JP4933617B2

JP4933617B2 - 新規４−アミノ−３−（３−アゾリル−フェノキシメチル）−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸誘導体

Info

Publication number: JP4933617B2
Application number: JP2009517136A
Authority: JP
Inventors: チェン，イー; トーマスルク，キン−チュン; ロリーンロスマン，パメラ; ソー，スン−シュー
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 2006-06-29
Filing date: 2007-06-22
Publication date: 2012-05-16
Anticipated expiration: 2027-06-22
Also published as: EP2038288A1; MX2008016068A; DK2038288T3; CA2655398A1; BRPI0713041A2; US20080009515A1; AU2007263770A1; WO2008000697A1; JP2009541424A; PT2038288E; US7932390B2; ATE489391T1; ES2354637T3; PL2038288T3; CN101479278A; KR101143286B1; KR20090021195A; BRPI0713041A8; CA2655398C; DE602007010779D1

Description

本発明は、Ｒａｆキナーゼの小分子阻害剤である、置換チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸誘導体に関する。

細胞の増殖や分化の制御不全を特徴とする病状は多い。かかる病状には、種々の細胞型や病気、例えば癌、アテローム性動脈硬化、再狭窄等が包含される。このような病状の多くでは、細胞分裂及び細胞増殖を制御する上で不可欠の機能を果たす重要な細胞性酵素であるキナーゼが、決定的な役割を果たしていると考えられる。

細胞増殖や細胞生存を制御する分子機構やシグナル伝達経路は、抗癌治療法の潜在的な標的として、大きな注目を集めている。近年は、受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）及びＧタンパク質共役受容体により惹起される広範な種類の増殖シグナルを統合するＭＡＰＫ経路を標的とする試みが、目立って増加している。

ＭＡＰＫシグナルカスケードは、３種のキナーゼからなるコアモジュールの上流で機能するＧタンパク質Ｒａｓを有する。Ｒａｆは、ＭＥＫ１／２をリン酸化して活性化し、それが最終的にはＥＲＫ１／２の活性化に繋がる。Ｒａｆキナーゼは、癌関連シグナル伝導の潜在的なチェックポイントとして重要であることから、長い間、魅力的な薬物送達の標的であると考えられてきた（Strumberg and Seeber, Onkologie, 2005, 28: 101-107; Beeram et al., J. Clin. Oncol. 2005, 23: 6771-6790）。腫瘍細胞の増殖及び生存におけるＭＡＰＫシグナル伝達カスケードの重要性は、ヒト腫瘍のＢ−Ｒａｆ突然変異の活性化の発見により、近年高まっている。Ｒａｆ突然変異の活性化は、メラノーマ、甲状腺、結腸、及び他の癌でも同定されている（Strumberg and Seeber, Onkologie, 2005, 28: 101-107; Bollag et al., Current Opinion in Investigational Drugs, 2003, 4:1436-1441）。

従って、Ｒａｓ突然変異及び活性化増殖因子受容体を有する腫瘍を制御する役割に加え、Ｒａｆキナーゼの阻害剤は、Ｂ−Ｒａｆ癌遺伝子を有する腫瘍を治療し得る可能性をも秘めている（Sharma et al., Cancer Res. 2005, 65: 2412-2421）。

哺乳類のＲａｆセリン／スレオニンキナーゼファミリーは、６８ｋｄから７４ｋｄの３種類のタンパク質からなる。これらはＡ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、及びＣ−Ｒａｆ（Ｒａｆ−１）と呼ばれ、いずれも、高度に保存されたアミノ末端の調節領域と、カルボキシル末端の触媒ドメインを有している。Ｒａｆタンパク質は通常は細胞質に存在するが、小型Ｇタンパク質Ｒａｓによって細胞膜に動員される。かかる段階は、増殖因子、サイトカイン、ホルモンにより活性化される上で、不可欠な段階である。膜におけるＲａｆの活性化は極めて複雑なプロセスを経て生じる。かかるプロセスには、構造の変化、他のタンパク質への結合、脂質への結合、並びに、同じ残基のリン酸化及び脱リン酸化が含まれる。

アンチセンスオリゴヌクレオチドや小分子等、Ｒａｆキナーゼと干渉する種々の剤が発見されている。これらの阻害剤は、Ｒａｆタンパク質の発現を阻害し、Ｒａｓ／Ｒａｆ相互作用を遮断し、又はそのキナーゼ活性を妨害する。ｓｉＲＮＡ又はキナーゼ阻害剤ＢＡＹ−４３−９００６によりＢ−Ｒａｆ活性を下方制御すると、メラノーマ細胞の成長が阻害され、ｓｉＲＮＡの媒介によりＢ−Ｒａｆを低減すると、１２０５Ｌｕ細胞の腫瘍形成能が低下する。現在臨床評価中のＲａｆ阻害剤は、非常に許容性の高い安全性プロファイルを有し、抗癌有効性についての見通しは有望である。臨床的に最も進んでいるのはＲａｆ阻害剤ＢＡＹ４３−９００６である。これは近年、転移性腎細胞癌の治療についてＦＤＡから認可され、他の癌の治療については更に第III相臨床試験中である。

これまでなされてきた進展はあるものの、広範な種類の腫瘍及び他の増殖性障害、例えば再狭窄、血管新生、糖尿病性網膜症、乾癬、術後の癒着、黄斑変性、アテローム性動脈硬化等の処置に有用な低分子量化合物の探索が続けられている。すなわち、抗増殖活性を有する組成物、医薬及び／又は薬剤を提供する強い要請が存在している。かかる組成物、医薬及び／又は薬剤は、単に強い活性を有するのみならず、他の抗増殖剤と比較して副作用が低減されていることが望ましい。さらに、かかる組成物、医薬及び／又は薬剤に対して応答性を示す腫瘍のスペクトルは広いことが望ましい。この種類の活性成分は、上述の適応において単剤として、及び／又は、治療剤との併用治療として、照射に、手術／外科処置に、温熱処置に、或いは上述の適応について知られている他の任意の処置に適していることが望ましい。

具体的には、本発明は少なくとも１種の、下記式の化合物

（式中、
Ｒ¹は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルコキシ、シアノ、ＮＲ⁴Ｒ⁵、トリフルオロメチル及びＮＯ₂からなる群より選択され；
Ｒ²は例えば、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール又はヘテロアリール置換低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シアノ、ハロゲン、メチルスルホニル、スルホンアミド、トリフルオロメチル、スルホニル尿素、アミド、エステル、カルバメート及び尿素からなる群より選択される１又は２以上の基であり；
Ｒ³は、水素、ヒドロキシ、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルコキシ及びＮＲ⁴Ｒ⁵からなる群より選択され；
環Ｂは、アリール及びヘテロアリールからなる群より選択され；
環Ａは、更に置換されていてもよい

（Ａは、独立にＣ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される）であり、環Ａは芳香族であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵は、水素、低級アルキル、又はヒドロキシ若しくは低級アルコキシで置換された低級アルキルから選択され、
ＸはＯ又はＮＨである）、
及び、医薬的に許容し得るその塩に関する。

上述したように、本発明の化合物はＲａｆキナーゼ阻害剤である。この阻害作用から、本化合物は、強力な選択的抗癌剤としての活性を有している可能性が高い。

本明細書において指定のある場合、種々の基は、１〜５、好ましくは１〜３の置換基で置換されていてもよい。かかる置換基は、独立に、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ジオキソ低級アルキレン（例えばベンゾジオキシル基を形成する）、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ₃、ＮＨ₂、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）、Ｎ（低級アルキル）₂、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ₂、低級アルコキシ、チオ低級アルコキシ、低級アルキルスルホニル、アミノスルホニル、低級アルキルカルボニル、低級アルキルカルボニルオキシ、低級アルコキシカルボニル、低級アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−低級アルキル、フルオロ−低級アルコキシ、低級アルコキシ−カルボニル−低級アルコキシ、カルボキシ−低級アルコキシ、カルバモイル−低級アルコキシ、ヒドロキシ−低級アルコキシ、ＮＨ₂−低級アルコキシ、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）−低級アルコキシ、Ｎ（低級アルキル）₂−低級アルコキシ、ベンジルオキシ−低級アルコキシ、モノ又はジ低級アルキル置換アミノ−スルホニル、並びに、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ₂、Ｎ（Ｈ、低級アルキル）又はＮ（低級アルキル）₂で置換されていてもよい低級アルキルからなる群より選択される。アルキル、アリール、ヘテロアリール及びヘテロシクリル環の好ましい置換基としては、ハロゲン、低級アルコキシ、低級アルキル及びアミノが挙げられる。

「Ｒ²は例えば・・・１又は２以上の基である」という記載は、１又は２以上、好ましくは１から３、より好ましくは１又は２、さらに好ましくは１つのＲ²基が、Ａ基に結合していてもよいことを表す。

「アルキル」という語は、直鎖又は分岐鎖の飽和炭化水素基であって、１から約２０の炭素原子を有するもの、例えば１から約７の炭素原子を有するものをいう。一部の実施形態によれば、アルキル置換基は低級アルキル置換基である。「低級アルキル」という語は、１から６の炭素原子を有するアルキル基を指し、一部の実施形態によれば、１から４の炭素原子を有するものを指す。アルキル基の例としては、これらに制限されるものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｓ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、及びｓ−ペンチルが挙げられる。

本明細書で使用される「シクロアルキル」とは、炭素原子のみからなる任意の安定な単環又は多環系であって、何れの環も飽和であるものを意味し、「シクロアルケニル」という語は、炭素原子のみからなる任意の安定な単環又は多環系であって、少なくとも１の環が部分的に不飽和であるものを意味する。好ましいシクロアルキルとしては、Ｃ３−Ｃ６−シクロアルキルが挙げられる。シクロアルキルの例としては、これらに制限されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、アダマンチル、シクロオクチル、ビシクロアルキル、例えばビシクロオクタン、例えば［２．２．２］ビシクロオクタン又は［３．３．０］ビシクロオクタン、ビシクロノナン、例えば［４．３．０］ビシクロノナン、及びビシクロデカン、例えば［４．４．０］ビシクロデカン（デカリン）、又はスピロ化合物が挙げられる。シクロアルケニルの例としては、これらに制限されるものではないが、シクロペンテニル又はシクロヘキセニルが挙げられる。

本明細書で使用される「アルケニル」とは、直鎖又は分岐の不飽和脂肪族炭化水素基であって、１つの二重結合を有すると共に、２から６、好ましくは２から４の炭素原子を有するものを意味する。かかる「アルケニル基」の例としては、ビニル（エテニル）、アリル、イソプロペニル、１−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、２−エチル−１−ブテニル、３−メチル−２−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、４−メチル−３−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル及び５−ヘキセニルが挙げられる。

