JP4760712B2

JP4760712B2 - 新規ニトロフェニルマスタードおよびニトロフェニルアジリジンアルコールおよびそれらの対応するリン酸エステルおよびターゲットが決められた細胞毒性剤としてのそれらの使用

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Publication number: JP4760712B2
Application number: JP2006537921A
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Inventors: ウィリアムアレキサンダーデニー; グレアムジョンアトウェル; シャンジンヤン; ウィリアムロバートウィルソン; アダムフォルンパターソン; ヌアラアンヘルスビー
Original assignee: オークランドユニサーヴィスィズリミテッド
Priority date: 2003-10-31
Filing date: 2004-10-29
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Description

本発明は、新規ニトロフェニルマスタードおよびニトロフェニルアジリジンアルコール、それらの対応するリン酸エステル、ターゲットが決められた細胞毒性剤；低酸素性腫瘍における生物還元性の薬物としてのそれらの使用およびニトロリダクターゼ酵素と連動する遺伝子−酵素プロドラッグ療法（gene-directed enzyme-prodrug therapy：ＧＤＥＰＴ）および抗体−酵素プロドラッグ療法（antibody-directed enzyme-prodrug therapy：ＡＤＥＰＴ）を含む細胞切除におけるそれらの使用に関する。

腫瘍選択的プロドラッグ（相対的に不活性であるが、インビボでより活性な化合物に選択的に転換され得る化合物）の使用は、癌治療において有益な概念である（例えば、非特許文献１を参照）。

例えば、プロドラッグは、抗原に関連する腫瘍に結合することになるモノクローナル抗体に結合可能な酵素の影響下に抗腫瘍剤に転換されてよい。このようなプロドラッグのこのような酵素モノクローナル／抗体接合体との組み合わせは、非常に強力な臨床剤である。癌治療に対するこのアプローチは、「抗体−酵素／プロドラッグ療法（antibody directed enzyme/prodrug therapy）」（ＡＤＥＰＴ）と呼ばれることがあるものであり、特許文献１に開示されている。

プロドラッグを用いて患者の腫瘍細胞を処理する方法として、「ウイルス−酵素プロドラッグ療法（virus-directed enzyme therapy）」（ＶＤＥＰＴ）と呼ばれるさらなる治療アプローチが提案された。プロドラッグを活性化することができる酵素をエンコードする遺伝子を有するウイルス・ベクターにより、腫瘍細胞はターゲット化される。プロモータまたはエンハンサ配列に特異的な組織によって遺伝子は転写調節され得る。ウイルス・ベクターは腫瘍細胞に入り、酵素を発現し、その結果、プロドラッグは、腫瘍細胞内で活性薬に転換される（非特許文献２）。あるいは、遺伝子送達のために非ウイルス法が用いられた。このような方法は、リン酸カルシウム共沈法、顕微注入法、リポソーム法、直接的ＤＮＡ摂取法およびレセプター媒介ＤＮＡ伝達法を含む。これらは、非特許文献３に概説されている。用語「ＧＤＥＰＴ」（遺伝子−酵素プロドラッグ療法）は、ウイルスおよび非ウイルスの両方の送達システムを含むように用いられる（デニーらの特許文献２）。

４−ニトロ芳香族化合物は、哺乳類および細菌の両方のフラボタンパク質酵素によって還元され、これは、６個までの電子の段階的な付加をもたらす。主要な酵素代謝産物は、通常、４電子還元された種（ヒドロキシルアミン）である。

ニトロリダクターゼ酵素と連動した遺伝子−酵素プロドラッグ療法（ＧＤＥＰＴ）における使用のためのプロドラッグとして多くのニトロフェニルマスタードおよびニトロフェニルアジリジンが報告された。特に、ＣＢ１９５４［５−（アジリジン−１−イル）−２，４−ジニトロベンズアミド（１）［下記に示される］は、大腸菌から単離された好気性ニトロリダクターゼＮＴＲ（ｎｔｆｓＢ遺伝子産物）の基質であることが報告された（非特許文献４〜６）。ＡＤＥＰＴ（非特許文献７）およびＧＤＥＰＴ（非特許文献８〜１１）の両方の、臨床試験（非特許文献１２）を含む適用におけるプロドラッグとして、この化合物は用いられた。

同様に、ジニトロフェニル・マスタードＳＮ２３８６２（２）もＮＴＲの基質であり、酵素を発現する細胞系に選択毒性を示す。ニトロ基の還元によってそれは活性化される（非特許文献１３、１４）。４−ＳＯ_２Ｍｅ誘導体（３）も基質であり（非特許文献１５）、位置異性体（４）および（５）も同様である（非特許文献１６）。

しかしながら、このタイプの化合物が内因性リダクターゼ酵素によって低酸素腫瘍組織において活性化された場合、これらの化合物は生物還元プロドラッグとしてそれほど大きくは効果的ではなく、クローン形成法を用いて、野生型ＡＡ８細胞系において有酸素条件と比較して低酸素条件下で２〜５倍の効力比を示す（非特許文献１７）。

化合物を溶解させるために、いくつかのマスタードのホスフェート類似体が記載された。最良の既知物は、リン酸エスタラムスチン（Estracyt：６）であり、これは、種々の微小管関連タンパク質上にドメインを結合するチューブリンに結合することが示され（非特許文献１８）、進行性の乳ガンにおいて活性であることが示された（非特許文献１９）が、ＮＴＲまたは低酸素状態によって活性化されることは示されなかった。別の研究も、リン酸エストラムスチンが放射線増感剤であることを示した（非特許文献２０）。フェノールマスタードホスフェート類似体（７）は、カルボキシペプチダーゼ基質であり、低酸素条件下に活性化されず（マツイら，特許文献３）、可溶化マスタード（８）は、ホスファターゼ阻害剤として記載されたが、低酸素条件下に活性化されることは示されなかった（非特許文献２１）。

国際公開第８８／０７３７８号パンフレット米国特許第６３１０２３７号明細書特開平７−８２２８０号公報デニー（Denny）著，「Eur.J.Med.Chem.」，2001年,第36巻，p.577 ヒューバー（Huber）ら著，「Proc.Natl.Acad.Sci.」，（米国），1991年，第88巻，p.8039 モルガン（Morgan）およびフレンチ（French）著，「Annu.Rev.Biochem.」，1993年，第62巻，p.191 ボランド（Boland）ら著，「Biochem.Pharmacol.」，1991年，第41巻，p.867-875 アンレザーク（Anlezark）ら著，「Biochem.Pharmcol.」，1992年，第44巻，p.2289-2295 パーキンソン（Parkinson）ら著，「J.Med.Chem.」，2000年，第43巻，p.3624 ノックス（Knox）ら著，「Biochem.Pharmacol.」，1995年，第49巻，p.1641-1647 ブリッジウォーター（Bridge）ら著，「Eur.J.Cancer.」，1995年，第31A巻，p.2362-2370 ベイリー（Bailey）ら著，「Gene Ther.」，1996年，第3巻，p.1143-1150 ベイリー（Bailey）およびハート（Hart）著，「Gene Ther.」，1997年，第4巻，p.80-81 グリーン（Green）ら著，「Cancer Gene Ther.」，1997年，第4巻，p.229-238 チュン−ファイ（Chung-Faye）ら著，「Clin.Canncer Res.」，2001年，第7巻，p.2662-2668 パーマー（Palmer）ら著，「J.Med.Chem.」，1995年，第38巻，p.1229 ケステル（Kestell）ら著，「Cancer Chemother.Pharmacol.」，2000年，第46巻，p.365-374 アトワエル（Atwell）ら著，「Anti-Cancer Drug Des.」，1996年，第11巻，p.553 フリドロス（Friedlos）ら著，「J.Med.Chem.」，1997年，第40巻，p.1270 パーマー（Palmer）ら著，「J.Med.Chem.」，1996年，第39巻，p.2518-2528 モラガ（Moraga）ら著，「Biochim.Biophys.Acta.」，1992年，第1121号，p.97-103 カレン−ローゼンバーグ（Keren-Rosenberg）ら著，「Semin.Oncol.」，1997年，第24巻（Suppl.3），p.26-29 キム（Kim）ら著，「Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.」，1994年，第29巻，p.555-557 ワークマン（Workman）著，「Chem.-Biol.Interact.」，1978年，第20巻，p.103-112

本発明の目的は、短鎖アルコールを有する特定クラスのニトロフェニルマスタードおよびアジリジンおよびそれらの対応するリン酸エステルであって、ターゲットが決められた細胞毒性剤または生物還元性プロドラッグとして使用されるものを提供すること、または、有用な代替品を公衆に少なくとも提供することである。

第１の態様では、本発明は、式（Ｉ）：

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシドまたはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基によって置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジシジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示す）
の新規なリン酸エステル化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体を提供する。

好ましい実施形態において、式（Ｉ）のリン酸エステル化合物は、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）：

（ここで、Ｙは、

を示してよく、
ｎは、１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、
ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択される）
によって示される化合物および薬学的に許容される塩および誘導体から選択される。

好ましくは、式（Ｉ）のリン酸エステル化合物は、以下から選択される：
リン酸二水素２−［［２−ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル：
リン酸二水素３−［［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル：
リン酸二水素３−［［５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル：
リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル：
メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アミノ］エチル；
リン酸二水素２−（｛２−［ビス（２−ブロモプロピル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル｝アミノ）エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−６−（｛［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ｝カルボニル）アニリノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
リン酸二水素３−（｛３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，６−ジニトロベンゾイル｝アミノ）プロピル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；および
メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル。

第２の態様では、本発明は、式（ＩＩ）：

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
のアルコール化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体を提供するが、ただし、ＺがＮＯ_２を示し、かつ、ＹがＮ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｃｌ）_２を示す場合、ＸおよびＲは一緒に、−ＣＯＮＨＣＨ_２（ＣＨＯＨ）ＣＨ_２−を示し得ず、さらに、

は除かれる。

好ましい実施形態において、式（ＩＩ）のアルコール化合物は、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）：

（ここで、Ｙは、

を示してもよく、
ｎは１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、
ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択される）
によって示される化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体から選択されるが、ただし、ＺがＮＯ _２を示し、かつ、ＹがＮ（ＣＨ _２ＣＨ _２Ｃｌ） _２を示す場合、ＸおよびＲは一緒に、−ＣＯＮＨＣＨ _２（ＣＨＯＨ）ＣＨ _２ −を示し得ず、さらに、

は除かれる。

好ましくは、式（ＩＩ）の化合物は、以下から選択される：
Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド；
Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド；
Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド；
Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド；
５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロベンズアミド；
メタンスルホン酸２［（２−ブロモエチル）−５−［［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル］−２，４−ジニトロアニリノ］エチル；
５−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２，４−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
２−［ビス（２−ブロモプロピル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル；
メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル；
メタンスルホン酸２−（（２−クロロエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル；
２−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド；
メタンスルホン酸２−（（２−ヨードエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル；
３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２，６−ジニトロベンズアミド；
メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−３−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル；
３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−２，６−ジニトロベンズアミド；
メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル；
３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−２，６−ジニトロベンズアミド；
メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−３−｛［（４−ヒドロキシブチル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル；
メタンスルホン酸２−（（２−クロロエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル；および
メタンスルホン酸２−（（２−ヨードエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル。

本発明の第３の態様では、一般式（Ｉ）；

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニルまたは−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示す）によって示されるリン酸エステルおよび薬学的に許容されるその塩およびその誘導体を合成する方法が提供され、
該方法は、
（ｉ）式（ＩＩ）：

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２、または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物をリン酸化する工程を包含する。

第４の態様では、式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）

（ここで、Ｙは、

を示してもよく
ｎは、１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、ここで、Ｗ_１はハロゲンであり、Ｗ_２は−ＯＳＯ_２Ｍｅである）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体を合成する方法であって、該方法は、
式（ＩＩａ’）、（ＩＩｂ’）または（ＩＩｃ’）

（ここで、Ｙは、

であってよく、ここで、Ｗ’_１およびＷ’_２はそれぞれハロゲンである）
の化合物を、有効量のメタンスルホン酸銀（ＡｇＯＭｓ）と、溶媒中において場合により加熱して反応させて、上記定義の式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）の化合物を与える工程を包含する方法である。

直上に規定された方法において、Ｗ’_１およびＷ’_２がヨウ素および／または臭素である場合に、ヨウ素および／または臭素は、部分的にまたは完全に、−ＯＳＯ_２Ｍｅと置換され得ることが理解されるべきである。Ｗ’_１およびＷ’_２のいずれかまたは両方が塩素を示す状況では、塩素は不活性であり、−ＯＳＯ_２Ｍｅと置換されることができない。

好ましくは、溶媒は、ＭｅＣＮまたは他の極性非プロトン性溶媒から選択される。

第５の態様では、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）

（ここで、Ｙは、

を示してもよく、
ｎは、１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し
ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択される）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体を合成する方法であって、該方法は、
式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）

（ここで、Ｙは、

を示し、
ｎは、１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、
ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅ選択される）
によって示される化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体をリン酸化する工程を包含する方法が提供される。

第６の態様では、上記に定義された合成方法のいずれか１つによって得られる式（Ｉ）、式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）または式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）の化合物が提供される。

第７の態様では、本発明は、
（ｉ）少なくとも１種のニトロリダクターゼ酵素と連動したＧＤＥＰＴ（遺伝子−酵素プロドラッグ療法）またはＡＤＥＰＴ（抗体−酵素プロドラッグ療法）；または
（ｉｉ）１以上の低酸素選択的細胞毒素としての使用
に適したプロドラッグとしての使用方法であって、
上記に定義された式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体またはその混合物を、治療上の有効量で治療対象の腫瘍細胞に投与する工程を包含する方法を提供する。

好ましくは、ニトロリダクターゼ酵素は、大腸菌（E.coli）のｎｆｓＢ遺伝子またはクロストリジウム（Clostridia）種のオーソロガス遺伝子によってエンコードされる。

好ましくは、本方法は、腫瘍細胞に放射線を当てるさらなる工程を包含する。

第８の態様では、本発明は、抗ガン剤として、少なくとも１種のニトロリダクターゼ酵素と連動したＧＤＥＰＴ（遺伝子−酵素プロドラッグ療法）またはＡＤＥＰＴ（抗体−酵素プロドラッグ療法）に適したプロドラッグとしての使用方法であって、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体またはその混合物を、治療上の有効量で、治療対象中のターゲット腫瘍細胞に投与する工程を包含する方法を提供する。

