JP5009811B2 - 子癇前症の検出 - Google Patents
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Description
本出願は、2004年12月21日に出願され、「子癇前症を有する女性を同定、診断および追跡するための方法および試験」と題される米国仮出願番号60/637,948の利益を主張する。参照される出願の全教示は、参照によって本明細書中に援用される。
子癇前症は、6〜8%までの妊娠を悪化させ、母親および周産期の罹患率および死亡率の主な原因のままである高血圧性障害である(1、2)。なお、広範な研究努力にも関わらず、この多重全身性(multi-systematic)障害の病因は不完全に理解されたままである。血管内皮の活性化に続く血管痙攣は、子癇前症の病原における中心的な特徴であるように思われる。その原因の理論は、異常な着床および胎盤の異常な発達、酸化的ストレス、減少した内皮プロスタノイドおよび一酸化窒素恒常性、遺伝子多形、異常な循環自己抗体ならびに異常な母親の全身性炎症応答を含む(3、4、5、6、7)。より最近では、高血圧、蛋白尿、内皮細胞の活性化および増加した血小板凝集を含む子癇前症の症状を引き起こす、新脈管形成のモジュレーターの発現レベルにおけるバリエーションの影響について増大された焦点が存在する(8、9、10、11、12)。
本発明は、妊娠女性が子癇前症または他の1つまたは複数の高血圧性障害を発現する危険にあるということを決定する方法または決定を補助する方法に関する。特定の態様において、本発明は、妊娠女性が子癇前症を有するということを決定する方法または決定を補助する方法に関する。さらなる態様において、本発明は、妊娠の間ずっとのさらなる試験のための必要を減少する、高血圧性障害を発現する低い危険を有する妊娠女性を同定するために妊娠女性をスクリーニングまたはプレスクリーニングする方法に関する。
子癇前症は、妊娠の後期で発現し、有意な母親および胎児の罹患率および死亡率と関連する。現在、本疾患および関連高血圧性障害を診断するか、あるいは発現する危険を評価する効果的なスクリーニング試験はない。結果は、増加した血圧および蛋白尿を含む障害と関連する合併症が発現したずっと後まで、妊娠女性は、効果的なモニタリングまたは処置を受けることができないということである。さらに、かかる障害を発現する危険がほとんどない〜まったくない妊娠女性が、妊娠の間ずっと不必要な症状の試験を受けなければならないのは、介護者が妊娠の初期段階における危険からこれらを排除し得る効果的な手段がないためである。
本発明はここで、包括的に記載され、本発明の特定の側面および態様の例示の目的のためにのみ含まれ、本発明を限定することを意図されない、以下の実施例への参照によってより容易に理解される。
高血圧性障害を有する妊娠女性におけるsFlt-1の増加したレベルおよびPlGFの減少したレベル
参加人
2004年2月〜8月にイェールニューヘブン病院に入院した68人の女性からの尿試料を利用した。試料を、イェール大学のヒト調査委員会によって承認されたプロトコルの下で回収した。書面のインフォームドコンセントを全ての参加人から得た。在胎齢は、月経日および/または妊娠20週の前の超音波検査を基に確立された。全ての女性は、参加することに同意した研究において登録を懇願した。本出願人らは、分娩病棟および分娩前高低危険ユニットへの入院した妊娠女性から登録を要請し、将来を見越して患者を登録した。登録された患者には、最終分析から除外されたものはいなかった。
