JP4648894B2

JP4648894B2 - 化合物並びに細胞増殖性疾患、網膜症及び関節炎を処置する方法

Info

Publication number: JP4648894B2
Application number: JP2006502497A
Authority: JP
Inventors: ルブロン，ベルトラン; プティ，シルヴェール; ピカール，ヴィルジニー; タヴェルネ，ティエリー; シュバイヒホッファー，ファビアン
Original assignee: ExonHit Therapeutics SA
Current assignee: ExonHit Therapeutics SA
Priority date: 2003-02-28
Filing date: 2004-02-27
Publication date: 2011-03-09
Anticipated expiration: 2024-02-27
Also published as: EP1597253A2; US20060183749A1; AU2004215577A1; ATE335734T1; US7514432B2; JP2006519221A; US20090216014A1; EP1597253B1; EA200501382A1; CN1747952A; WO2004076445A2; CA2516239A1; WO2004076445A3; EP1471063A1; DE602004001864D1; DE602004001864T2

Description

本発明は、化合物及び、特に医薬産業における、それらの使用に関する。本発明は、抗増殖性及び抗血管形成活性を有する化合物、並びに、癌を含む異常な細胞増殖を伴うか、あるいは固形癌の増殖及び転移、眼性疾患及び特に網膜症、又は関節炎を含む無秩序な血管形成を伴う種々の疾患をその化合物を投与することにより処置する方法に関する。本発明は、更に、その化合物、より特定的には、癌、眼性疾患、及び関節炎を処置するのに有用な、その化合物を含む医薬組成物に関する。

癌は、全ての年齢、性、人種的及び民族的グループに影響を及ぼすので、依然として、先進国において、死の主要原因の一つである。アメリカ癌研究協会（American Association for Cancer Research）によれば、米国において、１／５を超える死は癌によって引き起こされる。世界中で、最も多い癌の部位は、肺（１４％）、前立腺（１３％）、乳房（１１％）及び大腸直腸（１１％）である（癌統計局（Cancer Statistic Branch, NCI）から得られたデータ）。

いくつかの癌、例えば前立腺癌（検出プログラムによる）又は男性の肺癌（予防プログラムによる）の発生は低下しているにもかかわらず、先進国において、癌の比率は増加している。米国において、最も速く増加している癌比率は、非ホジキン型リンパ腺癌及び黒色腫（年３％増加）である（The Annual Report to the Nation on the Status of Cancer, 1973-1997）。

癌の発生とは異なって、癌による死は、先進国において減少している。これは、部分的に、より良い治療設計の故であるが、予防プログラム及び早期の段階でのいくつかの癌の検出の故でもある。

しかしながら、癌の処置及び予防における、より高い達成度にもかかわらず、以下の点で、いくつかの改良が待たれている：
−早期段階の癌に対する再発を減少させるための有効な治療法
−標準治療法では効果がない腫瘍を治癒するための代替治療法
−転移癌を治癒するための代替治療法
−より毒性の少ない薬剤、及び
−より良好な送達システム。

細胞信号伝達経路の阻害剤は、単独であるいは標準的な化学毒性薬剤と組み合わせて使用して、最初の三つの課題に対処することにより、そのような新しい代替治療法を提供する。しかしながら、細胞信号伝達経路は、遍在性であるので、これらの阻害剤の毒性は、標準的化学毒性薬剤の毒性と匹敵するものである。それらの毒性を減少させ、それらの組織特異性を向上させるために、これらの阻害剤は、適切な薬剤送達システムと結びつけることができる。

米国特許第４，５９０，２０１号は、化合物ＣＡＩ、細胞信号伝達阻害剤を開示している。この化合物は、細胞における信号処理に必要な生化学的経路に影響を及ぼすことにより、増殖及び炎症を阻害する。それは、増殖を引き起こすのに必要な第二のメッセンジャーを産生するエフェクター酵素の間接的なブロッカーである。

血管形成は、新規な血管が形成される基本的なプロセスであり、多くの正常な体内活動（例えば、再生、発達及び創傷修復）に必須である。このプロセスは完全には理解されていないが、内皮細胞、毛細血管の一次細胞の増殖を促進及び阻害する双方の分子の複雑な相互作用を含むと考えられている。正常な条件下で、これらの分子は、数週間、ある場合には数十年間続く、長い期間、平穏な状態における微小血管性を維持すると思われる。しかしながら、必要な場合（例えば、創傷修復中）、これらの同一の細胞は、５日間以内に迅速な増殖及び代謝回転を受けることができる。

血管形成は、正常な条件下では、高度に秩序立ったプロセスであるが、多くの疾患は、持続的で無秩序な血管形成により進行する。言い換えれば、無秩序な血管形成は、特定の疾患を直接引き起こすか、あるいは、既存の病気の状態を悪化させるであろう。例えば、眼の新生血管形成は、失明の最も一般的な原因として考えられており、約２０の眼病を支配する。関節炎等のある既存の病態において、新たに形成された毛細血管は、関節に侵入し、軟骨組織を破壊する。糖尿病において、網膜に形成された新生毛細血管は、硝子体に侵入し、出血し、そして失明を引き起こす。固形腫瘍の成長及び転移は、また、血管形成に依存性である。例えば、２mm以上に大きくなった腫瘍は、それら自体の血液供給を得なくてはならず、また新生毛細血管の成長を誘起することにより、そのようにしなくてはならない。これらの新たな血管が腫瘍中に埋め込まれたときには、それらは、腫瘍細胞が血液循環に進入して、離れた部位、例えば肝臓、肺又は骨に転移する手段を提供する。いくつかの血管形成阻害剤が、血管形成疾患の処置において使用するために現在開発中であるが、これらの化合物のいくつかに伴う欠点がある。例えば、スラミンは、強力な血管形成阻害剤であるが、ヒトにおいて、強い全身性の毒性を引き起こす。他の化合物、例えば、レチノイド、インターフェロン、及び抗エストロゲンはヒトでの使用には安全であるが、弱い抗血管形成効果を有するのみである。更に他の化合物は、製造するのが困難であるかあるいはコストがかかる。

本発明は、ここに、抗細胞増殖効果、より特定的には腫瘍細胞に対するもの、及び抗血管形成効果を与える新規な種類の化合物の同定及び特徴付けに関する。有利には、これらの化合物は、幅広いヒトの組織において、悪性細胞フェノタイプを阻害若しくは無効にし、正常細胞生理機構に殆ど又は全く影響がなく、少数回のみの処置が各々の患者に必要であるようなほど高活性であり、優れた生体的有用性及び薬物動態学的特性を有する。

従って、本発明の一つの態様は、一般式（Ｉ）：

（式中、Ｒ₁は、

よりなる群から選択され；
Ｒ₂は、水素原子、アルキル又は３〜６個の炭素原子を含有するアルケニル基を表し；
Ｂは、ハロゲン原子、好ましくは塩素又はフッ素、ヒドロキシル基、−Ｏ−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃（ＭＯＭ）基、−Ｏ−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₂−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃（ＭＥＭ）基、−ＯＳＯ₂−アルキル基又は−ＯＳｉ（ＣＨ₃）₂ｔＢｕを表し；
Ｄは、酸素原子、ＮＲ₃、ＣＲ′Ｒ″又は硫黄原子を表し；
Ｘは、酸素原子、硫黄原子又は−ＮＲ₄−基を表し；
Ｙは、酸素原子、硫黄原子又は−ＮＲ₄−基を表し；
Ｒ₃は、水素原子、アルキル基、カルボキシラート基、アシル基、カルボキサミド基又はＳＯ₂−アルキル基を表し；
Ｒ′及びＲ″は、同一又は異なって、水素原子又はアルキル基を表し；
Ｒ₄は、同一又は異なって、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基、アリール及びアラルキルよりなる群から選択され；
「リンカー」は、場合により、ヘテロ原子（好ましくは、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＰ）若しくはカルボニル基で中断されている（ＣＨ₂）_n（ここで、ｎは１〜１０の整数を表す）、又はアリールジアルキル（好ましくは、キシレニル）基を表し；
Ａは、

から選択される基を表し、場合によりＡは置換されている）
を有する化合物、その互変異性体、光学及び幾何異性体、ラセミ体、塩、水和物、及びそれらの混合物を提供する。

本発明の化合物は、１以上の不斉中心を有することができ、分離されたままの立体異性体（光学異性体）、純粋な若しくは部分的に精製された立体異性体又はそれらのラセミ混合物は、本発明の範囲に包含されることが意図される。

本発明は、また、場合により他の活性薬剤と共に、薬学的に許容しうる支持体中の上で定義された少なくとも一つの化合物を含む、医薬組成物に関する。

医薬組成物は、より特定的には、異常細胞増殖に伴う疾患、例えば癌、あるいは固形腫瘍の成長と転移、眼の病気、特に網膜症（糖尿病性網膜症、網膜変性症、加齢性黄斑変性症（ＡＲＭＤ）を含む）又は関節炎を含む無秩序な血管形成に伴う疾患の処置を目的とする。

本発明は、また、異常細胞増殖に伴う疾患、例えば癌、あるいは固形腫瘍の成長と転移、眼の病気、特に網膜症（糖尿病性網膜症、網膜変性症、加齢性黄斑変性症（ＡＲＭＤ）を含む）又は関節炎を含む無秩序な血管形成に伴う疾患の処置用の医薬を製造するための、上で定義された化合物の使用に関する。

本発明は、また、固形腫瘍の成長と転移、眼の病気、特に網膜症及び関節炎を含む無秩序な血管形成に伴う疾患並びに異常細胞増殖に伴う疾患、例えば癌を処置する方法であって、上で定義された化合物の有効量を、それを必要とする対象者に投与することを含む方法を包含する。

本出願で更に開示されるであろうように、本発明に係る化合物は、強い細胞増殖阻害活性を有し、且つ、増殖する癌細胞等の細胞の成長を減少又は停止する上で有効である。

好ましい態様
本出願の文脈において、用語アルキル及びアルコキシは、１〜１０個の炭素原子を含有する直鎖状又は分枝状飽和基を意味する。アルコキシ基は、−Ｏ−アルキル基を意味する。

アルキル基は、直鎖状又は分枝状であってもよい。１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基の例として、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、ｎ−ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、２−エチルヘキシル、２−メチルブチル、２−メチルペンチル、１−メチルヘキシル、３−メチルヘプチル及びそれらの他の異性体が挙げられる。好ましくは、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基である。

アルケニル基は、直鎖状又は分枝状であってもよい。３〜６個の炭素原子を含有するアルケニル基の例として、１−プロペニル、２−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニル、１−ペンテニル、２−ペンテニル、３−ペンテニル、４−ペンテニル、１−ヘキセニル、２−ヘキセニル、３−ヘキセニル、４−ヘキセニル、５−ヘキセニル及びそれらの他の異性体が挙げられる。

用語アリールは、場合により、Ｎ、Ｏ、Ｓ又はＰから選択される１個又は数個のヘテロ原子で中断されていてもよい、好ましくは５〜１４個の炭素原子、好ましくは６〜１４個の炭素原子を含む任意の芳香族基を包含する。最も好ましいアリール基は、一環性又は二環性であり、６〜１４個の炭素原子を含み、例えば、フェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、アントラセニル、又はフルオレニル基である。

用語アラルキル基は、一般に、上で定義されたアルキル基に結合したアリール基、例えばベンジル又はフェネチルを意味する。

用語カルボキシラート基は、一般に、−ＣＯＯ−Ｒ基（ここで、Ｒは、水素原子、アリール基、又は好ましくはアルキル基を表す）を表す基を意味する。この点で、Ｒ₃は、好ましくはｔｅｒｔ−ブチル−カルボキシラート基を表す。

用語アシル基は、一般に、−ＣＯＲ基（ここで、Ｒは、アリール基、又は好ましくはアルキル基を表す）を意味する。この点で、Ｒ₃は、好ましくはアセチル、ピバロイル、又はベンゾイル基を表す。

用語カルボキサミド基は、一般に、−ＣＯＮＲ′Ｒ″基（ここで、Ｒ′及びＲ″は、同一又は異なり、上で定義されたとおりである）を意味する。この点で、Ｒ₃は、好ましくはＮ，Ｎ−ジエチル−若しくはＮ，Ｎ−ジイソプロピル−カルボキサミド基又はＮ−ｔｅｒｔ−ブチル−若しくはＮ−メチル−カルボキサミド基を表す。

