JP4921458B2 - Fret発光における偏光異方性を使用したスクリーニングの方法 - Google Patents
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Description
r=(VV−gVH)/(VV+2gVH)
ここでVH及びVVは、垂直励起偏光と相対的な水平及び垂直発光偏光であり、gは、光学機器の偏光バイアスを補正する。
本発明の一部の実施形態では、随意的に、反応が生じた度合いを判断する。
Claims (20)
- 第一の化学物質と第二の化学物質との間の特異結合を検出するための方法であって、
ドナーフルオロフォアである第一のフルオロフォアに関連する前記第一の化学物質を固定化する工程と、
前記第二の化学物質を、前記固定化した第一の化学物質と結合可能にする工程であって、前記第二の化学物質は、前記第一のフルオロフォアとのFRETペアを形成する、アクセプタフルオロフォアである第二のフルオロフォアであるか、または、前記第二のフルオロフォアと結合した状態になる工程と、
前記結合化学物質を、前記第一または前記第二のフルオロフォアの何れかの励起周波数での放射に露出する工程と、
前記第一及び第二の化学物質間の特異結合を検出するために、前記ドナーフルオロフォア及び前記アクセプタフルオロフォアの発光波長におけるFRET蛍光信号の偏光異方性を測定する工程と、を備え、
前記ドナーフルオロフォアの発光波長での前記異方性を使用することは、前記アクセプタフルオロフォアの発光波長の前記異方性の変化を規定する内部基準の役割を果たす、
方法。 - 更に、前記第一または第二のフルオロフォアの少なくとも一方のドナー発光継続時間を測定する工程を備える、請求項1記載の方法。
- 前記偏光異方性は、単一の波長で測定される、請求項1記載の方法。
- 前記第一及び第二のフルオロフォアは、同一(ホモFRET)である、請求項1記載の方法。
- 更に、前記第一及び第二の化学物質の少なくとも一方に所定の処理を施す工程を備え、前記第一及び第二の化学物質間の特異結合は、前記所定の処理の結果として前記第一及び第二の化学物質の少なくとも一方が特定の状態になる場合にのみ生じる、請求項1記載の方法。
- 前記偏光異方性は、第一の波長と第二の波長とで測定される、請求項1記載の方法。
- 更に、第一の波長での前記異方性を、前記第二の波長での前記異方性の変化を判断するための基準として使用する工程を備える、請求項6記載の方法。
- 前記第一及び第二の波長の前記異方性は、信号読み出しの際の系統的な測定変化にとって短い時間枠の中で、連続して測定される、請求項6記載の方法。
- 更に、基準源の偏光異方性を測定する工程を備える、請求項6記載の方法。
- 前記基準源は、前記フルオロフォアの一方に対するレーザ励起源である、請求項9記載の方法。
- 更に、FRET相互作用が生じているかを判断するために、前記第一及び第二の波長の前記異方性を、前記基準源の前記異方性と比較する工程を備える、請求項9記載の方法。
- 前記第一及び第二の波長及び基準源の前記異方性は、信号読み出しの際の系統的な測定変化にとって短い時間枠の中で、連続して測定される、請求項9記載の方法。
- ドナーフルオロフォアに関連する第一の化学物質とアクセプタフルオロフォアに関連する第二の化学物質との間でFRET相互作用が発生しているかを検出するための方法であって、
前記フルオロフォアの少なくとも一方を、前記ドナーフルオロフォアの励起波長での放射に露出する工程と、
蛍光信号の偏光異方性を、前記ドナーフルオロフォアの発光波長と、前記アクセプタフルオロフォアの発光波長とにおいて測定する工程と、
前記第一及び第二の化学物質間でFRET相互作用が発生しているかを判断するために、前記測定した異方性を比較する工程と、を備える方法。 - 前記ドナーフルオロフォアの発光波長での前記異方性を使用することは、前記アクセプタフルオロフォアの発光波長の前記異方性の変化を判定または定量化するための内部基準の役割を果たす、請求項13記載の方法。
- 前記第一及び第二の波長の前記異方性は、信号読み出しの際の系統的な測定変化にとって短い時間枠の中で、連続して測定される、請求項13記載の方法。
- 前記ドナーフルオロフォアの前記発光波長での前記測定された異方性に対して、前記アクセプタフルオロフォアの前記発光波長での前記測定された異方性が相対的に変化した場合に、FRET相互作用が生じたと判断される、請求項13記載の方法。
- 前記第一及び第二の化学物質の一方は、前記第一及び第二の化学物質の他方との結合時に立体障害を受ける小分子である、請求項13記載の方法。
- 前記ドナーフルオロフォアと前記アクセプタフルオロフォアとは同一である、請求項13記載の方法。
- ドナーフルオロフォアに関連する第一の化学物質とアクセプタフルオロフォアに関連する第二の化学物質との間でFRET相互作用が発生しているかを検出するための方法であって、
前記フルオロフォアを含有する領域を、前記ドナーフルオロフォアの励起波長での放射に露出する工程と、
蛍光信号の偏光異方性を、前記アクセプタフルオロフォアの発光波長において測定する工程と、
前記フルオロフォアを含有する前記領域における基準信号の波長において偏光異方性を測定する工程と、
前記第一及び第二の化学物質間でFRET相互作用が発生しているかを判断するために、前記測定した異方性を比較する工程と、を備える方法。 - 前記基準信号は、前記ドナーフルオロフォアの蛍光以外の放射を含む、請求項19記載の方法。
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