本明細書で使用される「アルキニル」という語は、不飽和直鎖又は分岐鎖の脂肪族炭化水素基であって、１つの三重結合を有すると共に、２から６、好ましくは２から４の炭素原子を有するものを意味する。かかる「アルキニル基」の例としては、エチニル、１−プロピニル、２−プロピニル、１−ブチニル、２−ブチニル、３−ブチニル、１−ペンチニル、２−ペンチニル、３−ペンチニル、４−ペンチニル、１−ヘキシニル、２−ヘキシニル、３−ヘキシニル、４−ヘキシニル及び５−ヘキシニルが挙げられる。

「アミド」という語は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｎ−Ｒ^aＲ^bを指す。ここでＲ^a及びＲ^bは独立に、水素又は低級アルキルである。アミド基の例としては、カルバモイル：−（Ｃ＝Ｏ）−ＮＨ₂が挙げられる。

「エステル」という語は、−（Ｃ＝Ｏ）−Ｏ−Ｃ_1-6−アルキル基を指す。

上記定義で使用される「ハロゲン」という語は、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を指す。好ましくはフッ素又は塩素である。

「アリール」は、一価の単環又は二環式の芳香族炭素環式炭化水素基、好ましくは６〜１０員の芳香族環系を意味する。好ましいアリール基としては、これらに制限されるものではないが、フェニル、ナフチル、トリル、及びキシリルが挙げられる。

「ヘテロアリール」は、最大２つの環を有する芳香族ヘテロ環式環系を表す。好ましいヘテロアリール基としては、５又は６員のヘテロアリール基が挙げられ、例えば、これらに制限されるものではないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピラジニル、オキサゾリル、チアキソリル、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール及びテトラゾリルが挙げられる。

アリール又はヘテロアリールが二環式の場合、一方の環がアリールで、他方の環がヘテロアリールであってもよく、何れも置換でも無置換でもよい。

「ヘテロ環」は、置換又は無置換の５から８員の単環又は二環の非芳香族炭化水素において、１から３の炭素原子が、窒素、酸素又は硫黄原子から選択されたヘテロ原子に置き換えられたものを指す。例としては、ピロリジン−２−イル；ピロリジン−３−イル；ピペリジニル；モルホリン−４−イル等が挙げられる。

「ヘテロ原子」は、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される原子を意味する。

「アルコキシ、アルコキシル又は低級アルコキシ」は、上述の低級アルキル基のいずれかが酸素原子に結合したものを指す。典型的な低級アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、イソプロポキシ又はプロポキシ、ブチロキシ等が挙げられる。更にアルコキシの意味に含まれるものとして、多重アルコキシ側鎖、例えばエトキシエトキシ、メトキシエトキシ、メトキシエトキシエトキシ等、並びに置換アルコキシ側鎖、例えばジメチルアミノエトキシ、ジエチルアミノエトキシ、ジメトキシホスホリルメトキシ等が挙げられる。

医薬的に許容し得る担体、賦形剤等の「医薬的に許容し得る」とは、個々の化合物が投与される対象にとって、薬理学的に許容し得ると共に、実質的に無毒であることを指す。

「医薬的に許容し得る塩」とは、本発明の化合物の生物学的効果及び特性を保持する従来の酸付加塩又は塩基付加塩であって、適切な無毒の有機若しくは無機酸又は有機若しくは無機塩基から形成されるものをいう。酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等の無機酸から誘導されるもの、並びに、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、オキサル酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸、トリフルオロ酢酸等の有機酸から誘導されるものが挙げられる。塩基付加塩の例としては、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、ヒドロキシ化４級アンモニウム等から誘導されるもの、例えば、水酸化テトラメチルアンモニウム。医薬化合物（すなわち薬剤）を化学修飾して塩に変換する手法は、化合物の物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性及び溶解性を改善する上で、薬化学者には周知の手法である。例えばAnsel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6th Ed. 1995) at pp. 196 and 1456- 等参照。

少なくとも１の不斉炭素原子を有する式Ｉの化合物及びその塩は、ラセミ混合物として存在していてもよく、或いは異なる立体異性体として存在していてもよい。種々の異性体は、クロマトグラフィー等の公知の分離法により単離することができる。

本願明細書に開示する化合物、及び、上記式Ｉに包括される化合物は、互変異性又は構造異性を示すものでもよい。本発明は、これらの化合物の任意の互換異性体又は構造異性体、又はかかる形態の任意の混合物を包含することを意図するものであり、上記式Ｉに示す互換異性体又は構造異性体のいずれか１つに限定されるものではない。

「有効量」とは、疾病の症状を予防、軽減又は改善し、或いは処置される対象の生存を延長するのに有効な量を意味する。

「ＩＣ₅₀」とは、個別に測定される活性の５０％を阻害するのに必要な特定の化合物の濃度を指す。ＩＣ₅₀はとりわけ、以下の試験に関する説明に記載する方法で測定することができる。

「医薬的に許容し得るエステル」とは、カルボキシル基又はヒドロキシ基を有する式Ｉの化合物を従来法によりエステル化したものであって、得られたエステルが式Ｉ〜IVの化合物の生物学的効果及び特性を保持し、インビボで（in vivo：生体内で）開裂されて、それぞれ対応する活性なカルボン酸又はアルコールに変換されるものをいう。

本発明の化合物には、式Ｉの化合物であって、
Ｒ¹は、水素、低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルコキシ、シアノ、ＮＲ⁴Ｒ⁵、トリフルオロメチル及びＮＯ₂からなる群より選択され；
Ｒ²は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、アリール又はヘテロアリール置換低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シアノ、ハロゲン、メチルスルホニル、スルホンアミド、トリフルオロメチル、スルホニル尿素、アミド、エステル、カルバモイル、カルバメート及び尿素からなる群より選択され；
Ｒ³は、水素、低級アルキル、置換低級アルキル、低級アルコキシ及びＮＲ⁴Ｒ⁵からなる群より選択され；
環Ｂは、アリール及びヘテロアリールからなる群より選択され；
環Ａは、更に置換されていてもよい

（Ａは、独立にＣ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択される）であり、環Ａは芳香族であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵は、水素、低級アルキル、又はヒドロキシ若しくは低級アルコキシで置換された低級アルキルから選択され、
ＸはＯ又はＮＨである化合物、並びに、医薬的に許容し得るその塩も包含される。

本発明に係る式Ｉの化合物のいずれの実施形態でも、Ｒ²は例えば：
水素、
低級アルキル、
ヒドロキシ置換低級アルキル、
アリール又はヘテロアリールで置換された低級アルキル（ここでアリール又はヘテロアリールは、ハロゲン又は低級アルキルで置換されていてもよい）、
低級アルケニル、
低級アルキニル、
低級アルコキシ、
アリール、
アリール−低級アルキレニル（ここでアリール基は、低級アルコキシ又はハロゲンで置換されてなる）、
ヘテロアリール、
ヘテロアリール−低級アルキレニル（ここでヘテロアリール基は、低級アルキル、又は、ヒドロキシ置換低級アルキルで置換されてなる）
シアノ、
ハロゲン、
メチルスルホニル、
スルホンアミド、
トリフルオロメチル、
スルホニル尿素、
アミド、
エステル、
カルバメート、及び、
尿素からなる群より選択される、１又は２以上の基である。

本発明に係る式Ｉの化合物のいずれの実施形態でも、Ｒ³は例えば、水素、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシ及びＮＲ⁴Ｒ⁵からなる群より選択される。

本発明に係る式Ｉの化合物実施形態において、環Ａは例えば：

である。ここでＡは、独立にＣ、Ｎ、Ｏ及びＳから選択され、Ｒ²に結合したＡと、分子の残る部分に結合したＡは、Ｃ又はＮのいずれかであり、環Ａは、芳香族である。

好ましい化合物としては、上記式において、
Ｒ¹が、５−置換１−ヒドロキシ環Ｂ（ここで環Ｂはフェニルである）のＣ２における水素又は低級アルキルであるか、又は、
Ｒ¹が、５−置換３−ヒドロキシ環Ｂ（ここで環Ｂはピリジンである）のＣ２における水素又は低級アルキルである化合物が挙げられる。

好ましい環Ａ’としては、例えば：

が挙げられる。ここで上記の環は更に、上記定義のとおりに置換されていてもよい。

更に好ましい上記式の化合物としては、
４−クロロ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル；
４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル；
４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−アミノ−３−｛５−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩、
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−クロロ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−クロロ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−クロロ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩、
４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ−［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−クロロ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、及び、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドが挙げられる。

本発明の化合物は、細胞増殖性障害、特に腫瘍性障害の処置又は制御に有用である。これらの化合物、及びかかる化合物を含有する製剤は、固形腫瘍、例えば乳房、結腸、肺、前立腺等の腫瘍の処置又は制御に有用であることが望ましい。

本発明に係る化合物の治療的に有効な量とは、疾病の症状を予防、緩和又は改善し、或いは処置される対象の生存を延長するのに有効な化合物量を意味する。治療的に有効な量の決定は、本技術分野の知識の範囲内である。

本発明に係る化合物の治療的に有効な量又は用量は、広範な範囲の値を取り得るが、本技術分野で公知の手法により決定することができる。かかる用量は、具体的な各事例における個々の要件に合わせて調節される。かかる要件としては、投与される具体的な（１又は２以上の）化合物、投与経路、処置対象となる状態、さらには、処置される患者等が挙げられる。一般に、体重約７０ｋｇ程度の成人に対する経口又は非経口投与の場合、１日投与量としては約１０ｍｇから約１０，０００ｍｇ、好ましくは約２００ｍｇから約１，０００ｍｇが適切であるが、適応があれば上限を超えてもよい。一日投与量は単回投与しても分割投与してもよく、非経口投与の場合には、持続注入で投与してもよい。

本発明の製剤としては、経口、鼻腔内、局所（例えば頬内及び舌下）、直腸内、膣内及び／又は非経口投与に適したものが挙げられる。本製剤は単位投与形態で供するのが便利であり、薬学分野で周知の任意の方法で調製することができる。担体材料と組み合わせて単回投与形態を作製し得る活性成分の量は、処置される受容者や、具体的な投与形態に応じて異なり得る。担体材料と組み合わせて単回投与形態を作製し得る活性成分の量は、通常は、式Ｉの化合物が治療効果を発揮する量である。一般に、１００パーセントに対する活性成分の量は約１パーセントから約９９パーセント、好ましくは約５パーセントから約７０パーセント、最も好ましくは約１０パーセントから約３０パーセントの範囲である。

