JP4703853B2 - 生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法 - Google Patents
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Description
【０００１】
本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む、生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法に関する。本発明は、乳牛から得られるミルクを改良する方法、特にメチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を乳牛に供給することを含む方法にも関する。
【０００２】
タンパク質は、泌乳牛の飼料の主栄養素の１つである。しかし雌ウシは実際にはタンパク質を必要とせず、その代わり雌ウシ自身のタンパク質を作り上げる基本的要素である特定のアミノ酸を必要とする。
【０００３】
メチオニンは制限アミノ酸であることが知られており、特にミルク生産において、メチオニン量のバランスを良好に保つことによってミルク生産量が効率的になると考えられている。メチオニン量を増加させることによってミルク生産量を増加させることができるとも考えられている。
【０００４】
従って、メチオニン量を維持するかさらに増加させることが望ましい。メチオニンは雌ウシの飼料に直接加えることが可能である。しかしこのアミノ酸の遊離形態は、第１胃の細菌によって急速に分解され、その結果少量のメチオニンしか血流に入らない。この問題を克服するために多くのことが試みられており、一般には、第１胃の影響を受けずに化合物を通過させるために保護または修飾された形態でメチオニンが飼料に加えられている。保護または修飾された形態から遊離したメチオニンは次に小腸に送られ、血流に吸収される。この特殊な目的のために最も広く研究されている化合物の１つはメチオニンのヒドロキシアナログ、すなわち２−ヒドロキシ−４−（メチルチオ）ブタン酸であり、全般にＨＭＢと呼ばれる。
【０００５】
ＷＯ９９／０４６４７号（１９９９年２月４日公開）は、飼料にメチオニンのヒドロキシアナログを追加することによって、メチオニンを第１胃に導入する方法を開示している。この特許出願では、ヒドロキシアナログは第１胃による分解の影響を実質的に受けずに第１胃を通過し、その結果少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のヒドロキシアナログが腸から血流に吸収されると主張している。この特許出願では、ヒドロキシアナログ、その塩、エステル、アミド、およびオリゴマーを「第１胃バイパス」と呼んでおり、雌牛の血流へのメチオニンの導入のための改良された効率的な手段であると主張している。この特許に開示される化合物の利点は、この化合物は第１胃の問題を回避し腸で吸収されることであると主張している。
【０００６】
メチオニンのヒドロキシアナログの効果に関する出版物も多数存在し、１９９８年５月の発表を元にしたチャールズ・シュワーブ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｓｃｈｗａｂ）による出版物ではすべての出版物についてのレビューがあり、メチオニンのヒドロキシアナログが腸管吸収に関する第１胃の問題が回避されると考えられるが、１頭当り６０ｇ／日を超える投与量、好ましくは１頭当り９０ｇ／日を超える投与量で投与した場合にのみこのことが言えると結論している。より少ない投与量では、メチオニンのヒドロキシアナログは第１胃の微生物によってより多い量が消費されると著者は述べている。
【０００７】
メチオニンのヒドロキシアナログの吸収の最良の測定法は、血液中の生体利用率を測定することである。生体利用率は、飼料に導入される化合物のメチオニン相当量と比較した血液中のメチオニン量として特徴づけられる。この測定は、ヒドロキシアナログの第１胃を通過する経路、消化経路中の吸収位置とは無関係のアナログの吸収率、および酵素によるヒドロキシアナログからメチオニンへ転化する割合を考慮している。雌ウシ１頭当り５０ｇ／日に相当するメチオニンの投与量で、第１胃における消化に対してポリマーで保護されたメチオニン、特に商品名スマートアミン（Ｓｍａｒｔａｍｉｎｅ）（登録商標）として販売されている製品は、第１胃バイパスが９０％であり、ヒドロキシアナログの生体利用率はわずか３％であるとこの文献には記載されている。
【０００８】
Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，７１，ｐｐ３２９２−３３０１の論文には、ミルク生産量を増加させるためのメチオニンのヒドロキシアナログのメチルエステルまたはエチルエステルの雌ウシの飼料への導入が開示されている。この研究の結果は、これらのエステルはメチオニンのヒドロキシアナログに容易に転化され、続いて雌ウシの第１胃で分解されることを示している。特に、第１胃液中で６時間インキュベートした後では、ヒドロキシアナログのメチルエステルとエチルエステルはそれぞれ１．８％と３％しか残留しない。これは、メチオニンとメチオニンのヒドロキシアナログとの場合の３４％および８５％と比較される。
【０００９】
前述の従来技術の教示とは逆に、我々は、メチオニンまたはメチオニンアミドおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのある種のエステルが雌ウシに好都合な影響を与えることを発見した。驚くべきことに我々は、ある種の化合物によって公知の従来技術よりも効率的でより迅速に第１胃の血流にメチオニンが導入されることを発見した。我々は、これらの特定の化合物は第１胃バイパスおよび腸管吸収によって血流に入るのではなく、第１胃壁を通って吸収されることによって血流に入ることも発見した。本発明者らは、特定のエステル化合物を供給経路から乳牛の飼料に導入することによって、ミルク生産が希望通りに向上されることも発見した。
【００１０】
従って、本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法を提供する。 本発明の目的のため、雌ウシはウシを意味し、すなわち肉牛および乳牛を意味する。
【００１１】
特に、本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドの分岐アルキルエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログの分岐アルキルエステルを雌ウシに投与することを含む、生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法を提供する。
【００１２】
