ES2351974T3 - Un método de administración de metionina biodisponible a una vaca. - Google Patents

Abstract

Un método de suministro de metionina biodisponible a una vaca, que consiste en administrar a la vaca por lo menos un éster terc-butílico de metionina, éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina y una sal respectiva.

Description

La presente invención se refiere a un método de suministro

�� de metionina biodisponible a una vaca que consiste en administrar a la vaca un éster terc-butílico de metionina terc-butilo y/o éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina o una sal respectiva. La presente invención se refiere además a un método para mejorar la leche obtenida de vacas lecheras y en particular

���

a un método que consiste en administrar a la vaca lechera un éster terc-butílico de metionina y/o éster terc-butílico del análogo del hidroxi de la metionina o una sal respectiva.

La proteína es uno de los principales nutrientes de la dieta de las vacas lactantes. A pesar de que las vacas no necesiten

���

actualmente proteínas, lo que realmente necesitan son aminoácidos específicos para poder generar los bloques en los que se basan sus propias proteínas.

Se sabe que la metionina es un aminoácido limitador y en particular en lo referente a la producción de leche se considera

���

que un nivel bien equilibrado de metionina se traduce en niveles eficaces de producción lechera. Se considera además que un aumento de los niveles de metionina se puede traducir en una mayor producción de leche.

Es deseable por tanto mantener o incluso ampliar el nivel de

���

metionina. La metionina puede añadirse directamente al pienso de la vaca. Sin embargo, la forma libre de este aminoácido se degrada rápidamente por acción de las bacterias del rumen y por ello solamente una pequeña porción de la metionina penetra en el

torrente sanguíneo. Se han realizado múltiples intentos para superar este problema y en general la metionina se introduce en el pienso en forma protegida o modificada, permitiendo al compuesto atravesar el rumen sin sufrir alteración. La metionina

�� liberada a partir de la forma protegida o modificada penetra seguidamente en el intestino delgado y de este se absorbe en el torrente sanguíneo. Uno de los compuestos que se ha estudiado más a fondo para este fin especial es el análogo hidroxi de la metionina, a saber el ácido 2-hidroxi-4-(metiltio)butanoico, que

���

se abrevia en general con las siglas HMB.

En el documento WO 99/04647, publicado con fecha 4 de febrero de 1999, se describe un método de introducción de metionina en el rumen complementando el pienso con el análogo hidroxi de la metionina. En esta solicitud de patente se

���

reivindica que el análogo hidroxi resulta sustancialmente inalterado por la degradación realizada en el rumen, pasando a través del mismo y proporcionando por tanto por lo menos un 20%, con preferencia por lo menos un 40 % del análogo hidroxi por absorción en el torrente sanguíneo a través del intestino. La

���

solicitud de patente se refiere al análogo hidroxi, sus sales, ésteres, y oligómeros en calidad de atravesar el rumen (rumen by-pass) y reivindica un medio mejorado eficaz de introducir la metionina en el caudal sanguíneo de la vaca. La ventaja que se reivindica de los compuestos descritos en estos documentos es que

���

los compuestos atraviesan el rumen y se absorben en el intestino.

Existen también muchas publicaciones sobre el efecto del análogo hidroxi de la metionina y una publicación de Charles Schwab, de un discurso pronunciado en una conferencia en mayo de 1998, hace un repaso de las publicaciones y concluye que el

���

análogo hidroxi de la metionina se cree que atraviesa el rumen y

se absorbe después en el intestino, pero que solamente ocurre esto si se administra en una dosis superior a 60 g por animal y día, con preferencia superior a 90 g por animal y día. Al parecer en dosis menores, en opinión de este autor, el análogo hidroxi de

�� la metionina resulta consumido en gran parte por los microorganismos del rumen.

La mejor determinación de la absorción del análogo hidroxi

de la metionina consiste en determinar la biodisponibilidad en la

sangre. La biodisponibilidad se caracteriza por el nivel de

���

aparición de la metionina en la sangre, comparándolo con la cantidad de metionina equivalente al compuesto introducido mediante la ración de pienso. Esta determinación tiene en cuenta el paso del análogo hidroxi a través del rumen, su grado de absorción con independencia del lugar de absorción durante el

���

tránsito digestivo y el grado de conversión enzimática del análogo hidroxi en la metionina. En una dosis de metionina equivalente a 50 g por día y vaca, se describe en este artículo que la metionina protegida con un polímero de la degradación del rumen, en particular un producto suministrado con el nombre

���

comercial de SmartamineTM, atraviesa el rumen en una porción del 90%; el análogo hidroxi da una biodisponibilidad solamente del 3%.

