JP5048100B2 - アディポネクチンに対する結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いた分析方法および分析装置 - Google Patents
アディポネクチンに対する結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いた分析方法および分析装置 Download PDFInfo
- Publication number
- JP5048100B2 JP5048100B2 JP2010104272A JP2010104272A JP5048100B2 JP 5048100 B2 JP5048100 B2 JP 5048100B2 JP 2010104272 A JP2010104272 A JP 2010104272A JP 2010104272 A JP2010104272 A JP 2010104272A JP 5048100 B2 JP5048100 B2 JP 5048100B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- peptide
- adiponectin
- present
- group
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
本発明は、50個以下のアミノ酸からなり、かつアディポネクチンに対する結合性を有しているペプチドを提供する。一実施形態において、本発明に係るペプチドは、配列番号1〜15のいずれか1つに示されるアミノ酸配列を含んでいるペプチドである。また、一実施形態において、本発明に係るペプチドは、配列番号1〜15のいずれか1つに示されるアミノ酸配列において1または数個のアミノ酸の置換または付加が生じているアミノ酸配列を含んでいるペプチドである。
(a)親水性かつ中性を示すアミノ酸の群・・・アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニンおよびグリシン
(b)酸性を示すアミノ酸の群・・・アスパラギン酸およびグルタミン酸
(c)塩基性を示すアミノ酸の群・・・ヒスチジン、リジンおよびアルギニン
(d)疎水性かつ中性を示すアミノ酸の群・・・アラニン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、バリンおよびメチオニン
(e)芳香環を有するアミノ酸の群・・・フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシン。
本発明に係る基材は、本発明に係るペプチドの少なくとも1種が固定化されていることを特徴としている。本明細書において、「基材」はペプチドに足場を提供する(すなわちペプチドが固定化される)ものであれば特に限定されない。基材としては、例えば、ポリスチレンおよびポリカーボネートなどのプラスチック、セルロースおよびデキストランなどの生体高分子、金(Au)、銅(Cu)、銀(Ag)、白金(Pt)およびチタン(Ti)などの金属、ガラス、セラミックス、樹脂などが挙げられる。これらの基材は、用途に応じて任意の形状で用いることができ、例えば、基板(スライド、プレート、チップ、チューブなど)、微粒子、ビーズ、メンブレンなどであってもよい。
本発明は、アディポネクチンを分析する方法を提供する。本発明に係る分析方法は、本発明に係るペプチドの少なくとも1種、または本発明に係る基材を用いてアディポネクチンを分析することを特徴としている。より具体的には、本発明に係る分析方法は、本発明に係るペプチドとアディポネクチンとの複合体を分析する工程を包含している。この工程は、アディポネクチンがペプチドに結合していることを示すシグナル(吸光度、蛍光強度、蛍光偏光、表面プラズモン共鳴(SPR)、または水晶マイクロバランス(QCM)など)を従来公知の方法によって分析する工程であればよい。
本発明は、アディポネクチンを分析するための装置を提供する。具体的には、本発明は、上述した分析方法を実行するための分析装置を提供する。本発明に係る分析装置は、サンプル中のアディポネクチンを分析するために、サンプルを受容するサンプル受容部を備えており、アディポネクチンを捕捉する捕捉部が該サンプル受容部の内部に設けられており、捕捉部には、本発明に係るペプチドが固定化されているか、あるいは本発明に係る基材が配置されていればよい。
サンプル中の、アディポネクチン以外の物質(非検出対象物質)が、微細流路3、固定化部5および分析部8に非特異的に吸着することを防ぐために、非特異吸着防止剤を注入部2から導入して、微細流路3内を満たす。次いで、この非特異吸着防止剤を排出部3から排出する。洗浄溶液を注入部2から導入し、微細流路3内を通過させて排出部4から排出する。これにより、微細流路3内に残留する余分な非特異吸着防止剤を取り除く。好適な非特異的吸着防止剤としては、例えば、牛血清アルブミン(BSA)カゼイン、および高分子ポリマーが挙げられる。
サンプルを注入部2から微細流路3内に導入する。サンプルは、微細流路3内を移動して固定化部5へ送達される。サンプルが固定化部5を通過する間に、サンプル中のアディポネクチンが固定化部5の第1のペプチドと結合して、固定化部5にて捕捉される。次いで、洗浄溶液を注入部2から導入し、微細流路3内を移動させて排出部4から排出する。これにより、微細流路3内に残留する余分なサンプルを取り除く。
標識された第2のペプチドを、注入部2から微細流路3内に導入して、固定化部5へ送達する。この第2のペプチドが固定化部5を通過する間に、第2のペプチドは固定化部5に捕捉されているアディポネクチンと結合する。この操作によって、固定化部5内に捕捉されたアディポネクチンが標識される。
分析手段7を用いて標識を検出することによって、分析部8にてアディポネクチンを分析することが可能となる。標識化合物としては、例えば、蛍光化合物または酵素を用いることができる。
上記「3」において標識化合物が蛍光化合物であった場合、分析部8の蛍光を直接観察することによって、アディポネクチンを分析することができる。