特定の実施態様によれば、Ａは、水素原子、ハロゲン原子（好ましくは、Ｆ、Ｃｌ、又はＢｒ）、ヒドロキシル基、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）アルキル基、アルケニル基、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）アルカノイル基、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）アルコキシ基、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）アルコキシカルボニル（若しくはカルボキシラート）基、アリール基、アラルキル基、アリールカルボニル基、一環性若しくは多環性炭化水素基、−ＮＨＣＯ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基、−ＮＯ₂、−ＣＮ、−ＮＲ₅Ｒ₆基又はトリフルオロ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基よりなる群から選択される、少なくとも一つの置換基で置換されており、Ｒ₅及びＲ₆は、互いに独立に、水素原子、１〜１０個の炭素原子を有するアルキル基、アリール及びアラルキルよりなる群から選択される。

アルカノイル基は、−ＣＯ−アルキル基であり、そのアルキル基は、上で定義されたとおりである。

用語アリールカルボニル基は、一般に、カルボニル基に結合したアリール基を意味し、そのアリール基は、上で定義されたとおりである。

用語アルコキシカルボニル基は、一般に、カルボニル基に結合したアルコキシ基を意味し、そのアルコキシ基は、上で定義されたとおりである。

用語一環性若しくは多環性炭化水素基は、場合により、Ｎ、Ｏ、Ｓ及びＰのグループから選択される１個以上のヘテロ原子で中断されている、１〜２０個の炭素原子を有する炭化水素環状基を意味することが理解される。そのような一環性若しくは多環性炭化水素基のうち、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、１−若しくは２−アダマンチル基、ピラン、ピペリジン、ピロリジン、モルホリン、ジオキサン、テトラヒドロチオフェン、及びテトラヒドロフランを挙げることができる。一環性若しくは多環性炭化水素基は、それが結合しているフェニル基と共に、アリール基、例えば、α−ナフチル、β−ナフチル、又はアントラセニル基を形成してもよい。

「リンカー」が、ヘテロ原子で中断された（ＣＨ₂）_nを表す場合、ヘテロ原子は、より好ましくは酸素原子である。この場合、リンカーは、有利には、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂−基である。「リンカー」が、カルボニル基で中断された（ＣＨ₂）_nを表す場合、そのリンカーは、（好ましくは、Ｘが−ＮＲ₄−である場合）−（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−基を表すことができる。

上で同定された基は、場合により置換されていてもよい。特に、アルキル、アルケニル、アリール、アラルキル、及び一環性若しくは多環性炭化水素基は、場合により、ヒドロキシル基、ハロゲン原子、シアノ基、ニトロ基、エステル（−ＣＯＯ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基）、−ＯＣＯ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基、アミド（−ＮＨＣＯ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基又は−ＣＯＮＨ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基）、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）アルキル基、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）アルコキシ基、一環性若しくは多環性炭化水素基、Ｃ＝Ｏ基、−ＮＲ₅Ｒ₆基又はトリフルオロ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基よりなる群から選択される一個以上の基で置換されていてもよく、Ｒ₅及びＲ₆は、上で定義されたとおりである。

トリフルオロ（Ｃ₁〜Ｃ₆）アルキル基は、好ましくはトリフルオロメチル基である。

好ましい実施態様によれば、本発明に係る化合物は、
−Ｘが、硫黄、−ＮＨ−、又は好ましくは、酸素であり；及び／又は
−Ｙが、酸素であり；及び／又は
−「リンカー」が、（ＣＨ₂）_n（ここで、ｎは２〜９、好ましくは４〜７である）、又はメタ、オルト若しくはパラ−キシレニル基、−ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＣＨ₂ＣＨ₂−及び−（Ｃ＝Ｏ）ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂−を表し；及び／又は
Ｒ₁が、

、−ＣＨ₂Ｎ（Ｅｔ）₂及び−ＣＨ₂ピロリジン、

（ここで、Ｄは、酸素、硫黄、−ＣＨ₂−又はＮＲ₃（ここで、Ｒ₃は、好ましくはＨ又はアルキル基を表し、そのアルキルは、より特定的にはメチル基である）である）、並びに−ＣＨ₂−Ｂ（ここで、Ｂは、−Ｏ−ＣＨ₂−Ｏ−ＣＨ₃基又は−ＯＳＯ₂−アルキル基（ここで、アルキルは、好ましくはメチルである）又はハロゲン（好ましくは、フッ素又は塩素）である）であり；及び／又は
−Ｒ₂が、水素原子；及び／又は
−Ａが、上で定義されたような置換された基である、
一般式（Ｉ）に対応する。

特定の実施態様において、Ａが、上で定義された置換された基である場合、少なくとも一つの置換基は、ハロゲン原子、より好ましくは塩素又はフッ素である。

本発明に係る化合物の特に好ましい群は、Ａの置換基の少なくとも一つ、より好ましくは全ての置換基が、水素原子、メチル基、プロピル基、エトキシ基、ハロゲン原子、好ましくは塩素若しくはフッ素、又はＣＦ₃基を表す、式（Ｉ）の化合物である。

本発明に係る化合物が塩の形態である場合、それらは、好ましくは薬学的に許容しうる塩である。そのような塩として、薬学的に許容しうる酸付加塩、薬学的に許容しうる塩基付加塩、薬学的に許容しうる金属塩、アンモニウム及びアルキル化アンモニウム塩が挙げられる。酸付加塩として、無機酸及び有機酸の塩が挙げられる。好適な無機酸の代表例として、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸、硫酸、硝酸等が挙げられる。好適な有機酸の代表例として、ギ酸、酢酸、トリクロロ酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、安息香酸、桂皮酸、クエン酸、フマル酸、グリコール酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マロン酸、マンデル酸、シュウ酸、ピクリン酸、ピルビン酸、サリチル酸、コハク酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、酒石酸、アスコルビン酸、パモ酸、ビスメチレンサリチル酸、エタンジスルホン酸、グルコン酸、シトラコン酸、アスパラギン酸、ステアリン酸、パルミチン酸、ＥＤＴＡ、グリコール酸、ｐ−アミノ安息香酸、グルタミン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、過塩素酸塩、ホウ酸塩、酢酸塩、安息香酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、グリセロリン酸塩、ケトグルタル酸塩等が挙げられる。更に、薬学的に許容される無機又は有機酸付加塩の例として、参照として本明細書に組み入れられる、J. Pharm. Sci. 1977, 66, 2の中に列挙された薬学的に許容される塩が挙げられる。金属塩の例として、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム塩等が挙げられる。アンモニウム及びアルキル化アンモニウムの例として、アンモニウム、メチルアンモニウム、ジメチルアンモニウム、トリメチルアンモニウム、エチルアンモニウム、ヒドロキシエチルアンモニウム、ジエチルアンモニウム、ブチルアンモニウム、テトラメチルアンモニウム塩等が挙げられる。有機塩基の例として、リジン、アルギニン、グアニジン、ジエタノールアミン、コリン等が挙げられる。

薬学的に許容しうる塩は、エーテル、ＴＨＦ、メタノール、ｔ−ブタノール、ジオキサン、イソプロパノール、エタノール等のような溶媒中で、式（Ｉ）の化合物を１〜４当量の塩基、例えば水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、水素化ナトリウム、カリウムｔ−ブトキシド、水酸化カルシウム、水酸化マグネシウム等と反応させることにより調製される。溶媒の混合物を使用してもよい。リジン、アルギニン、ジエタノールアミン、コリン、グアニジン及びそれらの誘導体等のような有機塩基を使用してもよい。あるいは、適用しうる酸付加塩は、酢酸エチル、エーテル、アルコール、アセトン、ＴＨＦ、ジオキサン等のような溶媒中で、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、ホン酸（fonic acid）、酢酸、クエン酸、マレイン酸、サリチル酸、ヒドロキシナフトエ酸、アスコルビン酸、パルミチン酸、コハク酸、安息香酸、ベンゼンスルホン酸、酒石酸等の酸で処理することにより調製される。溶媒の混合物を使用してもよい。

本発明の範囲内の式（Ｉ）の化合物の具体例として、以下の化合物が挙げられる：
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−ピラン−４−オン（EHT 3788）
５−〔５−（６−フルオロ−２−メチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1593）
５−〔５−（６−フルオロ−２−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1074）
５−〔５−（７−プロピル−キノリン−８−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5810）
５−〔５−（ベンゾ〔ｂ〕チオフェン−７−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6060）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9376）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔４−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ブトキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4745）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6271）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン塩酸塩（EHT 1302）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（ETH 5909）
２−メトキシメトキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2168）
２−クロロメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1494）
２−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7365）
２−モルホリン−４−イルメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7168）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（フルオロメチル）−４Ｈ−ピラン４−オン（EHT 8817）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9317）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（チオモルホリノ−メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5430）
２−（（ジエチルアミノ）メチル）−５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7370）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3726）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4063）
４−〔５−（６−モルホリン−４−イルメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8935）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピロリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5317）
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5847）
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4687）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3411）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0079）
５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1426）
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8791）
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 2725）
５−（（４−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2218）
５−（（２−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9069）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−アセチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3980）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 5743）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−（ピバロイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0785）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 0566）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8366）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 3664）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−メチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 4495）
５−（６−（モルホリノメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）ペンタンアミド（EHT 6037）
５−（２−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0371）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 1864）
５−（（３−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 0434）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 9358）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 2580）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 9241）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 8560）
５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0872）
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5575）
５−（８−（７−トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）オクチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1006）
５−（７−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ヘプチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8883）
５−（２−（７−トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6892）

特に好ましい化合物は、ＥＨＴ９２４１、その遊離塩基ＥＨＴ７３６５、ＥＨＴ８５６０、ＥＨＴ１８６４、その遊離塩基ＥＨＴ７１６８又はＥＨＴ５７４３である。

本発明に係る化合物を、当業者に公知の種々の方法により調製してもよい。より好ましくは、いくつかの化学的経路が実施される。

第一の経路（スキーム１）は、化合物Ａ（Miyano, M.; Deason, J. R.; Nakao, A.; Stealey, M. A.; Villamil, C. I.; ら、J. Med. Chem. 1988; 31, 1052-1061）を出発して、２工程で得ることができる構造Ｃに包含される化合物に関する。

化合物Ａは、好ましくは、ＤＭＦ又はＴＨＦ等の溶媒中で実施されるアルキル化条件下に、５℃〜１００℃、典型的には約８０℃の温度で、炭酸セシウム（Ｃｓ₂ＣＯ₃）又はＮａＨ等の塩基及びジハロゲノアルカン又はジハロゲノアリールアルカン（工程ａ）を用いて、処理されうる（表１）。

得られた式Ｂのアルキル化生成物（１〜５）は、置換されて、ＮａＨ又は炭酸セシウム等の塩基及び表２記載の、４−キノリノール、４−キノリン−チオール、７−ベンゾ〔ｂ〕チオフェノール、７−プロピル−キノリン−８−オール非置換又は置換誘導体を含む反応（工程ｂ）において、式Ｃの化合物を得ることができる。好ましい溶媒は、ＤＭＦ、ＴＨＦ又はＤＭＳＯであり、反応は、２５℃〜１００℃の間の温度で行われる。

第二の化学的経路（スキーム２）は、ＥＨＴ９３７６化合物を使用し、それを、メタノール中、Ｄｏｗｅｘ樹脂５０ＷＸ８−２００等の酸源（ＭｅＯＨ、ＨＣｌ）で、５℃〜３０℃の間、典型的には約２５℃の温度で、対応するアルコールＥＨＴ１３０２（塩酸塩）へと脱保護化することができる。

第三の化学的経路（スキーム３）において、中間体７を、シリル化エーテル６（６は、Sefkow, M.; Kaatz, H. Tetrahedron Lett, 1999, 40, 6561-6562に記載されている）から、ジメチルホルムアミド中、５０℃で炭酸セシウム等の塩基及び１，５−ジブロモペンタンで調製することができる（スキーム３）。

誘導体８を、室温で、ジメチルホルムアミド中、水素化ナトリウム、７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオールを用いて、中間体７から調製することができる。室温で、テトラヒドロフラン中、フッ化ｎ−テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ）を用いるシリル化エーテル８の引き続く脱保護化は、アルコールＥＨＴ５９０９をもたらす（スキーム３）。

ＭＯＭ誘導体ＥＨＴ２１６８を、室温で、テトラヒドロフラン中、水素化ナトリウム及びメチルクロロメチルエーテルを用いて、アルコールＥＨＴ５９０９から得ることができる。クロロ、メシラート及びフルオロ誘導体（ＥＨＴ１４９４、９及びＥＨＴ８８１７）を、それぞれ室温で、ジクロロメタン中に塩化メタンスルホニル及びトリエチルアミンを用いるか、あるいはジクロロメタン中で三フッ化ジエチルアミノ硫黄（ＤＡＳＴ）を用いて、アルコールＥＨＴ５９０９から調製することができる（スキーム３）。

