JP4866181B2

JP4866181B2 - Melanin production inhibitor

Info

Publication number: JP4866181B2
Application number: JP2006236464A
Authority: JP
Inventors: 潮路石渡; 智弘大野
Original assignee: Fancl Corp
Current assignee: Fancl Corp
Priority date: 2006-08-31
Filing date: 2006-08-31
Publication date: 2012-02-01
Anticipated expiration: 2026-08-31
Also published as: JP2008056616A

Description

本発明は、メラニン産生抑制剤に関する。 The present invention relates to a melanin production inhibitor.

大気汚染やオゾン層の破壊などに起因して、人の表皮に届く紫外線量は年々増加する傾向にあり、それに伴い、紫外線による肌のシミ、ソバカス、色黒などの肌悩みが大きな問題となっている。紫外線が照射されることにより、皮膚内に存在するチロシンがチロシナーゼ酵素の働きにより酸化されてメラニン色素が産生され、これが過剰に産生されると、シミ、ソバカス、色黒などの肌悩みとなって表れる。このメラニン色素の産生を抑制し、シミ、ソバカス、色黒を予防する方法として、従来より、皮膚の美白を目的として、皮膚化粧料にL-アスコルビン酸及びその誘導体であるL-アスコルビン酸グルコース配糖体を配合することが行なわれており（例えば、特許文献１：特開平４−１８２４１２号公報参照）、さらにL-アスコルビン酸グルコース配糖体とアミノ酸又はその誘導体を組み合わせて配合した皮膚外用剤（例えば、特許文献２：特開平４−１８２４１３号公報参照）など多数提案されている。しかしながら、これらの美白剤は美白効果が必ずしも十分に認められないものであったり、美白効果を示す成分を、美白効果を認める濃度で配合すると安全性や安定性に問題を生じることがあった。
ロリオライド配糖体は葉たばこから単離され、たばこ用香喫味改良剤として使用できることが知られている（特許文献３：特開昭５７−２１２１９７号公報参照）。また、ロリオライドは医薬用免疫抑制剤（特許文献４：特開平７−１３８１５６号公報参照）、作物発芽抑制剤（特許文献５：特開２００２−２５５７０６号公報）、茶フレーバー組成物（特許文献６：特開２００５−１４３４６７号公報参照）、として利用されることが知られているが、ロリオライドに美白作用があることは知られていなかった。 Due to air pollution and destruction of the ozone layer, the amount of ultraviolet rays that reach the human epidermis tends to increase year by year. Along with this, skin problems such as skin spots, freckles, and darkness due to ultraviolet rays become a major problem. ing. By irradiating with ultraviolet rays, tyrosine present in the skin is oxidized by the action of tyrosinase enzyme to produce melanin pigment, and if this is produced excessively, it causes skin problems such as spots, freckles, and darkness. appear. As a method for inhibiting the production of this melanin pigment and preventing spots, freckles, and darkness, L-ascorbic acid and its derivative L-ascorbic acid glucose distribution have been conventionally applied to skin cosmetics for the purpose of skin whitening. Formulation of a saccharide (for example, see Patent Document 1: Japanese Patent Laid-Open No. 4-182212), and an external preparation for skin containing a combination of an L-ascorbic acid glucose glycoside and an amino acid or a derivative thereof (For example, see Patent Document 2: Japanese Patent Laid-Open No. 4-182413). However, these whitening agents do not always have a sufficient whitening effect, and if a component showing the whitening effect is blended in a concentration that allows the whitening effect, there may be problems in safety and stability.
It is known that Loriolide glycoside is isolated from leaf tobacco and can be used as a flavor improving agent for tobacco (Patent Document 3: Japanese Patent Laid-Open No. 57-212197). Loriolide is a pharmaceutical immunosuppressant (Patent Document 4: JP-A-7-138156), crop germination inhibitor (Patent Document 5: JP-A-2002-255706), tea flavor composition (Patent Document 6). : See JP-A-2005-143467), but it has not been known that Loriolide has a whitening effect.

特開平４−１８２４１２号公報JP-A-4-18212 特開平４−１８２４１３号公報JP-A-4-182413 特開昭５７−２１２１９７号公報JP 57-212197 特開平７−１３８１５６号公報JP 7-138156 A 特開２００２−２５５７０６号公報JP 2002-255706 A 特開２００５−１４３４６７号公報JP 2005-143467 A

本発明の課題は、優れたメラニン産生抑制剤並びに美白化粧料を提供することである。 The subject of this invention is providing the outstanding melanin production inhibitor and whitening cosmetics.