特許請求されるエステルの使用は、従来技術のメチオニン誘導体よりも雌ウシの血流中のメチオニン量が多くなるという点で従来技術よりも優れている。さらに驚くべきことに本発明者らは、特定のエステルを使用することによって、メチオニンが非常に迅速に血流に吸収されることを発見した。本発明によるエステル誘導体は、第１胃での分解が避けられるだけではなく、驚くべきことに第１胃壁から吸収されることによって血流にメチオニンが送られることが分かった。このことは、メチオニンのヒドロキシアナログ化合物が第１胃で分解されるか第１胃を通過して腸管で吸収されるかのいずれかであるかが知られている従来技術とは正反対である。
【００１３】
当分野の従来技術から明らかであるが、反芻動物の血流へのメチオニンの導入の研究は、血流へのメチオニン導入の最も速く最も効率的な手段として第１胃バイパス化合物の使用に集中していた。本発明者らは、本発明のエステルを雌ウシの飼料に添加することによって、メチオニン相当量の５０％を超える量が第１胃壁から直接吸収される場合があることを発見した。これらのエステルは高い生体利用率を有するだけではなく、雌ウシが摂取した後に第１胃から吸収されることによって、メチオニンまたは生物学的に等価な化合物を非常に迅速に血流に送ることができる。これまで揮発性脂肪酸、アンモニア、およびジオキシカーボン類などの化合物のみが第１胃壁から吸収されると実質的に考えられていたので、この結果は驚くべきことであり全く予想外のことであった。
【００１４】
本発明は雌ウシの体調の向上に関しても探求しており、本発明の特定のエステルを使用することによって重量増加を改良し、受精率を向上させ、エネルギーを増大させ、さらに肝機能を向上させることができる。
【００１５】
エステルの投与による肝機能への効果は重要な利点である。この効果は、非常に低密度のリポタンパク質の改良によって代謝の問題が軽減されることを特徴とすることができる。同様のことであるが、ケトン血症が減少し、肝脂肪症も制限される。
【００１６】
エステルの投与は、生殖においても有益な効果を得ることができる。出産と生殖の間隔を短くすることができる。この効果は、精子注入時の受精率を増大させるという特徴も有する。
【００１７】
特殊なエステルの使用によって、第１胃発酵を刺激し、それによってより消化しやすい有機物質が得られ、従ってより多くのエネルギーを得ることもできる。
【００１８】
本発明者らは、本発明のエステルを乳牛に与えた場合に、その乳牛から得られるミルクが改良されることも発見した。
【００１９】
本発明の別の態様によると、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む、乳牛のミルクの改良方法が提供される。
【００２０】
特に、本発明は、メチオニンの分岐アルキルエステルまたはメチオニンのヒドロキシアナログの分岐アルキルエステルを雌ウシに投与することを含む、乳牛のミルクの改良方法を提供する。
【００２１】
本発明のエステルを乳牛に供給する場合、本発明者らは、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を乳牛の毎日の通常飼料に追加することによって、乳牛から得られるミルクの品質の予期せぬ向上が見られることを発見した。特に、本発明者らは特定のエステルを乳牛の飼料に加えることによって、ミルクのタンパク質含有量が増加することを発見した。
【００２２】
さらに、タンパク質の量以外に、特定のメチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステルまたはそれらの塩を投与することによって、ミルク生産量およびミルクの脂肪含有量を向上させることができることを発見した。
【００２３】
エステルの投与によるタンパク質含有量の増加は、一般にミルク１リットル当りで０．５〜４ｇのタンパク質と評価することができる。一般に増加するタンパク質は、α、β、およびκであり、特にβおよびκタンパク質は生産されるミルクのチーズ製造特性に望ましい効果を有する。
【００２４】
以上の目的は、全体または一部で実現することができる。
【００２５】
本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む、雌ウシに生体利用可能なメチオニンを供給する方法に関する。好適なエステルはアルキルエステルである。アルキル基は、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜１０の炭素原子、最も好ましくは１〜４個の炭素原子を有する線状、分岐、または環状アルキル基であってよい。
【００２６】
メチオニンおよびメチオニンのヒドロキシアナログの好適なエステルとしては、メチルエステル、エチルエステル、ｎ−プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、すなわち、ｎ−ブチルエステル、ｓ−ブチルエステル、イソブチルエステル、およびｔ−ブチルエステル、ペンチルエステルおよびヘキシルエステル、特にｎ−ペンチル、イソペンチルエステル、ｎ−ヘキシルエステル、およびイソヘキシルエステルが挙げられる。メチオニンの好適なアミドとしては、Ｎ−アシルメチオニンアルキルエステルが挙げられ、例えばＮ−アセチルメチオニンアルキルが挙げられる。
【００２７】
好ましくは、エステルは分岐または線状アルキルエステルであり、特に分岐アルキルエステル、例えばイソプロピルエステルおよびｔ−ブチルエステルである。メチオニンのエステルに関しては、イソプロピルエステルおよびｔ−ブチルエステルが最も好ましい。メチオニンのヒドロキシアナログに関しては、ｔ−ブチルエステルおよびイソプロピルエステルが最も好ましい。
【００２８】
特に、メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルの使用が特に効果的であり、第１胃壁から吸収されることによってメチオニン相当量の少なくとも５０％を血流に供給可能であることが分かった。メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルは、メチオニンの生体利用率が５０％を超えることが分かった。
【００２９】
さらに、ヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを使用することで、投与後の比較的短時間で生体利用率のピークが現われることから、第１胃壁から直接吸収されることを示しており、従って該エステルが第１胃バイパスではないことを示していることが分かった。
【００３０】
メチオニンのｔ−ブチルエステルは、第１胃で吸収されることによってメチオニン相当量の約８０％を雌ウシに与えることができることも分かった。この特殊なエステルは、メチオニンを摂取して１時間以内の場合に血流に迅速に入ることも分かった。
【００３１】
エステルは任意の好適な方法で雌ウシに供給することができる。好ましくは、エステルは飼料のサプリメントとして供給され、通常の毎日の飼料によって雌ウシに与えることができる。雌ウシには濃縮物部分とかいば部分を含む飼料が与えられる。本発明の別の態様によると、かいば部分、濃縮物部分、およびサプリメントを含む飼料が提供され、該サプリメントはメチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、およびそれらの塩を含む。