ランダムな尿試料(5〜10mL/試料)を、滅菌容器の標準使用によって回収した。登録時に、全てのsPE女性は、尿排出の正確なモニタリングを可能にするようにフォーリーカテーテルを置かれた。フォーリーカテーテルが無い場合、尿試料を他の滅菌技術を用いて回収した(「ストレートカテ」または「クリーンキャッチ(clean catch)」)。「ストレートカテ」技術は、ストレートカテーテルを用いて無菌的な様式で尿を回収する「出入り」手順である。「クリーンキャッチ」技術は、尿試料を回収する方法であるが、生殖叢からの細菌汚染を最小化する。硫酸マグネシウム発作予防の初期設定の後、60%のsPE女性を登録した。硫酸マグネシウム発作予防が臨床子癇前症を有する患者のための標準ケアであるのは、硫酸マグネシウムを用いた処置はかかる患者における発作の発症を予防することを示したためである。9人の女性は、発作予防治療の開始前および開始2〜12時間後にも尿試料を回収された。尿試料の生化学的分析は、並行して行われた。回収後に試料は、4℃で20分間3000×gでスピンされ、アリコートにされ、sFlt-1、VEGFおよびPlGFレベルが特定の免疫アッセイによって測定されるまで直ぐに−80℃で保存された。
ヒト遊離VEGF、sFlt-1およびPlGFに対するELISAアッセイを、製造者の指示書(R&D Systems、Minneapolis、MN)に従って実施した。試料を遊離VEGF、sFlt-1またはPlGFに対して指向された捕獲抗体でプレコートされた96ウェルプレート中で二重にアッセイした。インキュベーションプロトコルを実施し、続いて洗浄し、手順要約に従って450nmで読み取った。VEGF、sFlt-1およびPlGFについてアッセイ中の最小検出可能な用量は、それぞれ5、5および7pg/mLであった。アッセイ間およびアッセイ内の変動係数は、3〜10%に変動した。蛋白尿は日変動を被り得るので、データを、計算し、公知の濃度から導かれた標準曲線を用いることによって同じアリコートから決定されたクレアチニン濃度およびタンパク質濃度を基にして標準化した。レベルまたは脈管形成因子を、クレアチニン濃度および/または全タンパク質濃度について標準化した。
全てのデータセットを、コルモゴロフ−スミルノフ方法を用いた正規性試験に供し、平均および95%の信頼区間(95%CI)(正常に分布したデータについて)または範囲と共に中央値(非対称のデータについて)のいずれかとして報告した。VEGF、sFlt-1およびPlGF濃度を算数手段として表し、統計解析を、データの対数変換前(クラスカル-ワリスANOVA)または対数変換後(一方向ANOVA)に完了した。2つの群の間の比較を、スチューデントt-検定またはマン-ホイットニー順位和検定を用いて実施した。割合を、フィッシャーの正確試験またはカイ二乗試験を用いて比較した。本出願人らは、独立変数としての母親特性、または実験室特性および従属変数としての比sFlt/PlGFとの間での有意な関連を同定するために直線回帰モデリングと共に単変量解析および多変量解析を応用した。ピアーソンまたはスピアマン積率相関係数を使用して、選択された独立変数間の共線形性ならびに従属変数および独立変数間の他の関連する相関を測定した。受信者動作曲線特性(ROC)曲線分析をMedCalc(Broekstraat、Belgium)統計ソフトウェアを用いて実施した。統計の有意さはp<0.05で判断した。
サンプリング時にVEGF、sFlt-1、PlGFおよびGAの尿レベル間での相関は無かった(VEGF:r=0.09、sFlt-1:r=0.02、PlGF:r=-0.03、p>0.05)。以下の図3は、脈管形成因子の尿レベルを示す(非対数形式において)。
尿試料中のsFlt-1およびVEGFの分解
実験を、尿中の脈管形成因子の安定性を試験するために実施した。子癇前症を有する患者由来の8個の尿試料を、(i)尿試料として本明細書中に記載されるように、または(ii)室温での24時間の期間の後に試験した。以下の図4は、合致のブランド-アルトマン法を使用する2つの試料のELISAデータの間の合致の分析を示す。この分析は、2つの技術の間の差が重要である場合に、2つの方法が交換可能に使用され得るかどうかおよび差の変動性が測定増加の大きさとして増加するかどうかを評価するために、これらの平均に対する2つの測定の間の差の値(バイアス)をプロットする。結果は、免疫反応性の最も大きな損失がsFlt-1(図4A:平均:57.5pg/mL)に対してであり、次いでVEGF(図4B:平均41.1pg/mL)であることを示す。PlGF(図4C)について、負のバイアス(−8.8pg/mL)は、室温で24時間後わずかにより高い値が測定されたことを示唆し、可能な試料蒸発のような他の因子がまた結果に影響を与え得ることを示唆する。図4Dは、100%レベルからの(from before as)免疫反応性の相対的変化を示す。結果は、sFlt-1に対する免疫反応性が統計的に減少し(sFlt-1に対する符号順位和検定p=0.023)、VEGFに対する免疫反応性は変化せず(p>0.05)、PlGFに対する免疫反応性は有意に増大した(符号順位和検定P=0.003)ことを示唆する。
