JP5044782B2

JP5044782B2 - 漢方処方による神経回路網再構築剤および神経回路網の再構築方法

Info

Publication number: JP5044782B2
Application number: JP2006549013A
Authority: JP
Inventors: 千尋東田; かつ子小松
Original assignee: Toyama University
Current assignee: Toyama University
Priority date: 2004-12-22
Filing date: 2005-12-20
Publication date: 2012-10-10
Anticipated expiration: 2025-12-20
Also published as: JPWO2006068155A1; WO2006068155A1

Description

本発明は、脳内の神経回路網の破綻に起因する認識機能不全の治療に有効な漢方処方による神経回路網再構築剤およびそれを用いる神経回路網の再構築方法に関するものである。

記憶・認知に障害を呈する疾患として、アルツハイマー病、脳血管性痴呆、老年性痴呆、前頭側頭葉型痴呆、レビー小体痴呆、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病などが知られている。これらは病因が異なるものの神経突起の萎縮とシナプス欠落による機能障害により生じる疾患である。
また、神経突起の萎縮とシナプス欠落による機能障害は、筋萎縮性側索硬化症、脳出血、脳梗塞、脳腫瘍、脳外傷、脊髄損傷などでも生じる。

臨床で抗痴呆薬として用いられているコリンエステラーゼ阻害薬は、疾患の進行を遅らせるものの疾患を治療するには至らず、且つ中程度を超えた痴呆患者には有効性が現れにくい。また神経栄養因子様作用物質に分類される薬物も抗痴呆薬候補として研究されているが、いずれも神経保護作用が主であり、神経変成環境下における神経突起伸展作用とシナプス形成作用は明確に示されていない。

一方、漢方を基礎とする抗痴呆薬として、例えば、丹参、川きゅう、芍薬、紅花、木香、香附子を原料とした「冠元顆粒」（特許文献１）、芍薬、蒼朮、沢瀉、茯苓、川きゅう、当帰を原料とした「当帰芍薬散」（特許文献２）が知られている。また、人参（分量1）、遠志（分量2）、菖蒲（分量1）、白茯苓（分量3）からなる「定志円」が物忘れを治す旨、漢方処方の古典「丹渓心法」「備急千金要方」に記載されている。また、人参（分量1）、遠志（分量2）、菖蒲（分量25）、白茯苓（分量50）からなるDX-9386が動物実験において記憶障害を改善することが報告されている（非特許文献１）。

本発明者らは、人参、三七人参、黄耆が神経障害後から軸索および樹状突起の再形成、シナプスの再形成作用を有すること、三七人参のその作用は人参より若干強いことを見出してきた。(非特許文献２)

特公平7-37392号公報特許2629251号公報 Biol. Pharm. Bull., 17(11), 1472-1476 (1994) Jpn. J. Pharmacol. 90, 254-262 (2002)

アルツハイマー病、老年痴呆、脳血管性痴呆、パーキンソン病などの神経変性疾患は、病因は異なるがいずれも神経回路網の破綻により、記憶・認知に障害を呈する症候を指す。これら有効な治療法の無い疾患に対し、既に神経回路網の障害が進行している状態からでも、神経機能を正常に近づけることのできる治療が、真に求められている。しかも患者の立場を考えると、手術を要する神経細胞移植や遺伝子治療よりは、負担の少ない投薬による治療法がより望ましい。そこで、神経細胞が障害を受けている時、あるいは受けた後からでも神経回路網を再生する薬物の開発が必要である。

筋萎縮性側索硬化症は、大脳皮質運動野の運動ニューロンと脊髄、脳幹の運動ニューロンが脱落することによって手足が動かなくなる難病であり、有効な治療法は存在しない。さらに、大脳皮質運動野の運動ニューロンは、脳出血、脳梗塞、脳腫瘍、脳外傷などによっても障害を受け、身体の麻痺に繋がる。また、外傷性の脊髄損傷では、脊髄の運動ニューロンが障害を受けることにより四肢麻痺が生じる。いずれの場合も神経回路網の破綻による機能障害であるが、生き残った神経細胞を賦活化して再び神経回路網を形成させることが出来れば、機能の回復が期待できる。
本発明は、神経回路網を再生する薬物として、すでに広く使用され安全性が十分に確認されている漢方薬に基礎を置き、新たな漢方処方を開発することを目的とするものである。

本発明者らは、神経回路網の破綻の細胞モデルとして、ラット大脳皮質神経の初代培養細胞に、アルツハイマー病の原因物質であるアミロイドベータの活性部分配列（Ａβ（25-35））を処置し、軸索と樹状突起の萎縮、前シナプス数と後シナプス数の減少を呈する状態を作製した。
この状態の神経細胞に処置することで、神経細胞の神経突起とシナプスを正常状態に戻すことのできる薬物を探索することができる。
探索方法は、例えば、試験薬物として、生薬を様々に等量合わせ、水で煎じ液エキスを作成し、それを上記の細胞モデルで試験する。この方法で神経突起伸展作用を有する方剤エキスを選び出すことができる。

本発明者らは、神経回路網の破綻の動物モデルとして、マウスの側脳室内にＡβ（25-35）を単回投与し、１週間後から現れ始める空間記憶障害と、脳内の軸索と樹状突起の萎縮、前シナプス数と後シナプス数の減少を呈する状態を作製した。細胞モデルで神経突起伸展作用が認められた方剤エキスをこの状態のマウスに経口投与し、空間記憶の回復をもたらすこと、同時に脳内の軸索、樹状突起、前シナプスのいずれもが正常状態の発現量に回復することを確認する。

上記細胞モデルと動物モデルの試験結果により、三七人参および／または人参、黄耆、菖蒲、茯苓の抽出物が有効であることを見い出した。
本発明において使用される生薬は以下のものである。
三七人参（サンシチニンジン）は、田七人参（デンシチニンジン)とも呼ばれ、ウコギ科の多年草（Panax notoginseng）の根、茎である
人参は、ウコギ科の多年草オタネニンジン（Panax ginseng C.A. Meyer）の根である。畑で収穫され、取れたばかりの人参は水参と呼ばれており、4〜6年根の水参を原料として、ほとんどは皮を剥ぎ、自然乾燥または60℃以下で熱風乾燥させて水分を15%以下としたものが白参、水参に蒸気を当てて蒸したものを乾燥したものが紅参と呼ばれている。
黄耆（オウギ）は、マメ科の多年草（Astragalus membranaceus BungeまたはAstragalus mongholicus Bunge）の根である。
菖蒲（ショウブ)は、サトイモ科の水菖蒲（Acorus calamus L.）、石菖蒲（Acorus gramineus Soland）の根茎である。
茯苓（ブクリョウ)は、サルノコシカケ科茯苓菌（Poria cocos（Schw.） Wolf.）（マツホド）の菌核である。菌核の内部が淡赤色ものが赤茯苓である。

本発明の抽出物は、三七人参および／または人参1〜25重量部、黄耆1〜25重量部、菖蒲1〜25重量部、茯苓1〜25重量部の混合物を10〜25倍量の水で熱時抽出し、乾燥して得られるものである。好ましくは、三七人参および／または人参5〜15重量部、黄耆5〜15重量部、菖蒲5〜15重量部、茯苓5〜15重量の混合物を10〜20倍量の水で熱時抽出し、凍結乾燥などの乾燥をして得られるものである。さらに好ましくは、三七人参および／または人参10重量部、黄耆10重量部、菖蒲10重量部、茯苓10重量部の混合物を15倍程度の熱水で抽出し、この抽出液を凍結乾燥し得られる粉末状のエキスである。

本発明の漢方処方を医薬品とする場合、賦形剤、補助剤、添加剤などと組み合わせることにより、各種の医薬製剤、例えば、液剤、懸濁剤、シロップ剤、エリキシル剤、エキス剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、錠剤、カプセル剤などにすればよい。
また、医薬品として投与する場合、投与方法、投与量および投与回数は、患者の年齢、体重および症状によって適宜選択できるが、経口投与の場合、エキスとして1〜1000mg/kg、好ましくは100〜1000mg/ｋｇであればよい。

三七人参および／または人参、黄耆、菖蒲、茯苓の抽出物からなる漢方処方は、アミロイドベータの活性部分配列（Ａβ(25-35））に誘発される軸索および樹状突起の萎縮と、前シナプスおよび後シナプスの減少に対し、顕著な改善作用を有する。
また、これらエキスは、Ａβ(25-35)を脳室内投与することでマウスに誘発される空間記憶障害、軸索、樹状突起、前シナプスの減少を、正常レベルにまで回復させた。
これらのことから、本発明におけるエキスは、既存の薬物には無い新規の作用様式を有し、アルツハイマー病、老年痴呆、脳血管性痴呆、前頭側頭型痴呆、レビー小体痴呆、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、など種々の神経変性疾患の治療に有用あるとともに、軸索形成が必要な筋萎縮性側索硬化症、脳出血、脳梗塞、脳腫瘍、脳外傷、脊髄損傷等による運動ニューロンの障害の治療にも有用である。
次に実施例、試験例で本発明を説明するが、本発明はこれらに限定されない。

方剤１〜８の樹状突起伸展作用を神経成長因子（ＮＧＦ）と比較した図である。方剤１〜８の軸索伸展作用を神経成長因子（ＮＧＦ）と比較した図である。方剤1の空間記憶障害改善作用を示した図である。

