JP5061375B2 - 電気化学測定装置用電極およびバイオセンサ用電極 - Google Patents
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Description
本発明は、電気化学測定装置用電極および電気化学測定装置用電極を用いた電気化学測定装置、バイオセンサ用電極およびバイオセンサ用電極を用いたバイオセンサ、電気化学測定装置用電極の製造方法、バイオセンサ用電極の製造方法、電気化学測定装置を用いた測定方法、バイオセンサを用いた測定方法に関する。
溶液中の過酸化水素濃度を測定する装置は、半導体製造プロセスにおいて用いられる還元剤に含まれる過酸化水素や、食品製造プロセスにおける殺菌・消毒液に含まれる過酸化水素の濃度を測定するため、あるいは、原子炉の炉水中の過酸化水素濃度を測定するために広く用いられている。
溶液中の過酸化水素濃度を測定する装置としては、例えば電気化学反応を用いたものがあり、過酸化水素を含む溶液中に電極を浸漬し、カーボン電極や白金等の貴金属電極を用いて、印加時に得られる電流値を検出することによって測定を行う。
これは、電極表面で過酸化水素が酸化されることにより、酸化電流が発生するため、酸化電流を測定すれば、溶液中の過酸化水素濃度を測定することができるからである。
一方、多種多様な溶液に含まれる物質の濃度を測定する装置として、上記の過酸化水素の電気化学反応に加えて、タンパク質の触媒反応と電気化学反応を組み合わせた測定装置が広く用いられている。
また、溶液中の化学物質を酵素の触媒機能により過酸化水素に変換し、変換した過酸化水素を、上記の電極を用いて酸化還元反応により計測するバイオセンサや、溶液中の化学物質（抗原）を抗体と反応させ、反応により生じる電流を検出することにより、溶液中の化学物質の濃度を計測する免疫センサが汎用化している。
例えば、グルコースをグルコースオキシダーゼによって酸化すると、グルコノラクトンと過酸化水素が生成されるが、生成される過酸化水素量はグルコース濃度に比例する。
そこで、グルコースバイオセンサに用いられる電極として、過酸化水素を酸化する電極の表面にグルコース酸化酵素を固定した電極を用意し、これを含む電極を溶液中に浸漬すると、グルコース酸化酵素がグルコースを酸化し、グルコノラクトンと過酸化水素を生成させる。
生成した過酸化水素は電極表面で酸化されるため、その際に生じる電流値を測定することにより、試料中のグルコース濃度を測定することができる。
ここで、過酸化水素を検出する電極としては、他の電極材料に比べて、過酸化水素に対する酸化力の高い材料である貴金属が使用されている。
例えば特開２００１−１１６７１６号公報（特許文献１）および特開２０００−８１４０９号公報（特許文献２）では、電極材料として白金が好ましく用いられると記載されている。
一方、白金は電極材料としては高価であり、他の電極材料に比べて加工性に劣ることから、白金以外の物質を用いた電極材料が用いられる場合がある。
例えば、Ｆａｍｉｎｇ Ｔｉａｎ ａｎｄ Ｇｕｏｙｉ Ｚｈｕ，”Ｓｏｌ−ｇｅｌ ｄｅｒｉｖｅｄ ｉｒｉｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｇｌｕｃｏｕｓｅ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ”，Ｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ａｃｔｕａｔｏｒｓ Ｂ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｂ．Ｖ，（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ），Ｖｏｌｕｍｅ８６，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００２，ｐ．２６６−２７０（非特許文献１）では酸化イリジウムを用いた電極が開示されている。
また、特許第３８５４８９２号公報（特許文献３）では、好ましい材料の１つとしてイリジウムが開示されている。
これらの電極は、過酸化水素に対する印加後の電流値を測定することによってグルコース濃度を測定している。
溶液中の過酸化水素濃度を測定する装置は、半導体製造プロセスにおいて用いられる還元剤に含まれる過酸化水素や、食品製造プロセスにおける殺菌・消毒液に含まれる過酸化水素の濃度を測定するため、あるいは、原子炉の炉水中の過酸化水素濃度を測定するために広く用いられている。
溶液中の過酸化水素濃度を測定する装置としては、例えば電気化学反応を用いたものがあり、過酸化水素を含む溶液中に電極を浸漬し、カーボン電極や白金等の貴金属電極を用いて、印加時に得られる電流値を検出することによって測定を行う。
これは、電極表面で過酸化水素が酸化されることにより、酸化電流が発生するため、酸化電流を測定すれば、溶液中の過酸化水素濃度を測定することができるからである。
一方、多種多様な溶液に含まれる物質の濃度を測定する装置として、上記の過酸化水素の電気化学反応に加えて、タンパク質の触媒反応と電気化学反応を組み合わせた測定装置が広く用いられている。
また、溶液中の化学物質を酵素の触媒機能により過酸化水素に変換し、変換した過酸化水素を、上記の電極を用いて酸化還元反応により計測するバイオセンサや、溶液中の化学物質（抗原）を抗体と反応させ、反応により生じる電流を検出することにより、溶液中の化学物質の濃度を計測する免疫センサが汎用化している。
例えば、グルコースをグルコースオキシダーゼによって酸化すると、グルコノラクトンと過酸化水素が生成されるが、生成される過酸化水素量はグルコース濃度に比例する。
そこで、グルコースバイオセンサに用いられる電極として、過酸化水素を酸化する電極の表面にグルコース酸化酵素を固定した電極を用意し、これを含む電極を溶液中に浸漬すると、グルコース酸化酵素がグルコースを酸化し、グルコノラクトンと過酸化水素を生成させる。
生成した過酸化水素は電極表面で酸化されるため、その際に生じる電流値を測定することにより、試料中のグルコース濃度を測定することができる。
ここで、過酸化水素を検出する電極としては、他の電極材料に比べて、過酸化水素に対する酸化力の高い材料である貴金属が使用されている。
例えば特開２００１−１１６７１６号公報（特許文献１）および特開２０００−８１４０９号公報（特許文献２）では、電極材料として白金が好ましく用いられると記載されている。
一方、白金は電極材料としては高価であり、他の電極材料に比べて加工性に劣ることから、白金以外の物質を用いた電極材料が用いられる場合がある。
例えば、Ｆａｍｉｎｇ Ｔｉａｎ ａｎｄ Ｇｕｏｙｉ Ｚｈｕ，”Ｓｏｌ−ｇｅｌ ｄｅｒｉｖｅｄ ｉｒｉｄｉｕｍ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ ｇｌｕｃｏｕｓｅ ｂｉｏｓｅｎｓｏｒ”，Ｓｅｎｓｏｒｓ ａｎｄ Ａｃｔｕａｔｏｒｓ Ｂ：Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｂ．Ｖ，（Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ），Ｖｏｌｕｍｅ８６，Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ ２００２，ｐ．２６６−２７０（非特許文献１）では酸化イリジウムを用いた電極が開示されている。
また、特許第３８５４８９２号公報（特許文献３）では、好ましい材料の１つとしてイリジウムが開示されている。
これらの電極は、過酸化水素に対する印加後の電流値を測定することによってグルコース濃度を測定している。
上記のような貴金属や酸化イリジウムを用いた電極は、過酸化水素の検出用電極およびそれを用いた電気化学測定装置やバイオセンサ用の電極としては有用である。
しかしながら、上記電極は、溶液中に含まれる過酸化水素以外の物質の影響を極力避けることが可能な構造、組成とするのがより望ましい。
具体的には、過酸化水素が電極表面で酸化される際に、溶液中の他の物質が干渉物質として同時に酸化され、これらが電流出力を生じて、測定精度を低下させる場合があり、これに対する対策を講じる必要がある。
例えば、白金やイリジウムを電極材料に用いて製作された電流検出型の電極やバイオセンサ用電極においては、アスコルビン酸（別名、ビタミンＣ）、尿酸塩、アセトアミノフェン等が干渉物質として電極に作用するため、これらに対する対策が必要となる。
一方で、酸化イリジウムを電極材料に用いて製作されたグルコースバイオセンサの場合においては、干渉物質に対して電流出力が低下するが、十分とはいえない。
また、印加電位を０Ｖ以下にする必要があり、溶液中の酸素の影響を受けやすくなるなど、新たな干渉物質対策を施す必要が出てくる。
さらに、０Ｖ付近の印加は電極材料自身が持つ自然電位の影響も受けやすくなる。このため、測定精度において、特に繰り返し再現性の測定精度が低下する恐れがある。
本発明は上記理由に鑑みてなされたものであり、その目的は、従来よりも干渉物質による影響を受けにくい電気化学測定装置用電極およびそれを用いた電気化学測定装置（バイオセンサ）を提供することにある。
前述した目的を達成するために、第１の発明は、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金で構成されていることを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極である。
第２の発明は、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲である合金で構成されていることを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極である。
第３の発明は、第１の発明または第２の発明に記載の電気化学測定装置用電極を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素の濃度を測定する、電気化学測定装置である。