尿比sFlt-1/PlGF
本明細書中で発見されたように、正常な妊娠は、増加した尿のPlGF排出によって特徴付けられ、その一方で、高血圧状態は、sFlt-1が増加するが尿PlGFが減少することによって特徴付けられる。以下の図5A〜5Bは、(A)妊娠女性におけるsFlt-1レベルおよび(B)妊娠女性におけるPlGFレベルに対するかかる高血圧状態の効果を示す代表的なELISA実験を示す。これを考慮して、本出願人らは、尿のsFlt-1対PlGF(uFP)比が脈管形成マーカーの個々の尿恒常性のよりよい指標であることを論じた。比指標を、以下の式:uFP=log[sFlt/PlGF×100]を使用して計算した。以下の図5C〜5Dは、(C)本明細書中に示されるELISAデータからのuFPの計算のために使用される代表的なスプレッドシートおよび(D)sPEを有する患者対P-CTRの平均(+SD)uFPを示す。かかる計算の結果は、uFPがpHTN(スチューデント−ニューマン−ケウル、p=0.008)、P-CTR(p<0.001)またはNP-CTR(p<0.001)と比べてsPEを有する女性において有意に上昇されることを示した(図6)。pHTN群はまた、P-CTR(p<0.001)およびNP-CTR(p<0.001)と比べて有意に上昇したuFP値を有した。
脈管形成因子の母体血清および尿濃度
参加人および試料回収
この研究のために、本出願人らは、2004年2月〜2005年1月にイェールニューヘブン病院に入院した64人の女性の血清−尿の対になった時間の一致した試料を研究した。試料を、イェール大学のヒト調査委員会によって承認されたプロトコルのもとで回収した。全ての参加人は、登録の前にインフォームドコンセントを提供した。登録を懇願された女性は、参加に同意した。14人の女性の血清免疫アッセイ結果ではなく尿免疫アッセイ結果は、以前に報告された。在胎齢(GA)は、月経日および/または妊娠20週の前の超音波検査試験に基づいて確立された。被験体は、分娩および誕生ユニットならびに分娩前高リスクおよび低リスクユニットに評価されるかまたは入院した女性から補充された。本出願人らの被験体は、1つの調査の利用可能性(CSB)に将来的に基づいて登録を懇願された。登録された女性は、誰も最終分析から排除されなかった。
ヒト非結合VEGF、sFlt-1およびPlGFに対するELISAアッセイを、製造業者の指示書(R&D Systems, Minneapolis, MN)に従って実施した。血清および尿試料を、遊離VEGF、遊離sFlt-1または遊離PlGFに対して指向される捕捉抗体でプレコートされた96ウェルプレート中で二重においてアッセイした。インキュベーションプロトコル、続いての洗浄および450nmでの読み取りを、手順概要に従って実施した。VEGF、sFlt-1およびPlGFに対するアッセイの最小検出可能濃度は、それぞれ2、5および7pg/mLであった。本出願人らのデータは報告され、SoftmaxソフトウェアPro 3.1.1 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA)を使用してプロットされた。このソフトウェアは、試料ウェルの光学密度がゼロ標準(空のウェル)より大きい場合正の値を報告する。試料ウェルの光学密度がゼロ標準未満の場合負の値が報告され、コンピューターによって自動的にゼロに変換される。血清VEGFは、本出願人らが任意のアッセイにおいて検出不可能なレベル(ゼロ標準より低い値)の例を有する唯一の分析物であった。アッセイ間およびアッセイ内変動係数は、3〜10%まで変化した。プレートを、Softmax Pro 3.1.1ソフトウェアと共にVERSAmaxTMマイクロプレートリーダーを使用して、570nm波長補正を伴って450nmで読み取った。