これらの製剤又は組成物を調製する方法は、本発明の化合物を担体と、並びに任意により１又は２以上の補助成分と混合する工程を含む。本製剤は通常、本発明の化合物を液体担体と、又は微粉砕個体担体と、又はその双方と均一且つ念入りに混合し、続いて必要に応じて生成物を成形することにより調製される。

経口投与に適した本発明の製剤は、カプセル、カシェ剤（cachets）、サシェ剤（sachets）、丸剤、錠剤、ドロップ剤（lozenges）（風味付基剤を使用、通常はショ糖及びアカシア又はトラガント）、粉剤、顆粒等の形態としてもよく、或いは水性又は非水性液体中の溶液又は懸濁液として、或いは水中油型又は油中水型の乳濁液として、或いはエリキシール剤又はシロップ剤として、或いはトローチ剤（pastilles）（不活性基材を使用、例えばゼラチン及びグリセリン、或いはショ糖及びアカシア）として、及び／又は洗口剤（mouth washes）等としてもよい。各々、所定量の本発明の化合物を活性成分として含有する。本発明の化合物はボーラス剤、舐剤（electuary）又はペースト剤として投与してもよい。

本発明の化合物は以下の一般スキームにしたがって合成することができる。

スキーム１

スキーム２

スキーム３

スキーム４

スキーム５

スキーム６

スキーム７

スキーム８

スキーム９

スキーム１０

スキーム１〜１０において、Ｒ¹、Ｒ²、及びＲ³は、式Ｉについて上述したとおりであり、基Ｒ、Ｒ’の例は以下の実施例に示すとおりである。ＰＧ及びＰＧ’は標準的な保護基であり、その例は以下の実施例に示すとおりである。

スキーム１〜１０の反応条件については、以下の実施例で更に例示及び詳述する。

これらのスキーム中、出発材料は市販されているか、或いは以下の実施例の記載にしたがって合成し得る。

以下の実施例及び文献は、本発明の理解を助けるために供するものである。本発明の真の範囲は、添付の特許請求の範囲に記載のとおりである。

実施例１
３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

出発材料である３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルは、３−メチルチオフェンから、Luk, K.; McDermott, L. A.; Rossman, P. L.; Wovkulich, P. M.; Zhang, Z.、米国特許公開２００５０２５６１５４Ａ１の手順に従って調製した。

実施例２
３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸エチルエステル

３−ヒドロキシ−４−メチル安息香酸（２５．４２ｇ、１６７ｍｍｏｌ）（TCI US）及び濃硫酸（３ｍＬ）の無水エタノール（１８０ｍＬ）中混合物を、還流温度で２０時間加熱した。冷却後、個体重炭酸ナトリウム（１０ｇ）を加えて酸を中和した。混合物をジエチルエーテル（２×４００ｍＬ）と水（２×３００ｍＬ）で分画した。有機層を塩水で洗浄し（３００ｍＬ）、集めて乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をヘキサンから再結晶化させることにより、３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸エチルエステルを白色結晶として二度の収穫により得た（収量２９．１４ｇ、９６．８％）。

実施例３
３−メトキシメトキシ−４−メチル−安息香酸エチルエステル

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５．３ｍＬ、３０．５ｍｍｏｌ）（Aldrich）を、エチル３−ヒドロキシ−４−メチルベンゾエート（５．０ｇ、２７．７５ｍｍｏｌ）（上記実施例２より）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中懸濁液に、氷水槽中で冷却しながら加えた。次いで、クロロメチルメチルエーテル（４．２ｍＬ、５５．５ｍｍｏｌ）（Aldrich）を滴下により加え、混合物を室温で５時間攪拌した。次いで、混合物をエーテル（１００ｍＬ）で希釈し、水（１００ｍＬ）を混合して洗浄し、続いて０．１ＮＨＣｌ（２×１００ｍＬ）及び塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。水性層をエーテル（１００ｍＬ）で逆洗浄した。有機溶液を集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をシリカゲル（Biotage 40L）に通し、ジクロロメタンで溶出して濾過した。画分を集めて濃縮することにより、３−メトキシメトキシ−４−メチル−安息香酸エチルエステルを無色油状物として得た（収量４．８８ｇ、７８．４％）。

実施例４
４−メチル−３−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシ）−安息香酸エチルエステル

水素化ナトリウム（油中６０％、１．８０ｇ、４５ｍｍｏｌ）（Aldrich）をペンタン（２×５０ｍＬ）で洗浄し、ペンタンをピペッティングにより除去した。得られた固体を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）に懸濁させ、氷水槽で冷却した。エチル３−ヒドロキシ−４−メチルベンゾエート（５．４１ｇ、３０ｍｍｏｌ）（上記実施例２より）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍＬ）中溶液を、滴下により３０分かけて加えた。更に３０分の攪拌後、２−（トリメチルシリル−エトキシメチルクロリド（６．４ｍＬ、３６ｍｍｏｌ）（Aldrich）を滴下により１０分かけて加えた。室温で更に２時間の攪拌後、反応混合物を水（３×１００ｍＬ）及びジエチルエーテル（２×１００ｍＬ）で分画した。有機層を塩水で洗浄し（１００ｍＬ）、次いでそれらを集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮することにより、粗製４−メチル−３−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシ）−安息香酸エチルエステルを無色油状物として得た。これは更に精製することなく次工程に使用した（収量９．００ｇ、９６．６％）。

実施例５
２−メチル−５−［４−メチル−３−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシ）−フェニル］−［１，３，４］オキサジアゾール

粗製４−メチル−３−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシ）−安息香酸エチルエステル（９．０ｇ、２９ｍｍｏｌ）（上記実施例４より）の無水ヒドラジン（１０ｍＬ、３１８ｍｍｏｌ）（Aldrich）中懸濁液を還流温度（浴温１５０℃）で１．５時間加熱した。室温に冷却後、混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）及び水（３×１００ｍＬ、数ｍＬの塩水を添加）で分画した。有機層を塩水で洗浄し（１００ｍＬ）、次いでそれらを集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をエタノール（３００ｍＬ）で希釈し、濃縮することにより、ヒドラジド中間体を白色固体として得た。これをオルト酢酸トリエチル（２０ｍＬ、１０９ｍｍｏｌ）（Aldrich）に懸濁させ、還流温度（浴温１５０℃）で２２時間加熱した。冷却後、混合物をヘキサンで希釈し、フラッシュクロマトグラフィー（Biotage 40L、溶媒としてヘキサン中５％、次いで２５％の酢酸エチル）で精製した。画分を集めて濃縮することにより、２−メチル−５−［４−メチル−３−（２−トリメチルシラニル−エトキシメトキシ）−フェニル］−［１，３，４］オキサジアゾールを淡黄色油状物として得た。静置すると白色結晶として結晶化した（収量８．２２ｇ、８８．５％）。

実施例６
３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸ヒドラジド

エチル３−ヒドロキシ−４−メチルベンゾエート（１４．４２ｇ、８０ｍｍｏｌ）（上記実施例２より）の無水ヒドラジン（３０ｍＬ、９５６ｍｍｏｌ）（Aldrich）中懸濁液を還流温度（浴温１５０℃）で２．０時間加熱した。室温に冷却後、混合物を減圧（高真空）下で濃縮することにより、粗製３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸ヒドラジドを灰白色固体として得た（収量１３．２６ｇ、１００％）。

実施例７
３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノール

３−ヒドロキシ安息香酸ヒドラジド（０．９１ｇ、６ｍｍｏｌ）（Aldrich）及びオルト酢酸トリエチル（４．５ｍＬ、２４ｍｍｏｌ）（Aldrich）の混合物を、１５０℃の浴槽中、密閉圧力反応器内で２２時間加熱した。室温に冷却後、混合物を濃縮し、残留物をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage 40L、溶媒として酢酸エチル − ヘキサンを１：１）で精製することにより、２つの生成物を得た。高Ｒｆ物質をジクロロメタン − ヘキサンから再結晶化させることにより、２−（３−エトキシ−フェニル）−５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾールを白色結晶として得た（収量０．２９ｇ、２３．７％）。また、低Ｒｆ物質をジクロロメタン − ヘキサンから再結晶化させることにより、３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノールを白色結晶として得た（収量０．７７ｇ、７２．８％）。

実施例８
４−クロロ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノール（０．１５ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）（上記実施例７より）、炭酸カリウム（０．２５ｇ、１．８ｍｍｏｌ）及び１８−クラウン−６（１０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）（Aldrich）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中懸濁液を、密閉管中マグネチックスターラーで攪拌しながら６５℃で２時間加熱した。次いで、３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．２７ｇ、０．８ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）及びヨウ化カリウム（０．１３ｇ、０．８ｍｍｏｌ）を加え、混合物を前記密閉管中、６５℃で更に２０時間加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で分画した。有機層を塩水で洗浄し、次いでそれらを集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage 40S、溶媒としてジクロロメタン中２０％酢酸エチル）で精製することにより、４−クロロ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．２２ｇ、６３．１％）。

実施例９
４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

アンモニアガスを４−クロロ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１２ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）（上記実施例８から）の２−プロパノール（１５ｍＬ）中溶液に通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器で１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．０７ｇ、５８％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₀H₁₈N₄O₄S + H [(M+H)⁺]：411.1122。Found: 411.1121。

実施例１０
４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０５ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）（上記実施例９より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）（Aldrich）で処理し、マイクロ波反応器により１６０℃で２時間加熱した。反応混合物を逆相クロマトグラフィー（C18 カラム）で、アセトニトリル − 水で溶出することにより精製し、４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを白色粉末として得た（収量１５．０ｍｇ、２９％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₀H₁₉N₅O₄S + H [(M+H)⁺]：426.1231。Found: 426.1227。

実施例１１
２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノール

エチル３−ヒドロキシ−４−メチルベンゾエート（３．６０ｇ、２０ｍｍｏｌ）（上記実施例６より）の無水ヒドラジン（１０ｍＬ、３１８ｍｍｏｌ）（Aldrich）中懸濁液を還流温度で３時間加熱した（浴温１５０℃）。室温に冷却後、混合物を減圧下で濃縮し、乾燥固体を得た。これをキシレン（５０ｍＬ）に懸濁させ、減圧下で濃縮した。得られた固体をトリエチルオルト酢酸（３５ｍＬ、１９１ｍｍｏｌ）（Aldrich）に懸濁させ、還流温度（浴温１５０℃）で２０時間加熱し、エタノールを除去した。冷却後、ジクロロメタンを加え、固体を濾過で収集することにより、２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノールを灰白色結晶物質として得た（収量２．２８ｇ、６０．０％）。

