JP4718444B2

JP4718444B2 - シクロブタン−１，１−ジカルボキシレートリガンドを有する白金錯体の蛋白結合誘導体

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Publication number: JP4718444B2
Application number: JP2006504734A
Authority: JP
Inventors: クラッツフェリックス; ヴァルネッケアンドレ
Original assignee: KTB Tumorforschungs GmbH
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Priority date: 2003-03-19
Filing date: 2004-03-18
Publication date: 2011-07-06
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Also published as: US7141691B2; DE502004004808D1; EP1603930B1; JP2006520360A; WO2004083223A1; US20060089341A1; EP1603930A1; DE10314780A1; ATE371664T1

Description

本発明は蛋白結合基を有するシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートリガンドの低分子白金錯体、その製造および使用に関する。

カルボプラチン（ジアンミン白金（ＩＩ）−シクロブタン−１，１−ジカルボキシレート）は、抗腫瘍作用のある白金（ＩＩ）錯体であり、これは種々の癌疾患を治療するために使用される（Ｗｏｌｏｓｃｈｕｋ、Ｄ．Ｍ．等、ＤｒｕｇＩｎｔｅｌｌ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．１９８８、２２、８４３〜８４９）。構造的に類似のシスプラチン（シス−ジアンミンジクロロ白金（ＩＩ））は、キレート化するシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートリガンドによりクロロリガンドが交換されていることによってカルボプラチンとは区別され、このことによって変更された薬物動態学ならびにシスプラチンとは異なった毒性プロファイルが生じる（Ｌｏｋｉｃｈ、Ｊ．、ＣａｎｃｅｒＩｎｖｅｓｔ．２００１、１９、７５６〜７６０）。しかしカルボプラチンを用いた治療は副作用を伴う（Ｇｏ、Ｒ．Ｓ．等、ＪＣｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１９９９、１７、４０９〜４２２）。細胞増殖抑制剤の副作用プロファイルおよび効果を改善するために、インビボで内因性血清蛋白質に結合し、かつこのようにして作用物質の高分子輸送形である、蛋白結合製剤を開発することはすでに提案された（Ｋｒａｔｚ，Ｆ．等、Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．２００１、４２、１３８〜１３９、Ｋｒａｔｚ，Ｆ．等、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２０００、４３、１２５３〜１２５６）。

本発明は、不所望の副作用が少なく、かつ腫瘍組織に対する効果が高いカルボプラチンの蛋白結合誘導体を作り出すという課題に基づいている。

前記課題は本発明により、一般式Ｉ：

［式中、
Ｒ＝２Ｈ、

−（ＣＨ_２）_ｉ−（ｉ＝２または３）、Ｘ＝ＯまたはＮＨ、Ｙ＝Ｏ、Ｓまたは２Ｈ、ｎ＝０〜５、ｍ＝０〜６を表し、ＰＭは蛋白結合基である］の低分子カルボプラチン誘導体により解決される。

本発明による化合物は抗腫瘍作用のあるシス−配置の白金（ＩＩ）錯体およびヘテロ二官能性のクロスリンカーから構成されている。以下にこの構造を詳細に説明する：
抗腫瘍作用のある白金錯体は一般式ＩＩ

［式中、
Ｒ＝２Ｈ、

−（ＣＨ_２）_ｉ−（ｉ＝２または３）、
Ｘ＝ＯＨまたはＮＨ_２を表す］の作用物質誘導体である。該錯体は、シクロブタン環にヒドロキシ基またはアミノ基が存在することにより、ならびに場合により、キレート化するアミンリガンド、たとえばトランス−１，２−ジアミノシクロヘキサン、シス−１，２−ジアミノシクロヘキサン、エチレンジアミンまたは１，３−ジアミノプロパンが存在することにより臨床的な標準カルボプラチンから区別される。

ヘテロ二官能性クロスリンカーは一般式ＩＩＩ

［式中、
Ｙ＝２Ｈ、ＯまたはＳ、
ｎ＝０〜５、
ｍ＝０〜６、
ＰＭ＝蛋白結合基を表す］の蛋白結合基を有するカルボン酸誘導体またはアルコールである。

蛋白結合基（ＰＭ）は、有利には２−ジチオピリジル基、ハロゲンアセトアミド基、ハロゲンアセテート基、ジスルフィド基、アクリル酸エステル基、モノアルキルマレイン酸エステル基、モノアルキルマレアミン酸アミド基、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル基、イソチオシアネート基、アジリジン基またはマレインイミド基から選択される。特に有利な蛋白結合基はマレインイミド基である。