第４の発明は、第１の発明または第２の発明に記載の電気化学測定装置用電極の表面に、固定化酵素層および／または固定化抗体層を設けてなることを特徴とする、溶液中の測定対象物質を検出する、バイオセンサ用電極である。
第５の発明は、第４の発明記載のバイオセンサ用電極を有することを特徴とする、溶液中の測定対象物質の濃度を測定する、バイオセンサである。
第６の発明は、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金を放電アーク法、蒸着法、スパッタリング法のいずれかで製造する工程を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極の製造方法である。
第７の発明は、第１の発明または第２の発明に記載の電気化学測定装置用電極の表面に固定化酵素層および／または固定化抗体層を設ける工程を有することを特徴とする、溶液中の測定対象物質を検出する、バイオセンサ用電極の製造方法である。
第８の発明は、第３の発明に記載の電気化学測定装置を用い、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を測定することを特徴とする測定方法である。
第９の発明は、第５の発明に記載のバイオセンサを用い、電流検出方式により、溶液中の測定対象物質の濃度を測定することを特徴とする測定方法である。
（発明の効果）
本発明によれば、従来よりも干渉物質による影響を受けにくい電気化学測定装置用電極およびそれを用いた電気化学測定装置（バイオセンサ）を提供することができる。
しかしながら、上記電極は、溶液中に含まれる過酸化水素以外の物質の影響を極力避けることが可能な構造、組成とするのがより望ましい。
具体的には、過酸化水素が電極表面で酸化される際に、溶液中の他の物質が干渉物質として同時に酸化され、これらが電流出力を生じて、測定精度を低下させる場合があり、これに対する対策を講じる必要がある。
例えば、白金やイリジウムを電極材料に用いて製作された電流検出型の電極やバイオセンサ用電極においては、アスコルビン酸（別名、ビタミンＣ）、尿酸塩、アセトアミノフェン等が干渉物質として電極に作用するため、これらに対する対策が必要となる。
一方で、酸化イリジウムを電極材料に用いて製作されたグルコースバイオセンサの場合においては、干渉物質に対して電流出力が低下するが、十分とはいえない。
また、印加電位を０Ｖ以下にする必要があり、溶液中の酸素の影響を受けやすくなるなど、新たな干渉物質対策を施す必要が出てくる。
さらに、０Ｖ付近の印加は電極材料自身が持つ自然電位の影響も受けやすくなる。このため、測定精度において、特に繰り返し再現性の測定精度が低下する恐れがある。
本発明は上記理由に鑑みてなされたものであり、その目的は、従来よりも干渉物質による影響を受けにくい電気化学測定装置用電極およびそれを用いた電気化学測定装置（バイオセンサ）を提供することにある。
前述した目的を達成するために、第１の発明は、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金で構成されていることを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極である。
第２の発明は、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲である合金で構成されていることを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極である。
第３の発明は、第１の発明または第２の発明に記載の電気化学測定装置用電極を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素の濃度を測定する、電気化学測定装置である。
第４の発明は、第１の発明または第２の発明に記載の電気化学測定装置用電極の表面に、固定化酵素層および／または固定化抗体層を設けてなることを特徴とする、溶液中の測定対象物質を検出する、バイオセンサ用電極である。
第５の発明は、第４の発明記載のバイオセンサ用電極を有することを特徴とする、溶液中の測定対象物質の濃度を測定する、バイオセンサである。
第６の発明は、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金を放電アーク法、蒸着法、スパッタリング法のいずれかで製造する工程を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極の製造方法である。
第７の発明は、第１の発明または第２の発明に記載の電気化学測定装置用電極の表面に固定化酵素層および／または固定化抗体層を設ける工程を有することを特徴とする、溶液中の測定対象物質を検出する、バイオセンサ用電極の製造方法である。
第８の発明は、第３の発明に記載の電気化学測定装置を用い、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を測定することを特徴とする測定方法である。
第９の発明は、第５の発明に記載のバイオセンサを用い、電流検出方式により、溶液中の測定対象物質の濃度を測定することを特徴とする測定方法である。
（発明の効果）
本発明によれば、従来よりも干渉物質による影響を受けにくい電気化学測定装置用電極およびそれを用いた電気化学測定装置（バイオセンサ）を提供することができる。
図１は電気化学測定装置３を示す模式図である。
図２Ａはバイオセンサ３ａを示す模式図である。
図２Ｂは図２Ａの作用電極９ａ（バイオセンサ用電極４）の縦断面図を示す図である。
図３はバイオセンサ３ｂを示す模式図である。
図４は図３のバイオセンサ用電極４ａの断面図である。
図５は実施例１の実験結果を示す図である。
図６は実施例２の実験結果を示す図である。
図７は実施例４の実験結果を示す図である。
図２Ａはバイオセンサ３ａを示す模式図である。
図２Ｂは図２Ａの作用電極９ａ（バイオセンサ用電極４）の縦断面図を示す図である。
図３はバイオセンサ３ｂを示す模式図である。
図４は図３のバイオセンサ用電極４ａの断面図である。
図５は実施例１の実験結果を示す図である。
図６は実施例２の実験結果を示す図である。
図７は実施例４の実験結果を示す図である。
１ 電気化学測定装置用電極
３ 電気化学測定装置
３ａ バイオセンサ
３ｂ バイオセンサ
４ バイオセンサ用電極
５ 参照電極
６ 固定化酵素層（固定化抗体層）
７ 対極
９ 作用電極
１１ 配線
１３ 測定装置
１５ 溶液
２３ 絶縁基板
２４ 結合層
３ 電気化学測定装置
３ａ バイオセンサ
３ｂ バイオセンサ
４ バイオセンサ用電極
５ 参照電極
６ 固定化酵素層（固定化抗体層）
７ 対極
９ 作用電極
１１ 配線
１３ 測定装置
１５ 溶液
２３ 絶縁基板
２４ 結合層
以下、図面に基づいて本発明に好適な実施形態を詳細に説明する。
まず、図１を参照して、本発明の第１の実施形態に係る電気化学測定装置用電極１を有する電気化学測定装置３の構成を説明する。
ここでは、電気化学測定装置３として、溶液１５中の過酸化水素濃度を測定する電気化学測定装置が例示されている。
図１に示された電気化学測定装置３は、溶液１５中の過酸化水素を酸化する作用電極９（電気化学測定装置用電極１）、電位の基準となる電極である参照電極５、および必要に応じて設けられる対極７を有している。
さらに、電気化学測定装置３は、測定の際の電位の印加等の制御および酸化電流を計測して過酸化水素濃度の測定を行う測定装置１３、各電極と測定装置１３を接続する配線１１を有している。
電気化学測定装置３は、作用電極９、対極７、参照電極５を過酸化水素を含む溶液１５中に浸漬し、測定装置１３を介して定電位を印加し、作用電極９の表面で過酸化水素が酸化される際に得られる酸化電流の値を測定することにより、溶液１５中の過酸化水素濃度を測定する装置である。
即ち、電気化学測定装置３は、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を測定する。
ここで、前述の通り、作用電極９は、測定の際に干渉物質の影響を受けにくい構造、材料であることが望ましい。
換言すれば、作用電極９は、測定の際に過酸化水素のみを酸化するような選択性を有しているのが望ましい。
上記問題に対して、発明者らは鋭意検討の結果、電極に、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金を用いることにより、干渉物質の影響を従来よりも受けにくくすることが可能であることを見出した。
以下、合金中の各物質についてより詳細に説明する。
イリジウムは、過酸化水素に対する高い酸化力を有し、かつ従来の作用電極の材料として用いられる金や白金と比べて、安価で加工性に優れた材料であり、溶液１５中の過酸化水素を酸化するために必須である。
レニウムは過酸化水素に対する酸化力を有するとともに、イリジウムに添加することにより、電極に過酸化水素の選択性を付与する元素であり、干渉物質の影響を従来よりも受けにくくするために必須である。
しかしながら、合金中のレニウムの含有率がイリジウムの含有量に対して１重量％以下だと、十分な選択性が付与できなくなる。
そのため、合金中のレニウムの含有率はイリジウムの含有量に対して重量％で１〜５０％である、または、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲であるのが望ましい。
また、より好ましくはイリジウムの含有量に対して重量％で１〜１０％である、または、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜９０：１０の範囲であるのが望ましい。
なお、合金をイリジウムとレニウムのみで構成してもよく、この場合、イリジウムとレニウムの重量比率は９９：１〜５０：５０の範囲であるのが望ましい。
即ち、電極をイリジウム−レニウム合金で構成し、レニウムの含有率を１〜５０重量％とすればよい。
この場合も、より好ましいイリジウムとレニウムの重量比率は９９：１〜９０：５０の範囲である。