マイクロタイタープレート(Immuno MaxiSorp, Nalge Nunc, Rochester, NY)を捕捉抗体(10μg/mlヤギ抗ヒトアルブミン抗体(Bethyl Laboratories))で被覆した。プレートを洗浄し、ブロックし、尿(NP患者に対して1:1000または1:100希釈)もしくは血清試料(1:150,000に希釈された)または6.25〜400ng/mlの範囲でヒトアルブミン較正物質(calibrant)と共にインキュベートした。検出を、西洋ワサビペルオキシダーゼ(1:150,000 希釈、Bethyl Laboratories)に結合体化されたヤギ抗ヒトアルブミン抗体および基質として3,3’、5,5’−テトラメチルベンジジン(Vector Laboratories, Burlingame, CA)を使用して達成した。色反応を、2M硫酸で停止し、プレートを650nm波長補正を伴って450nmで読み取った。アッセイ内変動係数は、5%未満であった。アッセイの感度は、1ng/mlであった。
血清および尿中のクレアチニンレベルを、公知の濃度に由来する標準曲線に対して、比色定量アッセイ(Stanbio Laboratory, Boerne, TX)を使用して免疫アッセイに対して使用される同じアリコートにおいて測定した。全タンパク質レベルをまた、ビシンコニン酸/硫酸第二銅試薬(BCA kit, Pierce, Rockford, II)を使用して測定した。脈管形成因子、タンパク質またはアルブミンの尿レベルを、尿クレアチニン濃度に対して正規化した。
本出願人らは、コルモゴロフ−スミルノフ法を使用する正常性試験に全てのデータセットを供し、本出願人らのデータを平均および95%信頼間隔(95%CI)もしくは平均の標準誤差(SEM)(正規分布のデータについて)または範囲の中間値(非対称データについて)いずれかとして報告する。脈管形成因子の部分排出の統計的解析は、データの対数変換の後完了した。対多重比較手順を、必要に応じて一方向分散分析またはクラスカル-ワリスANOVAを使用して実施した。2つの群の間の比較をスチューデントのt−検定またはマン-ホイットニー順位和検定試験を使用して実施した。割合を、フィッシャーの正確試験と比較した。ピアーソン積率相関を使用して、選択された独立変数間の共線形性および従属変数と独立変数との間の他の関係する相関を測定した。各脈管形成因子について、部分排出指標を、以下の式:[Ua]×[Sc] / [Sa]×[Uc]を使用して計算し、[Ua]および[Sa]は、それぞれ脈管形成因子の尿および血清濃度を示し、[Uc]および[Sc]は、尿および血清クレアチニン濃度を示す。同様の計算をアルブミンおよび全タンパク質に対して実施した。統計的有意性は、p<0.05で本出願人らによって判断された。
免疫アッセイの結果を図9に示す。VEGF、sFlt-1およびPlGFに対する群の間で血清および尿濃度における有意な差があった。sPE女性は、mPE女性に比べて、有意により低い血清(クラスカル-ワリスANOVA, p<0.05)タンパク質濃度を有したが、尿(p=0.495)タンパク質濃度はそうではなかった。尿ランダム全タンパク質/クレアチニン比は、24時間尿全タンパク質排出の強い予測分子として長く擁護されてきた(25)。mPE女性ではなくsPE女性は、他の研究群と比べて有意に増加した尿ランダム全タンパク質対クレアチニン比を有した(クラスカル-ワリスANOVA, p=0.007)。