本発明による化合物は形式的にはクロスリンカーによる作用物質誘導体の縮合によって得られる。従って作用物質誘導体とクロスリンカーとの間にはエステル結合、アミド結合、チオエステル結合、チオアミド結合、エーテル結合またはアミン結合が存在する。

本発明による白金錯体の製造は有利には一般式ＩＶ

［式中、
Ｘ＝ＯまたはＮＨ、
Ｙ＝Ｏ、Ｓまたは２Ｈ、
ｍ＝０〜５、
ｎ＝０〜６、
およびＰＭは蛋白結合基を表す］のシクロブタン−１，１−ジカルボン酸−誘導体と、一般式Ｖ

［式中、
Ｒ＝２Ｈ、

−（ＣＨ_２）_ｉ−（ｉ＝２または３）、
Ｒ′＝２ＮＯ_２、ＳＯ_２またはＣＯを表す］の白金錯体とを反応させることにより行う。

反応のためにたとえば白金錯体を水中に溶解し、かつシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体またはシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体のアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類金属塩を添加することができる。反応は有利には０℃〜５０℃の温度で実施し、その際、反応時間は通常、１〜２４時間である。生成物の単離は通常の方法、たとえば結晶化、シリカゲルを用いたクロマトグラフィーまたは逆相クロマトグラフィー（分離用ＨＰＬＣ）により行うことができる。

有利な実施態様によれば、シス−ジアミノアルキル白金（ＩＩ）ジニトレート錯体またはシス−ジアンミン白金（ＩＩ）ジニトレートの水溶液を、マレインイミド基およびオリゴ（エチレングリコール）主鎖を有するシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体と、５〜６のｐＨ値で反応させる。こうして得られた白金錯体の精製は有利にはシリカゲルを用いたカラムクロマトグラフィーにより、または逆相クロマトグラフィー（例５、６および）を参照のこと）により行う。このようにして得られた白金錯体は優れた水溶性を有する。

マレインイミド基およびオリゴ（エチレングリコール）主鎖を有する、錯体形成のために有利に使用されるシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体は、ビス（４−メトキシベンジル）マロネートおよび１，３−ジブロモ−２−ｔ−ブチルジメチルシロキシプロパンから出発して４段階の合成で製造することができる：
第一工程でビス（４−メトキシベンジル）マロネートを１，３−ジブロモ−２−ｔ−ブチルシロキシプロパンによりジアルキル化し、これによりシクロブタン環構造が生じる。

この反応は有利には非プロトン性の極性溶剤、たとえばジオキサンまたはＤＭＦ中で、塩基、たとえば水素化カリウム、水素化ナトリウムまたはナトリウムヘキサメチルジシラジドの利用下に、＞１００℃の温度で実施する。一般に反応時間はこの条件下で４８〜１２０時間である（例１を参照のこと）。

第二工程で、当業者に周知の方法により、有利にはテトラヒドロフラン中のテトラブチルアンモニウムフルオリドの使用下にｔ−ブチルジメチルシリル−保護基の分離を行う（例２を参照のこと）。

第三工程で、ビス（４−メトキシベンジル）−３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートのシクロブタン環の３−ヒドロキシ基を、一般式ＶＩａ

［式中、
ｎ＝０〜５、
ｍ＝０〜６を表す］のマレインイミドカルボン酸によりエステル化する。

その際、クロスリンカーのカルボキシル基を活性化するための試薬として有利にはＮ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジイミド、（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェートまたは２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージドを、通常の触媒もしくは補助塩基、たとえばトリアルキルアミン、ピリジン、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）またはヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）を添加して使用する。反応は有利には極性の有機溶剤、有利にはジクロロメタン、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドおよびテトラヒドロフラン中で行う。反応は有利には−１０℃から室温までの温度で実施し、その際、反応時間は通常、３〜４８時間である。

有利な実施態様によればビス（４−メトキシベンジル）−３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートを、オリゴ（エチレングリコール）主鎖を有するマレインイミドカルボン酸と、２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージドの使用下で反応させて、一般式ＶＩＩの化合物を形成する（例３および７を参照のこと）。