（１）ロリオライドからなるメラニン産生抑制剤。
（２）ロリオライドからなるチロシナーゼ阻害剤。
（３）ロリオライドを０．５質量％以上含有する化粧料。 (1) A melanin production inhibitor comprising Loriolide.
(2) A tyrosinase inhibitor comprising loriolide.
(3) Cosmetics containing 0.5% by mass or more of Loriolide.

本発明で用いるロリオライドはメラニン産生抑制作用があり、美白効果を奏する。ロリオライドを含有した美白化粧料を提供できる。 Loriolide used in the present invention has a melanin production inhibitory effect and exhibits a whitening effect. Whitening cosmetics containing Loriolide can be provided.

ロリオライドは下記式（１）で表される化合物である。 Loriolide is a compound represented by the following formula (1).

（１）
(1)

ロリオライドは、カロテノイドの酸化代謝物であり、例えば、ケール、イネ籾殻、麦種子殻、褐藻、サルビア、ツユクサ、ジギタリスの抽出物から分離して入手することができる。ケールは、南ヨーロッパ原産のアブラナ科植物の野菜で、キャベツの原種と言われており、その学名は、Brassicca Oleracea L．var．acephala DC.である。このケールには、キッチンケール、マローケール、ブッシュケール、ツリーケール、コラード、緑藻カンランなどの種類がある。
ロリオライドは、ケールの葉、茎、花、根などを濃度５０〜９９．５質量％、好ましくは７０〜８０質量％のエタノールで抽出して得られた抽出物の脂溶性画分に多く含まれている。
具体的には、例えば、ケールの葉、茎、花や根などの乾燥物に濃度５０〜９９．５質量％、好ましくは７０〜８０質量％エタノールを加え、室温で数時間ないし数十時間の間浸漬・攪拌することによりその抽出液を得て、この抽出液をおよそ１０〜２０倍程度まで加熱蒸発等によって濃縮し、分液ロートなどによって水溶性画分と脂溶性画分とに分離して得られた脂溶性画分である。ここで得られた脂溶性画分は、さらにその濃度が５０質量％のエタノールを用いて再度抽出を行い、分液ロートによって２層に分離することができる。 Loriolide is an oxidative metabolite of carotenoid, and can be obtained separately from extracts of kale, rice husk, wheat seed husk, brown algae, salvia, communis and digitalis, for example. Kale is a cruciferous vegetable native to Southern Europe and is said to be the original species of cabbage. Its scientific name is Brassicca Oleracea L. var. acephala DC. There are various types of kale, such as kitchen kale, mallow kale, bush kale, tree kale, collard, and green alga kanran.
Loriolide is abundant in the fat-soluble fraction of the extract obtained by extracting kale leaves, stems, flowers, roots and the like with ethanol having a concentration of 50 to 99.5% by mass, preferably 70 to 80% by mass. ing.
Specifically, for example, a concentration of 50 to 99.5% by mass, preferably 70 to 80% by mass of ethanol is added to dry matter such as kale leaves, stems, flowers and roots, and the mixture is used for several hours to several tens hours at room temperature. The extract is obtained by immersing and agitating for a while, and the extract is concentrated to about 10 to 20 times by heat evaporation or the like, and separated into a water-soluble fraction and a fat-soluble fraction by a separating funnel. It is a fat-soluble fraction obtained in this way. The fat-soluble fraction obtained here can be extracted again with ethanol having a concentration of 50% by mass and separated into two layers by a separatory funnel.