ａ）ＴＢＤＭＳＣｌ、ＣＨ₂Ｃｌ₂、ＴＥＡ、ＲＴ。ｂ）Ｃｓ₂ＣＯ₃、ＤＭＦ、ジブロモペンタン、５０℃ ｃ）７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール、ＮａＨ、ＤＭＦ、ＲＴ。ｄ）ＴＢＡＦ、ＴＨＦ、ＲＴｅ）ＭＯＭＣｌ、ＮａＨ、ＴＨＦ、ＲＴ。ｆ）ＣＨ₃ＳＯ₂Ｃｌ、ＴＥＡ、ＣＨ₂Ｃｌ₂、ＲＴ。ｇ）ＤＡＳＴ、ＣＨ₂Ｃｌ₂。

上記のシリーズについては、収率は、一般に、５５〜９０重量％、より特定的には、５５〜７５重量％の間である。式（Ｉ）の化合物を製造するこれらの方法は、本出願のさらなる目的を表す。

他の化学的経路において、アルコール類１１〜１５は、５℃〜１００℃、典型的には約８０℃の温度で、炭酸セシウム（Ｃｓ₂ＣＯ₃）等の塩基を用いて、ＤＭＦ中で５−（５−ブロモペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１０）から調製された。中間体１０は、ＤＭＦ中の１，５−ジブロモペンタンを使用し、且つ１１０℃で、塩基Ｃｓ₂ＣＯ₃を用いて、コウジ酸のアルキル化により収率４６％で調製された（表３）。

アルコール類１１〜１５及びＥＨＴ５９０９は、０℃〜室温の間の温度で、１時間〜１８時間、ジクロロメタン中でトリエチルアミン等の塩基の存在下、塩化メタンスルホニルとそれぞれ反応させて、メシル化誘導体１６〜２０及び９を得た（表４）。

メシル化誘導体９は、１時間〜４時間の間、ジクロロメタン中で還流下に、求核剤、一級及び二級アミン、例えば各々ピペリジン、チオモルホリン、ジエチルアミン、モルホリン及びＮ−メチルピペラジンと反応して、ＥＨＴ９３１７、ＥＨＴ５４３０、ＥＨＴ７３７０、ＥＨＴ７１６８及びＥＨＴ７３６５を得た（表５）。

同様に、メシル化誘導体１６〜２０は、求核剤、例えば一級及び二級アミン（モルホリン、Ｎ−メチルピペラジン、チオモルホリン、ジエチルアミン、ピペリジン）により置換されて、ＥＨＴ１４２６、ＥＨＴ００７９、ＥＨＴ３４１１、ＥＨＴ８７９１、ＥＨＴ８９３５、ＥＨＴ５８４７、ＥＨＴ４８６７、ＥＨＴ５３１７、ＥＨＴ３７２６及びＥＨＴ４０６３を得た（表６）。

本発明の化合物を得るための最後の好ましい化学的経路は、収斂型合成であった：ハロゲノアルキルキノリン（表８）と適切な置換コウジ酸（表７のそれらの調製物を参照）との間の反応は、本発明の化合物をより良い全収率とより短工程で得ることを可能にした。

表７において、第一の反応は、Ｈ₂ＳＯ₄／ＨＢｒ／Ｈ₂Ｏ系を用いる７０℃で１８時間のコウジ酸の臭素化であり、特許ＦＲ２７５１３３１に記載のような対応するブロモ誘導体２１が得られる。ブロモ誘導体２１は、種々のアミン（モルホリン、Ｎ−メチルピペラジン又はＮ−Ｂｏｃ−ピペラジン）と反応して、対応する置換コウジ酸２２〜２４を生成した。

表８において、様々な条件が、種々の置換キノリン中間体２５〜３３を得るために、使用される。アルキル化剤を、ＤＭＦ中、ＮａＨの存在下、７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオールと反応させて、２７及び２９を低収率（１２及び１５％）で得た。７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオールのアルキル化は、相間移動条件（ＣＨＣｌ₃／ＴＢＡＢ／Ｈ₂Ｏ）を用いて最適化し、塩基としてＫ₂ＣＯ₃／ＫＯＨ、Ｃｓ₂ＣＯ₃を用いるかあるいは塩基を全く用いないで、２５、２６、２８及び３０を良好な収率（６１〜７２％）で生成した。中間体３１を、相間移動条件において、７−トリフルオロメチル−４−キノリノール及び１，２−ジクロロエタンから調製して、少しの脱離生成物を認めた。誘導体３３は、ＮＭＰ中でＬｉ₂ＣＯ₃の存在下、７−クロロ−４−キノリノールの１，５−ジブロモペンタンによるアルキル化により得られ、主たるＮ−アルキル化生成物が認められた。ＣＨＣｌ₃中、トリエチルアミン及び塩化５−ブロモバレリルの存在下での４−アミノ−７−トリフルオロメチルキノリンのアシル化は、優れた収率（９０％）で３２をもたらした。

収斂型工程（表９）は、表８からのハロゲノアルキルキノリン系列及び表７からの置換コウジ酸２１〜２４を用いて実現され、対応する本発明の化合物を得た。

これらの最終化合物（ＥＨＴ６８９２、ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ０３７１、ＥＨＴ６０３７、ＥＨＴ９３５８、ＥＨＴ２５８０及びＥＨＴ９２４１）の大部分は、好ましくは、塩基としてＣｓ₂ＣＯ₃を用い、９０℃、ＤＭＦ中で、アルキル化条件により得られ、収率は、一般に、３５〜７５％の間である。

芳香族スペーサーを有する生成物のいくつかは、低温度に反応する（ＥＨＴ９０６９、ＥＨＴ２７２５及びＥＨＴ２２１８）。ＥＨＴ５５７５は、相間移動条件（ＣＨＣｌ₃／ＴＢＡＢ／Ｈ₂Ｏ／Ｃｓ₂ＣＯ₃）を用いて、クロロ誘導体３０から、低収率（５％）で得られ、主に脱離生成物が認められた。

Ｎ−Ｂｏｃ−ピペラジン誘導体（ＥＨＴ９３５８及びＥＨＴ２５８０）を、５０℃でエタノール中のＨＣｌガスの溶液を用いて、脱保護（表１０）して、対応するピペラジノ化合物（ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ０８７２）を得ることができる。

本発明の一連の化合物（ＥＨＴ３９８０、ＥＨＴ５７４３、ＥＨＴ０７８５、ＥＨＴ０５６６、ＥＨＴ８３６６、ＥＨＴ３６６４及びＥＨＴ４４９５）を、２０℃でＣＨＣｌ₃中でトリエチルアミンの存在下、種々の塩化アシル又は塩化カルバモイル、塩化メシル及びイソシアナートとの反応により、ＥＨＴ８５６０の遊離塩基を出発して良好な収率（７１〜９８％）で調製した（表１１）。

これらの化合物を製造する他の方法は、技術常識及び本出願に含まれる以下の指針に基づいて、当業者によりデザインされることを理解されたい。

上記のように、本発明のさらなる目的は、上で定義されるような、式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物及び薬学的に許容しうるビヒクル又は支持体を含む、医薬組成物に関する。

化合物は、固体形態及び液体形態、例えば、カプセル剤、錠剤、ゲル剤、溶液剤、シロップ剤、懸濁液剤、粉末剤、エアゾール剤、軟膏等を含む、種々の形態に製剤化される。

本発明の組成物は、生理学的に許容しうる希釈剤、充填剤、滑沢剤、賦形剤、溶剤、結合剤、安定剤等を含むことができる。組成物に用いられる希釈剤として、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、セルロース、カオリン、マンニトール、塩化ナトリウム、乾燥澱粉、粉末砂糖及び徐放錠剤用のヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）が挙げられるが、それらに限定されない。組成物に用いられる結合剤として、澱粉、ゼラチン、並びにスクロース、グルコース、デキストロース及びラクトース等の充填剤が挙げられるが、それらに限定されない。

組成物に用いられる天然及び合成ガムとして、アルギン酸ナトリウム、ガティガム、カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、及びビーガム（veegum）が挙げられるが、それらに限定されない。組成物に用いられる賦形剤として、微結晶セルロース、硫酸カルシウム、リン酸二カルシウム、澱粉、ステアリン酸マグネシウム、ラクトース、及びスクロースが挙げられるが、それらに限定されない。用いられる安定剤として、アカシア、寒天、アルギン酸、グアーガム及びトラガカント等の多糖類、ゼラチン等のアンホトシックス（amphotsics）並びにカルボマー樹脂、セルロースエーテル及びカルボキシメチルキチン等の合成及び半合成ポリマーが挙げられるが、それらに限定されない。

組成物に用いられる溶剤として、リンガー溶液、水、蒸留水、水中５０％までのジメチルスルホキシド、プロピレングリコール（希釈せずに又は水に溶かして）、リン酸緩衝生理食塩水、平衡塩溶液、グリコール及び他の慣用の液体が挙げられるが、それらに限定されない。

式（Ｉ）の化合物が投与される投与量及び投与計画は、投与形態、投与モード、治療される状態、及び治療される患者の詳細によって変化する。したがって、最適の治療濃度は、所定の実験を通して時間と場所で最良に決定される。

本発明に係る化合物は、また、経腸的に使用することができる。経口的には、本発明に係る化合物は、体重１kgあたり、１日あたり１０μg〜３００mgの比率で好適に投与される。必要な投与量は、１回又は数回に分けて投与できる。経口投与に関して、好適な形態は、例えば、カプセル剤、錠剤、ゲル剤、エアゾール剤、ピル剤、糖衣錠、シロップ剤、懸濁液剤、乳剤、溶液剤、粉末剤及び顆粒剤であり；好ましい投与方法は、１mg〜約５００mgの活性物質を含有する好適な形態を使用することからなる。

本発明に係る化合物は、また、経静脈、皮下又は筋肉内潅流又は注入用の溶液剤又は懸濁液剤の形態で、非経口的に投与することができる。その場合、本発明に係る化合物は、体重１ｋｇあたり、１日あたり約１０μg〜１０mgの比率で一般に投与され；好ましい投与方法は、１mlあたり約０．０１mg〜１mgの活性物質を含有する溶液剤又は懸濁液剤を使用することからなる。

本発明に係る化合物は、また、硝子体内又は眼窩後部（retro-orbitary）注入用の溶液剤又は懸濁液剤の形態で、眼に投与することができる。その場合、本発明に係る化合物は、体重１kgあたり、１日あたり約１０μg〜１０mgの比率で一般に投与され；好ましい投与方法は、１ｍｌあたり約０．０１mg〜１mgの活性物質を含有する溶液剤、懸濁液剤又はゲル剤を使用することからなる。

式（Ｉ）の化合物は、種々の腫瘍を（化学予防的に及び治療的に）処置するための他の公知の抗腫瘍剤あるいは眼性疾患を処置する他の公知の薬剤、特に抗網膜症剤又は抗関節炎剤と実質的に同様の方法で使用することができる。本発明の化合物について、単回投与、多回投与、又は毎日投与のいずれでも、投与すべき投与量は、化合物の効力が異なること、選ばれた投与経路、摂取者のサイズ、疾患（癌、及びその場合には腫瘍の種類、関節炎、眼性疾患及び特に網膜症、及びその場合には網膜症の種類、特に糖尿病性網膜症、網膜変性症、加齢性黄斑変性症（ＡＲＭＤ））の種類及び患者の状態の種類の故に、使用される特定の化合物により、当然変化する。投与すべき投与量は、明確な限界はないが、通常は有効量あるいは、その所望の薬理学的及び生理学的効果を達成するために、活性薬剤の代謝的放出で、投与薬剤から製造される薬理学的に活性な遊離形態のモル基準で当量となる量である。癌処置の当業者である癌専門医又は目の疾患、糖尿病又は関節炎処置の当業者である医師は、過度の実験なしに、例えば、抗腫瘍、抗血管形成、特に抗網膜症又は抗関節炎特性を有することが見出された化合物に関する先に出版された研究を参照することにより、本発明の化合物の有効な投与のための適切なプロトコルを確定することができる。

他の態様によれば、本発明は、異常細胞増殖を伴う疾患の処置方法に関し、そのような処置を必要とする患者に、上記の一般式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物の有効量を投与することを特徴とする。