第四工程でトリフルオロ酢酸およびアニソールを使用して０℃で４−メトキシベンジル−保護基の分離を行う（例４および８を参照のこと）。

本発明による白金錯体の本質的な特徴は、蛋白結合基による血清蛋白質への迅速な共有結合であり、このことにより作用物質の高分子輸送形が生じる。血清蛋白質、たとえばトランスフェリン、アルブミンおよびＬＤＬから腫瘍組織中での高い吸収が公知である（ＫｒａｔｚＦ．；ＢｅｙｅｒＵ．ＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ１９９８、５、２８１〜２９９）ので、これらを本発明の範囲では細胞増殖抑制剤のための内因性キャリアとして考慮することができる。特に有利な血清蛋白質は循環するヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）であり、これは３０〜５０ｇ／Ｌの平均濃度でヒトの血液の主蛋白質成分を形成し（ＰｅｔｅｒｓＴ．Ａｄｖ．ＰｒｏｔｅｉｎＣｈｅｍ．１９８５、３７、１６１〜２４５）、かつ蛋白質の表面に、チオール結合基、たとえばマレインイミドまたはジスルフィドの結合のために適切な遊離のシステイン基（システイン−３４−基）を有する。

本発明による蛋白結合白金錯体は薬剤として非経口、有利には静脈内投与することができる。このために本発明による白金錯体を溶液、固体または凍結乾燥物として、場合により通常の助剤を使用して調製する。このような助剤はたとえばポリソルベート、グルコース、ラクトース、マンニトール、デキストラン、クエン酸、トロメタモール、トリエタノールアミン、アミノ酢酸および／または合成ポリマーである。その後、投与された錯体は血清蛋白質と反応して輸送形を形成する。

新規の白金錯体と血清蛋白質との反応はあるいは輸液のための量のアルブミン、血液または血清を用いて体外で実施することもできる。

本発明による蛋白結合した白金錯体は従来の低分子錯体に対して変化した薬物動態学を有し、かつその高分子の特性に基づいて腫瘍組織中で富化する。細胞内で行われる加水分解反応により不安定な結合をしたシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートリガンドは分離し、かつその際にアクオ−、ヒドロキシ−または混合されたアクオヒドロキシ錯体が活性成分として遊離する。動物試験研究ではこれらの蛋白結合白金錯体は臨床的な標準カルボプラチンよりも高い有効性を示した（例１０を参照のこと）。

以下の例は本発明を図面と関連させて詳細に説明する。図面は、腫瘍体積の変化に基づいてカルボプラチンと比較した、本発明による物質を用いた動物実験の結果のグラフを示す。

例１
ビス（４−メトキシベンジル）−３−ｔ−ブチルジメチル−シロキシシクロブタン−１，１−ジカルボキシレート（ＰＭＢ−ＣＢ−ＯＴＢＳ）の製造

無水ジオキサン２０ｍＬ中の水素化カリウム（鉱油中３５％）の懸濁液（２．１０ｇ、１８．２９ミリモル）に、不活性ガス雰囲気下でビス（４−メトキシベンジル）マロネート（６．００ｇ、１７．４ミリモル）を３０分以内に滴加する。室温でさらに１５分間撹拌し、１，３−ジブロモ−２−ｔ−ブチルジメチルシロキシプロパン（６．０８ｇ、１８．２９ミリモル）を添加し、かつ還流下で一夜加熱する。室温に冷却した反応混合物に水素化カリウム（鉱油中３５％）（２．１０ｇ、１８．２９ミリモル）をジオキサン１０ｍＬ中の懸濁液としてゆっくり添加する。引き続きさらに３日間、還流下で撹拌する。形成された臭素化カリウムをセライトにより濾別し、溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／イソヘキサン１：１０）により精製する。ＰＭＢ−ＣＢ−ＯＴＢＳ２．７８ｇ（理論値の３１％）が無色の油状物として得られる。

例２
ビス（４−メトキシベンジル）−３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジ−カルボキシレート（ＰＭＢ−ＣＢ−ＯＨ）の製造

無水ＴＨＦ２５ｍＬ中のＰＭＢ−ＣＢ−ＯＴＢＳ（２．６９ｇ、５．２３ミリモル）の溶液にテトラブチルアンモニウムフルオリド（２．４７ｇ、７．８５ミリモル）を添加し、かつ室温で１５分間撹拌する。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル／イソヘキサン１：１）により精製する。ＰＭＢ−ＣＢ−ＯＨ１．８５ｇ（理論値の８８％）が無色の油状物として得られ、これはゆっくり結晶化する。