【００３２】
飼料に加えられる好適なエステルは、前述したエステルである。好ましい飼料は、かいば部分、濃縮物部分、およびメチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを含む。
【００３３】
雌ウシの飼料に加えられるエステルの量は、雌ウシの品種およびミルク生産サイクルの段階によって変動しうる。好適にはサプリメントは、メチオニン相当量で計算して１頭当り１日で上限７５ｇ、好ましくは５〜５０ｇ、特に１０〜３０ｇの量のエステルを含む。
【００３４】
必要なエステル量は、当業者には公知の任意の好適な手段を使用して計算することができる。好適には、コンピュータモデルを使用して量を求めることができる。
【００３５】
飼料がメチオニンのヒドロキシアナログのｔ−ブチルエステルまたはイソプロピルエステルを含む場合、エステルは好適には１頭当り７〜６５ｇ／日の濃度で存在することができ、最も好ましくは１頭当りで１０〜３０ｇ／日の濃度を含有する。飼料がメチオニンのイソプロピルエステルまたはｔ−ブチルエステルを含む場合、飼料は好適には７〜６５ｇ、最も好ましくは１０〜３０ｇのエステルを含む。
【００３６】
本発明の別の態様によると、本明細書で前述した１頭の雌ウシに１日に投与することが好適な量のエステルを含む単位用量が提供される。
【００３７】
かいば部分は通常、コーンサイレージ、グラスサイレージ、アルファルファサイレージおよび／または乾草サイレージを含むことができる。濃縮物部分は、粗びき粉、ナタネ、ダイズ、トウモロコシグルテンなどのタンパク質源、および魚粉、血粉、ビールかすなどの副産物に加えてトウモロコシ、コムギ、オオムギなどの穀物を通常含むことができる。
【００３８】
エステルを含むサプリメントは、任意の好適な時間にかいば部分および穀物部分と混合することができる。エステルは液体であり、飼料ペレットを製造する前にかいば部分および濃縮物部分と混合して導入することができる。あるいは、エステルは、雌ウシに与える前に農業従事者がペレット飼料に加えることができる。
【００３９】
飼料ペレットにエステルを加える場合、ペレットの製造前または後のいずれも好適である。特に、ヒドロキシアナログのイソプロピルエステルは、得られるペレットが長期間にわたって９５％の安定性が維持される程度に安定であることが分かった。従って、本発明のエステルを飼料サプリメントとして使用することによって、安定なメチオニン源を得ることができる。
【００４０】
以下の実施例を参照しながら本発明を詳細に説明する。
【００４１】
実施例１：メチオニンのヒドロキシアナログのエステル
（ａ）エステルの調製：
（１）メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステル
３１４．４ｇ（１．８８ｍｏｌ）の２−ヒドロキシ−４−メチルチオ−ブチロニトリルを、障害物を取付けた撹拌装置の付いたジャケット反応器に装入した。２０１．３ｇ（１．９５１ｍｏｌ）の９５％硫酸をゆっくり加えながら、温度を５０℃より低温に維持した。硫酸を加えた後、反応温度を４５℃で１５分間維持した。２２７．３ｇのイソプロパノールを反応内容物に加えた。次に反応器底部の温度が１１６℃に到達し、上部の温度が７０℃に到達するまで反応器の温度を５℃／分で上昇させた。これらの反応器条件を５時間維持した。この間、一部の蒸溜物を除去して、新しいイソプロパノールで置換した。
【００４２】
次に反応混合物に１６１．２ｇの３２％アンモニア水溶液（２．７２ｍｏｌのアンモニア）を加えて中和した。２相に分離した。７８０ｇの水と４４９．７ｇのジクロロメタンを加えた。得られた２つの相を分離し、９３９．１ｇの有機相と１２４７．４ｇの水相を得た。
【００４３】
有機生成物の軽留分を蒸溜によって除去した。蒸発浴の温度を上昇させ、約数ミリバールまで圧力を低下させた。２６３．５ｇの蒸溜物を回収した。メチオニンのイソプロピルエステルの力価が９９％を超えるていことが分かった。収率は７２％であった。
【００４４】
（２）メチオニンのヒドロキシアナログのメチルエステル、エチルエステル、ｎ−ブチルエステル、およびシクロヘキシルエステル
適当なアルコールを使用したことを除けば、上述のようにしてこれらのエステルを調製した。
【００４５】
（ｂ）生体利用率
前述のようにして調製したエステルの、５０ｇのメチオニン相当量に相当する以下の量の単回投与量を、前述の実施例２（ｂ１）に記載の方法で２頭の雌ウシに与えた。
【００４６】
ＨＭＢのメチルエステル：６４．８ｇ
ＨＭＢのエチルエステル：７４．８ｇ
ＨＭＢのイソプロピルエステル：８０．５ｇ
ＨＭＢのｎ−ブチルエステル：９６ｇ
ＨＭＢのシクロヘキシルエステル：９７．５ｇ
ＨＭＢのｓ−ブチルエステル：７９ｇ
メチオニンおよびＨＭＢの濃度を２７時間測定した。測定値をプロットし、得られた曲線の下の面積を計算して生体利用率の結果を求めた。
【００４７】
生体利用率はスマートアミン（Ｓｍａｒｔａｍｉｎｅ）（登録商標）を基準として求めた。
【００４８】
エステルの生体利用率の結果を表１に示す。
【００４９】
【表１】
【００５０】
実施例２−メチオニンのエステル
（ａ）エステルの調製
以下の一般手順に従ってメチオニンのエステルを調製した：
メチオニンと、エステル化されるメチオニンに対して１．２当量の硫酸とを、アルキル鎖の性質に対応したアルコールに加えた。得られた混合物を還流し、水を蒸発させて平衡を移動させた。混合物にアンモニアを加えて中和し、エステルを単離した。アルコールは留去した。得られたエステルをジクロロメタンで抽出し、水洗した。ジクロロメタンは蒸発させた。
【００５１】
この手順に従って調製したメチオニンのエステルは、メチオニンメチルエステル、メチオニンｎ−プロピルエステル、メチオニンｎ−ブチルエステル、メチオニンｎ−ヘキシルエステル、メチオニンｎ−オクタデシルエステル、Ｎ−アセチルメチオニンエチルエステル、メチオニンメチルエステル塩酸塩、メチオニンエチルエステル塩酸塩、メチオニンイソプロピルエステル、メチオニンｔ−ブチルエステル、メチオニンシクロヘキシルエステル、メチオニンｓ−ブチルエステル、およびメチオニンドデシルエステルである。
【００５２】
（ｂ）生体利用率
エステルの生体利用率を評価した。
【００５３】
（Ｉ）メチオニンメチルエステルおよびメチオニンｎ−プロピルエステル
前述のように調製した５６ｇのメチオニンメチルエステルと７２ｇのメチオニンｎ−プロピルエステル（ＤＬ−メチオニン５０ｇに相当する）を、朝の給餌直前の午前７時４５分に単回投与として２頭の雌ウシに与えた。
【００５４】
雌ウシに与えた飼料は、７ｋｇの乾草と２ｋｇの濃縮物を含み８時００分と１６時００分の２回の同量の飼料に分配した。
【００５５】
【表２】
【００５６】
雌ウシにエステルを与えた日の９時００分、１０時００分、１１時００分、１３時００分、および１５時００分と、エステル供給の前日および２日後の９時００分、１２時００分、および１５時００分に、頚静脈穿刺により血液試料を採取した。
【００５７】