本発明に従って使用するための好ましい化合物は、上で定義された任意の下位群を含み、具体的な例としては、以下の化合物を含む：
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−ピラン−４−オン（EHT 3788）
５−〔５−（６−フルオロ−２−メチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1593）
５−〔５−（６−フルオロ−２−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1074）
５−〔５−（７−プロピル−キノリン−８−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5810）
５−〔５−（ベンゾ〔ｂ〕チオフェン−７−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6060）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9376）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔４−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ブトキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4745）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6271）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン塩酸塩（EHT 1302）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5909）
２−メトキシメトキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2168）
２−クロロメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1494）
２−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7365）
２−モルホリン−４−イルメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7168）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（フルオロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8817）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9317）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（チオモルホリノ−メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5430）
２−（（ジエチルアミノ）メチル）−５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7370）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3726）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４−ピラン−４−オン（EHT 4063）
４−〔５−（６−モルホリン−４−イルメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8935）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピロリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5317）
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5847）
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4687）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3411）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0079）
５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1426）
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8791）
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 2725）
５−（（４−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2218）
５−（（２−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9069）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−アセチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3980）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 5743）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−（ピバロイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0785）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 0566）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）メチル）−４−ピラン−４−オン（EHT 8366）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 3664）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−メチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 4495）
５−（６−（モルホリノメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）ペンタンアミド（EHT 6037）
５−（２−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0371）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 1864）
５−（（３−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 0434）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 9358）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 2580）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 9241）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 8560）
５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0872）
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5575）
５−（８−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）オクチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1006）
５−（７−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ヘプチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8883）
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6892）。

本発明のさらなる目的は、異常細胞増殖に伴う疾患及び無秩序な血管形成に伴う疾患の処置に対する医薬組成物の製造用の、上で定義された式（Ｉ）の少なくとも一つの化合物の有効量の使用である。

それらの細胞増殖阻害活性の故に、本発明の化合物は、種々の状態の種々の疾患を処置するのに好適である。なお、「処置」又は「処置する」とは、治療的及び予防的処置の双方を包含する。したがって、化合物は、疾患の非常に早期の段階で、あるいは早期の兆候、あるいは転移を含む、有意な進行の後に、使用することができる。用語「処置」又は「処置する」とは、特に、患者における負担の削減、例えば細胞増殖率の減少、罹患増殖性疾患細胞の破壊、血管又は血管様構造の形成の阻害、腫瘍質量又は腫瘍サイズの減少、腫瘍進行の遅延、並びに完全な腫瘍の抑制を意味する。

異常細胞増殖に伴う疾患及び／又は無秩序な血管形成に伴う疾患の典型例としては、例えば、癌、再狭窄、関節炎、糖尿病、眼の病気、特に網膜症が挙げられる。本発明の化合物は、特に、癌、例えば固形癌又はリンパ腫の処置に好適である。具体例としては、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、肝臓癌、頭部及び頚部癌、大腸癌、膀胱癌、非ホジキンリンパ腫癌、白血病（急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病）及び黒色腫が挙げられる。

化合物は、種々の経路に従って、典型的には、経口経路により又は注入、例えば局所又は全身注入により、投与することができる。腫瘍内注入が、存在する癌を処置するためには好ましい。しかしながら、他の投与経路、例えば、筋肉内、静脈内、皮内、皮下等も同様に使用することができる。更に、化合物の効能の点で、限られた回数の注入が必要であるが、もし必要であれば、繰り返し注入がなされる。

本発明のさらなる目的は、癌を有する被験者に、有効量の、上で定義された式（Ｉ）の化合物を投与することにより、癌細胞の増殖を減少させるための組成物である。

本発明のさらなる目的は、そのような処置が必要な被験者に、有効量の、上で定義された式（Ｉ）の化合物を投与することにより、転移性癌を処置するための組成物である。

本発明のさらなる目的は、そのような処置が必要な被験者に、有効量の、上で定義された式（Ｉ）の化合物を投与することにより、眼性疾患を処置するための組成物である。

本発明のさらなる目的は、そのような処置が必要な被験者に、有効量の、上で定義された式（Ｉ）の化合物を投与することにより、関節炎を処置するための組成物である。

本発明のさらなる目的は、転移性癌を処置するための又は癌細胞増殖を減少させるための医薬組成物の製造用の、上で定義された化合物の使用である。

本発明のさらなる目的は、眼性疾患、特に網膜症（糖尿病性網膜症、網膜変性症、及び加齢性黄斑変性症（ＡＲＭＤ））を処置するための医薬組成物の製造用の、上で定義された化合物の使用である。

本発明のさらなる目的は、関節炎を処置するための医薬組成物の製造用の、上で定義された化合物の使用である。

本発明のさらなる態様及び利点は、以下の実施例において開示されるが、それらは例示とみなされるべきものであって、本出願の範囲を限定するものではない。

表及び図に対する説明

表１２：ＨＭＥＣ１、ＨＣＴ１１６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ７及びＮＩＨ３Ｔ３細胞系における、１０％ウシ胎仔血清及び１％ＤＭＳＯの存在下での６日間の細胞生存性アッセイ（ＭＴＴ）
３ｘ１０³〜１５ｘ１０³細胞を、４８穴プレート中、種々の濃度の試験化合物を有するか有しない１０％ＦＢＳを含む生育培地中に播種した。細胞培養物に、３日毎に、適切な培地を供給した。細胞生存性は、６日目に決定した。データを解析し、GraphPad Prismを用いて、用量反応曲線からＩＣ５０を算出した。表中にまとめた結果は、１〜８回の独立の実験の平均値±標準偏差である。

表１３：ＨＣＴ１１６及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞系における、０．５％ウシ胎仔血清及び１％ＤＭＳＯの存在下での６日間の細胞生存性アッセイ（ＭＴＴ）
７．５ｘ１０⁴〜１５ｘ１０⁴細胞を、４８穴プレート中、種々の濃度の試験化合物を有するか有しない１０％ＦＢＳを含む生育培地中に播種した。細胞培養物に、３日毎に、適切な培地を供給した。細胞生存性は、６日目に決定した。データを解析し、GraphPad Prismを用いて、用量反応曲線からＩＣ５０を算出した。表中にまとめた結果は、１〜２回の独立の実験の平均値±標準偏差である。

表１４：ＤＬＤ１、ＨＣＴ１１６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＭＣＦ７及びＨｅＬａ細胞における、１０％ウシ胎仔血清及び１％ＤＭＳＯの存在下での３日間の細胞生存性アッセイ（ＭＴＴ）
７．５ｘ１０³〜１．５ｘ１０⁴細胞を、４８穴プレート中、種々の濃度の試験化合物を有するか有しない１０％ＦＢＳを含む生育培地中に播種した。データを解析し、GraphPad Prismを用いて、用量反応曲線からＩＣ５０を算出した。表中にまとめた結果は、１〜７回の独立の実験の平均値±標準偏差である。

表１５：ＨＣＴ１１６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、ＮＩＨ３Ｔ３、ＨｅｐＧ２及び一次肝細胞における、１０％ウシ胎仔血清及び１％ＤＭＳＯの存在下での１６時間の細胞生存性アッセイ（ＭＴＴ）
５ｘ１０⁴〜１０ｘ１０⁴細胞を、４８穴プレート中、種々の濃度の試験化合物を有するか有しない１０％ＦＢＳを含む生育培地中に播種した。データを解析し、GraphPad Prismを用いて、用量反応曲線からＩＣ５０を算出した。表中にまとめた結果は、１〜２回の独立の実験の平均値±標準偏差である。

図１：アクチン細胞骨格への化合物効果の検討
静止性のＳｗｉｓｓ３Ｔ３細胞を、３０分間、種々の濃度の化合物で処理し、次いで、５０％Ｈ₂Ｏを含む媒体中で１０分間インキュベートすることにより、浸透圧ショックに付した。細胞を引き続いて固定し、透過可能にし、ファロイジンＴＲＩＴＣで標識化した。１００〜２００細胞を顕微鏡下に計測し、ラメリポジウム（lamellipodium）及び捲縮を示す細胞の百分率を求めた。

図２：６日（Ａ）及び３日（Ｂ）処理後の、最良化合物のＭＴＴアッセイ
細胞を、４８穴プレート中、種々の濃度の試験化合物を有するか有しない１０％ＦＢＳを含む生育培地中に播種した。細胞培養物に、３日毎に、適切な培地を供給した。細胞生存性は、３日目又は６日目に決定した。データを解析し、GraphPad Prismを用いて、用量反応曲線からＩＣ５０を算出した。データは、１〜８回の独立の実験の平均値±標準偏差である。

図３：軟寒天中での足場非依存性生育アッセイ
５ｘ１０³細胞を、２４穴プレート中、所定量の化合物を添加した０．３％寒天含有培地中に播種した。３７℃で７日間インキュベートしたのち、各穴の写真を撮り、ＩｍａｇｅＪ画像解析ソフトを用いて解析した。特に、クローンサイズ及び数を算出した。データを、GraphPad Prismを用いて解析し、ＩＣ５０を算出した。グラフ中に示した結果は、１〜３回の実験の平均値±標準偏差である。（Ａ）クローンサイズ及び数に対して得られた典型的な用量反応曲線。（Ｂ）各化合物について算出されたＩＣ５０を示す棒グラフ。

図４：移動アッセイ
（Ａ）ＲＥＦ細胞中での創傷治癒アッセイ。７．６ｘ１０⁴細胞を、実験の前に４８時間、カバースリップ上に置いた。細胞を、化合物で３０分間前処理し、次いで、ピペットチップを用いてこすった。処理媒体中のこすられたカバースリップを、ビデオカメラを取り付けた恒温顕微鏡下に置いた。材料及び方法に記載されたように動画を解析し、細胞で覆われた速度と全移動量を評価した。棒グラフは、２〜４回の実験の平均値±標準偏差である。（Ｂ）ＨＭＥＣ１、ＮＩＨ３Ｔ３及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞中でのボイデン（Boyden）チャンバー移動アッセイ。ＦＢＳを有するか有さず様々な化合物濃度の培養培地中に懸濁された５ｘ１０⁴〜７．５ｘ１０⁴細胞を、８μm孔径のフィルターの上部のボイデンブラインド穴中に播種した。フィルターを通して移動する細胞の能力は、下部ボイデンチャンバー中でＦＢＳの存在下又は不在下に、アッセイされた。１６時間のインキュベートののち、媒体を除去し、媒体を含有するカルセイン−ＡＭで置換した。標識化したのち、細胞をＨＢＳＳで洗浄し、蛍光を蛍光プレート読み取り機中で読み取った。蛍光値は、１％ＤＭＳＯ対照について得られた蛍光に対して標準化した。結果は、２〜４回の独立の実験の平均値±標準偏差である。

図５：管新生アッセイ（接合の数）
２ｘ１０⁴細胞を、材料及び方法に記載されたマトリゲル（Matrigel）−塗布穴上に置いた。７時間のインキュベーションののち、各穴の写真を撮った。「接合の数」パラメーターは、AngioSysソフトを用いて定量し、データを、ＩＴ５０算出のために、GraphPad Prismを用いて解析した。値は、２〜３０回の独立の実験の平均値±標準偏差を示す。

図６：インビボゼブラフィッシュ血管形成アッセイ
受精後２０時間（ｈｐｆ）の胚を、化合物と１％ＤＭＳＯで、２８時間インキュベートした。血管を、ＮＢＴ／ＢＣＩＰで染色し、形態計測学的解析を、Adobe Photoshopソフトを用いて行った。各々の条件に対して、１０個の胚を解析し、結果を平均値±標準偏差で表した。（Ａ）用量反応曲線。（Ｂ）死んだ胚の百分率と共に、体節間管形成の５０％及び最大阻害を示す表（材料及び方法参照）。

実施例
実施例１〜５０は、本発明に係る化合物の合成及び物理化学的特性を開示する。

実施例５１は、化合物の生物学的活性を開示する。

概要
¹ＨＮＭＲスペクトルは、周囲温度でＡｖａｎｃｅ３００（Bruker）スペクトロメーターで記録した。化合物は、Ｗａｔｅｒｓ２５２５ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ２６９６光ダイオードアレイ検出器、及びＸＴｅｒｒａカラム（商品番号１８６０００４８２、５μm、Ｃ１８、４．５ｘ５０mm）を備えたＷａｔｅｒｓ自動精製システムを使用して、逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。使用したＨＰＬＣ法は、７分間での溶媒Ｂ５％から１００％への勾配であった。溶媒Ａは０．０５％ＴＦＡを含むＨ₂Ｏであり、溶媒Ｂは０．０５％ＴＦＡを含むＣＨ₃ＣＮであった（方法Ａ）。融点は、Beuchi Ｂ−５４５融点測定装置で測定し、補正していない。反応生成物を単離するために、水浴温度が４０℃を超えないようにして、溶媒を真空ロータリーエバポレーターを使用して留去した。