好ましくは、ニトロリダクターゼ酵素は、大腸菌のｎｆｓＢ遺伝子またはクロストリジウム種のオーソロガス遺伝子によってエンコードされる。

ＡＤＥＰＴにより、還元性補因子を供給することが必要であり得ることが理解されるべきである。これらが十分な濃度で細胞外に存在しないかもしれないからである。細胞内酵素のようなプロドラッグの活性を刺激するために合成による補因子が用いられ得ることが想定される。同一の問題はＧＤＥＰＴには生じない。ＮＡＤＨ、ＮＡＤＰＨ等のいくつかの細胞内還元性補因子が十分な濃度で存在するからである。
第９の態様では、本発明は、抗ガン治療を提供する方法であって、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物が治療対象に応じた量で投与される方法を提供する。
好ましくは、前記方法の量は、治療対象の最大耐量の約２０〜１００％である。
好ましくは、本方法は、腫瘍細胞に放射線または化学療法剤を適用するさらなる工程を包含する。

本発明の第１０の態様では、少なくとも１種のニトロリダクターゼ酵素を利用する細胞切除（ablation）方法であって、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体またはその混合物を、細胞を切除するための有効量で投与する工程を包含し、前記細胞は、少なくとも１種のニトロリダクターゼ酵素を発現する、方法が提供される。

好ましくは、切除のターゲットにされる細胞は、治療対象の組織中の腫瘍細胞である。

好ましくは、少なくとも１種のニトロリダクターゼ酵素を利用する本細胞切除方法は、ＡＤＥＰＴまたはＧＤＥＰＴ技術のいずれかによって果たされる。

本発明の第１１の態様では、式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体またはその混合物の治療上の有効量および薬学的に許容される賦形剤、添加剤、担体、緩衝剤または安定剤を含む医薬組成物が提供される。

薬学的に許容される賦形剤、添加剤、担体、緩衝剤または安定剤は、好ましくは、無毒性であるべきであり、有効成分の効能に干渉するべきではない。担体または他の物質の正確な性質は、経口、または皮膚、皮下、静脈内等の注射であり得る投与ルートに依存することになる。これらの要素は、過度の実験を行うことなく当業者によって容易に決定され得ることが理解されるべきである。

経口投与用の医薬組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤または液体形態であり得る。錠剤は、固体の担体または添加剤を含み得る。液状医薬組成物は、一般的に、水、石油、動物または植物油、鉱油または合成油等の液状担体を含む。生理食塩水、デキストロースまたは他のサッカリド溶液またはグリコール（例えば、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）が含まれ得る。カプセル剤は、ゼラチン等の固形担体を含み得る。

静脈内、皮膚または皮下注射のために、有効成分は、発熱物質不含有でありかつ適切なｐＨ、等張性および安定性を有する非経口で許容される水溶液の形態であろう。当業者は、例えば等張の賦形剤（塩化ナトリウム注射液、リンゲル液、乳酸化リンゲル液等）を用いて適切な溶液を上手く調製することができる。保存剤、安定剤、緩衝剤、抗酸化剤および／または他の添加剤が必要に応じて含まれてよい。

本発明の第１２の態様では、（ｉ）ＧＤＥＰＴでの、または（ｉｉ）低酸素選択的細胞毒素としての、必要とする治療対象のガン細胞をターゲットとする使用のための、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物または薬学的に許容されるその塩およびその誘導体またはその混合物の有効量の薬品の製造での使用が提供される。

本発明の第１３の態様では、必要とする治療対象のガン細胞をターゲットとする細胞切除療法における使用のための、上記に定義されたような式（Ｉ）の化合物または式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−、−ＳＯ_２ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ_２−、−ＮＨＣＯ−または−ＮＨＳＯ_２−を示し；
Ｙは、任意の空いている環位置において、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示す）
の化合物および薬学的に許容されるその塩およびその誘導体またはその混合物の有効量の薬品の製造での使用が提供される。

本発明の化合物は、典型的には、ヒト治療対象の腫瘍細胞または腫瘍組織をターゲットとするように用いられるが、それらは、他の温血動物治療対象、例えば、他の霊長類、家畜（ウシ等）、競技用動物およびペット（ウマ、犬、ネコ等）における腫瘍細胞または腫瘍組織をターゲットとするように用いられてよい。

本明細書の全体にわたって使用されるように、用語「治療上の有効量」は、ガン細胞を有する治療対象に対する利点を示すのに十分な、上記に定義されたような式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物または上記に定義されたような化合物Ｉａ〜ＩｃまたはＩＩａ〜ＩＩｃのいずれか１つの化合物またはそれらの混合物の量として理解されるべきである。投与の実際の量、速度および時間経過は、治療される病気の性質および重傷度に依存することになる。治療の処方は、一般的な開業医および他の医療医の責任の範囲内である。

本明細書の全体にわたって用いられるように、用語「ハロゲン」は、塩素、臭素またはヨウ素を含む。

上記に定義されたような本発明の化合物は、治療されるべき状態に応じて、単独で、もしくは、同時にまたは順次のいずれかにより他の治療、特には、放射線治療および細胞毒化学療法薬と組み合わされて投与されてよいことが理解されるべきである。

本明細書の全体にわたって用いられるように、薬学的に許容される誘導体およびその塩は、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、スクシン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、イセチオン酸等から形成される酸由来の塩および炭酸ナトリウムおよびカリウム、水酸化ナトリウムおよびカリウム、アンモニア、トリエチルアミン、トリエタノールアミン等から形成される塩基由来の塩を含む。

本明細書の全体にわたって用いられるように、用語「細胞切除」は、細胞の殺害として理解されるべきであり、これは、ニトロリダクターゼ等の酵素を発現し、当該酵素によって、投与されたプロドラッグが活性化されるように設計される。結果として、組織によって特異的に発現され、特異的なターゲット細胞または組織を切除するような活性代謝物にプロドラッグを活性化するように利用され得る、例えばニトロリダクターゼの特異的な酵素発現を通じて、特異的なターゲット細胞または組織を選択的に切除するように細胞切除は用いられ得る（Gusterson et al，．Endocrine Related Cancer，1997，4，67-74）。

表現「実質的に最少の傍観者効果」は、ターゲット細胞と非ターゲット細胞との間に、上記に定義されたような式（Ｉ）または式（ＩＩ）の化合物または上記に定義されたような化合物Ｉａ−ＩｃまたはＩＩａ−ＩＩｃのいずれか１つの化合物またはそれらの混合物の酵素活性化から生じた活性化された代謝物の拡散がほとんどないかまたは全くないために、近傍の非ターゲット細胞の殺害が最少であるという意味として理解されるべきである。

式（Ｉ）の薬学的に許容される塩は、有機および無機の酸および／または有機および無機の塩基と薬学的に許容される塩を形成する式（Ｉ）の塩基性または酸性の化合物を含む。塩形成に適した酸の例は、塩酸、硫酸、リン酸、酢酸、クエン酸、シュウ酸、マロン酸、サリチル酸、リンゴ酸、フマル酸、スクシン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、イセチオン酸等である。塩形成に適した塩基の例は、炭酸ナトリウムおよびカリウム、水酸化ナトリウムおよびカリウム、アンモニア、トリエチルアミン、トリエタノールアミン等である。

本発明のさらなる態様は、実施例のみおよび添付の合成スキームを参照しながら与えられた以下の記載から明らかになる。

例えば、Ｘが−ＣＯＮＨ−である場合の式（Ｉ）の化合物は、スキーム１に記載された方法によって合成され得る。ここで、Ｚは、式（Ｉ）について定義された通りである。

下記表１ａおよび２ａは、一般式（Ｉ）および（ＩＩ）の範囲内であり、かつ、これを代表するものであり、かつ、本発明の方法によって合成することができるものの物理データを提示する。

（ここで、Ｙは、

を示してよい）

（注記）
既知化合物の参考値
１．Khan AH，Ross WCJ．Tumor-groth inhibitory nitrophenylaziridine and related compounds．Structure-activity relations．II．Chem.-Biol.Int．，1971，4，11-22．
２．ニュージーランド特許第２４０７８５号
３．同時係属中ニュージーランド出願第５２１８５１号
４．Wilson WR，Pullen SM，Hogg A，Helsby NA，Hicks KO，Denny WA．Quantitation of bystander effects in nitroreductase suicide gene therapy using three-dimensional cell cultures． Cancer Res．，2002，62，1425-1432．
表１ａの化合物は、スキーム２ａ−２ｋに説明され、下記実施例１〜２０に例示される一般法によって合成され得る。

ここで、Ｙは、

を示してもよい。

表１ｂの化合物は、スキーム３に説明された一般法によって合成され、下記実施例２６−３９に例示され得る。

スキーム３において、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＲは、上記式（Ｉ）および（ＩＩ）について特定されたものと同一である。