Un artículo publicado en J. Dairy Science 1988, 71, pp. 3292 a 3301, describe la introducción del éster metílico o el éster

���

etílico del análogo hidroxi de la metionina en el pienso de una vaca con el fin de aumentar el nivel de producción lechera. Los resultados del estudio indican que estos ésteres se convierten rápidamente en el análogo hidroxi de la metionina y a continuación se degradan en el rumen del animal. En concreto,

���

después de una incubación de seis horas en los jugos del rumen,

solamente queda el 1,8% y el 3% de los ésteres metílico y etílico del análogo hidroxi, respectivamente. Compárense estos valores con el 34% y el 85% de la metionina y del análogo hidroxi de la metionina.

�� La US 4388327A describe un método para aumentar la producción de leche de vacas lecheras con el análogo hidroxi de metionina y sus oligómeros, alimentando dichas vacas con un complemento alimenticio que comprende una cantidad efectiva de dicho análogo y/u oligómeros.

���

La AU478542B describe el uso de ésteres de metionina y del análogo hidroxi de metionina para estimular el crecimiento de lana en ovejas, eligiéndose dichos ésteres entre ésteres de metilo, etilo e isopropilo, que son los únicos ésteres encontrados efectivos. Estos ésteres prueban aumentar el nivel

���

de plasma en sangre de metionina de rumiantes.

Hemos encontrado ahora que, a diferencia de las enseñanzas ya mencionadas de la técnica anterior, que ciertos ésteres de metionina y/o del análogo hidroxi de la metionina tienen un efecto favorable en las vacas. Ahora hemos encontrado de modo

���

sorprendente que el compuesto introduce la metionina en el torrente circulatorio del rumen con mayor eficacia y mayor rapidez que las conocidas por la técnica anterior. Hemos encontrado además que estos compuestos particulares no entran en el torrente sanguíneo después de haber atravesado el rumen y ser

���

absorbido en el intestino, sino que la absorción se efectúa a través de la pared del rumen. Hemos encontrado además que la introducción de este compuesto de éster específico en la dieta de las vacas lecheras a través de la ración de pienso se traduce en la deseada mejora de la producción lechera.

La presente invención proporciona por tanto un método para suministrar metionina biodisponible a una vaca que consiste en administrar a la vaca un éster de metionina y/o un éster del análogo hidroxi de la metionina o una sal respèctiva.

�� Para los fines de la presente invención, se entiende por vaca el ganado, a saber vacas de carne y vacas lecheras.

Mas concretamente el presente invento proporciona un método

para suministrar metionina biodisponible a una vaca que comprende

administrar a la vaca por lo menos un éster terc-butílico de

��� metionina, éster del análogo hidroxi de metionina, y una sal respectiva.

El uso de los ésteres reivindicados proporciona la ventaja

sobre la técnica anterior de que aporta una mayor cantidad de

metionina al torrente circulatorio de la vaca que los derivados

���

de metionina de la técnica anterior. Además, hemos encontrado de modo sorprendente que el uso de los ésteres particulares se traduce en una absorción muy rápida de la metionina en el torrente sanguíneo. El derivado éster según la presente invención parece que no solo evita la degradación en el rumen sino que

���

además introduce de modo sorprendente la metionina en el torrente circulatorio por absorción a través de la pared del rumen. Esto es contrario a la técnica anterior ya mencionada, en la que los compuestos análogos hidroxi de la metionina se conocían ya sea por degradarse en el rumen, ya sea por atravesar el rumen y

���

absorberse a través del intestino.

Como es evidente por la técnica anterior en este ámbito, los

estudios para introducir la metionina en el torrente circulatorio

del rumiante se han concentrado en el uso de compuestos que

atraviesan el rumen como medio más rápido y más eficaz de

introducir la metionina en el torrente circulatorio. Hemos encontrado además que la adición de los ésteres de la presente invención al pienso de la vaca puede traducirse, en algunos casos, que más del 50% de equivalentes de metionina se absorbe

�� directamente a través de la pared del rumen. Estos ésteres no solo poseen un alto nivel de biodisponibilidad, sino que permite a la metionina o a sus compuestos biológicamente equivalentes la entrada en el torrente circulatorio con gran rapidez después de la ingestión por parte de la vaca a través de una absorción en el

���

rumen. Este resultado es muy sorprendente y totalmente inesperado porque hasta el presente se había creído que solamente se absorbían a través de las paredes del rumen los compuestos del tipo ácidos grasos volátiles, amoníaco y dioxicarbonos.

La presente invención pretende proporcionar además una

���

mejora del estado general de la vaca y el uso de ésteres específicos de la presente invención puede traducirse en una mejora en el aumento de peso, una mejora de la fertilidad, un aumento de la energía y también una mejora del funcionamiento del hígado.

���

El efecto sobre el funcionamiento del hígado como resultado de la administración del éster es un beneficio importante. Este efecto puede caracterizarse por una reducción de los problemas metabólicos por una mejora de las lipoproteínas de densidad muy baja. Se piensa además como probable la reducción de la cetosis

���

de la sangre y una limitación de la esteatosis hepática.