上記合金は、例えば放電アーク法、蒸着法、スパッタリング法によって製造されるが、材料を無駄なく利用できる点において、放電アーク法によって製造されるのが好ましい。
なお、参照電極５としては公知の電極を用いることができ、例えばガラス複合電極が挙げられる。
また、対極７としても公知の電極を用いることができ、例えば白金電極が挙げられる。
ここで、電気化学測定装置３を用いた、溶液１５中の過酸化水素の濃度の測定方法について詳細に説明する。
まず、作用電極９、対極７、参照電極５を、過酸化水素を含む溶液１５中に浸漬する。
溶液１５は例えば半導体製造プロセスに用いられる還元剤、食品製造に用いられる殺菌・消毒液、原子炉の炉水である。
各電極が溶液１５中に浸漬されると、測定装置１３を用いて定電位を印加する。
電位の印加により、作用電極９の表面では過酸化水素が酸化され、酸化電流が生じる。
測定装置１３は酸化電流を測定し、測定値をもとに、溶液１５中の過酸化水素濃度を測定する。
ここで、作用電極９は前述のように、電極に、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
そのため、溶液１５中に尿酸、アスコルビン酸、他の有機酸等の干渉物質が含まれていても、干渉物質の作用電極９の表面での酸化を従来よりも抑制でき、干渉物質の酸化により電流出力が生じて、測定精度を低下させるのを防ぐことができる。
即ち、従来よりも、溶液１５中の過酸化水素の濃度の測定精度を向上させることができる。
このように、第１の実施形態によれば、電気化学測定装置３は、作用電極９、対極７、参照電極５、測定装置１３を有し、作用電極９は、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
そのため、溶液１５中に干渉物質が含まれていても、干渉物質の作用電極９の表面での酸化を従来よりも抑制でき、干渉物質の酸化により電流出力を生じて、測定精度を低下させるのを防ぐことができる。
即ち、作用電極９は従来よりも干渉物質による影響を受けにくい。
次に、第２の実施形態について、図２Ａ、図２Ｂを参照して説明する。
第２の実施形態は、第１の実施形態において、作用電極９ａを、表面が固定化酵素層６で覆われたバイオセンサ用電極４とし、装置全体をバイオセンサ３ａとしたものである。
なお、第２の実施形態において、第１の実施形態と同様の効果を奏する要素については同一の番号を付し、説明を省略する。
図２Ａに示すように、バイオセンサ３ａの構成は電気化学測定装置３と同様であるが、溶液１５ａ中の測定対象物質を、過酸化水素に変換し、さらに得られた過酸化水素を酸化する作用電極９ａ（バイオセンサ用電極４）を有している。
さらに、バイオセンサ３ａは、測定の際の電位の印加等の制御および酸化電流を計測して過酸化水素濃度の測定を行い、測定した過酸化水素濃度から測定対象物質の濃度を測定する測定装置１３ａを有している。
図２Ｂに示すように、バイオセンサ用電極４は、電気化学測定装置用電極１と、電気化学測定装置用電極１の表面に設けられ、測定対象物質を過酸化水素に変換する固定化酵素層６（または固定化抗体層）を有している。
電気化学測定装置用電極１の構造、組成は、第１の実施形態に係る電気化学測定装置用電極１と同様であり、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
固定化酵素層６は、測定対象物質を過酸化水素に変換する酵素を含む層である。
バイオセンサ３ａは、固定化酵素層６の酵素が測定対象物質を過酸化水素に変換し、得られた過酸化水素が電気化学測定装置用電極１の表面で酸化される際に生じる酸化電流を測定することにより、溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度を測定することができる。
即ち、バイオセンサ３ａは、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を測定することにより、溶液中の測定対象物質の濃度を測定することができる。
酵素としては、測定対象物質の触媒反応の生成物として過酸化水素を生成する、または酸素を消費する酵素である必要があり、測定対象物質に応じて乳酸酸化酵素、グルコース酸化酵素、尿酸酸化酵素、尿素酸化酵素、アルコール酸化酵素等が用いられる。
また、２種類以上の酵素を同時に用いてもよい。例えば、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ，およびサルコシンオキシダーゼがこれに該当する。
これらの酵素を用いることによってクレアチニンの検出が可能になる。
さらに、酵素と補酵素を含んでいてもよい。
酵素を電気化学測定装置用電極１の表面に固定する方法としては、公知の方法を用いることができるが、例えば架橋反応を利用したものが挙げられる。
具体的には、酵素溶液、グルタルアルデヒド等の蛋白質の架橋剤、およびアルブミンを含む溶液を、電気化学測定装置用電極１の表面に滴下することにより電気化学測定装置用電極１の表面に酵素が固定され、固定化酵素層６が形成される。
以上のように、固定化酵素層６は少なくとも酵素を含み、測定対象物質を過酸化水素に変換する機能を持つ構成であれば、特に限定されない。
なお、固定化酵素層６の代わりに固定化抗体層を用いる場合は、抗体として、測定対象物質に応じて、絨毛性ゴナドトロピン抗体等の抗体を用いる。
また、抗体の固定方法としては、例えば、抗体を含む溶液中に電気化学測定装置用電極１を一定時間浸漬した後、塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液中で電極を掃引することにより、抗体を固定して、固定化抗体層を形成する。
なお、必要に応じて、ポリビニルアルコールで固定化抗体層を被覆することにより、抗体の離脱を防ぎ、より強固に抗体を固定化することも可能である。
このように、固定化酵素層６の代わりに固定化抗体層を有する構成とすることにより、バイオセンサ３ａは免疫センサとして機能する。
ここで、バイオセンサ３ａを用いた溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度の測定方法について詳細に説明する。
まず、作用電極９ａ、対極７、参照電極５を、測定対象物質を含む溶液１５ａ中に浸漬する。
溶液１５ａは、例えば測定対象物質がグルコースの場合は糖尿病患者の尿であり、絨毛性ゴナドトロピンの場合は、妊娠している可能性がある女性の尿である。
各電極が溶液１５ａ中に浸漬されると、測定装置１３ａを介して定電位を印加する。
ここで、バイオセンサ３ａが固定化酵素層６を用いた酵素センサの場合は、各電極が溶液１５ａ中に浸漬されると、溶液１５ａ中の測定対象物質は作用電極９ａの固定化酵素層６と接触し、触媒反応により、過酸化水素に変換される。
得られた過酸化水素は、電位の印加により、作用電極９ａの電気化学測定装置用電極１の表面で酸化され、酸化電流が生じる。
測定装置１３ａは酸化電流を測定し、測定した酸化電流をもとに、過酸化水素濃度を測定する。
さらに、測定装置１３ａは測定した過酸化水素濃度をもとに、溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度を測定する。
なお、バイオセンサ３ａが免疫センサの場合は、各電極が溶液１５ａ中に浸漬されると、抗体と測定対象物質が反応するため、測定装置１３ａを介して、方形波ボルタンメトリ法にて、反応により得られる電流値を測定し、電流値をもとに、溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度を測定する。
ここで、作用電極９ａの電気化学測定装置用電極１は前述のように、電極に、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
そのため、溶液１５ａ中にアスコルビン酸やアセトアミノフェン等の干渉物質が含まれていても、干渉物質の電気化学測定装置用電極１の表面での酸化を従来よりも抑制でき、干渉物質の酸化により電流出力が生じて、測定精度を低下させるのを防ぐことができる。
すなわち、従来よりも、測定対象物質の測定精度を向上させることができる。
このように、第２の実施形態によれば、バイオセンサ３ａは、作用電極９ａ、対極７、参照電極５、測定装置１３ａを有し、作用電極９ａの電気化学測定装置用電極１は、イリジウムとレニウムを含む合金が用いられており、上記合金は過酸化水素の選択性が得られるような組成となっている。
そのため、第１の実施形態と同様の効果を奏する。
次に、第３の実施形態について図３および図４を参照して説明する。
第３の実施形態におけるバイオセンサ３ｂは、第２の実施形態において、電気化学測定装置用電極１を絶縁基板２３上に設け、電気化学測定装置用電極１と固定化酵素層６の間に結合層２４をさらに設けて作用電極２５ａ（バイオセンサ用電極４ａ）を構成したものである。
図３および図４に示すように、作用電極２５ａ（バイオセンサ用電極４ａ）は絶縁基板２３、絶縁基板２３の表面に設けられた電気化学測定装置用電極１を有している。
また、図４に示すように、作用電極２５ａ（バイオセンサ用電極４ａ）は、図４における電気化学測定装置用電極１の上方に固定化酵素層６（または固定化抗体層）が設けられている。
さらに、作用電極２５ａは、電気化学測定装置用電極１と固定化酵素層６の間に設けられ、かつ電気化学測定装置用電極１を覆うように絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１上に設けられた結合層２４を有している。
結合層２４上には、固定化酵素層６が設けられている。
なお、電気化学測定装置用電極１、固定化酵素層６、結合層２４で電極部１０を構成している。
絶縁基板２３は電極部１０を保持する部材であり、耐水性、耐熱性、耐薬品性、絶縁性および電気化学測定装置用電極１との密着性に優れた材料であることが好ましい。
このような要件を満たす材料としては、例えばセラミックス、ガラス、石英、プラスチックスが挙げられる。
