトリックスタンパク質のN末端に位置する、請求項21に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質が化学修飾されている、請求項1〜24のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- システインがリンカー配列によってエナメルマトリックスタンパク質に付着している、請求項1〜25のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- リンカー配列が酵素分解可能なアミノ酸配列を含む、請求項25に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- リンカーがタンパク質分解される配列を含む、請求項25に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 配列がプラスミン分解可能配列である、請求項25に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- リンカー配列が非特異的な加水分解によって分解可能な配列をさらに含む、請求項25〜28のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 配列がエステル結合を含む、請求項29に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- リンカーが多糖分解の基質を含む、請求項25〜30のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- トランスグルタミナーゼ基質ドメインを介してエナメルマトリックスタンパク質を高分子マトリックス内に取り込ませる、請求項1〜20のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- トランスグルタミナーゼドメインがXIIIa因子基質ドメインである、請求項32に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 少なくとも1つのヘパリンおよび/またはヘパリン結合断片を含めることによって高分子マトリックスを改変する、請求項1〜20のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- エナメルマトリックスタンパク質が少なくとも1つのヘパリン結合断片を介して高分子マトリックスに共有結合または非共有結合している、請求項34に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 高分子マトリックスがフィブリンを含む、請求項1〜28のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物。
- 医薬品として用いる、請求項1〜37のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/また
は治療用配合物。 - 骨、軟骨および歯などの石灰化組織を修復するための医薬品を製造するための、請求項1〜36のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物の使用。
- 30mgのエナメルマトリックスタンパク質および1mlのアルギン酸プロピレングリコールを含み、主なタンパク質ピーク20、14および5kDaの重量比がそれぞれ80/8/12である薬剤組成物および/または治療用組成物をさらに含む、請求項1〜36のいずれか1項に記載の薬剤配合物および/または治療用配合物を含む薬剤組成物および/または治療用組成物。
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