上記の濾液をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage 40L、溶媒としてジクロロメタン中１０％、次いで４０％の酢酸エチル）で精製することにより、２次収穫物として２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノールを白色結晶物質として得た（収量０．９９ｇ、２６．０％）。

実施例１２
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．２９ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）、ヨウ化カリウム（０．１４ｇ、０．８７ｍｍｏｌ）、２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノール（０．１７ｇ、０．９ｍｍｏｌ）（上記実施例１１より）、炭酸カリウム（０．２７ｇ、１．９ｍｍｏｌ）及び１８−クラウン−６（１０ｍｇ、０．０４ｍｍｏｌ）（Aldrich）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中懸濁液を密閉管中、マグネチックスターラーで攪拌しながら６５℃で２０時間加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル（２×１００ｍＬ）及び水（２×１００ｍＬ）で分画した。水性層をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した［物質は酢酸エチルよりもジクロロメタンに高い溶解性を示した］。有機層を塩水で洗浄し、次いでそれらを集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage 40S、溶媒としてジクロロメタン、次いでジクロロメタン中２０％酢酸エチル）で精製することにより、４−クロロ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．２４ｇ、６２．４％）。

実施例１３
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシ−メチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１２ｇ、０．２８ｍｍｏｌ）（上記実施例１２より）の２−プロパノール（１５ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器により、１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン中３０％酢酸エチルで溶出して精製することにより、回収された出発材料（２５ｍｇ）及び４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．０５３ｇ、４４％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₀N₄O₄S + H [(M+H)⁺]：425.1278。Found: 425.1274。

実施例１４
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩

４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０４３ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）（上記実施例１３より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）（Aldrich）で処理し、マイクロ波反応器により１６０℃で２時間加熱した。反応混合物をＨＰＬＣにより、アセトニトリル − 水含有トリフルオロ酢酸で溶出して精製し、２つの生成物を得た。第１生成物として、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩を白色粉末として得た（収量２０．０ｍｇ、４７％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₁N₅O₄S + H [(M+H)⁺]：440.1387。Found: 440.1384。

実施例１５
４−アミノ−３−｛５−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩

第２生成物（上記実施例１４より）として、４−アミノ−３−｛５−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩を得た（収量１０．０ｍｇ、２１％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₃H₂₆N₆O₄S + H [(M+H)⁺]：483.1809。Found: 483.1808。

実施例１６
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩

４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド（０．０４５ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）（上記実施例１４より）のメタノール（６ｍＬ）中溶液を、トルエン−４−スルホン酸水和物（１９．５ｍｇ、０．１０ｍｍｏｌ）（Aldrich）で処理し、４０℃で３０分加熱した。溶液を濃縮した。残存物をジエチルエーテルで洗浄し、水に溶解させ、凍結乾燥することにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩を得た（収量６０．８ｍｇ、９７％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₁N₅O₄S + H [(M+H)⁺]：440.1387。Found: 440.1384。

実施例１７
５−ヨウ化−２−メチル−フェノール

５−ヨウ化−２−メチル−フェノールは、Laugraud, S.；Reinier, N, ＷＯ９６／３２３９９（１９９６年１０月１７日公開）の手順に従って調製した。

５−アミノ−Ｏ−クレゾール（１０．０ｇ、８１ｍｍｏｌ）（Aldrich）の、テトラヒドロフラン（１００ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）及び濃硫酸（６ｍＬ、０．１１ｍｍｏｌ）の混合液中溶液を、氷水槽で冷却した。亜硝酸ナトリウム（５．６ｇ、８１ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液を滴下により３０分かけて加えた。混合物を冷却しながら更に３０分攪拌した（懸濁液が生じた）。銅金属粉末（２００ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、次いでヨウ化カリウム（１７．５ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）の水（７０ｍＬ）溶液を加えた。混合物を室温に回復させ、９０分攪拌してから、水（２００ｍＬ）に注ぎ入れた。混合物を酢酸エチル（２×４００ｍＬ）で抽出した。有機層を水（４００ｍＬ）及び塩水（４００ｍＬ）で洗浄し、次いでそれらを集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage 75L、溶媒としてヘキサン − ジクロロメタン２：３）で精製した。純画分を集めて物質をヘキサンから再結晶化させ、５−ヨウ化−２−メチル−フェノールを２度の収穫により白色針状物として得た（収量１０．０８ｇ、５３．０％）。

実施例１８
４−ヨウ化−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼン

Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８．３ｍＬ、４７．４ｍｍｏｌ）（Aldrich）を、５−ヨウ化−２−メチル−フェノール（１０．１ｇ、４３．１ｍｍｏｌ）（上記実施例１７より）のジクロロメタン（４０ｍＬ）中懸濁液に、氷水槽中で冷却しながら加えた。クロロメチル−メチルエーテル（６．５ｍＬ、８６．１ｍｍｏｌ）（Aldrich）を滴下により加え、混合物を室温で５時間攪拌した。次いで、混合物をエーテル（２００ｍＬ）で希釈し、水（２００ｍＬ）で洗浄し、続いて０．１ＮＨＣｌ（２×２００ｍＬ）及び塩水（２００ｍＬ）で洗浄した。水性層をエーテル（２００ｍＬ）で逆洗浄した。有機溶液を集め、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をシリカゲル（Biotage 40L）に通し、ジクロロメタン − ヘキサン（１：４Ｖ／Ｖ）で溶出して濾過した。画分を集めて濃縮することにより、４−ヨウ化−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼンを無色油状物としてを得た（収量９．０５ｇ、７５．６％）。

実施例１９
４−エチニル−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼン

４−ヨウ化−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼン（７．６３ｇ、２７．５ｍｍｏｌ）（上記実施例１８より）、トリエチルアミン（５５ｍＬ）（Aldrich）及びアセトニトリル（１００ｍＬ）の混合物に、圧力反応器内でアルゴンを通過させ、室温で２０分バブリングさせた。エチニルトリメチルシラン（９．２ｍＬ、６４．５ｍｍｏｌ）（Aldrich）、ヨウ化銅（I）（２４５ｍｇ、１．２８ｍｍｏｌ）（Aldrich）及びジクロロビス（トリフェニル−ホスフィン）パラジウム（II）（９１１ｍｇ、１．２９ｍｍｏｌ）（Aldrich）を加えた。反応器を閉栓し、混合物をマグネチックスターラーで攪拌しながら、１００℃で５時間加熱した。室温に冷却後、混合物をジエチルエーテル（２５０ｍＬ）及び水（２５０ｍＬ）に懸濁させ、セライト（Celite）^{（登録商標）}を通して濾過した。層分離を行った。有機層を水（２５０ｍＬ）及び塩水（２５０ｍＬ）で洗浄した。水性層をエーテル（２５０ｍＬ）で逆洗浄した。有機層を集めて乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をメタノール（５０ｍＬ）に溶解させ、炭酸カリウム（５００ｍｇ）を加えた。混合物を室温で一晩攪拌した。濃縮後、残存物をジエチルエーテル（２×２５０ｍＬ）及び水（２×２５０ｍＬ）で分画した。有機層を塩水で洗浄し（２００ｍＬ）、集めて乾燥し（ＭｇＳＯ₄）、濾過及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィー（Biotage 40L、溶媒としてヘキサン、次いでヘキサン − ジクロロメタン９：１及び３：１）で精製することにより、４−エチニル−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼンを茶色油状物として得た（収量４．６５ｇ、９６．２％）。

実施例２０
４−（３−メトキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール

４−エチニル−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼン（０．６４ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）（上記実施例１９より）、ヨウ化メタン（０．２３ｍＬ、３．６３ｍｍｏｌ）（Aldrich）及びアジ化ナトリウム（０．２４ｇ、３．６３ｍｍｏｌ）（Aldrich）の、水（６ｍＬ）及びｔ−ブタノール（６ｍＬ）の混合液中懸濁液に、銅粉末（０．１７ｇ、２．６８ｍｍｏｌ）及び硫酸銅水溶液（１Ｎ、０．７ｍＬ）を加えた。反応混合物をマイクロ波反応器により、１２５℃で２０分加熱した。冷却後、反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中５〜６０％酢酸エチルで溶出して精製し、４−（３−メトキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールを得た（収量０．５７ｇ、６７％）。

実施例２１
２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノール

４−（３−メトキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール（０．５７ｇ、２．４４ｍｍｏｌ）（上記実施例２０より）のテトラヒドロフラン − ２−プロパノール（１：１、２０ｍＬ）中溶液に、ジオキサン中ＨＣｌ（４Ｍ、８ｍＬ）（Aldrich）を加えた。反応混合物を室温で２日攪拌した。溶液を濃縮した。残存物を酢酸エチルで希釈し、飽和水性重炭酸ナトリウム溶液及び塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物を酢酸エチル − ヘキサンから再結晶化、乾燥することにより、２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノールを得た（収量０．２４ｇ、５２％）。

実施例２２
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸セシウム（０．５６ｇ、１．７３ｍｍｏｌ）（Aldrich）、２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノール（０．２４ｇ、１．２７ｍｍｏｌ）（上記実施例２１より）のテトラヒドロフラン − Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、１７．５ｍＬ）中懸濁液を７０℃で３時間加熱した。３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．４０ｇ、１．１５ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を加えた。加熱を１８時間継続した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン中３０％酢酸エチルで溶出して精製して、４−クロロ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシ−メチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．２５ｇ、４８％）。

実施例２３
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシ−メチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１７g、０．３８ｍｍｏｌ）（上記実施例２２より）の２−プロパノール（１５ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器により、１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．１０ｇ、６３％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₁N₅O₃S + H [(M+H)⁺]：424.1438。Found: 424.1436。

実施例２４
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０５０ｇ、０．１１ｍｍｏｌ）（上記実施例２３より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）（Aldrich）で処理し、マイクロ波反応器により１６０℃で２時間加熱した。反応混合物をC18カラムに通し、アセトニトリル − 水で溶出して精製することにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを白色粉末として得た（収量３１．０ｍｇ、６０％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₂N₆O₃S + H [(M+H)⁺]：439.1547。Found: 439.1545。

実施例２５
３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノール

３−シアノフェノール（４．１４ｇ、３４．７５ｍｍｏｌ）（Aldrich）、アジ化ナトリウム（２．４９ｇ、３８．２３ｍｍｏｌ）（Aldrich）及び塩化アンモニウム（２．０５ｇ、３８．２３ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍＬ）中混合物を１６０℃に１８時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物をC18カラムに通し、アセトニトリル − 水で溶出して精製することにより、３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノールを得た（収量０．９ｇ、１６％）。