結合層２４は、固定化酵素層６と絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１との密着性（結合性）を向上させるために設けられるものである。
また、結合層２４は、絶縁基板２３の表面のぬれ性を改善し、固定化酵素層６を形成する際の膜厚の均一性を向上させる効果も有している。
結合層２４を構成する材料としては、例えばシランカップリング剤が挙げられる。
シランカップリング剤の種類としては、アミノシラン、ビニルシラン、エポキシシランが挙げられるが、このうち、密着性の観点から、アミノシランの一種であるγ−アミノプロピルトリエトキシシランがより好ましい。
結合層２４は例えばシランカップリング剤溶液をスピンコートすることにより絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１上に形成することができる。
この際、シランカップリング剤濃度は１ｖ／ｖ％（体積／体積％）程度とすることが好ましい。この濃度であれば、アルコキシル基が十分に水和し、十分な密着性が発揮されるからである。
なお、図４では一枚の絶縁基板２３上に１つの電極部１０が設けられているが、一枚の絶縁基板２３上に複数の電極部１０を設けてもよい。
また、図３では対極７および参照電極５も別々の絶縁基板２３上に形成されているが、全ての電極を一枚の絶縁基板２３上に形成してもよい。
ここで、作用電極２５ａの製造方法について、簡単に説明する。
まず、絶縁基板２３上に、電気化学測定装置用電極１を蒸着法、またはスパッタリング法等を用いて設ける。
次に、絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１上に、電気化学測定装置用電極１を覆うようにして結合層２４をスピンコートにより設ける。
次に、結合層２４上に、酵素溶液、グルタルアルデヒド等の蛋白質の架橋剤、およびアルブミンを含む溶液を、滴下することにより固定化酵素層６が形成され、作用電極２５ａが完成する。
なお、バイオセンサ３ｂを用いた、溶液中１５ａ中の測定対象物質の濃度の測定方法については、第２の実施形態と同様であるため、説明を省略する。
このように、第３の実施形態によれば、バイオセンサ３ｂは、作用電極２５ａ、対極７、参照電極５、測定装置１３ａを有し、作用電極２５ａの電気化学測定装置用電極１は、イリジウムとレニウムを含む合金が用いられており、上記合金は過酸化水素の選択性が得られるような組成となっている。
そのため、第２の実施形態と同様の効果を奏する。
また、第３の実施形態によれば、作用電極２５ａは、電気化学測定装置用電極１を絶縁基板２３上に設け、電気化学測定装置用電極１と固定化酵素層６の間に結合層２４をさらに設けた構造を有している。
そのため、第２の実施形態と比較して、固定化酵素層６と電気化学測定装置用電極１との密着性（結合性）を向上させることができ、また、固定化酵素層６を形成する際の膜厚の均一性を向上させることができる。
まず、図１を参照して、本発明の第１の実施形態に係る電気化学測定装置用電極１を有する電気化学測定装置３の構成を説明する。
ここでは、電気化学測定装置３として、溶液１５中の過酸化水素濃度を測定する電気化学測定装置が例示されている。
図１に示された電気化学測定装置３は、溶液１５中の過酸化水素を酸化する作用電極９（電気化学測定装置用電極１）、電位の基準となる電極である参照電極５、および必要に応じて設けられる対極７を有している。
さらに、電気化学測定装置３は、測定の際の電位の印加等の制御および酸化電流を計測して過酸化水素濃度の測定を行う測定装置１３、各電極と測定装置１３を接続する配線１１を有している。
電気化学測定装置３は、作用電極９、対極７、参照電極５を過酸化水素を含む溶液１５中に浸漬し、測定装置１３を介して定電位を印加し、作用電極９の表面で過酸化水素が酸化される際に得られる酸化電流の値を測定することにより、溶液１５中の過酸化水素濃度を測定する装置である。
即ち、電気化学測定装置３は、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を測定する。
ここで、前述の通り、作用電極９は、測定の際に干渉物質の影響を受けにくい構造、材料であることが望ましい。
換言すれば、作用電極９は、測定の際に過酸化水素のみを酸化するような選択性を有しているのが望ましい。
上記問題に対して、発明者らは鋭意検討の結果、電極に、少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金を用いることにより、干渉物質の影響を従来よりも受けにくくすることが可能であることを見出した。
以下、合金中の各物質についてより詳細に説明する。
イリジウムは、過酸化水素に対する高い酸化力を有し、かつ従来の作用電極の材料として用いられる金や白金と比べて、安価で加工性に優れた材料であり、溶液１５中の過酸化水素を酸化するために必須である。
レニウムは過酸化水素に対する酸化力を有するとともに、イリジウムに添加することにより、電極に過酸化水素の選択性を付与する元素であり、干渉物質の影響を従来よりも受けにくくするために必須である。
しかしながら、合金中のレニウムの含有率がイリジウムの含有量に対して１重量％以下だと、十分な選択性が付与できなくなる。
そのため、合金中のレニウムの含有率はイリジウムの含有量に対して重量％で１〜５０％である、または、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲であるのが望ましい。
また、より好ましくはイリジウムの含有量に対して重量％で１〜１０％である、または、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜９０：１０の範囲であるのが望ましい。
なお、合金をイリジウムとレニウムのみで構成してもよく、この場合、イリジウムとレニウムの重量比率は９９：１〜５０：５０の範囲であるのが望ましい。
即ち、電極をイリジウム−レニウム合金で構成し、レニウムの含有率を１〜５０重量％とすればよい。
この場合も、より好ましいイリジウムとレニウムの重量比率は９９：１〜９０：５０の範囲である。
上記合金は、例えば放電アーク法、蒸着法、スパッタリング法によって製造されるが、材料を無駄なく利用できる点において、放電アーク法によって製造されるのが好ましい。
なお、参照電極５としては公知の電極を用いることができ、例えばガラス複合電極が挙げられる。
また、対極７としても公知の電極を用いることができ、例えば白金電極が挙げられる。
ここで、電気化学測定装置３を用いた、溶液１５中の過酸化水素の濃度の測定方法について詳細に説明する。
まず、作用電極９、対極７、参照電極５を、過酸化水素を含む溶液１５中に浸漬する。
溶液１５は例えば半導体製造プロセスに用いられる還元剤、食品製造に用いられる殺菌・消毒液、原子炉の炉水である。
各電極が溶液１５中に浸漬されると、測定装置１３を用いて定電位を印加する。
電位の印加により、作用電極９の表面では過酸化水素が酸化され、酸化電流が生じる。
測定装置１３は酸化電流を測定し、測定値をもとに、溶液１５中の過酸化水素濃度を測定する。
ここで、作用電極９は前述のように、電極に、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
そのため、溶液１５中に尿酸、アスコルビン酸、他の有機酸等の干渉物質が含まれていても、干渉物質の作用電極９の表面での酸化を従来よりも抑制でき、干渉物質の酸化により電流出力が生じて、測定精度を低下させるのを防ぐことができる。
即ち、従来よりも、溶液１５中の過酸化水素の濃度の測定精度を向上させることができる。
このように、第１の実施形態によれば、電気化学測定装置３は、作用電極９、対極７、参照電極５、測定装置１３を有し、作用電極９は、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
そのため、溶液１５中に干渉物質が含まれていても、干渉物質の作用電極９の表面での酸化を従来よりも抑制でき、干渉物質の酸化により電流出力を生じて、測定精度を低下させるのを防ぐことができる。
即ち、作用電極９は従来よりも干渉物質による影響を受けにくい。
次に、第２の実施形態について、図２Ａ、図２Ｂを参照して説明する。
第２の実施形態は、第１の実施形態において、作用電極９ａを、表面が固定化酵素層６で覆われたバイオセンサ用電極４とし、装置全体をバイオセンサ３ａとしたものである。
なお、第２の実施形態において、第１の実施形態と同様の効果を奏する要素については同一の番号を付し、説明を省略する。
図２Ａに示すように、バイオセンサ３ａの構成は電気化学測定装置３と同様であるが、溶液１５ａ中の測定対象物質を、過酸化水素に変換し、さらに得られた過酸化水素を酸化する作用電極９ａ（バイオセンサ用電極４）を有している。
さらに、バイオセンサ３ａは、測定の際の電位の印加等の制御および酸化電流を計測して過酸化水素濃度の測定を行い、測定した過酸化水素濃度から測定対象物質の濃度を測定する測定装置１３ａを有している。
図２Ｂに示すように、バイオセンサ用電極４は、電気化学測定装置用電極１と、電気化学測定装置用電極１の表面に設けられ、測定対象物質を過酸化水素に変換する固定化酵素層６（または固定化抗体層）を有している。
電気化学測定装置用電極１の構造、組成は、第１の実施形態に係る電気化学測定装置用電極１と同様であり、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
固定化酵素層６は、測定対象物質を過酸化水素に変換する酵素を含む層である。
バイオセンサ３ａは、固定化酵素層６の酵素が測定対象物質を過酸化水素に変換し、得られた過酸化水素が電気化学測定装置用電極１の表面で酸化される際に生じる酸化電流を測定することにより、溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度を測定することができる。
即ち、バイオセンサ３ａは、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を測定することにより、溶液中の測定対象物質の濃度を測定することができる。