妊娠は、VEGFの減少した血清レベルによって特徴付けられた(NP-CTR対P- CTR, p<0.001)(図9)。sPE女性は、P-CTRに比べて遊離VEGFの有意により低い血清濃度を有した(ANOVA クラスカル-ワリス, p<0.05)が、mPE女性はそうではなかった(p> 0.05)(図10A)。NP-CTR、P-CTRおよびmPE女性の間でVEGFの尿濃度に差はなかった(一方向ANOVA, p=0.371)。対照的に、sPE女性は、mPE群に比べて2倍を超える尿VEGF濃度を有した(p=0.01)(図10B)。sPE群について、アルブミン尿とVEGFの尿レベルとの間に有意な相関はなかった(r=0.083, p=0.860)。mPEにおいて、蛋白尿とVEGFの尿濃度との間に有意な相関があった(r=0.713, p=0.003)が、sPE群にはなく(r=-0.021, p=0.918)、このことは、sPEがこの脈管形成因子の血清および尿濃度を大いに変更するが蛋白尿に独立して変更することを示した。
妊娠は、sFlt-1の増加した血清レベルと関係する(ANOVA クラスカル-ワリス, NP-CTR対P-CTR, p<0.001)(図11A)。臨床診断の時に、両mPEおよびsPE群は、健康な妊娠コントロールに比べてsFlt-1の有意に上昇した平均血清レベルを有した(p<0.05)。sPE女性は、血清sFlt-1濃度がより47%高いのでmPEから区別した(sPE対mPE, p<0.05)。sFlt-1の尿濃度は、妊娠それ自体に影響を受けなかった(NP-CTR対P-CTR, p>0.05)(図11B)。しかし、mPE被験体は、P-CTR群に比べてsFlt-1の有意により高い尿レベルを有した(ANOVA クラスカル-ワリス, p=0.007)。sFlt-1の尿濃度は、疾患重篤度の程度に従って変化した(sPE対mPE, p<0.05)。sPE群内に、アルブミン尿とsFlt-1の尿レベルとの間の有意な相関はなかった(r=0.324, p=0.873)。mPE (r=0.137, p=0.628)またはsPE 群(r=0.336, p=0.087)いずれかについて、蛋白尿とsFlt-1の尿濃度との間の有意な相関はなかった。要約すると、子癇前症の女性は、有意に上昇したsFlt-1の血清および尿濃度を有する。この擾乱は、高血圧性障害の重篤度と共に変化する。
PlGFの血清および尿濃度は、正常な妊娠の間に有意に上昇される(ANOVA クラスカル-ワリス, P-CTR対NP-CTR, p<0.05)(図12Aおよび12B)。さらに、sPE女性およびmPEは、P-CTRに比べて5倍より低い血清PlGFレベルを有した(sPE対P-CTR, p<0.05) (mPE対P-CTR, p<0.05)。sPEを有する女性は、mPEに比べて有意により低いPlGFの血清レベルを有した(sPE対mPE, p<0.05)(図12A)。同様に、PlGFの尿濃度に関するこの比は、維持された(sPE対P-CTR, p=0.004)。子癇前症の女性の間でPlGFの尿濃度に有意な差はなかった(sPE対mPE, p=0.733)。sPE群について、アルブミン尿とPlGFの尿レベルとの間に有意な相関はなかった(r=-0.091, p=0.653)。sPEにおいて、蛋白尿と尿PlGF濃度の間に逆相関および有意な相関があった(ピアーソンr=-0.6, p=0.002)。要約すると、sPE女性は、mPEおよびP-CTR女性に比べて有意により低い血清PlGFレベルを有した。PlGFの尿レベルはまた、子癇前症の女性においてより低く、高血圧性疾患の重篤度によって変化しなかった。
重篤な子癇前症を有する女性において起こる糸球体損傷が尿試料中の脈管形成マーカーの増加した放出を説明するかどうかを評価するために、本出願人らは、腎臓の糸球体濾過能の高い確率の損傷を反映するアルブミン尿、非特異的蛋白尿に関係して、同定された脈管形成マーカーの各々の部分排出を分析した。脈管形成マーカーの部分排出と尿ランダム全タンパク質対クレアチニン比との間の相関分析はまた、研究群の各々について実施された。物質の部分排出は、糸球体によって濾過されたものと比べた尿中に排出された物質の割合を示す。それは、クレアチニンクリアランスに比べて、一般的に報告され、なぜならクレアチニンは、再吸収も有意に分泌もされず、従って、尿濃縮/希釈の任意の効果は、相殺されるからである。健康な妊娠女性は、NP-CTRに比べて有意により多くのVEGFを排出する(ANOVA p<0.001)(図9)。pHTNは、P-CTRに比べてVEGFの部分排出に対して影響を与えなかった(p=0.346)。しかし、sPEは、pHTN (p=0.007)またはP-CTR女性(p<O.001)の両方と比べた場合、VEGFの部分排出を有意に増加した。