ＥＨＴ３７８８、１５９３、ＥＨＴ１０７４、ＥＨＴ５８１０、ＥＨＴ０４７０、ＥＨＴ６０６０及びＥＨＴ９３７６の調製

一般的手順
方法Ａ（ＴＨＦ中）：
磁気撹拌機を備えた２５mLの丸底フラスコに、ＮａＨ１当量（鉱油中６０％）、無水ＴＨＦ（１０mL）及び脱プロトン化するモノマー（２５０mg）を、不活性雰囲気下、順次仕込んだ。ガスの発生が全く観察されなくなるまで（３〜５時間の間）、反応混合物を放置した。ＴＨＦ中の５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１）の１M溶液（１当量）を加え、反応混合物を室温で１２時間撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させ、粗生成物を、ＮａＯＨ２N水溶液を用いた洗浄により及び／又はシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。

方法Ｂ（ＤＭＳＯ中）：
磁気撹拌機を備えた５０mL丸底フラスコに、ＮａＨ１当量（鉱油中６０％）、ＤＭＳＯ（５mL）及び脱プロトン化するモノマー（２５０mg）を、不活性雰囲気下、順次仕込んだ。反応混合物を６０℃で３時間加熱した。室温に冷却後、５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１）（１当量）を加え（１度に）、反応混合物を６０℃で１２時間加熱した。冷却後、ジクロロメタン５０mLを加え、有機層をＨ₂Ｏ（４×１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。粗生成物を、ＮａＯＨ２N水溶液を用いた洗浄により及び／又はシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。

５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１）
化合物を、実施例１１に従ってＤＭＦ２０mL中の５−ヒドロキシ−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（３．５ｇ、１５．５mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（５．０４ｇ、１５．５mmol）及び１，５−ジブロモペンタン（８．８ｇ、３６．７mmol）を使用して調製した。密閉管を９０〜９５℃で１時間４０分間加熱した。白色の固体（１）を得た（５．３０ｇ、収率９１％）。

化合物（１）の構造を下記に示す：

実施例１：
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−ピラン−４−オン（EHT 3788）
化合物を、方法Ａに従って７−トリフルオロメチル−キノリン−４−オール（０．２５ｇ、０．１２mmol）を用いて調製した。溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した後、ベージュ色の固体EHT 3788（０．１１ｇ、収率１８％）を得た。

実施例１の化合物の構造を下記に示す：

実施例２：
５−〔５−（６−フルオロ−２−メチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1593）
化合物を、実施例１１に従って６−フルオロ−２−メチル−キノリン−４−オール（０．２５ｇ、１．４１mmol）を用いて調製した。溶離剤としてヘプタン：ＥｔＯＡｃ＝９：１を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した後、褐色の油状物EHT 1593（０．１３ｇ、収率１９．５％）を得た。

実施例２の化合物の構造を下記に示す：

実施例３：
５−〔５−（６−フルオロ−２−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1074）
化合物を、方法Ｂに従って６−フルオロ−２−トリフルオロメチル−キノリン−４−オール（０．２５ｇ、１．０８mmol）を用いて調製した。溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：２を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した後、灰色の固体EHT 1074（０．０７ｇ、収率１２％）を得た。

実施例３の化合物の構造を下記に示す：

実施例４：
５−〔５−（７−プロピル−キノリン−８−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5810）
化合物を、方法Ｂに従って７−プロピル−キノリン−８−オール（０．２５ｇ、１．３３mmol）を用いて調製した。溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：２を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した後、緑色の油状物EHT 5810（０．１６ｇ、収率２５％）を得た。

実施例４の化合物の構造を下記に示す：

実施例５：
５−〔５−（ベンゾ〔ｂ〕チオフェン−７−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6060）
化合物を、方法Ａに従ってベンゾ〔ｂ〕チオフェン−７−オール（０．２５ｇ、１．６６mmol）を用いて調製した。溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した後、黄色の油状物EHT 6060（０．０２ｇ、収率３％）を得た。

実施例５の化合物の構造を下記に示す：

実施例６：
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9376）

化合物を、方法Ａに従って７−トリフルオロメチル−キノリン−４−チオール（０．２５ｇ、１．０９mmol）を用いて調製した。溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した後、黄色の固体EHT 9376（０．２７ｇ、収率４７％）を得た。

実施例６の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ４７４５、ＥＨＴ６２７１、ＥＨＴ１３０２の合成

５−（４−ブロモ−ブトキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２）
化合物を、実施例１１に従って５−ヒドロキシ−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１．００ｇ、４．４２mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（１．５８ｇ、４．８６mmol）及び１，４−ジブロモブタン（２．００mL、１６．７mmol）を用いて調製した。密閉管を８０℃で２時間３０分間加熱した。白色の固体（２）を得た（１．１４ｇ、収率７１％）。

化合物（２）の構造を下記に示す：

実施例７：
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔４−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ブトキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4745）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（０．１９ｇ、０．８７mmol）を、磁気撹拌機を備えた２５mLの丸底フラスコに、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（１０mL）及び油中６０％分散ＮａＨ（３５mg、０．８７mmol）を順次加えた。３０分後、５−（４−ブロモ−ブトキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２）（０．３０ｇ、０．８３mmol）の溶液を室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ２００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×７５mL）で抽出した。有機層をブライン（４×２５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物をジエチルエーテル中で再結晶化させ、濾過した後、EHT 4745（２７１mg、収率６４％）を、黄色の固体として得た。

実施例７の化合物の構造を下記に示す：

５−（５−ブロモ−ヘキシルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（３）
５−ヒドロキシ−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１．５０ｇ、６．６０mmol）を、磁気撹拌機を備えた３０mLの密閉管に、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（１０mL）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（２．３０ｇ、７．００mmol）及び１，６−ジブロモ−ヘキサン（３．２０ｇ、１３．３０mmol）を順次加えた。反応混合物を６０℃で２時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＥｔＯＡｃ＝８：２）により精製して、蒸発させた後、５−（６−ブロモ−ヘキシルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（３）を、油状物（１９０mg、収率５２％）として得た。

化合物（３）の構造を下記に示す：

実施例８：
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6271）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（０．６２ｇ、２．７０mmol）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（２０mL）及び油中６０％分散ＮａＨ（１１０mg、２．７０mmol）を順次加えた。３０分後、５−（６−ブロモ−ヘキシルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（３）（１．００ｇ、２．５７mmol）の溶液を、室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ２００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×８０mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：２〜９：１）により精製して、ジエチルエーテル中で再結晶化させた後、EHT 6271（３７０mg、収率３３％）を、白色の固体として得た。

実施例８の化合物の構造を下記に示す：

実施例９：
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン塩酸塩（EHT 1302）。

EHT 9376（４０．６mg、０．００７７mmol）を、磁気撹拌機を備えた５mlのバイアルに仕込んだ。ＭｅＯＨ２ml及び活性化DOWEX（50WX8）（５０mg）を加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。懸濁液を濾過し、沈殿物をＭｅＯＨ：ＨＣｌ１M＝９：１の溶液で洗浄した。蒸発させた後、粘性で淡黄色の油状物２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン塩酸塩 EHT 1302（７mg、収率１９％）として得た。

実施例９の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ５９０９、ＥＨＴ２１６８、ＥＨＴ１４９４、ＥＨＴ７３６５及びＥＨＴ７１６８の調製

５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（７）
２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン（６）（１．５０ｇ、５．８５mmol）を、磁気撹拌機を備えた１００mLの丸底フラスコに、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（２５mL）及びＣｓ₂ＣＯ₃（２．１０ｇ、６．４４mmol）を順次加えた。５分後、１，５−ジブロモペンタン（２．３９mL、１７．５５mmol）を、シリンジを介して室温で加えた。反応混合物を５０℃で３時間加熱した。冷却し濾過した後、ＤＭＦを真空下で除去した。粗油状物を、溶離剤としてＥｔＯＡｃ：シクロヘキサン＝２０：８０、次に３０：７０を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した。蒸発させた後、５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（７）（１．２５ｇ、収率５３％）を、白色の固体として得た。

化合物（７）の構造を下記に示す：

２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（８）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（０．７７ｇ、３．３７mmol）を、磁気撹拌機を備えた１００mLの丸底フラスコに、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（２０mL）及び油中６０％分散ＮａＨ（１３５mg、３．３７mmol）を順次加えた。４０分後、ＤＭＦ１０mL中の５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（７）（１．２４ｇ、３．０６mmol）の溶液を、シリンジを介して室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ５００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×１５０mL）で抽出した。有機層をブライン（４×２５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。黄色の粗固体を、溶離剤としてＥｔＯＡｃ：シクロヘキサン＝５０：５０、次に６０：４０を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した。蒸発後、２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（８）を、黄色の固体として得た（１．２７ｇ、収率７５％）。

化合物（８）の構造を下記に示す：

実施例１０：
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5909）
５０mLの丸底フラスコ中で、２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（８）（１．２０ｇ、２．１７mmol）を、ＴＨＦ２５mLに溶解した。ＴＨＦ中のｎ−フッ化テトラブチルアンモニウムの溶液（２．３８mL、２．３８mmol）を、シリンジを介して加えた。反応混合物を室温で１時間撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させ、粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した。蒸発させた後、明黄色の固体EHT 5909（０．７３ｇ、収率７７％）を得た。

実施例１０の化合物の構造を下記に示す：

実施例１１：
２−メトキシメトキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2168）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 5909（０．１０ｇ、０．２２７mmol）を、磁気撹拌機を備えた２５mLの三つ首丸底フラスコに、窒素雰囲気下、仕込んだ。ＴＨＦ（６mL）及びＮａＨ（油中６０％分散、１０mg、０．２５mmol）を室温で加えた。反応混合物を５分間撹拌した後、メチルクロロメチルエーテル（１８．１μL、０．２４mmol、１．０５当量）をシリンジを介して加え、反応混合物を室温で２時間３０分間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ（６０mL）に注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×２０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＭｅＯＨ：ＣＨ₂Ｃｌ₂＝２：９８を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した。蒸発させ、真空ポンプで乾燥させた後、白色淡黄色の固体 EHT 2168を得た（７４mg、収率６７％）。

実施例１１の化合物の構造を下記に示す：

メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）
ジクロロメタン４mL中の２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 5909（０．１０ｇ、０．２３mmol）の懸濁液に、トリエチルアミン（３５μL、０．２５mmol）及び塩化メタンスルホニル（１９．４μL、０．２５mmol）を、５℃で加えた。反応混合物を室温で１８時間撹拌した。ジクロロメタン（２０mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃水溶液（２×３０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、真空下で蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ：＝９８：２を使用してシリカのクロマトグラフィーにより精製した。蒸発させた後、メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）（８３mg、６９％）を、白色の固体として得た。

化合物（９）の構造を下記に示す：

実施例１２：
２−クロロメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1494）
化合物を、EHT 5909からの上記手順に従って調製し、反応の後は、それの代わりに混合物を蒸発乾固し、室温で１８時間放置した（メシラートとトリエチルアミン塩酸塩の間で自然反応が起きた）。分取ＨＰＬＣ（ＣＨ₃ＣＨ：Ｈ₂Ｏ：ＴＦＡ勾配１／１０００）により精製して、EHT 1494（４３％）を黄色の固体として得た。

実施例１２の化合物の構造を下記に示す：

実施例１３：
２−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7365）
ジクロロメタン１．５mL中のメタンスルホン酸４−オキソ−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）（８２mg、０．１６mmol）を、磁気撹拌機を備えた１０mlの丸底フラスコに、窒素雰囲気下、仕込んだ。１−メチルピペラジン（３５．１μL、０．３２mmol）を、シリンジを介して加え、反応混合物を４５℃で２時間４０分間加熱した。反応混合物を蒸発乾固し、ＥｔＯＡｃ中で再結晶化させ、Ｅｔ₂Ｏで洗浄した。ジクロロメタン４０mLを加え、溶液を５％ＮａＨＣＯ₃（４０mL）及びブライン（４０mL）で順次洗浄した。溶液をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、淡黄色の固体EHT 7365（５９mg、収率７２％）を得た。

実施例１３の化合物の構造を下記に示す：

実施例１４：
２−モルホリン−４−イルメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン
（EHT7168）
ジクロロメタン１．８mL中のメタンスルホン酸４−オキソ−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）（９６mg、０．１８４mmol）を、磁気撹拌機を備えた１０mlの丸底フラスコに、窒素雰囲気下、仕込んだ。モルホリン（４１μL、０．４６mmol）をシリンジを介して加え、反応混合物を４５℃で３時間３０分間加熱した。反応混合物を蒸発乾固し、ＥｔＯＡｃ中で再結晶化させ、Ｅｔ₂Ｏで洗浄した。ジクロロメタン４０mLを加え、溶液を５％ＮａＨＣＯ₃（４０mL）及びブライン（４０mL）で順次洗浄した。溶液をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させて、淡黄色の固体EHT 7168（６０mg、収率６４％）を得た