酵素としては、測定対象物質の触媒反応の生成物として過酸化水素を生成する、または酸素を消費する酵素である必要があり、測定対象物質に応じて乳酸酸化酵素、グルコース酸化酵素、尿酸酸化酵素、尿素酸化酵素、アルコール酸化酵素等が用いられる。
また、２種類以上の酵素を同時に用いてもよい。例えば、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ，およびサルコシンオキシダーゼがこれに該当する。
これらの酵素を用いることによってクレアチニンの検出が可能になる。
さらに、酵素と補酵素を含んでいてもよい。
酵素を電気化学測定装置用電極１の表面に固定する方法としては、公知の方法を用いることができるが、例えば架橋反応を利用したものが挙げられる。
具体的には、酵素溶液、グルタルアルデヒド等の蛋白質の架橋剤、およびアルブミンを含む溶液を、電気化学測定装置用電極１の表面に滴下することにより電気化学測定装置用電極１の表面に酵素が固定され、固定化酵素層６が形成される。
以上のように、固定化酵素層６は少なくとも酵素を含み、測定対象物質を過酸化水素に変換する機能を持つ構成であれば、特に限定されない。
なお、固定化酵素層６の代わりに固定化抗体層を用いる場合は、抗体として、測定対象物質に応じて、絨毛性ゴナドトロピン抗体等の抗体を用いる。
また、抗体の固定方法としては、例えば、抗体を含む溶液中に電気化学測定装置用電極１を一定時間浸漬した後、塩化ナトリウムを含むリン酸緩衝液中で電極を掃引することにより、抗体を固定して、固定化抗体層を形成する。
なお、必要に応じて、ポリビニルアルコールで固定化抗体層を被覆することにより、抗体の離脱を防ぎ、より強固に抗体を固定化することも可能である。
このように、固定化酵素層６の代わりに固定化抗体層を有する構成とすることにより、バイオセンサ３ａは免疫センサとして機能する。
ここで、バイオセンサ３ａを用いた溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度の測定方法について詳細に説明する。
まず、作用電極９ａ、対極７、参照電極５を、測定対象物質を含む溶液１５ａ中に浸漬する。
溶液１５ａは、例えば測定対象物質がグルコースの場合は糖尿病患者の尿であり、絨毛性ゴナドトロピンの場合は、妊娠している可能性がある女性の尿である。
各電極が溶液１５ａ中に浸漬されると、測定装置１３ａを介して定電位を印加する。
ここで、バイオセンサ３ａが固定化酵素層６を用いた酵素センサの場合は、各電極が溶液１５ａ中に浸漬されると、溶液１５ａ中の測定対象物質は作用電極９ａの固定化酵素層６と接触し、触媒反応により、過酸化水素に変換される。
得られた過酸化水素は、電位の印加により、作用電極９ａの電気化学測定装置用電極１の表面で酸化され、酸化電流が生じる。
測定装置１３ａは酸化電流を測定し、測定した酸化電流をもとに、過酸化水素濃度を測定する。
さらに、測定装置１３ａは測定した過酸化水素濃度をもとに、溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度を測定する。
なお、バイオセンサ３ａが免疫センサの場合は、各電極が溶液１５ａ中に浸漬されると、抗体と測定対象物質が反応するため、測定装置１３ａを介して、方形波ボルタンメトリ法にて、反応により得られる電流値を測定し、電流値をもとに、溶液１５ａ中の測定対象物質の濃度を測定する。
ここで、作用電極９ａの電気化学測定装置用電極１は前述のように、電極に、イリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金が用いられている。
そのため、溶液１５ａ中にアスコルビン酸やアセトアミノフェン等の干渉物質が含まれていても、干渉物質の電気化学測定装置用電極１の表面での酸化を従来よりも抑制でき、干渉物質の酸化により電流出力が生じて、測定精度を低下させるのを防ぐことができる。
すなわち、従来よりも、測定対象物質の測定精度を向上させることができる。
このように、第２の実施形態によれば、バイオセンサ３ａは、作用電極９ａ、対極７、参照電極５、測定装置１３ａを有し、作用電極９ａの電気化学測定装置用電極１は、イリジウムとレニウムを含む合金が用いられており、上記合金は過酸化水素の選択性が得られるような組成となっている。
そのため、第１の実施形態と同様の効果を奏する。
次に、第３の実施形態について図３および図４を参照して説明する。
第３の実施形態におけるバイオセンサ３ｂは、第２の実施形態において、電気化学測定装置用電極１を絶縁基板２３上に設け、電気化学測定装置用電極１と固定化酵素層６の間に結合層２４をさらに設けて作用電極２５ａ（バイオセンサ用電極４ａ）を構成したものである。
図３および図４に示すように、作用電極２５ａ（バイオセンサ用電極４ａ）は絶縁基板２３、絶縁基板２３の表面に設けられた電気化学測定装置用電極１を有している。
また、図４に示すように、作用電極２５ａ（バイオセンサ用電極４ａ）は、図４における電気化学測定装置用電極１の上方に固定化酵素層６（または固定化抗体層）が設けられている。
さらに、作用電極２５ａは、電気化学測定装置用電極１と固定化酵素層６の間に設けられ、かつ電気化学測定装置用電極１を覆うように絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１上に設けられた結合層２４を有している。
結合層２４上には、固定化酵素層６が設けられている。
なお、電気化学測定装置用電極１、固定化酵素層６、結合層２４で電極部１０を構成している。
絶縁基板２３は電極部１０を保持する部材であり、耐水性、耐熱性、耐薬品性、絶縁性および電気化学測定装置用電極１との密着性に優れた材料であることが好ましい。
このような要件を満たす材料としては、例えばセラミックス、ガラス、石英、プラスチックスが挙げられる。
結合層２４は、固定化酵素層６と絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１との密着性（結合性）を向上させるために設けられるものである。
また、結合層２４は、絶縁基板２３の表面のぬれ性を改善し、固定化酵素層６を形成する際の膜厚の均一性を向上させる効果も有している。
結合層２４を構成する材料としては、例えばシランカップリング剤が挙げられる。
シランカップリング剤の種類としては、アミノシラン、ビニルシラン、エポキシシランが挙げられるが、このうち、密着性の観点から、アミノシランの一種であるγ−アミノプロピルトリエトキシシランがより好ましい。
結合層２４は例えばシランカップリング剤溶液をスピンコートすることにより絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１上に形成することができる。
この際、シランカップリング剤濃度は１ｖ／ｖ％（体積／体積％）程度とすることが好ましい。この濃度であれば、アルコキシル基が十分に水和し、十分な密着性が発揮されるからである。
なお、図４では一枚の絶縁基板２３上に１つの電極部１０が設けられているが、一枚の絶縁基板２３上に複数の電極部１０を設けてもよい。
また、図３では対極７および参照電極５も別々の絶縁基板２３上に形成されているが、全ての電極を一枚の絶縁基板２３上に形成してもよい。
ここで、作用電極２５ａの製造方法について、簡単に説明する。
まず、絶縁基板２３上に、電気化学測定装置用電極１を蒸着法、またはスパッタリング法等を用いて設ける。
次に、絶縁基板２３および電気化学測定装置用電極１上に、電気化学測定装置用電極１を覆うようにして結合層２４をスピンコートにより設ける。
次に、結合層２４上に、酵素溶液、グルタルアルデヒド等の蛋白質の架橋剤、およびアルブミンを含む溶液を、滴下することにより固定化酵素層６が形成され、作用電極２５ａが完成する。
なお、バイオセンサ３ｂを用いた、溶液中１５ａ中の測定対象物質の濃度の測定方法については、第２の実施形態と同様であるため、説明を省略する。
このように、第３の実施形態によれば、バイオセンサ３ｂは、作用電極２５ａ、対極７、参照電極５、測定装置１３ａを有し、作用電極２５ａの電気化学測定装置用電極１は、イリジウムとレニウムを含む合金が用いられており、上記合金は過酸化水素の選択性が得られるような組成となっている。
そのため、第２の実施形態と同様の効果を奏する。
また、第３の実施形態によれば、作用電極２５ａは、電気化学測定装置用電極１を絶縁基板２３上に設け、電気化学測定装置用電極１と固定化酵素層６の間に結合層２４をさらに設けた構造を有している。
そのため、第２の実施形態と比較して、固定化酵素層６と電気化学測定装置用電極１との密着性（結合性）を向上させることができ、また、固定化酵素層６を形成する際の膜厚の均一性を向上させることができる。
次に、具体的な実施例に基づき、本発明をさらに詳細に説明する。
（実施例１）
図１に示す電気化学測定装置３を作製し、過酸化水素と干渉物質を含む溶液中で、定電位測定により、干渉物質の１つであるアスコルビン酸に対する過酸化水素の電流比率を算出し、作用電極９の過酸化水素の選択性の評価を行った。
まず、作用電極９（電気化学測定装置用電極１）の製作を以下のように行った。
はじめに、イリジウムワイヤとレニウムワイヤを用意し、アーク放電によってイリジウム−レニウム合金を製造した。
イリジウム−レニウム合金としては、イリジウムとレニウムの重量比率が１００：０、９９：１、９０：１０、５５：４５、１０：９０、０：１００の６種類のものを製造した。
次に、製造したイリジウム−レニウム合金を、プリント配線が施されたフレキシブル基板に接着剤を用いて固定化し、ワイヤボンデングによって結線した後、シリコーン封止剤で防水処理を施し、作用電極９（電気化学測定装置用電極１）とした。
なお、作用電極９の電極面積は５９．０〜７１．４×１０−６ｍ２（５９．０〜７１．４ｍｍ２）とした。
次に、参照電極５として既存のガラス複合電極（東亞ディーケーケー（株）社製、ＧＳＴ−５７４１Ｃ）を用意し、対極７として既存の白金電極（ＢＡＳ社製、００２２３３）を用意した。