上記「3」において標識化合物が酵素であった場合、酵素を含む本発明に係るペプチド体をアディポネクチンに結合させた後に、この酵素に対する基質溶液を注入部2から微細流路3内に導入する。基質溶液が固定化部5を通過する間に、アディポネクチンに結合した本発明に係るペプチドの酵素と基質溶液とが反応する。この反応の結果によって得られるシグナルを公知の方法を用いて検出することによってアディポネクチンを分析することができる。当業者は、このような方法を、使用する基質の種類に応じて、適宜選択することができる。
本発明に係る遺伝子は、本発明に係るペプチドをコードする遺伝子であることを特徴としている。本明細書中で使用される場合、用語「遺伝子」は、「ポリヌクレオチド」、「核酸」または「核酸分子」と交換可能に使用され、ヌクレオチドの重合体が意図される。本明細書中で使用される場合、用語「ヌクレオチド配列」は、「核酸配列」または「塩基配列」と交換可能に使用され、デオキシリボヌクレオチド(A、G、CおよびTと省略される)の配列として示される。
本発明に係る組換えベクターは、本発明に係る遺伝子を含んでいることを特徴としている。例えば、本発明に係るペプチドをコードする遺伝子が挿入された組換え発現ベクターが挙げられる。後述するように、このような組換え発現ベクターを宿主に導入することによって、本発明に係るペプチドを宿主中において生成することができる。
本発明に係る形質転換体は、本発明に係る組換えベクターを含んでいることを特徴としている。形質転換の対象となる生物としては特に限定されるものではなく、上述の宿主を挙げることができる。すなわち、本明細書において、「形質転換体」は、細胞だけでなく、生物個体を含むことが意図される。
<セルロースメンブレン上でのペプチドの合成(スポット合成)>
アディポネクチンに対する結合性を有するアミノ酸配列を同定するために、Fmoc法によるペプチドスポット合成法を利用したペプチド合成装置(Model MultiPep RS(Intavis AG))を用いて、セルロースメンブレン上においてペプチドを合成した。
酵素免疫法の1つであるサンドイッチ法を用いて、上述のようにして合成した各ペプチドとアディポネクチンとの結合を測定した。
実施例1と同様の方法に従って、配列番号16に示すアミノ酸配列からなるペプチドを合成した。そして、合成したペプチドとアディポネクチンとの結合を実施例1と同様にして測定した。
実施例1および比較例1における測定の結果を図3に示す。配列番号1〜15に示すアミノ酸配列からなるペプチド(実施例1)は、配列番号16に示すアミノ酸配列からなるペプチド(比較例1)に比べて有意に高い蛍光強度を示した。よって、配列番号1〜15に示すアミノ酸配列からなるペプチドは、アディポネクチンに結合することが示された。
<マイクロプレートを用いた酵素免疫法によるペプチドとアディポネクチンとの結合の測定>
酵素免疫法を用いて、マイクロプレートに固定化されたアディポネクチンと、ビオチンを標識したペプチド(ビオチン標識ペプチド)との結合を以下のようにして測定した。
実施例2と同様の方法によって、配列番号17に示すアミノ酸配列からなるペプチドとアディポネクチンとの結合を測定した。
実施例2および比較例2における測定の結果を図4に示す。配列番号14および15に示すアミノ酸配列からなるペプチド(実施例2)は、配列番号17に示すアミノ酸配列からなるペプチド(比較例2)に比べて有意に高い吸光度を示した。よって、配列番号14および15に示すアミノ酸配列からなるペプチドは、アディポネクチンに結合することが示された。
<アミノ酸が置換されたペプチドとアディポネクチンとの結合の測定>
上述の「(1)本発明に係るペプチド」に示した、アミノ酸を分類した群に基づいて、アミノ酸の保存的置換を行ったペプチドと、アディポネクチンとの結合を以下のようにして測定した。
実施例3における測定の結果を図5に示す。配列番号18、19に示すアミノ酸配列からなるペプチドは、配列番号8、9に示すアミノ酸配列からなるペプチドに比べて同程度の蛍光強度を示した。すなわち、配列番号18、19に示すアミノ酸配列からなるペプチドは、アディポネクチンに対する結合性を保持していた。
2 注入部
3 微細流路
4 排出部
5 固定化部
6 基板
7 分析手段
8 分析部
9 蓋
12 注入孔
14 排出孔
Claims (16)
- 下記(i)または(ii)の、アディポネクチンに対する結合性を有している、ペプチド:
(i) 配列番号1〜15、18および19のいずれか1つに示されるアミノ酸配列からなる、ペプチド;または
(ii)配列番号1〜15のいずれか1つに示されるアミノ酸配列において1個のアミノ酸の置換が生じているアミノ酸配列からなり、かつアディポネクチンに対する結合性を有しており、上記アミノ酸の置換が、
(a)アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニンおよびグリシンからなる群、
(b)アスパラギン酸およびグルタミン酸からなる群、
(c)ヒスチジン、リジンおよびアルギニンからなる群、
(d)アラニン、イソロイシン、ロイシン、プロリン、バリンおよびメチオニンからなる群、ならびに
(e)フェニルアラニン、トリプトファンおよびチロシンからなる群
より選択される単一の群に含まれる2つのアミノ酸の間で生じている保存的置換である、ペプチド。 - 請求項1に記載のペプチドにリンカーを結合させてなる、アディポネクチンに対する結合性を有しているペプチド。
- 請求項1に記載のペプチドに標識化合物を付加させてなる、アディポネクチンに対する結合性を有しているペプチド。
- 前記標識化合物は、生体関連分子であることを特徴とする請求項3に記載のペプチド。
- 前記生体関連分子は、酵素、ビオチンおよびアビジンからなる群より少なくとも1つ選択されることを特徴とする請求項4に記載のペプチド。
- 前記標識化合物は、蛍光化合物であることを特徴とする請求項3に記載のペプチド。
- 請求項1〜6のいずれか一項に記載のペプチドの少なくとも1種が固定化されていることを特徴とする基材。
- サンプルを受容するサンプル受容部を備えており、アディポネクチンを捕捉する捕捉部が該サンプル受容部の内部に設けられており、該捕捉部には、請求項1〜6のいずれか一項に記載のペプチドの少なくとも1種が固定化されていることを特徴とするアディポネクチン分析用装置。
- サンプルを受容するサンプル受容部を備えており、アディポネクチンを捕捉する捕捉部が該サンプル受容部の内部に設けられており、該捕捉部には、請求項7に記載の基材が配置されていることを特徴とするアディポネクチン分析用装置。