実施例１４の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ８８８３及びＥＨＴ１００６の調製

５−（７−ブロモ−ヘプチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（４）
化合物を実施例１１の手順に従って、５−ヒドロキシ−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１．００ｇ、４．４２mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（１．５８ｇ、４．８６mmol）及び１，７−ジブロモヘプタン（２．５mL、１４．６mmol）を使用して調製した。密閉管を８０℃で２時間３０分間加熱した。白色の固体５−（７−ブロモ−ヘプチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（４）を得た（１．４０ｇ、収率７８％）。

化合物（４）の構造を下記に示す：

実施例１５：
５−（７−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ヘプチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8883）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（３２０mg、１．４mmol）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（１０mL）及び油中６０％分散ＮａＨ（５５mg、１．４mmol）を、４℃で順次加えた。３０分後、ＤＭＦ（６mL）中の５−（７−ブロモ−ヘプチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（４）（５２０mg、１．３mmol）の溶液を、室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ１５０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×８０mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５〜９８：２）により精製して、５−（７−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ヘプチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 8883（３１０mg、収率４３％）を、油状物として得た。

実施例１５の化合物の構造を下記に示す：

５−（８−ブロモ−オクチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（５）
化合物を実施例１１の手順に従って、５−ヒドロキシ−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１．００ｇ、４．４２mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（１．５８ｇ、４．８６mmol）及び１，８−ジブロモオクタン（４．１２mL、２２．１mmol）を使用して調製した。密閉管を８０℃で２時間３０分間加熱した。白色の固体（５）を得た（１．４０ｇ、収率７８％）。

化合物（５）の構造を下記に示す：

実施例１６：
５−（８−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）オクチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1006）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（３００mg、１．３mmol）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに、不活性雰囲気下、仕込んだ。無水ＤＭＦ（１０mL）及び油中６０％分散ＮａＨ（５３mg、１．３mmol）を、４℃で順次加えた。３０分後、ＤＭＦ（５mL）中の５−（８−ブロモ−オクチルオキシ）−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（５）（５００mg、１．２mmol）の溶液を、室温で加えた。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ１５０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×８０mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５〜９８：２）により精製して、５−（８−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）オクチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 1006（３２０mg、収率４７％）を、白色の固体として得た。

実施例１６の化合物の構造を下記に示す：

中間体化合物１０〜１５の調製
５−（５−ブロモペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１０）
コウジ酸（２ｇ、１４．１mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（４．６ｇ、１４．１mmol）及びＤＭＦ（１２mL）を、磁気撹拌機を備えた１００mLの丸底フラスコに仕込んだ。１，５−ジブロモペンタン（８．１ｇ、３５．２mmol）を加え、反応混合物を１１０℃で２時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、反応混合物をＨ₂Ｏ５０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１〜９５：５）により精製し、蒸発させた後、５−（５−ブロモペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１０）（１．９ｇ、収率４６％）を、褐色の油状物として得た。

化合物（１０）の構造を下記に示す：

５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル−４Ｈ−ピラン−４−オン（１１）
６−トリフルオロメチル−キノリン−４−オール（０．２３ｇ、１．０８mmol）を、ＤＭＦ（３mL）に溶解した。Ｃｓ₂ＣＯ₃（０．３５ｇ，１．０８mmol）を室温で加え、混合物を１０分間撹拌した。ＤＭＦ（２mL）中の５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−ヒドロキシメチル−ピラン−４−オン（１０）（０．３０ｇ、１．０３mmol）の溶液を、シリンジを介して加えた。この混合物を５０℃で１時間撹拌した。水（１０mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０mL）で抽出し、水（３×５０mL）、ブライン（３×５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤として（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ）＝９０：１０を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１１）を、黄色の油状物として得た（９３mg、収率２１％）。

化合物（１１）の構造を下記に示す：

５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１２）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン（３２０mg、１．５mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（５００mg、１．５mmol）及び無水ＤＭＦ（３mL）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコ中で７０℃にて撹拌した。２０分後、ＤＭＦ（２mL）中の５−（５−ブロモペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１０）（４２０mg、１．４mmol）を加え、反応混合物を７５℃で１５時間撹拌した。ＤＭＦを６０℃で蒸発させ、反応混合物をＨ₂Ｏ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で抽出した。有機層をブライン（１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：２〜９０：１０）により精製して、蒸発させた後、５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１２）（３００mg、収率４７％）を、白色の固体として得た。

化合物（１２）の構造を下記に示す：

４−〔５−（６−ヒドロキシメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）
４−ヒドロキシ−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（０．８６ｇ、３．０２mmol）を、ＤＭＦ（１０mL）に溶解した。Ｃｓ₂ＣＯ₃（０．９８ｇ、３．０２mmol）を室温で加え、混合物を１０分間撹拌した。ＤＭＦ（５mL）中の５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−ヒドロキシメチル−ピラン−４−オン（１０）（０．８６ｇ、３．０２mmol）の溶液を、シリンジを介して加えた。この混合物を５０℃で２２時間撹拌した。水（１０mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０mL）で抽出し、水（３×５０mL）、ブライン（３×５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤として（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ）＝９０：１０を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。４−〔５−（６−ヒドロキシメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）を、淡黄色の泡状物として得た（０．４３ｇ、収率３１％）。

化合物（１３）の構造を下記に示す：

５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１４）
８−トリフルオロメチル−キノリン−４−オール（０．８４ｇ、２．８８mmol）をＤＭＦ（５mL）に溶解した。Ｃｓ₂ＣＯ₃（０．９８ｇ、３．０２mmol）を室温で加え、混合物を１０分間撹拌した。ＤＭＦ（５mL）中の５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−ヒドロキシメチル）−ピラン−４−オン（１０）（０．８６ｇ、３．０２mmol）の溶液を、シリンジを介して加えた。この混合物を５０℃で１８時間撹拌した。水（１０mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（２×５０mL）で抽出し、水（３×５０mL）、ブライン（３×５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤として（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ）＝９０：１０を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１４）を、淡黄色の泡状物として得た（０．５３ｇ、収率３５％）。

化合物（１４）の構造を下記に示す：

５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１５）
キナゾリン−４−オール（１．０ｇ、６．８４mmol）をＤＭＦ（７mL）に溶解した。Ｃｓ₂ＣＯ₃（２．２３ｇ、６．８４mmol）を室温で加え、混合物を１０分間撹拌した。ＤＭＦ（７mL）中の５−（５−ブロモ−ペンチルオキシ）−２−ヒドロキシメチル−ピラン−４−オン（１０）（１．９０ｇ、６．５２mmol）の溶液を、シリンジを介して加えた。この混合物を５０℃で２時間撹拌した。水（１５０mL）を加え、混合物をＥｔＯＡｃ（２×１００mL）で抽出し、水（３×１００mL）、ブライン（３×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１５）を、淡黄色の固体として得た（０．６１ｇ、収率２６％）。

化合物（１５）の構造を下記に示す：

中間体化合物１６〜２０の調製

（５−（５−（６−トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１６）
ＣＨ₂Ｃｌ₂（５ml）中の５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１１）（９３mg、０．２２mmol）の溶液に、トリエチルアミン（３７μL、０．２６mmol）、塩化メタンスルホニル（２０．５μL、０．２６mmol）を０℃で加えた。溶液を室温で１．５時間撹拌した。ジクロロメタン（５０mL）を加え、溶液を水（２×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。（５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１６）を、淡黄色の油状物として得た（１００mg、収率９０．５％）。

化合物（１６）の構造を下記に示す：

（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１７）
ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ml）中の５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１２）（２４０mg、０．５７mmol）の溶液に、トリエチルアミン（９６μL、０．６８mmol）、塩化メタンスルホニル（５３μL、０．６８mmol）を０℃で加えた。溶液を室温で１．５時間撹拌した。ジクロロメタン（５０mL）を加え、溶液を水（３×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１７）を、黄色の粗油状物として得た（２６０mg、収率９１％）。

化合物（１７）の構造を下記に示す：

４−〔５−（６−メタンスルホニルオキシメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（１８）
ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ml）中の４−〔５−（６−ヒドロキシメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（１３）（３３０mg、０．６７mmol）の溶液に、トリエチルアミン（３７μL、０．２６mmol）、塩化メタンスルホニル（６２μL、０．８０mmol）を０℃で加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタン（５０mL）を加え、溶液を水（２×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：１５を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。（５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１８）を、淡黄色の油状物として得た（２４６mg、収率６５％）。

化合物（１８）の構造を下記に示す：

（５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１９）
ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５ml）中の５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１４）（４３０mg、１．０２mmol）の溶液に、トリエチルアミン（１７３μL、１．２１mmol）、塩化メタンスルホニル（９５μL、１．２１mmol）を０℃で加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタン（５０mL）を加え、溶液を水（２×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤として（ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ）＝９５：０５を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。（５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（１９）を、淡黄色の油状物として得た（１８８mg、収率３７％）。

化合物（１９）の構造を下記に示す：

（５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（２０）
ＣＨ₂Ｃｌ₂（２０ml）中の５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１５）（０．５３ｇ、１．４９mmol）の溶液に、トリエチルアミン（２５２μL、１．７８mmol）、塩化メタンスルホニル（１３８μL、１．７８mmol）を０℃で加えた。溶液を室温で１時間撹拌した。ジクロロメタン（５０mL）を加え、溶液を水（２×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。（５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチルメタンスルホナート（２０）を、淡黄色の油状物として得た（０．６４ｇ、収率９９％）。

化合物（２０）の構造を下記に示す：

ＥＨＴ９３１７、ＥＨＴ５４３０及びＥＨＴ７３７０の調製

実施例１７：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9317）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）（１００mg、０．１９３mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。ピペリジン（４８μL、０．４８３mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で１．２５時間撹拌した。溶液を蒸発乾固して、ＣＨ₂Ｃｌ₂を加えた（５０mL）。溶液を５％ＮａＨＣＯ₃水溶液（３×５０mL）及びブライン（２×２０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：０２を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 9317を、ベージュ色の固体として得た（８６mg、収率８８％）。

実施例１７の化合物の構造を下記に示す：

実施例１８：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（チオモルホリノ−メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5430）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）（１００mg、０．１９３mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。チオモルホリン（４６μL、０．４８３mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で２．５時間撹拌した。溶液を蒸発乾固して、ＣＨ₂Ｃｌ₂を加えた（５０mL）。この溶液を５％ＮａＨＣＯ₃の水溶液（３×５０mL）及びブライン（２×２０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：０２を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（チオモルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 5430を、ベージュ色の固体として得た（６５mg、収率６４％）。

実施例１８の化合物の構造を下記に示す：

実施例１９：
２−（（ジエチルアミノ）メチル）−５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7370）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（９）（１００mg、０．１９３mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。ジエチルアミン（５０μL、０．４８３mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で３．５時間撹拌した。溶液を蒸発乾固して、ＣＨ₂Ｃｌ₂を加えた（５０mL）。この溶液を５％ＮａＨＣＯ₃の水溶液（３×５０mL）及びブライン（２×２０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：０２を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。２−（（ジエチルアミノ）メチル）−５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 7370を、白色の固体として得た（４６mg、収率４８％）。

実施例１９の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ１４２６、ＥＨＴ００７９、ＥＨＴ３４１１、ＥＨＴ８７９１、ＥＨＴ８９３５、ＥＨＴ５８４７、ＥＨＴ４８６７、ＥＨＴ５３１７、ＥＨＴ３７２６及びＥＨＴ４０６３の調製

実施例２０：
５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1426）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（１６）（１００mg、０．２０mmol）を、ジクロロメタン（５ml）に溶解した。モルホリン（４４μL、０．５０mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で１８時間撹拌した。室温に冷却した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５ml）を加え、混合物を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０ml）及びブライン（３×５０ml）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９：１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 1426を、橙色の油状物として得た（３７mg、収率３５％）。

実施例２０の化合物の構造を下記に示す：

実施例２１：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0079）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（１７）（１３０mg、０．２６mmol）を、ジクロロメタン（５mL）に溶解した。１−メチル−ピペラジン（７５μL、０．６７mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で３時間撹拌した。室温に冷却した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５ml）を加え、混合物を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０ml）及びブライン（３×５０ml）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９：１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 0079を、黄色の油状物として得た（３０mg、収率２３％）。

実施例２１の化合物の構造を下記に示す：

実施例２２：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3411）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（１７）（１３０mg、０．２５９mmol）を、ジクロロメタン（５mL）に溶解した。モルホリン（５８μL、０．６６mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で５時間撹拌した。室温に冷却した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５ml）を加え、混合物を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０ml）及びブライン（３×５０ml）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９：１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 3411を、無色の油状物として得た（２４mg、収率１９％）。