次に、溶液１５として、１００ｍｏｌ／ｍ３（１００ｍＭ）のエヌ−トリス（ハイドロキシ−メチル）−メチル−２−アミノエタンサルフォニックアシッド（同仁化学研究所製ｐＨ緩衝液、ｐＨを７に調整済み、１５０ｍｏｌ／ｍ３（１５０ｍＭ）の塩化ナトリウムを含む、以下ＴＥＳと記述）を用意し、溶液１５の入った０．１リットル容量のビーカーに作用電極９、参照電極５、対極７を浸漬し、配線１１を通じてこれらの電極を測定装置１３に接続し、電気化学測定装置３を作製した。
測定は過酸化水素およびアスコルビン酸に対する定電位測定として、０．５Ｖ、０．７Ｖおよび０．９Ｖ印加時の応答電流を測定した。
これらの電位を印加し、定常状態となった電流から、両者を添加したときに得られる応答電流の差とした。
各印加時に得られるアスコルビン酸（干渉物質）に対する過酸化水素の電流比率を算出した。結果を図５に示す。
図５に示すように、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１、９０：１０、５５：４５の場合に、過酸化水素に対して選択的に応答電流を示した。
特に、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１、９０：１０の場合（イリジウムに対するレニウム含有量が１〜１０重量％の場合）に、特に過酸化水素に対して選択的に応答電流を示すことがわかった。
即ち、上記組成範囲の場合は、過酸化水素を選択的に酸化し酸化力が大きいが、アスコルビン酸への酸化力は小さいことが示された。
一方で、イリジウムとレニウムの重量比率が１００：０および１０：９０、０：１００の場合は、アスコルビン酸の酸化力も過酸化水素と同等であり、作用電極９は干渉物質の影響を受けることがわかった。
（実施例２）
実施例１において、評価時の印加電位を０．７Ｖのみとし、他は同様の条件において、干渉物質としての尿酸およびアセトアミノフェンに対する評価を実施例１と同様に行った。
結果を図６に示す。
図６に示すように、本実施例のイリジウム−レニウム合金の電極は、アスコルビン酸と同様に尿酸およびアセトアミノフェンに対しても、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１、９０：１０、５５：４５の場合の時に酸化力が小さく、過酸化水素を選択的に酸化させることがわかった。
また、過酸化水素の選択的酸化の効果は、イリジウムに対するレニウム含有率が１０重量％の時に最も優れていることがわかった。
（実施例３）
図２に示すバイオセンサ３ａをグルコース測定用のバイオセンサとして作製し、アスコルビン酸と、濃度が既知のグルコースを含む溶液１５ａ中でのグルコースの濃度を測定し、作用電極２５ａの過酸化水素への選択性の評価を行った。
はじめに、イリジウム−レニウム合金の電気化学測定装置用電極１を、実施例１と同様に、イリジウムとレニウムの重量比率が９０：１０となるように作製した。
次に、作製した電気化学測定装置用電極１の表面に１ｖ／ｖ％のγ−アミノプロピルトリエトキシシラン（信越化学（株）社製）を塗布した後、１１０℃で１時間加熱した。
加熱終了後、１００ｍｏｌ／ｍ３（１００ｍＭ）ＴＥＳで２２．５ｗ／ｖ％に調整した牛血清アルブミン溶液（１ｖ／ｖ％のグルタルアルデヒドと５６．５Ｕ×１０−６／リットル（５６．５Ｕ／μｌ）のグルコース酸化酵素を含む）を同様に塗布し、２．５±１℃の冷蔵庫で２４時間乾燥させて作用電極９ａ（バイオセンサ用電極４ａ）を製造した。
また、参照電極５、対極７も用意し、溶液１５ａにこれらの電極を浸漬し、配線１１を通じてこれらの電極を測定装置１３ａに接続し、バイオセンサ３ａを作製した。
なお、比較例として作用電極に、イリジウム−レニウム合金の代わりに白金を用いた電極を用いたバイオセンサ用電極を作成し、これを用いたバイオセンサを作製した。
溶液１５ａとしてはバイオラッド・ラボラトリーズ社製のライフォチェックのコントロール尿を用い、アスコルビン酸を５０×１０−５ｋｇ／リットル（５０ｍｇ／ｄｌ）となるように添加し、グルコースを１０×１０−５ｋｇ／リットル（１０ｍｇ／ｄｌ）となるように添加した。
つづいて、バイオセンサ３ａを０、５、１０、２０×１０−５ｋｇ／リットル（０、５、１０、２０ｍｇ／ｄｌ）のグルコース溶液で検量線を作成しておき、コントロール尿中のグルコース濃度を測定した。
測定は０．９Ｖ定電位測定で３回繰り返した。
その結果、イリジウム−レニウム合金の電極を用いたバイオセンサ３ａは１０．８±０．３×１０−５ｋｇ／リットル（１０．８±０．３ｍｇ／ｄｌ）、白金電極を用いたバイオセンサは３０．１±３．６×１０−５ｋｇ／リットル（３０．１±３．６ｍｇ／ｄｌ）をそれぞれ示した。
イリジウム−レニウム合金を用いた本実施例のバイオセンサ３ａはほぼ正確なグルコース濃度を測定できたが、白金電極を用いた比較例のバイオセンサはアスコルビン酸の酸化電流に伴う干渉を受けて正確なグルコース濃度を測定することができなかった。
（実施例４）
実施例３で用いたバイオセンサ３ａを用意した。
バイオセンサ３ａの各電極を室温下でＴＥＳ溶液中に浸漬し、一定日数毎に１０×１０−５ｋｇ／リットル（１０ｍｇ／ｄｌ）のグルコースと１×１０−５ｋｇ／リットル（１ｍｇ／ｄｌ）のアスコルビン酸を測定し、電極の安定性を評価した。
評価は０．９Ｖ印加時における過酸化水素の電流値に対するアスコルビン酸の電流値の比率を算出した。
結果を図７に示す。
なお、図７におけるグラフ中の「Ｐｔ」は白金電極を用いたバイオセンサ（比較例）の測定値であり、「Ｉｒ−Ｒｅ」はイリジウム−レニウム合金電極を用いたバイオセンサ３ａ（本実施例）の測定値である。
図７に示すように、白金電極を用いたバイオセンサは過酸化水素よりもアスコルビン酸に対して高い電流を示し、その電流比率は５．５−６．１（アスコルビン酸／過酸化水素）であり、２７日間にわたって安定していた。
一方で、イリジウム−レニウム合金電極を用いたバイオセンサ３ａはグルコースから生成される過酸化水素に対して選択的に電流を示し、アスコルビン酸に対してはほとんど電流を示さなかった。
電流比率は０．０６−０．１（アスコルビン酸／過酸化水素）であり、２７日間ほとんど変動せずに安定していた。
（実施例５）
実施例３において、固定化酵素層６の代わりに固定化抗体層を設けた作用電極を用いた免疫センサを用意し、アスコルビン酸と、濃度が既知の絨毛性ゴナドトロビンを含む溶液中での絨毛性ゴナドトロビンの濃度を測定し、作用電極の過酸化水素への選択性の評価を行った。
作用電極の製作は次のように行った。
はじめに、電気化学測定装置用電極１を、実施例１と同様に、イリジウムとレニウムの重量比率が９０：１０となるように作製した。
作製した電気化学測定装置用電極１を、１×１０−３ｋｇ／０．２リットル（１ｍｇ／０．２ｍｌ）のヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体（ハイテスト社製のマウス免疫のモノクローナル抗体）の溶液に１時間浸漬した。
浸漬後、３ｍｏｌ／ｍ３（３ｍＭ）の１、３−ジアミノベンゼン（アルドリッチ（株）社製、ＵＳＡ、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液および０．１×１０３ｍｏｌ／ｍ３（０．１Ｍ）の塩化ナトリウムを含む）中にさらに浸漬し、０から０．８Ｖを２×１０−３Ｖ／ｓ（２ｍＶ／ｓ）で１００回掃引し、次いで０．６５Ｖで５時間印加し、その後に１ｗ／ｖ％のポリビニルアルコール溶液中に１時間浸漬することによって、前述の抗体を固定化した。
比較例として白金を用いた電極に同様の工程で同種の抗体を固定化した。
溶液としてはバイオラッド・ラボラトリーズ社製のライフォチェックのコントロール尿を用い、アスコルビン酸（和光純薬工業（株）社製）として５０×１０−５ｋｇ／リットル（５０ｍｇ／ｄｌ）と、絨毛性ゴナドトロビン（アスペン・バイオ・ファーマ社製のヒト妊婦の尿由来のβサブユニット）として６０×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（６０ｎＭ）を、それぞれ終濃度として添加した。
つづいて、実施例と比較例の免疫センサを０，６６、１３２×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（０，６６，１３２ｎＭ）絨毛性ゴナドトロピン溶液で検量線を作成しておき、溶液中の絨毛性ゴナドトロピン濃度を測定した。測定は０．１−１．２Ｖ掃引範囲、４０×１０−３（４０ｍＶ）のパルス電位、４Ｈｚの周波数、１０×１０−３Ｖ（１０ｍＶ）のステップ電位とする方形波ボルタンメトリ法で３回繰り返した。
その結果、イリジウム−レニウム合金の電極を用いた免疫センサは１．１Ｖにおいて、６１．１±０．６×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（６１．１±０．６ｎＭ）、白金電極を用いた免疫センサは１１８±１２．２×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（１１８±１２．２ｎＭ）をそれぞれ示した。
作用電極にイリジウム−レニウム合金を用いた本実施例の免疫センサはほぼ正確に絨毛性ゴナドトロピンの濃度を示したが、白金電極を用いた比較例の免疫センサはアスコルビン酸の酸化電流に伴う干渉を受けて正確な濃度を測定することができなかった。
このように、本実施例の電気化学測定装置用電極１は、免疫センサに用いた場合においても干渉物質の影響を排除できることがわかった。
上記した実施形態および実施例では、バイオセンサ３ａおよび免疫センサを、主として溶液中のグルコースおよび絨毛性ゴナドトロピンの濃度の測定用のセンサに適用した場合について説明したが、本発明は、何等、これに限定されることなく、触媒反応により、測定対象物質を過酸化水素に変換可能な全ての物質の濃度測定に用いることができる。
また、本出願は、２００７年１１月７日に出願された、日本国特許出願第２００７−２８９８３６号からの優先権を基礎として、その利益を主張するものであり、その開示はここに全体として参考文献として取り込む。
（実施例１）