La administración del éster puede tener además efectos

beneficiosos en la reproducción. Puede acortarse el período entre

el parto y la reproducción. Este efecto se caracteriza además por un incremento en el porcentaje de fertilización durante la inseminación.

Parece además que el uso de los ésteres específicos puede traducirse en una estimulación de la fermentación en el rumen,

�� con lo cual aumenta la materia orgánica digerible y por ello también la energía obtenida.

Hemos encontrado además que cuando se administran los

ésteres de la presente invención a las vacas lecheras, se observa

una mejora en la leche obtenida de las mismas.

���

Según otro aspecto de la presente invención se proporciona también un método de mejora de la leche de una vaca lechera que consiste en administrar a la vaca éster terc-butílico de metionina y/o éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina o una sal respectiva.

���

Cuando se suministra el éster de la presente invención a vacas lecheras, hemos constatado que complementando el pienso diario normal de la vaca lechera dicho éster y/o dicho éster del análogo hidroxi de la metionina o una sal respectiva, se logra una mejora sorprendente de la calidad de la leche obtenida de la

���

vaca lechera. Hemos constatado en particular que la introducción del éster específico en la dieta de la vaca lechera se traduce en un aumento del contenido proteico de la leche.

Por otro lado, además del nivel proteico, se ha observado que la administración del éster específico de metionina y/o éster

���

del análogo hidroxi de la metionina o una sal respectiva puede traducirse en mejoras del volumen de leche producida y del contenido graso de la leche.

El incremento del contenido proteico como resultado de la administración del éster puede evaluarse con valor que en general se sitúa entre 0,5 y 4 g de proteína por litro de leche. Las proteínas que aumentan son en general las proteínas alfa, beta y

�� cappa, en especial las proteínas beta y cappa que tienen un efecto favorable en los propiedades queseras de la leche producida.

Los objetos anteriores pueden obtenerse en su totalidad o en

parte.

���

El presente invento se dirige a un método para suministrar metionina biodisponible a la vaca que comprende administrar a la vaca un éster de metionina y/o éster del análogo hidroxi de metionina o una sal respectiva.

Se ha encontrado que el uso del éster isopropílico del

���

análogo hidroxi de la metionina es particularmente eficaz, siendo

capaz de proporcionar por lo menos un 50% de equivalente de metionina en el torrente circulatorio por absorción a través de las paredes del rumen. Se ha observado que el éster isopropílico del análogo hidroxi de la metionina mejora la biodisponibilidad

���

de la metionina en más del 50%.

Se ha encontrado además que con el éster isopropílico del análogo hidroxi el pico de la biodisponibilidad en la sangre aparece relativamente pronto después de la administración, lo cual indica que el éster es absorbido directamente a través de la

���

pared del rumen, lo cual sugiere que este éster no atraviesa el rumen.

Se ha encontrado que el éster terc-butílico de metionina es capaz de proporcionar aproximadamente el equivalente de metionina del 80% a la vaca mediante absorción del rumen. Este éster específico parece entrar en el torrente circulatorio muy

�� rápidamente, proporcionando metionina dentro de menos de una hora de la toma.

El éster puede suministrarse a la vaca por cualquier vía

apropiada. El éster se suministra con preferencia en forma de

suplemento dietético y puede administrarse a la vaca a través del

���

pienso diario normal. Se administra a las vacas una ración que contiene una porción de concentrado y una porción de forraje. Según otro aspecto de la presente invención se proporciona una ración que consta de una porción de forraje, una porción de concentrado y un suplemento, comprendiendo dicho suplemento por

���

lo menos un éster terc-butílico de metionina, éster terc-butílico del análogo hidroxi de metionina y una sal respectiva.

Una ración preferida consiste en una porción de forraje, una

porción de concentrado y el éster terc-butílico del análogo

hidroxi de la metionina.

���

La cantidad de éster introducido en la alimentación de la vaca puede variar mucho en función del engorde la vaca y del estadio del ciclo de producción de leche. El suplemento contiene de modo conveniente una cantidad de éster, calculada como equivalente de metionina, de hasta 75 g, con preferencia entre 5

���

y 50 g, en especial entre 10 y 30 g por animal y día.

La cantidad de éster requerido puede calcularse empleando

cualquier medio familiar al experto en la material. La cantidad

podrá determinarse de modo conveniente mediante el uso de un

modelo computerizado.

Cuando la ración contiene el éster terc-butílico del análogo hidroxi de metionina, el éster puede estar presente en una concentración de 7 al 65 g por animal y día, mas preferentemente entre 10 y 30 g por animal y día de éster. Cuando la ración

�� contiene el éster terc-butílico de metionina, la reacción comprende apropiadamente de 7 a 65 g, mas preferentemente de 10 a 30 g del éster.

Según otro aspecto de la presente invención se proporciona una forma de dosificación unitaria que contiene una cantidad de

��� éster como se ha descrito antes apropiada para la administración a una vaca en un día.