例３
ビス（４−メトキシベンジル）−３−（６−マレインイミド−４−オキサカプロイル）シクロブタン−１，１−ジカルボキシレート（ＰＭＢ−ＣＢ−１−Ｍａｌ）の製造

無水ジクロロメタン３０ｍＬ中のＰＭＢ−ＣＢ−ＯＨ（１．９７ｇ、４．９１ミリモル）、６−マレインイミド−４−オキサカプロン酸（１．５７ｇ、７．３７ミリモル）およびトリエチルアミン（２．０４ｍＬ、８．６４ミリモル）の溶液に２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージド（１．８８ｇ、７．３７ミリモル）を添加し、かつ室温で３時間撹拌する。ジクロロメタン１４０ｍＬで希釈し、そのつど塩酸１ｎ８０ｍＬ、水８０ｍＬで２回、ならびに塩化ナトリウム溶液（飽和）８０ｍＬで１回洗浄し、かつ硫酸マグネシウムにより乾燥させる。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム／メタノール２００：１）により精製する。ＰＭＢ−ＣＢ−１−Ｍａｌ２．８９ｇ（理論値の９９％）が無色の油状物として得られる。

例４
３−（６−マレインイミド−４−オキサカプロイル）シクロブタン−１，１−ジ−カルボン酸（ＣＯＯＨ−ＣＢ−１−Ｍａｌ）の製造

無水ジクロロメタン５０ｍＬ中のＰＭＢ−ＣＢ−１−Ｍａｌ（２．７６ｇ、４．６３ミリモル）およびアニソール（７．５７ｍＬ、６９．５ミリモル）の溶液に０℃でトリフルオロ酢酸１０ｍＬを添加し、かつ０℃で２時間撹拌する。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム／メタノール２０：１）により精製する。ＣＯＯＨ−ＣＢ−１−Ｍａｌ１．２８ｇ（理論値の７８％）が無色のシロップとして得られる。

例５
トランス−（Ｒ，Ｒ／Ｓ，Ｓ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミノ白金（ＩＩ）−［３−（６−マレインイミド−４−オキサカプロイル）シクロブタン−１，１−ジカルボキシレート］（ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌ）の製造

白金錯体を水６０ｍＬと共に加熱（５０℃）することにより得られ、室温に冷却した［Ｐｔトランス−ＤＡＣＨ］（ＮＯ_３）_２（３００ｍｇ、６９２μモル）の水溶液に、水５ｍＬ中のＣＯＯＨ−ＣＢ−１−Ｍａｌ（２７１ｍｇ、７６２μモル）の溶液を添加する。反応混合物を０．１ＭのＫＯＨによりｐＨ５．５に調節し、かつ暗所中、室温で３時間撹拌する。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、エタノール）により精製する。ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌ２９１ｍｇ（理論値の６１％）が無色の固体として得られる。
^１Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：
δ＝０．９７〜１．２９（ｍ、４Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、１．３８〜１．５６（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、１．８１〜１．９６（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、２．１９〜２．３６（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、２．４２（ｔ、Ｊ＝５．９Ｈｚ、ＣＨ _２ＣＯＯ）、２．６０〜２．７９（ｍ、２Ｈ、ＣＨ _２ＣＨＯＲ）、３．２７〜３．４１（ｍ、２Ｈ、ＣＨ _２ＣＨＯＲ）、３．４６〜３．６６（ｍ、６Ｈ、ＮＣＨ _２、ＯＣＨ _２）、４．６７〜４．８６（ｍ、１Ｈ、ＣＨＯＲ）、６．７６（ｓ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）：
δ＝２５．５１、３３．３０（シクロヘキシル）、３５．９２（ＣＨ_２ＣＯＯ）、３８．１７（ＮＣＨ_２）、３９．８０／４０．０９（ＣＨ_２ＣＨＯＲ）、５１．３５（Ｃ（ＣＯＯＨ）_２）、６３．８１／６３．８６（シクロヘキシル−ＮＨ_２）、６５．６６（ＣＨＯＲ）、６７．２２、６８．６５（ＯＣＨ_２）、１３５．５０（Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ）、１７２．５２、１７２．８０（Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ、ＣＨ_２ＣＯＯ）、１８０．４１、１８０．６１（Ｃ（ＣＯＯＨ）_２）。
ＥＳＩ−ＭＳ（４．０ｋＶ、ＭｅＯＨ）：
ｍ／ｚ（％）６６３．０（［Ｍ＋１］^＋、１００）。