実施例２６
３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノール

４−メトキシベンジル塩化（０．２６ｍＬ、１．９４ｍｍｏｌ）（Aldrich）、ヨウ化カリウム（０．３１ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）（Aldrich）、３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノール（０．３ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）（上記実施例２５より）、炭酸カリウム（０．３８ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及び１８−クラウン−６（２４．０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）（Aldrich）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中懸濁液を６５℃で１日加熱した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中５〜４０％酢酸エチルで溶出して精製し、３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノールを得た（収量０．３８ｇ、７３％）。

実施例２７
４−クロロ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸セシウム（０．６０ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）、３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノール（０．３８g、１．３５ｍｍｏｌ）（上記実施例２６より）のテトラヒドロフラン − Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、１７．５ｍＬ）中懸濁液を、７０℃で３時間加熱した。３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．４１ｇ、１．２２ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を加えた。加熱を１８時間継続した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中３０％酢酸エチルで溶出して精製し、４−クロロ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．１７ｇ、２６％）。

実施例２８
４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１７ｇ、０．３２ｍｍｏｌ）（上記実施例２７より）の２−プロパノール（１５ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器によって、１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．１５ｇ、９４％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₆H₂₄N₆O₄S + H [(M+H)⁺]: 517.1653。Found: 517.1653。

実施例２９
４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０５０ｇ、０．１０ｍｍｏｌ）（上記実施例２８より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）（Aldrich）で処理し、マイクロ波反応器によって１６０℃で２時間加熱した。沈殿を濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを得た（収量１８．０ｍｇ、３５％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₆H₂₅N₇O₄S + H [(M+H)⁺]：532.1762。Found：532.1762。

実施例３０
３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノール

炭酸セシウム（０．６０ｇ、１．８３ｍｍｏｌ）、３−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノール（０．３０ｇ、１．８５ｍｍｏｌ）（上記実施例２５より）のテトラヒドロフラン − Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、１７．５ｍＬ）中懸濁液を７０℃で３時間加熱した。ヨウ化メタン（０．２９ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）（Aldrich）を加えた。加熱を１８時間継続した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中４０％酢酸エチルで溶出して精製し、３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノールを得た（収量０．２３ｇ、７０％）。

実施例３１
４−クロロ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０４２ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）（上記実施例３０より）、３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノール（０．２３ｇ、１．３１ｍｍｏｌ）（上記実施例３０より）、ヨウ化カリウム（０．２１ｇ、１．２４ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（０．３８ｇ、２．７８ｍｍｏｌ）及び１８−クラウン−６（１６．０ｍｇ、０．０６ｍｍｏｌ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１５ｍＬ）中混合物を６５℃で１日加熱した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中３０％酢酸エチルで溶出して精製し、４−クロロ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．１５ｇ、２８％）。

実施例３２
４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１５ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）（上記実施例３１より）の２−プロパノール（１５ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器によって１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．１１ｇ、７９％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₁₉H₁₈N₆O₃S + H [(M+H)⁺]: 411.1234。Found: 411.1235。

実施例３３
４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０５０ｇ、０．１２ｍｍｏｌ）（上記実施例３２より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）（Aldrich）で処理し、マイクロ波反応器によって１６０℃で２時間加熱した。沈殿を濾過し、メタノールで洗浄し、乾燥することにより、４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを白色粉末として得た（収量３９．０ｍｇ、７５％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₁₉H₁₉N₇O₃S + H [(M+H)⁺]: 426.1343。Found: 426.1344。

実施例３４
５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノール

４−エチニル−２−メトキシメトキシ−１−メチル−ベンゼン（１．５０ｇ、８．５０ｍｍｏｌ）（上記実施例１９より）、臭化４−クロロベンジル（１．７６ｇ、８．５０ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（０．５６ｇ、８．５０ｍｍｏｌ）の、水（１２ｍＬ）及びｔ−ブタノール（１２ｍＬ）混合液中懸濁液に、銅粉末（０．４０ｇ、６．３０ｍｍｏｌ）及び硫酸銅水溶液（１Ｎ、１．６４ｍＬ）を加えた。反応混合物をマイクロ波反応器によって、１３０℃で３０分加熱した。冷却後、反応混合物をジクロロメタン及び水で分画した。水相をジクロロメタン（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中４０％酢酸エチルで溶出して精製し、５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノール（収量０．７５ｇ、５９％）、及び、１−（４−クロロ−ベンジル）−４−（３−メトキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−１Ｈ［１，２，３］トリアゾール（収量０．６１ｇ、２１％）を得た。

実施例３５
４−クロロ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸セシウム（１．１１ｇ、３．４１ｍｍｏｌ）、５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノール（０．７５ｇ、２．５０ｍｍｏｌ）（上記実施例３４より）のテトラヒドロフラン − Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、２３ｍＬ）中懸濁液を７０℃で２時間加熱した。３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．７６ｇ、２．２７ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を加えた。加熱を１８時間継続した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。沈殿を濾過し、酢酸エチルで洗浄し、乾燥することにより、４−クロロ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．３３ｇ、２６％）。

実施例３６
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．３３ｇ、０．６０ｍｍｏｌ）（上記実施例３５より）の２−プロパノール（３０ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器によって１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．２３ｇ、７２％）。

実施例３７
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０５０ｇ、０．０９ｍｍｏｌ）（上記実施例３６より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）（Aldrich）で処理し、マイクロ波反応器によって１６０℃で２時間加熱した。沈殿を濾過し、メタノールで洗浄し、乾燥することにより、４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを白色粉末として得た（収量３４．５ｍｇ、６８％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₇H₂₅ClN₆O₃S + H [(M+H)⁺]: 549.1470。Found: 549.1459。

実施例３８
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩

４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド（０．１５９ｇ、０．２９ｍｍｏｌ）（上記実施例３７より）のメタノール（１０ｍＬ）中溶液をトルエン−４−スルホン酸水和物（６１．０ｍｇ、０．３１９ｍｍｏｌ）で処理し、室温で４０分加熱した。溶液を濃縮した。残存物をジエチルエーテルで洗浄し、水に溶解させ、凍結乾燥することにより、４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド１．５トルエン−４−スルホン酸塩を得た（収量０．２１ｇ、１００％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₇H₂₅ClN₆O₃S + H [(M+H)⁺]: 549.1470。Found: 549.1467。

実施例３９
３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ’−［２−（４−クロロ−フェニル）−アセチル］−ヒドラジド

塩化４−クロロフェニルアセチル（１．３６ｇ、７．２２ｍｍｏｌ）（Aldrich）、３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸ヒドラジド（１．０ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）（上記実施例６より）及びトリエチルアミン（１．３６ｍＬ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中混合物を８５℃で１日加熱した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（１×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物を酢酸エチル及びジクロロメタンで洗浄し、乾燥させることにより、３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ’−［２−（４−クロロ−フェニル）−アセチル］−ヒドラジド（収量０．９１ｇ、９５％）を得た。

実施例４０
５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］−オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノール

３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ’−［２−（４−クロロ−フェニル）−アセチル］−ヒドラジド（０．９１ｇ、２．８５ｍｍｏｌ）（上記実施例３９より）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（３．０ｍＬ、１７．１ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（１．５０ｇ、５．７０ｍｍｏｌ）を加えた。５分攪拌後、ヘキサクロロエタン（１．０１ｇ、４．２８ｍｍｏｌ）（Aldrich）を加え、混合物を攪拌しながら室温で２日放置した。溶媒を蒸発乾燥した。残存物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（１×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中２０％酢酸エチルで溶出して精製することにより、５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］−オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノールを得た（収量０．６８ｇ、７９％）。

実施例４１
４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸セシウム（０．５４ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］−オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノール（０．３６ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）（上記実施例４０より）のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、２１ｍＬ）中懸濁液を６８℃で２時間加熱した。３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．３６ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を加えた。加熱を２時間継続した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物を酢酸エチルで洗浄し、乾燥することにより、４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．１７ｇ、２６％）。

実施例４２
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１１g、０．２０ｍｍｏｌ）（上記実施例４１より）の２−プロパノール（１５ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器によって１４０℃で５．５時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．０７ｇ、６４％）。

実施例４３
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．０７ｇ、０．１３ｍｍｏｌ）（上記実施例４２より）のジメチルスルホキシド中（０．５ｍＬ）溶液をエタノールアミン（１．５ｍＬ）で処理し、マイクロ波反応器によって１６０℃で２．８時間加熱した。反応混合物をC18カラムクロマトグラフィー及びSFCカラムクロマトグラフィーで精製することにより、４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを白色粉末として得た（収量８ｍｇ、１１％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₇H₂₄ClN₅O₄S + H [(M+H)⁺]: 550.1311。Found: 550.1311。

実施例４４
３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ’−（４−クロロ−ベンゾイル）−ヒドラジド

塩化４−クロロベンゾイル（０．９２ｍＬ、７．２２ｍｍｏｌ）（Aldrich）、３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸ヒドラジド（１．０ｇ、６．０２ｍｍｏｌ）（上記実施例６より）及びトリエチルアミン（１．３６ｍＬ）のテトラヒドロフラン（２０ｍＬ）中混合物を８５℃で１日加熱した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。沈殿を酢酸エチル及びジクロロメタンで洗浄し、乾燥させることにより、３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ’−（４−クロロ−ベンゾイル）−ヒドラジドを得た（収量１．２８ｇ、７０％）。

実施例４５
５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］−オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノール

３−ヒドロキシ−４−メチル−安息香酸Ｎ’−（４−クロロ−ベンゾイル）−ヒドラジド（１．２８ｇ、４．２０ｍｍｏｌ）（上記実施例４４より）のアセトニトリル（２０ｍＬ）中溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（４．４ｍＬ、２５．２ｍｍｏｌ）及びトリフェニルホスフィン（２．２１ｇ、８．４０ｍｍｏｌ）を加えた。５分攪拌後、ヘキサクロロエタン（１．４９ｇ、６．３０ｍｍｏｌ）（Aldrich）を加え、混合物を攪拌しながら室温で１日放置した。溶媒を蒸発乾燥した。残存物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（１×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ヘキサン中０ − ６０％酢酸エチルで溶出して精製することにより、５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］−オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノールを得た（収量０．３４ｇ、２８％）。

実施例４６
４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸セシウム（０．５４ｇ、１．６６ｍｍｏｌ）、５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］−オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノール（０．３４ｇ、１．１９ｍｍｏｌ）（上記実施例４５より）のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、２１ｍＬ）中懸濁液を６８℃で２時間加熱した。３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．３６ｇ、１．０８ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を加えた。加熱を２時間継続した。反応混合物を酢酸エチル及び水で分画した。水相を酢酸エチル（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物を酢酸エチルで洗浄し、乾燥することにより、４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．３０ｇ、４７％）。