La porción de forraje puede comprender típicamente forraje

ensilado, hierba de ensilado, ensilado de alfalfa y/o ensilado de

heno. La porción de concentrado puede comprender típicamente

���

granos tales como maíz, trigo, cebada en adición a fuentes de proteína tales como harina, colza, soja, gluten de maíz y productos derivados de segunda calidad, tales como harina de pescado, harina de sangre, granos de cerveceras y similares.

El suplemento que contiene el éster puede mezclarse con la

���

porción de forraje y la porción de grano en cualquier tiempo oportuno. El éster es un líquido y puede introducirse por mezclado con la porción de forraje y la porción de concentrado antes de la formación de los perdigones de pienso. Como alternativa, el mismo granjero puede añadir el éster a la ración

���

de perdigones antes de dar el pienso a la vaca.

El éster es estable cuando se incorpora a los perdigones de pienso o después de la formación de los perdigones. En particular se ha observado que el éster isopropílico del análogo hidroxi es estable en el perdigón resultante, conservando más de un 95% de su estabilidad a lo largo de un período prolongado de tiempo. Por lo tanto, el uso del éster de la presente invención en forma de suplemento dietético proporciona una fuente estable de metionina.

Los ésteres terc-butílicos de conformidad con las

�� reivindicaciones forman parte del invento y se describirán ahora con detalle con referencia a los ejemplos siguientes, entre otros que no pertenecen al presente invento.

EJEMPLO 1

ÉSTER DEL ANÁLOGO HIDROXI DE LA METIONINA

��� (a) PREPARACIÓN DE LOS ÉSTERES

(1) Éster isopropílico del análogo hidroxi de la metionina

Se cargan 314,4 g (1,88 moles) de 2-hidroxi-4-metiltiobutironitrilo en un reactor encamisado, provisto de agitador y de columna de destilación. Se añaden lentamente 201,3 g (1,951

���

moles) de ácido sulfúrico al 95% al tiempo que se mantiene la temperatura por debajo de 50ºC. Una vez finalizada la introducción del ácido se mantiene la temperatura de la mezcla reaccionante a 45ºC durante 15 minutos. Se añade al reactor 227,3 g de isopropanol. Luego se aumenta la temperatura del reactor a

���

razón de 5ºC por minuto hasta que el fondo del reactor alcanza una temperatura de 116ºC y la temperatura en la parte superior es de 75ºC. Se mantienen estas condiciones del reactor durante 5 horas. Durante este período se retira una parte del destilado y se sustituye por isopropanol fresco.

���

A continuación se neutraliza la mezcla reaccionante con 161,2 g de amoníaco acuoso al 32 % (2,72 moles de amoníaco). Se obtienen dos fases. Se añaden 780 g de agua y 449,7 g de

diclorometano. Las dos fases resultantes se separan, obteniéndose 939,1 g de fase orgánica y 1247,4 g de fase acuosa.

Se separan las fracciones ligeras del producto orgánico por destilación. Se incrementa la temperatura del baño de evaporación

�� y se reduce la presión hasta unos pocos milibares. Se recuperan 263,5 g de destilado. La concentración (pureza) del éster isopropílico obtenido es superior al 99%. El rendimiento fue del 72%.

(2) ésteres de metilo, etilo, n-butilo y ciclohexilo del

��� análogo hidroxi de metionina

Estos ésteres se preparan como se ha expuesto antes pero utilizando el alcohol apropiado.

(b) BIODISPONIBILIDAD Se administran a 2 vacas dosis puntuales de las cantidades

��� siguientes de lps ésteres obtenidos por el método recién descrito, que corresponden a 50 g de equivalente de metionina, del modo indicado en el ejemplo 2(b1) anterior.

éster metílico de HMB: 64,8 g

éster etílico de HMB: 74,8 g

��� éster isopropílico del HMB: 80,5 g éster n-butílico de HMB: 96 g éster ciclohexílico de HMB: 97,5 g éster sec-butílico de HMB: 79 g

La concentración de metionina y del HMB se determina durante un período de 27 horas. Las mediciones se marcan en forma de gráfica y se calculan las áreas contenidas debajo de las curvas, para proporcionar los resultados de biodisponibilidad.

�� La biodisponibilidad se determina tomando como referencia la SmartamineTM .

Los resultados de biodisponibilidad del éster se recogen en la tabla 1.