例６
ジアンミン白金（ＩＩ）−［３−（６−マレインイミド−４−オキサカプロイル）シクロブタン−１，１−ジカルボキシレート］（（ＮＨ_３）_２−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌ）の製造

白金錯体を水９０ｍＬと共に加熱（５０℃）することにより得られ、室温に冷却した［（ＮＨ_３）_２Ｐｔ］（ＮＯ_３）_２（４８５ｍｇ、１．３７ミリモル）の水溶液に、水５ｍＬ中のＣＯＯＨ−ＣＢ−１−Ｍａｌ（５３８ｍｇ、１．５１ミリモル）の溶液を添加する。反応混合物を０．１ＭのＫＯＨによりｐＨ５．５に調節し、かつ暗所中、室温で３時間撹拌する。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、エタノール）により精製する。（ＮＨ_３）_２−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌ２６３ｍｇ（理論値の３３％）が無色の固体として得られる。
ＥＳＩ−ＭＳ：
ｍ／ｚ（％）５８１．８（［Ｍ］^＋、１００）。

例７
ビス（４−メトキシベンジル）−３−（１５−マレインイミド−４，７，１０，１３−テトロキサペンタデカノイル）シクロブタン−１，１−ジカルボキシレート（ＰＭＢ−ＣＢ−４−Ｍａｌ）の製造

無水ジクロロメタン２０ｍＬ中のＰＭＢ−ＣＢ−ＯＨ（１．１５４ｇ、２．８８１ミリモル）、１５−マレインイミド−４，７，１０，１３−テトロキサペンタデカン酸（１．４９ｇ、４．３２ミリモル）およびトリエチルアミン（１．２０ｍＬ、８．６４ミリモル）の溶液に２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージド（１．１０ｇ、４．３２ミリモル）を添加し、かつ室温で３時間撹拌する。ジクロロメタン８０ｍＬで希釈し、そのつど塩酸１ｎ５０ｍＬ、水５０ｍＬで２回ならびに塩化ナトリウム溶液（飽和）５０ｍＬで１回洗浄し、かつ硫酸マグネシウムにより乾燥させる。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、酢酸エチル）により精製する。ＰＭＢ−ＣＢ−４−Ｍａｌ１．９３ｇ（理論値の９２％）が無色の油状物として得られる。

例８
３−（１５−マレインイミド−４，７，１０，１３−テトロキサペンタデカノイル）シクロブタン−１，１−ジカルボン酸（ＣＯＯＨ−ＣＢ−４−Ｍａｌ）の製造

無水ジクロロメタン５０ｍＬ中のＰＭＢ−ＣＢ−４−Ｍａｌ（１．９４ｇ、２．６６ミリモル）およびアニソール（４．３５ｍＬ、３９．９ミリモル）の溶液に０℃でトリフルオロ酢酸１０ｍＬを添加し、かつ０℃で２時間撹拌する。引き続き溶剤を真空中で除去し、かつ残留物をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、クロロホルム／メタノール１０：１）により精製する。ＣＯＯＨ−ＣＢ−４−Ｍａｌ１．１５ｇ（理論値の８９％）が無色のシロップとして得られる。

例９
トランス−（Ｒ，Ｒ／Ｓ，Ｓ）−シクロヘキサン−１，２−ジアミノ白金（ＩＩ）−［３−（１５−マレインイミド−４，７，１０，１３−テトロキサペンタデカノイル）シクロ−ブタン−１，１−ジカルボキシレート］（ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−４−Ｍａｌ）の製造