各試料について、３０００回転／分で１０分間血液を遠心分離することによって血液試料から血漿を分離した。試料は冷凍室で保存した。ムーア（Ｍｏｏｒｅ）およびステイン（Ｓｔｅｉｎ）の標準的手順に従ってメチオニンの分析を行った。
【００５８】
従来のＡＵＣ法を使用して結果をプロットし、得られた曲線の下の面積を計算して各エステルの生体利用率が計算される。
【００５９】
エステルの生体利用率の結果を表２に示す。
【００６０】
（２）メチオニンｎ−ヘキシルエステル、メチオニンｎ−ブチルエステル、メチオニンｎ−オクタデシルエステル、Ｎ−アセチルメチオニンエチルエステル
前述のようにして調製したエステルの、５０ｇのメチオニンに相当する以下の量の単回投与量を、前述の（ｂ１）に記載の方法で２頭の雌ウシに与えた。
【００６１】
メチオニンｎ−ヘキシルエステル：７９ｇ
メチオニンｎ−ブチルエステル：８６ｇ
メチオニンｎ−オクタデシルエステル：２２７ｇ
Ｎ−アセチルメチオニンエチルエステル：７５ｇ
雌ウシに与えた飼料は、７ｋｇの乾草と、４１％のオオムギ、３７％の脱水ビートパルプ、５％の糖蜜、２％の尿素、および１５％のダイズ４８を含むと２ｋｇの濃縮物を含み、８時００分と１６時００分の２回の同量の飼料に分配した。
【００６２】
以下の計画で雌ウシにエステルを与えた：
【００６３】
【表３】
これらのエステルの生体利用率の結果を表２に示す。
【００６４】
（３）メチオニンエチルエステル塩酸塩
前述のようにして調製した７２ｇのメチオニンエチルエステル塩酸塩を使用して（ｂ１）の手順を繰り返した。
【００６５】
雌ウシに与えた毎日の試料は（ｂ２）と同様であった。
【００６６】
以下の計画に従って雌ウシにエステルを与えた：
【００６７】
【表４】
血液試料は（ｂ１）と同じ時間に採取した。
【００６８】
このエステルの生体利用率の結果を表２に示す。
【００６９】
（４）メチオニンドデシルエステルおよびメチオニンイソプロピルエステル
前述のようにして調製した１０６．５ｇのメチオニンドデシルエステルと６４．１ｇのメチオニンイソプロピルエステル（５０ｇのＤＬ−メチオニンに相当）を前述の（ｂ１）のようにして２頭の雌ウシに与えた。
【００７０】
以下の計画に従って雌ウシにエステルを与えた：
【００７１】
【表５】
血液試料は（ｂ１）の計画に従って採取した。
【００７２】
これらのエステルの生体利用率を表２に示す。
【００７３】
（５）メチオニンシクロヘキシルエステル、メチオニンメチルエステル塩酸塩、およびメチオニンｓ−ブチルエステル
前述のようにして調製したエステルの、５０ｇのメチオニン相当量に相当する以下の量の単回投与量を、前述の（ｂ１）に記載の方法で２頭の雌ウシに与えた：
メチオニンシクロヘキシルエステル：１２２ｇ
メチオニンメチルエステル塩酸塩：７３ｇ
メチオニンｓ−ブチルエステル：７２ｇ
生体利用率の結果を表２に示す。
【００７４】
【表６】
【００７５】
実施例３：動態
血流のメチオニンおよびＨＭＢの生体利用率の動態を、メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルに関して測定し、メチオニンのヒドロキシアナログ（本発明によらない化合物）と比較した。
【００７６】
ヒドロキシアナログのイソプロピルエステルの試料と（６９ｇ）ヒドロキシアナログ（アリメット（Ａｌｉｍｅｔ）（登録商標）５７ｇ）を４頭の雌ウシに与えて実施例２の手順を繰り返した。雌ウシから採取した血漿中のメチオニンおよびＨＭＢの量を分析し、その結果を以下の表３および４に示す。
【００７７】
メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルによって、ＨＭＢ自体の場合よりもはるかに速く血流にメチオニンおよびＨＭＢが送られることが結果から分かり、従って第１胃壁からエステルが吸収されていることを示している。
【００７８】
【表７】
【００７９】
【表８】
【００８０】
実施例４：ミルク生産
実施例（ａ）メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルおよびメチオニンのイソプロピルエステル
メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを、１６頭の雌ウシに８週間与えた。各雌ウシには、１００％の要求および１１５％のＰＤＩＥ（腸で消化できるタンパク質）要求を満たすコーンサイレージおよびサプリメントを毎日与えた。毎日のサプリメントは、１９．８％のオオムギ、２１．１％のコムギ、３７．５％のビートパルプ、２．３％の動物性脂肪、１．１％の塩類、０．６％の炭酸カルシウム、および１．１％の重炭酸ナトリウムからなる４．３ｋｇの高エネルギー濃縮物、２．２ｋｇの日に当てたダイズケーキ、１ｋｇの通常ダイズケーキ、２４０ｇの尿素、および３００ｇのビタミンおよびミネラルサプリメント類で構成された。
【００８１】
雌ウシを３つの群に分割し、通常の飼料に以下のサプリメントを加え、１頭で１日当り１２．５ｇの生体利用可能なメチオニンが得られるようにして、本発明による方法を実施した。
【００８２】
−処理１：１ｋｇのダイズケーキ
−処理２：１ｋｇのダイズケーキ、２０ｇのポリマーコーティングしたメチオニン（比較例）
−処理３：５７％のメチオニンを含有するＨＭＢＩのイソプロピルエステルを３％添加した１ｋｇのダイズケーキ
−処理４：７６％のメチオニンを含有するメチオニンのイソプロピルエステルを２．５％添加した１ｋｇのダイズケーキ。
【００８３】
これらのサプリメントを以下の計画に従って雌ウシに与えた：
【００８４】
【表９】
生産したミルクの分析結果を以下の表５に示す。
【００８５】
【表１０】
【００８６】
メチオニンのイソプロピルエステル、ならびにメチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを雌牛の飼料に加えることによって、より脂肪含有率が高くよりタンパク質含有率の高いミルクが得られることが結果から分かる。
【００８７】
実施例５ 肝臓および繁殖性
実施例４の手順を繰返し、雌ウシの肝機能および繁殖性を調べた。エステルを与えた雌ウシに実質的な向上が見られた。
【００８８】
実施例６ ミルク生産
実施例１および２に報告される結果を確認するために選択した他のエステルを含有する飼料を使用して実施例４の手順を繰り返すと、乳牛の血液中のメチオニンの生体利用率は本発明のエステルおよびこれらのエステルを使用した飼料を使用した場合に向上が見られる。ミルクの向上も見られる。
本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む、生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法に関する。本発明は、乳牛から得られるミルクを改良する方法、特にメチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を乳牛に供給することを含む方法にも関する。
【０００２】
タンパク質は、泌乳牛の飼料の主栄養素の１つである。しかし雌ウシは実際にはタンパク質を必要とせず、その代わり雌ウシ自身のタンパク質を作り上げる基本的要素である特定のアミノ酸を必要とする。