これらのうちの水溶性画分は主に水溶性の高い糖類や食物繊維などから構成されている。一方、脂溶性画分のうちの５０質量％エタノールに溶解しない画分（脂溶性画分Ｉ）は主としてクロロフィルやフィトステロールなどである。また、５０質量％エタノールに溶解する画分（脂溶性画分Ｓ）は主としてポリフェノール類などから構成されている。ロリオライドはこの脂溶性画分Ｓに含まれているので、脂溶性画分Ｓから逆相ＨＰＬＣなどでロリオライドを分離精製することによって得ることができる。
ロリオライドは公知の方法（特開昭５８−１６４５３８）で合成することもできる。
本発明のメラニン産生抑制剤は、ロリオライドをそのまま使用してもよいし、上記のようにして得たロリオライドを含有するケールのエタノール抽出物の脂溶性画分をそのままの状態で含有する組成物として使用してもよい。 Among these, the water-soluble fraction is mainly composed of saccharides and dietary fibers having high water solubility. On the other hand, of the fat-soluble fraction, the fraction not dissolved in 50% by mass ethanol (fat-soluble fraction I) is mainly chlorophyll, phytosterol and the like. Further, the fraction dissolved in 50% by mass ethanol (lipid-soluble fraction S) is mainly composed of polyphenols and the like. Since loroliide is contained in this fat-soluble fraction S, it can be obtained by separating and purifying loroliide from the fat-soluble fraction S by reverse phase HPLC or the like.
Loriolide can also be synthesized by a known method (Japanese Patent Laid-Open No. 58-164538).
The melanin production inhibitor of the present invention may use loriolide as it is, or as a composition containing the fat-soluble fraction of kale ethanol extract containing loriolide obtained as described above as it is. May be used.

本発明のメラニン産生抑制剤を、直接化粧料成分として使用し、美白化粧料を製造することができる。このような美白化粧料には、植物油のような油脂類、高級脂肪酸、高級アルコール、シリコーン、アニオン界面活性剤、カチオン界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン界面活性剤、防腐剤、糖類、金属イオン封鎖剤、水溶性高分子のような高分子、増粘剤、粉体成分、紫外線吸収剤、紫外線遮断剤、ヒアルロン酸のような保湿剤、香料、ｐＨ調整剤などを含有させることができる。さらに、ビタミン類、皮膚賦活剤、血行促進剤、活性酸素消去剤、抗炎症剤、美白剤等のほかの薬効成分、生理活性成分を含有させることができる。 The melanin production inhibitor of the present invention can be directly used as a cosmetic ingredient to produce a whitening cosmetic. Such whitening cosmetics include oils and fats such as vegetable oils, higher fatty acids, higher alcohols, silicones, anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, nonionic surfactants, preservatives, sugars, It may contain sequestering agents, polymers such as water-soluble polymers, thickeners, powder components, UV absorbers, UV blockers, moisturizers such as hyaluronic acid, fragrances, pH adjusters, etc. it can. Furthermore, vitamins, skin activators, blood circulation promoters, active oxygen scavengers, anti-inflammatory agents, other medicinal components such as whitening agents, and physiologically active components can be contained.

美白化粧料の種類としては、化粧水、乳液、クリーム、パック等の皮膚化粧料、メイクアップベースローション、メイクアップクリーム、乳液状又はクリーム状あるいは軟膏型のファンデーションといったメイクアップ化粧料、ハンドクリーム、レッグクリーム、ボディローション等の身体用化粧料等とすることができる。ロリオライドを含有するメラニン産生抑制剤を含有させた美白化粧料としては、その機能面からは、例えば乳液、化粧液、フェイスクリーム、ハンドクリーム、ローション、エッセンスなどが好ましい。
このような本発明のメラニン産生抑制剤を含有する美白化粧料は、常法に従って製造することができる。美白化粧料におけるロリオライドの添加量は、特に限定されるものではないが、一例としてあげると、化粧料全重量の０．００１〜２０質量％、好ましくは０．０１〜１０質量％が適当である。 Types of whitening cosmetics include skin cosmetics such as lotions, emulsions, creams, packs, makeup base lotions, makeup creams, makeup cosmetics such as emulsions, creams or ointment foundations, hand creams, It can be used as body cosmetics such as leg creams and body lotions. As the whitening cosmetic containing a melanin production inhibitor containing loriolide, from the functional aspect, for example, emulsion, cosmetic liquid, face cream, hand cream, lotion, essence and the like are preferable.
Such a whitening cosmetic containing the melanin production inhibitor of the present invention can be produced according to a conventional method. The amount of Loriolide added to the whitening cosmetic is not particularly limited, but as an example, 0.001 to 20% by mass, preferably 0.01 to 10% by mass of the total cosmetic is appropriate. .

次に、本発明を実施例によって更に詳しく説明する。以下の製造例、実施例、処方例は本発明の好ましい例を示すものであり、これに限定されるものではない。また、各例中の「％」は質量基準である。 Next, the present invention will be described in more detail with reference to examples. The following production examples, examples and formulation examples show preferred examples of the present invention and are not limited thereto. Further, “%” in each example is based on mass.