TABLA 1

RESULTADOS DE BIODISPONIBILIDAD ÉSTERES DEL ANÁLOGO HIDROXI DE METIONINA HMB)�

Ester�

Tiempo des-pues de administración (horas)� 0� 1� 2� 3� 5� 7� 27� Biodisponibilidad�

Éster isopropílico de HMB

[met]* [HMB]*� 0.27 0� 1.53 1.90� 1.96 1.00� 2.49 0.99� 2.93 0.38� 2.93 0.30� 1.00 0� 59%�

Ëster metílico del HMB�

[met]* [HMB]*� 0.42 0� 1.26 1.35� 1.58 0.60� 1.64 0.65� 1.66 0.30� 1.86 0.33� 0.53 0� 39%�

Ëster etílico del HMB�

[met]* [HMB]*� 0.44 0.00� 1.61 2.39� 1.87 0.92� 1.94 0.50� 1.97 0.27� 2.13 0.32� 0.66 0� 35%�

Éster n-butílico del HMB

[met]* [HMB]*� 0.33 0.00� 0.67 0.23� 0.70 0.12� 0.74 0.15� 0.91 0.26� 1.07 0� 0.49 0� 17%�

Éster sec-butílico del HMB

[met]* [HMB]*� 0.31 0� 1.25 2.15� 1.48 1.06� 1.53 0.59� 1.14 0.42� 1.22 0.52� 0.42 0� 31%�

Éster ciclohexílico del HMB

[met]* [HMB]*� 0.36 0.00� 0.55 0.36� 0.87 0.21� 1.06 0.23� 1.07 0.26� 1.09 0.24� 0.47 0� 20%�

* concentración medida en mg/100g de plasma sanguíneo; met = metionina�

.EJEMPLO 2 – ÉSTERES DE METIONINA

(a) PREPARACION DE ÉSTERES

Los ésteres de metionina se prepararon de conformidad con el procedimiento general siguiente:

��� Se introdujo metionina y 1,2 equivalentes de ácido sulfúrico relativo a la metionina que ha de esterificarse en el alcohol correspondiente a la naturaleza de la cadena alquílica. La mezcla resultante se sometió a reflujo mientras se separaba agua para cambiar el equilibrio. La mezcla se neutralizó con amoníaco para aislar el éster. El alcohol se separó por destilación. El éster obtenido se extrajo con diclorometano y se lavó con agua. Se

�� evaporó el diclorometano.

Los ésteres de metionina preparados de conformidad con este proceso son: metioninato de metilo, metioninato de n-propilo, metioninato de n-butilo, metioninato de n-hexilo, metioninato de n-octadecilo, metioninato de etil N-acetilo, clorhidrato de

���

éster metílico de metionina, clorhidrato de éster etílico de metionina, metioninato de isopropilo, metioninato de tercbutilo, metioninato de ciclohexilo, metioninato de sec-butilo y metioninato de dodecilo.

(b) BIODISPONIBILIDAD

���

Se evaluó la biodisponibilidad de los ésteres.

(1) metioninato de metilo y metioninato de n-propilo

56 g de metioninato de metilo y 72 g de metioninato de n-propilo (proporcionando un equivalente de 50 g de DLmetionina), preparado como se ha descrito antes, se

��� administraron a dos vacas como una dosis puntual a 7,45 am justo antes de recibir el pienso de la mañana.

La ración dada a las vacas se distribuyó como dos piensos iguales a 08,00 horas y 16,00 horas comprendiendo 7 kg de heno y 2 kg de concentrado.

SEMANA

VACA 1 VACA 2

1

metioninato de metilo metionina de n-propilo

2

- -

3

metioninato de n-propilo metioninato de metilo

4

- -

Se tomaron muestras de sangre mediante punción de la vena yugular a 09,00, 10,00, 11,00, 13,00 y 15,00 horas del día en que se dio el éster al animal y a 09,00, 12,00 y 15,00 horas del día antes y dos dias después de la

�� administración.

Se aisló el plasma de cada muestra de las muestras de sangre mediante centrifugación de la sangre a 3000 rev. por minuto durante 10 minutos. Las muestras se guardaron en un congelador. El ensayo de la metionina se llevó a cabo de

���

conformidad con el procedimiento corriente de Moore and Stein.

Los resultados se trazaron utilizando el método AUC convencional en donde las áreas bajo las curvas se calculan para obtener los valores de biodisponibilidad para cada

���

éster.

Los resultados de biodisponibilidad para los ésteres se dan en la Tabla 2.

(2) n-hexi metioninato, n-butil metioninato, n-octadecil metioninato, etil N-acetil metioninato

���

Se administró a 2 vacas en la forma descrito en (b1) antes, dosis puntuales de las cantidades siguientes de ésteres preparados como se ha descrito antes, equivalente a 50 g de metionina.

n-hexi metioninato: 79 g

���

n-butil metioninato: 86 g n-octadecil metioninato: 227 g etil N-acetil metioninato: 75 g La ración dada a las vacas se distribuyó como dos

piensos iguales a 08,00 horas y 16,00 horas y compredió 7 kg

���

de heno y 2 kg de concentrado comprendiendo 41% de cebada,

37% de pulpa de remolacha deshidratada, 5% de melaza, 2% de urea y 15% de soja 48. Los ésteres se administraron a la vaca según el programa siguiente:

SEMANA

VACA 1 VACA 2

3

butil metioninato octadecill metioninato

5

octadecil metioninato n-hexil metioninato

7

etil N-acetil metioninato n-butil metioninato

10

n-hexil metioninato etil N-acetil metioninato

Los resultados de biodisponibilidad de los ésteres se dan en la Tabla 2.