白金錯体を水３０ｍＬと共に加熱（５０℃）することにより得られ、室温に冷却した［Ｐｔトランス−ＤＡＣＨ］（ＮＯ_３）_２（１７５ｍｇ、４０５μモル）の水溶液に、水５ｍＬ中のＣＯＯＨ−ＣＢ−４−Ｍａｌ（２１７ｍｇ、４４５μモル）の溶液を添加する。反応混合物を０．１ＭのＫＯＨによりｐＨ５．５に調節し、かつ暗所中、室温で３時間撹拌する。引き続き、真空中で約５ｍＬに濃縮し、かつ沈殿物を遠心分離する。上澄み液を分離用ＨＰＬＣ（Ｎｕｃｌｅｏｓｉｌ ^（Ｒ）１００−７−Ｃ１８−カラム（２５０×１５ｍｍ）、水／アセトニトリル８０：２０＋０．０５％ＴＦＡ、流量：２０ｍＬ／分、保持時間：約２０分）により精製する。真空中で溶離剤を除去し、２−プロパノール約１ｍＬの添加により残留物を結晶化した後で、ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−４−Ｍａｌ６０ｍｇ（理論値の１９％）が無色の固体として得られる。
^１Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ、アセトンで検定、δ＝２．２０ｐｐｍ）：
δ＝０．９８〜１．３５（ｍ、４Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、１．４４〜１．６２（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、１．９４〜２．０６（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、２．２８〜２．４８（ｍ、２Ｈ、シクロヘキシル−Ｈ）、２．６６（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、ＣＨ _２ＣＯＯ）、２．８０〜２．９３（ｍ、２Ｈ、ＣＨ _２ＣＨＯＲ）、３．３４〜３．５０（ｍ、２Ｈ、ＣＨ _２ＣＨＯＲ）、３．５４〜３．８４（ｍ、１８Ｈ、ＮＣＨ _２、ＯＣＨ _２）、４．９３（′ｐ′、Ｊ＝７．１Ｈｚ、１Ｈ、ＣＨＯＲ）、６．８５（ｓ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ）。
^１３Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ、アセトンで検定）：
δ＝２４．３０、３２．２２（シクロヘキシル）、３４．９１（ＣＨ_２ＣＯＯ）、３７．３７（ＮＣＨ_２）、３８．５４／３８．７２（ＣＨ_２ＣＨＯＲ）、５０．７１（Ｃ（ＣＯＯＨ）_２）、６３．０５／６３．０９（シクロヘキシル−ＮＨ_２）、６５．３７（ＣＨＯＲ）、６６．５２、６８．０２、６９．７３、６９．９７、７０．０１（ＯＣＨ_２）、１３４．８６（Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ）、１７３．３９、１７４．１１（Ｃ（Ｏ）ＣＨ＝ＣＨＣＯ、ＣＨ_２ＣＣＯＯ）、１８０．３０、１８０．４７（Ｃ（ＣＯＯＨ）_２）。
^１９５Ｐｔ−ＮＭＲ（Ｄ_２Ｏ）：δ＝−３１１。
ＩＲ（ＫＢｒ）：ｖ＝３４４８（ｓｓ、ｂ）、２９３９（ｗ、ｂ）、１７０９（ｓｓ）、１６２７（ｓ）、１３５３（ｍ）、１０９４（ｓｓ、ｂ）、６９６（ｗ）ｃｍ^−１。
ＥＳＩ−ＭＳ（４．０ｋＶ、ＭｅＯＨ）：ｍ／ｚ（％）８１６．９（［Ｍ＋Ｎａ］^＋、１００）。
Ｃ_２４Ｈ_４１Ｎ_３Ｏ_１２Ｐｔ［７９４．７１］
元素分析：計算値：Ｃ：４０．８１％、Ｈ：５．２０％、Ｎ：５．２９％、
測定値：Ｃ：３９．８８％、Ｈ：５．１６％、Ｎ：５．０８％。

例１０
インビボでのＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌの有効性
図１に記載されている生物学的データは、カルボプラチンと比較して、ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌの高められたインビボ有効性を明示している。

動物：ヌードマウス腫瘍モデル：ＭａＴｕ（乳癌）
治療：ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌ（７５および１００ｍｇ／ｋｇ）ならびにカルボプラチン（１００ｍｇ／ｋｇ）、７日目に１回、カルボプラチン（７５ｍｇ／ｋｇ）はそのつど７日目および１４日目；ｉ．ｖ．（カルボプラチンおよび誘導体をそのつど０．１５０．３ｍＬグルコース−ホスフェート−バッファｐＨ６．５）。