【０００３】
メチオニンは制限アミノ酸であることが知られており、特にミルク生産において、メチオニン量のバランスを良好に保つことによってミルク生産量が効率的になると考えられている。メチオニン量を増加させることによってミルク生産量を増加させることができるとも考えられている。
【０００４】
従って、メチオニン量を維持するかさらに増加させることが望ましい。メチオニンは雌ウシの飼料に直接加えることが可能である。しかしこのアミノ酸の遊離形態は、第１胃の細菌によって急速に分解され、その結果少量のメチオニンしか血流に入らない。この問題を克服するために多くのことが試みられており、一般には、第１胃の影響を受けずに化合物を通過させるために保護または修飾された形態でメチオニンが飼料に加えられている。保護または修飾された形態から遊離したメチオニンは次に小腸に送られ、血流に吸収される。この特殊な目的のために最も広く研究されている化合物の１つはメチオニンのヒドロキシアナログ、すなわち２−ヒドロキシ−４−（メチルチオ）ブタン酸であり、全般にＨＭＢと呼ばれる。
【０００５】
ＷＯ９９／０４６４７号（１９９９年２月４日公開）は、飼料にメチオニンのヒドロキシアナログを追加することによって、メチオニンを第１胃に導入する方法を開示している。この特許出願では、ヒドロキシアナログは第１胃による分解の影響を実質的に受けずに第１胃を通過し、その結果少なくとも２０％、好ましくは少なくとも４０％のヒドロキシアナログが腸から血流に吸収されると主張している。この特許出願では、ヒドロキシアナログ、その塩、エステル、アミド、およびオリゴマーを「第１胃バイパス」と呼んでおり、雌牛の血流へのメチオニンの導入のための改良された効率的な手段であると主張している。この特許に開示される化合物の利点は、この化合物は第１胃の問題を回避し腸で吸収されることであると主張している。
【０００６】
メチオニンのヒドロキシアナログの効果に関する出版物も多数存在し、１９９８年５月の発表を元にしたチャールズ・シュワーブ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｓｃｈｗａｂ）による出版物ではすべての出版物についてのレビューがあり、メチオニンのヒドロキシアナログが腸管吸収に関する第１胃の問題が回避されると考えられるが、１頭当り６０ｇ／日を超える投与量、好ましくは１頭当り９０ｇ／日を超える投与量で投与した場合にのみこのことが言えると結論している。より少ない投与量では、メチオニンのヒドロキシアナログは第１胃の微生物によってより多い量が消費されると著者は述べている。
【０００７】
メチオニンのヒドロキシアナログの吸収の最良の測定法は、血液中の生体利用率を測定することである。生体利用率は、飼料に導入される化合物のメチオニン相当量と比較した血液中のメチオニン量として特徴づけられる。この測定は、ヒドロキシアナログの第１胃を通過する経路、消化経路中の吸収位置とは無関係のアナログの吸収率、および酵素によるヒドロキシアナログからメチオニンへ転化する割合を考慮している。雌ウシ１頭当り５０ｇ／日に相当するメチオニンの投与量で、第１胃における消化に対してポリマーで保護されたメチオニン、特に商品名スマートアミン（Ｓｍａｒｔａｍｉｎｅ）（登録商標）として販売されている製品は、第１胃バイパスが９０％であり、ヒドロキシアナログの生体利用率はわずか３％であるとこの文献には記載されている。
【０００８】
Ｊ Ｄａｉｒｙ Ｓｃｉｅｎｃｅ １９８８，７１，ｐｐ３２９２−３３０１の論文には、ミルク生産量を増加させるためのメチオニンのヒドロキシアナログのメチルエステルまたはエチルエステルの雌ウシの飼料への導入が開示されている。この研究の結果は、これらのエステルはメチオニンのヒドロキシアナログに容易に転化され、続いて雌ウシの第１胃で分解されることを示している。特に、第１胃液中で６時間インキュベートした後では、ヒドロキシアナログのメチルエステルとエチルエステルはそれぞれ１．８％と３％しか残留しない。これは、メチオニンとメチオニンのヒドロキシアナログとの場合の３４％および８５％と比較される。
【０００９】
前述の従来技術の教示とは逆に、我々は、メチオニンまたはメチオニンアミドおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのある種のエステルが雌ウシに好都合な影響を与えることを発見した。驚くべきことに我々は、ある種の化合物によって公知の従来技術よりも効率的でより迅速に第１胃の血流にメチオニンが導入されることを発見した。我々は、これらの特定の化合物は第１胃バイパスおよび腸管吸収によって血流に入るのではなく、第１胃壁を通って吸収されることによって血流に入ることも発見した。本発明者らは、特定のエステル化合物を供給経路から乳牛の飼料に導入することによって、ミルク生産が希望通りに向上されることも発見した。
【００１０】
従って、本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法を提供する。 本発明の目的のため、雌ウシはウシを意味し、すなわち肉牛および乳牛を意味する。
【００１１】
特に、本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドの分岐アルキルエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログの分岐アルキルエステルを雌ウシに投与することを含む、生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法を提供する。
【００１２】
特許請求されるエステルの使用は、従来技術のメチオニン誘導体よりも雌ウシの血流中のメチオニン量が多くなるという点で従来技術よりも優れている。さらに驚くべきことに本発明者らは、特定のエステルを使用することによって、メチオニンが非常に迅速に血流に吸収されることを発見した。本発明によるエステル誘導体は、第１胃での分解が避けられるだけではなく、驚くべきことに第１胃壁から吸収されることによって血流にメチオニンが送られることが分かった。このことは、メチオニンのヒドロキシアナログ化合物が第１胃で分解されるか第１胃を通過して腸管で吸収されるかのいずれかであるかが知られている従来技術とは正反対である。
【００１３】
当分野の従来技術から明らかであるが、反芻動物の血流へのメチオニンの導入の研究は、血流へのメチオニン導入の最も速く最も効率的な手段として第１胃バイパス化合物の使用に集中していた。本発明者らは、本発明のエステルを雌ウシの飼料に添加することによって、メチオニン相当量の５０％を超える量が第１胃壁から直接吸収される場合があることを発見した。これらのエステルは高い生体利用率を有するだけではなく、雌ウシが摂取した後に第１胃から吸収されることによって、メチオニンまたは生物学的に等価な化合物を非常に迅速に血流に送ることができる。これまで揮発性脂肪酸、アンモニア、およびジオキシカーボン類などの化合物のみが第１胃壁から吸収されると実質的に考えられていたので、この結果は驚くべきことであり全く予想外のことであった。
【００１４】