(3) clorhidrato de éster etílico de metionina

���

Se repitió el proceso de (b) utilizando 72 g de clorhidrato de éster etílico de metionina preparado como se ha descrito antes.

La ración diaria dada a las vacas fue como en (b2) El éster se administró a la vaca según el programa

���

siguiente:

SEMANA

VACA 1 VACA 2

3

Clorhidrato de éster etílico de metionina Clorhidrato de éster etílico de metionina

5

- -

Se tomaron muestras de sangre a los mismos tiempos que en (b1).

��� El resultado de biodisponibilidad para este éster se expone en la Tabla 2.

(4) dodecil metioninato e isopropil metioninato

Se administró a dos vacas como se detalla en (b1) antes, 106,5 g de dodecil metioninato y 64,1 de isopropil metioninato (proporcionando un equivalente de 50 g de DL-metionina), preparado como se ha detallado antes.

�� Los ésteres se administran a la vaca según el programa siguiente:

SEMANA

VACA 1 VACA 2

3

isopropil metioninato isopropil metioninato

5

isopropil metioninato isopropil metioninato

7

dodecil metioninato dodecil metioninato

Se tomaron muestras de sangre de cada vaca de conformidad

��� con el regimen de (b1).

Los resultados de biodisponibilidad para los ésteres se ofrecen en la Tabla 2.

(4) ciclohexil metioninato, clorhidrato del éster metílico de metionina y sec-butil metioninato

���

Se administró a 2 vacas en la forma descrita en (b1) antes, dosis puntuales de los ésteres siguientes preparados como se ha detallado antes, equivalente a 50 g de metionina:

ciclohexil metioninato: 122 g clorhidrato de éster metílico de metionina: 73 g

���

sec-butil metioninato: 72 g Los resultados de biodisponibilidad se ofrecen en la Tabla 2.

TABLA 2: RESULTADOS DE BIODISPONIBILIDAD DE ÉSTERES DE METIONINA EJEMPLO 3: CINÉTICA

ESTER�

����������������� ��� ��� ������������ �������� 0� 1� 2� 3� 5� 7� 28� Biodisponibilidad %�

n-octadecil metioninato�

[met]*� 0.37� 0.37� 0.37� 0.34� 0.37� 0.31� 0.38� 1�

Dodecil metioninato�

[met]*� 0.33� 0.38� 0.37� 0.37� 0.44� 0.45� 0.28� 3�

n-butil metioninato�

[met]*� 0.32� 1.10� 0.74� 0.63� 0.62� 0.61� 0.27� 8�

n-hexil metioninato�

[met]*� 0.31� 1.22� 0.92� 0.94� 1.06� 1.07� 0.35� 17�

n-propil metioninato

[met]* 0.32 2.29 1.70 1.55 1.27 1.14 0.32 22

etil N-acetil metioninato

[met]* 0.26 1.84 1.97 1.53 1.12 0.86 0.36 20

clorhidrato de éster metílico de metionina

[met]* 0.36 2.78 2.60 2.30 2.00 1.43 0.38 30

metil metioninato

[met]* 0.34 4.08 3.87 3.25 2.57 2.51 0.41 51

isopropil metioninato

[met]* 0.33 3.62 3.21 2.86 2.22 1.93 0.35 44

terc-butil metioninato

[met]* 0.37 4.84 4.87 4.98 4.39 4.19 0.76 80

ciclohexil metioninato

[met]* 0.29 2.55 2.27 1.88 1.61 1.55 0.38 35

clorhidrato de éster metílico de metionina

[met]* 0.41 1.96 1.43 1.27 1.18 1.22 0.43 25

Sec-butil metioninato

[met]* 0.35 2.75 2.49 2.39 1.75 1.56 0.44 28

* concentración medida en mg/100 g de plasma sanguíneo;; met = metionina�

La cinética de la disponibilidad de la metionina y del HMB en el torrente circulatorio se determinaron para el éster isopropílico

��

del análogo hidroxi de la metionina y se compararon con el análogo hidroxi de la metionina (un compuesto no acorde con la presente invención).

Se repite el procedimiento del ejemplo 2 en donde se administra a cuatro vacas muestras de éster isopropílico del análogo hidroxi (69 g) y del análogo hidroxi (AlimetTM, -57 g). Se analizaron los niveles de metionina y de HMB en el plasma

��

sanguíneo extraído de las vacas y se recogen los resultados en las siguientes tablas 3 y 4.

Por los resultados se observa que el éster isopropílico del

análogo hidroxi de la metionina proporciona metionina y HMB al

torrente circulatorio con mucha mayor rapidez que el mismo HMB,

��� indicando de este modo que el éster se absorbe a través de la pared del rumen.