図１に示す電気化学測定装置３を作製し、過酸化水素と干渉物質を含む溶液中で、定電位測定により、干渉物質の１つであるアスコルビン酸に対する過酸化水素の電流比率を算出し、作用電極９の過酸化水素の選択性の評価を行った。
まず、作用電極９（電気化学測定装置用電極１）の製作を以下のように行った。
はじめに、イリジウムワイヤとレニウムワイヤを用意し、アーク放電によってイリジウム−レニウム合金を製造した。
イリジウム−レニウム合金としては、イリジウムとレニウムの重量比率が１００：０、９９：１、９０：１０、５５：４５、１０：９０、０：１００の６種類のものを製造した。
次に、製造したイリジウム−レニウム合金を、プリント配線が施されたフレキシブル基板に接着剤を用いて固定化し、ワイヤボンデングによって結線した後、シリコーン封止剤で防水処理を施し、作用電極９（電気化学測定装置用電極１）とした。
なお、作用電極９の電極面積は５９．０〜７１．４×１０−６ｍ２（５９．０〜７１．４ｍｍ２）とした。
次に、参照電極５として既存のガラス複合電極（東亞ディーケーケー（株）社製、ＧＳＴ−５７４１Ｃ）を用意し、対極７として既存の白金電極（ＢＡＳ社製、００２２３３）を用意した。
次に、溶液１５として、１００ｍｏｌ／ｍ３（１００ｍＭ）のエヌ−トリス（ハイドロキシ−メチル）−メチル−２−アミノエタンサルフォニックアシッド（同仁化学研究所製ｐＨ緩衝液、ｐＨを７に調整済み、１５０ｍｏｌ／ｍ３（１５０ｍＭ）の塩化ナトリウムを含む、以下ＴＥＳと記述）を用意し、溶液１５の入った０．１リットル容量のビーカーに作用電極９、参照電極５、対極７を浸漬し、配線１１を通じてこれらの電極を測定装置１３に接続し、電気化学測定装置３を作製した。
測定は過酸化水素およびアスコルビン酸に対する定電位測定として、０．５Ｖ、０．７Ｖおよび０．９Ｖ印加時の応答電流を測定した。
これらの電位を印加し、定常状態となった電流から、両者を添加したときに得られる応答電流の差とした。
各印加時に得られるアスコルビン酸（干渉物質）に対する過酸化水素の電流比率を算出した。結果を図５に示す。
図５に示すように、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１、９０：１０、５５：４５の場合に、過酸化水素に対して選択的に応答電流を示した。
特に、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１、９０：１０の場合（イリジウムに対するレニウム含有量が１〜１０重量％の場合）に、特に過酸化水素に対して選択的に応答電流を示すことがわかった。
即ち、上記組成範囲の場合は、過酸化水素を選択的に酸化し酸化力が大きいが、アスコルビン酸への酸化力は小さいことが示された。
一方で、イリジウムとレニウムの重量比率が１００：０および１０：９０、０：１００の場合は、アスコルビン酸の酸化力も過酸化水素と同等であり、作用電極９は干渉物質の影響を受けることがわかった。
（実施例２）
実施例１において、評価時の印加電位を０．７Ｖのみとし、他は同様の条件において、干渉物質としての尿酸およびアセトアミノフェンに対する評価を実施例１と同様に行った。
結果を図６に示す。
図６に示すように、本実施例のイリジウム−レニウム合金の電極は、アスコルビン酸と同様に尿酸およびアセトアミノフェンに対しても、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１、９０：１０、５５：４５の場合の時に酸化力が小さく、過酸化水素を選択的に酸化させることがわかった。
また、過酸化水素の選択的酸化の効果は、イリジウムに対するレニウム含有率が１０重量％の時に最も優れていることがわかった。
（実施例３）
図２に示すバイオセンサ３ａをグルコース測定用のバイオセンサとして作製し、アスコルビン酸と、濃度が既知のグルコースを含む溶液１５ａ中でのグルコースの濃度を測定し、作用電極２５ａの過酸化水素への選択性の評価を行った。
はじめに、イリジウム−レニウム合金の電気化学測定装置用電極１を、実施例１と同様に、イリジウムとレニウムの重量比率が９０：１０となるように作製した。
次に、作製した電気化学測定装置用電極１の表面に１ｖ／ｖ％のγ−アミノプロピルトリエトキシシラン（信越化学（株）社製）を塗布した後、１１０℃で１時間加熱した。
加熱終了後、１００ｍｏｌ／ｍ３（１００ｍＭ）ＴＥＳで２２．５ｗ／ｖ％に調整した牛血清アルブミン溶液（１ｖ／ｖ％のグルタルアルデヒドと５６．５Ｕ×１０−６／リットル（５６．５Ｕ／μｌ）のグルコース酸化酵素を含む）を同様に塗布し、２．５±１℃の冷蔵庫で２４時間乾燥させて作用電極９ａ（バイオセンサ用電極４ａ）を製造した。
また、参照電極５、対極７も用意し、溶液１５ａにこれらの電極を浸漬し、配線１１を通じてこれらの電極を測定装置１３ａに接続し、バイオセンサ３ａを作製した。
なお、比較例として作用電極に、イリジウム−レニウム合金の代わりに白金を用いた電極を用いたバイオセンサ用電極を作成し、これを用いたバイオセンサを作製した。
溶液１５ａとしてはバイオラッド・ラボラトリーズ社製のライフォチェックのコントロール尿を用い、アスコルビン酸を５０×１０−５ｋｇ／リットル（５０ｍｇ／ｄｌ）となるように添加し、グルコースを１０×１０−５ｋｇ／リットル（１０ｍｇ／ｄｌ）となるように添加した。
つづいて、バイオセンサ３ａを０、５、１０、２０×１０−５ｋｇ／リットル（０、５、１０、２０ｍｇ／ｄｌ）のグルコース溶液で検量線を作成しておき、コントロール尿中のグルコース濃度を測定した。
測定は０．９Ｖ定電位測定で３回繰り返した。
その結果、イリジウム−レニウム合金の電極を用いたバイオセンサ３ａは１０．８±０．３×１０−５ｋｇ／リットル（１０．８±０．３ｍｇ／ｄｌ）、白金電極を用いたバイオセンサは３０．１±３．６×１０−５ｋｇ／リットル（３０．１±３．６ｍｇ／ｄｌ）をそれぞれ示した。
イリジウム−レニウム合金を用いた本実施例のバイオセンサ３ａはほぼ正確なグルコース濃度を測定できたが、白金電極を用いた比較例のバイオセンサはアスコルビン酸の酸化電流に伴う干渉を受けて正確なグルコース濃度を測定することができなかった。
（実施例４）
実施例３で用いたバイオセンサ３ａを用意した。
バイオセンサ３ａの各電極を室温下でＴＥＳ溶液中に浸漬し、一定日数毎に１０×１０−５ｋｇ／リットル（１０ｍｇ／ｄｌ）のグルコースと１×１０−５ｋｇ／リットル（１ｍｇ／ｄｌ）のアスコルビン酸を測定し、電極の安定性を評価した。
評価は０．９Ｖ印加時における過酸化水素の電流値に対するアスコルビン酸の電流値の比率を算出した。
結果を図７に示す。
なお、図７におけるグラフ中の「Ｐｔ」は白金電極を用いたバイオセンサ（比較例）の測定値であり、「Ｉｒ−Ｒｅ」はイリジウム−レニウム合金電極を用いたバイオセンサ３ａ（本実施例）の測定値である。
図７に示すように、白金電極を用いたバイオセンサは過酸化水素よりもアスコルビン酸に対して高い電流を示し、その電流比率は５．５−６．１（アスコルビン酸／過酸化水素）であり、２７日間にわたって安定していた。
一方で、イリジウム−レニウム合金電極を用いたバイオセンサ３ａはグルコースから生成される過酸化水素に対して選択的に電流を示し、アスコルビン酸に対してはほとんど電流を示さなかった。
電流比率は０．０６−０．１（アスコルビン酸／過酸化水素）であり、２７日間ほとんど変動せずに安定していた。
（実施例５）
実施例３において、固定化酵素層６の代わりに固定化抗体層を設けた作用電極を用いた免疫センサを用意し、アスコルビン酸と、濃度が既知の絨毛性ゴナドトロビンを含む溶液中での絨毛性ゴナドトロビンの濃度を測定し、作用電極の過酸化水素への選択性の評価を行った。
作用電極の製作は次のように行った。
はじめに、電気化学測定装置用電極１を、実施例１と同様に、イリジウムとレニウムの重量比率が９０：１０となるように作製した。
作製した電気化学測定装置用電極１を、１×１０−３ｋｇ／０．２リットル（１ｍｇ／０．２ｍｌ）のヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体（ハイテスト社製のマウス免疫のモノクローナル抗体）の溶液に１時間浸漬した。
浸漬後、３ｍｏｌ／ｍ３（３ｍＭ）の１、３−ジアミノベンゼン（アルドリッチ（株）社製、ＵＳＡ、ｐＨ７．４のリン酸緩衝液および０．１×１０３ｍｏｌ／ｍ３（０．１Ｍ）の塩化ナトリウムを含む）中にさらに浸漬し、０から０．８Ｖを２×１０−３Ｖ／ｓ（２ｍＶ／ｓ）で１００回掃引し、次いで０．６５Ｖで５時間印加し、その後に１ｗ／ｖ％のポリビニルアルコール溶液中に１時間浸漬することによって、前述の抗体を固定化した。
比較例として白金を用いた電極に同様の工程で同種の抗体を固定化した。
溶液としてはバイオラッド・ラボラトリーズ社製のライフォチェックのコントロール尿を用い、アスコルビン酸（和光純薬工業（株）社製）として５０×１０−５ｋｇ／リットル（５０ｍｇ／ｄｌ）と、絨毛性ゴナドトロビン（アスペン・バイオ・ファーマ社製のヒト妊婦の尿由来のβサブユニット）として６０×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（６０ｎＭ）を、それぞれ終濃度として添加した。
つづいて、実施例と比較例の免疫センサを０，６６、１３２×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（０，６６，１３２ｎＭ）絨毛性ゴナドトロピン溶液で検量線を作成しておき、溶液中の絨毛性ゴナドトロピン濃度を測定した。測定は０．１−１．２Ｖ掃引範囲、４０×１０−３（４０ｍＶ）のパルス電位、４Ｈｚの周波数、１０×１０−３Ｖ（１０ｍＶ）のステップ電位とする方形波ボルタンメトリ法で３回繰り返した。
その結果、イリジウム−レニウム合金の電極を用いた免疫センサは１．１Ｖにおいて、６１．１±０．６×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（６１．１±０．６ｎＭ）、白金電極を用いた免疫センサは１１８±１２．２×１０−６ｍｏｌ／ｍ３（１１８±１２．２ｎＭ）をそれぞれ示した。