１）ロリオライドの製造
乾燥させたケールの葉を粉砕し、ケール粉砕物１２ｋｇを２００Ｌドラムに入れ、７０％エタノール、９６Ｌ、７２Ｌ、７２Ｌで３回抽出し、この抽出液を合わせて（１６９Ｌ）、１２．０ｋｇまで減圧濃縮した。次いで、遠心分離し、上層と下層に分けた。下層を分離し、３．６Ｌの水で２回洗浄し、５０％エタノール４８Ｌに溶解した。このエタノール溶液を、さらに遠心分離し、上層を分離して、濃縮乾固させてケールエタノール抽出物の「脂溶性画分Ｓ」として９５ｇを得た。 1) Production of Loriolide The dried kale leaf was pulverized, 12 kg of the pulverized kale was placed in a 200 L drum, extracted three times with 70% ethanol, 96 L, 72 L, and 72 L, and the extracts were combined (169 L). The solution was concentrated under reduced pressure to 12.0 kg. Then, it was centrifuged and divided into an upper layer and a lower layer. The lower layer was separated, washed twice with 3.6 L water and dissolved in 48 L 50% ethanol. This ethanol solution was further centrifuged, and the upper layer was separated and concentrated to dryness to obtain 95 g of “lipophilic fraction S” of the kale ethanol extract.

２）脂溶性画分Ｓ中の成分の中圧液体クロマトグラフィーによる分取
得られた脂溶性画分Ｓの９５ｇのうちの５０ｇを用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・機器構成：
中圧液体クロマトグラフィーシステム：ＫｒｏｎｌａｂＧｍｂＨ
逆相カラム：Ｐｏｌｙｇｏｐｒｅｐ６０−５０ＲＰ−１８（Ｍａｃｈｅｒｅｙ＆
Ｎａｇｅｌ）
・溶離液：
精製水１００％、続いて、精製水１００％→メタノール１００％のグラジエント、続いて、イソプロパノール１００％
・分取物
溶離液が精製水１００％で溶出した分画Ｐ（０．４２ｇ）を得た。 2) using 50g of 95g of fat-soluble fraction S of lipophilic fraction S obtained fractionated by medium pressure liquid chromatography component, it was separated and purified by the following method and conditions.
·Equipment configuration:
Medium pressure liquid chromatography system: Kronlab GmbH
Reversed phase column: Polyprep 60-50 RP-18 (Macheley &
Nagel)
・ Eluent:
Purified water 100%, followed by purified water 100% → methanol 100% gradient, followed by isopropanol 100%
・ Preparation
Fraction P (0.42 g) in which the eluent eluted with 100% purified water was obtained.

３）分画Ｐ脱塩物含まれる成分の高速液体クロマトグラフィーによる分離
得られた分画Ｐ０．４２ｇを用いて、以下の方法と条件によって分離精製した。
・機器構成：
全自動分画・精製・分取システム：ＳＥＰＢＯＸＬｉｇｈｔ
分取カラム：
ＭｅｒｃｋＳｅｌｅｃｔＢ２５０×１６ｍｍ、１０μｍ
検出器：ＥＬＳＤ（Ｓｅｄｅｘ７５）
ＵＶ（Ｍｅｒｃｋ、２５４ｎｍ）
・溶離液：
流速：
１５ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液：Ａ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸水溶液
：Ｂ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸のアセトニトリル：メタノール＝１：１溶液
グラジエント：表１に示す。 3) Separation of components contained in fraction P desalted product by high-performance liquid chromatography Using 0.42 g of fraction P obtained as described above, separation and purification were performed according to the following method and conditions.
·Equipment configuration:
Fully automatic fractionation / purification / sorting system: SEPBOXLight
Preparative column:
Merck Select B 250 × 16mm, 10μm
Detector: ELSD (Sedex75)
UV (Merck, 254nm)
・ Eluent:
Flow speed:
15 mL / min
Eluent: A ... 0.5 mM ammonium formate, 0.1% formic acid aqueous solution
: B: 0.5 mM ammonium formate, 0.1% formic acid in acetonitrile: methanol = 1: 1 solution Gradient: shown in Table 1.