CONCENTRACIONES DE METIONINA ENPLASMA SANGUÍNEO (mg/100g de plasma)�

COMPUESTO�

Tiempo después de administración� 0� 10 min.� 20 min.� 30 min.� 40 min.� 50 min.� 60 min.� 75 min.� 90 min.� 120 min.� 240 min.�

HMB�

VACA 1� 0.32� 0.31� 0.34� 0.29� 0.27� 0.27� 0.28� 0.29� 0.30� 0.26� 0.48�

HMB�

VACA 2� 0.39� 0.32� 0.35� 0.35� 0.34� 0.34� 0.35� 0.29� 0.31� 0.39� 0.67�

HMB�

VACA 3� 0.40� 0.35� 0.36� 0.36� 0.34� 0.34� 0.34� 0.31� 0.33� 0.42� 0.59�

HMB�

VACA 4� 0.30� 0.33� 0.34� 0.36� 0.31� 0.26� 0.24� 0.25� 0.28� 0.32� 0.46�

éster isopropílico de HMB�

VACA 1� 0.33� 0.72� 1.00� 1.13� 1.30� 1.46� 1.60� 1.69� 1.74� 1.96� 2.12�

éster isopropílico de HMB�

VACA 2� 0.33� 0.45� 0.67� 0.71� 0.75� 0.77� 0.86� 1.11� 1.43� 1.75� 1.98�

éster isopropílico de HMB�

VACA 3� 0.37� 0.37� 0.50� 0.76� 0.89� 1.05� 1.10� 1.21� 1.44� 1.68� 2.39�

éster isopropílico de HMB�

VACA 4� 0.37� 0.26� 0.45� 0.70� 0.82� 0.92� 1.19� 1.40� 1.54� 1.79� 2.00�

TABLA 4

CONCENTRACIONES DE HMB EN PLASMA SANGUINEO (mg/100g de plasma)�

COMPUESTO�

Tiempo después de la administración� 0� 10 mins� 20 mins� 30 mins� 40 mins� 50 mins� 60 mins� 75 mins� 90 mins� 120 mins� 240 mins�

HMB�

COW 1� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.03� 0.06�

HMB�

COW 2� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.10� 0.45�

HMB�

COW 3� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.51�

HMB�

COW 4� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.00� 0.24�

Éster isopropílico de HMB�

COW 1� 0.00� 4.02� 4.19� 3.64� 3.40� 3.11� 2.71� 2.35� 2.23� 1.78� 0.58�

Éster isopropílico de HMB�

COW 2� 0.00� 1.05� 1.24� 1.31� 1.39� 1.46� 1.53� 3.11� 2.38� 2.54� 0.82�

Éster isopropílico de HMB�

COW 3� 0.00� 0.28� 0.93� 1.45� 1.96� 1.99� 2.37� 2.94� 3.49� 3.11� 1.09�

Éster isopropílico de HMB�

COW 4� 0.00� 0.17� 0.57� 1.22� 1.36� 1.84� 3.31� 3.73� 2.37� 2.31� 0.92�

EJEMPLO 4: PRODUCCIÓN DE LECHE

Ejemplo (a) Éster isopropílico del análogo hidroxi de la metionina y éster isopropílico de la metionina

Se administra el éster isopropílico del análogo hidroxi de

�� la metionina a 16 vacas durante un período de 8 semanas. Cada vaca recibe cada día forraje de maíz y un suplemento para cubrir el 100% de sus necesidades y un 115% de sus necesidades de PDIE (proteína digerible en el intestino). El suplemento diario consiste en 4,3 kg de un concentrado muy energético, que contiene

���

un 19,8% de cebada, un 21,1% de trigo, un 37,5% de pulpa de remolacha, un 2,3% de grasa animal, un 1,1% de sales, un 0,6% de carbonato cálcico y un 1,1% de bicarbonato sódico; 2,2 kg de torta de soja morena, 1 kg de torta de soja normal, 240 g de urea y 300 g de vitamina y suplementos minerales.

���

El método según la presente invención se lleva a cabo repartiendo las vacas en tres grupos y administrando el suplemento siguiente a la dieta normal para proporcionar 12,5 g de metionina biodisponible por animal y día.

-Tratamiento 1: 1 kg de torta de soja

���

-Tratamiento 2: 1 kg de torta de soja y 20 g de metionina recubierta con polímero (ejemplo comparativo)

-Tratamiento 3: 1 kg de torta de soja suplementado con 3%

de éster isopropílico del HMBI, que contiene un 57% de

equivalente de metionina.

��� -Tratamiento 4: 1 kg de torta de soja suplementado con 2,5% de éster isopropílico de metionina, que contiene un 76% de

equivalente de metionina.