実施例４７
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．３０ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）（上記実施例４６より）の２−プロパノール（３０ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器によって、１４０℃で５．５時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．２２ｇ、７６％）。

実施例４８
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸

水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、２．０ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）を、４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．２２ｇ、０．４２ｍｍｏｌ）（上記実施例４７より）のテトラヒドロフラン／メタノール（３：１、８ｍＬ）溶液に加え、混合物を５０℃で１日加熱した。反応混合物を濃縮し、トルエンと共沸混合した。固体残存物を酢酸エチルで倍散した。次いでこの個体を水に分散させ、塩酸（１Ｎ）で処理した。３０分攪拌後、固体を収集し、水で洗浄し、乾燥することにより、４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸を得た（収量０．２０ｇ、９５％）。

実施例４９
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩

の混合物４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（０．１０ｇ、０．２０ｍｍｏｌ）（上記実施例４８より）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（４３ｍｇ、０．３２ｍｍｏｌ）（Aldrich）及び１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（０．０４４ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ）（Aldrich）をテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．６ｍＬ、５：１）に攪拌混合した。１時間後、エタノールアミン（０．０３６ｍＬ、０．６０ｍｍｏｌ）（Aldrich）を加えた。混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで濃縮した。残存物をＨＰＬＣにより、アセトニトリル／水で溶出して精製し、４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩を白色粉末として得た（収量５２ｍｇ、４０％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₆H₂₂ClN₅O₄S + H [(M+H)⁺]: 536.1154。Found: 536.1149。

実施例５０
３−メトキシメトキシ−４−メチル−安息香酸

３−メトキシメトキシ−４−メチル−安息香酸エチルエステル（４．５ｇ、２０ｍｍｏｌ）（上記実施例３より）の、エタノール（５０ｍＬ）、水（２０ｍＬ）及び１Ｎ水性水酸化ナトリウム（３０ｍＬ）混合液中溶液を、室温で１８時間攪拌した。混合物を濃縮してエタノールの大部分を除去し、得られた水溶液を酢酸（２．５ｇ、４１．６ｍｍｏｌ）で酸性化した。更に３０分静置後、形成された沈殿を濾過で収集し、水で洗浄し、乾燥することにより、３−メトキシメトキシ−４−メチル−安息香酸を白色粉末として得た（収量３．８２ｇ、９７％）。

実施例５１
５−（３−メトキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール

３−メトキシメトキシ−４−メチル−安息香酸（１．９６ｇ、１０ｍｍｏｌ）（上記実施例５０より）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（１．９２ｇ、１０ｍｍｏｌ）（Aldrich）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１．３５ｇ、１０ｍｍｏｌ）（Aldrich）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２５ｍＬ）中混合物を室温で３０分攪拌した。アセトアミドオキシム（０．７４ｇ、１０ｍｍｏｌ）（GFS Chemicals）を加え、混合物を１４０℃で２時間加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチル（２×）及び飽和重炭酸水溶液で分画した。酢酸エチル溶液を集めて濃縮し、残存物をフラッシュクロマトグラフィーで精製することにより、５−（３−メトキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾールを得た（収量１．２３ｇ、５２．５％）。

実施例５２
２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノール

５−（３−メチルオキシメトキシ−４−メチル−フェニル）−３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール（１．２３ｇ、５．２５ｍｍｏｌ）（上記実施例５１より）のテトラヒドロフラン／２−プロパノール（１：１、３０ｍＬ）中溶液に、ジオキサン中４ＭＨＣｌ（Aldrich）１３．１ｍＬを加えた。反応混合物を室温で１８時間攪拌した。溶液を濃縮した。残存物を酢酸エチルで希釈し、水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶化させ、乾燥することにより、２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノールを得た（収量０．８８ｇ、８８％）。

実施例５３
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸セシウム（１．０２ｇ、３．１３ｍｍｏｌ）、２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノール（０．４２ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）（上記実施例５２より）のテトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５：２、２１ｍＬ）中懸濁液を７０℃で２時間加熱した。３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．６８ｇ、２．０４ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を加えた。加熱を１時間継続した。反応混合物をジクロロメタン及び水で分画した。水相をジクロロメタン（２×）で抽出した。有機相を集めて水及び塩水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）及び濃縮した。残存物をフラッシュクロマトグラフィーにより、ジクロロメタン中５〜１０％酢酸エチルで溶出して精製し、４−クロロ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．５１ｇ、５７％）。

実施例５４
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．４２ｇ、０．９５ｍｍｏｌ）（上記実施例５３より）の２−プロパノール（３０ｍＬ）中溶液に、アンモニアガスを通して２０分バブリングさせた。混合物をマイクロ波反応器によって１４０℃で２時間加熱した。反応混合物を濃縮した。残存物を温メタノールで洗浄し、濾過及び乾燥することにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色粉末として得た（収量０．３３ｇ、８３％）。

実施例５５
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸

水酸化ナトリウム（２ N、３．０ｍＬ、１．５ｍｍｏｌ）の水溶液を、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．３３ｇ、０．７８ｍｍｏｌ）（上記実施例５４より）のテトラヒドロフラン／メタノール（３：１、８ｍＬ）中溶液に加え、混合物を５０℃で１日加熱した。反応混合物を濃縮し、トルエンと共沸混合した。固体残存物を酢酸エチルで倍散した。次いでこの個体を水に分散させ、塩酸（１Ｎ）で処理した。３０分攪拌後、固体を収集し、水で洗浄し、乾燥させることにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（収量０．２９ｇ、９４％）を得た。

実施例５６
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ−［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩

４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（０．１０ｇ、０．２５ｍｍｏｌ）（上記実施例５５より）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（５４ｍｇ、０．４０ｍｍｏｌ）（Aldrich）及び１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（０．０５５ｍＬ、０．３６ｍｍｏｌ）（Aldrich）の混合物を、テトラヒドロフラン／Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３．６ｍＬ、５：１）に攪拌混合した。１時間後、エタノールアミン（０．０４６ｍＬ、０．７６ｍｍｏｌ）（Aldrich）を加えた。混合物を室温で１８時間攪拌し、次いで濃縮した。残存物をＨＰＬＣにより、アセトニトリル／水で溶出して精製し、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩を白色粉末として得た（収量７０ｍｇ、５０％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₁N₅O₄S + H [(M+H)⁺]: 440.1387。Found: 440.1384。

実施例５７
５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノール

２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノール（０．６５ｇ；３．４２ｍｍｏｌ）（上記実施例１１より）及び４−メトキシベンジルアミン（３．１０ｇ；２２．６ｍｍｏｌ）（Aldrich）の混合物を、密閉反応容器中、油浴槽内で１５０〜１５５℃で４２時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ジクロロメタン及びヘキサンで希釈し、生成物を溶液から沈殿させた。粗製固体を濾過で収集した後、ジクロロメタン − メタノールに溶解させ、溶媒を蒸発乾燥することにより再沈殿させた。固体を収集して乾燥することにより、５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノールを得た（収量０．８４９ｇ、７６．３％）。

実施例５８
４−クロロ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

炭酸カリウム（０．２４６ｇ；１．６７ｍｍｏｌ）を、５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノール（０．１７ｇ；０．５５ｍｍｏｌ）（上記実施例５７より）のＤＭＦ（３．４ｍＬ）溶液に加え、混合物を室温で５分攪拌した。次いで３−ブロモメチル−４−クロロ−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．２４６ｇ；０．７４ｍｍｏｌ）（上記実施例１より）を適切に加え、攪拌を室温で４．２５時間継続した。濃赤色混合物を酢酸エチルで希釈し、混合物を水で２度洗浄し、次いで塩水で１度洗浄した。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗製物をで精製したフラッシュクロマトグラフィー（８０ｇカラム、ジクロロメタン中４％メタノール、次いで４０％メタノールへの勾配で溶出した）。生成物を含有する画分を集めて濃縮した。次いで、クロマトグラフによる取得物から少量の夾雑物を除去するため、ジクロロメタン − ヘキサンに溶解させた後、濃縮して体積を減少させ、生成物の白色固体沈殿を生じさせ、これを濾過により集めて乾燥させることにより、４−クロロ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量０．１８８ｇ；６０．８％）。

実施例５９
４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．３３０ｇ；０．５９ｍｍｏｌ）（上記実施例５８より）の２−プロパノール（２０ｍＬ）中懸濁液に、アンモニアガスを通して１５〜２０分バブリングさせた。次いで混合物をマイクロ波反応器によって１４０℃で９０分加熱した。反応混合物を濃縮し、残存物をフラッシュクロマトグラフィー（１２０ｇカラム；ジクロロメタン中４％メタノール、次いでへの勾配４０％メタノール）で精製することにより、４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（０．２６３ｇ；純度９６％；７８．７２％）。

実施例６０
４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

エタノールアミン（１．８ｍＬ；２９．９ｍｍｏｌ）（Aldrich）を、４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（５０ｍｇ；０．０８２７７ｍｍｏｌe）（上記実施例５９より）のジメチルスルホキシド（０．６ｍＬ）中溶液に加えた。混合物をマイクロ波反応器によって１３５℃で２．２５時間加熱した。室温に冷却後、反応混合物を水で希釈することにより、生成物を乳状固体として沈殿させ、これをを遠心分離により収集して乾燥させた。粗製固体を温メタノールで倍散し、荒熱を取り、濾過及び乾燥させることにより、４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを二度の収穫により得た（収量３１．２ｍｇ、５１．３％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₉H₃₀N₆O₄S + H [(M+H)⁺]: 559.2122。Found: 559.2120。

実施例６１
４−クロロ−３−［２−メチル−５−（メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（８５ｍｇ；０．１５１ｍｍｏｌ）（上記実施例５８より）と、トリフルオロ酢酸（１．０ｍＬ；１３ｍｍｏｌ）、アニソール（１００μＬ；０．９２ｍｍｏｌ）（Aldrich）及び硫酸（５０μＬ；０．９４ｍｍｏｌ）との混合物を、室温で４２時間攪拌した。混合物を濃縮した。残存物をジクロロメタンで希釈し、再濃縮した。次いで残存物をジクロロメタン及びメタノールで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液及び水で洗浄した。水相をジクロロメタン及びメタノールの混合液で逆洗浄した。２つの有機相を集め、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮した。粗製物をフラッシュクロマトグラフィー（１２ｇカラム；ＥｔＯＡｃ、次いで６０：４０ＥｔＯＡｃ：メタノールへの勾配）で精製することにより、４−クロロ−３−［２−メチル−５−（メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを得た（収量５６．３ｍｇ、８４．２０％）。