・分取物
分取物をＳＰＥカラム（ＬｉｃｈｒｏｌｕｔＥＮ-Ｍｅｒｃｋ）で脱塩し、サンプル（ａ）０．８ｍｇを得た。 -Preparative fraction The desalted fraction was desalted with an SPE column (Lichlort EN-Merck) to obtain 0.8 mg of sample (a).

４）サンプル（ａ）の高速液体クロマトグラフィーによる純度確認、並びに保持時間の確認
・機器構成：
ＨＰＬＣシステム：ＭｅｒｃｋＨｉｔａｃｈｉ
分析カラム：ＭｅｒｃｋＳｕｐｅｒｓｐｈｅｒ６０ＲＰＳｅｌｅｃｔＢ１２５×４ｍｍ
検出器：ＥＬＳＤ（Ｓｅｄｅｘ７５）、ＵＶ（Ｍｅｒｃｋ、２５４ｎｍ）
・溶離液：
流速：１ｍＬ／ｍｉｎ
溶離液：Ａ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸水溶液
Ｂ・・・０．５ｍＭギ酸アンモニウム、０．１％ギ酸のアセトニトリル：メタノール＝１：１溶液
グラジエント：表２に示す。 4) Confirmation of purity of sample (a) by high performance liquid chromatography, confirmation of retention time and equipment configuration:
HPLC system: Merck Hitachi
Analytical column: Merck Supersphere 60 RP SelectB 125 × 4 mm
Detector: ELSD (Sedex75), UV (Merck, 254 nm)
・ Eluent:
Flow rate: 1 mL / min
Eluent: A ... 0.5 mM ammonium formate, 0.1% formic acid aqueous solution
B: 0.5 mM ammonium formate, 0.1% formic acid in acetonitrile: methanol = 1: 1 solution Gradient: shown in Table 2.

本分析条件により、サンプル（ａ）の純度を確認した。保持時間は１４．０１分であった。 The purity of the sample (a) was confirmed under the analysis conditions. The retention time was 14.01 minutes.

５）サンプル（ａ）の構造決定
上記の３）で分取したサンプル(ａ)について、ＬＣ／ＭＳ分析装置及びＮＭＲ分析装置を用いて化合物の構造決定を行なった。
ＬＣ／ＭＳ分析の溶離液は４）と同じものを用い、グラジエント条件は適宜調整した。
ＭＳシステムはＰＥ-ＳｃｉｅｘＡＰＩ１５０（+/(-)-ＥＳＩ、Ｆａｓｔ-Ｓｗｉｔｃｈｉｎｇ-Ｍｏｄｅ）を使用した。
^１Ｈ−ＮＭＲ、ＨＳＱＣ、ＨＭＢＣ、ＨＨ−ＣＯＳＹは共鳴周波数４００ＭＨｚあるいは５００ＭＨｚで測定した。^１３Ｃ−ＮＭＲのスペクトルはＨＭＢＣ、ＨＳＱＣの手法を用いて帰属した。溶媒は重メタノールを用い、化学シフト基準に使用した（^１Ｈ−ＮＭＲ３．３０ｐｐｍ、^１３Ｃ−ＮＭＲ４９．０ｐｐｍ）。
以上のようにして抽出分離した各サンプルのＬＣ／ＭＳ分析、ＮＭＲ分析の結果を以下に示す。
ＬＣ／ＭＳ
（+)−ＥＳＩ：１９７[Ｍ＋Ｈ]^＋
^１Ｈ−ＮＭＲ、 ^１３Ｃ−ＮＭＲ
スペクトルの帰属と化学シフトを表３に示す。対応する原子の位置を化学式で示す。 5) Structure determination of sample (a) About the sample (a) fractionated by said 3), the structure of the compound was determined using the LC / MS analyzer and the NMR analyzer.
The same eluent for LC / MS analysis was used as in 4), and the gradient conditions were appropriately adjusted.
The MS system used PE-Sciex API150 (+ / (-)-ESI, Fast-Switching-Mode).
¹ H-NMR, HSQC, HMBC, and HH-COSY were measured at a resonance frequency of 400 MHz or 500 MHz. ^{The 13} C-NMR spectrum was assigned using the methods of HMBC and HSQC. The solvent was deuterated methanol and used for the chemical shift standard ( ¹ H-NMR 3.30 ppm, ¹³ C-NMR 49.0 ppm).
The results of LC / MS analysis and NMR analysis of each sample extracted and separated as described above are shown below.
LC / MS
(+)-ESI: 197 [M + H] ⁺
¹ H-NMR, ¹³ C-NMR
The spectral assignments and chemical shifts are shown in Table 3. The position of the corresponding atom is shown in chemical formula.