Los suplementos se administran a las vacas con arreglo al programa siguiente:

PERIODO

Grupo*

D1 a D15 D15 a D30 D31 a D45 D46 a D60

1

Control sin Aditivo éster isopropílico de HMB éster isopropílico de metionina metionina protegida con polímero

2

éster isopropílico de metionina control sin aditivo metionina protegida con polímero éster isopropílico de HMB

2

éster isopropílico de HMB metionina protegida con polímero control sin aditivo éster isopropílico de metionina

4

metionina protegida con polímero éster isopropílico de metionina éster isopropílico de HMB control sin aditivo

      *4 vacas por grupo 

��

Los resultados de los análisis de la leche producida se recogen en la siguiente tabla 5. TABLA 5 RESULTADOS DE LA PRODUCCIÓN DE LECHE

De los resultados se desprende que la adición de los ésteres isopropílicos de metionina y del análogo hidroxi de la metionina a la dieta de las vacas se traduce en una leche de mayor

��

contenido graso y mayor contenido proteico.

COMPUESTO

Cantidad diaria de leche (kg/vaca) Contenido de mantequilla en leche g/kg Contenido de proteina de la leche g/kg

Control

31,4 39,1 30,1

éster isopropílico de metionina

32,7 43,3 30,6

éster isopropílico

32,3 44,3 30,8

de HMB

COMPARATIVO: Metionina protegida con polímero

31,4 40,3 30.9

EJEMPLO 5 HÍGADO Y FERTILIDAD

Se repitió el procedimiento del ejemplo 4 y se efectuaron observaciones del funcionamiento del hígado y de la fertilidad de las vacas. Se observaron mejoras sustanciales en las vacas a las

��� que se administró los ésteres.

EJEMPLO 6 PRODUCCION DE LECHE

Se repitió el procedimiento del ejemplo 4 utilizando raciones conteniendo otros ésteres realizándose la elección del éster en confirmación con los resultados expuestos en los

��� ejemplos 1 y 2 que muestran que la biodisponibilidad de metionina en la sangre de vacas lecheras se mejora cuando se utilizan los ésteres del presente invento y raciones que contienen estos ésteres. Se obtiene también leche mejorada.

-.

Claims (16)

1. Un método de suministro de metionina biodisponible a una vaca, que consiste en administrar a la vaca por lo menos un éster terc-butílico de metionina, éster terc-butílico del análogo

�� hidroxi de la metionina y una sal respectiva.

2.

El método de conformidad con la reivindicación 1, en el que el éster se introduce en forma de suplemento del pienso.

3.

El método de conformidad con la reivindicación 1, en el que el éster es éster terc-butílico de metionina o el éster terc

���

butílico del análogo hidroxi de metionina.

4. Un método de suministro por lo menos 50% de metionina disponible a una vaca que consiste en administrar a la vaca el éster terc-butílico de metionina.

5. Un método para la mejora de la leche obtenida de una vaca

���

lechera que consiste en suministrar a la vaca por lo menos un éster terc-butílico de metionina, éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina y una sal respectiva.

6. El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde la mejora consiste en un incremento del contenido proteico

���

de la leche.

7. El método de conformidad con la reivindicación 5, en donde mejora consiste en un incremento del contenido graso de la leche.

8. Una ración que contiene una porción de grano, una porción

���

de concentrado y un suplemento, conteniendo dicho suplemento por

lo menos un éster terc-butílico de metionina, éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina y una sal respectiva.

9. Una ración de conformidad con la reivindicación 8, en la que el suplemento contiene una cantidad de éster, calculada como

�� equivalente de metionina, de hasta 75 g.

10. La ración de conformidad con la reivindicación 9, que contiene una cantidad de éster, calculada en forma de equivalente de metionina, comprendida entre 10 y 30 g.

11. La ración de conformidad con cualquiera de las

���

reivindicaciones 8 a 10, en donde el éster es éster terc-butílico de metionina.

12. La ración de conformidad con la reivindicación 11, en la que el éster está presente en una cantidad comprendida entre 7 y 65 g por vaca y por día.

���

13. Una forma de dosificación unitaria que contiene un éster dicho como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, apropiada para dosificarse a una vaca para un período de un día.

14. Un método de mejora del estado general de una vaca que

���

consiste en suministrar a la vaca por lo menos un éster tercbutílico de metionina, éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina y una sal respectiva, en donde se excluyen los métodos de tratamiento del cuerpo humano o animal mediante cirugía o terapia y métodos de diagnóstico practicados en el

���

cuerpo humano o animal.

15.

El método de conformidad con la reivindicación 14, en el que la mejora consiste en una mejora de la fertilidad.

16.

El método de conformidad con la reivindicación 14, en el que la mejora consiste en un incremento de la energía.

17.

Uso de por lo menos un éster terc-butílico de metionina, éster terc-butílico del análogo hidroxi de la metionina y una sal

�� respectiva, para la preparación de un suplemento de pienso para mejorar la función hepática de una vaca.