実施例６２
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル

４−クロロ−３−［２−メチル−５−（メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（０．１０６ｇ；０．２４ｍｍｏｌ）（上記実施例６１より）の２−プロパノール（２０ｍＬ）中懸濁液に、アンモニアガスを通して１５〜２０分バブリングさせた。次いで、混合物をマイクロ波反応器によって１４０℃で７５分加熱した。室温に冷却後、反応混合物をジクロロメタン（~７５ｍＬ）で希釈し、水で洗浄し、次いで塩水で洗浄した。有機相を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）及び濃縮した。残存物を温ジクロロメタンで２度倍散することにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステルを白色固体として得た（収量８０．４ｍｇ）。２度の倍散の母液をクロマトグラフィーにかけ、更なる生成物を得た（収量７．７ｍｇ、総収量８２．４９％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₁N₅O₃S + H [(M+H)⁺]: 424.1438。Found: 424.1433。

実施例６３
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド

エタノールアミン（１．５ｍＬ；２４．９ｍｍｏｌ）（Aldrich）を、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル（６８．４ｍｇ；０．１６２ｍｍｏｌ）（上記実施例６２より）のジメチルスルホキシド（０．５ｍＬ）中懸濁液に加えた。混合物をマイクロ波反応器によって１３５℃で９０分、次いで１４０℃で１時間加熱した。粗製反応混合物を高真空下で加熱しながら濃縮し、エタノールアミン及びＤＭＳＯを大部分除去した。残存物を水で希釈し、溶液から乳状沈殿を析出させた。固体を濾過で収集し、水で洗浄し、乾燥させた。次いで、生成物を温メタノールで倍散することにより、４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドを灰白色固体として得た（収量４８ｍｇ、６７．８％）。
HRMS(ES⁺) m/z Calcd for C₂₁H₂₂N₆O₃S + H [(M+H)⁺]: 439.1547。Found: 439.1544。

実施例６４
キナーゼ酵素阻害アッセイ（ＩＣ₅₀）
６Ｈ−ＭＥＫを基質としたｃ−ＲａｆＨＴＲＦアッセイ（用量反応）

アッセイ原理：
本アッセイでは６Ｈ−ＭＥＫを基質として使用する。ｃ−Ｒａｆリン酸化時に、リン酸化された６Ｈ−ＭＥＫは、ウサギ抗ホスホ−ＭＥＫ１／２、Ｅｕ標識抗ウサギ、及びＡＰＣ標識抗６Ｈ抗体によって検出される。

試薬及び機器：

酵素：ＥＥタグを有するクローン化ヒトｃ−Ｒａｆ；リン酸化（バキュロ・ウイルスＨｉ５細胞内でｖ−ｓｒｃ−ＦＬＡＧと共発現）、０．２ｍｇ／ｍＬ（分子量を７３ｋＤと仮定すると２．７４μＭ）、−１５℃で保存。

基質：ＷＴ全長６Ｈ−ＭＥＫ、４．９４ｍｇ／ｍＬ（ＭＷを３２ｋＤと仮定すると１５４．４μＭ）、−１５℃で保存。

抗体：ウサギ（α−Ｐ−（Ser 217/221）−ＭＥＫ−１／２Ａｂ（Cell Signaling社製、Cat. # 9121B、Lot 14）；Ｅｕ−（α−ウサギＩｇＧ（Wallac社製、Cat. # AD0083、Lot 318663、７１０ｕｇ／ｍＬ、４．４μＭ）；（α−６Ｈ−SureLight−ＡＰＣ（Martek社製、Cat. #AD0059H、Lot E012AB01、３．０３μＭ）。

リーダー： Envision、PERKinElmer社製、４１２ミラーによるＨＴＲＦ読み取りモード。

アッセイプレート：Matrix全黒色ポリプロピレンプレート（Cat. # 4344）。

その他：化合物用プレートとしてWeidman 384ポリプロピレンプレート（ＲＥＭＰ）。

アッセイ手順：

（１）キナーゼアッセイバッファー（ＫＡＢ）を調製：５０ｍＭＨＥＰＥＳ（HyClone）ｐＨ７、１０ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＤＴＴ、０．１ｍＭＮａ₃Ｖ₂Ｏ₄、及び０．３ｍｇ／ｍｌＢＳＡ。

（２）ＫＡＢ中６Ｈ−ＭＥＫ（１５０ｎＭ）を調製。１２μｌ／ウェルをアッセイプレートに添加。

（３）ＫＡＢ中ＡＴＰ（６６μＭ）を調製。

（４）化合物をＤＭＳＯ中２．４ｍＭに、任意の陽対照をＤＭＳＯ中４８０μＭに希釈。ＤＭＳＯによる１０点の３×希釈を実施。２．５μｌ／ウェルのＤＭＳＯ溶液を取り出し、（３）のＡＴＰ溶液２７．５μｌ／ウェルに添加。

（５）混合後、（４）の溶液６μｌ／ウェルをアッセイプレートに加え、ＭＥＫリン酸化時のＤＭＳＯ濃度を２．１％に調整。

（６）ＫＡＢ中ｃ−Ｒａｆ（１２ｎＭ）を調製。

（７）６μｌ／ウェルのＫＡＢをカラム１〜２に、６μｌ／ウェルのｃ−Ｒａｆをカラム３〜２４に添加。

（８）３７℃で３０分インキュベート。

（９）ウサギ（α−Ｐ−（Ser ２１７／２２１）−ＭＥＫ−１／２Ａｂ（ストックより１：２４０）のＡＢ１：５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）、０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、及び４３ｍＭＥＤＴＡ中液を調製。

（１０）反応を停止するべく、６μｌ／ウェルの（９）の溶液をアッセイプレートに加え、３７℃で３０分インキュベート。

（１１）Ｅｕ−（α−ウサギＩｇＧ（９ｎＭ）及び（α−６Ｈ−SureLight−ＡＰＣ（１２０ｎＭ）のＡＢ２：５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）及び０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ中液を調製。

（１２）（１１）の溶液６μｌ／ウェルをアッセイプレートに添加。

（１３）スペクトルクロストーク因子を決定するべく、ステップ（１）〜（１０）に従って２サンプルを調製。ブランクサンプルには６μｌ／ウェルのＡＢ２を添加。クロストーク因子サンプルには６μｌ／ウェルのＥｕ−抗ウサギＩｇＧ（９ｎＭ）を添加。

（１４）室温で１．５時間インキュベート。

（１５）Envisionで６１５ｎｍ及び６６５ｎｍのＨＴＲＦシグナルを読み取り。スペクトルクロストーク補正後ＨＴＲＦシグナルを正規化。

ｃ−Ｒａｆの発現及び精製
Ｎ末端ＥＥタグ化ｃ−ＲａｆをHigh-5細胞で発現させた。５Ｌの培養物をウイルスにより、ＥＥ−ｃ−Ｒａｆ及びＦＬＡＧ−ｖＳｒｃについて１：２の比で共トランスフェクトさせ、４８時間後に収穫した。細胞ペレットを、５ｍＭＥＤＴＡ、５０ｍＭＫＦ、２０ｍＭピロリン酸Ｎａ、２０ｍＭリン酸β−グリセロール、０．５ｍＭＮａＶＯ₃、１％ＮＰ−４０（ｗ／ｖ）及び完全プロテアーゼ錠を含有するＴＢＳで溶解した。溶解物を２０，０００×ｇで１時間遠心分離した。上清を８ｍｌの抗タグタンパク質Ｇセファロースとともに４℃で２時間インキュベートした。その後、樹脂を３０倍体積の上記バッファーで洗浄した。ｃ−Ｒａｆタンパク質を、１００ｍｇ／ｍｌのＥＥペプチドを含有する上述のバッファーとともに、４℃で１時間インキュベートすることにより溶出させた。Amicon Stir CellをYM10膜と用いてタンパク質を濃縮した。濃縮タンパク質を１ｍＭＤＴＴ及び３０％グリセロール含有ＴＢＳに対して透析した。タンパク質濃度はBioRad DC法で決定した。

６Ｈ−ＭＥＫ１（６２−３９３）の精製
６Ｈ−ＭＥＫ１（６２−３９３）の発現用のプラスミドを含有する大腸菌（E. coli）細胞をRich Mediaにおいて、２２℃で２４時間インキュベートし、１ｍＭＩＰＴＧにより誘導した。細胞ペレット５０ｍＭを、リン酸カリウムバッファー（ｐＨ８．０）、３００ｍＭＮａＣｌ、５ｍＭＭｇＣｌ₂、１０ｍＭＣＨＡＰＳ、２ｍＭＴＣＥＰ、及び完全プロテアーゼ阻害錠に再懸濁させた。細胞を超音波処理により破壊した。１３，０００×ｇで４５分の遠心分離により、溶解物を清明化した。上清を５０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ８．０）、１０ｍＭイミダゾール、４ｍＭＴＣＥＰ、３００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＣＨＡＰＳ、２ｍＭピロール−２−カルボキシレート、及び１００ｍＭＺｎＣｌ₂で１：１に希釈した後、ＴＡＬＯＮ金属アフィニティー樹脂と４℃で１時間インキュベートした。

樹脂を１０倍体積の５０ｍＭリン酸カリウムバッファー（ｐＨ８．０）、５ｍＭイミダゾール、２ｍＭＴＣＥＰ、３００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＣＨＡＰＳ、１ｍＭピロール−２−カルボキシレート、及び５０ｍＭＺｎＣｌ₂で洗浄した。５倍体積の２０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０、１００ｍＭＥＤＴＡ、２ｍＭＴＣＥＰ、１０％ｖ／ｖグリセロールと共に、４℃で１時間インキュベートすることにより、タンパク質を溶出させた。Amicon Ultra 15デバイスと共に、１０ＫｄＭＷカットオフ膜を用いて、溶出物を濃縮した。次いでサンプルを、Superdex 200 26/60カラムを用いたサイズ排除クロマトグラフィーに供した。６Ｈ−ＭＥＫ１のピークをプールし、上述のように濃縮した。タンパク質はBioRad DC法で決定した。

６Ｈ−ＭＥＫを基質としたb−Ｒａｆ野生型ＨＴＲＦアッセイ（用量反応）

アッセイ原理：
本アッセイは６Ｈ−ＭＥＫを基質として使用する。ｂ−ＲａｆＷＴリン酸化時に、リン酸化６Ｈ−ＭＥＫは、ウサギ抗ホスホ−ＭＥＫ１／２、Ｅｕ標識抗ウサギ、及びＡＰＣ標識抗６Ｈ抗体により検出される。