本発明は雌ウシの体調の向上に関しても探求しており、本発明の特定のエステルを使用することによって重量増加を改良し、受精率を向上させ、エネルギーを増大させ、さらに肝機能を向上させることができる。
【００１５】
エステルの投与による肝機能への効果は重要な利点である。この効果は、非常に低密度のリポタンパク質の改良によって代謝の問題が軽減されることを特徴とすることができる。同様のことであるが、ケトン血症が減少し、肝脂肪症も制限される。
【００１６】
エステルの投与は、生殖においても有益な効果を得ることができる。出産と生殖の間隔を短くすることができる。この効果は、精子注入時の受精率を増大させるという特徴も有する。
【００１７】
特殊なエステルの使用によって、第１胃発酵を刺激し、それによってより消化しやすい有機物質が得られ、従ってより多くのエネルギーを得ることもできる。
【００１８】
本発明者らは、本発明のエステルを乳牛に与えた場合に、その乳牛から得られるミルクが改良されることも発見した。
【００１９】
本発明の別の態様によると、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む、乳牛のミルクの改良方法が提供される。
【００２０】
特に、本発明は、メチオニンの分岐アルキルエステルまたはメチオニンのヒドロキシアナログの分岐アルキルエステルを雌ウシに投与することを含む、乳牛のミルクの改良方法を提供する。
【００２１】
本発明のエステルを乳牛に供給する場合、本発明者らは、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を乳牛の毎日の通常飼料に追加することによって、乳牛から得られるミルクの品質の予期せぬ向上が見られることを発見した。特に、本発明者らは特定のエステルを乳牛の飼料に加えることによって、ミルクのタンパク質含有量が増加することを発見した。
【００２２】
さらに、タンパク質の量以外に、特定のメチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステルまたはそれらの塩を投与することによって、ミルク生産量およびミルクの脂肪含有量を向上させることができることを発見した。
【００２３】
エステルの投与によるタンパク質含有量の増加は、一般にミルク１リットル当りで０．５〜４ｇのタンパク質と評価することができる。一般に増加するタンパク質は、α、β、およびκであり、特にβおよびκタンパク質は生産されるミルクのチーズ製造特性に望ましい効果を有する。
【００２４】
以上の目的は、全体または一部で実現することができる。
【００２５】
本発明は、メチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、またはそれらの塩を雌ウシに投与することを含む、雌ウシに生体利用可能なメチオニンを供給する方法に関する。好適なエステルはアルキルエステルである。アルキル基は、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜１０の炭素原子、最も好ましくは１〜４個の炭素原子を有する線状、分岐、または環状アルキル基であってよい。
【００２６】
メチオニンおよびメチオニンのヒドロキシアナログの好適なエステルとしては、メチルエステル、エチルエステル、ｎ−プロピルエステル、イソプロピルエステル、ブチルエステル、すなわち、ｎ−ブチルエステル、ｓ−ブチルエステル、イソブチルエステル、およびｔ−ブチルエステル、ペンチルエステルおよびヘキシルエステル、特にｎ−ペンチル、イソペンチルエステル、ｎ−ヘキシルエステル、およびイソヘキシルエステルが挙げられる。メチオニンの好適なアミドとしては、Ｎ−アシルメチオニンアルキルエステルが挙げられ、例えばＮ−アセチルメチオニンアルキルが挙げられる。
【００２７】
好ましくは、エステルは分岐または線状アルキルエステルであり、特に分岐アルキルエステル、例えばイソプロピルエステルおよびｔ−ブチルエステルである。メチオニンのエステルに関しては、イソプロピルエステルおよびｔ−ブチルエステルが最も好ましい。メチオニンのヒドロキシアナログに関しては、ｔ−ブチルエステルおよびイソプロピルエステルが最も好ましい。
【００２８】
特に、メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルの使用が特に効果的であり、第１胃壁から吸収されることによってメチオニン相当量の少なくとも５０％を血流に供給可能であることが分かった。メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルは、メチオニンの生体利用率が５０％を超えることが分かった。
【００２９】
さらに、ヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを使用することで、投与後の比較的短時間で生体利用率のピークが現われることから、第１胃壁から直接吸収されることを示しており、従って該エステルが第１胃バイパスではないことを示していることが分かった。
【００３０】
メチオニンのｔ−ブチルエステルは、第１胃で吸収されることによってメチオニン相当量の約８０％を雌ウシに与えることができることも分かった。この特殊なエステルは、メチオニンを摂取して１時間以内の場合に血流に迅速に入ることも分かった。
【００３１】
エステルは任意の好適な方法で雌ウシに供給することができる。好ましくは、エステルは飼料のサプリメントとして供給され、通常の毎日の飼料によって雌ウシに与えることができる。雌ウシには濃縮物部分とかいば部分を含む飼料が与えられる。本発明の別の態様によると、かいば部分、濃縮物部分、およびサプリメントを含む飼料が提供され、該サプリメントはメチオニンまたはメチオニンアミドのエステルおよび／またはメチオニンのヒドロキシアナログのエステル、およびそれらの塩を含む。
【００３２】
飼料に加えられる好適なエステルは、前述したエステルである。好ましい飼料は、かいば部分、濃縮物部分、およびメチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを含む。
【００３３】
雌ウシの飼料に加えられるエステルの量は、雌ウシの品種およびミルク生産サイクルの段階によって変動しうる。好適にはサプリメントは、メチオニン相当量で計算して１頭当り１日で上限７５ｇ、好ましくは５〜５０ｇ、特に１０〜３０ｇの量のエステルを含む。
【００３４】
必要なエステル量は、当業者には公知の任意の好適な手段を使用して計算することができる。好適には、コンピュータモデルを使用して量を求めることができる。
【００３５】
飼料がメチオニンのヒドロキシアナログのｔ−ブチルエステルまたはイソプロピルエステルを含む場合、エステルは好適には１頭当り７〜６５ｇ／日の濃度で存在することができ、最も好ましくは１頭当りで１０〜３０ｇ／日の濃度を含有する。飼料がメチオニンのイソプロピルエステルまたはｔ−ブチルエステルを含む場合、飼料は好適には７〜６５ｇ、最も好ましくは１０〜３０ｇのエステルを含む。
【００３６】