作用電極にイリジウム−レニウム合金を用いた本実施例の免疫センサはほぼ正確に絨毛性ゴナドトロピンの濃度を示したが、白金電極を用いた比較例の免疫センサはアスコルビン酸の酸化電流に伴う干渉を受けて正確な濃度を測定することができなかった。
このように、本実施例の電気化学測定装置用電極１は、免疫センサに用いた場合においても干渉物質の影響を排除できることがわかった。
上記した実施形態および実施例では、バイオセンサ３ａおよび免疫センサを、主として溶液中のグルコースおよび絨毛性ゴナドトロピンの濃度の測定用のセンサに適用した場合について説明したが、本発明は、何等、これに限定されることなく、触媒反応により、測定対象物質を過酸化水素に変換可能な全ての物質の濃度測定に用いることができる。
また、本出願は、２００７年１１月７日に出願された、日本国特許出願第２００７−２８９８３６号からの優先権を基礎として、その利益を主張するものであり、その開示はここに全体として参考文献として取り込む。
Claims (40)
- 少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金で構成されていることを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極。
- 前記合金は、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲であることを特徴とする請求項１記載の電気化学測定装置用電極。
- 少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲である合金で構成されていることを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極。
- 前記合金は、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜９０：１０の範囲であることを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の電気化学測定装置用電極。
- 前記合金は、
イリジウム−レニウム合金であることを特徴とする請求項１〜４のいずれかに記載の電気化学測定装置用電極。 - 少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金で構成された電気化学測定装置用電極を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素の濃度を検出する、検出装置。
- 請求項１〜５のいずれかに記載の電気化学測定装置用電極の表面に、固定化酵素層および／または固定化抗体層を設けてなることを特徴とする、溶液中の測定対象物質を検出する、バイオセンサ用電極。
- 前記固定化酵素層は、
前記測定対象物質を、過酸化水素に変換可能な少なくとも１つの種類の酵素を有し、
前記固定化酵素層が変換した過酸化水素を前記電気化学測定装置用電極が検出することにより、前記測定対象物質を検出することを特徴とする請求項７記載のバイオセンサ用電極。 - 前記酵素は、
乳酸酸化酵素、グルコース酸化酵素、尿酸酸化酵素、尿素酸化酵素、アルコール酸化酵素、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ、サルコシンオキシダーゼのうちの少なくとも１つであることを特徴とする請求項８記載のバイオセンサ用電極。 - 前記固定化抗体層は、
前記測定対象物質と反応可能な少なくとも１つの種類の抗体を有し、
前記固定化抗体層中の前記抗体と前記測定対象物質との反応により生じる電流を、前記電極が検出することにより、前記測定対象物質を検出することを特徴とする請求項７記載のバイオセンサ用電極。 - 前記抗体は、
ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体であることを特徴とする請求項１０記載のバイオセンサ用電極。 - 前記電気化学測定装置用電極を保持する絶縁基板と、
前記電気化学測定装置用電極と前記固定化酵素層および／または固定化抗体層の間に設けられ、かつ前記電気化学測定装置用電極を覆うように、前記絶縁基板および電気化学測定装置用電極上に設けられた結合層と、
をさらに有することを特徴とする請求項７〜１１記載のバイオセンサ用電極。 - 請求項７〜１２のいずれかに記載のバイオセンサ用電極を有することを特徴とする、溶液中の測定対象物質の濃度を測定する、バイオセンサ。
- 少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金を、放電アーク法、蒸着法、スパッタリング法のいずれかで製造する工程を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極の製造方法。
- 前記工程は、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲である合金を製造する工程であることを特徴とする請求項１４記載の電気化学測定装置用電極の製造方法。
- 少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜５０：５０の範囲である合金を、放電アーク法、蒸着法、スパッタリング法のいずれかで製造する工程を有することを特徴とする、溶液中の過酸化水素を検出する、電気化学測定装置用電極の製造方法。
- 前記工程は、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜９０：１０である合金を製造する工程であることを特徴とする請求項１４〜１６のいずれかに記載の電気化学測定装置用電極の製造方法。
- 請求項１〜５のいずれかに記載の電気化学測定装置用電極の表面に固定化酵素層および／または固定化抗体層を設ける工程を有することを特徴とする、溶液中の測定対象物質を検出する、バイオセンサ用電極の製造方法。
- 前記工程は、
前記測定対象物質を、過酸化水素に変換可能な少なくとも１つの酵素を前記電気化学測定装置用電極の表面に固定して固定化酵素層を設ける工程であることを特徴とする請求項１８記載のバイオセンサ用電極の製造方法。 - 前記工程は、
乳酸酸化酵素、グルコース酸化酵素、尿酸酸化酵素、尿素酸化酵素、アルコール酸化酵素、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ、サルコシンオキシダーゼのうち、少なくとも１つを前記電気化学測定装置用電極の表面に固定して固定化酵素層を設ける工程であることを特徴とする請求項１９記載のバイオセンサ用電極の製造方法。 - 前記工程は、
前記測定対象物質前記測定対象物質と反応可能な少なくとも１つの抗体を前記電気化学測定装置用電極の表面に固定して固定化抗体層を設ける工程であることを特徴とする請求項１８記載のバイオセンサ用電極の製造方法。 - 前記工程は、
ヒト絨毛性ゴナドトロピン抗体を前記電気化学測定装置用電極の表面に固定して固定化抗体層を設ける工程であることを特徴とする請求項２１記載のバイオセンサ用電極の製造方法。 - 少なくともイリジウムとレニウムを含み、かつ、イリジウムとレニウムとを、過酸化水素の選択性が得られるような組成となるように含有した合金で構成された電気化学測定装置用電極を有する検出装置を用い、電流検出方式により、溶液中の過酸化水素の濃度を検出することを特徴とする検出方法。
- 請求項１３記載のバイオセンサを用い、電流検出方式により、溶液中の測定対象物質の濃度を測定することを特徴とする検出方法。
- 前記電気化学測定装置用電極を作用極として機能させ、前記溶液中の過酸化水素を酸化することによって前記溶液中の過酸化水素の濃度を検出することを特徴とする請求項２３に記載の検出方法。
- 前記検出装置が、参照電極と対極を有していることを特徴とする請求項２５に記載の検出方法。
- 電流電位測定もしくは定電位測定を実施することを特徴とする請求項２５または２６のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記電気化学測定装置用電極が作用極として機能することを特徴とする請求項６に記載の検出装置。
- 参照電極と対極を有することを特徴とする請求項２８に記載の検出装置。
- 電流電位測定もしくは定電位測定を実施する装置を有することを特徴とする請求項６、請求項２８または２９のいずれか一項に記載の検出装置。
- 請求項１３に記載のバイオセンサを用い、前記バイオセンサ用電極を少なくとも作用極として機能させ、電気化学測定を実施することによって、溶液中の測定対象物質の濃度を検出することを特徴とする検出方法。
- 前記バイオセンサが、参照電極と対極を有することを特徴とする請求項３１に記載の検出方法。
- 電流電位測定もしくは定電位測定を実施することを特徴とする請求項３１または３２のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記バイオセンサ用電極が作用極として機能し、電気化学測定を実施することによって溶液中の測定対象物質を検出することを特徴とする請求項１３記載のバイオセンサ。
- 参照電極と対極を有することを特徴とする請求項３４記載のバイオセンサ。
- 電流電位測定もしくは定電位測定を実施する装置を有することを特徴とする請求項１３、請求項３４、請求項３５のいずれか一項に記載のバイオセンサ。
- 前記合金は、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜９０：１０の範囲であることを特徴とする請求項６、請求項２８乃至３０のいずれか一項に記載の検出装置。
- 前記合金は、イリジウム−レニウム合金であることを特徴とする請求項６または請求項３７のいずれかに記載の検出装置。
- 前記合金は、イリジウムとレニウムの重量比率が９９：１〜９０：１０の範囲であることを特徴とする請求項２３、２５乃至２７のいずれか一項に記載の検出方法。
- 前記合金は、イリジウム−レニウム合金であることを特徴とする請求項２３または請求項３９のいずれかに記載の検出方法。
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