メラニン産生抑制作用の評価試験
B16マウスメラノーマ細胞をグルコサミン0.1%(w/v)の入ったMEM培地で48wellプレートに3,000cells/well播種し、5日間培養した。その後、培地をテオフィリン0.03%(w/v)の入ったMEM培地にサンプルを入れたものに交換し、3日間培養した。サンプルは予め終濃度0.5%のエタノールで溶解後、添加した。細胞を洗浄後、0.1%SDS水溶液により可溶化して475nm、260nmの吸光度を測定し、S475、S260とした。メラニン量比はサンプルを添加しない培地で培養した細胞の475nm、260nmにおける吸光度をC475、C260として式１により計算した。 Evaluation test of melanin production inhibitory action
B16 mouse melanoma cells were seeded at 3,000 cells / well in a 48-well plate with MEM medium containing 0.1% (w / v) glucosamine and cultured for 5 days. Thereafter, the medium was replaced with a sample in MEM medium containing 0.03% (w / v) theophylline and cultured for 3 days. The sample was dissolved in ethanol at a final concentration of 0.5% in advance and then added. After washing the cells, the cells were solubilized with a 0.1% SDS aqueous solution and the absorbance at 475 nm and 260 nm was measured to give S475 and S260. The melanin amount ratio was calculated according to Equation 1 with the absorbance at 475 nm and 260 nm of cells cultured in a medium to which no sample was added as C475 and C260.

(数１)
メラニン量比(%)＝｛（S475／S260）／(C475／C260)｝×100 （式１） (Equation 1)
Melanin ratio (%) = {(S475 / S260) / (C475 / C260)} × 100 (Formula 1)

陽性対照サンプルとして美白成分として広く使用されているアスコルビン酸、コウジ酸、アルブチンを用いた。
メラニン量比が５０％となるサンプル濃度をメラニン産生のＩＣ_５０（５０％阻害濃度）とし、ロリオライドと陽性対照サンプルを比較した。結果を表４に示す。 Ascorbic acid, kojic acid, and arbutin widely used as whitening components were used as positive control samples.
The sample concentration at which the melanin ratio was 50% was defined as the IC ₅₀ (50% inhibitory concentration) of melanin production, and Loriolide and the positive control sample were compared. The results are shown in Table 4.

ロリオライドのメラニン産生のＩＣ_５０は、陽性対照サンプルのアスコルビン酸の約１／６、コウジ酸の約１／３であり、優れたメラニン産生抑制効果を示した。また、ロリオライドのメラニン産生のＩＣ_５０は、アルブチンと同程度であった。 IC ₅₀ of melanin production Rorioraido is about 1/6 of ascorbic acid positive control sample, approximately one-third of kojic acid showed excellent melanogenesis inhibitory effect. In addition, IC ₅₀ of melanin production of Rorioraido was about the same as the arbutin.

チロシナーゼ阻害作用の評価試験
サンプルを溶解した100mM Sodium succinate buffer (pH5.5）溶液100μlにチロシナーゼ300U/ml(100mM Sodium succinate buffer pH5.5)を混合して30℃10分インキュベートし、予め30℃にインキュベートした6mM L-DOPA/100mM Sodium succinate buffer pH5.5 を40μl添加し、30℃40分間振とうしながらインキュベートした。その後、475nmにおける吸光度を測定した。サンプルをいれないものをコントロールとし、L-DOPAを入れないものをブランクとし、以下の計算式によりチロシナーゼ阻害率を算出した。 Evaluation test of tyrosinase inhibitory activity 100μl of 100mM sodium succinate buffer (pH5.5) solution in which the sample was dissolved was mixed with 300U / ml tyrosinase (100mM sodium succinate buffer pH5.5) and incubated at 30 ° C for 10 minutes. 40 μl of the incubated 6 mM L-DOPA / 100 mM Sodium succinate buffer pH 5.5 was added, and the mixture was incubated with shaking at 30 ° C. for 40 minutes. Thereafter, the absorbance at 475 nm was measured. A sample without a sample was used as a control, a sample without L-DOPA was used as a blank, and the tyrosinase inhibition rate was calculated by the following formula.