実施例２２の化合物の構造を下記に示す：

実施例２３：
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8791）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（１８）（１２３mg、０．２１５mmol）を、ジクロロメタン（５mL）に溶解した。１−メチル−ピペラジン（６０μL、０．５４mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で２時間撹拌した。室温に冷却した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５ml）を加え、混合物を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０ml）及びブライン（３×５０ml）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９：１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル EHT 8791を、黄色の油状物として得た（３８mg、収率３１％）。

実施例２３の化合物の構造を下記に示す：

実施例２４：
４−〔５−（６−モルホリン−４−イルメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8935）
４−〔５−（６−メタンスルホニルオキシメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（１８）（１２３mg、０．２１４mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。モルホリン（４７．３μL、０．５３７mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で３時間撹拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０mL）及びブライン（３×５０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：０５を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。４−〔５−（６−モルホリン−４−イルメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル EHT 8935を、無色の油状物として得た（６６mg、５５％）。

実施例２４の化合物の構造を下記に示す：

実施例２５：
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5847）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（８−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（１９）（９４mg、０．１８７mmol）を、ジクロロメタン（５mL）に溶解した。１−メチル−ピペラジン（５２μL、０．４７mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で１時間撹拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０mL）及びブライン（３×５０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９：１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 5847を、白色の泡状物として得た（１３．６mg、収率１５％）。

実施例２５の化合物の構造を下記に示す：

実施例２６：
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4687）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（８−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（１９）（９４mg、０．１８７mmol）を、ジクロロメタン（４mL）に溶解した。モルホリン（４１μL、０．４７mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で３時間撹拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０mL）及びブライン（３×５０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 4687を、白色の泡状物として得た（４６mg、収率５０％）。

実施例２６の化合物の構造を下記に示す：

実施例２７：
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピロリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5317）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（キナゾリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（２０）（１００mg、０．２３mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。ピロリジン（４８μL、０．５７５mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で１．５時間撹拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（７５mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０mL）、ブライン（３×５０mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９０：１０を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピロリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 5317を、無色の油状物として得た（３０mg、収率３５％）。

実施例２７の化合物の構造を下記に示す：

実施例２８：
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3726）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（キナゾリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（２０）（１００mg、０．２３mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。モルホリン（５１μL、０．５７５mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で１時間撹拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０mL）及びブライン（３×５０mL）で洗浄した。生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５×５０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：０１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 3726を、白色の固体として得た（８．２mg、８．５％）。

実施例２８の化合物の構造を下記に示す：

実施例２９：
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4063）
メタンスルホン酸４−オキソ−５−〔５−（キナゾリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−２−イルメチルエステル（２０）（１００mg、０．２３mmol）を、ジクロロメタン（３mL）に溶解した。１−メチル−ピペラジン（６４μL、０．５７５mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を４５℃で１時間撹拌した。ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）を加え、溶液を１０％ＮａＨＣＯ₃（３×５０mL）及びブライン（３×５０mL）で洗浄した。生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂（５×５０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：０１を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 4063を、白色の固体として得た（３５mg、３５％）。

実施例２９の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ８８１７の調製

実施例３０：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（フルオロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8817）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−ピラン−４−オン EHT 5909（１００mg、０．２３mmol）を、ジクロロメタン（５mL）に溶解した。混合物を０℃で１５分間撹拌した。ジエチルアミノ硫黄トリフルオリド（DAST、３３μL、０．２５mmol）を、シリンジを介して加えた。混合物を室温で１０分間撹拌した。溶液を蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：０１を使用してシリカのフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（フルオロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 8817を、白色の固体として得た（４８mg、収率３５％）。

実施例３０の化合物の構造を下記に示す：

中間体２１〜２４の調製

２−（ブロモメチル）−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン（２１）
２５０mLの丸底フラスコ中で、５−ヒドロキシ−２−（ヒドロキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（１０．０ｇ、７０．３６mmol）を濃Ｈ₂ＳＯ₄（３０mL）に加えた。溶液を４℃に冷却し、臭化水素酸（４０mL）を１．５時間滴加した。ＨＢｒ蒸気を、ＮａＯＨ０．５N溶液を使用して捕捉した。反応を７０℃で１８．５時間撹拌した。冷却後、１．５時間絶えず撹拌しながら氷（２２０ｇ）を加え、白色の沈殿物を得た。固体を濾取し、酢酸エチルに溶解し、溶液をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。２−（ブロモメチル）−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン（２１）を、淡黄色の固体（９．１ｇ、収率６３％）として得た。

化合物（２１）の構造を下記に示す：

５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）
２−（ブロモメチル）−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン（２１）（５．０ｇ、２４．４mmol）、モルホリン（４．３mL、４８．８mmol）及びアセトニトリル（１２０mL）を、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。反応混合物を８０℃で３時間撹拌した。アセトニトリルを蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（４００mL）で抽出した。有機層を水（２０mL）、ブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。ジエチルエーテル（２５mL）を加え、生成物を沈殿させ、濾過し、乾燥させた後、５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（４．８ｇ、収率７２％）を、白色の固体として得た。

実施例２２の化合物の構造を下記に示す：

５−ヒドロキシ−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン臭化水素酸塩（２３）
２−（ブロモメチル）−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン（２１）（０．５ｇ、２．４mmol）、１−メチルピペラジン（０．３mL、２．４mmol）及びテトラヒドロフラン（１２mL）を、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。反応混合物を７５℃で２時間撹拌した。反応混合物を冷却し、沈殿物を濾過し、乾燥させた後、５−ヒドロキシ−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン臭化水素酸塩（２３）（０．６ｇ、収率８３％）を、ベージュ色の固体として得た。セシウム塩を、水（２０mL）中のＣｓ₂ＣＯ₃（７．３ｇ、２２．４mmol）に加えて調製した。水相をＣＨ₂Ｃｌ₂（２００mL）で洗浄し、次に水を４０℃で蒸発させ、セシウム塩を真空下で乾燥させて、白色の粉末を得た。

化合物（２３）の構造を下記に示す：

ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（２４）
２−（ブロモメチル）−５−ヒドロキシ−４Ｈ−ピラン−４−オン（８．９ｇ、４３．４mmol）、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルピペラジン（８．５ｇ、４５．６mmol）、トリエチルアミン（７mL、４９．９mmol）及びアセトニトリル（２００mL）を、磁気撹拌機を備えた５００mLの丸底フラスコに仕込んだ。反応混合物を９０℃で２時間撹拌した。アセトニトリルを蒸発させ、ＥｔＯＡｃ（５０mL）を加えた。（Ｃ₂Ｈ₅）₃Ｎ・ＨＣｌの沈殿を濾別し、酢酸エチルを４０℃で蒸発させて乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（不活性化ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：トリエチルアミン９８：２〜ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ９５：５、精製；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ９９．５：０．５〜９６：４）により精製して、蒸発させた後、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（２４）（１０．５ｇ、収率７８％）を、白色の粉末として得た。

化合物（２４）の構造を下記に示す：

中間体２５〜３３の調製

４−（５−ブロモペンチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２５）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（５ｇ、２１．８mmol）、１，５−ジブロモペンタン（２３．７ｇ、９８．１mmol）及びＣＨＣｌ₃（６０mL）を、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＴＢＡＢｒ（０．７ｇ、２．２mmol）及び水（４０mL）を加え、反応混合物を２０℃で４８時間撹拌した。反応混合物を、Ｋ₂ＣＯ₃（３．０ｇ、２１．８mmol）を含むＨ₂Ｏ１００mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（４００mL）で抽出した。有機層を水（３０mL）、ブライン（２×３０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させ乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂; ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．５：０．５〜９８：２）により精製して、蒸発させた後、４−（５−ブロモペンチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２５）（５．９g、収率７２％）を、白色の固体として得た。

化合物（２５）の構造を下記に示す：

４−〔２−（２−クロロ−エトキシ）−エチルスルファニル〕−７−トリフルオロメチル−キノリン（２６）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（２ｇ、８．７mmol）及び２−クロロエチルエーテル（６．２ｇ、４３．７mmol）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。次にＣｓ₂ＣＯ₃（２．８ｇ、８．７mmol）、ＮａＩ（１．３ｇ、８．７mmol）、ＴＢＡＢｒ（１．１ｇ、３．５mmol）及び水（１５mL）を加え、反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ１００mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×１００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１〜９８：２）により精製して、蒸発させた後、４−〔２−（２−クロロ−エトキシ）−エチルスルファニル〕−７−トリフルオロメチル−キノリン（２６）（１．９g、収率６５％）を、無色の油状物として得た。

化合物（２６）の構造を下記に示す：

４−（２−（ブロモメチル）ベンジルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２７）
２５mLの丸底フラスコ中で、７−トリフルオロメチル−キノリン−４−チオール（１．０ｇ、４．３７mmol）を、無水ＤＭＦ１０mLに溶解し、ＮａＨ（油中６０％分散、１８４mg）をゆっくりと加えた。反応を室温で１０分間撹拌した。５０mLの丸底フラスコ中で、１，４−ビス−ブロモメチル−ベンゼン（１．２７ｇ、４．８０mmol）を、無水ＤＭＦ（１０mL）に溶解し、溶液を０℃で１０分間撹拌した。第一の溶液を、シリンジを介してこの溶液に加え、反応を０℃で１５分間撹拌した。橙色の溶液が淡黄色になり、混合物を室温で１．２５時間撹拌した。水（５０mL）を加え、生成物をジエチルエーテル（５×１００mL）で抽出した。有機層を水（３×５０mL）、ブライン（３×５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン：ジエチルエーテル＝７：３を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。４−（２−（ブロモメチル）ベンジルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２７）を、白色の固体として得た（２０５mg、収率１２％）。

化合物（２７）の構造を下記に示す：

４−（３−ブロモメチル）ベンジルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２８）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（３．０ｇ、１３．１mmol）、１，３−ビス−ブロモメチル−ベンゼン（１０．４ｇ、３９．３mmol）及びＣＨＣｌ₃（１５０mL）を、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＴＢＡＢｒ（０．５ｇ、１．５mmol）及び水（１２mL）を加え、反応混合物を２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物を、Ｋ₂ＣＯ₃（１．８ｇ、１３．１mmol）を含むＨ₂Ｏ１０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（４００mL）で抽出した。有機層を水（３０mL）、ブライン（２×３０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させ乾固した。ジエチルエーテル（１５０mL）を加え、ビス−アルキル化生成物を沈殿させ、濾取した。濾液を蒸発させ、粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．５：０．５〜９６：４）により精製して、蒸発させた後、４−（３−ブロモメチル）ベンジルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２８）（３．３g、収率６１％）を、白色の固体として得た。

化合物（２８）の構造を下記に示す：

４−（４−（ブロモメチル）ベンジルチオ−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２９）
２５mLの丸底フラスコ中で、７−トリフルオロメチル−キノリン−４−チオール（１．０ｇ、４．３７mmol）を無水ＤＭＦ８mLに溶解し、ＮａＨ（油中６０％分散、１８４mg）をゆっくりと加えた。反応を室温で１０分間撹拌した。５０mLの丸底フラスコ中で、１，４−ビス−ブロモメチル−ベンゼン（１．２７ｇ、４．８０mmol）を、無水ＤＭＦ（１０mL）に溶解し、溶液を０℃で１０分間撹拌した。第一の溶液を、シリンジを介してこの溶液に加え、反応を０℃で１５分間撹拌した。橙色の溶液が淡黄色になり、混合物を室温で２時間撹拌した。水（５０mL）を加え、生成物をジエチルエーテル（５×１００mL）で抽出した。有機層を水（３×５０mL）、ブライン（３×５０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発させた。粗生成物を、溶離剤としてシクロヘキサン：ジエチルエーテル＝７：３を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。４−（４−ブロモメチル）ベンジルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２９）を、白色の固体として得た（２６５mg、収率１５％）。

化合物（２９）の構造を下記に示す：

４−（２−クロロエチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（３０）
７−トリフルオロメチル−４−キノリン−チオール（８００mg、３．５mmol）及び１，２−ジクロロエタン（１０．４ｇ、１０．５mmol）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。次にＴＢＡＢｒ（６００mg、１．７mmol）、Ｋ₂ＣＯ₃（５００mg、３．５mmol）、ＫＯＨ（５００mg、０．７mmol）及び水（２mL）を加え、反応混合物を２０℃で５時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ１００mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０mL）で抽出した。有機層を水（３０mL）、ブライン（２×１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させ乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＥｔＯＡｃ＝８：２〜５：５）により精製して、蒸発させた後、４−（２−クロロエチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（３０）（６８０mg、収率６７％）を、ベージュ色の固体として得た。