本発明の別の態様によると、本明細書で前述した１頭の雌ウシに１日に投与することが好適な量のエステルを含む単位用量が提供される。
【００３７】
かいば部分は通常、コーンサイレージ、グラスサイレージ、アルファルファサイレージおよび／または乾草サイレージを含むことができる。濃縮物部分は、粗びき粉、ナタネ、ダイズ、トウモロコシグルテンなどのタンパク質源、および魚粉、血粉、ビールかすなどの副産物に加えてトウモロコシ、コムギ、オオムギなどの穀物を通常含むことができる。
【００３８】
エステルを含むサプリメントは、任意の好適な時間にかいば部分および穀物部分と混合することができる。エステルは液体であり、飼料ペレットを製造する前にかいば部分および濃縮物部分と混合して導入することができる。あるいは、エステルは、雌ウシに与える前に農業従事者がペレット飼料に加えることができる。
【００３９】
飼料ペレットにエステルを加える場合、ペレットの製造前または後のいずれも好適である。特に、ヒドロキシアナログのイソプロピルエステルは、得られるペレットが長期間にわたって９５％の安定性が維持される程度に安定であることが分かった。従って、本発明のエステルを飼料サプリメントとして使用することによって、安定なメチオニン源を得ることができる。
【００４０】
以下の実施例を参照しながら本発明を詳細に説明する。
【００４１】
実施例１：メチオニンのヒドロキシアナログのエステル
（ａ）エステルの調製：
（１）メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステル
３１４．４ｇ（１．８８ｍｏｌ）の２−ヒドロキシ−４−メチルチオ−ブチロニトリルを、障害物を取付けた撹拌装置の付いたジャケット反応器に装入した。２０１．３ｇ（１．９５１ｍｏｌ）の９５％硫酸をゆっくり加えながら、温度を５０℃より低温に維持した。硫酸を加えた後、反応温度を４５℃で１５分間維持した。２２７．３ｇのイソプロパノールを反応内容物に加えた。次に反応器底部の温度が１１６℃に到達し、上部の温度が７０℃に到達するまで反応器の温度を５℃／分で上昇させた。これらの反応器条件を５時間維持した。この間、一部の蒸溜物を除去して、新しいイソプロパノールで置換した。
【００４２】
次に反応混合物に１６１．２ｇの３２％アンモニア水溶液（２．７２ｍｏｌのアンモニア）を加えて中和した。２相に分離した。７８０ｇの水と４４９．７ｇのジクロロメタンを加えた。得られた２つの相を分離し、９３９．１ｇの有機相と１２４７．４ｇの水相を得た。
【００４３】
有機生成物の軽留分を蒸溜によって除去した。蒸発浴の温度を上昇させ、約数ミリバールまで圧力を低下させた。２６３．５ｇの蒸溜物を回収した。メチオニンのイソプロピルエステルの力価が９９％を超えるていことが分かった。収率は７２％であった。
【００４４】
（２）メチオニンのヒドロキシアナログのメチルエステル、エチルエステル、ｎ−ブチルエステル、およびシクロヘキシルエステル
適当なアルコールを使用したことを除けば、上述のようにしてこれらのエステルを調製した。
【００４５】
（ｂ）生体利用率
前述のようにして調製したエステルの、５０ｇのメチオニン相当量に相当する以下の量の単回投与量を、前述の実施例２（ｂ１）に記載の方法で２頭の雌ウシに与えた。
【００４６】
ＨＭＢのメチルエステル：６４．８ｇ
ＨＭＢのエチルエステル：７４．８ｇ
ＨＭＢのイソプロピルエステル：８０．５ｇ
ＨＭＢのｎ−ブチルエステル：９６ｇ
ＨＭＢのシクロヘキシルエステル：９７．５ｇ
ＨＭＢのｓ−ブチルエステル：７９ｇ
メチオニンおよびＨＭＢの濃度を２７時間測定した。測定値をプロットし、得られた曲線の下の面積を計算して生体利用率の結果を求めた。
【００４７】
生体利用率はスマートアミン（Ｓｍａｒｔａｍｉｎｅ）（登録商標）を基準として求めた。
【００４８】
エステルの生体利用率の結果を表１に示す。
【００４９】
【表１】
実施例２−メチオニンのエステル
（ａ）エステルの調製
以下の一般手順に従ってメチオニンのエステルを調製した：
メチオニンと、エステル化されるメチオニンに対して１．２当量の硫酸とを、アルキル鎖の性質に対応したアルコールに加えた。得られた混合物を還流し、水を蒸発させて平衡を移動させた。混合物にアンモニアを加えて中和し、エステルを単離した。アルコールは留去した。得られたエステルをジクロロメタンで抽出し、水洗した。ジクロロメタンは蒸発させた。
【００５１】
この手順に従って調製したメチオニンのエステルは、メチオニンメチルエステル、メチオニンｎ−プロピルエステル、メチオニンｎ−ブチルエステル、メチオニンｎ−ヘキシルエステル、メチオニンｎ−オクタデシルエステル、Ｎ−アセチルメチオニンエチルエステル、メチオニンメチルエステル塩酸塩、メチオニンエチルエステル塩酸塩、メチオニンイソプロピルエステル、メチオニンｔ−ブチルエステル、メチオニンシクロヘキシルエステル、メチオニンｓ−ブチルエステル、およびメチオニンドデシルエステルである。
【００５２】
（ｂ）生体利用率
エステルの生体利用率を評価した。
【００５３】
（Ｉ）メチオニンメチルエステルおよびメチオニンｎ−プロピルエステル
前述のように調製した５６ｇのメチオニンメチルエステルと７２ｇのメチオニンｎ−プロピルエステル（ＤＬ−メチオニン５０ｇに相当する）を、朝の給餌直前の午前７時４５分に単回投与として２頭の雌ウシに与えた。
【００５４】
雌ウシに与えた飼料は、７ｋｇの乾草と２ｋｇの濃縮物を含み８時００分と１６時００分の２回の同量の飼料に分配した。
【００５５】
【表２】
雌ウシにエステルを与えた日の９時００分、１０時００分、１１時００分、１３時００分、および１５時００分と、エステル供給の前日および２日後の９時００分、１２時００分、および１５時００分に、頚静脈穿刺により血液試料を採取した。
【００５７】
各試料について、３０００回転／分で１０分間血液を遠心分離することによって血液試料から血漿を分離した。試料は冷凍室で保存した。ムーア（Ｍｏｏｒｅ）およびステイン（Ｓｔｅｉｎ）の標準的手順に従ってメチオニンの分析を行った。
【００５８】
従来のＡＵＣ法を使用して結果をプロットし、得られた曲線の下の面積を計算して各エステルの生体利用率が計算される。
【００５９】
エステルの生体利用率の結果を表２に示す。
【００６０】
（２）メチオニンｎ−ヘキシルエステル、メチオニンｎ−ブチルエステル、メチオニンｎ−オクタデシルエステル、Ｎ−アセチルメチオニンエチルエステル
前述のようにして調製したエステルの、５０ｇのメチオニンに相当する以下の量の単回投与量を、前述の（ｂ１）に記載の方法で２頭の雌ウシに与えた。
【００６１】
メチオニンｎ−ヘキシルエステル：７９ｇ
メチオニンｎ−ブチルエステル：８６ｇ
メチオニンｎ−オクタデシルエステル：２２７ｇ
Ｎ−アセチルメチオニンエチルエステル：７５ｇ
雌ウシに与えた飼料は、７ｋｇの乾草と、４１％のオオムギ、３７％の脱水ビートパルプ、５％の糖蜜、２％の尿素、および１５％のダイズ４８を含むと２ｋｇの濃縮物を含み、８時００分と１６時００分の２回の同量の飼料に分配した。
【００６２】
以下の計画で雌ウシにエステルを与えた：
【００６３】
【表３】
【００６４】
（３）メチオニンエチルエステル塩酸塩