試薬及び機器：

酵素：組換ヒトｂ−Ｒａｆ残基４１６端Ｎ末端ＧＳＴタグ、Upstate社製；（バキュロ・ウイルスによりSf21昆虫細胞中で発現）、０．２６ｍｇ／ｍＬ（分子量を６７．２ｋＤと仮定すると３．８７μＭ） Cat. #14-530M、Lot #25502AU、−８０℃で保存。

基質：Ｃ．ベルニス（C. Belunis）由来ＷＴ全長６Ｈ−ＭＥＫ（５／２６／０４）、４．９４ｍｇ／ｍＬ（ＭＷを３２ｋＤと仮定すると１５４．４μＭ）、−１５℃で保存。

抗体：ウサギ（α−Ｐ−（Ser217/221）−ＭＥＫ−１／２Ａｂ（Cell Signaling社製、Cat. # 9121B、Lot 14）；Ｅｕ−（α−ウサギＩｇＧ（Wallac社製、Cat. # AD００８３、Lot 318663、７１０ｕｇ／ｍＬ、４．４μＭ）；（α−６Ｈ−SureLight−ＡＰＣ（Martek社製、Cat. #AD0059H、Lot E012AB01、３．０３μＭ）。

リーダー：PERKinElmer社製Envision、４１２ミラーによるＨＴＲＦ読取モード。

その他：化合物プレートとしてWeidman 384ポリプロピレンプレート（ＲＥＭＰ）。

アッセイ手順：

（１）キナーゼアッセイバッファー（ＫＡＢ）を調製：５０ｍＭＨＥＰＥＳ（HyClone）（ｐＨ７）、１０ｍＭＭｇＣｌ₂、１ｍＭＤＴＴ、０．１ｍＭＮａ₃Ｖ₂Ｏ₄、及び０．３ｍｇ／ｍｌＢＳＡ。

（３）ＫＡＢ中ＡＴＰ（６６μＭ）を調製。

（４）化合物を２．４ｍＭに、任意の陽対照を４８０μＭに、ＤＭＳＯで希釈。ＤＭＳＯによる１０点３×希釈を実施。２．５μｌ／ウェルのＤＭＳＯ溶液を取り出し、（３）のＡＴＰ溶液２７．５μｌ／ウェルに添加。

（５）混合した後、（４）の溶液６μｌ／ウェルをアッセイプレートに添加し、ＭＥＫリン酸化時のＤＭＳＯ濃度を２．１％に調整。

（６）ＫＡＢ中ｂ−ＲａｆＷＴ（１００ｐＭ）を調製。

（７）６μｌ／ウェルのＫＡＢをカラム１〜２に、６μｌ／ウェルのｂ−ＲａｆＷＴをカラム３〜２４に添加。

（８）３７℃で３０分インキュベート。

（９）ウサギ（α−Ｐ−（Ser 217/221）−ＭＥＫ−１／２Ａｂ（ストックより１：２００）のＡＢ１：５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）、０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ、及び４３ｍＭＥＤＴＡ中液を調製。

（１０）反応を停止させるべく、（９）の溶液６μｌ／ウェルをアッセイプレートに添加し、３７℃で３０分インキュベート。

（１１）Ｅｕ−（α−ウサギＩｇＧ（９ｎＭ）及び（α−６Ｈ−SureLight−ＡＰＣ（１８０ｎＭ）のＡＢ２：５０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７）及び０．２ｍｇ／ｍｌＢＳＡ中液を調製。

（１４）室温で１．５時間インキュベート。

６Ｈ−ＭＥＫを基質としたｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ変異ＨＴＲＦアッセイ（用量反応）

アッセイ原理
本アッセイは６Ｈ−ＭＥＫを基質として使用する。ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅリン酸化時に、リン酸化６Ｈ−ＭＥＫは、ウサギ抗ホスホ−ＭＥＫ１／２、Ｅｕ標識抗ウサギ、及びＡＰＣ標識抗６Ｈ抗体により検出される。

試薬及び機器

酵素：組換ヒトｂ−Ｒａｆ残基４１６端、Ｖ６００Ｅ突然変異含有、Ｎ末端ＧＳＴタグ、Upstate社製；（バキュロ・ウイルスによりSf21昆虫細胞中で発現）、０．２６ｍｇ／ｍＬ（分子量を６７．３ｋＤと仮定すると７．４９μＭ） Cat. #14-5M、Lot #25633AU、−８０℃で保存。

アッセイプレート：Matrix全黒色ポリプロピレンプレート（Cat. # ４３４４）。

アッセイ手順

（３）ＫＡＢ中ＡＴＰ（６６μＭ）を調製。

（６）ＫＡＢ中ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ（１００ｐＭ）を調製。

（７）６μｌ／ウェルのＫＡＢをカラム１〜２に、６μｌ／ウェルのｂ−ＲａｆＶ６００Ｅをカラム３〜２４に添加。

（８）３７℃で３０分インキュベート。

（１４）室温で１．５時間インキュベート。

アッセイデータ
表１：キナーゼ酵素阻害アッセイ（ＩＣ₅₀）

Claims

下記式の化合物

（式中、
Ｒ¹は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルケニル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルキニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ、シアノ、ＮＲ⁴Ｒ⁵、トリフルオロメチル及びＮＯ₂からなる群より選択され；
Ｒ²は例えば、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、アリール又はヘテロアリール置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルケニル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルキニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シアノ、ハロゲン、メチルスルホニル、スルホンアミド、トリフルオロメチル、スルホニル尿素、アミド、エステル、カルバメート及び尿素からなる群より選択される１又は２以上の基であり；
Ｒ³は、水素、ヒドロキシ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ及びＮＲ⁴Ｒ⁵からなる群より選択され；
環Ｂは、フェニルであり；
環Ａは、更に置換されていてもよい

（Ａは、独立にＣ、Ｎ及びＯから選択される）であり、環Ａは芳香族であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、又はヒドロキシ若しくはＣ ₁ −Ｃ ₆アルコキシで置換されたＣ ₁ −Ｃ ₆アルキルから選択され、
ＸはＯ又はＮＨであり、
なお、上記基が置換される場合の置換基は、別途定義された場合を除き、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆ アルケニル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆ アルキニル、ジオキソＣ ₁ −Ｃ ₆ アルキレン、ハロゲン、ヒドロキシ、ＣＮ、ＣＦ ₃ 、ＮＨ ₂ 、Ｎ（Ｈ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル）、Ｎ（Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル） ₂ 、アミノカルボニル、カルボキシ、ＮＯ ₂ 、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、チオＣ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキルスルホニル、アミノスルホニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキルカルボニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキルカルボニルオキシ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシカルボニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル−カルボニル−ＮＨ、フルオロ−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル、フルオロ−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ−カルボニル−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、カルボキシ−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、カルバモイル−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、ヒドロキシ−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、ＮＨ ₂ −Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、Ｎ（Ｈ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル）−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、Ｎ（Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル） ₂ −Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、ベンジルオキシ−Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルコキシ、モノ又はジＣ ₁ −Ｃ ₆ アルキル置換アミノ−スルホニル、並びに、ハロゲン、ヒドロキシ、ＮＨ ₂ 、Ｎ（Ｈ、Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル）又はＮ（Ｃ ₁ −Ｃ ₆ アルキル） ₂ で置換されていてもよい低級アルキルからなる群より選択される）、
及び、医薬的に許容し得るその塩。
Ｒ¹は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルケニル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルキニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ、シアノ、ＮＲ⁴Ｒ⁵、トリフルオロメチル及びＮＯ₂からなる群より選択され；
Ｒ²は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、アリール又はヘテロアリール置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルケニル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルキニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シアノ、ハロゲン、メチルスルホニル、スルホンアミド、トリフルオロメチル、スルホニル尿素、アミド、エステル、カルバモイル、カルバメート及び尿素からなる群より選択され；
Ｒ³は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ及びＮＲ⁴Ｒ⁵からなる群より選択され；
環Ｂは、フェニルであり；
環Ａは、

（Ａは、独立にＣ、Ｎ及びＯから選択される）であり、環Ａは芳香族であり、
Ｒ⁴及びＲ⁵は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、又はヒドロキシ若しくはＣ ₁ −Ｃ ₆アルコキシで置換されたＣ ₁ −Ｃ ₆アルキルから選択され、
ＸはＯ又はＮＨである、
請求項１記載の式Ｉの化合物、及び医薬的に許容し得るその塩。
Ｒ¹ が、水素又はＣ ₁ −Ｃ ₆アルキルであり、環Ｂの環Ａ結合位に対してパラ位に結合する、請求項１又は請求項２に記載の化合物。
環Ａは、

からなる群より選択され
（式中、
Ｒ²は、水素、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、アリール又はヘテロアリール置換Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルキル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルケニル、Ｃ ₂ −Ｃ ₆アルキニル、Ｃ ₁ −Ｃ ₆アルコキシ、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、シアノ、ハロゲン、メチルスルホニル、スルホンアミド、トリフルオロメチル、スルホニル尿素、アミド、エステル、カルバモイル、カルバメート及び尿素からなる群より選択される）、
環Ｂは、アリール及びヘテロアリールからなる群より選択される、
請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［３−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−アミノ−３−｛５−［４−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩、及び
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（１−メチル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛３−［２−（４−メトキシ−ベンジル）−２Ｈ−テトラゾール−５−イル］−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［３−（２−メチル−２Ｈ−テトラゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、及び、
４−アミノ−３−｛５−［１−（４−クロロ−ベンジル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトルエン−４−スルホン酸塩.
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−ベンジル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸、及び、
４−アミノ−３−｛５−［５−（４−クロロ−フェニル）−［１，３，４］オキサジアゾール−２−イル］−２−メチル−フェノキシ−メチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（３−メチル−［１，２，４］オキサジアゾール−５−イル）−フェノキシメチル］−チエノ−［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドトリフルオロ酢酸塩、
４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、
４−アミノ−３−｛５−［４−（４−メトキシ−ベンジル）−５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル］−２−メチル−フェノキシメチル｝−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸エチルエステル、及び、
４−アミノ−３−［２−メチル−５−（５−メチル−４Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−フェノキシメチル］−チエノ［３，２−ｃ］ピリジン−７−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド
からなる群より選択される、請求項１記載の化合物。
請求項１〜８のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物、又は医薬的に許容し得るその塩を、医薬的に許容し得る担体と共に含んでなる、医薬組成物。
請求項１〜８のいずれか１項に記載の式Ｉの化合物の使用であって、癌、アテローム性動脈硬化、及び／又は再狭窄の処置に有用な薬剤の調製における使用。