JP4755325B2

JP4755325B2 - Bioactive composition derived from silk protein hydrolyzate

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Publication number: JP4755325B2
Application number: JP31889797A
Authority: JP
Inventors: 安藤義隆; 豊渡邊
Original assignee: Gifu Prefecture; Ichimaru Pharcos Co Ltd
Current assignee: Gifu Prefecture; Ichimaru Pharcos Co Ltd
Priority date: 1997-11-04
Filing date: 1997-11-04
Publication date: 2011-08-24
Anticipated expiration: 2017-11-04
Also published as: JPH11139986A

Description

【０００１】
本発明は、絹蛋白質由来の免疫賦活剤に関する。更に詳しくは、絹蛋白質に蛋白分解酵素等を作用させることにより得られる、分子量３００〜５，０００のペプチドを有効成分とする免疫賦活剤に関するものである。
【０００２】
【発明の属する技術分野】
本発明の免疫賦活剤は、免疫機能を強化したり、或いは低下した免疫能を回復させたりする優れた免疫賦活作用のほか、抗発癌プロモーション作用を有する。
【０００３】
本発明による免疫賦活剤は極めて安全なものであり、健康志向の飲食品、嗜好品、家畜やペット用の飼料をはじめ、化粧料（浴用剤を含む）といった日常的に使用される製品形態に配合することにより、癌、感染症、自己免疫疾患、アレルギー、動脈硬化、虚血性疾患、細胞の老化やしみ・そばかす等の予防、軽減または改善といった効果が期待できる。また、経口医薬品、外用医薬品、注射・点滴薬、坐薬等の医療用製剤類などへの配合も可能であり、人、ペット動物等の美容と健康の維持、体質改善に有効なものである。
【０００４】
飲食品類用途における具体例として、栄養補強（栄養補助）を目的とするような健康維持のための錠剤、飲料、顆粒等の健康志向の飲食品類、家畜飼料、ペットフード等が対象として上げられる。
【０００５】
また、化粧料類としては、例えば、化粧水（ローション），乳液，クリーム，軟膏，シェービングムース，オイル，パック，シャンプー，リンス，トリートメント，ヘアトニック，整髪料，育毛料，パーマネント液，染毛剤，ボディーソープなどのスキンケアおよびヘアケア製剤，あるいは浴用剤（液状，粉末状，顆粒状，固形状など性状は、何れであってもよい）などが上げられる。
【０００６】
その他、これらとは別に、衛生用品，ウエットタイプのティシュペーパーや紙タオルあるいはコットン，すり傷，切り傷、火傷、あかぎれ、炎症、湿疹、吹き出物、ニキビ、肌荒れなどに適用する消毒用又は治療用の各種製剤やそれを含浸させたガーゼ類、絆創膏、アイ・ケア剤、吸入剤、口腔洗浄剤、うがい剤、歯磨き剤などにも応用することができる。
【０００７】
【従来の技術】
従来、癌や脳卒中といった成人病の治療において、西洋医学の果たしてきた役割は大きい。しかし一方で予防医学的にそうした疾病に対処することも高齢化社会を迎えるこれからにあってはますます重要となってきている。
【０００８】
我々は、本来、外界からはウィルスや微生物等の侵入にさらされ、内部においては異物的自己物質（例えば、癌、自己死細胞など）が出現する状況で生存している。このような状況下で我々が生存できるのは、そうした異物を排除したり、自己を防衛する機構を有しているからである。したがって、このような生体防御能（免疫能）の低下や異常は、様々な疾病を引き起こすことになる。
【０００９】
一般には、ストレス、感染症（麻疹、インフルエンザ、エイズなど）、化学物質の暴露などがこうした免疫能の低下につながる要因と考えられており、また加齢とともにもそれらは低下する。
【００１０】
一方、我々の食生活において、近年、健康管理上問題視されつつあるのが、様々な合成食品添加物や残留農薬などによるとみられる、生体中に発生する活性酸素による影響である。生体は、酵素等によりこの有害な活性酸素を除去しようと働くが、老化などによってこの除去機能が低下すると、正常な細胞や器官までもが障害を受けることがあり、その結果、様々な病気や組織の老化などを招く心配がある。こうしたことから、ビタミンＥやビタミンＣなどをはじめとする抗酸化作用を有した成分を多く含む食品の有用性が指摘されてきた。
【００１１】
さらに、身近な環境問題としてとりだたされている大気汚染やオゾン層の破壊なども健康を損ねる原因となることから関心度は高い。特にオゾン層の破壊は、有害な紫外線を増加させ、しみ、そばかす、さらには皮膚癌という深刻な問題をも引き起こす。このため、地域によっては肌をできるだけ露出しない衣服、あるいはサングラス等を奨励し、身体を保護するように呼びかけている。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、これらの事情に鑑みてなされたものであって、我々の美容と健康を維持していくために有用な生理活性作用組成物を提供することにある。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
このため本発明では免疫賦活剤を提供する。それは絹という素材から製造することができる。すなわち、この素材より得られた特定のペプチドを有効成分とするものであり、これには免疫賦活作用、抗発癌プロモーション作用といった美容と健康の維持に有用な効果を有する。
【００１４】
【発明の実施の形態】
原料は絹から調整したシルクフィブロインという蛋白質を用いることが出来る。製造法は、酸、アルカリ及び酵素による直接又はバイオリアクター法による分解によって製造できる。例えば、次のようにして製造することが出来る。
【００１５】
絹をまず８０℃以上に昇温して加熱滅菌する。これを臭化リチウム、硝酸マグネシウム、塩化カルシウムなどの高濃度塩溶液に加熱溶解し、次いで透析、逆浸透法等で脱塩した後蛋白分解酵素を作用させる。用いる蛋白分解酵素としては、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、ペプシン、レンニン、パンクレアチン、エラスターゼ、カルボキシペプチターゼ、アミノペプチターゼ、ジペプチターゼ、アルカラーゼ等を用いることが出来るが、例えばトリプシンを絹４０に対して１の割合で３７℃、ｐＨ７の条件で作用させる。その際、好ましくは２４時間かけて無菌的に分解する。その後、８０℃以上に昇温し酵素を失活させた後、遠心分離し沈殿を除去することによって絹蛋白質由来の分解物が得られる。これをスプレードライ、凍結乾燥等によってパウダー化する。
【００１６】
更に、用途に応じゲル濾過法、イオン交換法により精製することも出来る。このようにして得られたペプチドは、システイン、グルタミン酸、アスパラギン酸、リジン、アルギニン、グリシン、アラニン、ロイシン、プロリン等多種類のアミノ酸で構成され、分子量は３００〜５，０００を主とする。
【００１７】
本発明による免疫賦活剤はそのまま利用することもできるが、必要に応じて、下記に示されるような医薬品類，医薬部外品類，化粧品類，浴用剤，食品類，飲料類などにおいて使用されている各種成分や添加剤の中から用途に適したものを任意に選択、併用して、それぞれの利用しやすい製品形態とすることができる。
【００１８】
[1]各種油脂類
アボガド油，アーモンド油，ウイキョウ油，エゴマ油，オリブ油，オレンジ油，オレンジラファー油，ゴマ油，カカオ脂，カミツレ油，カロット油，キューカンバー油，牛脂，牛脂脂肪酸，ククイナッツ油，サフラワー油，シア油，大豆油，ツバキ油，トウモロコシ油，ナタネ油，パーシック油，ヒマシ油，綿実油，落花生油，タートル油，ミンク油，卵黄油，カカオ脂，パーム油，パーム核油，モクロウ，ヤシ油，牛脂，豚脂，乳脂，又はこれら油脂類の水素添加物（硬化油等）など。
【００１９】
[2]ロウ類
ミツロウ，カルナバロウ，鯨ロウ，ラノリン，液状ラノリン，還元ラノリン，硬質ラノリン，カンデリラロウ，モンタンロウ，セラックロウなど。
【００２０】
[3]鉱物油
流動パラフィン，ワセリン，パラフィン，オゾケライド，セレシン，マイクロクリスタンワックス，スクワレン，スクワラン，プリスタンなど。
【００２１】
[4]脂肪酸類
ラウリン酸，ミリスチン酸，パルミチン酸，ステアリン酸，ベヘン酸，オレイン酸，１２-ヒドロキシステアリン酸，ウンデシレン酸，トール油，ラノリン脂肪酸などの天然脂肪酸、イソノナン酸，カプロン酸，２−エチルブタン酸，イソペンタン酸，２−メチルペンタン酸，２−エチルヘキサン酸，イソペンタン酸などの合成脂肪酸。
【００２２】
[5]アルコール類
エタノール，イソピロパノール，ラウリルアルコール，セタノール，ステアリルアルコール，オレイルアルコール，ラノリンアルコール，コレステロール，フィトステロールなどの天然アルコール、２−ヘキシルデカノール，イソステアリルアルコール，２−オクチルドデカノールなどの合成アルコール。
【００２３】
[6]多価アルコール類
酸化エチレン，エチレングリコール，ジエチレングリコール，トリエチレングリコール，エチレングリコールモノエチルエーテル，エチレングリコールモノブチルエーテル，ジエチレングリコールモノメチルエーテル，ジエチレングリコールモノエチルエーテル，ポリエチレングリコール，酸化プロピレン，プロピレングリコール，ポリプロピレングリコール，１，３−ブチレングリコール，グリセリン，ペンタエリトリトール，ソルビトール，マンニトールなど。
【００２４】
[7]エステル類
ミリスチン酸イソプロピル，パルミチン酸イソプロピル，ステアリン酸ブチル，ラウリン酸ヘキシル，ミリスチン酸ミリスチル，オレイン酸オレイル，オレイン酸デシル，ミリスチン酸オクチルドデシル，ジメチルオクタン酸ヘキシルデシル，乳酸セチル，乳酸ミリスチル，フタル酸ジエチル，フタル酸ジブチル，酢酸ラノリン，モノステアリン酸エチレングリコール，モノステアリン酸プロピレングリコール，ジオレイン酸プロピレングリコールなど。
【００２５】
[8]金属セッケン類
ステアリン酸アルミニウム，ステアリン酸マグネシウム，ステアリン酸亜鉛，ステアリン酸カルシウム，パルミチン酸亜鉛，ミリスチン酸マグネシウム，ラウリン酸亜鉛，ウンデシレン酸亜鉛など。
【００２６】
[9]ガム質、糖類及び水溶性高分子化合物
アラビアゴム，ベンゾインゴム，ダンマルゴム，グアヤク脂，アイルランド苔，カラヤゴム，トラガントゴム，キャロブゴム，クインシード，寒天，カゼイン，乳糖，果糖，ショ糖およびそのエステル，トレハロースおよびその誘導体，デキストリン，ゼラチン，ペクチン，デンプン，カラギーナン，カルボキシメチルキチン又はキトサン，エチレンオキサイド等のアルキレン(Ｃ2〜Ｃ4)オキサイドが付加されたヒドロキシアルキル(Ｃ2〜Ｃ4)キチン又はキトサン，低分子キチン又はキトサン，キトサン塩，硫酸化キチンまたはキトサン，リン酸化キチン又はキトサン，アルギン酸及びその塩，ヒアルロン酸及びその塩，コンドロイチン硫酸及びその塩，ヘパリン，エチルセルロース，メチルセルロース，カルボキシメチルセルロース，カルボキシエチルセルロース，カルボキシエチルセルロースナトリウム，ヒドロキシエチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース，ニトロセルロース，結晶セルロース，ポリビニルアルコール，ポリビニルメチルエーテル，ポリビニルピロリドン，ポリビニルメタアクリレート，ポリアクリル酸塩，ポリエチレンオキサイドやポリプロピレンオキサイドなどのポリアルキレンオキサイド又はその架橋重合物，カルボキシビニルポリマー，ポリエチレンイミンなど。
【００２７】
[10]界面活性剤
アニオン界面活性剤（カルボン酸塩，スルホン酸塩，硫酸エステル塩，リン酸エステル塩）、カチオン界面活性剤（アミン塩，四級アンモニウム塩）、両性界面活性剤：カルボン酸型両性界面活性剤（アミノ型，ベタイン型），硫酸エステル型両性界面活性剤，スルホン酸型両性界面活性剤，リン酸エステル型両性界面活性剤、非イオン界面活性剤（エーテル型非イオン界面活性剤，エーテルエステル型非イオン界面活性剤，エステル型非イオン界面活性剤，ブロックポリマー型非イオン界面活性剤，含窒素型非イオン界面活性剤）、その他の界面活性剤（天然界面活性剤，タンパク質加水分解物の誘導体，高分子界面活性剤，チタン・ケイ素を含む界面活性剤，フッ化炭素系界面活性剤）など。
【００２８】
[11]各種ビタミン類
ビタミンＡ群：レチノール，レチナール（ビタミンＡ1），デヒドロレチナール（ビタミンＡ2），カロチン，リコピン（プロビタミンＡ）、ビタミンＢ群：チアミン塩酸塩，チアミン硫酸塩（ビタミンＢ1），リボフラビン（ビタミンＢ2），ピリドキシン（ビタミンＢ6），シアノコバラミン（ビタミンＢ12），葉酸類，ニコチン酸類，パントテン酸類，ビオチン類，コリン，イノシトール類、ビタミンＣ群：アスコルビン酸及びその誘導体、ビタミンＤ群：エルゴカルシフェロール（ビタミンＤ2），コレカルシフェロール（ビタミンＤ3），ジヒドロタキステロール、ビタミンＥ群：トコフェロール及びその誘導体，ユビキノン類、ビタミンＫ群：フィトナジオン（ビタミンＫ1），メナキノン（ビタミンＫ2），メナジオン（ビタミンＫ3），メナジオール（ビタミンＫ4）,その他，必須脂肪酸（ビタミンＦ），カルニチン，フェルラ酸，γ−オリザノール，オロット酸，ビタミンＰ類（ルチン，エリオシトリン，ヘスペリジン），ビタミンＵなど。
【００２９】
[12]各種アミノ酸類
バリン，ロイシン，イソロイシン，トレオニン，メチオニン，フェニルアラニン，トリプトファン，リジン，グリシン，アラニン，アスパラギン，グルタミン，セリン，システイン，シスチン，チロシン，プロリン，ヒドロキシプロリン，アスパラギン酸，グルタミン酸，ヒドロキシリジン，アルギニン，オルニチン，ヒスチジンなどや，それらの硫酸塩，リン酸塩，硝酸塩，クエン酸塩，或いはピロリドンカルボン酸のごときアミノ酸誘導体など。
【００３０】
[13]植物又は動物系原料由来の種々の添加物
これらは、添加しようとする製品種別、形態に応じて常法的に行われる加工（例えば、粉砕，製粉，洗浄，加水分解，醗酵，精製，圧搾，抽出，分画，ろ過，乾燥，粉末化，造粒，溶解，滅菌，ｐＨ調整，脱臭，脱色などを任意に選択、組合わせた処理）を行い、各種の素材から任意に選択して供すればよい。尚、抽出に用いる溶媒については、供する製品の使用目的、種類、あるいは後に行う加工処理等を考慮した上で選択すれば良いが、通常では、水，水溶性有機溶媒（例えば、エタノール，プロピレングリコール，１,３−ブチレングリコールなど）の中から選ばれる１種もしくは２種以上の混液を用いるのが望ましい。但し、用途により有機溶媒の含有が好ましくない場合においては、水のみを使用したり、あるいは抽出後に除去しやすいエタノールを採用し、単独又は水との任意の混液で用いたりすれば良く、また、搾取抽出したものでも良い。
【００３１】
尚、植物又は動物系原料由来の添加物を、全身用または局所用の外用剤や化粧料類に供する場合、皮膚や頭髪の保護をはじめ、保湿，感触・風合いの改善，柔軟性の付与，刺激の緩和，芳香によるストレスの緩和，細胞賦活（細胞老化防止），炎症の抑制，肌質・髪質の改善，肌荒れ防止及びその改善，発毛，育毛，脱毛防止，光沢の付与，清浄効果，疲労の緩和，血流促進，温浴効果などの美容的効果のほか，香付け，消臭，増粘，防腐，緩衝などの効果も期待できる。
【００３２】
また、食用製品においては、栄養補給，疲労回復，強壮，細胞賦活（細胞老化防止）等の健身並びに美容的効果をはじめ、味覚の改善，色調や芳香、光沢の付与，安定化，増粘，防腐等の目的で使用することができる。さらにこの他にも、これまでに知られている各原料素材の様々な美容的、薬剤的効果を期待し、これらを組合わせることによって目的とする効果の増進を図ったり、あるいは多機能的な効果を期待した製品とすることも可能である。
【００３３】
原料とする具体的な植物(生薬)としては、例えば、アイ(藍葉)，アオカズラ(清風藤)，アオツヅラフジ(木防巳)，アオノリュウゼツラン，アカシア，アカスグリ果実，アカブドウ，アカメガシワ(赤芽柏)，アカネ(茜草根)，アカヤジオウ(地黄)，アギ(阿魏)，アキニレ(榔楡皮)，アケビ(木通)，アサ(麻子仁)，アサガオ(牽牛子)，アシタバ(明日葉)，アズキ(赤小豆)，アセンヤク(阿仙薬)，アセロラ，アニス果実，アベマキ果実，アボカド，アマ，アマチャ(甘茶)，アマチャヅル，アマドコロ(玉竹)，アミガサユリ(貝母)，アーモンド(へん桃)，アルテア，アルニカ，アロエ(蘆薈)，アロエベラ，アンジェリカ，アンズ(杏仁)，アンソッコウ(安息香)，イガコウゾリナ(地胆頭)，イタドリ(虎杖根)，イチゴ，イチジク(無花果)又はその葉，イチビ(冬葵子)，イチヤクソウ，イチョウ(銀杏葉，銀杏)，イトヒメハギ(遠志)，イナゴマメ，イネ種子又は種皮，イノンド種子，イブキジャコウソウ，イラクサ，イランイラン，ウイキョウ(茴香)，ウキヤガラ(三稜)，ウグイスカグラ果実，ウコン(鬱金)，ウスバサイシン(細辛), ウスベニアオイ，ウスベニタチアオイ，，ウツボグサ(夏枯草)，ウド，ウメ(烏梅)又はその果肉，ウラジロガシ，ウワウルシ，ウンシュウミカン(陳皮)，エストラゴン，エゾウコギ(蝦夷五加)，エチナシ(ホソバムラサキバレンギク), エノキ，エビスグサ(決明子)，エルダーベリー果実，エレミ，エンジュ(槐花，槐花米)，オウギ(黄耆)，オウレン(黄連)，オオカラスウリ(カロニン)，オオツヅラフジ(防己)，オオバコ(車前子，車前草)，オオハシバミ(榛子)，オオバナオケラ(白朮)，オオバヤシャブシ果実，オオミサンザシ(山査子)，オウヒササノユキ，オオムギ(大麦)，オグルマ(旋覆)，オクラ果実，オケラ(白朮)，オタネニンジン(人参)，オトギリソウ(弟切草)，オドリコソウ(続断)，オナモミ(蒼耳子)，オニグルミ，オニノヤガラ(天麻)，オニユリ(百合)，オニノス，オヒョウ(裂葉楡)，オミナエシ(敗醤)，オランダイチゴ，オランダガラシ，オランダゼリ，オランダパセリ，オランダミツバ，オリーブ，オレガノ，オレンジ果実又は果皮，カイケイジオウ(熟地黄)，海藻［緑藻，褐藻，紅藻］，カカオ種子，カキ又はその葉(柿蒂)，カギカズラ(釣藤鈎)，カシア，カジノキ果実(楮実)，ガジュツ(莪朮)，カシワ(槲樹，槲葉)，カスカリラ，カニクサ(金沙藤)，カノコソウ(吉草根)，カバノキ，カボチャ，カポックノキ種子，カホクサンショウ(蜀椒)，ガマ(蒲黄)，カミツレ，カミヤツデ(通草)，カラスウリ(王瓜)，カラスビシャク(半夏)，カラスムギ，ガラナ種実，カラヤ，カリテ，カリン(木瓜)，ガルシニア，カワヤナギ，カワラタケ，カワラヨモギ(茵チン蒿)，カンスイ(甘遂)，カンゾウ(甘草)，カンタラアサ，カンデリラ，カントウ，カンナ，キイチゴ，キウイ果実，キカラスウリ(瓜呂根)，キキョウ(桔梗，桔梗根)，キク(菊花)，キササゲ(梓実)，ギシギシ(羊蹄根)，キジツ(枳実), 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コンブ，コンフリー(鰭張草)，サイザル，サイザルアサ，サキシマボタンズル(威霊仙)，サクラの花・葉・果実・樹皮(桜皮)，サクランボ，ザクロ，ササ，ササノユキ，ササユリ(百合)，サザンカ，サジオモダカ(沢瀉)，サツマイモ，サトウキビ，サトウダイコン，サネカズラ，サネブトナツメ(酸棗仁)，サフラン(番紅花，西紅花)，ザボン果実，サボンソウ，サーモンベリー果実，サラシナショウマ(升麻)，サルビア，サワギキョウ(山梗菜)，サワグルミ葉，サンキライ(山帰来)，サンザシ(山査子)，サンシチニンジン(三七人参)，サンシュユ(山茱萸)，サンショウ(山椒)，サンズコン(山豆根)，シア，シアノキ果実，シイタケ，ジオウ(地黄)，シオン(紫苑)，ジギタリス，シクンシ(使君子)，シシウド(羌活, 独活，唐独活)，シソ・アオジソ・チリメンジソ・カタメンジソ(紫蘇葉，紫蘇子)，シダレカンバ(白樺皮)，シタン，シナノキ，シナレンギョウ(連翹)，シマカンギク(菊花)，シモツケソウ，ジャガイモ，シャクヤク(芍薬)，シャジン(沙参)，ジャノヒゲ(麦門冬)，シラカシ種子，シロゴチョウの種子，シロバナイリス，シロバナタンポポ，シロバナツタの花，シロミナンテン(南天実)，ジュズダマ，シュロ果実，ショウガ(生姜)，ショウブ(菖蒲，菖蒲根)，ショズク果実，シラカバ，シンコナサクシルブラ，シンナモン，スイカ(西瓜)，スイカズラ(金銀花，忍冬)，スイバ(酸模)，スイムベリー果実，ストロベリー果実，スギナ(問荊)，ステビア，スモモ果実，セイヨウアカマツの球果，セイヨウオトギリソウ，セイヨウカラマツ，セイヨウキヅタ，セイヨウグルミ，セイヨウサンザシ，セイヨウタンポポ，セイヨウトチノキ，セイヨウナシ果実，セイヨウナツユキソウ，セイヨウネズ，セイヨウノコギリソウ(ミルフォイル)，セイヨウニワトコ，セイヨウネズ，セイヨウハッカ，セイヨウフウチョウボク，セイヨウヤドリギ，セイヨウヤマハッカ，セイヨウバラ，セイヨウワサビ，セキショウ(石菖根)，セージ，ゼニアオイ，セネガ，セリ，セロリ，センキュウ(川キュウ)，センダン，センナ果実又は葉，センニンソウ(大蓼)，センブリ(当薬)，ソウカ(草果)，ソバ種実，ソメモノイモ，ダイオウ(大黄)，大根，大豆，ダイダイ(橙皮，枳実)，タイム，タカトウダイ(大戟)，タカワラビ(狗脊)，ダークスィートチェリー果実，タチアオイ，タチジャコウソウ(百里香)，タチバナ(橘皮)，タチヤナギ，タマリンド種子，タマネギ，タムシバ(辛夷)，タラノキ又はその根皮，タンジン(丹参)，タンポポ(蒲公英), ダンマル，チェリー果実，チガヤ又はその根(茅根)，チクセツニンジン(竹節人参)，チコリ，チョウジ(丁子，丁香)，チョウセンゴミシ(五味子)，チョウセンダイオウ(大黄)，チョウセンニレ(蕪夷)，チョウセンニンジン(人参)，チョウセンヨモギ(艾葉)，チョレイマイタケ(猪苓)，ツキミソウ，ツバキ，ツボクサ，ツメクサ(漆姑草)，ツユクサ(鴨跖草)，ツルアズキ(赤小豆)，ツルドクダミ(何首烏)，ツルナ(蕃杏)，ツルニンジン(四葉参)，ツワブキ，デイコ，テウチグルミ，デュベリー果実，テングサ，テンダイウヤク(烏薬)，トウガ(冬瓜子)，トウガラシ(番椒)，トウキ(当帰)，トウキンセンカ，トウモロコシ又はトウモロコシ毛(南蛮毛)，トウネズミモチ(女貞子)，トウリンドウ(竜胆)，ドクダミ(十薬)，トコン(吐根)，トシシ，トチバニンジン(竹節人参)，トチュウ(杜仲，杜仲葉)，トマト，トラガント，トリアカンソス種子，トルメンチラ，ドロノキ，トロロアオイ，ナイゼリアベリー果実，ナガイモ(山薬)，ナギイカダ，ナギナタコウジュ，ナズナ，ナタネ，ナツミカン，ナツメ(大棗)，ナニワイバラ(金桜子)，ナルコユリ(黄精)，ナンキンマメ(落花生)，ナンテン(南天実)，ニガキ(苦木)，ニガヨモギ(苦艾)，ニクズク，ニッケイ(桂皮)，ニラ(韮子)，ニワトコ(接骨木)，ニンジン，ニンニク(大蒜)，ヌルデ(五倍子)，ネギ，ネナシカズラ，ノアザミ(大薊)，ノイバラ(営実)，ノコギリソウ，ノダケ(前胡)，ノバラ，ノモモ，パーム，パイナップル果実，ハイビスカス，ハカタユリ(百合)，ハカマウラボシ(骨砕補)，ハクセン(白蘚皮)，ハクルベリー果実，ハコベ(繁縷)，ハシバミ(榛子)，ハシリドコロ(ロート根)，バジル，ハス(蓮肉，蓮子)，パセリ，ハダカムギ，バタタ，ハチク(竹茹)，パチョリー，ハッカ(薄荷，薄荷葉)，ハトムギ(ヨクイニン)，ハナスゲ(知母)，バナナ，ハナハッカ，バニラビンズ，パパイヤ，ハハコグサ(鼠麹草)，ハブ草，パプリカ，ハマゴウ(蔓荊子)，ハマスゲ(香附子)，ハマビシ(シツ莉子)，ハマナス(マイ瑰花)，ハマボウフウ(浜防風)，ハマメリス，バラ(薔薇)，パリエタリア，ハルニレ(楡皮，楡白皮，楡葉)，パンノキ，ヒオウギ(射干)，ヒカゲツルニンジン(党参)，ピーカンナッツ，ヒガンバナ(石蒜，蔓珠沙華)，ヒキオコシ(延命草)，ヒシ(菱実)，ピスタチオ，ビート，ヒトツバ(石葦)，ヒナタイノコズチ(牛膝)，ビナンカズラ，ヒノキ，ヒバ，ヒマシ，ヒマワリ，ピーマン，ヒメウイキョウ，ヒメガマ(香蒲)，ヒメマツタケ，ピメンタ果実，ビャクシ，ビャッキョウ，ヒユ果実，ビロウドアオイ，ヒロハオキナグサ(白頭翁)，ヒロハセネガ(セネガ)，ビワ(枇杷，枇杷葉)，ビンロウ(大腹皮，檳榔子)，フウトウカズラ(南藤)，フウリンブッソウゲ，フキ(款冬花)，フキタンポポ(款冬花，款冬葉)，フクリンリュウゼツラン，フジバカマ(蘭草)，フジマメ(扁豆)，ブッソウゲ，ブッチャーブルーム，ブドウ果実または種皮・種子・葉，ブナ，フユムシナツクサタケ(冬虫夏草)，ブラジルカンゾウ，ブラックカーラント果実，ブラックベリー果実，プラム果実，フルセラリア，ブルーベリー果実，プルーン，ブロンドサイリウム，ブンドウ(緑豆)，ヘチマ，ベニバナ(紅花)，ヘネケン，ベラドンナ，ベリー果実，ボイセンベリー果実，ボウフウ(防風)，ホウレンソウ，ホオズキ(登呂根)，ホオノキ(厚朴，和厚朴)，ボケ(木瓜)，ホソバオケラ(蒼朮)，ホソババレンギク，ボダイジュ，ボタン(牡丹皮)，ホップ，ホホバ，ホワートルベリー果実，ホンアンズ(杏仁)，ホンシメジ，マイズルテンナンショウ(天南星)，マオウ(麻黄)，マカデミアナッツ，マクリ(海人草)，マグワ(桑葉，桑白皮)，マダケ(竹茹)，マタタビ(木天蓼)，マツカサ，マツバ(松葉),マツブサ，マツホド(茯苓)，マメダオシ，マヨラム，マリーゴールド，マルバアサガオ，マルバノジャジン(杏参)，マルベリー果実，マルメロ，マロニエ，マンゴー，マンゴスチン，マンシュウグルミ，マンダリン果実，マンネンタケ(霊芝)，マンネンロウ，ミカン属植物果実(枳実)，ミシマサイコ(柴胡)，ミゾカクシ(半辺蓮)，ミソハギ(千屈菜)，ミツガシワ，ミツバ，ミツバハマゴウ(蔓荊子)，ミドリハッカ，ミモザ，ミョウガ，ミラクルフルーツ果実，ミルラ，ミロバラン，ムクゲ(木槿)，ムクノキ，ムクロジ，ムラサキ(紫根)，ムラサキトウモロコシ，メハジキ(益母草)，メボウキ，メラロイカ，メリッサ，メリロート，メロン果実，モウコタンポポ，モウコヨモギ，モウソウチク，モクレン(辛夷)，モッコウ(木香)，モミジバダイオウ，モモの果実・種(桃仁)又は葉(桃葉)，モヤシ，モレロチェリー果実，モロヘイヤ(黄麻)，ヤカワムラサキイモ，ヤクチ(益智)，ヤグルマギク，ヤグルマソウ，ヤグルマハッカ，ヤシャブシ（矢車），ヤチヤナギ，ヤツデ(八角金盤)，ヤドリギ(柳寄生)，ヤナギタデの葉，ヤブガラシ，ヤブコウジ(紫金牛)，ヤマゴボウ(商陸)，ヤマノイモ(山薬)，ヤマハンノキ(山榛)，ヤマモモ(楊梅皮)，ヤマヨモギ，ユーカリ，ユッカ・ブレビフォリア，ユキノシタ(虎耳草)，ユズ果実，ユリ，ヨモギ(艾葉)，ヨロイグサ，ライム果実，ライムギ，落花生，ラカンカ果実，ラズベリー葉・果実，ラベンダー，リュウガン(竜眼肉)，リョクチャ(緑茶)，リンゴ果実，リンドウ，ルバス・スアビシムス(甜涼)，レタス，レッドカーラント果実，レモン果実，レモングラス，レンギョウ(連翹)，レンゲソウ，ロウヤシ，ローガンベリー果実，ログウッド，ローズヒップ，ローズマリー，ローゼル，ローマカミツレ，ワカメ，ワサビ，ワレモコウ(地楡)などがある。
【００３４】
また動物系原料由来の素材としては、鶏冠抽出物，牛・人の胎盤抽出物，豚・牛の胃や十二指腸あるいは腸の抽出物若しくはその分解物，豚・牛の脾臓の抽出物若しくはその分解物，豚・牛の脳細胞の抽出物若しくはその分解物，水溶性コラーゲン，アシル化コラーゲン等のコラーゲン誘導体，コラーゲン加水分解物，エラスチン，エラスチン加水分解物，水溶性エラスチン誘導体，ケラチン及びその分解物，シルク蛋白およびその分解物，豚・牛血球蛋白分解物（グロビンペプチド），豚・牛ヘモグロビン分解物（ヘミン，ヘマチン，ヘム，プロトヘム，ヘム鉄等），カゼイン分解物，鶏卵，魚肉およびその分解物など。
【００３５】
[14]微生物培養代謝物
酵母代謝物，酵母菌抽出エキス，米発酵エキス，米糠発酵エキス，ユーグレナ抽出物，脱脂粉乳の乳酸発酵物やトレハロースまたはその誘導体など。
【００３６】
[15]α−ヒドロキシ酸
グリコール酸，クエン酸，リンゴ酸，酒石酸，乳酸など。
【００３７】
[16]無機顔料
無水ケイ酸，ケイ酸マグネシウム，タルク，カオリン，ベントナイト，マイカ，雲母チタン，オキシ塩化ビスマス，酸化ジルコニウム，酸化マグネシウム，酸化亜鉛，酸化チタン，炭酸カルシウム，炭酸マグネシウム，黄酸化鉄，ベンガラ，黒酸化鉄，グンジョウ，酸化クロム，水酸化クロム，カーボンブラック，カラミンなど。
【００３８】
[17]紫外線吸収剤／遮断剤
ｐ−アミノ安息香酸誘導体，サルチル酸誘導体，アントラニル酸誘導体，クマリン誘導体，アミノ酸系化合物，ベンゾトリアゾール誘導体，テトラゾール誘導体，イミダゾリン誘導体，ピリミジン誘導体，ジオキサン誘導体，カンファー誘導体，フラン誘導体，ピロン誘導体，核酸誘導体，アラントイン誘導体，ニコチン酸誘導体，ビタミンＢ6誘導体，オキシベンゾン，ベンゾフェノン，アルブチン，グアイアズレン，シコニン，バイカリン，バイカレイン，ベルベリン, ネオヘリオパン，ウロカニン酸誘導体，エスカロール，酸化亜鉛，タルク，カオリンなど。
【００３９】
[18]Ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ活性阻害剤
アスコルビン酸又はその誘導体，ハイドロキノン又はその配糖体，コウジ酸又はその誘導体，胎盤エキス，シルクペプチド，植物エキス（クワ，トウキ，ワレモコウ，クララ，ヨモギ，スイカズラ，キハダ，ドクダミ，マツホド，ハトムギ，オドリコソウ，ホップ，サンザシ，ユーカリ，セイヨウノコギリソウ，アルテア，ケイヒ，マンケイシ，ハマメリス，ヤマグワ，延命草，桔梗，トシシ，続随子，射干，麻黄，センキュウ，ドッカツ，サイコ，ボウフウ，ハマボウフウ，オウゴン，牡丹皮，シャクヤク，ゲンノショウコ，葛根，甘草，五倍子，アロエ，ショウマ，紅花，緑茶，紅茶，阿仙薬など）。
【００４０】
[19]メラニン色素還元／分解
ハイドロキノンモノベンジルエーテル，フェニル水銀ヘキサクロロフェン，酸化第二水銀，塩化第一水銀，過酸化水素水，過酸化亜鉛など。
【００４１】
[20]ターンオーバーの促進作用／細胞賦活
ハイドロキノン，乳酸菌エキス，胎盤エキス，霊芝エキス，ビタミンＡ，ビタミンＥ，アラントイン，脾臓エキス，胸腺エキス，酵母エキス，発酵乳エキス，植物エキス（アロエ，オウゴン，スギナ，ゲンチアナ，ゴボウ，シコン，ニンジン，ハマメリス，ホップ，ヨクイニン，オドリコソウ，センブリ，トウキ，トウキンセンカ，アマチャ，オトギリソウ，キュウリ，タチジャコウソウ，ローズマリー，パセリなど）。
【００４２】
[21]収斂剤
乳酸，酒石酸，コハク酸，クエン酸，アラントイン，塩化亜鉛，硫酸亜鉛，酸化亜鉛，カラミン，ｐ−フェノールスルホン酸亜鉛，硫酸アルミニウムカリウム，レソルシン，塩化第二鉄，タンニン酸（カテキン化合物を含む）など。
【００４３】
[22]活性酸素消去剤
ＳＯＤ，カタラーゼ，グルタチオンパーオキシダーゼなど。
【００４４】
[23]抗酸化剤
アスコルビン酸及びその塩，ステアリン酸エステル，トコフェロール及びそのエステル誘導体，ノルジヒドログアセレテン酸，ブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ），ブチルヒドロキシアニソール（ＢＨＡ），ヒドロキシチロソール，パラヒドロキシアニソール，没食子酸プロピル，セサモール，セサモリン，ゴシポールなど。
【００４５】
[24]過酸化脂質生成抑制剤
β−カロチン，植物エキス（ゴマ培養細胞，アマチャ，オトギリソウ，ハマメリス，チョウジ，メリッサ，エンメイソウ，シラカバ，セージ，ローズマリー，南天実，キナ，エイジツ，イチョウ，緑茶など）。
【００４６】
[25]抗炎症剤
イクタモール，インドメタシン，カオリン，サリチル酸，サリチル酸ナトリウム，サリチル酸メチル，アセチルサリチル酸，塩酸ジフェンヒドラミン，ｄ又はｄｌ−カンフル，ヒドロコルチゾン，グアイアズレン，カマズレン，マレイン酸クロルフェニラミン，グリチルリチン酸及びその塩，グリチルレチン酸及びその塩など。
【００４７】
[26]殺菌・消毒薬
アクリノール，イオウ，塩化ベンザルコニウム，塩化ベンゼトニウム，塩化メチルロザニリン，クレゾール，グルコン酸カルシウム，グルコン酸クロルヘキシジン，スルファミン，マーキュロクロム，ラクトフェリン又はその加水分解物など。
【００４８】
[27]保湿剤
グリセリン，プロピレングリコール，１，３−ブチレングリコール，ヒアルロン酸又はその塩，ポリエチレングリコール，コンドロイチン硫酸又はその塩，水溶性キチン又はキトサン誘導体，乳酸ナトリウムなど。
【００４９】
[28]頭髪用剤
二硫化セレン，臭化アルキルイソキノリニウム液，ジンクピリチオン，ビフェナミン，チアントール，カスタリチンキ，ショウキョウチンキ，トウガラシチンキ，塩酸キニーネ，強アンモニア水，臭素酸カリウム，臭素酸ナトリウム，チオグリコール酸など。
【００５０】
[29]酸化剤
過酸化水素水、過硫酸ナトリウム、過硫酸アンモニウム、過ホウ酸ナトリウム、過酸化尿素、過炭酸ナトリウム、過酸化トリポリリン酸ナトリウム、臭素酸ナトリウム、臭素酸カリウム、過酸化ピロリン酸ナトリウム、過酸化オルソリン酸ナトリウム、ケイ酸ナトリウム過酸化水素付加体、硫酸ナトリウム塩化ナトリウム過酸化水素付加体、β−チロシナーゼ酵素液、マッシュルーム抽出液など。
【００５１】
[30]染料剤
５−アミノオルトクレゾール，２−アミノ−４−ニトロフェノール，２−アミノ−５−ニトロフェノール，１−アミノ−４−メチルアミノアントラキノン，３，３′−イミノジフェノール，塩酸２，４−ジアミノフェノキシエタノール，塩酸２，４−ジアミノフェノール，塩酸トルエン−２，５−ジアミン，塩酸ニトロパラフェニレンジアミン，塩酸パラフェニレンジアミン，塩酸Ｎ−フェニルパラフェニレンジアミン，塩酸メタフェニレンジアミン，オルトアミノフェノール，酢酸Ｎ−フェニルパラフェニレンジアミン，１，４−ジアミノアントラキノン，２，６−ジアミノピリジン，１，５−ジヒドロキシナフタレン，トルエン−２，５−ジアミン，トルエン−３，４−ジアミン，ニトロパラフェニレンジアミン，パラアミノフェノール，パラニトロオルトフェニレンジアミン，パラフェニレンジアミン，パラメチルアミノフェノール，ピクラミン酸，ピクラミン酸ナトリウム，Ｎ，′Ｎ−ビス（４−アミノフェニル）−２，５−ジアミノ−１，−４−キノンジイミン，５−（２−ヒドロキシエチルアミノ）−２−メチルフェノール，Ｎ−フェニルパラフェニレンジアミン，メタアミノフェノール，メタフェニレンジアミン，硫酸５−アミノオルトクレゾール，硫酸２−アミノ−５−ニトロフェノール，硫酸オルトアミノフェノール，硫酸オルトクロルパラフェニレンジアミン，硫酸４，４′−ジアミノジフェニルアミン，硫酸２，４−ジアミノフェノール，硫酸トルエン−２，５−ジアミン，硫酸ニトロパラフェニレンジアミン，硫酸パラアミノフェノール，硫酸パラニトロオルトフェニレンジアミン，硫酸パラニトロメタフェニレンジアミン，硫酸パラフェニレンジアミン，硫酸パラメチルアミノフェノール，硫酸メタアミノフェノール，硫酸メタフェニレンジアミン，カテコール，ジフェニルアミン，α−ナフトール，ヒドロキノン，ピロガロール，フロロログルシン，没食子酸，レゾルシン，タンニン酸，２−ヒドロキシ−５−ニトロ−２′，４′−ジアミノアゾベンゾゼン−５′−スルホン酸ナトリウム，ヘマテインなど。
【００５２】
[31]香料
ジャコウ，シベット，カストリウム，アンバーグリスなどの天然動物性香料、アニス精油，アンゲリカ精油，イランイラン精油，イリス精油，ウイキョウ精油，オレンジ精油，カナンガ精油，カラウェー精油，カルダモン精油，グアヤクウッド精油，クミン精油，黒文字精油，ケイ皮精油，シンナモン精油，ゲラニウム精油，コパイババルサム精油，コリアンデル精油，シソ精油，シダーウッド精油，シトロネラ精油，ジャスミン精油，ジンジャーグラス精油，杉精油，スペアミント精油，西洋ハッカ精油，大茴香精油，チュベローズ精油，丁字精油，橙花精油，冬緑精油，トルーバルサム精油，バチュリー精油，バラ精油，パルマローザ精油，桧精油，ヒバ精油，白檀精油，プチグレン精油，ベイ精油，ベチバ精油，ベルガモット精油，ペルーバルサム精油，ボアドローズ精油，芳樟精油，マンダリン精油，ユーカリ精油，ライム精油，ラベンダー精油，リナロエ精油，レモングラス精油，レモン精油，ローズマリー精油，和種ハッカ精油などの植物性香料、その他合成香料など。
【００５３】
[32]色素・着色剤
赤キャベツ色素，赤米色素，アカネ色素，アナトー色素，イカスミ色素，ウコン色素，エンジュ色素，オキアミ色素，柿色素，カラメル，金，銀，クチナシ色素，コーン色素，タマネギ色素，タマリンド色素，スピルリナ色素，ソバ全草色素，チェリー色素，海苔色素，ハイビスカス色素，ブドウ果汁色素，マリーゴールド色素，紫イモ色素，紫ヤマイモ色素，ラック色素，ルチンなど。
【００５４】
[33]甘味料
砂糖，甘茶，果糖，アラビノース，ガラクトース，キシロース，ステビア，マンノース，エリスリトール，麦芽糖，蜂蜜，ブドウ糖，ミラクリン，モネリン，甘草抽出物など。
【００５５】
[34]栄養強化剤
貝殻焼成カルシウム，シアノコラバミン，酵母，小麦胚芽，卵黄粉末，ヘミセルロース,ヘム鉄など）
【００５６】
[35]乳製品
牛乳，チーズ，生クリーム，バター，マーガリン，粉乳，ホエー，練乳など。
【００５７】
[36]その他
保湿剤、ホルモン類、金属イオン封鎖剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、防腐・防バイ剤、清涼剤、安定化剤、乳化剤、動・植物性蛋白質及びその分解物、動・植物性多糖類及びその分解物、動・植物性糖蛋白質及びその分解物、血流促進剤、消炎剤・抗アレルギー剤、細胞賦活剤、角質溶解剤、創傷治療剤、増泡剤、増粘剤、口腔用剤、消臭・脱臭剤、苦味料、調味料、酵素などが上げられ、これらとの併用によって、相加的及び相乗的な効果が期待できる。
【００５８】
以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
【００５９】
【実施例】
バッチ法による製造法
１００ｋｇ飽和塩化カルシウム溶液と絹蛋白質２０ｋｇを反応釜に入れ、約１００℃に昇温して溶解した。次いで３７℃まで冷却し、逆浸透膜にて脱塩した後、ｐＨ７で２４時間トリプシンを作用させた。再び９０℃で１時間加熱して酵素を失活させた後、遠心分離し沈殿を除去した。これを凍結乾燥して約１０Ｋｇのパウダーを得た。次いでこれを少量の精製水に溶かし、カラム分画により５つのフラクションを得た（図１）。
【００６０】
［カラム分画条件］
樹脂：Sephadex G-25 fine（ファルマシア社製）
カラムサイズ：φ２．６ｃｍ×９１ｃｍ
溶出液：０．４％炭酸アンモニウム
流量：１．０ｍｌ／分
【００６１】
別に行った、既知分子量物質による較正曲線（図２）により、絹蛋白質分解物は分子量３００〜５，０００であると推定した。
【００６２】
以下、本発明により得られた免疫賦活剤の免疫賦活作用、抗酸化作用、抗発癌プロモーション作用について説明する。
【００６３】
【実施例】
免疫賦活作用の評価
マウスの腹腔内に、５％羊赤血球浮遊液０．５ｍｌを投与、４日後に脾臓を摘出し脾臓細胞浮遊液（２×１０⁶ 個／０．２ｍｌ）を調整した。この浮遊液に被験物質を添加し３７℃で２４時間培養し、培養液中に産生される羊赤血球に対する抗体量を測定した。抗体量の測定は、培養上清液５０μｌにベロナール緩衝液４５０μｌを加え、さらに、１．７％羊赤血球溶液及び１／２５希釈補体溶液を各々５００μｌ加え３７℃で１時間反応させた。これにより、培養上清液中に存在する抗体量に比例して溶血が起こり、溶血により生じたヘモグロビン量の評価を波長５４０ｎｍでの吸光度を測定することにより行った。結果は、５４０ｎｍでの吸光度を被験物質を添加しない対照の吸光度で除した値で示した。従って、値が１より大きいほど抗体産生能に対する効果が大きいことを表す。本発明による絹蛋白質分解物と、これをカラム分画して得られた５画分の抗体産生能に対する効果を上記のように調べ、その結果を表１に示した。
【００６４】
【表１】

【００６５】
表１に示したように、絹蛋白質分解物は低濃度から抗体産生能を高める効果が見られ、カラム画分ではＦｒ３と４に顕著な効果が認められた。特にＦｒ３は１μｇ／ｍｌという低濃度でも被験物質を加えない対照の１．６５倍という強い効果を示した。これら２画分以外も、弱いながらも効果が認められ、絹蛋白質分解物中には抗体産生能を高めるペプチドが多種類存在することが示された。
【００６６】
【実施例】
抗酸化作用の評価
ブラックマイクロプレ−ト（スミロン社製）に精製水１００μｌ／ｗｅｌｌ分注し、適宜希釈した試料２０μｌ、２０，０００倍希釈した西洋ワサビ製パーオキシダーゼ（ＨＲＰ：タゴ社製）２５μｌを添加し攪はんした。更に、発光試薬Ｂ（発光試薬セット：和光純薬工業（株）製）を２５μｌ添加し再度攪はんした。ブラックマイクロプレートを化学発光測定装置（ルミネッセンサーＪＮＲＡＢ−２１００：アトー社製）にセットし、装置付属のポンプで発光試薬２５μｌを添加と同時に発光量を２０秒間測定した。試料を加えないときの発光量から試料を加えたときの発光量を減じ、更にそれを、試料を加えないときの発光量で割ることにより、化学発光抑制率を算出した。本発明で得られた絹蛋白質分解物の抗酸化作用を上記のように評価し、その結果を図３に示した。また、用いた絹蛋白質分解物量と化学発光抑制率の相関式から５０％抑制量（ＩＣ50）を算出し、同様に求めた５画分の値と共に表２に示した。
【００６７】
【表２】

【００６８】
絹蛋白質分解物は２５．２μｇで、発生する活性酸素の５０％を消去する作用を有し、カラム画分では最も低分子量であるＦｒ５が７．３μｇと強い抗酸化作用を示した。その他の画分も程度の差はあるものの、抗酸化作用を有することが判明した。
【００６９】
【実施例】
抗発癌プロモーション作用の評価
H.Tokuda et al.の方法（Cancer Lett.,40,309(1988)）によるエプスタイン−バールウイルス早期抗原（ＥＢＶ−ＥＡ）発現抑制試験により評価した。つまり、上咽頭癌患者由来でＥＢウイルスが潜在感染しているラジ細胞は、発癌プロモーターを作用させるとＥＢウイルスが活性化され早期抗原（ＥＡ）を産生する。このＥＡ産生細胞数を計数することで発癌プロモーション作用を評価することが出来る。また、この時共存させることにより典型的発癌プロモーターである１２−Ｏ−テトラデカノイルフォルボール−１３−アセテート（ＴＰＡ）によるＥＢウイルスの活性化を抑制しＥＡ産生細胞数を減少させる物質を、抗発癌プロモーターと、その作用を抗発癌プロモーション作用と評価できる。上記方法により実施した、絹蛋白質分解物の発癌プロモーション作用の評価結果を示した（表３）。
【００７０】
【表３】

【００７１】
表中の値は、ＴＰＡ（２０ｎｇ／ｍｌ）を作用させ２４時間培養後、全細胞に占めるＥＡ産生細胞の割合を１００とするとき、同系中に被験物質を添加したときのそれに対する割合を示す。絹蛋白質分解物は低濃度から抗発癌プロモーション作用を示し、１０μｇ／ｍｌで２１．６％に、１００μｇ／ｍｌでは細胞毒性が見られるもののＴＰＡによって誘発されるＥＢウイルスの活性化を完全に阻止した。このことは、絹蛋白質分解物はＴＰＡによる発癌プロモーション作用を抑制すること、つまり、抗発癌プロモーション作用を有する抗発癌プロモーターであると評価される。
【００７２】
【実施例】
安全性試験
1)皮膚一次刺激性試験
本発明による絹蛋白質分解物を、各２ｗ／ｖ％濃度の水溶液に調整し、背部を除毛したハートレー系モルモット（１群５匹，体重３２０ｇ前後）の皮膚に貼付した。判定は、貼付後２４時間に一次刺激性の評点法により紅斑および浮腫を指標として行った。
【００７３】
その結果、すべての動物において、何等、紅斑および浮腫を認めず陰性と判定された。
【００７４】
【実施例】
安全性試験
2)皮膚累積刺激性試験
本発明による絹蛋白質分解物を、固形分として２ｗ／ｖ％濃度の水溶液に調整し、側腹部を除毛したハートレー系モルモット（雌性，１群５匹，体重３２０ｇ前後）の皮膚に１日１回の頻度で、週５回，動物当り０．５ｍｌを塗布した。塗布は、４週にわたって、また除毛は各週の最終塗布日に行った。判定は、各週の最終日の翌日に一次刺激性の評点法により、紅斑および浮腫を指標として行った。その結果、すべての動物において、塗布後１〜４週目にわたって、何等紅斑および浮腫を認めず陰性と判定された。
【００７５】
【実施例】
安全性試験
3)急性毒性試験
本発明による絹蛋白分解物を、試験前、４時間絶食させたｄｄｙ系マウス（雌性，１群５匹，体重２８ｇ）に２，０００ｍｇ／ｋｇ量経口投与し、毒性症状の発現、程度などを経時的に観察した。その結果、すべてのマウスにおいて１４日間何等異常を認めず、また解剖の結果も異常がなかった。ＬＤ５０は２，０００ｍｇ／ｋｇ以上と判定された。
【００７６】
【実施例】
各種食用組成物の製造
本発明による免疫賦活剤を使用し、各種食用組成物を製造した。以下にその参考処方例を示す。
【００７７】
1)健康向け食品（錠剤）
次の添加物を含有する組成物を打錠し、錠剤とした。
重量％
１．絹蛋白質分解物の乾燥末１０
２．植物抽出末（ドクダミ，ニンジン，シソ）３０
３．ローヤルゼリー粉末５
４．コラーゲン末５
５．乳糖２５
６．トウモロコシデンプン２０
７．ヒドロキシプロピルセルロース４
８．ステアリン酸マグネシウム１
【００７８】
2)健康向け飲料
次の処方により健康飲料を製した。
重量％
１．絹蛋白質分解物の乾燥末４
２．ハチミツ１５
３．クエン酸０.１
４．ｄｌ−リンゴ酸０.１
５．植物抽出液（クロレラ，シンナモン）２０
６．Ｄ−ソルビトール液(70％) １０
７．安息香酸ナトリウム０.０５
８．香料適量
９．精製水１００とする残余
【００７９】
3)果汁飲料
次の処方により果汁飲料を製した。
重量％
１．ブドウ糖液糖３３
２．グレープフルーツ果汁６５
３．絹蛋白質分解物の乾燥末０.５
４．香料適量
５．酸味料適量
【００８０】
【実施例】
各種化粧料組成物の製造
本発明による免疫賦活剤を使用し、各種化粧料組成物を製造した。以下にその参考処方例を示す。
【００８１】
1)ローションの製造例
次の処方によりローションを製造した。
重量％
１．ソルビット２
２．１,３−ブチレングリコール２
３．ポリエチレングリコール1000 １
４．ポリオキシエチレンオレイルエーテル（25E.O.）２
５．エタノール１０
６．絹蛋白質分解物の乾燥末１
７．植物抽出液（アロエ，ハマメリス）３
８．pH調整剤適量
９．防腐剤適量
10．精製水１００とする残余
【００８２】
2)乳液の製造例
次の処方により乳液を製造した。
重量％
１．スクワラン３
２．ワセリン１
３．ステアリルアルコール０.３
４．ソルビタンモノステアレート１.５
５．ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレート３
６．１,３−ブチレングリコール５
７．絹蛋白質分解物の乾燥末０.５
８．水溶性コラーゲン１
９．防腐剤適量
10．精製水１００とする残余
【００８３】
3)クリームの製造例
次の処方によりクリームを製造した。
重量％
１．スクワラン２０
２．ミツロウ５
３．精製ホホバ油５
４．グリセリンモノステアレート２
５．ソルビタンモノステアレート２
６．ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノステアレート２
７．グリセリン５
８．絹蛋白質分解物の乾燥末０.３
９．牛胎盤エキス２
10．防腐剤適量
11．精製水１００とする残余
【００８４】
4)ボディーソープの製造例
次の処方によりボディーソープを製造した。
重量％
１．ラウリン酸カリウム１５
２．ミリスチン酸カリウム５
３．プロピレングリコール５
４．絹蛋白質分解物の乾燥末３
５．pH調整剤適量
６．防腐剤適量
７．精製水１００とする残余
【００８５】
5)シャンプー
次の処方によりシャンプーを製造した。
重量％
１．ラウリル硫酸トリエタノールアミン５
２．ポリオキシエチレンラウリルエーテル硫酸Ｎａ１２
３．１,３-ブチレングリコール４
４．ラウリン酸ジエタノールアミド２
５．エデト酸二ナトリウム０.１
６．絹蛋白質分解物の乾燥末２
７．ヒドロキシプロピルキトサン０.４
８．香料,防腐剤適量
９．精製水１００とする残余
【００８６】
6)リンス
次の処方によりリンスを製造した。
重量％
１．塩化ステアリルトリメチルアンモニウム２
２．セトステアリルアルコール２
３．ポリオキシエチレンラノリンエーテル３
４．プロピレングリコール５
５．絹蛋白質分解物の乾燥末２
６．ｐＨ調整剤適量
７．防腐剤適量
８．精製水１００とする残余
【００８７】
7)ヘアートニック
次の処方によりリンスを製造した。
重量％
１．エタノール５０
２．オレイン酸エチル１
３．ポリオキシエチレン(40)硬化ヒマシ油２
４．植物抽出液（エンメイソウ，センブリ，ハマメリス）１０
５．絹蛋白質分解物の乾燥末０.５
６．精製水１００とする残余
【００８８】
8)浴用剤（Ａタイプ）の製造例
次の処方により浴用剤を製造した。
重量％
１．炭酸水素ナトリウム５６
２．無水硫酸ナトリウム３０
３．ホウ砂２
４．絹蛋白質分解物の乾燥末１０
５．植物抽出末（カミツレ，トウキ）２
【００８９】
9)浴用剤（Ｂタイプ）の製造例
次の処方により浴用剤を製造した。
重量％
１．精製ホホバ油５
２．ポルオキシエチレンソルビタンモノラウレート２０
３．グリセリンモノステアレート５
４．流動パラフィン２
５．ラウリン酸ジエタノールアミド３
６．絹蛋白質分解物の乾燥末１０
７．植物抽出液（シャクヤク，アロエベラ，チンピ）１０
８．精製水１００とする残余
【００９０】
【発明の効果】
本発明により、絹より得られる蛋白質シルクフィブロインを加水分解して得られる、分子量３００〜５，０００のペプチドよりなる免疫賦活剤が提供された。本発明による免疫賦活剤は、食品、医薬品及び化粧品等への有効利用を図ることにより美容と健康の維持に役立つものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【図１】絹分解物のSephadex G-25 による分画チャートを示す。
【図２】既知分子量物質による分子量較正曲線を示す。
【図３】絹蛋白質分解物の抗酸化作用を示す。[0001]
  The present invention is derived from silk proteinImmunostimulatorAbout. More specifically, it can be obtained by allowing a proteolytic enzyme or the like to act on silk protein.Immunostimulant comprising a peptide having a molecular weight of 300 to 5,000 as an active ingredientIt is about.
[0002]
BACKGROUND OF THE INVENTION
  Of the present inventionImmunostimulatorHas an anti-carcinogenic promotion action in addition to an excellent immunostimulatory action that strengthens the immune function or restores the lowered immune ability.
[0003]
  According to the inventionImmunostimulatorIs extremely safe and can be formulated into daily-use product forms such as health-oriented food and drinks, luxury goods, livestock and pet feeds, and cosmetics (including bath preparations). It can be expected to have effects such as prevention, reduction or improvement of infection, autoimmune disease, allergy, arteriosclerosis, ischemic disease, aging of cells, stains and freckles. In addition, it can be formulated into oral pharmaceuticals, topical pharmaceuticals, medical preparations such as injections, infusions, suppositories, etc., and is effective in maintaining the beauty and health of humans, pet animals, etc., and improving the constitution.
[0004]
  Specific examples of food and drink applications include health-oriented food and drinks such as tablets, beverages, and granules, livestock feed, pet food, and the like for the purpose of maintaining nutrition such as nutritional supplementation (nutritional supplement).
[0005]
  Cosmetics include, for example, lotion, milky lotion, cream, ointment, shaving mousse, oil, pack, shampoo, rinse, treatment, hair tonic, hair conditioner, hair restorer, permanent solution, hair dye. Skin care and hair care preparations such as body soaps, or bath preparations (any form such as liquid, powder, granule, solid, etc. may be used).
[0006]
  In addition to these, sanitary products, wet tissue paper and paper towels, cotton, scratches, cuts, burns, scratches, inflammation, eczema, pimples, acne, rough skin, etc. It can also be applied to preparations and gauze impregnated with them, adhesive bandages, eye care agents, inhalants, mouth washes, gargles, dentifrices and the like.
[0007]
[Prior art]
  Traditionally, Western medicine has played a major role in the treatment of adult diseases such as cancer and stroke. On the other hand, dealing with such diseases in preventive medicine is becoming more and more important in the coming age.
[0008]
  We are inherently exposed to the invasion of viruses and microorganisms from the outside, and live in a situation where foreign self-substances (eg, cancer, self-dead cells, etc.) appear inside. We can survive in this situation because we have a mechanism to eliminate such foreign substances and defend ourselves. Therefore, such a decrease or abnormality in the body defense ability (immunity ability) causes various diseases.
[0009]
  Generally, stress, infectious diseases (measles, influenza, AIDS, etc.), chemical exposure, etc. are considered to be the factors that lead to such a decline in immunity, and they decrease with age.
[0010]
  On the other hand, in our eating habits, what has been seen as a problem in health management in recent years is the effect of active oxygen generated in the living body, which seems to be due to various synthetic food additives and residual agricultural chemicals. Living organisms work to remove this harmful active oxygen by enzymes, etc., but when this removal function decreases due to aging etc., even normal cells and organs may be damaged, resulting in various diseases and There are concerns about aging of the organization. For these reasons, the usefulness of foods containing a large amount of components having an antioxidant action, such as vitamin E and vitamin C, has been pointed out.
[0011]
  Furthermore, there is a high level of interest because air pollution and ozone layer destruction, which are identified as familiar environmental problems, can cause health problems. In particular, the destruction of the ozone layer increases harmful ultraviolet rays and causes serious problems such as spots, freckles, and skin cancer. For this reason, some regions encourage clothing or sunglasses that do not expose the skin as much as possible and call for protection.
[0012]
[Problems to be solved by the invention]
  The object of the present invention has been made in view of these circumstances, and is to provide a physiologically active composition useful for maintaining our beauty and health.
[0013]
[Means for Solving the Problems]
  For this reason, in the present invention,ImmunostimulatorI will provide a. It can be made from a material called silk. That is, a specific peptide obtained from this material is used as an active ingredient, and it has effects useful for maintaining beauty and health, such as an immunostimulatory action and an anti-carcinogenic promotion action.
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
  As a raw material, a protein called silk fibroin prepared from silk can be used. The production method can be produced by acid, alkali and enzyme direct or bioreactor degradation. For example, it can be manufactured as follows.
[0015]
  Silk is first heated to 80 ° C or higher and sterilized by heating. This is heated and dissolved in a high-concentration salt solution such as lithium bromide, magnesium nitrate, and calcium chloride, and then desalted by dialysis, reverse osmosis, or the like, and then a protease is allowed to act. As the proteolytic enzyme to be used, trypsin, chymotrypsin, papain, pepsin, rennin, pancreatin, elastase, carboxypeptidase, aminopeptidase, dipeptidase, alcalase, etc. can be used. In the ratio of 37 ° C. and pH 7. In that case, it decomposes | disassembles aseptically over 24 hours preferably. Thereafter, the temperature is raised to 80 ° C. or higher to inactivate the enzyme, and then centrifugal separation is performed to remove the precipitate, thereby obtaining a degradation product derived from silk protein. This is powdered by spray drying, freeze drying or the like.
[0016]
  Furthermore, it can also refine | purify by the gel filtration method and the ion exchange method according to a use. The peptide thus obtained is composed of many kinds of amino acids such as cysteine, glutamic acid, aspartic acid, lysine, arginine, glycine, alanine, leucine, and proline, and the molecular weight is mainly 300 to 5,000.
[0017]
  According to the inventionImmunostimulatorCan be used as is, but as necessary, various ingredients and additives used in pharmaceuticals, quasi-drugs, cosmetics, bath preparations, foods, beverages, etc. The products suitable for the application can be arbitrarily selected and used in combination to make each product form easy to use.
[0018]
[1] Various fats and oils
Avocado oil, almond oil, fennel oil, egoma oil, olive oil, orange oil, orange rafa oil, sesame oil, cacao butter, chamomile oil, carrot oil, cucumber oil, beef tallow, beef tallow fatty acid, cucumber nut oil, safflower oil, shea oil , Soybean oil, camellia oil, corn oil, rapeseed oil, persic oil, castor oil, cottonseed oil, peanut oil, turtle oil, mink oil, egg yolk oil, cocoa butter, palm oil, palm kernel oil, owl, palm oil, beef tallow, Pork fat, milk fat, or hydrogenated products (hardened oil, etc.) of these fats and oils.
[0019]
[2] Wax
Beeswax, carnauba wax, whale wax, lanolin, liquid lanolin, reduced lanolin, hard lanolin, candelilla wax, montan wax, shellac wax.
[0020]
[3] Mineral oil
Liquid paraffin, petrolatum, paraffin, ozokelide, ceresin, micro-cristan wax, squalene, squalane, pristane, etc.
[0021]
[4] Fatty acids
Natural fatty acids such as lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, behenic acid, oleic acid, 12-hydroxystearic acid, undecylenic acid, tall oil, lanolin fatty acid, isononanoic acid, caproic acid, 2-ethylbutanoic acid, isopentanoic acid , Synthetic fatty acids such as 2-methylpentanoic acid, 2-ethylhexanoic acid and isopentanoic acid.
[0022]
[5] alcohols
Natural alcohols such as ethanol, isopyropanol, lauryl alcohol, cetanol, stearyl alcohol, oleyl alcohol, lanolin alcohol, cholesterol and phytosterol, and synthetic alcohols such as 2-hexyldecanol, isostearyl alcohol and 2-octyldodecanol.
[0023]
[6] Polyhydric alcohols
Ethylene oxide, ethylene glycol, diethylene glycol, triethylene glycol, ethylene glycol monoethyl ether, ethylene glycol monobutyl ether, diethylene glycol monomethyl ether, diethylene glycol monoethyl ether, polyethylene glycol, propylene oxide, propylene glycol, polypropylene glycol, 1,3-butylene glycol , Glycerin, pentaerythritol, sorbitol, mannitol, etc.
[0024]
[7] Esters
Isopropyl myristate, isopropyl palmitate, butyl stearate, hexyl laurate, myristyl myristate, oleyl oleate, decyl oleate, octyldodecyl myristate, hexyldecyl dimethyloctanoate, cetyl lactate, myristyl lactate, diethyl phthalate, phthalate Dibutyl acid, lanolin acetate, ethylene glycol monostearate, propylene glycol monostearate, propylene glycol dioleate, etc.
[0025]
[8] Metal soaps
Aluminum stearate, magnesium stearate, zinc stearate, calcium stearate, zinc palmitate, magnesium myristate, zinc laurate, zinc undecylenate, etc.
[0026]
[9] Gums, sugars and water-soluble polymer compounds
Gum arabic, benzoin rubber, danmar gum, guaiac gum, Irish moss, Karaya gum, tragacanth gum, carob gum, quince seed, agar, casein, lactose, fructose, sucrose and its esters, trehalose and its derivatives, dextrin, gelatin, pectin, starch, Carrageenan, carboxymethyl chitin or chitosan, hydroxyalkyl (C2 to C4) chitin or chitosan to which alkylene (C2 to C4) oxide such as ethylene oxide is added, low molecular chitin or chitosan, chitosan salt, sulfated chitin or chitosan, phosphorus Oxidized chitin or chitosan, alginic acid and its salt, hyaluronic acid and its salt, chondroitin sulfate and its salt, heparin, ethylcellulose, methylcellulose, carboxymethylcellulose, carbo Polyethylenic oxide such as siethyl cellulose, sodium carboxyethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, nitrocellulose, crystalline cellulose, polyvinyl alcohol, polyvinyl methyl ether, polyvinyl pyrrolidone, polyvinyl methacrylate, polyacrylate, polyethylene oxide and polypropylene oxide or Its cross-linked polymer, carboxyvinyl polymer, polyethyleneimine, etc.
[0027]
[10] Surfactant
Anionic surfactant (carboxylate, sulfonate, sulfate ester salt, phosphate ester salt), cationic surfactant (amine salt, quaternary ammonium salt), amphoteric surfactant: carboxylic acid type amphoteric surfactant ( Amino type, betaine type), sulfate ester type amphoteric surfactant, sulfonic acid type amphoteric surfactant, phosphate ester type amphoteric surfactant, nonionic surfactant (ether type nonionic surfactant, ether ester type non) Ionic surfactants, ester-type nonionic surfactants, block polymer-type nonionic surfactants, nitrogen-containing nonionic surfactants), other surfactants (natural surfactants, derivatives of protein hydrolysates, Polymeric surfactants, surfactants containing titanium and silicon, fluorocarbon surfactants).
[0028]
[11] Various vitamins
Vitamin A group: retinol, retinal (vitamin A1), dehydroretinal (vitamin A2), carotene, lycopene (provitamin A), vitamin B group: thiamine hydrochloride, thiamine sulfate (vitamin B1), riboflavin (vitamin B2), Pyridoxine (vitamin B6), cyanocobalamin (vitamin B12), folic acid, nicotinic acids, pantothenic acids, biotins, choline, inositols, vitamin C group: ascorbic acid and its derivatives, vitamin D group: ergocalciferol (vitamin D2) , Cholecalciferol (vitamin D3), dihydrotaxosterol, vitamin E group: tocopherol and its derivatives, ubiquinones, vitamin K group: phytonadione (vitamin K1), menaquinone (vitamin K2), menadione (vitamin K3), me Diol (vitamin K4), other essential fatty acids (vitamin F), carnitine, ferulic acid, .gamma.-oryzanol, orotic acid, vitamin P such (rutin, eriocitrin, hesperidin), and vitamin U.
[0029]
[12] Various amino acids
Valine, leucine, isoleucine, threonine, methionine, phenylalanine, tryptophan, lysine, glycine, alanine, asparagine, glutamine, serine, cysteine, cystine, tyrosine, proline, hydroxyproline, aspartic acid, glutamic acid, hydroxylysine, arginine, ornithine, histidine And amino acid derivatives such as sulfates, phosphates, nitrates, citrates, or pyrrolidone carboxylic acids.
[0030]
[13] Various additives derived from plant or animal materials
  These are processed in a conventional manner according to the type and form of the product to be added (eg grinding, milling, washing, hydrolysis, fermentation, purification, pressing, extraction, fractionation, filtration, drying, pulverization , Granulation, dissolution, sterilization, pH adjustment, deodorization, decolorization, etc., can be arbitrarily selected and combined), and selected from various materials. The solvent used for the extraction may be selected in consideration of the intended purpose and type of the product to be provided, or the processing performed later. Usually, water, a water-soluble organic solvent (for example, ethanol, propylene glycol) , 1,3-butylene glycol, etc.) is preferably used. However, when it is not preferable to contain an organic solvent depending on the use, it is sufficient to use only water or ethanol that can be easily removed after extraction, and it may be used alone or in any mixture with water. The thing extracted and extracted may be sufficient.
[0031]
  In addition, when using additives derived from plant or animal-based raw materials for systemic or topical external preparations and cosmetics, not only the protection of skin and hair, but also moisturizing, improving touch and texture, imparting flexibility, Stimulation relaxation, stress reduction by fragrance, cell activation (cell aging prevention), suppression of inflammation, improvement of skin quality / hair quality, prevention of rough skin and its improvement, hair growth, hair growth, hair loss prevention, glossiness, cleansing effect In addition to cosmetic effects such as fatigue relief, blood flow promotion, and bathing effects, effects such as flavoring, deodorization, thickening, antiseptic, and buffering can also be expected.
[0032]
  In edible products, nutritional supplementation, fatigue recovery, tonicity, cell activation (cell aging prevention) and other health and beauty effects, as well as improved taste, color tone, aroma, gloss, stabilization, thickening, It can be used for antiseptic purposes. In addition to this, we expect various cosmetic and pharmaceutical effects of each of the raw materials known so far, and by combining these, we aim to enhance the target effect, or are multifunctional It is also possible to make the product expected to be effective.
[0033]
Specific plants (herbal medicines) used as raw materials include, for example, Ai (blue leaves), Aokazura (Keifu Fuji), Aotsuki-rafuji (Kiho-bamboo), Aonori Agave, Acacia, Akasuguri fruits, Red grapes, Akamegasiwa (red buds), Akane (茜 (grass root), red gecko (earth yellow), agi (Atsu), Akinire (crust), akebi (Kido), Asa (Asako Jin), morning glory (Toshiboshi), Ashitaba (Tomorrow), azuki (Red Azuki) , Asenyaku (Asenyaku), Acerola, Anise fruit, Abemaki fruit, Avocado, Ama, Achacha (Amacha), Achacharu, Amadokororo (Tamatake), Amigasayuri (shellfish mother), Almond (Tencho), Altea, Arnica, Aloe (蘆薈), Aloe vera, Angelica, Apricot, Ansokkou (benzoic acid), Igakozolina (Gallhead), Japanese knotweed (Tiger root), Strawberry, Fig (no flower fruit) or its leaves, Ichibi (winter lion), Ichi Yakuso, Ginkgo (Ginkgo Leaves, Ginkgo), Carpenter (Garden), Carob, Rice Seed or Seed, Inond Seed, Ikuki Sou, Nettle, Iran Iran, Fennel (Yuka), Ukiyara (Sanryo), Uguisukagura Fruit, Turmeric ( (Usukin), Usubasaishin (Spicy), Usabunia, Usubeitachiaoi, Nepenthes (Summer hay), Udo, Ume (Plum) or its flesh, Vulgari, Uwaurushi, Unsumikan (Chest), Estragon, Ezoukogi ), Echinacea (Prunus japonicus), Enoki, Ebisugusa (Keiko), Elderberry fruit, Elemi, Enju (Hanabana, Suzuka rice), Ogi (Yellow cocoon), Ouren (Yoren), Okarasuuri (Karonin), Oo Tsurugafuji (prevention), psyllium (car front child, car front grass), toucan beetle (lion lion), Ovana okera (white birch), psyllium Bushi fruit, Hawthorn (Yamako), Ohisanoyuki, Barley (barley), Oguruma (overturned), Okra fruit, Okera (white birch), Panax ginseng (carrot), Hypericum perennial (cutting grass), Odorikosou (continuous), Onamomi Child), Onigurumi, Onino Yagara (Tempa), Onyuri (Yuri), Oninos, Halibut (Shiyo), Ominaeshi (Defeated Soy Sauce), Dutch Strawberry, Dutch Pepper, Dutch Jelly, Dutch Parsley, Dutch Mitsuba, Olive, Oregano, Orange Fruit or pericarp, silkworm (mature ground yellow), seaweed [green algae, brown algae, red algae], cacao seeds, oysters or their leaves (bamboo shoots), scallops (Katsufuji potatoes), cassia, casino berries (fruit berries), gadgets (Amber), Kashiwa (Bamboo Tree, Bamboo Leaves), Cascarilla, Crab (Kinshato), Valerian (Valentine Root), Birch, Pumpkin, Capockonoki Seed, Kahoku Salamander (椒), Gama (Yellow Yellow), Chamomile, Kamiyatsude (Tongweed), Crows (Wolf), Crow Bishaku (Halfsummer), Crowed Wheat, Guarana Seed, Karaya, Karite, Karin (Kiso), Garcinia, Kawayanagi, Kawaratake, Kawara Momogi (茵 Chin 蒿), Kansui (sweet tasting), licorice (licorice), Kantara asa, candelilla, kanto, canna, kistrawberry, kiwi fruit, kikarasuuri (guro-root), kiku-kyo (kikyo, bellflower root), chrysanthemum (chrysanthemum), Catalpa (fruit), scallop (sheep), pheasant (fruit), squirrel, yellow aloe vera, yellow mint, linden, yellowfin (yellow japonicus), yellow butterfly (yellow japonicus), gymnema sylvesta, cabbage, cabbage immature fruit, cucumber, kiraja Saponaria, kiraya, kumquat fruit, betel, goldfish (Sengakurusaku), guava fruit, guayule, quercus infectria (gallicy), Cuinut, wolfberry (bamboo shoots, coconut tree, cocoon leaf, crustal skin), Japanese cedar casserole (Tenmon winter), kudu (kuzune), camphor tree, gooseberry fruit, gardenia (mountain lion), kunugi (bamboo grass), kumazasa, pine moth (horse whip) Grass), Clara (bitter gins), cranberry fruit, chestnut or its astringent skin, curkrigo latifolia fruit, watercress, grapefruit fruit, buckthorn, black-headed beetle (emergency), black-bellied kokoshi (life-prolonging grass), clove, chlorella, mulberry (mulberry leaf) , Mulberry white skin), Kay, Keigai (Kashiwa, Koho), Keishi (Katsurae), Keito (chicken flower, chicken crown), Keirinsaishin (fine spicy), bay bay (Laurel tree), Gentian, Gentianshoko ), Cilantro fruit, koshinbara (monthly flower), kouseihakka, kozo fruit, kocha (tea), kohone (river bone), kohhon (Tsubakimoto, Karatsumoto), Koryang Cilantro fruit, Cowberry (Etsutachibana), Scarlet moth (Yellow Gon), Kogomebaotogiriso, Coconut palm fruit, Goshuyu (Golden cucumber), Gaucho strawberry (Golden bonsai), Pepper (Pepper), Copaiba balsam, Coffee bean, Kobushi (Hot potato), Burdock (Beef bowl, beef eggplant), coconut lees, sesame (sesame seeds), sesame seeds (genus ginseng), garbage (goblin), wheat (wheat), rice or rice bran (red rice bran, white birch), rice oil, cola acuminata seed, cola・ Bella seeds, fenugreek fruit, colombo, conzurango, konjac, kombu, comfrey (birch grass), sisal, sisal asa, saxima buttonzul (wei Sen-sen), cherry blossoms, leaves, fruits, bark (cherry bark), cherries , Pomegranate, Sasa, Sasanoyuki, Sasayuri (Yuri), Sasanka, Sadamodaka (Sawada), Sweet potato, Sugarcane, Sugar beet, Saneka zutsu, Sanebutjutsu ), Saffron (banban flower, west red flower), pomelo fruit, savonso, salmon berry fruit, salamander, salvia, ragweed (mountain curd), sawagurumi leaf, sankirai (mountain return), hawthorn (mountain checker), sanshichi Carrot (37 ginseng), Sanshuyu (Yamamuro), Sansho (Yamamuro), Sandskon (Yamadone), Shea, Cyano fruit, Shiitake mushroom, Giant (jio yellow), Zion (purple mushroom), Digitalis, Sikunshi (Amiko), Shishiudo (Kai-Kai, Katsu-kun, Tang-zhu), Perilla, Ajizo, Chiri-miso, Katamen-jiso (Shiyo, Shiso), Weeping birch (White birch), Rosewood, Blossoms, Chinese syringa (Rhinoceros), Astragalus (Chrysanthemum), Japanese potato, Japanese potato, Peonies (glaze), shajin (shasan), janohi (wheat gate winter), shirakashi seeds, white butterfly seeds, white squirrels, white dandelion, white Natsuta flower, white minten (southern berry), juzudama, palm fruit, ginger (ginger), shobu (bamboo shoot, root), shozu fruit, birch, cinchona sill bra, cinnamon, watermelon (western bud), honeysuckle (gold and silver flower) , Shinobu), sorrel (acid model), swimberry fruit, strawberry fruit, horsetail (question), stevia, plum fruit, pine cones, Hypericum pertussis, larch, larch, ivy, walnut, hawthorn, dandelion, Horse chestnut, pear fruit, psyllium serrata, psyllium serrata, millefol, elderberry, squirrel serrata, mint moth, butterfly, mistletoe, serrata, rose, horseradish Cormorant (stone root), sage, mallow, senega, seri, celery, nematode (river cucumber), sendan, senna fruit or leaf, ginseng (large persimmon), senburi (medicinal herb), buckwheat seed, Somer potato, Daiou (daihuang), radish, soybean, Daidai (orange peel, fruit), Thyme, Takatodai (daikon), Takarabi (dark spine), dark sweet cherry fruit, hollyhock, Tachikakuso (Marika), Tachibana (Tachibana peel) ) 、 Tachiyanagi 、 Tamarind seed 、 Onion 、 Tum Shiba (Pepper) 、 Taranoki or its root bark 、 Tangine (Tanjin) 、 Tanpopo (Tongkang) 、 Danmaru 、 Cherry fruit 、 Tigaya or its root (Sone root) 、 Chixsetunjin (Bamboo ginseng) , Chicory, clove (clove, clove), ginseng (gomi), ginseng (large yellow), ginseng (carp), ginseng (carrot), chowse Japanese mugwort (bamboo leaves), choreimaitake (bamboo shoots), camellia, camellia, camellia, tsumekusa (lacquered vines), tsuyukusa (duck vines), tsurumazuki (red bean), tsurugakudami (what neck rice cake), tsuruna (bamboo apricot), tsuruninjin (Nippon ginseng), Japanese apricot, Deco, Teuchigurumi, Duberry fruit, Tengusa, Tendaiyaku (glaze), Toga (winter coconut), Pepper (Ganban), Toki (Tokai), Tokinsenka, corn or corn hair ), Japanese hornworm (Sadako), Torindo (Ryuboku), Dokudami (10 medicines), Tokon (Tongan), Toshishi, Tochibaninjin (Takebana Ginseng), Tochu (Tochu, Tochu), Tomato, Tragacanth, Triacanthus seed, Tormentilla, Dronoki, Trolley, Neiseria berry fruit, Chinese yam, Chinese cabbage, Naginata Koju, Nazuna, Rapeseed, Natsumikan, Jujube (Otsuchi), Naniwaibara (Golden Cherry), Narco Yuri (Yellow), Peanut (Peanut), Nanten (Nami Tenmi), Nigaki (Nagi), Nigorimugi (Anniversary), Nikuzuku, Nikkei (Kinshika), Japanese leek (Reiko) ), Elderberry (bone graft), carrot, garlic (large cocoon), nullde (penta), leek, pear, Japanese thistle (large moth), wild rose (fruit), yarrow, maize (frontal husk), wild rose, peach, palm, pineapple Fruit, hibiscus, lily, lily, hakama (white crust), hakusen (white husk), hakuruberry fruit, hakobe (breeding), hazel (coconut), hashiridokoro (roth root), basil, lotus (lotus, Renko), parsley, sand squirrel, batata, honeybee (patches), patchouli, mint (thin load, light load leaf), pearl barley (yokuinin), Hanasuge (knowing mother), banana, hana mint, vanilla bins, papaya, mint moth (鼠) Grass), Hubgrass, Paprika, Hamago (Vulgaria), Hamasuge (Katsukiko), Hamabishi (Shitsuko), Hamanasu (My cocoon flower), Hamaboufu (Hamafufu), Hamamelis, Rose (Rose), Parietalia, Harunire ( Husk, husk skin, cocoon leaf), breadfruit, Japanese cypress (hibuki), mushroom carrot (participant), pecan nut, ganbanana (stone wall, vine pearl shahua), hikikoshi (long life grass), Japanese cypress (hijimi), Pistachio, Beet, Hitotsuba (Ishizuchi), Hinata Taikozuchi (cow knee), Binankazura, Hinoki, Hiba, Castor, Sunflower, Pepper, Himekikyo, Himegaima (Kaori), Japanese matsutake, Pimenta fruit, Bikushi, Bikkyo, Ayu fruit Aoi, Hirohakinagusa (Bald eagle), Hiroha Senega (Senega), loquat (枇杷, 枇杷葉), betel nut (big belly skin, coconut), Futsukazura (Nanto), Furinbussouge, Ki (Fun winter flower), Fukidanpopo (Fun winter flower, Fen winter leaf), Fukurin agave, Fujibakama (Orchid), Fuji bean (Apricot), Busouge, Butcher bloom, Grape fruit or seed coat / seed / leaves, Beech ), Brazilian licorice, black currant fruit, blackberry fruit, plum fruit, fluceraria, blueberry fruit, prunes, blond psyllium, bundo (mung bean), loofah, safflower (safflower), henken, belladonna, berry fruit, boysenberry fruit, Bofu (windproof), spinach, physalis (Torone), honoki (shoku, Japanese welcoming), bokeh (wooden moss), hosobaokera (salmon), josobabarengiku, bodaiju, button (peony skin), hops, jojoba, whirlberry Fruit, Hong apricot, Honshimeji, Mizurutennansho (heaven) South star), mao (mao), macadamia nut, macri (marine grass), mugwa (mulberry leaf, mulberry white skin), mushroom (bamboo moth), matababi (wood tengu), matsukasa, matsuba (matsuba), pine bush, matsuhod (茯苓), mamedaosi, maryoram, marigold, marubaasagao, malvanojadine (apricot ginseng), mulberry fruit, quince, maronier, mango, mangosteen, mansuguru, mandarin fruit, mannentake (ganoderma), mannenro, mandarin plant fruit (枳 fruit), Mishimasaiko (Shibahu), Mizokakushi (Harenen), Misohagi (Chinese cucumber), Mitsugashiwa, Mitsuba, Mitsubahamago (Vulgaris), Midorihakka, Mimosa, Myouga, Miracle fruit fruit, Myrrh, Milobaran, Mukhuge (Kiso), Mukunoki, Mukuroji, Murasaki (purple root), Murasaki maize, Mejiki (beneficial mother grass), Mebouki, Melaroika, Me Sassa, Melilot, Melon fruit, Mouko dandelion, Mouko mugwort, Moso bamboo, magnolia (powder), mokko (woody incense), peach fruit, peach fruit / seed (peach seed) or leaf (peach leaf), coconut, morello cherry fruit, Morohaya (Yellow), Yakawamurasakiimo, Yakuchi (Masashi), Cornflower, Cornflower, Yagurumahakka, Yashabushi (Yakha), Yachiyanagi, Millipede (octagonal gold plate), Mistletoe (willow parasite), Willow tree leaf, Yabukoji (Purple gold beef), pokeweed (commercial land), Japanese yam (mountain medicine), mountain alder (mountain), bayberry (bamboo ume skin), sagebrush, eucalyptus, yucca brevifolia, yukinoshita (tiger ear grass), yuzu fruit, lily, Artemisia (bamboo leaf), euglena, lime fruit, rye, peanut, lacanca fruit, raspberry leaf / fruit, lavender, longan (longan) Ryokucha (green tea), apple fruit, gentian, lubus suabisimus (cool), lettuce, red currant fruit, lemon fruit, lemongrass, forsythia, forsythia, wax palm, loganberry fruit, logwood, rosehip, There are rosemary, roselle, roman chamomile, wakame, wasabi, and bittersweet.
[0034]
In addition, animal-derived raw materials include chicken crown extract, cattle / human placenta extract, pig / cow stomach and duodenum or intestinal extract or degradation product, pig / cow spleen extract or degradation product , Extracts of porcine and bovine brain cells or their degradation products, water-soluble collagen, collagen derivatives such as acylated collagen, collagen hydrolysates, elastin, elastin hydrolysates, water-soluble elastin derivatives, keratin and their degradation products , Silk protein and its degradation products, porcine and bovine blood cell protein degradation products (globin peptides), porcine and bovine hemoglobin degradation products (hemin, hematin, heme, protoheme, heme iron, etc.), casein degradation products, chicken egg, fish meat and its Decomposition products.
[0035]
[14] Microbial culture metabolites
Yeast metabolites, yeast extract, rice fermented extract, rice bran fermented extract, Euglena extract, lactic acid fermented milk powder or trehalose or its derivatives.
[0036]
[15] α-hydroxy acid
Glycolic acid, citric acid, malic acid, tartaric acid, lactic acid, etc.
[0037]
[16] Inorganic pigment
Silica, magnesium silicate, talc, kaolin, bentonite, mica, titanium mica, bismuth oxychloride, zirconium oxide, magnesium oxide, zinc oxide, titanium oxide, calcium carbonate, magnesium carbonate, yellow iron oxide, red iron oxide, black iron oxide , Gunjo, chromium oxide, chromium hydroxide, carbon black, calamine, etc.
[0038]
[17] UV absorber / blocker
p-aminobenzoic acid derivatives, salicylic acid derivatives, anthranilic acid derivatives, coumarin derivatives, amino acid compounds, benzotriazole derivatives, tetrazole derivatives, imidazoline derivatives, pyrimidine derivatives, dioxane derivatives, camphor derivatives, furan derivatives, pyrone derivatives, nucleic acid derivatives, Allantoin derivatives, nicotinic acid derivatives, vitamin B6 derivatives, oxybenzone, benzophenone, arbutin, guaiazulene, shikonin, baicalin, baicalein, berberine, neoheliopan, urocanic acid derivatives, escalol, zinc oxide, talc, kaolin, etc.
[0039]
[18] Tyrosinase activity inhibitor
Ascorbic acid or its derivative, hydroquinone or its glycoside, kojic acid or its derivative, placenta extract, silk peptide, plant extract (mulberry, mugwort, firewood, honeysuckle, yellowfin, dokudami, matsuhod, pearl barley, oleander, Hop, hawthorn, eucalyptus, yarrow, altea, keihi, mankeishi, hamamelis, yamagua, life-grass, bellflower, toshishi, seiyu, gyoza, mao, senkyu, dokkatsu, psycho, boufuu, hamakoufu, ogon, peonies, peonies , Gennoshouko, Kakkon, Liquorice, Pagoda, Aloe, Shouma, Safflower, Green Tea, Black Tea, Asen, etc.).
[0040]
[19] Melanin pigment reduction / degradation
Hydroquinone monobenzyl ether, phenylmercury hexachlorophene, mercuric oxide, mercuric chloride, hydrogen peroxide, zinc peroxide, etc.
[0041]
[20] Promoting turnover / cell activation
Hydroquinone, Lactic acid bacteria extract, Placenta extract, Ganoderma extract, Vitamin A, Vitamin E, Allantoin, Spleen extract, Thymus extract, Yeast extract, Fermented milk extract, Plant extract (Aloe, Ogon, Horsetail, Gentian, Burdock, Shikon, Carrot, Hamamelis, Hops, Yokuinin, Odorikosou, Assembly, Toki, Tokinsenka, Achacha, Hypericum, Cucumber, Ginger, Rosemary, Parsley, etc.).
[0042]
[21] astringent
Lactic acid, tartaric acid, succinic acid, citric acid, allantoin, zinc chloride, zinc sulfate, zinc oxide, calamine, zinc p-phenolsulfonate, potassium aluminum sulfate, resorcin, ferric chloride, tannic acid (including catechin compounds), etc. .
[0043]
[22] Active oxygen scavenger
SOD, catalase, glutathione peroxidase, etc.
[0044]
[23] antioxidants
Ascorbic acid and its salts, stearic acid ester, tocopherol and its ester derivatives, nordihydrogua ceretenoic acid, butylhydroxytoluene (BHT), butylhydroxyanisole (BHA), hydroxytyrosol, parahydroxyanisole, propyl gallate, sesamol , Sesamorin, gossypol, etc.
[0045]
[24] Lipid peroxide production inhibitor
β-carotene, plant extract (sesame cultured cells, amacha, hypericum, clams, clove, melissa, enamel, birch, sage, rosemary, nanami, kina, ages, ginkgo, green tea, etc.)
[0046]
[25] anti-inflammatory agents
Ictamol, indomethacin, kaolin, salicylic acid, sodium salicylate, methyl salicylate, acetylsalicylic acid, diphenhydramine hydrochloride, d or dl-camphor, hydrocortisone, guaiazulene, camazulene, chlorpheniramine maleate, glycyrrhizic acid and its salts, glycyrrhetinic acid and its salts, etc. .
[0047]
[26] Disinfectant / disinfectant
Acrinol, sulfur, benzalkonium chloride, benzethonium chloride, methylrosaniline chloride, cresol, calcium gluconate, chlorhexidine gluconate, sulfamine, mercurochrome, lactoferrin or hydrolysates thereof.
[0048]
[27] moisturizer
Glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, hyaluronic acid or its salt, polyethylene glycol, chondroitin sulfate or its salt, water-soluble chitin or chitosan derivative, sodium lactate and the like.
[0049]
[28] Hair preparation
Selenium disulfide, alkylisoquinolinium bromide, zinc pyrithione, biphenamine, thianthol, castari tincture, pepper tincture, chili pepper tincture, quinine hydrochloride, strong aqueous ammonia, potassium bromate, sodium bromate, thioglycolic acid, etc.
[0050]
[29] Oxidizing agent
Hydrogen peroxide solution, sodium persulfate, ammonium persulfate, sodium perborate, urea peroxide, sodium percarbonate, sodium tripolyphosphate, sodium bromate, potassium bromate, sodium pyrophosphate, sodium orthophosphate Sodium silicate hydrogen peroxide adduct, sodium sulfate sodium chloride hydrogen peroxide adduct, β-tyrosinase enzyme solution, mushroom extract and the like.
[0051]
[30] Dye agent
5-aminoorthocresol, 2-amino-4-nitrophenol, 2-amino-5-nitrophenol, 1-amino-4-methylaminoanthraquinone, 3,3'-iminodiphenol, 2,4-diaminophenoxyethanol hydrochloride , 2,4-diaminophenol hydrochloride, toluene-2,5-diamine hydrochloride, nitroparaphenylenediamine hydrochloride, paraphenylenediamine hydrochloride, N-phenylparaphenylenediamine hydrochloride, metaphenylenediamine hydrochloride, orthoaminophenol, N-phenyl acetate Paraphenylenediamine, 1,4-diaminoanthraquinone, 2,6-diaminopyridine, 1,5-dihydroxynaphthalene, toluene-2,5-diamine, toluene-3,4-diamine, nitroparaphenylenediamine, paraaminophenol P-nitroorthophenylenediamine, p-phenylenediamine, p-methylaminophenol, picramic acid, sodium picramate, N, 'N-bis (4-aminophenyl) -2,5-diamino-1, -4-quinonediimine, 5- (2-hydroxyethylamino) -2-methylphenol, N-phenylparaphenylenediamine, metaaminophenol, metaphenylenediamine, 5-aminoorcresol sulfate, 2-amino-5-nitrophenol sulfate, orthoaminophenol sulfate, Orthochloroparaphenylenediamine sulfate, 4,4'-diaminodiphenylamine sulfate, 2,4-diaminophenol sulfate, toluene-2,5-diamine sulfate, nitroparaphenylenediamine sulfate, paraaminophenol sulfate, paranitrosulfate Lutophenylenediamine, paranitrometaphenylenediamine sulfate, paraphenylenediamine sulfate, paramethylaminophenol sulfate, metaaminophenol sulfate, metaphenylenediamine sulfate, catechol, diphenylamine, α-naphthol, hydroquinone, pyrogallol, phloroglucin, gallic acid , Resorcin, tannic acid, 2-hydroxy-5-nitro-2 ', 4'-diaminoazobenzozen-5'-sodium sulfonate, hematein and the like.
[0052]
[31] Fragrance
Natural animal flavors such as musk, civet, castrium, ambergris, anise essential oil, angelica essential oil, ylang ylang essential oil, iris essential oil, fennel essential oil, orange essential oil, cananga essential oil, caraway essential oil, cardamom essential oil, guayakwood essential oil, cumin essential oil, black letter Essential oil, cinnamon essential oil, cinnamon essential oil, geranium essential oil, copaiba balsam essential oil, coriander essential oil, perilla essential oil, cedarwood essential oil, citronella essential oil, jasmine essential oil, gingergrass essential oil, cedar essential oil, spearmint essential oil, western peppermint essential oil, dairy perfume essential oil, Tuberose Essential Oil, Clove Essential Oil, Orange Flower Essential Oil, Winter Green Essential Oil, Truval Sam Essential Oil, Batule Essential Oil, Rose Essential Oil, Palmarosa Essential Oil, Agate Essential Oil, Hiba Essential Oil, Sandalwood Essential Oil, Petit Glen Essential Oil, Bay Essential Oil, Vetiver Essential Oil, Bergamot Essential Oil, Pe -Plant flavors such as balsam essential oil, boad rose essential oil, melamine essential oil, mandarin essential oil, eucalyptus essential oil, lime essential oil, lavender essential oil, linaloe essential oil, lemongrass essential oil, lemon essential oil, rosemary essential oil, Japanese mint essential oil, and other synthetic flavors .
[0053]
[32] Dyes / colorants
Red cabbage dye, red rice dye, red dye, anato dye, squid dye, turmeric dye, enju dye, krill dye, amber dye, caramel, gold, silver, gardenia dye, corn dye, onion dye, tamarind dye, spirulina dye, Whole buckwheat pigment, cherry pigment, laver pigment, hibiscus pigment, grape juice pigment, marigold pigment, purple potato pigment, purple yam pigment, lac pigment, rutin, etc.
[0054]
[33] sweeteners
Sugar, sweet tea, fructose, arabinose, galactose, xylose, stevia, mannose, erythritol, maltose, honey, glucose, miraculin, monelin, licorice extract, etc.
[0055]
[34] Nutrition enhancer
(Shell calcined calcium, cyanocolabamine, yeast, wheat germ, egg yolk powder, hemicellulose, heme iron, etc.)
[0056]
[35] Dairy products
Milk, cheese, fresh cream, butter, margarine, powdered milk, whey, condensed milk, etc.
[0057]
[36] Other
Moisturizers, hormones, sequestering agents, pH adjusters, chelating agents, antiseptic and antibacterial agents, cooling agents, stabilizers, emulsifiers, animal and vegetable proteins and their degradation products, animal and vegetable polysaccharides and Decomposition product, animal / plant glycoprotein and decomposition product, blood flow promoter, anti-inflammatory agent / antiallergic agent, cell activator, keratolytic agent, wound treatment agent, foam enhancer, thickener, oral preparation Deodorizing / deodorizing agents, bittering agents, seasonings, enzymes, and the like can be raised, and additive and synergistic effects can be expected when used in combination.
[0058]
  EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention concretely, this invention is not limited at all by these.
[0059]
【Example】
Manufacturing method by batch method
  A 100 kg saturated calcium chloride solution and 20 kg of silk protein were placed in a reaction kettle and heated to about 100 ° C. to dissolve. Subsequently, after cooling to 37 ° C. and desalting with a reverse osmosis membrane, trypsin was allowed to act at pH 7 for 24 hours. After heating again at 90 ° C. for 1 hour to inactivate the enzyme, centrifugation was performed to remove the precipitate. This was freeze-dried to obtain about 10 kg of powder. Next, this was dissolved in a small amount of purified water, and five fractions were obtained by column fractionation (FIG. 1).
[0060]
  [Column fractionation conditions]
      Resin: Sephadex G-25 fine (Pharmacia)
      Column size: φ2.6cm × 91cm
      Eluent: 0.4% ammonium carbonate
      Flow rate: 1.0 ml / min
[0061]
  Separately, a silk protein degradation product was estimated to have a molecular weight of 300 to 5,000 from a calibration curve (FIG. 2) with known molecular weight substances.
[0062]
  Hereinafter, obtained by the present inventionImmunostimulatorThe immunostimulatory action, antioxidant action, and anti-carcinogenic promotion action will be described.
[0063]
【Example】
Evaluation of immunostimulatory effect
  0.5 ml of 5% sheep erythrocyte suspension was intraperitoneally injected into the mouse, and after 4 days, the spleen was removed and the spleen cell suspension (2 × 10⁶ Pieces / 0.2 ml). A test substance was added to this suspension and cultured at 37 ° C. for 24 hours, and the amount of antibody against sheep erythrocytes produced in the culture was measured. The antibody amount was measured by adding 450 μl of veronal buffer to 50 μl of the culture supernatant, adding 500 μl each of 1.7% sheep erythrocyte solution and 1/25 diluted complement solution, and reacting at 37 ° C. for 1 hour. As a result, hemolysis occurred in proportion to the amount of antibody present in the culture supernatant, and the amount of hemoglobin generated by the hemolysis was evaluated by measuring the absorbance at a wavelength of 540 nm. The result was shown as a value obtained by dividing the absorbance at 540 nm by the absorbance of a control to which no test substance was added. Therefore, the larger the value is, the greater the effect on antibody production ability. The silk protein degradation product according to the present invention and the effects on the antibody-producing ability of 5 fractions obtained by column fractionation were examined as described above, and the results are shown in Table 1.
[0064]
[Table 1]

[0065]
As shown in Table 1, the silk protein degradation product showed an effect of increasing the antibody production ability from a low concentration, and a remarkable effect was observed in Fr3 and 4 in the column fraction. In particular, Fr3 showed a strong effect of 1.65 times that of a control in which no test substance was added even at a low concentration of 1 μg / ml. In addition to these two fractions, a weak but effective effect was observed, and it was shown that many kinds of peptides that enhance antibody production ability exist in the silk protein degradation product.
[0066]
【Example】
Evaluation of antioxidant effect
Dispense 100 μl / well of purified water into a black microplate (manufactured by Sumilon), add 20 μl of appropriately diluted sample, and 25 μl of horseradish peroxidase (HRP: manufactured by Tago) diluted 20,000 times. I did. Further, 25 μl of Luminescent Reagent B (Luminescent Reagent Set: Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) was added and stirred again. The black microplate was set in a chemiluminescence measuring device (Luminescence sensor JNR AB-2100: manufactured by Atto Corporation), and 25 μl of a luminescent reagent was added with a pump attached to the device, and simultaneously the luminescence was measured for 20 seconds. The chemiluminescence inhibition rate was calculated by subtracting the light emission amount when the sample was added from the light emission amount when the sample was not added and dividing it by the light emission amount when the sample was not added. The antioxidant activity of the silk protein degradation product obtained in the present invention was evaluated as described above, and the results are shown in FIG. In addition, a 50% inhibition amount (IC50) was calculated from the correlation equation between the amount of silk protein degradation product used and the chemiluminescence inhibition rate, and the values are shown in Table 2 together with the values of 5 fractions obtained in the same manner.
[0067]
[Table 2]

[0068]
The silk protein degradation product was 25.2 μg and had the effect of erasing 50% of the generated active oxygen, and Fr5, which is the lowest molecular weight in the column fraction, showed a strong antioxidant effect of 7.3 μg. The other fractions were also found to have antioxidant effects, although to varying degrees.
[0069]
【Example】
Evaluation of anti-carcinogenic promotion effect
It was evaluated by an Epstein-Barr virus early antigen (EBV-EA) expression suppression test by the method of H. Tokuda et al. (Cancer Lett., 40, 309 (1988)). In other words, raji cells derived from patients with nasopharyngeal cancer and latently infected with the EB virus activate the EB virus and produce an early antigen (EA) when an oncogenic promoter is acted on. Carcinogenic promotion action can be evaluated by counting the number of EA producing cells. In addition, a substance that suppresses activation of EB virus by 12-O-tetradecanoyl phorbol-13-acetate (TPA), which is a typical tumor promoter, and decreases the number of EA-producing cells by coexisting at this time, Carcinogenic promoter and its action can be evaluated as an anti-carcinogenic promotion action. The evaluation result of the carcinogenic promotion effect | action of the silk protein degradation material implemented by the said method was shown (Table 3).
[0070]
[Table 3]

[0071]
  The values in the table indicate the ratio of the EA-producing cells to the total when the test substance is added to the same strain when the ratio of EA-producing cells to all cells is 100 after 24 hours of incubation with TPA (20 ng / ml). . Silk protein degradation product showed anti-carcinogenic promotion effect from low concentration, 21.6% at 10 μg / ml, and completely blocked TPA-induced EB virus activation at 100 μg / ml although cytotoxicity was observed . This is evaluated that the silk protein degradation product suppresses the carcinogenic promotion action by TPA, that is, is an anti-carcinogenic promoter having an anti-carcinogenic promotion action.
[0072]
【Example】
Safety test
1) Skin primary irritation test
The silk protein degradation product according to the present invention was adjusted to an aqueous solution having a concentration of 2 w / v each, and applied to the skin of a Hartley guinea pig (5 mice per group, weight of about 320 g) with hair removed on the back. Judgment was performed 24 hours after application using the primary irritation scoring method with erythema and edema as indices.
[0073]
  As a result, in all animals, no erythema and edema were observed, and it was judged negative.
[0074]
【Example】
Safety test
2) Cumulative skin irritation test
The silk protein degradation product according to the present invention was adjusted to a 2 w / v% concentration aqueous solution as a solid content, and the skin of a Hartley guinea pig (female, 5 mice per group, around 320 g body weight) whose hair was removed on the flank 1 daily. 0.5 ml per animal was applied 5 times a week. Application was performed over 4 weeks, and hair removal was performed on the last application day of each week. Judgment was performed on the day after the last day of each week by using the primary irritation scoring method with erythema and edema as indices. As a result, in all animals, no erythema and edema were observed for 1 to 4 weeks after application.
[0075]
【Example】
Safety test
3) Acute toxicity test
The silk protein degradation product according to the present invention was orally administered to a ddy mouse (female, 5 mice per group, body weight 28 g) fasted for 4 hours before the test to determine the onset and degree of toxic symptoms. Observed over time. As a result, no abnormality was observed in all mice for 14 days, and the results of dissection were not abnormal. The LD50 was determined to be 2,000 mg / kg or more.
[0076]
【Example】
Manufacture of various edible compositions
According to the inventionImmunostimulatorUsing this, various edible compositions were produced. The reference prescription example is shown below.
[0077]
1) Health food (tablets)
The composition containing the following additives was compressed into tablets.
                                                            weight%
        1. Dry powder of silk protein breakdown product 10
        2. Plant extract powder (Dokudami, carrot, perilla) 30
        3. Royal jelly powder 5
        4). Collagen powder 5
        5. Lactose 25
        6). Corn starch 20
        7). Hydroxypropyl cellulose 4
        8). Magnesium stearate 1
[0078]
2) Health drink
A health drink was prepared according to the following prescription.
                                                            weight%
        1. Dried powder of silk protein breakdown product 4
        2. Honey 15
        3. Citric acid 0.1
        4). dl-malic acid 0.1
        5. Plant extract (chlorella, cinnamon) 20
        6). D-sorbitol solution (70%) 10
        7). Sodium benzoate 0.05
        8). Perfume
        9. Residue with 100 purified water
[0079]
3) Fruit juice drink
A juice drink was prepared according to the following prescription.
                                                            weight%
        1. Glucose liquid sugar 33
        2. Grapefruit juice 65
        3. Dry powder of silk protein degradation product 0.5
        4). Perfume
        5. Sour seasoning
[0080]
【Example】
Manufacture of various cosmetic compositions
  According to the inventionImmunostimulatorVarious cosmetic compositions were produced using The reference prescription example is shown below.
[0081]
1) Lotion production example
A lotion was prepared according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Sorbit 2
        2.1,3-Butylene glycol 2
        3. Polyethylene glycol 1000 1
        4). Polyoxyethylene oleyl ether (25E.O.) 2
        5. Ethanol 10
        6). Dry powder of silk protein degradation product 1
        7). Plant extract (Aloe, Hamamelis) 3
        8). pH adjuster
        9. Preservative appropriate amount
        Ten. Residue with 100 purified water
[0082]
2) Example of milk production
An emulsion was prepared according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Squalane 3
        2. Vaseline 1
        3. Stearyl alcohol 0.3
        4). Sorbitan monostearate 1.5
        5. Polyoxyethylene (20) sorbitan monooleate 3
        6.1,3-Butylene glycol 5
        7). Dry powder of silk protein degradation product 0.5
        8). Water-soluble collagen 1
        9. Preservative appropriate amount
        Ten. Residue with 100 purified water
[0083]
3) Example of cream production
A cream was prepared according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Squalane 20
        2. Beeswax 5
        3. Refined jojoba oil 5
        4). Glycerol monostearate 2
        5. Sorbitan monostearate 2
        6). Polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate 2
        7). Glycerin 5
        8). Dry powder of silk protein degradation product 0.3
        9. Cow placenta extract 2
        Ten. Preservative appropriate amount
        11． Residue with 100 purified water
[0084]
4) Manufacturing example of body soap
A body soap was produced according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Potassium laurate 15
        2. Potassium myristate 5
        3. Propylene glycol 5
        4). Dry powder of silk protein degradation product 3
        5. pH adjuster
        6). Preservative appropriate amount
        7). Residue with 100 purified water
[0085]
5) Shampoo
A shampoo was produced according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Lauryl sulfate triethanolamine 5
        2. Polyoxyethylene lauryl ether sulfate Na 12
        3.1,3-Butylene glycol 4
        4). Lauric acid diethanolamide 2
        5. Edetate disodium 0.1
        6). Dry powder of silk protein degradation product 2
        7). Hydroxypropyl chitosan 0.4
        8). Perfume and preservatives
        9. Residue with 100 purified water
[0086]
6) Rinse
A rinse was made according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Stearyltrimethylammonium chloride 2
        2. Cetostearyl alcohol 2
        3. Polyoxyethylene lanolin ether 3
        4). Propylene glycol 5
        5. Dry powder of silk protein degradation product 2
        6). pH adjuster
        7). Preservative appropriate amount
        8). Residue with 100 purified water
[0087]
7) Hair Nick
A rinse was made according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Ethanol 50
        2. Ethyl oleate 1
        3. Polyoxyethylene (40) hydrogenated castor oil 2
        4). Plant extract (Cirrus, Assembly, Clam) 10
        5. Dry powder of silk protein degradation product 0.5
        6). Residue with 100 purified water
[0088]
8) Example of bath preparation (A type)
A bath preparation was prepared according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Sodium bicarbonate 56
        2. Anhydrous sodium sulfate 30
        3. Borax 2
        4). Dry powder of silk protein breakdown product 10
        5. Plant extract powder (camomile, toki) 2
[0089]
9) Example of bath preparation (B type)
A bath preparation was prepared according to the following formulation.
                                                            weight%
        1. Refined jojoba oil 5
        2. Poloxyethylene sorbitan monolaurate 20
        3. Glycerol monostearate 5
        4). Liquid paraffin 2
        5. Lauric acid diethanolamide 3
        6). Dry powder of silk protein breakdown product 10
        7). Plant extract (peony, aloe vera, chimpi) 10
        8). Residue with 100 purified water
[0090]
【The invention's effect】
  According to the present invention, it is obtained by hydrolyzing protein silk fibroin obtained from silk.An immunostimulant comprising a peptide having a molecular weight of 300 to 5,000Was provided. According to the inventionImmunostimulatorIs considered to be useful for maintaining beauty and health through effective use in foods, pharmaceuticals, cosmetics, and the like.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows a fractionation chart of silk degradation product by Sephadex G-25.
FIG. 2 shows a molecular weight calibration curve with known molecular weight materials.
FIG. 3 shows the antioxidant activity of silk protein degradation products.

Claims

An immunostimulant comprising a peptide having a molecular weight of 300 to 5,000, obtained by hydrolyzing silk protein, as an active ingredient .