本明細書中に示される全ての刊行物および特許は、個々の刊行物または特許が参照によって援用されるように具体的かつ個々に示されたように、その全体を参照によって本明細書によって援用される。矛盾がある場合、本明細書中に任意の定義を含む本願は制御する。
当業者は、本明細書中に記載される本発明の具体的な態様に対する多くの等価物を認識するか、または常套的な実験のみを使用して確かめ得る。かかる等価物は、添付の特許請求の範囲によって含まれることが意図される。
Claims (33)
- 高血圧性障害を有するかまたは発現しやすい妊娠女性を検出するために、被験体妊娠女性から得られた尿試料において測定された可溶性fms様チロシンキナーゼ1(sFlt-1)のレベルを標準と比較する方法であって、ここで該標準は、正常に妊娠している妊娠女性から得られた尿試料のsFlt-1のレベルであり、該標準と比較してのsFlt-1の発現の増加が、該被験体妊娠女性が高血圧性障害を発現する危険にあることを示す、方法。
- 前記標準が、試験尿試料が得られたときの被験体妊娠女性の妊娠の週と同じ妊娠の週の正常に妊娠している妊娠女性から得られたものである、請求項1記載の方法。
- 高血圧性障害が子癇前症であり、被験体妊娠女性についての1mgの尿クレアチニンあたり9.5pgより高いsFlt-1のレベルが、子癇前症の検出指標である、請求項1記載の方法。
- 高血圧性障害が子癇前症であり、被験体妊娠女性についての1mgの尿クレアチニンあたり40pgより高いsFlt-1のレベルが、重篤な子癇前症の検出指標である、請求項1記載の方法。
- 高血圧性障害が、妊娠誘導性高血圧、妊娠性高血圧、子癇前症、EPH妊娠中毒、子癇、混合型子癇前症、HELLP症候群または慢性腎症である、請求項1記載の方法。
- 尿試料が、sFlt-1のレベルを測定する前に安定化剤で処理される、請求項1記載の方法。
- 測定が免疫学的アッセイを使用して実施される、請求項1記載の方法。
- 免疫学的アッセイがELISAである、請求項7記載の方法。
- 高血圧性障害を有するかまたは発現しやすい妊娠女性を検出するために、被験体妊娠女性から得られた尿試料において測定された可溶性fms様チロシンキナーゼ1(sFlt-1)のレベルを標準と比較する方法であって、ここで該標準は、高血圧性障害を有する妊娠女性から得られた尿試料のsFlt-1のレベルであり、該標準と比較してのsFlt-1の同様の発現が、該被験体妊娠女性が高血圧性障害を有するかまたは発現する危険にあることを示す、方法。
- 前記標準が、試験尿試料が得られたときの被験体妊娠女性の妊娠の週と同じ妊娠の週の高血圧性障害を有する妊娠女性から得られたものである、請求項9記載の方法。
- 高血圧性障害が子癇前症であり、被験体妊娠女性についての1mgの尿クレアチニンあたり9.5pgより高いsFlt-1のレベルが、子癇前症の検出指標である、請求項9記載の方法。
- 高血圧性障害が子癇前症であり、被験体妊娠女性についての1mgの尿クレアチニンあたり40pgより高いsFlt-1のレベルが、重篤な子癇前症の検出指標である、請求項9記載の方法。
- 高血圧性障害が、妊娠誘導性高血圧、妊娠性高血圧、子癇前症、EPH妊娠中毒、子癇、混合型子癇前症、HELLP症候群または慢性腎症である、請求項9記載の方法。
- 尿試料が、sFlt-1のレベルを測定する前に安定化剤で処理される、請求項9記載の方法。
- 測定が免疫学的アッセイを使用して実施される、請求項9記載の方法。
- 免疫学的アッセイがELISAである、請求項15記載の方法。
- 高血圧性障害および/またはそれに関係する特定の因子を有するかまたは発現しやすい妊娠女性を検出、または検出を補助する方法であって、該方法は:
妊娠女性から得られた尿試料中の可溶性fms様チロシンキナーゼ1(sFlt-1)および胎盤成長因子(PlGF)のレベルを測定する工程、ならびに
sFlt-1の測定された発現レベルとPlGFの測定された発現レベルとの間の関係を計算する工程、該計算は以下の比指標(uFP):log[sFlt-1/PlGF×100]である、