(数２)
チロシナーゼ阻害率＝｛１− (サンプル吸光度−サンプルブランク吸光度)／(コントロール吸光度−コントロールブランク吸光度)｝×１００（％）（式２） (Equation 2)
Tyrosinase inhibition rate = {1− (sample absorbance−sample blank absorbance) / (control absorbance−control blank absorbance)} × 100 (%) (Formula 2)

陽性対照サンプルとして美白成分として広く使用されているアスコルビン酸、コウジ酸、アルブチンを用いた。結果を表５、図１に示す。 Ascorbic acid, kojic acid, and arbutin widely used as whitening components were used as positive control samples. The results are shown in Table 5 and FIG.

陽性対照サンプルのアスコルビン酸、コウジ酸、アルブチンと比べて、ロリオライドのチロシナーゼ阻害率は高かった。ロリオライドのチロシナーゼ阻害率は、陽性対照サンプルの中でチロシナーゼ阻害率が最も高いコウジ酸と比べて２倍以上であった。 Compared to the positive control samples ascorbic acid, kojic acid, and arbutin, loriolide had a higher tyrosinase inhibition rate. The tyrosinase inhibition rate of Loriolide was more than twice that of kojic acid, which has the highest tyrosinase inhibition rate among the positive control samples.

次に、本発明のメラニン産生抑制剤を含む美白化粧料の処方例を示す。
処方例１：美白化粧水
上記の実施例１で得られたロリオライドを用いて、常法により下記組成の美白化粧水を製造できる。
（組成）（質量％）
グリセリン８．０
１，３−ブチレングリコール２．０
クエン酸０．１
Ｌ−セリン０．０５
ロリオライド０．５
精製水残余 Next, the formulation example of the whitening cosmetics containing the melanin production inhibitor of this invention is shown.
Formulation Example 1: Whitening lotion Using the Loriolide obtained in Example 1 above, a whitening lotion having the following composition can be produced by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Glycerin 8.0
1,3-butylene glycol 2.0
Citric acid 0.1
L-serine 0.05
Lorio Ride 0.5
Purified water residue

処方例２：美白クリーム
上記の実施例１で得られたロリオライドを用いて、常法により下記組成の美白クリームを製造できる。
（組成）（質量％）
ステアリルアルコール６．０
ステアリン酸２．０
スクワラン９．０
オクチルドデカノール１０．０
１，３−ブチレングリコール０．５
ホ゜リエチレンク゛リコール１５００４．０
POE(25)セチルアルコールエーテル３．０
モノステアリン酸ク゛リセリル２．０
ロリオライド１．０
精製水残余 Formulation Example 2: Whitening Cream Using the Loriolide obtained in Example 1 above, a whitening cream having the following composition can be produced by a conventional method.
(Composition) (mass%)
Stearyl alcohol 6.0
Stearic acid 2.0
Squalane 9.0
Octyldodecanol 10.0
1,3-butylene glycol 0.5
Polyethylene glycol 1500 4.0
POE (25) cetyl alcohol ether 3.0
Glyceryl monostearate 2.0
Lorio Ride 1.0
Purified water residue

処方例３：美白パック
ロリオライドを用いて、常法により下記組成の美白パックを製造できる。
（組成）（質量％）
ポリビニルアルコール１５．０
カルホ゛キシメチルセルロース５．０
１，３−ブチレングリコール５．０
エタノール１２．０
POE(25)オレイルアルコールエーテル０．５
クエン酸０．０２
クエン酸ナトリウム０．０４
ロリオライド１．０
精製水残余 Formulation Example 3: Whitening Pack Whitening pack having the following composition can be produced by a conventional method using Loriolide.
(Composition) (mass%)
Polyvinyl alcohol 15.0
Carboxymethylcellulose 5.0
1,3-butylene glycol 5.0
Ethanol 12.0
POE (25) oleyl alcohol ether 0.5
Citric acid 0.02
Sodium citrate 0.04
Lorio Ride 1.0
Purified water residue

ロリオライドのチロシナーゼ阻害作用の評価試験の結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of the evaluation test of the tyrosinase inhibitory effect of Loriolide.

Claims

Melanin production inhibitor consisting of Loriolide.

A tyrosinase inhibitor comprising loriolide.

Cosmetics containing 0.5% by mass or more of Loriolide.