（実施例）
本発明および本発明を実施するための最良の形態は、以下の実施例１〜２５（アルコール）および実施例２６〜３９（リン酸エステル）によって例示される。

（実施例１（スキーム２ａ）：Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−３））
５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−２，４−ジニトロ安息香酸［Ｐａｌｍｅｒｅｔａｌ．，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，１９９４，３７，２１７５］（１）（２．５０ｇ，７．１ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（２滴）含有ＳＯＣｌ_２（２０ｍｌ）懸濁液が還流下に１時間にわたり加熱され、次いで、減圧下に乾固するまで濃縮され、ベンゼンとともに再蒸発させられた。得られた粗塩化ベンゾイルは、Ｍｅ_２ＣＯ（５０ｍｌ）中に溶解させられ、冷却された（−５℃）溶液が３−アミノ−１−プロパノール（１．０９ｇ，１４．５ｍｍｏｌ）の冷水溶液（２５ｍＬ）により処理された。反応混合物は室温で５分にわたり振とうされ、次いで、水（２５ｍｌ）により希釈され、半分の容積に濃縮され、ＣＨ_２Ｃｌ_２により抽出された（２回）。有機抽出層は、０．１ＮＨＣｌおよび水により洗浄され、次いで、仕上げ処理が行われ、固体を与えた。この固体は、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃにより溶離するクロマトグラフに付され、ＩＩａ−３（２．３７ｇ，８２％）が与えられた：mp (EtOAc/i-Pr₂O) 90-91℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ8.63 (t, J = 5.6 Hz, 1 H, CONH), 8.53 (s, 1 H, H-3), 7.42 (s, 1 H, H-6), 4.46 (t, J = 5.1 Hz, 1 H, OH), 3.82 (t, J = 5.9 Hz, 4 H, N(CH₂CH₂Cl)₂), 3.68 (t, J= 5.9 Hz, 4 H, N (CH₂CH₂Cl)₂), 3.49 (q, J = 6.0 Hz, 2 H, CH₂OH), 3.29 (q（一部不明瞭), J = 5.9 Hz, 2 H, CONHCH₂), 1.68 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H, CH₂CH₂CH₂). 元素分析 (C₁₄H₁₈Cl₂N₄O₆) C, H, N, Cl.
（実施例２（スキーム２ａ）：Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−ｂ））
粉末状５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロ安息香酸（２）（１．１０ｇ，２．４９ｍｍｏｌ）のベンゼン懸濁液（１７０ｍＬ）が２０℃で臭化オキサリル（１．１０ｍＬ，１１．７ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（２滴）により処理された。混合物は、２０℃で２時間にわたり攪拌され、次いで、減圧下に濃縮され、高真空下ベンゼンの存在下に乾固するまで再蒸発させられた。得られた酸ブロミドは、Ｍｅ_２ＣＯ（２０ｍＬ）中に溶解させられ、溶液は、−５℃で３−アミノ−１−プロパノール（０．３９ｇ，５．１９ｍｍｏｌ）の冷水溶液（１０ｍＬ）により処理された。混合物は、室温で５分にわたり振とうされ、次いで、水により希釈され、ＥｔＯＡｃにより抽出された（２回）。有機抽出層は仕上げ処理がなされ、得られた残渣は、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃにより溶離するクロマトグラフ処理に付され、ＩＩａ−８が与えられた（１．０６ｇ，８５％）。：mp (EtOAc/i-Pr₂O) 85-86 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.64 (t, J = 5.6 Hz, 1 H, CONH), 8.53 (s, 1 H, H-3), 7.41 (s, 1 H, H-6), 3.77-3.64 (m, 8 H, N(CH₂CH₂Cl)₂), 4.46 (br s, 1 H, OH), 3.49 (t, J = 6.3 Hz, 2 H, CH₂OH), 3.33-3.25 (m,（一部不明瞭), 2 H, CONHCH₂), 1.68 (pent, J = 6.72 Hz, 2 H, CH₂CH₂CH₂). 元素分析 (C₁₄H₁₈Br₂N₄O₆) C, H, N, Br.
（実施例３（スキーム２ａ）：Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−７））
酸ブロミド（２）の２−アミノエタノールとの類似の反応により、ＩＩａ−７が与えられた（０．７８ｇ，４６％）。：mp (MeOH/EtOAc/石油エーテル) 151-152 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.73 (t, J = 5.7 Hz, 1 H, CONH), 8.53 (s, 1 H, H-3), 7.43 (s, 1 H, H-6), 4.76 (t, J = 5.6 Hz, 1 H, OH), 3.77-3.64 (m, 8 H, N(CH₂CH₂Br)₂), 3.53 (q, J = 6.0 Hz, 2 H, CH₂OH), 3.31 (q（一部不明瞭）, J = 6.1 Hz, 2 H, CONHCH₂). 元素分析 (C₁₃H₁₆Br₂N₄O₆) C, H, N, Br.
（実施例４（スキーム２ａ）：Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−９））
冷Ｍｅ_２ＣＯ中での酸ブロミド（２）の４−アミノ−１−ブタノールとの類似の反応、続くシリカゲルを用いたクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃよる溶離により、ＩＩａ−９が黄色固体として与えられた（６９％）。：mp (EtOAc/iPr₂O) 123-124℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ8.62 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 4.39 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 3.78-3.64 (m, 8 H), 3.47-3.40 (m, 2 H), 3.27-3.20 (m, 2 H), 1,61-1.44 (m, 4 H). 元素分析. (C₁₅H₂₀Br₂N₄O₆) C, H, N, Br.
（実施例５（スキーム２ａ）：Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−１０））
冷Ｍｅ_２ＣＯ中での酸ブロミド（２）の５−アミノ−１−ペンタノールとの類似の反応、続くシリカゲルを用いたクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃによる溶離により、ＩＩａ−１０が黄色発泡状物として与えられた（６６％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.62 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 4.34 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 3.79-3.64 (m, 8 H), 3.44-3.37 (m, 2 H), 3.26-3.18 (m, 2 H), 1.59-1.29 (m, 4 H). HRMS (FAB) C₁₆H₂₃ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/zについての計算値524.9984,実測値524.9964
（実施例６（スキーム２ａ）：Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−１１））
冷Ｍｅ_２ＣＯ中での酸ブロミド（２）の６−アミノ−１−ヘキサノールとの類似の反応、続く、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃによる溶離により、ＩＩａ−１１が黄色発泡状物として与えられた（７２％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.61 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 4.31 (t, J = 5.2 Hz, 1 H), 3.79-3.64 (m, 8 H), 3.43-3.36 (m, 2 H), 3.27-3.19 (m, 2 H), 1.58-1.26 (m, 4 H). HRMS (FAB) C₁₇H₂₅ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/zについての計算値539.0141,実測値 539.0137.
（実施例７（スキーム２ｂ）：５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロベンズアミド（ＩＩａ−７ｓ））
５−フルオロ−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロ安息香酸［Atwell et al., ACDD, 1996, 11, 553］（３）が、過剰量のＳＯＣｌ_２／触媒量のＤＭＦ中で加熱され、これにより、酸クロリドが得られた。これは、無水ＭｅＯＨと反応させられ、５−フルオロ−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロ安息香酸メチル（４）が与えられた。：mp (EtOAc/ヘキサン) 134-135℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.49 (d, J = 5.9 Hz, 1 H), 8.14 (d, J = 9.3 Hz, 1 H), 3.92 (s, 3 H), 3.46 (s, 3 H). 元素分析 (C₉H₈FNO₆S) C, H, N.
（４）（１．４８ｇ，５．３４ｍｍｏｌ）とジエタノールアミン（１．４０ｇ，１３．３ｍｍｏｌ）のＤＭＡ（６ｍＬ）中の混合物が３０℃で１時間にわたり攪拌され、次いで、ＥｔＯＡｃ（６０ｍＬ）により希釈された。溶液は、飽和食塩水により洗浄され（２回）、減圧下に濃縮された。シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨによる溶離するクロマトグラフィー、続く、ＥｔＯＡｃ／ｉＰｒ_２Ｏからの再結晶によって残渣が精製され、５−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロ安息香酸メチル（５）が与えられた（１．４１ｇ，７３％）。：mp 99-100℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.56 (s, 1 H), 7.73 (s, 1 H), 4.62 (t, J = 4.9 Hz, 2 H), 3.89 (s, 3 H), 3.59-3.49 (m, 8 H), 3.45 (s, 3 H). 元素分析 (C₁₃H₁₈N₂O₈S) C, H, N.
（５）（１．４８ｇ，４．０８）の無水ピリジン溶液（１５ｍＬ）が、０℃でＭｓＣｌ（０．８０ｍＬ，１０．３ｍｍｏｌ）により滴下処理された。反応溶液が０℃で２時間にわたり攪拌され、次いで、１０％ＮａＢｒ水溶液に注がれた。得られた粗ジメシレートが集められ、水により十分に洗浄され、乾燥させられ、ＤＭＦ（１５ｍＬ）中に溶解させられ、７０℃で１．５時間にわたりＮａＢｒ（２１．６ｇ，２５ｍｍｏｌ）と共に攪拌された。冷却された混合物が水に注がれ、得られた固体は、シリカゲルを用い、ＣＨ_２Ｃｌ_２により溶離するクロマトグラフィーによって精製され、次いで、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ｉＰｒ_２Ｏからの再結晶により、５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロ安息香酸メチル（６）が与えられた（１．４７ｇ，７４％）。：mp 161-162 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.58 (s, 1 H), 7.94 (s, 1 H), 3.90 (s, 3 H), 3.82 (t, J = 7.0 Hz, 4 H), 3.63 (t, J = 6.9 Hz, 4 H), 3.48 (s, 3 H). 元素分析. (C₁₃H₁₆Br₂N₂O₆S) C, H, N.
（６）（１．００ｇ，２．０５ｍｍｏｌ）のジオキサン／ＭｅＯＨ溶液（１：１，２０ｍＬ）が、１０℃で４ＮＫＯＨ水溶液（５ｍＬ）により処理され、１０℃で４５分にわたり攪拌された。混合物が、１ＮＨＢｒ水溶液によりｐＨ２に酸性にされ、減圧下に小容積に濃縮され、次いで、飽和ＮａＢｒ水溶液（２０ｍＬ）により希釈された。得られた半固体が単離され、ＭｅＯＨ／Ｈ_２Ｏから２回結晶化され、５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−４−（メチルスルホニル）−２−ニトロ安息香酸（７）が与えられた（０．７０ｇ，７２％）。：mp 174-176 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.50 (s, 1 H), 7.88 (s, 1 H), 3.79 (t, J = 7.0 Hz, 4 H), 3.62 (t, J = 7.0 Hz, 4 H), 3.48 (s, 3 H). 元素分析 (C₁₂H₁₄Br₂N₂O₆S) C, H, N.
（７）（２６０ｍｍｇ，０．５５ｍｍｏｌ）の無水ベンゼン（５０ｍＬ）中の最終分離懸濁液が、（ＣＯＢｒ）_２（２．１３ｍＬ，０．２０ｍｍｏｌ）および触媒量のＤＭＦにより処理された。混合液は、２時間にわたり攪拌され、次いで、減圧下に乾固するまで濃縮され、高減圧下にベンゼンと共に再蒸発させられた。得られた粗酸ブロミドは、Ｍｅ_２ＣＯ（１０ｍＬ）中に溶解させられ、−５℃で２−アミノエタノール（１０１ｍｇ，１．６５ｍｍｏｌ）の冷水溶液（５ｍＬ）により処理された。混合液は、０℃で５分にわたり攪拌され、次いで、１ＮＨＢｒ水溶液によりｐＨ４に酸性にされ、減圧下に濃縮された。残渣は、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡＣにより溶離するクロマトグラフに付され、ＩＩａ−７ｓが与えられた（２２２ｍｇ，７８％）。：mp (EtOAc/iPr₂O) 126-127 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.75 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.51 (s, 1 h), 7.68 (s, 1 H), 4.79 (t, J = 5.4 Hz, 1 H), 3.76 (t, J = 7.1 Hz, 4 H), 3.62 (t, J = 7.0 Hz, 4 H), 3.54 (q, J = 5.9 Hz, 2 H), 3.48 (s, 3 H), 3.31 (D₂O 交換後, t, J = 6.0 Hz, 2 H). HRMS (FAB) C₁₄H₂₀ ⁷⁹Br₂N₃O₆S (MH⁺) m/zについての計算値515.9440;実測値515.9425.
（実施例８（スキーム２ｃ）：メタンスルホン酸２［（２−ブロモエチル）−５−［［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル］−２，４−ジニトロアニリノ］エチル（ＩＩａ−１３）および５−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−２，４−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−１４））
５−（ビス｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝アミノ）−２，４−ジニトロ安息香酸［この化合物を合成する方法は、同時係属中のＮＺ出願第５２１８５１号に開示されている］（９）が、過剰量のＳＯＣｌ_２（６０ｍＬ）および触媒量のＤＭＦ中、還元下に１時間にわたり加熱された。減圧留去、続く、ベンゼン共沸により、粗酸クロリドが与えられた。これは、無水Ｍｅ_２ＣＯ中に溶解させられ、０℃で、３−アミノ−プロパノールにより５分にわたり処理された。混合液は、０．２ＮＨＣｌによりｐＨ２−３に酸性にされ、半分の容積に濃縮され、次いで、固体のＮａＢｒが加えられ、続いて、ＥｔＯＡｃにより抽出された（２回）。留去およびその残渣の、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９／１）により溶離するクロマトグラフィーにより、メタンスルホン酸２−（５−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（８）が黄色ガム状物として与えられた（６８％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.54 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 4.43 (t, J = 5.1 Hz, 1 H), 4.33 (t, J = 5.2 Hz, 4 H), 3.69 (t, J = 5.2 Hz, 4 H), 3.5 7(q, J = 5.9 Hz, 2 H), 3.26 (D₂O交換後, t, J = 7.0 Hz, 2 H), 3.12 (s, 6 H), 1.66 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H). HRMS (FAB) C₁₆H₂₅N₄O₁₂Sについての計算値(MH⁺) m/z 529.0910;実測値 529.0904.
（８）のＤＭＦ溶液が、ＬｉＢｒ（１．４当量）により処理され、上記のように仕上げ処理がなされ、生成物は、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーに付された。ＥｔＯＡｃによる溶離により、少量のジブロモマスタードが与えられ、にＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１９／１）よる溶離により、ＩＩａ−１３が黄色ガム状物として与えられた（３１％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.60 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 7.44 (s, 1 H), 4.45 (t, J = 5.2 Hz, 1 H), 4.33 (t, J = 5.1 Hz, 2 H), 3.74 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.72-3.66 (m, 4 H), 3.49 (q, J = 5.9 Hz, 2 H), 3.27 (D₂O 交換後, t, J = 7.0 Hz, 2 H), 3.14 (s, 3 H), 1.68 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H). HRMS (FAB) C₁₅H₂₂ ⁷⁹BrN₄O₉S (MH⁺) m/zについての計算値 515.0270;実測値 515.0283.
酸クロリド（９）の２−アミノエタノールとの類似の処理（（ＣＯＣｌ）_２／ＤＭＦによる活性化）により、メタンスルホン酸２−（５−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（１０）が与えられた。（１０）（１．４２ｇ，２．７６ｍｍｏｌ）およびＮａＩ（３．３ｇ，２２ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮ（４５ｍＬ）中の攪拌された混合液が１時間にわたり還流加熱され、次いで、減圧下に濃縮された。残渣が、ＥｔＯＡｃおよび水の間に分配され、有機層は、水により洗浄され、溶媒留去された。残渣は、シリカゲルを用い、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（１／４）により溶離するクロマトグラフィーに付され、続いて、ＭｅＯＨ／ＥｔＯＡｃ／ｉ−Ｐｒ_２Ｏからの再結晶が行われ、ＩＩａ−１４が与えられた（２．９ｇ，８１％）。：mp 142-143 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.73 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 8.53 (s, 1 H), 7.38 (s, 1 H), 4.76 (t, J = 5.5 Hz, 1 H), 3.68 (t, J = 6.9 Hz, 4 H), 3.57-3.49 (m, 2 H), 3.39 (t, J = 6.9 Hz, 4 H), 3.34-3.26 (m,（一部不明瞭), 2 H).元素分析 (C₁₃H₁₆I₂N₄O₆) C, H, N.
（実施例９：２−（アジリジン−１−イル）−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩａ−１））
２−クロロ−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１６）［合成法については、下記実施例１４を参照］（１１８ｍｇ，０．３４ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（２００ｍｇ）のＥｔＯＡＣ溶液（２００ｍＬ）が、アジリジン（１００ｍｇ）により、室温で３時間にわたり処理された。混合物は、ＥｔＯＡｃにより希釈され、水により３回洗浄され、乾燥後に、減圧下に約２０ｍＬまで濃縮され、黄色固体が集められ、１０１ｍｇの生成物が与えられた（８４％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.63 (m, 1 H), 8.29 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.31 (m, 1 H), 3.39 (m, 2 H), 3.25 (m, 2 H), 2.37 (s, 4 H), 1.56 (m, 2 H), 1.43 (m, 2 H), 1.33 (m, 4 H). 元素分析. (C₁₅H₂₀N₄O₆) C, H, N.
（実施例１０（スキーム２ｄ）：２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−２）および２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−７））
２−クロロ−３，５−ジニトロ安息香酸（１）（１８ｇ，８１ｍｍｏｌ）が、１滴のＤＭＦを含むＳＯＣｌ_２（２５０ｍＬ）により処理され、還流下に６時間にわたり加熱された。試薬の留去に続いてベンゼンによる共沸を行い、粗酸クロリドが与えられ、これは、ＴＨＦ（２００ｍＬ）中に溶解させられ、２５ｍＬの２−アミノエタノールから調製されたＴＨＦ溶液（４００ｍＬ）に滴下され、ドライアイス−アセトン浴により冷却された。２０分にわたり攪拌した後、反応混合物は、１ＮＨＣｌによりｐＨ４−５の酸性にされ、大部分の溶媒が留去され、残渣は、水（２５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（３００ｍＬ）間に分配された。水相がＥｔＯＡＣにより抽出され、合わされた有機相は、飽和ＮａＨＣＯ_３、１ＮＨＣｌおよび飽和食塩水によりそれぞれ洗浄され、次いで、濃縮され、２−クロロ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（２）が白色固体として与えられる（２１．３４ｇ，９１％）。：mp (EtOAc) 159-160℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.99 (d, J = 2.6 Hz, 1 H, H-4), 8.86 (m, 1 H, CONH), 8.56 (d, J = 2.6 Hz, 1 H, H-6), 4.83 (m, 1 H, OH), 3.54 (m, 4 H). 元素分析 (C₉H₈ClN₃O₆) C, H, N.
（１２）（１．５２ｇ，５．３ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（４ｍＬ）のｐ−ジオキサン溶液（６０ｍＬ）が、Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（３．０ｇ，１６．５ｍｍｏｌ）により５０℃で２４時間にわたり処理された。混合液は水に注がれ、ＥｔＯＡｃにより抽出され、粗生成物が与えられ、これは、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーに付された。ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（４／１）による溶離および減圧下での溶出液の濃縮により、油状の残渣が与えられ、これは、最少量のＥｔＯＡｃ中に溶解させられた。初期の混濁まで石油エーテルがゆっくりと加えられ、溶液は、終夜放置され、２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩＩｂ−２）の沈殿が黄色結晶として生じた（２．０７ｇ，１００％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 109-111℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.73 (d, J = 2.6 Hz, 1 H, H-4), 8.72 (m, 1 H, CONH), 8.34 (d, J = 2.6 Hz, 1 H, H-6), 4.83 (m, 1 H, OH), 3.72 (m, 4 H, 2xCH₂Cl), 3.55 (m, 2 H), 3.42 (m, 4 H, 2xCH₂N), 3.34 (m, 2 H);¹³C NMR δ 165.3, 145.8, 145.3, 141.0, 136.3, 127.5, 122.1, 59.1, 54.1, 42.1, 41.5. HRMS (FAB) [MH⁺] C₁₃H₁₇ ³⁵Cl₂N₄O₆m/zについての計算値395.0525. 実測値; 395.0525
ＩＩｂ−２（１．２０ｇ，３．０ｍｍｏｌ）およびＬｉＢｒ（５．０ｇ，５８ｍｍｏｌ）の３−メチル−２−ブタノン溶液（２０ｍＬ）が、還流下に６時間にわたり加熱され、次いで、冷却され、水に注がれた。ＥｔＯＡｃによる抽出により、粗生成物が与えられ（＜９５％純度）、これは、３−メチル−２−ブタノン中でＬｉＢｒ（５．０ｇ，５８ｍｍｏｌ）によりさらに４時間にわたり再処理され、次いで、仕上げ処理がなされ、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から１／０）により溶離するクロマトグラフィーに付され、ＩＩｂ−７が与えられた（１．３９ｇ，９５％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 105-108 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-4), 8.73 (m, 1 H, CONH), 8.34 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-6), 4.83 (m, 1 H, OH), 3.59-3.29 (m, 12 H);¹³C NMR δ 165.3, 145.4, 145.3, 141.1, 136.5, 127.4, 122.1, 59.3, 53.9, 42.1, 30.0. HRMS (FAB) C₁₃H₁₇ ⁷⁹Br₂N₄O₆[M+H⁺] m/zについての計算値482.9515. 実測値; 482.9492. 元素分析(C₁₃H₁₆Br₂N₄O₆) H, N, Br; C: 実測値, 32.9; 計算値 32.3%
（実施例１１（スキーム２ｄ）：２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−３）および２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−８））
上記に記載されたようなＭｅ_２ＣＯ（１２０ｍＬ）中０℃での酸クロリド（１１）（１７ｇ）の３−アミノプロパノール（７．５ｇ）との反応により、２−クロロ−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１３）が与えられた（５．０６ｇ，２６％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 120-121 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.99 (d, J = 2.6 Hz, 1 H, H-4), 8.79 (m, 1 H, CONH), 8.51 (d, J = 2.6 Hz, 1 H, H-6), 4.50 (m, 1 H, OH), 3.49 (m, 2 H), 3.32 (m, 2 H), 1.70 (m, 2 H). 元素分析 (C₁₀H₁₀ClN₃O₆) C, H, N.
（１３）（１．３９ｇ，４．５８ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（４ｍＬ）のｐ−ジオキサン溶液（６０ｍＬ）が、５０℃で２４時間にわたりＮ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（２．９ｇ，１６．０ｍｍｏｌ）により処理された。上記に記載されたような仕上げ処理がなされ、ＩＩｂ−３が与えられた（１．８４ｇ，１００％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 89-91℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-4), 8.71 (m, 1 H, CONH), 8.30 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-6), 4.52 (m, 1 H, OH), 3.71 (m, 4 H, 2xCH₂Cl), 3.50 (m, 2 H), 3.42 (m, 4 H, 2xCH₂N), 3.32 (m, 2 H), 1.71 (m, 2 H);¹³C NMRδ 165.1, 145.7, 145.5, 141.0, 136.4, 127.3, 122.1, 58.4, 54.1, 41.5, 36.7, 31.8. HRMS (FAB) C₁₄H₁₉ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値 409.0682. 実測値; 409.0678.
上記に記載されたような３−メチル−２−ブタノン中でのＩＩｂ−３のＬｉＢｒによる２回の処理により、ＩＩｂ−８が与えられた（７４％収率）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 89-94℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-4), 8.72 (m, 1 H, CONH), 8.30 (d, J = 2.7 Hz, 1H, H-6), 3.77-3.44 (m, 12 H), 1.70 (m, 2 H);¹³C NMR δ 165.1, 145.5, 145.3, 141.2, 136.5, 127.3, 122.1, 58.4, 54.0, 36.7, 31.8, 29.9. HRMS (FAB) C₁₄H₁₉ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値496.9671. 実測値; 496.9658.
（実施例１２（スキーム２ｄ）：２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−４）および２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−９））
上記のような酸クロリド（１１）（２．６５ｇ，１０ｍｍｏｌ）の４−アミノブタノール（１．９ｇ）との反応、続く、１ＮＨＣｌによるｐＨ４−５への酸性化および溶媒の大部分の留去により、残渣が与えられる。これは、水（５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）間に分配された。水相がＥｔＯＡｃにより抽出され、合わされた有機相は、飽和ＮａＨＣＯ_３水、１ＮＨＣｌおよび飽和食塩水によりそれぞれ洗浄され、次いで、濃縮され、２−クロロ−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１４）が与えられた（１．１１ｇ，３５％）。：mp (EtOAc) 121-124 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.98 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.79 (m, 1 H), 8.52 (d, J= 2.7 Hz, 1H), 4.43 (m, 1 H), 3.43 (m, 2H), 3.26 (m, 2 H), 1.54 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 162.6, 148.4, 145.9, 140.4, 128.2, 125.8, 120.4, 60.2, 39.1, 29.8, 25.3. 元素分析. (C₁₁H₁₂ClN₃O₆) C, H, N.
（１４）（０．７５ｇ，２．３ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（２ｍＬ）のｐ−ジオキサン溶液（３０ｍＬ）が、Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（１．５ｇ，８．０ｍｍｏｌ）により５０℃で２４時間にわたり処理された。混合物は、水に注がれ、ＥｔＯＡｃにより抽出され、粗生成物が与えられ、これは、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーに付された。ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（４／１）による溶離によりＩＩｂ−４が黄色発泡状物として与えられた（０．９９ｇ，１００％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.71 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.69 (m, 1 H), 8.27 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.37 (m, 1 H), 3.70 (m, 4 H), 3.38 (m, 6 H), 3.25 (m, 2 H), 1.56 (m, 2 H), 1.47 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 165.0, 145.7, 145.5, 141.0, 136.4, 127.2, 122.0, 60.2, 54.2, 41.5, 39.2, 29.8, 25.2. HRMS (FAB) C₁₅H₂₁ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H⁺] m/zについての計算値423.0838. 実測値; 423.0847.
ＩＩｂ−４（０．９６ｇ，３．０４ｍｍｏｌ）およびＬｉＢｒ（５ｇ）の３−メチル−２−ブタノン溶液（１５ｍＬ）が、還流下に６時間にわたり加熱され、次いで、冷却され、水に注がれた。ＥｔＯＡｃによる抽出により、粗生成物が与えられ（＜９５％純度）、これは、３−メチル−２−ブタノン中でＬｉＢｒ（５ｇ）によりさらに４時間にわたり再処理され、次いで、仕上げ処理がなされ、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から３／１）により溶離するクロマトグラフィーに付され、ＩＩｂ−９が黄色発泡状物として与えられた（１．０１ｇ，８７％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.72 (m, 1 H), 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.60-3.26 (m, 12 H), 1.58 (m, 2 H), 1.49 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 165.0, 145.6, 145.2, 141.2, 136.5, 127.2, 122.0, 60.2, 54.1, 39.2, 29.9, 29.8, 25.2. HRMS (FAB) C₁₅H₂₁ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値510.9828. 実測値; 510.9832
（実施例１３（スキーム２ｄ）：２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−５）および２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−１０））
上記のような酸クロリド（１１）の５−アミノペンタノールとの類似の反応により、２−クロロ−Ｎ−（５−ヒドロキシペンチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１５）が与えられた（１．３ｇ；３９％）。：mp (EtOAc) 105-108℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.98 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.79 (m, 1 H), 8.50 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 4.35 (m, 1 H), 3.39 (m, 2 H), 3.26 (m, 2 H), 1.54 (m, 2 H), 1.44 (m, 2 H), 1.36 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 162.7, 148.4, 145.9, 140.4, 128.2, 125.8, 120.4, 60.5, 39.1, 32.0, 28.4, 22.8. 元素分析 (C₁₂H₁₄ClN₃O₆) C, H, N.
（１５）（０．６３ｇ，２．３ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（２ｍＬ）のｐ−ジオキサン溶液（３０ｍＬ）が、Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（１．５ｇ，８．０ｍｍｏｌ）により５０℃で２４時間にわたり処理された。混合物は水に注がれ、ＥｔＯＡｃにより抽出され、粗生成物が与えられ、これは、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーに付された。ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（４／１）による溶離により、ＩＩｂ−５が黄色発泡状物として与えられた（０．８２ｇ，１００％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.73 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.69 (m, 1 H), 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.32 (m, 1 H), 3.70 (m, 4 H), 3.40 (m, 6 H), 3.25 (m, 2 H), 1.55 (m, 2 H), 1.47 (m, 2 H), 1.37 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 165.0, 145.7, 145.5, 141.0, 136.4, 127.2, 122.0, 60.5, 54.2, 41.5, 39.3, 32.0, 28.3, 22.9. HRMS (FAB) C₁₆H₂₃ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H⁺] m/zについての計算値437.0995. 実測値; 437.0991.
ＩＩｂ−５（１．３ｇ）のＬｉＢｒとの類似の反応により、ＩＩｂ−１０が黄色発泡状物として与えられた（１．３５ｇ，８６％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.71 (m, 1 H), 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.60-3.26 (m, 12 H), 1.55 (m, 2 H), 1.48 (m, 2 H), 1.37 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 165.0, 145.6, 145.2, 141.2, 136.5, 127.2, 122.0, 60.5, 54.1, 39.3, 32.0, 29.8, 28.4, 22.9. HRMS (FAB) C₁₆H₂₃ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値524.9984. 実測値; 524.9975.
（実施例１４（スキーム２ｄ）：２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−６）および２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−１１））
酸クロリド（１１）の６−アミノヘキサノールとの上記と類似の反応により、２−クロロ−Ｎ−（６−ヒドロキシヘキシル）−３，５−ジニトロベンズアミド（１６）が与えられた（０．９ｇ，２６％）。：mp (EtOAc) 88-91℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.98 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 8.78 (m, 1 H), 8.49 (d, J = 2.7 Hz, 1 H), 4.32 (m, 1 H), 3.39 (m, 2H), 3.26 (m, 2 H), 1.54 (m, 2 H), 1.44 (m, 2 H), 1.34 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 162.7, 148.4, 145.9, 140.4, 128.2, 125.8, 120.4, 60.5, 39.1, 32.3, 28.6, 26.2, 25.1.元素分析 (C₁₃H₁₆ClN₃O₆) C, H, N.
（１６）（０．６７ｇ，２．５ｍｍｏｌ）およびＥｔ_３Ｎ（２ｍＬ）のｐ−ジオキサン溶液（３０ｍＬ）が、Ｎ，Ｎ−ビス（２−クロロエチル）アミン塩酸塩（１．５ｇ，８．０ｍｍｏｌ）により５０℃で２４時間にわたり処理された。混合物は水に注がれ、ＥｔＯＡｃにより抽出され、粗生成物が与えられ、これは、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーに付された。ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（４／１）による溶離により、ＩＩｂ−６が黄色発泡状物として与えられた（０．８７ｇ，１００％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.73 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.70 (m, 1 H), 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.31 (m, 1 H), 3.70 (m, 4 H), 3.38 (m, 6 H), 3.25 (m, 2 H), 1.54 (m, 2 H), 1.40 (m, 2 H), 1.32 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 165.0, 145.7, 145.6, 141.0, 136.4, 127.2, 122.0, 60.5, 54.2, 41.5, 39.2, 32.3, 28.5, 26.3, 25.1. HRMS (FAB) C₁₇H₂₅ ³⁵Cl₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値 451.1151. 実測値; 451.1154.
ＩＩＢ−６（０．９７ｇ）のＬｉＢｒとの類似の反応により、ＩＩｂ−１１が黄色発泡状物として与えられた（０．９６ｇ，８１％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.70 (m, 1 H), 8.28 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.60-3.26 (m, 12 H), 1.54 (m, 2 H), 1.43 (m, 2 H), 1.32 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 165.0, 145.6, 145.2, 141.2, 136.5, 127.2, 122.0, 60.6, 54.1, 39.2, 32.4, 29.9, 28.5, 26.3, 25.1. HRMS (FAB) C₁₇H₂₅ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値539.0141. 実測値; 539.0135.
（実施例１５（スキーム２ｅ）：２−［ビス（２−ブロモプロピル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−７ａ））
２−クロロ−３，５−ジニトロ−Ｎ−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］ベンズアミド（１７）（１．０２ｇ）［合成方法については、同時係属中のＮＺ出願第５２１８５１号を参照］のジイソプロパノールアミン（０．８ｇ）との上記のような反応により、２−［ビス（２−ヒドロキシプロパニル）アミノ］−３，５−ジニトロ−Ｎ−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］ベンズアミド（１８）が黄色発泡状物として与えられた（１．２９ｇ，１００％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 9.22 (br, 1H), 8.66 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.29(d, J= 2.8 Hz, 1H), 4.99 (m, 1 H), 4.85 (br, 1 H), 4.62 (br, 1 H), 3.94 (m, 2 H), 3.77 (m, 2 H), 3.53 (m, 4H), 3.26 (m, 2 H), 1.48 (m, 10 H), 0.98 (m, 6 H); ¹³C NMR δ 166.5, 147.8, 142.4, 138.2, 132.6, 128.8, 123.8, 98.1, 64.8, 63.5, 61.5, 60.1, 30.1, 25.0, 20.5, 20.2, 19.1. HRMS (FAB) C₂₀H₃₁N₄O₉ [M+H⁺] m/z についての計算値 471.2091. 実測値; 471.2089.
（１８）のＭｓＣｌとの上記のような反応により、メタンスルホン酸１−メチル−２−［｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］プロピル｝−２，４−ジニトロ−６−（｛［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）エチル］アミノ｝カルボニル）アニリノ］エチル（１９）が黄色発泡状物として与えられた（２．５２ｇ，１００％）。これは、次の工程のために直接的に用いられた。

（１９）（２．５２ｇ，４．０３ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１５０ｍＬ）が、１ＮＨＣｌ（１００ｍＬ）により処理され、溶液は、２０℃で１時間にわたり攪拌され、次いで、水（１００ｍＬ）により希釈され、飽和ＮａＨＣＯ_３水により中和され、ＥｔＯＡｃにより抽出された（３×８０ｍＬ）。合わされた有機相は、飽和食塩水により洗浄され、乾燥させられ、溶媒が留去され、残渣が、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１００／１）により溶離するクロマトグラフィーによって精製され、メタンスルホン酸２−（２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］プロピル｝−４，６−ジニトロアニリノ）−１−メチルエチル（２０）が黄色発泡状物として与えられた（０．８０ｇ，３７％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.94 (m, 1 H), 8.72 (m, 1 H), 8.35 (m, 1 H), 4.92 (m, 2 H), 3.56 (m, 2 H), 3.30 (m, 6 H), 3.16 (s, 6 H), 1.32 (m, 6 H); ¹³C NMR δ 165.9, 145.8, 143.4, 139.4, 133.6, 128.0, 123.1, 76.3, 59.2, 57.3, 42.2, 37.7, 18.6. HRMS (FAB) C₁₇H₂₇N₄O₁₂S₂ [M+H⁺] m/z についての計算値543.1067. 実測値; 543.1074.
ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中での（２０）（０．５２ｇ，０．９６ｍｍｏｌ）のＬｉＢｒ（０．５ｇ，５．８ｍｍｏｌ）との６０℃での３時間にわたる処理、およびシリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（２／１から１／０）により溶離する生成物のクロマトグラフィーにより、ＩＩｂ−７ａが黄色固体として与えられた（０．３１ｇ，６２％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 127-130℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.91 (m, 1H, CONH), 8.70 (d, J = 2.8 Hz, 1H, H-4), 8.32 (d, J =2.8 Hz, 1H, H-6), 4.80 (m, 1 H), 4.42 (m, 2 H), 3.55 (m, 4 H), 1.62 (m, 6 H); ¹³C NMR δ 165.8, 144.8, 143.5, 139.6, 133.6, 128.0, 122.9, 60.6, 59.2, 47.9, 42.2, 23.4.元素分析(C₁₅H₂₀Br₂N₄O₆) C, H, N
（実施例１６（スキーム２ｆ）：メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｂ−１３））
（１３）（１．２２ｇ，４．０ｍｍｏｌ）のＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（５０ｍＬ）が、氷浴中で冷却され、３，４−ジヒドロ−２Ｈ−ピラン（１．０ｍＬ）およびｐ−トルエンスルホン酸（０．１）が加えられた。反応混合物は、２時間にわたり攪拌され、次いで、減圧下に濃縮された。シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／２から２／１）により溶離する、残渣のクロマトグラフィーにより、２−クロロ−３，５−ジニトロ−Ｎ−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロピル］ベンズアミド（２１）が淡黄色油状物として与えられた（１．４５ｇ，９４％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.99 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-4), 8.81 (m, 1 H, CONH), 8.51 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-6), 4.57 (m, 1 H), 3.72 (m, 2 H), 3.46-3.25 (m, 4 H), 1.82-1.44 (m, 8 H). ¹³C NMR δ 162.7, 148.4, 145.9, 140.3, 128.2, 125.8, 120.5, 98.0, 64.2, 61.3, 36.5, 30.2, 28.9, 24.9, 19.1. HRMS (FAB) C₁₅H₁₉ ³⁵ClIN₃O₇ [M+H⁺] m/z についての計算値388.0912. 実測値; 388.0915.
（２１）（１．４５ｇ，３．７５ｍｍｏｌ）のジエタノールアミン（１．６７ｇ）との上記のような反応により、２−［ビス（２−ヒドロキシエチル）アミノ］−３，５−ジニトロ−Ｎ−［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロピル］ベンズアミド（２２）が黄色発泡状物として与えられた（１．６２ｇ，９５％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.96 (m, 1H, CONH), 8.66 (d, J = 2.8 Hz, 1H, H-4), 8.31 (d, J =2.8 Hz, 1H, H-6), 4.95 (m, 2H), 4.56 (m, 1H), 3.79-3.16 (m, 14H), 1.80-1.45 (m, 8 H); ¹³C NMR δ 166.2, 148.1, 143.6, 139.3, 133.8, 128.9, 123.8, 98.5, 64.8, 61.7, 58.5, 54.6, 37.3, 30.6, 29.2, 25.4, 19.6. HRMS (FAB) C₁₉H₂₉N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値457.1935. 実測値; 457.1939
（２２）（１．６２ｇ，３．５５ｍｍｏｌ）のＭｓＣｌ（２ｍＬ）との上記のような反応により、メタンスルホン酸２−［｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−４，６−ジニトロ−６−（｛［２−（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）プロピル］−アミノ｝カルボニル）アニリノ］エチル（２３）が黄色発泡状物として与えられた（２．１７ｇ，１００％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.71 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.71 (m, 1H), 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.26 (m, 4 H), 3.71-3.37 (m, 10 H), 3.13 (s, 6 H), 3.10 (m, 2 H), 1.82-1.43 (m, 8 H); ¹³C NMR δ 165.1, 146.3, 145.4, 140.9, 135.9, 127.4, 122.2, 98.0, 67.2, 64.3, 51.4, 45.7, 36.5, 30.2, 28.7, 24.9, 19.1, 8.5. HRMS (FAB) C₂₁H₃₃N₄O₁₃S₂ [M+H⁺] m/zについての計算値613.1486. 実測値; 613.1481.
（２３）（２．９５ｇ，３．５５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（１２０ｍＬ）が、１ＮＨＣｌ（８０ｍＬ）により処理され、溶液は、２０℃で１時間にわたり攪拌され、次いで、水（１００ｍＬ）により希釈され、飽和ＮａＨＣＯ_３水により中和され、ＥｔＯＡｃにより抽出された（３×８０ｍＬ）。合わされた有機相は、飽和食塩水により洗浄され、乾燥させられ、溶媒が留去され、残渣が、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（１００／１）により溶離するクロマトグラフィーによって精製され、メタンスルホン酸２−（２−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル（２４）が黄色固体として与えられた（１．４ｇ，７５％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 130-133℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.72 (m, 1H), 8.32 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.29 (m, 4 H), 3.47 (m, 8 H), 3.14 (s, 6 H), 1.71 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 165.2, 146.3, 145.3, 140.8, 135.9, 127.5, 122.3, 67.3, 58.4, 51.4, 36.8, 36.5, 31.7. 元素分析 (C₁₆H₂₄N₄O₁₂S₂) C, H, N.
ＥｔＯＡｃ（５０ｍＬ）中、（２４）（０．２５ｇ，０．４５ｍｍｏｌ）のＬｉＢｒ（５３ｍｇ，０．６１ｍｍｏｌ）による６０℃での３時間にわたる処理、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（２／１から１／０）により溶離する生成物のクロマトグラフィーにより、ＩＩｂ−１３が黄色発泡状物として与えられた（０．１６ｇ，６６％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.73 (m, 1H), 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.28 (m, 2 H), 3.65-3.44 (m, 10 H), 3.13 (s, 3 H), 1.70 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 165.1, 145.7, 145.4, 141.0, 136.2, 127.3, 122.1, 67.5, 58.4, 51.1, 36.7, 36.5, 31.7, 29.6. HRMS (FAB) C₁₅H₂₂ ⁷⁹BrN₄O₉S [M+H⁺] m/zについての計算値513.0291. 実測値; 513.0281
（実施例１７（スキーム２ｇ）：メタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｂ−１２））
無水ＭｅＣＮ（１５ｍＬ）中のＩＩｂ−７（３００ｍｇ，０．６２ｍｍｏｌ）の固体およびメタンスルホン酸銀（１３０ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）が、還流下に３時間にわたり加熱され、次いで、冷却され、ろ過された。ＡｇＢｒの固体が、ＥｔＯＡｃにより洗浄され、９８％収率のＡｇＢｒが与えられた。溶媒は、減圧下に除去され、残渣は、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から１／０）により溶離するクロマトグラフィーによって分離され、が下記物質が順次に与えられた。

−出発物質（ＩＩｂ−７）（２８ｍｇ，９％）
−ＩＩｂ−１２（１２３ｍｇ，３８％，黄色発泡状物）；¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.77 (m, 1 H, CONH), 8.74 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-4), 8.36 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-6), 4.28 (m, 2 H, CH₂OMs), 3.58 (m, 4 H), 3.44 (m, 4 H), 3.14 (s, 3 H, OSO₂CH₃); ¹³C NMR δ 165.3, 145.8, 145.2, 140,9, 135.1, 127.5, 122.2, 67.5, 59.2, 54.2, 51.0, 42.1, 36.4, 29.7; HRMS C₁₄H₂₀ ⁷⁹BrN₄O₉Sについて求められたm/z 499.01344; 実測値 499.01324.
カラムは、最後に、ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（９／１）により溶離され、メタンスルホン酸２−（２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝（２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル）−４，６−ジニトロアニリノ）エチル（２５）が黄色固体として与えられた（１５９ｍｇ，５３％）。：mp 128-132 ℃ (EtOAc/石油エーテル); ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.78 (m, 1 H, CONH), 8.74 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-4), 8.36 (d, J = 2.7 Hz, 1 H, H-6), 4.29 (m, 4 H, 2xCH₂OMs), 3.56 (m, 2 H), 3.45 (m, 6 H), 3.14 (s, 6 H, 2xOSO₂CH₃); ¹³C NMR δ 165.4, 146.3, 145.1, 140,6, 135.8, 127.6, 122.3, 67.3, 59.2, 51.3, 42.1, 36.4; HRMS: C₁₅H₂₃N₄O₁₂S₂について求められたm/z 515.0754. 実測値: 515.0744.
（実施例１８（スキーム２ｈ）：メタンスルホン酸２−（（２−クロロエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｂ−２ｍ））
（２５）（５．３ｇ，１０．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１００ｍＬ）が、ＬｉＣｌ（５２４ｍｇ，１２．４ｍｍｏｌ）により６０℃で２時間にわたり処理され、次いで、冷却され、希釈ＨＣｌに注がれ、ＥｔＯＡｃにより抽出された（３×１５０ｍＬ）。仕上げ処理、およびシリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から１／０）により溶離する生成物のクロマトグラフィーにより、ＩＩｂ−２（２．４ｇ，５９％）、次いで、ＩＩｂ−２ｍ（１．９４ｇ，４１％）が黄色油状物として与えられた。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.77 (m, 1H, CONH), 8.74 (d, J= 2.7 Hz, 1H, H-4), 8.36 (d, J=2.7 Hz, 1H, H-6), 4.28 (m, 2H, −CH₂O-Ms), 3.58 (m, 4H), 3.44 (m, 4H), 3.14 (s, 3 H, −OSO₂CH₃); ¹³C NMR δ 165.3, 145.8, 145.2, 140,9, 135.1, 127.5, 122.2, 67.5, 59.2, 54.2, 51.0, 42.1, 36.4, 29.7.
ＩＩｂ−２ｍは、以下の代替法によって合成された：ＩＩｂ−２（１２．５０ｇ，３１．６ｍｍｏｌ）の３−メチル−２−ブタノン溶液（１５０ｍＬ）が、ＮａＩ（５．６９ｇ，３８．０ｍｍｏｌ）により２５℃で処理され、混合物は、７０℃で２時間にわたり攪拌され、次いで、減圧下に濃縮された。残渣は、水（２５０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２５０ｍＬ）の間に分配され、分離された有機層は、水により洗浄され、乾燥させられ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、次いで、減圧下に濃縮された。得られた油状物（１５．２３ｇ）は、ＣＨ_３ＣＮ（８０ｍＬ）中に溶解させられ、メタンスルホン酸銀（９．６３ｇ，４７．４ｍｍｏｌ）により処理され、混合物は、２５℃で１時間にわたり攪拌され、次いで、減圧下に濃縮された。残渣は、ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）により抽出され、ろ過され、固体がＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）により洗浄され、ＥｔＯＡｃ溶液が蒸発させられ、油状混合物が上記のようなシリカゲルを用いるクロマトグラフィーによって分離され、出発物質（３．６１ｇ，２９％）、ＩＩｂ−２ｍ（４．５５ｇ，３２％）および２５（４．９８ｇ，３１％）が与えられた。ＮａＩがＬｉＢｒと置き換えられた場合、反応により類似の結果が与えられる。

（実施例１９（スキーム２ｉ）２−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−３，５−ジニトロベンズアミド（ＩＩｂ−１４）およびメタンスルホン酸２−（（２−ヨードエチル）−２−｛［（２−ヒドロキシエチル）アミノ］カルボニル｝−４，６−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｂ−１５））
ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中の（２５）（６．７ｇ，１３．０ｍｍｏｌ）のＮａＩ（２．９ｇ，２０ｍｍｏｌ）による６０℃での３時間にわたる処理、およびシリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（２／１から１／０）により溶離する生成物のクロマトグラフィーにより、ＩＩｂ−１４が黄色固体として与えられた（３．３ｇ，４４％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 129-131℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.72 (d, J = 2.8 Hz, 1 H, H-4), 8.70 (m, 1 H, CONH), 8.32 (d, J = 2.8 Hz, 1 H, H-6), 4.80 (m, 1 H), 3.55 (m, 2 H), 3.43 (m, 4 H), 3.31 (m, 6 H); ¹³C NMR δ 165.3, 145.2, 144.7, 141.0, 136.3, 127.3, 122.0, 59.3, 54.7, 42.1, 2.94. 元素分析(C₁₃H₁₆N₄I₂O₆) C, H, N.
後の溶出液により、ＩＩｂ−１５が黄色発泡状物として与えられた（１．３５ｇ，１９％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1H, H-4), 8.74 (m, 1H, CONH), 8.34 (d, J = 2.8 Hz, 1 H, H-6), 4.28 (m, 2 H), 3.56 (m, 2 H), 3.43 (m, 2 H), 3.31 (m, 6 H), 3.13 (s, 3 H); ¹³C NMR δ 165.3, 145.5, 145.2, 140.8, 136.1, 127.4, 122.1, 67.5, 59.2, 55.4, 50.6, 42.1, 36.5, 2.6. HRMS (FAB) C₁₄H₂₀IN₄O₉S [M+H⁺] m/z についての計算値546.9996. 実測値; 546.9997.
（実施例２１（スキーム２ｊ）：３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（３−ヒドロキシプロピル）−２，６−ジニトロベンズアミド（ＩＩｃ−８）およびメタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｃ−１３））
ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）中のメタンスルホン酸２−（３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（２７）［合成方法については、同時係属中のＮＺ出願第５２１８５１号を参照］（７１６ｍｇ，１．３６ｍｍｏｌ）のＬｉＢｒ（１７５ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）による処理、続く、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から１／０）による溶離により、ＩＩｃ−８が黄色固体として与えられた（２８９ｍｇ，４２％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 142-144 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.75 (t, J = 5.8 Hz, 1 H, CONH), 8.23 (d, J = 9.4 Hz, 1 H, H-5), 7.62 (d, J = 9.4 Hz, 1 H, H-6), 4.47 (m, 1 H, CHOH), 3.68 (m, 4 H), 3.57 (m, 4 H), 3.43 (m, 2 H), 3.20 (m, 2 H), 1.60 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 161.2, 146.9, 140.2, 137.5, 129.4, 127.7, 122.6, 58.3, 52.6, 36.4, 31.6, 30.1. HRMS (FAB) C₁₄H₁₉ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値496.9671. 実測値: 496.9667.
ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（５０／２）によるさらなる溶離により、ＩＩｃ−１３が与えられた（２７０ｍｇ，３９％）。：mp. 115-117 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.75 (t, J = 5.8 Hz, 1 H, CONH), 8.24 (d, J = 9.4 Hz, 1 H, H-5), 7.64 (d, J = 9.4 Hz, 1 H, H-6), 4.43 (m, 1 H, CHOH), 4.27 (m, 2 H, CH₂OMs), 3.66 (m, 4 H, 2xCH₂N), 3.59 (m, 2 H), 3.44 (m, 2 H), 3.22 (m, 2 H), 3.15 (s, 3 H, CH₃SO₃), 1.60 (m, 2 H); ¹³C NMR δ 161.1, 146.2, 140.5, 137.7, 129.2, 127.6, 122.9, 66.8, 58.2, 52.9, 50.0, 36.6, 36.4, 31.6, 30.0. 元素分析 (C₁₅H₂₁BrN₄O₉S) C, H, N.
（実施例２２（スキーム２ｊ）：３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−Ｎ−（４−ヒドロキシブチル）−２，６−ジニトロベンズアミド（ＩＩｃ−９）およびメタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−３−｛［（４−ヒドロキシブチル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｃ−１４））
ＥｔＯＡｃ（１００ｍＬ）中のメタンスルホン酸２−（３−｛［（４−ヒドロキシブチル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（２８）［合成方法については、ＮＺ出願第５２１８５１号を参照］（５００ｍｇ，０．９２ｍｍｏｌ）のＬｉＢｒ（１１０ｍｇ，１．４ｍｍｏｌ）による処理、続く、シリカゲルを用いるクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から１／０）による溶離により、ＩＩｃ−９が発泡状物として与えられた（１００ｍｇ，２１％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.73 (m, 1H, CONH), 8.25 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.38 (m, 1 H), 3.69 (m, 4 H), 3.57 (m, 4 H), 3.40 (m, 2 H), 3.14 (m, 2 H), 1.47 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 161.0, 145.8, 140.2, 137.6, 129.3, 127.6, 122.6, 60.2, 52.6, 30.0, 29.6, 24.8. HRMS (FAB) C₁₅H₂₀ ⁷⁹Br₂N₄O₆ [M+H⁺] m/z についての計算値510.9828. 実測値; 510.9819.
ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ（５０／２）によるさらなる溶離により、ＩＩｃ−１４が与えられた（１１７ｍｇ，３０％）。：mp. 114-117℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.74 (m, 1 H, CONH), 8.25 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.37 (m, 1 H), 4.27 (m, 2 H), 3.65 (m, 4 H), 3.57 (m, 2 H), 3.35 (m, 2 H), 3.16 (m, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.47 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 160.0, 146.1, 140.6, 137.8, 129.2, 127.5, 122.9, 66.8, 60.2, 52.9, 50.0, 36.6, 29.9, 29.6, 24.9. 元素分析. (C₁₆H₂₃BrN₄O₉S) C, H, N.
（実施例２３（スキーム２ｋ）：メタンスルホン酸２−（３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝｛２−［（メチルスルホニル）オキシ］エチル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（２７）およびメタンスルホン酸２−（（２−ブロモエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｃ−１３））
固体のＩＩｃ−８（２．１５ｇ，４．３ｍｍｏｌ）がメタンスルホン酸銀（０．９９２ｇ，４．９ｍｍｏｌ）の無水ＭｅＣＮの熱溶液（４０ｍＬ）に加えられた。混合物は、還流下に３時間にわたり加熱され、次いで、冷却され、ろ過された。溶媒が減圧下に除去され、残渣は、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡＣ／石油エーテル（１／１から１／０）により溶離するクロマトグラフィーによって分離され、ＩＩｃ−１３（０．５ｇ，２５％）、ＩＩｃ−８（０．３ｇ，１４％）および２７（０．４ｇ，１８％）が順次与えられた。

（実施例２４（スキーム２ｋ）：メタンスルホン酸２−（（２−クロロエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｃ−６）
（２７）（９．０ｇ，１７．０ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１１０ｍＬ）が、ＬｉＣｌ（８６０ｍｇ，２０．４ｍｍｏｌ）により６０℃で２時間にわたり処理され、次いで、冷却され、希ＨＣｌに注がれ、ＥｔＯＡｃにより抽出された（３×１５０ｍＬ）。仕上げ処理およびシリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１から１／０）により溶離する生成物のクロマトグラフィーにより、ＩＩｃ−６が黄色結晶として与えられた（４．０ｇ，５０％）。：mp104-109℃;¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.75 (t, J= 5.8 Hz, 1H, CONH), 8.24 (d, J = 9.4 Hz, 1 H, H-5), 7.64 (d, J = 9.4 Hz, 1H, H-6), 4.44 (m, 1 H, CHOH), 4.26 (m, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.65 (m, 2H), 3.59 (m, 2H), 3.43 (m, 2H), 3.20 (m, 2H), 3.15 (s, 3H), 1.60 (m, 2H); ¹³C NMR δ 161.1, 146.4, 140.5, 137.7, 129.2, 127.6, 122.9, 66.8, 58.2, 52.9, 50.1, 41.4, 36.6, 36.4, 31.6. 元素分析 (C₁₅H₂₁ClN₄O₉S) C, H, N.
（実施例２５（スキーム２ｋ）：メタンスルホン酸２−（（２−ヨードエチル）−３−｛［（３−ヒドロキシプロピル）アミノ］カルボニル｝−２，４−ジニトロアニリノ）エチル（ＩＩｃ−５））
（２７）（５．２８ｇ，１０．０ｍｍｏｌ）のＥｔＯＡｃ溶液（２５０ｍＬ）が、ＮａＩ（１．８ｇ，１２．０ｍｍｏｌ）により６０℃で２時間にわたり処理され、生成物は、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／２から１／０）により溶離するクロマトグラフィーに付され、ＩＩｃ−１５が黄色結晶として与えられた（２．２９ｇ，４１％）。：mp 100-103℃;¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 10.05 (s, 1H), 7.40 (d, J = 11.5 Hz, 1 H), 7.09 (s, 1 H), 6.70 (d, J = 11.5 Hz, 1 H), 2.50 (m, 2 H), 2.21 (m, 2 H), 2.03 (s, 3 H), 1.52 (m, 4 H); ¹³C NMR δ 161.1, 145.8, 140.5, 137.7, 129.2, 127.6, 122.9, 66.8, 58.2, 53.9, 49.9, 41.4, 36.6, 36.4, 31.6. 元素分析 (C₁₅H₂₁IN₄O₉S) C, H, N.
リン酸エステルの合成（スキーム３）
（実施例２６：リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル（Ｉｂ−７Ｐ））
アルコールＩＩｂ−７（２．５８ｇ，５．３３ｍｍｏｌ）およびジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（di-tert-butyl diethylphosphoramidite）（９３％、２．０ｍＬ，６．９ｍｍｏｌの無水ＤＭＦ溶液（２０ｍＬ）が、Ｎ_２下に、１Ｈ−テトラゾール（ＣＨ_３ＣＮ中３重量％，５５ｍＬ，１８．７ｍｍｏｌ）により処理され、２０℃で１．５時間にわたり攪拌された。次いで、反応混合物は、−５０℃に冷却され、３−クロロペルオキシ安息香酸（５５％，２．６８ｇ，８．５４ｍｍｏｌ）の溶液が迅速に加えられ、温度は、−５℃以下に維持された。反応混合物は、室温に昇温させられ、ＣＨ_２Ｃｌ_２（１５０ｍＬ）により希釈された。溶液は、５％Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_５水溶液（２×５０ｍＬ）、１０％ＮａＨＣＯ_３水溶液（２×５０ｍＬ）、水（２×５０ｍＬ）により洗浄され、乾燥させられ、減圧下３０℃以下で濃縮され、残渣は、ｉ−Ｐｒ_２Ｏ／ヘキサンにより振とうされ、冷却された。得られた固体は、シリカゲルを用い、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃにより溶離するクロマトグラフィー、続く、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ヘキサンからの再結晶（４０℃以下）によって精製され、リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−［［２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル（Ｉｂ−７Ｅ）が不安定な黄色固体として与えられた（２．５９ｇ，７２％）。：mp 99-101℃ (分解); ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.93 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.76 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.33 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.01 (g, J = 6.1 Hz, 2 H), 3.62-3.42 (m, 10 H), 1.43 (s, 18 H). HRMS (FAB) C₂₁H₃₄ ⁷⁹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/zについての計算値675.0430 実測値 675.0398; C₂₁H₃₄ ⁷⁹Br⁸¹BrN₄O₉P (MH⁺) m/zについての計算値677.0410, 実測値 677.0397; C₂₁H₃₄ ⁸¹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/z についての計算値679.0389, 実測値 679.0398. 元素分析 (C₂₁H₃₃Br₂N₄O₉P).
Ｉｂ−７Ｅ（２．８０ｇ，４．１４ｍｍｏｌ）およびＴＦＡ（１５ｍＬ）の無水ＣＨ_２Ｃｌ_２溶液（１５ｍＬ）が２０℃で１時間にわたり攪拌され、次いで、減圧下に濃縮された。残留ＴＦＡは、ＣＨ_３ＣＮとともに共沸除去され（２回）、得られた残渣は、ＥｔＯＡｃに溶解させられた。過剰のヘキサンの添加により、半固体が沈殿し、これは、高減圧下２０℃で乾燥させられ、Ｉｂ−７Ｐが黄色発泡状物として与えられた（９８％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.93 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.75 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.36 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.97 (q, J = 6.3 Hz, 2 H), 3.62-3.43 (m, 10 H). HRMS (FAB) C₁₃H₁₈ ⁷⁹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/zについての計算値 562.9178, 実測値 562.9171; C₁₃H₁₈ ⁷⁹Br⁸¹BrN₄O₉P (MH⁺) m/z についての計算値 564.9158, 実測値 564.9152; C₁₃H₁₈ ⁸¹Br₂N₄O₉P. (MH⁺) m/z についての計算値566.9137, 実測値 566.9121。二酸Ｉｂ−７ＰのＮａＨＣＯ_３（２．０当量）による処理により、ジナトリウム塩が与えられた。

（実施例２７：リン酸二水素３−［［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル（Ｉａ−３Ｐ））
ＩＩａ−３の類似のリン酸化、続く、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（２／３）による溶離により、リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル３−［［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル（Ｉａ−３Ｅ）が黄色固体として与えられた（７６％）。：mp (EtOAc/i-Pr₂O/ヘキサン) 120-121℃ (分解); ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.70 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 3.96 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.82 (t, J = 5.8 Hz, 4 H), 3.69 (t, J = 5.8 Hz, 4 H), 3.34 (D₂O 交換後, t, J = 6.8 Hz, 2 H), 1.86 (pent, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.42 (s, 18 H). 元素分析. (C₂₂H₃₅Cl₂N₄O₉P) C, H, N.
エステルＩａ−３ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉａ−３Ｐが吸湿性黄色固体として与えられた（９９％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.71 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 7.45 (s, 1 H), 3.92 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.82 (t, J = 5.8 Hz, 4 H), 3.69 (t, J = 5.8 Hz, 4 H), 3.31 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 1.84 (pent, J = 6.6 Hz, 2 H). HRMS (FAB) C₁₄H₂₀ ³⁵Cl₂N₄O₉P [M+H]⁺ m/zについての計算値 489.0345;実測値 489.0344. C₁₄H₂₀ ³⁵Cl³⁷ClN₄O₉P [M+H]⁺ m/zについての計算値 491.0316; 実測値 491.0317. C₁₄H₂₀ ³⁷Cl₂N₄O₉P [M+H]⁺ m/zについての計算値 493.0286; 実測値 493.0312。二酸Ｉ−３ＰのＮａＨＣＯ_３（２．０当量）による処理により、ジナトリウム塩が与えられた。

（実施例２８：リン酸二水素３−［［５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル（Ｉａ−８Ｐ））
ＩＩａ−８の類似のリン酸化、続く、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（１／１）による溶離により、リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル３−［［５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル（Ｉａ−８Ｅ）が黄色固体として与えられた（６６％）。：mp (EtOAc/i-Pr₂O/ヘキサン) 110-111℃ (分解). ¹H NMR ((CD₃)₂SO) δ 8.70 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 7.44 (s, 1 H), 3.96 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.79-3.63 (m, 84 H), 3.35 (D₂O交換後, t, J = 6.8 Hz, 2 H), 1.86 (pent, J = 6.6 Hz, 2 H), 1.42 (s, 18 H). 元素分析. (C₂₂H₃₅Br₂N₄O₉P) C, H, N.
エステルＩａ−８ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉａ−８Ｐが吸湿性黄色固体として与えられた（９９％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.71 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.55 (s, 1 H), 7.43 (s, 1 H), 3.93 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.79-3.63 (m, 8 H), 3.31(q, J = 6.5 Hz, 2 H), 1.85 (pent, J = 6.6 Hz, 2 H). HRMS (FAB) C₁₄H₂₀ ⁷⁹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/zについての計算値 576.9335, 実測離 576.9314; C₁₄H₂₀ ⁷⁹Br⁸¹BrN₄O₉P (MH⁺) m/zについての計算値 578.9314, 実測値 578.9305; C₁₄H₂₀ ⁸¹Br₂N₄O₉P (MH⁺) m/zについての計算値 580.9294, 実測値 580.9297。二酸Ｉａ−８ＰのＮａＨＣＯ_３（２．０当量）による処理により、ジナトリウム塩が与えられた。

（実施例２９：リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル（Ｉｂ−２Ｐ））
ＩＩＩｂ−２の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（１３／７）による溶離により、リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２−［［２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル（Ｉｂ−２Ｅ）が黄色固体として与えられた（７２％）。：mp (EtOAc/i-Pr₂O/ヘキサン) 107-108 ℃ (分解); ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.90 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.75 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.33 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.01 (q, J = 6.1 Hz, 2 H), 3.72 (t, J = 6.8 Hz, 4 H), 3.53 (q, J = 5.5 Hz, 2 H), 3.43 (t, J = 6.8 Hz, 4 H), 1.43 (s, 18 H). 元素分析. (C₂₁H₃₃Cl₂N₄O₉P) C, H, N, P. CRL 11363.
エステルＩｂ−２ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｂ−２Ｐが黄色発泡状物として与えられた（９８％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.89 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.36 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.98 (q, J = 6.2 Hz, 2 H), 3.72 (t, J = 6.7 Hz, 4 H), 3.51 (q, J = 5.6 Hz, 2 H), 3.43 (t, J = 6.7 Hz, 4 H). HRMS (FAB) C₁₃H₁₈ ³⁵Cl₂N₂O₉P [M+H]⁺ m/zについての計算値 475.0189; 実測値 475.0189. C₁₃H₁₈ ³⁵Cl³⁷ClN₂O₉P [M+H]⁺ m/zについての計算値 477.0159; 実測値 477.0167. C₁₃H₁₈ ³⁵Cl₂N₂O₉P [M+H]⁺ m/zについての計算値 479.0130; 実測値 479.0160.二酸Ｉｂ−２ＰのＮａＨＣＯ３（１．０当量）による処理により、モノナトリウム塩が与えられた。

（実施例３０：メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル（Ｉｂ−２ｍＰ））
ＩＩｂ−２ｍの類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃによる溶離により、メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２−（６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−８，８−ジメチル−６−オキシド−５，７−ジオキサ−２−アザ−６−ホスファノン−１−アノイル）−４，６−ジニトロアニリノ］エチル（Ｉｂ−２ｍＥ）が黄色発泡状物として与えられた（８０％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.94 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.75 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.34 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.4 Hz, 2 H), 4.02 (q, Ｊ= 6.2 Hz, 2 H), 3.74-3.43 (m, 8 H), 3.13 (s, 3 H), 1.43 (s, 18 H). ¹³C NMR δ 265.6, 146.2, 145.3, 140.8, 135.6, 127.5, 122.4, 81.7, 67.5, 64.2, 54.3, 51.3, 41.4, 36.5, 29.5.
エステルＩｂ−２ｍＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｂ−２ｍＰが黄色固体として与えられた（６８％）。：mp (EtOAc/CH₂Cl₂): 132-134 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.92 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.37 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.29 (t, J = 5.4 Hz, 2 H), 3.98 (q, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.58-3.40 (D₂O 交換後, m, 8 H), 3.13 (s, 2 H). ¹³C NMR δ 165.5, 146.1, 145.3, 140.8, 135.7, 127.6, 122.3, 67.5, 63.3, 63.2, 54.3, 51.3, 41.3, 36.5. 元素分析. (C₁₄H₂₀ClN₄O₁₂PS) C, H, N.
（実施例３１：リン酸二水素２−（｛２−［ビス（２−ブロモプロピル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル｝アミノ）エチル（Ｉｂ−７ａＰ）
アルコールＩＩｂ−７ａ（０．６７ｇ，１．３ｍｍｏｌ）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（９３％，４８９ｍｇ，２．０ｍｍｏｌ）による類似のリン酸化、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１）により溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、Ｉｂ−７ａＥが黄色固体として与えられた（０．７４ｇ，８１％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 121-123 ℃; 1H NMR [(CD₃)₂SO] δ 9.09 (m, 1 H), 8.73 (m, 1 H), 8.32 (m, 1 H), 4.44 (m, 2 H), 4.00 (m, 2 H), 3.39 (m, 2 H), 3.60 (m, 4 H), 1.62 (m, 6 H), 1.44 (s, 18 H). 13C NMR δ 165.9, 144.8, 143.6, 139.6, 133.2, 128.0, 123.1, 81.6, 64.0, 60.4, 39.9, 29.4, 23.5. 元素分析 (C₂₃H₃₇Br₂N₄O₉P) C, H, N.
Ｉｂ−７ａＥ（１００ｍｇ）のＴＦＡ（６ｍＬ）による類似の処理、ＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃからの結晶化により、Ｉｂ−７ａＰが黄色固体として与えられた（７０ｍｇ，８５％）。：mp 157-161℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 9.07 (m, 1 H), 8.72 (m, 1 H), 8.36 (m, 1 H), 4.43 (m, 2 H), 4.00 (m, 2 H), 3.52 (m, 6 H), 1.62 (m, 6 H). ¹³C NMR δ 165.9, 144.8, 143.6, 139.7, 133.4, 128.1, 123.1, 63.2, 60.4, 47.9, 39.9, 23.5. 元素分析 (C₁₅H₂₁Br₂N₄O₉P) C, H, N.
（実施例３２：メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル（Ｉｂ−１２Ｐ））
ＩＩａ−１２の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃによる溶離により、メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２−（６−ｔｅｒｔ−ブトキシ−８，８−ジメチル−６−オキシド−５，７−ジオキサ−２−アザ−６−ホスファノン−１−アノイル）−４，６−ジニトロアニリノ］エチル（Ｉｂ−１２Ｅ）が黄色発泡状物として与えられた（６６％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.94 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.75 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.34 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.4 Hz, 2 H), 4.02 (q, Ｊ= 6.2 Hz, 2 H), 3.62-3.43 (m, 8 H), 3.13 (s, 3 H), 1.43 (s, 18 H). HRMS (FAB) C₂₂H₃₇ ⁷⁹BrN₄O₁₂PS [M+H]⁺ m/zについての計算値 693.1029; 実測値 693.1010.
エステル１ｂ−１２ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｂ−１２Ｐが黄色発泡状物として与えられた（９８％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.92 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.37 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.4 Hz, 2 H), 3.98 (q, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.58-3.40 (D₂O交換後, m, 8 H), 3.13 (s, 2 H). HRMS (FAB) C₁₄H₂₁ ⁷⁹BrN₄O₁₂PS [M+H]⁺ m/zについての計算値 578.9798; 実測値 578.9784; C₁₄H₂₁ ⁸¹Br⁸¹BrN₄O₁₂PS [M+H]⁺ m/zについての計算値 580.9777; 実測値 580.9784。二酸Ｉｂ−１２ＰのＮａＨＣＯ_３（１．０当量）による処理により、モノナトリウム塩が与えられた。

（実施例３３：リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル（Ｉｂ−１４Ｐ））
Ｉｂ−１４の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（３／１）による溶離により、リン酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル２［［２−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル（Ｉｂ−１４Ｅ）が黄色固体として与えられた（６７％）。：mp (CH₂Cl₂/i-Pr₂O/ヘキサン) 108-110℃ (分解); ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.91 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.30 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.01 (q, J = 6.3 Hz, 2 H), 3.53 ( q, J = 5.7 Hz, 2 H), 3.45 (t, J 7.8 Hz, 4 H), 3.24 (D₂O交換後, t, J = 7.6 Hz, 4 H), 1.44 (s, 18 H). 元素分析. (C₂₁H₃₃I₂N₄O₉P), C, H, N, P
エステルＩｂ−１４ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｂ−１４Ｐが黄色発泡状物として与えられた（９７％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.90 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.73 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.34 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 3.98 (q, J = 6.4 Hz, 2 H), 3.49 (D₂O交換後 t, J = 5.6 Hz, 2 H), 3.45 (t, J = 7.8 Hz, 4 H), 3.29 (t, J = 7.7 Hz, 4 H). HRMS (FAB) C₁₃H₁₈I₂N₄O₉ [M+H]⁺ m/zについての計算値 658.3911; 実測値 658.3907。二酸Ｉｂ−１４ＰのＮａＨＣＯ_３（２．０当量）による処理により、ジナトリウム塩が与えられた。

（実施例３４：メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−６−（｛［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ｝カルボニル）−アニリノ］エチル（Ｉｂ−１５Ｐ））
アルコールＩＩｂ−１５（１．６８ｇ，３．１ｍｍｏｌ）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（９３％，１．１５ｇ，４．５ｍｍｏｌ）による類似のリン酸化に続く、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１）により溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃ／石油エーテルからの結晶化により、Ｉｂ−１５Ｅが黄色固体として与えられた（２．２３ｇ，９７％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 109-111 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.98 (m, 1 H), 8.76 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.33 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.27 (m, 2 H), 4.00 (m, 2 H), 3.53 (m, 2 H), 3.46 (m, 4 H), 3.14 (s, 3 H), 1.43 (s, 18 H). ¹³C NMR δ 165.5, 145.6, 145.2, 140.8, 135.6, 127.4, 122.4, 81.7, 67.5, 64.2, 55.4, 50.7, 39.9, 36.5, 29.3, 2.6. 元素分析 (C₂₂H₃₆IN₄O₁₂PS), C, H, N.
ＩＢ−１５Ｅ（４０５ｍｇ）のＴＦＡ（６ｍＬ）による類似の処理およびＣＨ_２Ｃｌ_２／石油エーテルからの生成物の結晶化により、二酸Ｉｂ−１５Ｐが黄色固体として与えられた（３０６ｍｇ，８９％）。：mp 147-150 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.93 (m, 1 H), 8.74 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 8.36 (d, J = 2.8 Hz, 1 H), 4.27 (m, 2 H), 4.00 (m, 2 H), 3.46 (m, 6 H), 3.31 (m, 2 H), 3.12 (s, 3 H). ¹³C NMR δ 165.5, 145.6, 145.2, 140.8, 135.7, 127.6, 122.3, 67.6, 63.3, 55.5, 50.7, 39.9, 36.5, 2.7. 元素分析(C₁₄H₂₀IN₄O₉PS), C, H, N.
（実施例３５：メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル（Ｉｃ−６Ｐ））
ＩＩｃ−６の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィー及びにＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／２から１／１）による溶離により、メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−３−（７−ｔｅｒｔ−ブトキシ−９，９−ジメチル−７−オキシド−６，８−ジオキサ−２−アザ−７−ホスファヘキサ−１−アノイル）−２，４−ジニトロアニリノ］エチル（Ｉｃ−６Ｅ）が黄色固体として与えられた（９８％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 98-102 ℃. ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.83 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.26 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.29 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.92 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.72-3.62 (m, 4 H), 3.62-3.55 (m, 2 H), 3.23 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.79 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H), 1.42 (s, 18 H). ¹³C NMR δ 161.3, 146.4, 140.4, 137.6, 129.1, 127.6, 123.0, 81.2, 66.8, 64.1, 64.0, 52.9, 50.1, 41.4, 36.6, 35.9, 29.3. 元素分析(C₂₃H₃₈ClN₄O₁₂PS) C, H, N.
エステルＩｃ−６ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｃ−６Ｐが黄色固体として与えられた（８４％）。mp (EtOAc/CH₂Cl₂) 98-102℃;¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.84 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 8.26 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.88 (q, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.72-3.62 (m, 4 H), 3.53 (D₂O交換後, t, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.23 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.76 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H). 元素分析(C₁₅H₂₂ClN₄O₁₂PS) C, H, N.
（実施例３６：リン酸二水素３−（｛３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，６−ジニトロベンゾイル｝アミノ）プロピル（Ｉｃ−８Ｐ））
アルコールＩＩｃ−８（１．４１ｇ，２．８３ｍｍｏｌ）のジ−ｔｅｒｔ−ブチルジエチルホスホラミダイト（９３％，１２．５ｇ，５．０ｍｍｏｌ）による類似のリン酸化に続く、シリカゲルを用い、ＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／１）により溶離するフラッシュカラムクロマトグラフィーにより、Ｉｃ−８Ｅが黄色固体として与えられた（１．７７ｇ，９１％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 112-114 ℃; ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.86 (m, 1 H), 8.24 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 3.92 (m, 2 H), 3.70 (m, 4 H), 3.60 (m, 4 H), 3.22 (m, 2 H), 1.78 (m, 2 H), 1.41 (s, 18 H). ¹³C NMR δ 161.4, 145.9, 139.9, 137.3, 129.2, 127.8, 122.5, 81.3, 64.1, 52.5, 35.9, 30.1, 29.4. 29.1. 元素分析 (C₂₂H₃₅Br₂N₄O₉P), C, H, N.
Ｉｃ−８Ｅ（９００ｍｇ）のＴＦＡ（１０ｍＬ）による類似の処理により、Ｉｃ−８Ｐが黄色発泡状物として与えられた（７５４ｍｇ，１００％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.83 (m, 1 H), 8.24 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 3.86 (m, 2 H), 3.73 (m, 4 H), 3.60 (m, 4 H), 3.22 (m, 2 H), 1.76 (m, 2 H). ¹³C NMR δ 161.3, 145.9, 140.1, 137.4, 129.2, 127.6, 122.5, 62.9, 52.5, 36.0, 30.0, 29.3. HRMS (FAB) C₁₄H₂₀ ⁷⁹Br₂N₄O₉P. [M+H]⁺ m/zについての計算値 576.9335, 実測値576.9326
（実施例３７：メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［２−ホスホノオキシ］エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ）エチル（Ｉｃ−１２Ｐ））
ＩＩｃ−１２の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＥｔＯＡｃ／石油エーテル（１／２から１／０）による溶離により、二酸（Ｉｃ−１２Ｅ）が黄色固体として与えられた（９９％）。：mp (EtOAc/石油エーテル) 82-86 ℃ (分解). ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 9.00 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.26 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.92 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.72-3.62 (m, 4 H), 3.62-3.55 (m, 2 H), 3.23 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.42 (s, 18 H). 元素分析 (C₂₂H₃₆BrN₄O₁₂PS) C, H, N.
エステルＩｃ−１２ＥのＴＦＡによる類似の処理により、Ｉｃ−１２Ｐが黄色固体として与えられた（１００％）。mp (EtOAc/CH₂Cl₂) 93-97℃;¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.99 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 8.26 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.88 (q, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.72-3.62 (m, 4 H), 3.53 (D₂O 交換後, t, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.23 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H). 元素分析 (C₁₄H₂₀BrN₄O₁₂PS) C, H, N.
（実施例３８：メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル（Ｉｃ−１３Ｐ））
ＩＩｃ−１３の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（１／３）による溶離により、メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−３−（７−ｔｅｒｔ−ブトキシ−９，９−ジメチル−７−オキシド−６，８−ジオキサ−２−アザ−７−ホスファヘキサ−１−アノイル）−２，４−ジニトロアニリノ］エチル（Ｉｃ−１３Ｅ）が黄色固体として与えられた（７０％）。：mp (CH₂Cl₂/i-Pr₂O) 95-96 ℃(分解). ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.83 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.26 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.92 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.72-3.62 (m, 4 H), 3.62-3.55 (m, 2 H), 3.23 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.79 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H), 1.42 (s, 18 H). 元素分析 (C₂₃H₃₈BrN₄O₁₂PS) C, H, N, P.
エステルＩｃ−１３ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｃ−１３Ｐが吸湿性黄色固体として与えられた（９８％）。：¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.84 (t, J = 5.7 Hz, 1 H), 8.26 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.65 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 4.28 (t, J = 5.3 Hz, 2 H), 3.88 (q, J = 6.8 Hz, 2 H), 3.72-3.62 (m, 4 H), 3.53 ( D₂O 交換後, t, J = 6.0 Hz, 2 H), 3.23 (q, J = 6.6 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.76 (pent, J = 6.7 Hz, 2 H). HRMS (FAB) C₁₅H₂₃ ⁷⁹BrN₄O₁₂PS [M+H]⁺ m/zについての計算値 592.9954; 実測値 592.9956。二酸Ｉｃ−１３ＰのＮａＨＣＯ_３（１．０当量）による処理により、モノナトリウム塩が与えられた。

（実施例３９：メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル（Ｉｃ−１５Ｐ））
ＩＩｃ−１５の類似のリン酸化、シリカゲルを用いる生成物のクロマトグラフィーおよびＣＨ_２Ｃｌ_２／ＥｔＯＡｃ（１／３）による溶離により、メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−３−（７−ｔｅｒｔ−ブトキシ−９，９−ジメチル−７−オキシド−６，８−ジオキサ−２−アザ−７−ホスファノヘキサ−１−アノイル）−２，４−ジニトロアニリノ］エチル（Ｉｃ−１５Ｅ）が黄色固体として与えられた（５８％）。：mp (EtOAc/iPr₂O) 90-100 ℃. ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.86 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.25 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.63 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 4.27 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.91 (q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.67 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.60 (t, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.26-3.17 (D₂O交換後, m（一部不明瞭）, 2 H), 3.23 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.15 (s, 3 H), 1.78 (pent, J = 6.6 Hz, 2 H). 元素分析 (C₂₃H₃₈IN₄O₁₂PS) C, H, N, P.
エステルＩＣ−１５ＥのＴＦＡによる類似の処理により、二酸Ｉｃ−１５Ｐが吸湿性黄色固体として与えられた（９７％）。mp (CH₃CN/EtOAc) 84-86℃. ¹H NMR [(CD₃)₂SO] δ 8.90 (t, J = 5.6 Hz, 1 H), 8.24 (d, J = 9.4 Hz, 1 H), 7.57 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 4.25 (t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.81 (D₂O交換後, q, J = 6.7 Hz, 2 H), 3.62 (D₂O交換後, t, J = 5.2 Hz, 2 H), 3.56 (t, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.26 (t, J = 6.9 Hz, 2 H), 3.20 (q, J = 6.5 Hz, 2 H), 3.09 (s, 3 H), 1.73 (pent, J = 6.6 Hz, 2 H). HRMS(FAB) C₁₅H₂₂IN₄O₁₂PS (MH⁺) m/zについての計算値 640.9816. 実測値; 640.9795. 元素分析 (C₁₅H₂₂IN₄O₁₂PS) C, H.

式（Ｉ）の代表的なアルコール（表１ａに列挙）は、大腸菌ニトロリダクターゼｃＤＮＡ（ＮＴＲ）（表３，列２および３）または低酸素条件下のヒトのシトクロムＰ４５０リダクターゼ（Ｐ４５０Ｒ）（表３、列４および５）のいずれかをトランスフェクトしたヒトのガン細胞系への選択的細胞毒性を示している。この表では、感度比は、ＮＴＲ発現（列３）または低酸素（列５）のいずれかに対する選択性の度合いを示すように表示される。しかしながら、Ｐ４５０Ｒの過剰発現は、低酸素感度に必要とされない。

ＩＣ_５０値は、２０％酸素または０％酸素（嫌気性チャンバを用いて達成される酸素欠乏症）のいずれかの気相下での４時間の薬物露出に続く細胞増殖実験から誘導される。細胞は、有酸素条件の下でさらに５日間にわたり生育させられ、細胞密度は、スルホロダミンＢアッセイを用いて評価され、コントロールの５０％に生育を阻害するために必要とするプロドラッグの濃度を決定した。

リン酸エステルの低酸素細胞毒素としての活性は、図１中の代表的な例（Ｉｂ−７Ｐ）についてのデータによって立証される。これはＲｉｆ−１腫瘍によるインビボ切除アッセイを利用した。ここでは、１５Ｇｙの放射線によって有酸素腫瘍細胞が増殖不能化され（sterlised）、残った低酸素細胞に対する試薬の細胞毒性が定量化され得る。予想外なことに、リン酸エステルＩｂ−７Ｐの活性がそれらの各最大耐量においてその親アルコール（ＩＩｂ−７）の活性を超えることが分かった（Ｉｂ−７Ｐ＝７５０μｍｏｌ／ｋｇ；ＩＩｂ−７＝１０００μｍｏｌ／ｋｇ）。この実験は、リン酸エステルＩｂ−７が、基準の低酸素細胞毒素チラパザミン（tirapazamine）よりも低酸素細胞に対してより活性であること、有酸素細胞よりも低酸素細胞に対して（すなわち、放射線なしで与えられる場合よりも放射後に与えられる場合）それはより活性であることを立証する。このため、Ｉｂ−７Ｐは、インビボの低酸素選択的細胞毒素として作用する。有酸素腫瘍細胞に対する活性は劣るが、この活性は、化合物が単独剤として（放射線なし）の有用性も有していることを有意に実証している。

ヒトの腫瘍の異種間移植片における低酸素細胞に対する式（Ｉ）のリン酸エステルの顕著な活性は、表４のデータによって例示される。これらの実験では、ＳｉＨａヒト頚部がん腫細胞は、ＣＤ−１ヌード（免疫不全）マウスにおいて皮下で大きくなった。有酸素細胞を増殖不能化するのに十分なイオン化放射（コバルト−６０のガンマ放射線）（１５Ｇｙ）の全身線量の５分後に、化合物は最大耐量（ＭＴＤ）の７５％または２０％に相当する用量で投与された。腫瘍は、１８時間後に切除され、プロテアーゼのカクテル法により分離され、細胞の生き残りが、クローン形成法を用いて立証された。死細胞の対数は、処理された腫瘍とコントロールの腫瘍との間の腫瘍組織のグラム当たりの増殖性細胞（clonogen）の数の差から計算された。試験された全てのリン酸エステルは、ＭＴＤの７５％で低酸素細胞に対して大きな効果を示した（表４，４列）。これは、放射線がない場合に死細胞がより少ないことによって立証されるように、低酸素状態に対して選択的であった。しかしながら、化合物単独による細胞殺は、全ての場合において大きかった（表４、５列）。これは、化合物単独でも単剤として抗腫瘍活性を有していることを立証している。低酸素細胞に対する活性も、ＭＴＤの２０％のみに相当する用量で同一化合物について立証された（表４，７列）。基準の低酸素細胞毒素チラパザミン、および基準ナイトロジェンマスタード（メルファラン、クロランブシルおよびシクロホスファミド）は、それらの各ＭＴＤの２０％において活性を欠いていた。

式（Ｉ）のリン酸エステルのＮＴＲ活性型細胞毒素としての代表例が、図２において提供される。ＷｉＤｒインビボ生育遅延アッセイ、ＷｉＤｒ^ＷＴおよびＷｉＤｒ^ＮＴＲ細胞の混合物を含む異種移植片において細胞は３００ｍｍ^３に生育させられ、プロドラッグの単一用量によりそのＭＴＤで処理される。腫瘍の生育が経時でモニタリングされ、平均の腫瘍容積が１６００ｍｍ^３を超えた時に動物は安楽死させられる。データは、時間対死として示される。予想外なことに、各最大耐量（７５μｍｏｌ／ｋｇ）で投与される場合に、リン酸エステル（Ｉｂ−７Ｐ）の活性が、その親アルコール（ＩＩｂ−７）の活性を超えることが観察された。Ｉｂ−７は、（ｉ）最初の処理の減退までの時間（７７日対１７日）および（ｉｉ）全体的な生存（４０％対６％）に関してＩＩｂ−７より優れている。

下記グラフは、最大耐量の７５％に相当する用量での腹腔内注射による雌ＣＤ−１ヌードマウスへの投与後のリン酸エステルＩｂ−２ｍＰ、Ｉｂ−７Ｐ、Ｉｂ−１２ＰおよびＩｃ−１２Ｐの薬物動態を示す。化合物のモノナトリウム塩は、リン酸塩緩衝飽和食塩水（ｐＨ７．４）中に溶解させられ、１当量の重炭酸ナトリウムが添加された。小尾部の静脈出血（small tail vein bleed）によって連続的な血液サンプルが得られ、１０ｕｌの血漿がそれぞれから調製された。３倍容積のメタノールの添加によってタンパク質が沈殿させられ、ＵＶまたは質量分析検出のいずれかを用いるＨＰＬＣによってリン酸エステルおよび対応するアルコールの濃度が測定された。

マウス内でリン酸エステルが対応するアルコールに効果的に変換されたことをデータは示す。アルコールは、低酸素またはＮＴＲ発現細胞内のニトロ還元によって活性化された種である。

前述の記載参照が試薬またはそれの既知の等価性を有するものに対してなされた場合、それらの等価物は、本明細書において、個別に説明されたものとして援用される。

本発明は、所定の実施形態および実施例を参照しながら記載されているが、本発明の範囲から逸脱することなく実施形態および実施例に対してさらなる改変および変形がなされ得ること理解されるべきである。

ＩＩｂ−７およびその対応するリン酸エステルの前プロドラッグＩｂ−７Ｐの、既知の低酸素細胞毒素チラパザミンと比較したインビボ活性。９０％ＮＴＲ−ｖｅおよび１０％ＮＴＲ＋ｖｅＷｉＤｒ細胞の混合物を接種することによって生育させられたヒトの大腸癌腫異種移植片に対するＩＩｂ−７およびその対応するリン酸エステルの前プロドラッグＩｂ−７のインビボ活性。最大耐量の７５％に相当する用量での腹腔内注射による雌ＣＤ−１ヌードマウスへの投与後のホスフェートエステルＩｂ−２ｍＰ、Ｉｂ−７Ｐ、Ｉｂ−１２ＰおよびＩｃ−１２Ｐの薬物動態を示すグラフである。

Claims

式（Ｉ）：

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−を示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示し；
Ｙは、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示す）
のリン酸エステル化合物および薬学的に許容されるその塩。
式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）：

（ここで、Ｙは、

を示し、
ｎは１〜６を示し、
Ｚは−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、
各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択される）
によって示される化合物から選択される、請求項１に記載の式（Ｉ）のリン酸エステル化合物および薬学的に許容されるその塩。
リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル；
リン酸二水素３−［［５−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル；
リン酸二水素３−［［５−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，４−ジニトロベンゾイル］アミノ］プロピル；
リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−クロロエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
リン酸二水素２−（｛２−［ビス（２−ブロモプロピル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル｝アミノ）エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
リン酸二水素２−［［２−［ビス（２−ヨードエチル）アミノ］−３，５−ジニトロベンゾイル］アミノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−６−（｛［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ｝カルボニル）−アニリノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−クロロエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
リン酸二水素３−（｛３−［ビス（２−ブロモエチル）アミノ］−２，６−ジニトロベンゾイル｝アミノ）プロピル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［２−（ホスホノオキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；および
メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノオキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル
から選択される、請求項１に記載された式（Ｉ）のリン酸エステル化合物。
一般式（Ｉ）；

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−を示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ_１−６アルキルを示し；
Ｙは、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ _２ＣＨＭｅＷ） _２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示す）
によって示されるリン酸エステル化合物および薬学的に許容されるその塩を合成する方法であって、
（ｉ）式（ＩＩ）

（ここで：
Ｘは、任意の空いている環位置において、−ＣＯＮＨ−を示し；
Ｒは、ヒドロキシ、アミノおよびそのＮ−オキシド、またはジアルキルアミノおよびそのＮ−オキシドを含む１以上の基により置換されてもよい低級Ｃ _１−６アルキルを示し；
Ｙは、−Ｎ−アジリジニル、−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｗ）_２または−Ｎ（ＣＨ_２ＣＨＭｅＷ）_２を示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択され；
Ｚは、任意の空いている環位置において、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示す）
の化合物をリン酸化する工程を包含する方法。
式（Ｉａ）、（Ｉｂ）または（Ｉｃ）：

（ここで、Ｙは、

を示してもよく、
ｎは、１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、ここで、各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択される）
の化合物および薬学的に許容されるその塩を合成する方法であって、
式（ＩＩａ）、（ＩＩｂ）または（ＩＩｃ）

（ここで、Ｙは、

を示し、
ｎは、１〜６を示し、
Ｚは、−ＮＯ_２、−ハロゲン、−ＣＮ、−ＣＦ_３または−ＳＯ_２Ｍｅを示し、
各Ｗは、独立して、ハロゲンまたは−ＯＳＯ_２Ｍｅから選択される）
によって示される化合物および薬学的に許容される塩をリン酸化する工程を包含する、方法。
ガンの治療用の薬品の製造のための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容される塩の使用。
腫瘍の低酸素細胞を殺害する際に使用される薬品の製造のための、請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物または薬学的に許容される塩の使用。
請求項１に記載された式（Ｉ）の化合物または許容される塩の治療上の有効量および薬学的に許容される賦形剤、添加剤、担体、緩衝剤または安定剤を含むガン治療用の医薬組成物。
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［２−（ホスホノキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル；および
メタンスルホン酸２−［（２−ヨードエチル）−２，４−ジニトロ−３−［［［３−（ホスホノキシ）プロピル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチル
から選択される化合物。
メタンスルホン酸２−［（２−ブロモエチル）−２，４−ジニトロ−６−［［［２−（ホスホノキシ）エチル］アミノ］−カルボニル］アニリノ］エチルである化合物。
請求項１０に記載の化合物の治療上有効量および薬学的に許容される賦形剤、添加剤、担体、緩衝剤または安定剤を含む、ガン治療用の医薬組成物。
ガン治療用の薬品の製造のための、請求項１０に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
腫瘍の低酸素細胞を殺害する際に使用される薬品の製造のための、請求項１０に記載の式（Ｉ）の化合物の使用。