を含み、1.4を超えるuFPは、該妊娠女性が高血圧性障害に関連する症状の発現または悪化を予防するための治療を必要とする危険の増加の予後指標である、方法。 - 高血圧性障害に関係する特定の因子が、血清尿酸の上昇;帝王切開による分娩、収縮期血圧および拡張期血圧の上昇、尿試験紙蛋白尿、妊娠回数、分娩時の低い胎児の体重、胎盤剥離、子宮内発育不全(IUGR)、溶血、血小板減少、肝臓酵素の上昇ならびにHELLP症候群からなる群から選択される、請求項17記載の方法。
- 高血圧性障害が子癇前症であり、2.1を超えるuFPが、重篤な子癇前症の検出指標である、請求項17記載の方法。
- 高血圧性障害に関係する特定の因子が帝王切開による分娩であり、2.1を超えるuFPは、妊娠女性が帝王切開による分娩をする必要がある危険の増加の検出指標である、請求項17記載の方法。
- 高血圧性障害が、妊娠誘導性高血圧、妊娠性高血圧、子癇前症、EPH妊娠中毒、子癇、混合型子癇前症、HELLP症候群または慢性腎症である、請求項17記載の方法。
- 尿試料が、sFlt-1のレベルおよびPlGFのレベルを測定する前に安定化剤で処理される、請求項17記載の方法。
- 測定が免疫学的アッセイを使用して実施される、請求項17記載の方法。
- 免疫学的アッセイがELISAである、請求項23記載の方法。
- (a)尿の試料を受け取るための容器;
(b)sFlt-1を検出するための手段;
(c)参照試料;および
(d)女性における高血圧性障害の診断のための使用のための指示書
を含む、妊娠女性が高血圧性障害を発現する危険にあるかどうかを決定するためのキット。 - PlGFを検出する試薬をさらに含む、請求項25記載のキット。
- 安定化剤をさらに含む、請求項25記載のキット。
- 前記参照試料が、正常に妊娠している女性から得られた尿試料のsFlt-1レベルを含む、請求項25記載のキット。
- 妊娠誘導性高血圧、妊娠性高血圧、子癇前症、EPH妊娠中毒、子癇、混合型子癇前症、HELLP症候群および慢性腎症を診断するのに有用である、請求項25記載のキット。
- 前記安定化剤がプロテアーゼインヒビターである、請求項6、14または22記載の方法。
- 前記安定化剤がプロテアーゼインヒビターである、請求項27記載のキット。
- 前記プロテアーゼインヒビターが、以下:AEBSF、Pefabloc SC、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド、アンチパイン、アンチパイン-二塩酸、アプロチニン、ベンズアミジン、ベンズアミジン塩酸、ベスタチン、キモスタチン、E-64、L-トランス-エポキシスクシニル-ロイシルアミド-(4-グアニド)-ブタン、N-[N-(L-トランス-カルボキシオキシラン-2-カルボニル)-L-ロイシル]-アグマチン、エチレンジアミン四酢酸およびそのナトリウム塩、ロイペプチン、N-エチルマレイミド、ペプスタチン、ペプスタチンA、ホスホラミドン、アジ化ナトリウム、トリプシンインヒビターならびにε-アミノカプロン酸のいずれかまたはその任意の組み合わせである、請求項30記載の方法。
- 前記プロテアーゼインヒビターが、以下:AEBSF、Pefabloc SC、4-(2-アミノエチル)ベンゼンスルホニルフルオリド、アンチパイン、アンチパイン-二塩酸、アプロチニン、ベンズアミジン、ベンズアミジン塩酸、ベスタチン、キモスタチン、E-64、L-トランス-エポキシスクシニル-ロイシルアミド-(4-グアニド)-ブタン、N-[N-(L-トランス-カルボキシオキシラン-2-カルボニル)-L-ロイシル]-アグマチン、エチレンジアミン四酢酸およびそのナトリウム塩、ロイペプチン、N-エチルマレイミド、ペプスタチン、ペプスタチンA、ホスホラミドン、アジ化ナトリウム、トリプシンインヒビターならびにε-アミノカプロン酸のいずれかまたはその任意の組み合わせである、請求項31記載のキット。
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