- 前記サンプル受容部が流路を形成していることを特徴とする請求項8または9に記載の装置。
- 捕捉されたアディポネクチンを分析する分析手段が、前記サンプル受容部の内部の分析部に向けてさらに備えられていることを特徴とする請求項8〜10のいずれか一項に記載の装置。
- 前記分析部が前記捕捉部の下流であることを特徴とする請求項11に記載の装置。
- 基板上に形成されたマイクロチャネル型であることを特徴とする請求項8〜12のいずれか1項に記載の装置。
- 請求項1に記載のペプチドをコードしていることを特徴とする遺伝子。
- 請求項14に記載の遺伝子を含んでいることを特徴とする組換えベクター。
- 請求項15に記載の組換えベクターを含んでいることを特徴とする形質転換体。
Priority Applications (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010104272A JP5048100B2 (ja) | 2010-04-28 | 2010-04-28 | アディポネクチンに対する結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いた分析方法および分析装置 |
US13/094,472 US8445633B2 (en) | 2010-04-28 | 2011-04-26 | Peptide having bindability with adiponectin, analysis method utilizing same peptide, and analysis device utilizing same peptide |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010104272A JP5048100B2 (ja) | 2010-04-28 | 2010-04-28 | アディポネクチンに対する結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いた分析方法および分析装置 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2011231069A JP2011231069A (ja) | 2011-11-17 |
JP5048100B2 true JP5048100B2 (ja) | 2012-10-17 |
Family
ID=44858542
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2010104272A Expired - Fee Related JP5048100B2 (ja) | 2010-04-28 | 2010-04-28 | アディポネクチンに対する結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いた分析方法および分析装置 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8445633B2 (ja) |
JP (1) | JP5048100B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110108624B (zh) * | 2019-05-08 | 2020-06-16 | 中国科学院化学研究所 | 一种功能化磷脂制备纳米单颗粒的方法及该纳米单颗粒的检测 |
Family Cites Families (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4214202B2 (ja) | 2001-08-17 | 2009-01-28 | 富士レビオ株式会社 | 糖代謝異常の診断又はモニタリング方法 |
AU2002328630B2 (en) | 2001-08-17 | 2005-09-01 | Fujirebio Inc. | Method of diagnosing or monitoring saccharometabolic error |
EP2141235B1 (en) * | 2002-12-29 | 2014-06-11 | Toudai Tlo, Ltd. | Adiponectin receptor and gene coding for the same |
JP4347874B2 (ja) * | 2002-12-29 | 2009-10-21 | 株式会社東京大学Tlo | アディポネクチン受容体及びそれをコードする遺伝子 |
CA2520438C (en) * | 2003-03-24 | 2011-06-21 | Tetsuya Tachikawa | Latex reagent for adiponectin analysis and method of adiponectin analysis |
US7435808B2 (en) * | 2003-06-25 | 2008-10-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Polynucleotides encoding novel adiponectin receptor variant, AdipoR2v2 |
-
2010
- 2010-04-28 JP JP2010104272A patent/JP5048100B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2011
- 2011-04-26 US US13/094,472 patent/US8445633B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US8445633B2 (en) | 2013-05-21 |
US20110269227A1 (en) | 2011-11-03 |
JP2011231069A (ja) | 2011-11-17 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Bhandari et al. | The E3 ubiquitin ligase atrophin interacting protein 4 binds directly to the chemokine receptor CXCR4 via a novel WW domain-mediated interaction | |