前述のようにして調製した７２ｇのメチオニンエチルエステル塩酸塩を使用して（ｂ１）の手順を繰り返した。
【００６５】
雌ウシに与えた毎日の試料は（ｂ２）と同様であった。
【００６６】
以下の計画に従って雌ウシにエステルを与えた：
【００６７】
【表４】
【００６８】
このエステルの生体利用率の結果を表２に示す。
【００６９】
（４）メチオニンドデシルエステルおよびメチオニンイソプロピルエステル
前述のようにして調製した１０６．５ｇのメチオニンドデシルエステルと６４．１ｇのメチオニンイソプロピルエステル（５０ｇのＤＬ−メチオニンに相当）を前述の（ｂ１）のようにして２頭の雌ウシに与えた。
【００７０】
以下の計画に従って雌ウシにエステルを与えた：
【００７１】
【表５】
【００７２】
これらのエステルの生体利用率を表２に示す。
【００７３】
（５）メチオニンシクロヘキシルエステル、メチオニンメチルエステル塩酸塩、およびメチオニンｓ−ブチルエステル
前述のようにして調製したエステルの、５０ｇのメチオニン相当量に相当する以下の量の単回投与量を、前述の（ｂ１）に記載の方法で２頭の雌ウシに与えた：
メチオニンシクロヘキシルエステル：１２２ｇ
メチオニンメチルエステル塩酸塩：７３ｇ
メチオニンｓ−ブチルエステル：７２ｇ
生体利用率の結果を表２に示す。
【００７４】
【表６】
実施例３：動態
血流のメチオニンおよびＨＭＢの生体利用率の動態を、メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルに関して測定し、メチオニンのヒドロキシアナログ（本発明によらない化合物）と比較した。
【００７６】
ヒドロキシアナログのイソプロピルエステルの試料と（６９ｇ）ヒドロキシアナログ（アリメット（Ａｌｉｍｅｔ）（登録商標）５７ｇ）を４頭の雌ウシに与えて実施例２の手順を繰り返した。雌ウシから採取した血漿中のメチオニンおよびＨＭＢの量を分析し、その結果を以下の表３および４に示す。
【００７７】
メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルによって、ＨＭＢ自体の場合よりもはるかに速く血流にメチオニンおよびＨＭＢが送られることが結果から分かり、従って第１胃壁からエステルが吸収されていることを示している。
【００７８】
【表７】
【表８】
実施例４：ミルク生産
実施例（ａ）メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルおよびメチオニンのイソプロピルエステル
メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを、１６頭の雌ウシに８週間与えた。各雌ウシには、１００％の要求および１１５％のＰＤＩＥ（腸で消化できるタンパク質）要求を満たすコーンサイレージおよびサプリメントを毎日与えた。毎日のサプリメントは、１９．８％のオオムギ、２１．１％のコムギ、３７．５％のビートパルプ、２．３％の動物性脂肪、１．１％の塩類、０．６％の炭酸カルシウム、および１．１％の重炭酸ナトリウムからなる４．３ｋｇの高エネルギー濃縮物、２．２ｋｇの日に当てたダイズケーキ、１ｋｇの通常ダイズケーキ、２４０ｇの尿素、および３００ｇのビタミンおよびミネラルサプリメント類で構成された。
【００８１】
雌ウシを３つの群に分割し、通常の飼料に以下のサプリメントを加え、１頭で１日当り１２．５ｇの生体利用可能なメチオニンが得られるようにして、本発明による方法を実施した。
【００８２】
−処理１：１ｋｇのダイズケーキ
−処理２：１ｋｇのダイズケーキ、２０ｇのポリマーコーティングしたメチオニン（比較例）
−処理３：５７％のメチオニンを含有するＨＭＢＩのイソプロピルエステルを３％添加した１ｋｇのダイズケーキ
−処理４：７６％のメチオニンを含有するメチオニンのイソプロピルエステルを２．５％添加した１ｋｇのダイズケーキ。
【００８３】
これらのサプリメントを以下の計画に従って雌ウシに与えた：
【００８４】
【表９】
【００８５】
【表１０】
メチオニンのイソプロピルエステル、ならびにメチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを雌牛の飼料に加えることによって、より脂肪含有率が高くよりタンパク質含有率の高いミルクが得られることが結果から分かる。
【００８７】
実施例５ 肝臓および繁殖性
実施例４の手順を繰返し、雌ウシの肝機能および繁殖性を調べた。エステルを与えた雌ウシに実質的な向上が見られた。
【００８８】
実施例６ ミルク生産
実施例１および２に報告される結果を確認するために選択した他のエステルを含有する飼料を使用して実施例４の手順を繰り返すと、乳牛の血液中のメチオニンの生体利用率は本発明のエステルおよびこれらのエステルを使用した飼料を使用した場合に向上が見られる。ミルクの向上も見られる。
Claims (14)
- メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルまたはその塩を雌ウシに投与することを含み、第１胃壁を通って吸収されることによって、生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給する方法。
- 前記エステルが飼料へのサプリメントとして導入される請求項１に記載の方法。
- メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルを雌ウシに投与することを含む、生体利用率が少なくとも５０％であるメチオニンを雌ウシに供給する方法。
- メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルまたはその塩を乳牛に供給することを含む、乳牛から得られるミルクの改良方法。
- 前記改良が前記ミルクのタンパク質含有量の増加を含む請求項４に記載の方法。
- 前記改良が前記ミルクの脂肪含有量の増加を含む請求項４に記載の方法。
- 穀物部分、濃縮物部分、およびサプリメントを含む飼料であって、該サプリメントがメチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルまたはその塩を含む、請求項１または２により生体利用可能なメチオニンを雌ウシに供給するための飼料。
- 前記サプリメントが、メチオニン相当量で計算して上限７５ｇの量のエステルを含む請求項７に記載の飼料。
- メチオニン相当量で計算して１０〜３０ｇの量のエステルを含む請求項８に記載の飼料。
- 前記イソプロピルエステルが、雌ウシ１頭当り１日当りで７〜６５ｇの量で存在する請求項８または９に記載の飼料。
- メチオニンのヒドロキシアナログのイソプロピルエステルまたはそれらの塩を雌ウシに供給することを含む、雌ウシの体調を向上させる方法。
- 前記向上が繁殖性の向上を含む請求項１１に記載の方法。
- 前記向上が肝機能の向上を含む請求項１１に記載の方法。
- 前記向上がエネルギーの増大を含む請求項１１に記載の方法。
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