ＤＡＣＨ−Ｐｔ−ＣＢ−１−Ｍａｌのインビボ有効性をカルボプラチンと比較したデータのグラフを示す図

Claims

一般式Ｉ：

［式中、
Ｒ＝２Ｈ、

、−（ＣＨ_２）_ｉ−（ｉ＝２または３）、
Ｘ＝ＯまたはＮＨ、
Ｙ＝Ｏ、Ｓまたは２Ｈ、
ｍ＝０〜５、
ｎ＝０〜６、
ＰＭは、マレインイミド基、２−ジチオピリジル基、ハロゲンアセトアミド基、ハロゲンアセテート基、ジスルフィド基、アクリル酸エステル基、モノアルキルマレイン酸エステル基、モノアルキルマレアミン酸アミド基、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル基、イソチオシアネート基またはアジリジン基（これらは置換されていていてもよい）から選択される蛋白結合基を表す］の白金錯体。
ＰＭがマレインイミド基であり、置換されていてもよい、請求項１記載の白金錯体。
ｍ＜２およびｎ＝１〜４である、請求項２記載の白金錯体。
Ｘ＝ＯおよびＹ＝Ｏである、請求項３記載の白金錯体。
一般式ＩＶ

［式中、
Ｘ＝ＯまたはＮＨ、
Ｙ＝Ｏ、Ｓまたは２Ｈ、
ｍ＝０〜５、
ｎ＝０〜６
およびＰＭは、マレインイミド基、２−ジチオピリジル基、ハロゲンアセトアミド基、ハロゲンアセテート基、ジスルフィド基、アクリル酸エステル基、モノアルキルマレイン酸エステル基、モノアルキルマレアミン酸アミド基、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミジルエステル基、イソチオシアネート基またはアジリジン基（これらは置換されていていてもよい）から選択される蛋白結合基を表す］のシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体を、一般式Ｖ

［式中、
Ｒ＝２Ｈ、

、−（ＣＨ_２）_ｉ−（ｉ＝２または３）
Ｒ′＝２ＮＯ_２、ＳＯ_２またはＣＯを表す］の白金錯体と反応させることを特徴とする、請求項１から４までのいずれか１項記載の白金錯体の製造方法。
一般式ＶＩＩ

［式中、
Ｘ＝ＯまたはＮＨ、
Ｙ＝Ｏ、Ｓまたは２Ｈ、
ｍ＝０〜５、
ｎ＝０〜６、
およびＰＭが蛋白結合基を表す］の４−メトキシベンジル−保護されたシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体を、トリフルオロ酢酸およびアニソールと反応させることにより、一般式ＩＶのシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体が得られる、請求項５記載の方法。
ビス（４−メトキシベンジル）−３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートを、カルボン酸活性化試薬の存在下に、一般式ＶＩ

［式中、
ｎ＝０、１、
ｍ＝１〜６、
およびＰＭは蛋白結合基を表す］のヘテロ二官能性クロスリンカーと反応させることにより、一般式ＶＩＩのシクロブタン−１，１−ジカルボン酸誘導体が得られる、請求項６記載の方法。
カルボン酸活性化試薬として、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド、Ｎ，Ｎ′−ジイソプロピルカルボジイミドまたは（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム−ヘキサフルオロ−ホスフェートを使用する、請求項７記載の方法。
カルボン酸活性化試薬として、２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージドを使用する、請求項７記載の方法。
ビス（４−メトキシベンジル）−３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートを、２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨージドの使用下に、一般式ＶＩａ

［式中、
ｎ＝０、１、
ｍ＝１〜６を表す］のマレインイミドカルボン酸と反応させる、請求項７または９記載の方法。
ビス（４−メトキシベンジル）−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシシクロブタン−１，１−ジ−カルボキシレートを、テトラブチルアンモニウムフルオリドと反応させることにより、ビス（４−メトキシベンジル）−３−ヒドロキシシクロブタン−１，１−ジカルボキシレートが得られる、請求項７記載の方法。
ビス（４−メトキシベンジル）マロネートを、１，３−ジブロモ−２−ｔ−ブチルジメチル−シロキシプロパンと反応させることにより、ビス（４−メトキシベンジル）−３−ｔ−ブチルジメチルシロキシシクロ−ブタン−１，１−ジ−カルボキシレートが得られる、請求項１１記載の方法。
作用物質として請求項１から４までのいずれか１項記載の白金錯体を、場合により通常の助剤および／または製薬溶剤と共に含有する薬剤。
癌疾患を治療するための薬剤を製造するための、請求項１から４までのいずれか１項記載の白金錯体の使用。
請求項１から４までのいずれか１項記載の化合物を治療のために認容可能な溶液にすることを特徴とする、癌疾患を治療するための薬剤の製造方法。