JP5604782B2 (ja) | 受容体再構築物、ならびにこれを用いる疾病検査法 | |
JP2013532957A5 (ja) | ||
KR20140143140A (ko) | 피분석물을 검출 및 측정하기 위한 방법 및 장치 | |
Sung et al. | A novel method for producing mono-biotinylated, biologically active neurotrophic factors: an essential reagent for single molecule study of axonal transport | |
US8188051B2 (en) | Metadherin polypeptides, encoding nucleic acids and methods of use | |
Kim et al. | Biomimetic isolation of affinity peptides for electrochemical detection of influenza virus antigen | |
AU2015231210A1 (en) | Stabilized fibronectin based scaffold molecules | |
WO2011071280A2 (ko) | 세포내 타겟 결합용 바이포달 펩타이드 바인더 | |
JP5999542B2 (ja) | リガンド様活性を有する分子の検出方法 | |
Suzuki et al. | Construction of a more sensitive fluorescence sensing material for the detection of vascular endothelial growth factor, a biomarker for angiogenesis, prepared by combining a fluorescent peptide and a nanopillar substrate | |
KR20100093502A (ko) | 압타머를 이용한 타겟물질의 검출방법 | |
WO2012177775A1 (en) | Reagents and methods for bispecific antibody-based binding of target molecules | |
JP5048100B2 (ja) | アディポネクチンに対する結合性を有するペプチド、ならびに該ペプチドを用いた分析方法および分析装置 | |
Chen et al. | Growth stimulation expressed gene 2 (ST2): Clinical research and application in the cardiovascular related diseases | |
Limson et al. | The use of a quartz crystal microbalance with dissipation for the measurement of protein-protein interactions: a qualitative and quantitative analysis of the interactions between molecular chaperones | |
KR101227434B1 (ko) | 유방암 줄기세포 특이적 마커인 cd44 단백질 표적용 펩타이드 및 이의 이용 | |
ES2705328T3 (es) | Inmunoensayo sensible de múltiples etapas para receptores solubles de factor de crecimiento de fibroblastos | |
JP6004369B2 (ja) | 糖尿病合併症マーカーとなり得る新規rageリガンド | |
Tanaka et al. | Bivalent 14‐mer peptide ligands of CXCR4 with polyproline linkers with anti‐chemotactic activity against Jurkat cells | |
Khoirunnisa et al. | Detecting epithelial sodium channel (ENAC) protein levels as a biomarker of hypertension | |
US8673309B2 (en) | Methods for measuring high molecular weight complexes of fibrinogen with fibronectin and fibulin-1 | |
KR20140041120A (ko) | 핵산 앱타머 및 항체를 이용한 에디포카인의 ELAAS(Enzyme-Linked Antibody Aptamer Sandwich) 검출방법 | |
CN110079300B (zh) | 纳米磷光探针及其用途 | |
Kim et al. | Fluorescence detection of protein/Z-DNA interactions |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20120403 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20120518 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20120619 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20120718 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20150727 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |