JP5043674B2

JP5043674B2 - ２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール及びその使用

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Publication number: JP5043674B2
Application number: JP2007543320A
Authority: JP
Inventors: デルーカ，ヘクター・エフ; バーリッキー，ラファル; プラム，ロリ・エイ; クラジェット−ダーム，マーガレット
Original assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Current assignee: Wisconsin Alumni Research Foundation
Priority date: 2004-11-22
Filing date: 2005-11-18
Publication date: 2012-10-10
Anticipated expiration: 2025-11-18
Also published as: EP1817278A2; NZ555280A; EP1817278B1; US7238681B2; WO2006057932A2; MX2007006544A; CA2588417C; US20060122157A1; CA2588417A1; ES2349662T3; WO2006057932A3; ATE472528T1; JP2008520716A; DE602005022098D1; AU2005309747A1

Description

本発明は、ビタミンＤ化合物、より具体的には、２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール及びその医薬的使用に関する。

天然ホルモンである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３及びそのエルゴステロール系列の類似体、すなわち、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_２は、動物及びヒトのカルシウムホメオスタシスの極めて強力な調節因子であることが知られているが、細胞分化におけるその活性もOstrem et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 2610 (1987)で確認された。１α−ヒドロキシビタミンＤ_３、１α−ヒドロキシビタミンＤ_２、種々の側鎖同族ビタミン及びフッ素化類似体を含む、これら代謝産物の多数の構造類似体が、製造され、試験されている。本化合物のうちいくつかは、細胞分化及びカルシウム調節において活性の興味深い分離を示す。この活性の相違は、腎性骨ジストロフィー、ビタミンＤ抵抗性くる病、骨粗鬆症、乾癬及びある種の悪性疾患等の様々な疾患の治療に有用でありうる。

別のクラスのビタミンＤ類似体、すなわち、いわゆる１９−ノル−ビタミンＤ化合物は、ビタミンＤ系に典型的なＡ環環外メチレン基（炭素１９）が２個の水素原子で置換されていることを特徴とする。このような１９−ノル類似体（例えば、１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ_３）の生物学的試験は、細胞分化を誘導する場合に高力価となる選択的活性プロフィールとカルシウム動員活性が極めて低いことを示した。従って、本化合物は、悪性疾患の治療又は様々な皮膚障害の治療のための治療薬として潜在的に有用である。このような１９−ノル−ビタミンＤ類似体について二つの異なる合成方法が報告された（Perlman et al., Tetrahedron Lett. 31, 1823 (1990); Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991) 及び DeLucaら、米国特許第５，０８６，１９１号）。

米国特許第４，６６６，６３４号には、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３の２β−ヒドロキシ及びアルコキシ（例えば、ＥＤ−７１）類似体が記載されており、中外グループにより、骨粗鬆症薬の薬物及び抗腫瘍薬としての可能性が検討された。Okano et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 163, 1444 (1989)も参照されたい。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３の他の２−置換（ヒドロキシアルキル、例えば、ＥＤ−１２０及びフルオロアルキル基）Ａ環類似体も、製造され、試験された（Miyamoto et al., Chem. Pharm. Bull. 41, 1111 (1993); Nishii et al., Osteoporosis Int. Suppl. 1, 190 (1993); Posner et al., J. Org. Chem. 59, 7855 (1994), and J. Org. Chem. 60, 4617 (1995)）。

１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ_３の２−置換類似体、すなわち、２位にヒドロキシ基又はアルコキシ基で（DeLucaら、米国特許第５，５３６，７１３号）、２−アルキル基で（DeLucaら、米国特許第５，９４５，４１０号）及び２−アルキリデン基で（DeLucaら、米国特許第５，８４３，９２８号）置換された化合物も合成されたが、それらは、興味深く選択的な活性プロフィールを示す。上記研究は全て、ビタミンＤ受容体中の結合部位が、合成されたビタミンＤ類似体のＣ−２位に異なる置換基で置換できることを示す。

薬理学的に重要なビタミンＤ化合物の１９−ノル−クラスの調査を精力的に続けて、炭素２（Ｃ−２）にメチレン置換基、炭素１（Ｃ−１）にヒドロキシル基、及び炭素２０（Ｃ−２０）へ結合した短い側鎖の存在を特徴とする類似体をも合成して試験した。１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−プレグナカルシフェロールは米国特許第６，５６６，３５２号に報告され、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ホモプレグナカルシフェロールは米国特許第６，５７９，８６１号に報告され、そして１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールは米国特許第６，６２７，６２２号に報告されている。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３と比較したところ、３種類の本化合物は全て、ビタミンＤ受容体への結合活性及び細胞分化活性が比較的高いが、カルシウム血症活性（calcemic activity）は、あったとしても極めて低い。第６，５６６，３５２号、第６，５７９，８６１号及び第６，６２７，６２２号特許に開示されるように、上記化合物は、その生物学的活性のため、様々な医薬的使用の優れた候補物質となる。

本発明は、２−メチレン−１８，１９−ジノル−ビタミンＤ類似体、より具体的には、２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール、その生物学的活性、及びこれら化合物のいろいろな医薬的使用に関する。

構造的には、これら２−メチレン−１８，１９−ジノル−ビタミンＤ類似体は、下に示される一般式Ｉ：

（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を特徴とする。好ましい類似体は、次の式Ｉａ：

を有する２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロールである。

上記化合物Ｉ、特にＩａは、望ましく極めて好都合な生物学的活性態様を示す。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３の場合と比較すると、上記化合物はビタミンＤ受容体への結合は比較的高いことを特徴とするが、腸管カルシウム輸送活性は極めて低いことを特徴とし、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３と比較すると、カルシウムを骨から動員する機能は極めて低い。従って、上記化合物は、カルシウム血症活性があるとしても極めて低いと特定できる。プレプロ副甲状腺ホルモン遺伝子（Darwish & DeLuca, Arch. Biochem. Biophys. 365, 123-130, 1999）及び副甲状腺増殖を抑制する場合、血清カルシウムが超生理学的レベルに上昇するのは望ましくない。カルシウム血症活性が全くないか又は極めて低いが、分化には極めて活性な上記類似体は、腎性骨ジストロフィーの続発性副甲状腺機能亢進の抑制のための療法として有用であると考えられる。

本発明の化合物Ｉ、特にＩａはまた免疫系の不均衡を特徴とする、例えば、多発性硬化症、狼瘡、真性糖尿病、宿主対移植片拒絶反応及び臓器移植拒絶反応を含めた自己免疫疾患のヒト障害の治療及び予防に；さらに、関節リウマチ、喘息、並びにセリアック病、潰瘍性大腸炎及びクローン病等の炎症性腸疾患等の炎症性疾患の治療に、特に適することが見出された。ざ瘡、脱毛症及び高血圧症は、本発明の化合物で治療することができる他の症状である。

上の化合物Ｉ、特にＩａはまた、細胞分化活性が比較的高いことを特徴とする。従って、本化合物はまた、乾癬の治療用又は、特に、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌に対する抗癌剤としての治療薬をもたらす。さらに、本化合物は細胞分化活性がその比較的高いため、しわ、適切な皮膚水和の欠如、すなわち、乾燥皮膚、適切な皮膚引き締めの欠如、すなわち、たるんだ皮膚、及び不十分な皮脂分泌を含めた様々な皮膚状態の治療用の治療薬をもたらす。従って、本化合物を用いると、皮膚が加湿されるのみならず、皮膚の保護機能も改善される。

式Ｉ、特に式Ｉａを有する本発明の化合物はまた、動物個体の肥満症を予防又は治療する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害及び／又は体脂肪を減少させる場合に有用である。従って、ある態様では、動物個体の肥満症を予防する又は治療する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害する及び／又は体脂肪を減少させる方法としては、式Ｉの１又はそれ以上の化合物、あるいは１又はそれ以上の化合物を包含する医薬組成物の有効量を、その動物個体に投与することがあげられる。１又はそれ以上の化合物又は医薬組成物を個体へ投与することにより、動物個体の脂肪細胞分化が阻害され、遺伝子転写が阻害され及び／又は体脂肪が減少する。

１又はそれ以上の化合物は、上記疾患及び障害を治療するための組成物中に、組成物の約０．０１μｇ／ｇｍ〜約１０００μｇ／ｇｍ、好ましくは、組成物の約０．１μｇ／ｇｍ〜約５００μｇ／ｇｍの量で存在してよく、局所に、経皮で、経口で、直腸に、鼻腔内に、舌下に又は非経口で、約０．０１μｇ／日〜約１０００μｇ／日、好ましくは、約０．１μｇ／日〜約５００μｇ／日の用量で投与することができる。

発明の詳細な説明
２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール（本明細書中、１８，１９−ジノル−２ＭＰという）を合成して試験した。構造的には、この２−メチレン−１８，１９−ジノル−ビタミンＤ類似体は、本明細書の前記一般式Ｉａを特徴とし、その（保護されたヒドロキシの形）プロドラッグは、本明細書中前記一般式Ｉを特徴とする。

構造Ｉａを有する２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール及びそのプロドラッグの製造は、共通の一般的な方法、すなわち、二環式Ｗｉｎｄａｕｓ−Ｇｒｕｎｄｍａｎｎ型ケトンＩＩとアリルホスフィンオキシドＩＩＩとを対応する２−メチレン−１８，１９−ジノル−ビタミンＤ類似体ＩＶへと縮合後、本化合物のＣ−１及びＣ−３における脱保護によって達成することができる。

構造ＩＩＩ及びＩＶにおいて、基Ｘ_１及びＸ_２は、ヒドロキシ保護基、好ましくは、ｔ−ブチルジメチルシリルであるが、当該技術分野において周知のように、感受性であるかもしれない又は縮合反応の妨げになるいずれの官能基も適当に保護されるということが理解される。上記方法は、ビタミンＤ化合物の製造に有効に適用された収束的合成概念の応用である［例えば、Lythgoe et al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 590(1978); Lythgoe, Chem. Soc. Rev. 9, 449(1983); Toh et al., J. Org. Chem. 48, 1414(1983); Baggiolini et al., J. Org. Chem. 51, 3098(1986); Sardina et al., J. Org. Chem. 51, 1264(1986); J. Org. Chem. 51, 1269(1986); DeLucaら米国特許第５，０８６，１９１号；DeLucaら米国特許第５，５３６，７１３号］。

一般的な構造ＩＩを有するヒドロインダノンは知られていない。それは、本明細書中のスキームＩで示される方法により製造することができる（化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰの製造を参照）。

一般的な構造ＩＩＩを有する必要なホスフィンオキシドの製造について、Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663(1991) 及び DeLucaら米国特許第５，０８６，１９１号に記載のように、市販の（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−（−）−キナ酸より容易に得られるメチルキニケート（methyl quinicate）誘導体から出発する合成経路が開発された。

化合物Ｉ及びＩａの合成方法全体は、本明細書中にその明細書が具体的に援用される、「２−アルキリデン−１９−ノル−ビタミンＤ化合物」という米国特許第５，８４３，９２８号に記載の方法と同様である。

本明細書中及び請求の範囲中で用いられる「ヒドロキシ保護基」という用語は、ヒドロキシ官能基の一時的保護に一般的に用いられるいずれかの基、例えば、アルコキシカルボニル基、アシル基、アルキルシリル基又はアルキルアリールシリル基（以下、簡単に「シリル」基と称される）及びアルコキシアルキル基等を意味する。アルコキシカルボニル保護基は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、ｔ−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル又はアリルオキシカルボニル等のアルキル−Ｏ−ＣＯ−群である。「アシル」という用語は、１〜６個の炭素を有するアルカノイル基であって、その全ての異性体の形；又はオキサリル基、マロニル基、スクシニル基、グルタリル基のような、１〜６個の炭素を有するカルボキシアルカノイル基；又はベンゾイル基、又はハロ、ニトロ又はアルキルで置換されたベンゾイル基等の芳香族アシル基を意味する。本明細書又は請求の範囲中で用いられる「アルキル」という語は、１〜１０個の炭素を有する直鎖又は分岐状アルキル基であって、その全ての異性体の形を意味する。アルコキシアルキル保護基は、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエトキシメチル又はテトラヒドロフラニル及びテトラヒドロピラニル等の群である。好ましいシリル保護基は、トリメチルシリル基、トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、ジブチルメチルシリル基、ジフェニルメチルシリル基、フェニルジメチルシリル基、ジフェニル−ｔ−ブチルシリル基及び類似のアルキル化シリル基である。「アリール」という用語は、フェニル基、又はアルキル、ニトロ又はハロで置換されたフェニル基を意味する。

「保護されたヒドロキシ」基は、ヒドロキシ官能基の一時的又は永久的保護に一般的に用いられる上のいずれかの基、例えば、前に定義のシリル基、アルコキシアルキル基、アシル基又はアルコキシカルボニル基によって保護された又は誘導体化されたヒドロキシ基である。「ヒドロキシアルキル」、「ジュウテロアルキル」及び「フルオロアルキル」という用語は、それぞれ、１個又はそれを超えるヒドロキシ基、ジュウテリウム基又はフルオロ基で置換されたアルキル基を意味する。

より具体的には、化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰの製造の詳細な説明については、次の説明並びに本明細書中のスキーム１を参照すべきである。

デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノルコラン−８β，２２−ジオール（１）
メタノール（４００ｍＬ）及びピリジン（５ｍＬ）中のビタミンＤ_２化合物（５ｇ，１２．７ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴンでパージしながら−７８℃に冷却した。アルゴン流を止め、そしてオゾン流を青色になるまで通過させた。その溶液を、青色が消失するまで酸素でパージし、そしてＮａＢＨ_４（１．２ｇ，３２ｍｍｏｌ）で処理した。２０分後、第二部分のＮａＢＨ_４（１．２ｇ，３２ｍｍｏｌ）を加え、反応を室温に暖めた。第三部分のＮａＢＨ_４（１．２ｇ，３２ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で一晩撹拌した。その反応を、７０ｍＬの水で急冷して真空下で濃縮した。残留物を、塩化メチレン（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を、１ＭＨＣｌ水溶液（２×１００ｍＬ）で、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１００ｍＬ）で洗浄し、無水ＭｇＳＯ_４上で乾燥させ、真空下で濃縮した。残留物を、フラッシュクロマトグラフィー（２５％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、２．０５ｇ（９．６９ｍｍｏｌ，７６％収率）のジオール１を白色結晶として得た。［α］_Ｄ＋５６．０（ｃ０．９５，ＣＨＣｌ_３）；ｍｐ．１１０〜１１１℃；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．９６（３Ｈ，ｓ），１．０３（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），３．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），３．６４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．５Ｈｚ，Ｊ＝３．２Ｈｚ），４．０９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．６，１６．６，１７．４，２２．６，２６．６，３３．５，３８．２，４０．２，４１．３，５２．３，５２．９，６７．８，６９．２；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２１２（２，Ｍ^＋），１９４（１７），１７９（１８），１６３（１０），１３５（１９），１２５（３４），１１１（１００）；Ｃ_１３Ｈ_２２Ｏ（［Ｍ−Ｈ_２Ｏ］^＋）の正確な理論質量１９４．１６７１，実測値１９４．１６６５

デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノル−２２−（トシルオキシ）コラン−８β−オール（２）
無水塩化メチレン（２０ｍＬ）中の１（４５０ｍｇ，２．１２ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン（９７５μＬ，７０８ｍｇ，７．００ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２０ｍｇ，０．１６ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、トシルクロリド（４４４ｍｇ，２．３３ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。反応混合物を４℃で一晩保持した。次に、塩化メチレン（３０ｍＬ）を加え、そして反応混合物を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２×３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を、カラムクロマトグラフィー（２５〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、７５４ｍｇ（２．０６ｍｍｏｌ，９７％収率）の２を得た。［α］_Ｄ＋２１．０（ｃ１．１０，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８９（３Ｈ，ｓ），０．９６（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），２．４５（３Ｈ，ｓ），３．８１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｊ＝６．２Ｈｚ），３．９５（２Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｊ＝３．０Ｈｚ），４．０７（１Ｈ，ｂｒｄ），７．３４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ），７．７８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．４，１６．８，１７．３，２１．６，２２．４，２６．４，３３．５，３５．７，４０．０，４１．８，５２．２，６９．０，７５．６，１２７．９，１２９．８，１３３．１，１４４．６；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ３６６（７，Ｍ^＋），３４８（５），１９４（１６），１７９（１９），１６１（１１），１５５（１９），１５０（１６），１３５（１５），１２５（３７），１１１（１００）；Ｃ_２０Ｈ_３０Ｏ_４Ｓの正確な理論質量３６６．１８６５，実測値３６６．１８７６

デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノルコラン−８β−オール（３）
ジエチルエーテル（３０ｍＬ）中のＬｉＡｌＨ_４（２９０ｍｇ，７．６５ｍｍｏｌ）の撹拌スラリーに、ジエチルエーテル（２０ｍＬ）中の２（７００ｍｇ，１．９１ｍｍｏｌ）の溶液を、カニューレによって滴加した。反応混合物をアルゴン下で１時間撹拌した。次に、数滴の酢酸エチル、５％ＨＣｌ水溶液（２５ｍＬ，０℃で）及び水（３０ｍＬ）を加え、その混合物を、ジエチルエーテル（３×４０ｍＬ）で抽出した。有機相を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、そして残留物を、カラムクロマトグラフィー（５〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製して、３２０ｍｇ（１．６０ｍｍｏｌ，８５％収率）の３を得た。［α］_Ｄ＋２３．５（ｃ０．９０，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），０．９１−０．９３（６Ｈ，ｍ），４．０７（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝２．２Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １３．６，１７．４，２２．４，２２．５，２３．０，２７．４，３０．５，３３．５，４０．３，４１．８，５２．６，５８．７，６９．４；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ１９６（１５，Ｍ^＋），１８１（１６），１３５（１３），１２５（１６），１１１（１００）；Ｃ_１３Ｈ_２４Ｏの正確な理論質量１９６．１８２７，実測値１９６．１８２８。

デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノルコラン−８β−イル亜硝酸塩（４）
クロロホルム（８ｍＬ）中の３（２８５ｍｇ，１．５３ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、亜硝酸 tert−ブチル（２．２ｍＬ）を、暗所中で滴加した。１時間後、ベンゼンを加え、溶媒を減圧下で除去した。

（１８Ｅ）−１８−（ヒドロキシイミノ）−デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノルコラン−８β−オール（５）
粗製亜硝酸塩を、無水ベンゼン（１５０ｍＬ）中に溶解させ、そして水冷浸漬ウェルを含む Pyrex 容器と、Pyrex フィルターを装備した Hanovia 高圧水銀灯とからなる装置中で照射した。アルゴン流を溶液を介してゆっくり通過させ、温度を約１０℃で維持した。反応進行は、ＴＬＣで監視した。４５分後、反応を終えた。ベンゼンを減圧下で除去し、そして残留物を、２−プロパノール（５ｍＬ）中に溶解させ、一晩保持して、ニトロソ化合物のオキシムへの異性化を達成した。溶媒を蒸発させ、そして残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（１５〜２５％酢酸エチル／ヘキサン）上で精製して、２３０ｍｇ（１．０２ｍｍｏｌ，３より出発して６７％収率）の５を得た。［α］_Ｄ＋４５．７（ｃ０．９０，ＣＨＣｌ_３）；ｍｐ．１４４℃；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），１．０２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ），２．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ），４．０４（１Ｈ，ｓ），６．７８（１Ｈ，ｓ），７．３４（１Ｈ，ｓ），１０．９４（１Ｈ，ｓ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １７．４，２１．９，２２．３，２３．１，２７．７，３０．９，３４．２，３６．５，４９．５，５２．５，５８．９，６７．５，１５１．９；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２２５（２０，Ｍ^＋），２０８（９２），１９０（７０），１８３（７８），１７５（４０），１６４（４３），１３６（６６），１２１（５１），８７（１００）；Ｃ_１３Ｈ_２３ＮＯ_２Ｎａ（［Ｍ＋Ｎａ］^＋）の正確な理論質量（ＥＳＩ）２４８．１６２６，実測値２４８．１６２０

８β−（アセトキシ）−デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノルコラン−１８−ニトリル（６）
無水酢酸（１５ｍＬ）中の５（２２０ｍｇ，０．９８ｍｍｏｌ）の溶液を、１．５時間還流させた。反応混合物を冷却し、氷中に注意深く注ぎ、ベンゼン（３×６０ｍＬ）で抽出した。合わせた有機相を、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（２×５０ｍＬ）で、水（３０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（８〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）上で精製して、２３９ｍｇ（０．９６ｍｍｏｌ，９８％収率）の６を得た。［α］_Ｄ−５．２（ｃ０．９５，ＣＨＣｌ_３）；ｍｐ．４０℃；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．１４（３Ｈ，ｓ），２．４９（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ），５．２０（１Ｈ，ｓ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １８．７，２０．９，２２．３，２３．４，２７．４，２９．８，３２．１，３６．２，４５．７，５１．９，５６．２，６８．６，１２１．１，１７０．９；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２４９（２，Ｍ^＋），２２４（９），２０７（６６），１８９（４３），１８３（１００）；Ｃ_１５Ｈ_２３ＮＯ_２の正確な理論質量２４９．１７２９，実測値２４９．１７３３

デス−Ａ，Ｂ−２３，２４−ジノルコラン−１８−ニトリル−８β−オール（７）
６（２２５ｍｇ，０．９０ｍｍｏｌ）を、メタノール（１０ｍＬ）中に溶解させ、そしてメタノール中の１０％ＭｅＯＮａ溶液（１０ｍＬ）で２時間処理した。その後、溶媒を減圧下で除去し、残留物を、水（２０ｍＬ）及び飽和ＮＨ_４Ｃｌ水溶液（１５ｍＬ）で処理し、塩化メチレン（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機相を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、蒸発させた。残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）上で精製して、１８０ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ，９７％収率）の７を得た。［α］_Ｄ＋２０．６（ｃ１．１５，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．９４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．０４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），２．４６（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．０Ｈｚ），４．１１（１Ｈ，ｍ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １８．０，２２．２，２２．２，２３．０，２７．５，３２．０，３２．７，３６．３，４４．９，５３．４，５６．２，６７．４，１２２．３；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ２０７（１４，Ｍ^＋），１８０（１６），１７４（２６），１６２（３９），１４７（２０），１３６（３９），１２１（１００）；Ｃ_１３Ｈ_２１ＮＯの正確な理論質量２０７．１６２３，実測値２０７．１６１８

デス−Ａ，Ｂ−１８，２３，２４−トリノルコラン−８β−オール（８）
ＨＭＰＡ（９５０μＬ，９７９ｍｇ，５．４６ｍｍｏｌ）及びジエチルエーテル（２ｍＬ）中のカリウム（２７０ｍｇ，６．７５ｍｍｏｌ）の撹拌混合物に、tert−ブチルアルコール（２２０μＬ）及びジエチルエーテル（８５０μＬ）中の７（１８５ｍｇ，０．８９ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下において０℃で滴加した。その混合物を室温まで暖め、一晩撹拌した。残留するカリウムを除去し、数滴の２−プロパノール及びベンゼン（４０ｍＬ）を加えた。有機相を、水（１０ｍＬ）で洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（５〜１０％酢酸エチル／ヘキサン）上で精製して、１１２ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ，６９％収率）の８を得た。［α］_Ｄ＋５４．９（ｃ０．８５，ＣＨＣｌ_３）；^１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），１．８３（１Ｈ，ｂｒｄｄ，Ｊ＝１３．４Ｈｚ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），１．９２（１Ｈ，ｂｒｄｄ，Ｊ＝１２．５Ｈｚ，Ｊ＝２．３Ｈｚ），４．０７（１Ｈ，ｓ）；^１３ＣＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １８．１，２０．１，２１．８，２４．０，２４．６，２９．４，３１．１，３３．２，４０．１，５０．１，５０．３，６７．９；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ１６３（４），１４９（３），１３９（１２），１２１（１００）；Ｃ_９Ｈ_１５Ｏ（［Ｍ−Ｃ_３Ｈ_７］^＋）の正確な理論質量１３９．１１２３，実測値１３９．１１２４

デス−Ａ，Ｂ−１８，２３，２４−トリノルコラン−８β−オン（９）
塩化メチレン（４ｍＬ）中の８（１５ｍｇ，８２μｍｏｌ）及びＰＰＴＳ（２結晶）の撹拌溶液に、ＰＤＣ（１１０ｍｇ，２９０μｍｏｌ）を０℃で加えた。５分後、冷却浴を除去し、反応混合物を６時間撹拌した。次に、溶媒を減圧下で除去し、そして残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（２〜５％酢酸エチル／ヘキサン）上で精製して、１２ｍｇ（６７μｍｏｌ，８１％収率）の９を得た。^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．９２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １８．０，２１．４，２１．６，２４．１，２７．８，２９．３，３０．３，４１．５，５１．３，５１．６，５８．３，２１２．０；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ１８０（４０，Ｍ^＋），１３７（１００）；Ｃ_１２Ｈ_２０Ｏの正確な理論質量１８０．１５１４，実測値１８０．１５２０

２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール（１２）
無水ＴＨＦ（６００μｌ）中のホスフィンオキシド１０（４５ｍｇ，７７μｍｏｌ）の撹拌溶液に、ＴＨＦ中の１．５Ｍフェニルリチウム溶液（７５μｌ，１０５μｍｏｌ）を、アルゴン下において−２０℃で加えた。その混合物を２０分間撹拌後、−７８℃に冷却した。無水ＴＨＦ（２００μｌ）中の９（６ｍｇ，３３μｍｏｌ）の予め冷却された溶液を、カニューレによって加え、反応混合物を−７８℃で３時間撹拌した。その後、反応混合物を４℃で一晩撹拌した。次に、酢酸エチルを加え、有機相をブラインで洗浄し、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（ヘキサン〜３％酢酸エチル／ヘキサン）上で、次にＨＰＬＣ（０．０３％２−プロパノール／ヘキサン，４ｍＬ／分，Zorbax−シリカ１０×２５０ｍｍ）上で精製して、１１．４ｍｇ（２１ｍｍｏｌ，６４％収率）の１１をＲ_ｔ＝７．０８分で得た。ＵＶ（ヘキサン）λ_ｍａｘ＝２４２，２５０，２６１ｎｍ；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．０３（３Ｈ，ｓ），０．０４（３Ｈ，ｓ），０．０７（３Ｈ，ｓ），０．０８（３Ｈ，ｓ），０．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８６（９Ｈ，ｓ），０．８９（９Ｈ，ｓ），２．１８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１２．４Ｈｚ，Ｊ＝７．７Ｈｚ），２．８６（１Ｈ，ｂｒｄ，Ｊ＝１３．８Ｈｚ），４．４２（１Ｈ，ｍ），４．９３（１Ｈ，ｓ），４．９６（１Ｈ，ｓ），５．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ），６．２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．２Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ −５．１，−４．９，−４．８，１８．２，１８．２，１８．３，２１．６，２４．６，２５．８，２５．８，２７．８，２８．９，２９．８，３１．９，３８．７，４７．５，５０．７，５０．８，５２．７，７１．９，７２．３，１０６．３，１１３．７，１２２．４，１３２．９，１４３．７，１５３．０；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ５４４（３，Ｍ^＋），４４８（９），４１２（３６），３６６（１４），３１３（１１），２９０（１００）；

Ｃ_３３Ｈ_６０Ｏ_２Ｓｉ_２の正確な理論質量５４４．４１３２，実測値５４４．４１３１
無水ｎ−ブタノール（１ｍＬ）中の１１（１１ｍｇ，２０μｍｏｌ）の撹拌溶液に、（１Ｓ）−（＋）−１０−ショウノウスルホン酸（７ｍｇ，３０μｍｏｌ）を０℃で加えた。次に、冷却浴を除去し、反応混合物を４日間撹拌した。その後、飽和ＮａＨＣＯ_３水溶液（１ｍＬ）及び水（３ｍＬ）を加え、その混合物を、酢酸エチル（３×７ｍＬ）で抽出した。有機相を、無水Ｎａ_２ＳＯ_４上で乾燥させ、減圧下で濃縮し、そして残留物を、Waters シリカゲル Sep-Pack カートリッジ（２０〜３０％酢酸エチル／ヘキサン）上で精製した。粗製ビタミンを、ＨＰＬＣ（１０％２−プロパノール／ヘキサン，４ｍＬ／分，Zorbax−シリカ１０×２５０ｍｍ）上で再精製して、６ｍｇ（１９μｍｏｌ，９３％収率）の１２をＲ_ｔ＝７．７８分で得た。ＵＶ（ＥｔＯＨ）λ_ｍａｘ＝２４２，２５０，２６０ｎｍ；^１ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ ０．８０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），０．８８（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．８Ｈｚ），２．５８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，Ｊ＝３．８Ｈｚ），４．４８（１Ｈ，ｂｒｓ），５．０９（１Ｈ，ｓ），５．１０（１Ｈ，ｓ），５．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ），６．３５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ）；^１３ＣＮＭＲ（１００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ １８．３，２１．７，２４．５，２５．８，２７．８，２９．１，２９．８，３１．７，３８．０，４５．９，５０．７，５０．９，５２．７，７０．９，７１．７，１０７．７，１１２．９，１２４．３，１３０．７，１４６．０，１５２．０；ＭＳ（ＥＩ）ｍ／ｚ３１６（１４，Ｍ^＋），２９８（１０），２８０（１５），２３７（１９），８４（７１），６６（１００）；Ｃ_２１Ｈ_３２Ｏ_２の正確な理論質量３１６．２４０２，実測値３１６．２３８７

２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロールの生物学的活性
メチレン基の２位への導入、１８位に通常見出されるメチルから水素の置換、及び１α−ヒドロキシ−１９−ノルビタミンＤ_３の側鎖中の炭素２３、２４、２５、２６及び２７の脱離は、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３と比較すると、完全長組換えラットビタミンＤ受容体への結合にほとんど又は全く影響しなかった。化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰは、標準の１，２５−（ＯＨ）_２Ｄ_３と比較すると、受容体にも５分の１結合した（図１）。これら結果から、化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰは、同様の生物学的活性を有するであろうと考えられる。しかしながら、驚くべきことに、化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰは、独特の生物学的活性を有する極めて選択的な類似体である。

図５は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、腸管カルシウム輸送を刺激すると、天然ホルモンである１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３）の場合と比較して、測定可能な活性を有しないことを示す。

図４は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３と比較して、測定可能な骨カルシウム動員活性を有さないことを示す。

従って、図４及び図５は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、カルシウム血症活性があるとしても低いと特定できることを示す。

図２は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、ＨＬ−６０細胞分化について、１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３とほぼ同程度に強力であることを示し、乾癬及び、特に、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌に対する癌の治療のための優れた候補となる。さらに、細胞分化活性が比較的高いため、本化合物は、しわ、適切な皮膚水和の欠如、すなわち、乾燥皮膚、適切な皮膚引き締めの欠如、すなわち、たるんだ皮膚、及び不十分な皮脂分泌を含めた様々な皮膚状態の治療用の治療薬をもたらす。従って、本化合物の使用は、皮膚が加湿されるのみならず、皮膚の保護機能も改善する。

図３は、化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰが、骨細胞中での転写活性が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３の５分の１であることを示す。この結果は、図２の細胞分化活性と相俟って、１８，１９−ジノル−２ＭＰは、細胞分化を引き起こす場合及び細胞増殖を抑制する場合に直接的な細胞活性を有するため、乾癬に極めて有効であろうことを示唆する。上記データは、さらに、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、特に、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌に対する抗癌剤として活性が有意でありうることを示す。

ＨＬ−６０分化及び遺伝子転写増加への１８，１９−ジノル−２ＭＰの活性が強いことは、副甲状腺の増殖を抑制する場合及びプレプロ副甲状腺遺伝子の抑制に活性であろうことを示唆する。

実験方法
ビタミンＤ受容体結合
試験材料
タンパク質源
完全長組換えラット受容体は、大腸菌（ＢＬ２１（ＤＥ３）Codon Plus ＲＩＬ細胞で発現させて二つの異なったカラムクロマトグラフィーシステムを用いて精製して均一にした。最初の系は本タンパク質上のＣ末端ヒスチジン標識を利用するニッケル親和性樹脂であった。本樹脂から溶離したタンパク質を、イオン交換クロマトグラフィー（Ｓ−Sepharose Fast Flow）を用いてさらに精製した。精製したタンパク質のアリコートを、液体窒素で急速冷凍して−８０℃で使用まで貯蔵した。結合アッセイで用いるために、本タンパク質を、０．１％ Chaps 洗浄剤を含むＴＥＤＫ_５０（５０ｍＭ Tris，１．５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４，５ｍＭＤＴＴ，１５０ｍＭＫＣｌ）中で希釈した。受容体タンパク質及びリガンド濃度を最適化して、加えた受容体に結合する放射性標識リガンドが２０％以下になるようにした。

研究用試薬
未標識リガンドを、エタノールに溶解させて、ＵＶ分光測光を用いて濃度を決定した（１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３：モル吸光係数＝１８，２００及びλ_ｍａｘ＝２６５ｎｍ；類似体：モル吸光係数＝４２，０００及びλ_ｍａｘ＝２５２ｎｍ）。放射性標識リガンド（^３Ｈ−１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３，約１５９Ｃｉ／ｍｍｏｌｅ）を、エタノール中で最終濃度１ｎＭとなるように加えた。

アッセイ条件
放射性標識リガンド及び未標識リガンドを、最終エタノール濃度１０％未満で希釈した１００ｍｃｌのタンパク質に加えて混合し、氷上で一晩インキュベートして結合平衡にした。翌日、１００ｍｃｌのヒドロキシルアパタイトスラリー（５０％）を、各試験管に加え、１０分間隔で３０分間混合した。ヒドロキシルアパタイトを、遠心分離で回収後、０．５％ Titron Ｘ−１００含有Tris−ＥＤＴＡ緩衝液（５０ｍＭ Tris，１．５ｍＭＥＤＴＡ，ｐＨ７．４）で３回洗浄した。最後の洗浄後、ペレットを４ｍｌの Biosafe IIシンチレーション混合物入りシンチレーションバイアルに移して混合し、シンチレーション計数計に入れた。放射性標識リガンドのみが入っている試験管から全結合を決定した。

ＨＬ−６０分化
試験材料
研究用試薬
研究用試薬を、エタノールに溶解し、ＵＶ分光測光を用いて濃度を決定した。連続希釈液を作製して、一定範囲の試薬濃度を、細胞培養物中に存在するエタノールの最終濃度（０．２％未満）を変更せずに試験できるようにした。

細胞
ヒト前骨髄球性白血病（ＨＬ６０）細胞を、１０％ウシ胎児血清含有ＲＰＭＩ−１６４０培地で増殖した。当該細胞を、５％ＣＯ_２の存在下で３７℃でインキュベートした。

アッセイ条件
ＨＬ６０細胞を、１．２×１０^５個／ｍｌで播種した。播種１８時間後、二重反復試験において細胞を試薬で処理した。４日後、上記細胞を採取し、ニトロブルーテトラゾリウム還元アッセイを行った（Collins et al., 1979; J. Exp. Med. 149:969-974）。分化した細胞の百分率を、全２００個の細胞を計数し、細胞内に黒〜青色ホルマザン沈着物を含有した数を記録し決定した。単球細胞への分化アッセイは、食細胞活性を測定して決定した（データ示さず）。

インビトロ転写検定
転写活性は、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流に２４−ヒドロキシラーゼ（２４Ｏｈａｓｅ）遺伝子プロモーターで安定化トランスフェクションしたＲＯＳ１７／２．８（骨）細胞で測定した（Arbour et al., 1998）。細胞を一定範囲の用量で与えた。投与１６時間後、細胞を採取して、ルミノメーターを用いてルシフェラーゼ活性を測定した。

ＲＬＵ＝相対ルシフェラーゼ単位
腸管カルシウム輸送及び骨カルシウム動員
離乳雄Sprague-Dawley ラットを、Diet １１（０．４７％Ｃａ）飼料＋ＡＥＫで１週間、Diet １１（０．０２％Ｃａ）飼料＋ＡＥＫで３週間給餌した。次に、上記ラットを、０．４７％Ｃａ含有飼料を１週間、次に、０．０２％Ｃａ含有飼料で２週間へと切り換えた。用量投与は０．０２％カルシウム飼料の最終週で開始した。ｉｐ用量を４回連続約２４時間隔で与えた。最終用量から２４時間後、頸部を切断して血液を回収し、血清カルシウム濃度を骨カルシウム動員の指標として決定した。腸管の始めの１０ｃｍもまた外転腸嚢法（everted gut sac method）を用いた腸管カルシウム輸送分析のために回収した。

データの解釈
ＶＤＲ結合、ＨＬ６０細胞分化及び転写活性
１８，１９−ジノル−２ＭＰ（Ｋ_ｉ＝２．２×１０^−１０Ｍ）は、完全長組換えラットビタミンＤ受容体への結合について［^３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）_２Ｄ_３と競合する機能が、天然ホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（Ｋ_ｉ＝４．１×１０^−１１Ｍ）と比較した活性が僅かに低い（図１）。化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰ（ＥＣ_５０＝１．５×１０^−８Ｍ）は、ＨＬ６０分化を促進する場合、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（ＥＣ_５０＝３．２×１０^−９Ｍ）と比較して、活性がやや低い（図２を参照）。さらに、化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰ（ＥＣ_５０＝１．５×１０^−８Ｍ）は、骨細胞で１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３（ＥＣ_５０＝３．２×１０^−９Ｍ）より転写活性がやや低い（図３を参照）。上記結果は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、細胞分化を起こす場合及び細胞増殖を抑制する場合に直接的な細胞活性を有することから、乾癬に極めて有効であろうことを示唆する。上記データは、さらに、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、特に、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌及び前立腺癌に対する抗癌剤として、さらに、乾燥皮膚（皮膚水和の欠如）、過度の皮膚たるみ（不十分な皮膚引き締め）、不十分な皮脂分泌及びしわ等の皮膚状態に対する活性が有意であろうことを示す。それは、さらに、続発性副甲状腺機能亢進を抑制する場合に極めて活性であると考えられる。

ビタミンＤ欠乏動物の骨からのカルシウム動員及び腸管カルシウム吸収
低カルシウム飼料（０．０２％）を給餌されたビタミンＤ欠乏ラットを用いて、腸管及び骨の１８，１９−ジノル−２ＭＰ及び１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３の活性を調べた。予想されるように、天然ホルモン（１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３）では、全ての用量で血清カルシウムレベルが増加した（図４）。図４は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、骨からカルシウムを動員する場合の活性があっても低く、その活性は２ＭＰとほぼ同等であることを示す。１８，１９−ジノル−２ＭＰを７８０ｐｍｏｌ／日で連続４日間投与しても、骨カルシウムの動員は起こらず、１８，１９−ジノル−２ＭＰの量を２３４０ｐｍｏｌ／日又は７０２０ｐｍｏｌ／日に増やしても実質的な影響はなかった。

腸管カルシウム輸送は、同一動物群で外転腸嚢法を用いて評価した（図５）。上記結果は、化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰは、７８０ｐｍｏｌ／日、２３４０ｐｍｏｌ／日又は７０２０ｐｍｏｌ／日で投与しても腸管カルシウム輸送を促進することはないが、１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３は、７８０ｐｍｏｌ／日の用量では有意に増加が促進され、２ＭＰも、２３４０ｐｍｏｌ／日の用量で有意に増加することを示す。従って、１８，１９−ジノル−２ＭＰは、試験した用量で腸管カルシウム輸送活性を本質的に欠くと結論できる。

上記結果は、１８，１９−ジノル−２ＭＰが、本明細書中に記載の多数のヒト療法の優れた候補であること、及びそれが、腎性骨ジストロフィーの続発性副甲状腺機能亢進の抑制、自己免疫疾患、癌及び乾癬等の多数の症状で特に有用でありうることを示す。１８，１９−ジノル−２ＭＰは、（１）有意のＶＤＲ結合、転写活性及び細胞分化活性を有する；（２）１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３と異なり、高カルシウム血症への傾向がない；（３）容易に合成できるという理由で、乾癬を治療するための優れた候補である。１８，１９−ジノル−２ＭＰは、ビタミンＤ受容体への結合活性が有意であるが、血清カルシウムを上昇させる機能がほとんどなく、腎性骨ジストロフィーの続発性副甲状腺機能亢進の治療に特に有用でありうる。

上記データは、さらに、本発明の化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰが、例えば、多発性硬化症、狼瘡、真性糖尿病、宿主対移植片拒絶反応及び臓器移植拒絶反応を含めた自己免疫疾患等の免疫系の不均衡を特徴とするヒト障害の治療及び予防に；さらに、関節リウマチ、喘息、及びセリアック病、潰瘍性大腸炎及びクローン病等の炎症性腸疾患等の炎症性疾患の治療に特に適しうることを示す。ざ瘡、脱毛症及び高血圧症は、本発明の化合物１８，１９−ジノル−２ＭＰで治療することができる他の症状である。

式Ｉ、特に式Ｉａを有する本発明の化合物は、さらに、動物対象の肥満症を予防する又は治療する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害する及び／又は体脂肪を減少させる場合に有用である。従って、ある態様では、動物対象の肥満症を予防する又は治療する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害する及び／又は体脂肪を減少させる方法は、その動物対象に、式Ｉを有する１つ又はそれ以上の化合物又は１つ又はそれ以上の化合物を包含する医薬組成物の有効量を投与することを包含する。化合物又は医薬組成物の対象への投与は、動物対象の脂肪細胞分化を阻害する、遺伝子転写を阻害する、及び／又は体脂肪を減少させる。その動物は、ヒト、イヌ又はネコ等の家畜又は農産物用動物、特に、ニワトリ、シチメンチョウ、キジ又はウズラのような家禽並びに、ウシ、ヒツジ、ヤギ又はブタ等の、ヒト消費用食肉を提供する動物であってよい。

予防及び／又は治療目的のために、式Ｉで定義される本発明の化合物は、医薬的用途のために、無害な溶媒中の溶液として、又は適する溶媒又は担体中のエマルジョン、懸濁液又は分散として、又は丸剤、錠剤又はカプセル剤、坐剤又はエアゾル剤として固形担体と共に、当前記技術分野で公知の慣用法により製剤化することができる。上記製剤はいずれも、安定化剤、酸化防止剤、結合剤、着色剤又は乳化剤又は風味調節剤等の他の医薬的に許容しうる無毒性の賦形剤も含有できる。

式Ｉの化合物、特に１８，１９−ジノル−２ＭＰは、経口で、局所に、非経口で、直腸に、鼻腔内に、舌下に又は経皮で投与することができる。上記化合物は、好都合には、注射又は静脈内注入又は適する滅菌液剤により、又は消化管経由の液状又は固形用量の形で、又はクリーム剤、軟膏剤、貼付剤、又は経皮用途に適する類似のビヒクルの形で投与することができる。０．０１μｇ／日〜１０００μｇ／日、好ましくは、約０．１μｇ／日〜約５００μｇ／日の用量の化合物Ｉ、特に１８，１９−ジノル−２ＭＰは、予防及び／又は治療目的に適当であり、上記用量は、治療される疾患、その重症度及び対象の応答に従って調整されることが当該技術分野において十分に理解される。上記化合物は、作用特異性を示すため、各々、好適には、様々な程度の骨無機質動員及びカルシウム輸送刺激が好都合であると判明している状況で、単独で又は勾配用量の別の活性なビタミンＤ化合物、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ_２又はＤ_３、又は１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３と共に投与することができる。

上記治療に用いるための組成物は、上記式Ｉ及び式Ｉａで定義される化合物Ｉ、特に１８，１９−ジノル−２ＭＰの活性成分としての有効量と適する担体を含む。本発明で用いる上記化合物の有効量は、１ｇｍの組成物につき約０．０１μｇ〜約１０００μｇ、好ましくは、組成物１グラムにつき約０．１μｇ〜約５００μｇであり、そして局所に、経皮で、経口又は非経口で、約０．０１μｇ／日〜約１０００μｇ／日、好ましくは、約０．１μｇ／日〜約５００μｇ／日の用量で投与することができる。

化合物Ｉ、特に１８，１９−ジノル−２ＭＰは、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、局所貼付剤、丸剤、カプセル剤又は錠剤、坐剤、エアゾル剤として、又は医薬的に無害な許容しうる溶媒又は油中の液剤、乳剤、分散剤又は懸濁剤として液体で製剤化することができるが、上記製剤は、さらに、安定化剤、酸化防止剤、乳化剤、着色剤、結合剤又は風味調節剤等の他の医薬的に無害な又は有益な成分を含有してよい。

化合物Ｉ、特に１８，１９−ジノル−２ＭＰは、好都合には、前骨髄球を正常マクロファージへと分化させるのに十分な量で投与することができる。上記用量は適しているが、投与量は、当該技術分野で十分に理解されるように、疾患の重症度と、対象の状態及び応答により調整されるべきであることが理解される。

本発明の製剤は、活性成分を、医薬的に許容しうる担体と共に、すなわち場合により、他の治療的成分と共に含む。その担体は、製剤の他の成分と相溶性であり供与体に有害でないという意味で、「許容しうる」べきものである。

経口投与に適する本発明の製剤は、所定量の活性成分を各々含有するカプセル剤、サシェ剤、錠剤又はロゼンジとして個別の単位の剤型；粉末又は顆粒剤の剤型；水性液又は非水性液中の溶液又は懸濁液の剤型；又は水中油エマルジョン又は油中水エマルジョンの剤型であってよい。

直腸投与用の製剤は、活性成分とカカオ脂等の担体を包含する坐剤の剤型又は浣腸剤の剤型であってよい。

非経口投与に適する製剤は、好都合には、活性成分の滅菌油状又は水性製剤を含むが、それは、好ましくは、レシピエントの血液と等張である。

局所投与に適する製剤としては液状又は半液状製剤であり、リニメント剤、ローション剤、外用薬（applicants）等、水中油エマルジョン又は油中水エマルジョンであり、クリーム剤、軟膏剤又はペースト剤等；滴剤等の液剤又は懸濁剤；又は噴霧剤があげられる。

鼻腔内投与用には、スプレー缶、ネブライザー又はアトマイザーで計量分配される粉末製剤、自己推進性製剤又は噴霧製剤の吸入を用いることができる。上記製剤は、計量分配される場合、好ましくは、粒度が１０〜１００μの範囲内である。

上記製剤は、好都合には、投薬単位の剤型で与えることができるし、医薬技術分野で周知のいかなる方法でも製造することができる。「投薬単位」という用語により、活性成分を、それ自体でか又は、それと固形又は液状の医薬希釈剤又は担体との混合物として含む、物理的で化学的に適する単位用量として患者に投与することができる単一の、すなわち、単回の用量を意味する。

図１は、以下、「１８，１９−ジノル−２ＭＰ」という２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロールの、天然ホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ_３、以下、「１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３」と比較した種々の生物学的活性を示す。図１は、完全長組換えラットビタミンＤ受容体への結合について［^３Ｈ］−１，２５−（ＯＨ）_２−Ｄ_３と競合する１８，１９−ジノル−２ＭＰ及び１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３の相対活性を示すグラフである。図２は、１８，１９−ジノル−２ＭＰの、天然ホルモン１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３と比較した種々の生物学的活性を示す。図２は、１８，１９−ジノル−２ＭＰ及び１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３の濃度の関数としてのＨＬ−６０細胞分化パーセントを示すグラフである。図３は、１８，１９−ジノル−２ＭＰの、天然ホルモン１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３と比較した種々の生物学的活性を示す。図３は、１８，１９−ジノル−２ＭＰと比較した１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３のインビトロ転写活性を示すグラフである。図４は、１８，１９−ジノル−２ＭＰの、天然ホルモン１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３と比較した種々の生物学的活性を示す。図４は、１８，１９−ジノル−２ＭＰと比較した１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３並びに化合物２−メチレン−１９−ノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール（以下、「２−ＭＰ」と称される）の骨カルシウム動員活性を示す棒グラフである。図５は、１８，１９−ジノル−２ＭＰの、天然ホルモン１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３と比較した種々の生物学的活性を示す。図５は、１８，１９−ジノル−２ＭＰと比較した１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３並びに２−ＭＰの腸管カルシウム輸送活性を示す棒グラフである。

Claims

式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物。
Ｘ_１が水素であるか、又はＸ_２が水素である、請求項１に記載の化合物。
Ｘ_１及びＸ_２が共にｔ−ブチルジメチルシリルである、請求項１に記載の化合物。
式
を有する２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロール。
請求項１又は４に記載の少なくとも１つの化合物の有効量を、医薬的に許容しうる賦形剤と共に含有する医薬組成物。
有効量が、組成物１グラムにつき０．０１μｇ〜１０００μｇを含む、請求項５に記載の医薬組成物。
式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物の有効量を含む、乾癬を治療するための医薬組成物。
式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物の有効量を含む、白血病、結腸癌、乳癌、皮膚癌又は前立腺癌からなる群より選択される疾患を治療するための医薬組成物。
式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物の有効量を含む、多発性硬化症、狼瘡、真性糖尿病、宿主対移植片拒絶反応及び臓器移植拒絶反応からなる群より選択される自己免疫疾患を治療するための医薬組成物。
式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物の有効量を含む、関節リウマチ、喘息及び炎症性腸疾患からなる群より選択される炎症性疾患を治療するための医薬組成物。
式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物の有効量を含む、しわ、適切な皮膚引き締めの欠如、適切な皮膚水和の欠如及び不十分な皮脂分泌からなる群より選択される皮膚状態を治療するための医薬組成物。
式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物の有効量を含む、腎性骨ジストロフィーを治療するための医薬組成物方法。
有効量の式
（式中、Ｘ_１及びＸ_２は、同一又は異なっていてもよく、各々、水素又はヒドロキシ保護基より選択される）
を有する化合物を含有する、動物の肥満症を治療する又は予防する、脂肪細胞分化を阻害する、ＳＣＤ−１遺伝子転写を阻害する及び／又は動物の体脂肪を減少させるための医薬組成物。
化合物の投与経路が、経口投与、非経口投与、経皮投与、直腸投与、鼻腔内投与、および舌下投与からなる群より選択される、請求項７〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
化合物の投与経路が局所投与である、請求項７又は１１に記載の医薬組成物。
化合物が、０．０１μｇ／日〜１０００μｇ／日の用量で投与されるように含まれる、請求項７〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。
化合物が、式
を有する２−メチレン−１８，１９−ジノル−１α−ヒドロキシ−ホモプレグナカルシフェロールである、請求項７〜１３のいずれかに記載の医薬組成物。