実施例１
三七人参10ｇ、黄耆10ｇ、石菖蒲10ｇ、赤茯苓10ｇに水600mLを加え、１時間煎じた。煎じ液を凍結乾燥しエキス粉末Ａ（方剤１）を得た。

実施例２
白参10ｇ、黄耆10ｇ、石菖蒲10ｇ、赤茯苓10ｇに水600mLを加え、１時間煎じた。煎じ液を凍結乾燥しエキス粉末Ｂ（方剤２）を得た。

参考例
白参、三七人参、黄耆、石菖蒲、赤茯苓、遠志を用い、各生薬を以下の配合とし、各配合総量の15倍の水を加え、１時間煎じた。煎じ液を凍結乾燥しエキス粉末（方剤３〜８）を得た。
・方剤３：三七人参10ｇ、黄耆10ｇ、石菖蒲10ｇ、赤茯苓10ｇ、遠志10g
・方剤４：黄耆10ｇ、石菖蒲10ｇ、赤茯苓10ｇ、遠志10g
・方剤５：三七人参10ｇ、石菖蒲10ｇ、赤茯苓10ｇ
・方剤６：三七人参10ｇ、黄耆10ｇ、赤茯苓10ｇ
・方剤７：三七人参10ｇ、黄耆10ｇ、石菖蒲10ｇ
・方剤８：白参10ｇ、石菖蒲10ｇ、赤茯苓10ｇ、遠志10g

試験例１
神経回路網形成作用
（方法）胎生18日齢のSDラットの大脳皮質神経細胞を分散培養した。10μM Ａβ(25-35)を神経細胞に処置し障害を与えた。障害誘発後の神経細胞に対して方剤を処置した後、リン酸化型NF-H（軸索マーカー）、MAP2（樹状突起マーカー）、synaptophysin（前シナプスマーカー）、PSD-95（後シナプスマーカー）に対する抗体を用いた免疫染色を行い、細胞当たりの軸索、樹状突起の長さ、および樹状突起単位長さ当たりのシナプス密度を測定した。

（結果）ラット大脳皮質神経細胞の培養開始1日後に、10 μM Ａβ(25-35)を処置するとその4日後には、軸索と樹状突起の著しい萎縮が認められた。ここに、本発明エキスを100 μg/mlで処置したところ、その4日後には軸索、樹状突起のいずれもが溶媒処置群に比べて有意に伸展した。次にラット大脳皮質神経細胞を3週間培養しシナプスを十分形成させた後、10 μM Ａβ(25-35)を4日間処置すると、前シナプス、後シナプスともに顕著に減少した。ここに、本発明のエキス粉末を100 μg/mlで処置したところ、その7日後には前シナプス、後シナプスの密度がいずれも溶媒投与群に比べて有意に増加した。

試験例２
空間記憶障害改善作用
（方法）8週齢のddYマウス(雄)の右側脳室に、25 nmol Ａβ(25-35)を投与した。7日後から1日1回エキス粉末Ａ(方剤1)経口投与(1000mg/kg)し14日間続けた。方剤１の投与を始めた7日後から、モーリス水迷路にて空間記憶の獲得試験を7日間行った。獲得試験の最終日で薬物投与を中止し、その7日後に水迷路にて空間記憶の保持試験を行った。

（結果）25 nmol Ａβ(25-35)の脳室内投与により、マウスの記憶保持能力が低下した。方剤１を投与し始める、Ａβ(25-35)投与の7日後には既に、記憶障害が始まることを確認した上で、方剤１を連続経口投与した。その結果、記憶保持能力が正常マウスレベルにまで回復した。

三七人参および／または人参、黄耆、菖蒲、茯苓の抽出物は、神経回路網形成作用および空間記憶障害改善作用を示し、脳内の神経回路網の破綻に起因する認識機能不全の治療するための漢方処方として有用である。

Claims

三七人参５〜１５重量部、黄耆５〜１５重量部、菖蒲５〜１５重量部、茯苓５〜１５重量部の混合物の抽出物のみを乾燥して得られた粉末状エキスを有効成分とすることを特徴とする神経回路網再構築剤。
人参５〜１５重量部、黄耆５〜１５重量部、菖蒲５〜１５重量部、茯苓５〜１５重量部の混合物の抽出物のみを乾燥して得られた粉末状エキスを有効成分とすることを特徴とする神経回路網再構築剤。
三七人参または人参を５〜１５重量部、黄耆５〜１５重量部、菖蒲５〜１５重量部、茯苓５〜１５重量部の混合物のみから１０〜２５倍量の水で熱時抽出し、乾燥したことを特徴とする神経回路網再構築剤の製造方法。