化合物（３０）の構造を下記に示す：

４−（２−クロロエトキシ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（３１）
７−トリフルオロメチル−４−キノリノール（５００mg、２．３mmol）及び１，２−ジクロロエタン（１１．６ｇ、１１．７mmol）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＴＢＡＢｒ（３７０mg、１．２mmol）、Ｋ₂ＣＯ₃（９５０mg、６．９mmol）、ＫＯＨ（７６０mg、１１．５mmol）及び水（６mL）を加え、反応混合物を７０〜８０℃で５時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ５０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１５０mL）で抽出した。有機層を水（３０mL）、ブライン（２×１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させて乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＥｔＯＡｃ＝５：５）により精製して、蒸発させた後、４−（２−クロロエトキシ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（３１）（１５０mg、収率２５％）を、ベージュ色の固体として得た。

化合物（３１）の構造を下記に示す：

５−ブロモ−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）ペンタンアミド（３２）
４−アミノ−７−トリフルオロメチルキノリン（１２０mg、０．５６mmol）、トリエチルアミン（１７０mg、１．７mmol）及びＣＨＣｌ₃（４mL）を、磁気撹拌機を備えた１０mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＣＨＣｌ₃（２mL）中の５−ブロモバレリルクロリド（１４０mg、０．７mmol）を加え、反応混合物を２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ１０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させて乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．５：０．５〜９８：２）により精製して、蒸発させた後、５−ブロモ−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）−ペンタンアミド（３２）（１９０mg、収率９０％）を、ベージュ色の固体として得た。

化合物（３２）の構造を下記に示す：

４−（５−ブロモペンチルオキシ）−７−クロロキノリン（３３）
７−クロロ−４−キノリノール（２ｇ、１１．１mmol）、Ｌｉ₂ＣＯ₃（１．７ｇ、２２．３mmol）及びＮＭＰ（１６mL）を、磁気撹拌機を備えた１００mLの丸底フラスコに仕込んだ。１，５−ジブロモペンタン（１３．５ｇ、５５．７mmol）を加え、反応混合物を９０℃で１時間撹拌した。反応混合物を、Ｈ₂Ｏ１００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３００mL）で抽出した。有機層を水（３０mL）、ブライン（２×３０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させて乾固した。ジエチルエーテル中の１M ＨＣｌ（１５mL、１５mmol）を加え、ビス−アルキル化生成物を沈殿させ、濾過した。沈殿物をＫ₂ＣＯ₃（１．５ｇ、１１．１mmol）を含む水に溶解し、ＥｔＯＡｃ（３００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、３０℃で蒸発させ乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．５：０．５〜９５：５）により精製して、蒸発させた後、４−（５−ブロモペンチルオキシ）−７−クロロキノリン（３３）（０．４５ g、収率１２％）を、白色の固体として得た。

化合物（３３）の構造を下記に示す：

ＥＨＴ５５７５、ＥＨＴ６８９２、ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ０３７１、ＥＨＴ６０３７、ＥＨＴ９０６９、ＥＨＴ２７２５、ＥＨＴ０４３４、ＥＨＴ２２１８、ＥＨＴ９３５８、ＥＨＴ２５８０及びＥＨＴ９２４１の調製

実施例３１：
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5575）
５−ヒドロキシ−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−ピラン−４−オン（３６０mg、１．６mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（５２０mg、１．６mmol）、ＴＢＡＢｒ（９０mg、０．３mmol）、水（２mL）及びＣＨＣｌ₃（５mL）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。４−（２−クロロエチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（３０）（２３０mg、０．８mmol）を加え、反応混合物を２０℃で１５時間撹拌した。反応混合物をＨ₂Ｏ２０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×２５mL）で抽出した。有機層をブライン（１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＥｔＯＡｃ）により精製して、蒸発させた後、EHT 5575（２０mg、収率５％）を、糊状生成物として得た。

実施例３１の化合物の構造を下記に示す：

実施例３２：
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）エトキシ）−２−モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6892）
５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（１３０mg、０．６mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（２００mg、０．６mmol）及び無水ＤＭＦ（５mL）を、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコ中で、４０℃にて撹拌した。３０分後、４−（２−クロロエトキシ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（３１）（１４０mg、０．５mmol）及びＮａＩ（８０mg、０．５mmol）を加え、反応混合物を９０℃で３時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させ、反応混合物をＨ₂Ｏ２０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×４０mL）で抽出した。有機層をブライン（１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１〜９５：５）により精製して、蒸発させた後、EHT 6892（１００mg、収率３５％）を、白色の固体として得た。

実施例３２の化合物の構造を下記に示す：

実施例３３：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 1864）
５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（２．５ｇ、１２．０mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（３．９ｇ、１２．０mmol）及び無水ＤＭＦ（４０mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。４−（５−ブロモペンチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２５）（３．８ｇ、１０．０mmol）及びＮａＩ（０．２ｇ、１．３mmol）を加え、反応混合物を９０℃で２時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、反応混合物をＨ₂Ｏ５０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×２００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１〜９４：６）により精製して、蒸発させた後、純粋な固体（４．４ g、収率８８％）を得た。化合物をＥｔＯＨ（１５０mL）に溶解し、次にＥｔＯＨ中の１M ＨＣｌ（２２mL、２１．６mmol）を加え、反応混合物を２０℃で２時間撹拌した。ＥｔＯＨを蒸発させた後、塩酸塩化合物を真空下で乾燥させ、エタノール（５０mL）中で結晶化させて、EHT 1864（３．３５ｇ、収率５８％）を、白色の粉末として得た。

実施例３３の化合物の構造を下記に示す：

実施例３４：
５−（２−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0371）
５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（３５０mg、１．７mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（５５０mg、１．７mmol）及び無水ＤＭＦ（５mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた３０mLの密閉管に仕込んだ。４−〔２−（２−クロロ−エトキシ）−エチルスルファニル〕−７−トリフルオロメチル−キノリン（２６）（４８０mg、１．４mmol）及びＮａＩ（２１０mg、１．４mmol）を加え、反応混合物を９０℃で２時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、反応混合物をＨ₂Ｏ５０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（３×５０mL）で抽出した。有機層をブライン（２×１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．４：０．６〜９７：３）により精製して、蒸発させた後、EHT 0371（４００mg、収率５６％）を、淡黄色の油状物として得た。

実施例３４の化合物の構造を下記に示す：

実施例３５：
５−（６−（モルホリノメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）ペンタンアミド（EHT 6037）
５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（８５mg、０．４mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（１３０mg、０．４mmol）及び無水ＤＭＦ（５mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた３０mLの密閉管に仕込んだ。次に５−ブロモ−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）ペンタンアミド（３２）（１００mg、０．３mmol）を加え、反応混合物を９０℃で３時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、反応混合物をＨ₂Ｏ５０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（３×３０mL）で抽出した。有機層をブライン（２×１０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．９：０．１〜９５：５）により精製して、蒸発させた後、EHT 6037（４５mg、収率５５％）を、白色の粉末として得た。

実施例３５の化合物の構造を下記に示す：

実施例３６：
５−（（２−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9069）
５０mLの丸底フラスコ中で、５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（９５mg、０．４５mmol）を、無水ＤＭＦ（５mL）に溶解し、Ｃｓ₂ＣＯ₃（１６１mg、０．５０mmol）を室温で加えた。淡黄色の反応混合物を１０分間撹拌し、０℃に１５分間冷却した。２５mLの丸底フラスコ中で、４−（２−ブロモメチル−ベンジルスルファニル）−７−トリフルオロメチル−キノリン（２７）（１８５mg、０．４５mmol）を、無水ＤＭＦ（１０mL）に溶解し、溶液を０℃に１０分間冷却した。この溶液を、第一の反応混合物にシリンジを介して０℃で１５分間加えた。反応混合物を室温で１．７５時間撹拌した（橙色）。水（１００mL）を加え、溶液をＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で抽出した。有機層を水（５×７５mL）、ブライン（３×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：２を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（（２−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 9069を、白色の固体として得た（１５５mg、収率６４％）。

実施例３６の化合物の構造を下記に示す：

実施例３７：
５−（（３−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 0434）及びその遊離塩基（EHT 2725）
５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（３．１ｇ、１４．７mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（４．８ｇ、１４．７mmol）及び無水ＤＭＦ（４０mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＤＭＦ（６０mL）中の４−（３−（ブロモメチル）ベンジルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２８）（５．８ｇ、１４．１mmol）を、４℃で加え、反応混合物を２０℃で４時間撹拌した。反応混合物を氷−水３００mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×５００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×５０mL）で洗浄し、木炭（２ｇ）を含むＭｇＳＯ₄（５０ｇ）で乾燥させ、ＳｉＯ₂（３００mL）で被覆されたセライト545（２００mL）上に注ぎ、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．８：０．２〜９６：４）により精製して、蒸発させた後、遊離塩基 EHT 2725（５．８ｇ、収率７６％）を得た。EHT 2725をＥｔＯＨ（１５０mL）に溶解し、ＥｔＯＨ中の１M ＨＣｌ（２６mL、２６．３mmol）を加え、反応混合物を２０℃で０．５時間撹拌した。ＥｔＯＨを蒸発させた後、二塩酸塩を真空下で乾燥させ、イソプロパノール（５００mL）中で結晶化させて、EHT 0434（４．４ｇ、収率４８％）を、ベージュ色の粉末として得た。

実施例３７の化合物の構造を下記に示す：

実施例３８：
５−（（４−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2218）
５０mLの丸底フラスコ中で、５−ヒドロキシ−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（２２）（１２８mg、０．６１mmol）を、無水ＤＭＦ（１０mL）に溶解し、Ｃｓ₂ＣＯ₃（２１７mg、０．６７mmol）を室温で加えた。反応混合物を１０分間撹拌し、０℃に１５分間冷却した。２５mLの丸底フラスコ中で、４−（４−ブロモメチル−ベンジルスルファニル）−７−トリフルオロメチル−キノリン（２９）（２５０mg、０．６１mmol）を、無水ＤＭＦ（１０mL）に溶解し、溶液を０℃に１０分間冷却した。この溶液を、第一の反応混合物にシリンジを介して０℃で１５分間加えた。反応混合物を室温で１．７５時間撹拌した（橙色）。水（５０mL）を加え、溶液をＥｔＯＡｃ（３×１００mL）で抽出した。有機層を水（３×１００mL）、ブライン（３×１００mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗生成物を、溶離剤としてＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９８：２を使用してシリカのカラムクロマトグラフィーにより精製した。５−（（４−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン EHT 2218を、白色の固体として得た（１５０mg、収率４６％）。

実施例３８の化合物の構造を下記に示す：

実施例３９：
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 9358）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（２３）（５．０ｇ、１６．１mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（５．３ｇ、１６．１mmol）及び無水ＤＭＦ（２０mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。４−（５−ブロモペンチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２５）（５．８ｇ、１５．３mmol）及びＤＭＦ（１０mL）を加え、反応混合物を９０℃で３時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、化合物を真空下で乾燥させて、ＥｔＯＡｃ（７０mL）中で沈殿させた。沈殿物を水（３×２０mL）で洗浄し、濾過し、乾燥させた後、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート EHT 9358（７．０ｇ、収率７５％）を、白色の粉末として得た。

実施例３９の化合物の構造を下記に示す：

実施例４０：
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 2580）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−ヒドロキシ−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（２３）（０．９５ｇ、３．０mmol）、Ｃｓ₂ＣＯ₃（１．１ｇ、３．２mmol）及び無水ＤＭＦ（７mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。４−（５−ブロモペンチルオキシ）−７−クロロキノリン（３３）（１．００ｇ、３．０mmol）を加え、反応混合物を９０℃で３時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、反応混合物をＨ₂Ｏ５０mLに注ぎ、ＥｔＯＡｃ（２×１００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×２０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（不活性化ＳｉＯ₂：ＣＨ₂Ｃｌ₂：トリエチルアミン＝９８：２〜ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９５：５；精製：ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１〜９７．５：２．５）により精製して、蒸発させた後、ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート EHT 2580（１．２ｇ、収率７２％）を、白色の粉末として得た。

実施例４０の化合物の構造を下記に示す：

実施例４１：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 9241）
５−ヒドロキシ−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン臭化水素酸塩（２４）（５．２ｇ、１７．０mmol）を、水（４０mL）に溶解し、水（２０mL）中のＣｓ₂ＣＯ₃（７．３ｇ、２２．４mmol）を加えた。水相をＣＨ₂Ｃｌ₂（２００mL）で洗浄し、次に水を４０℃で蒸発させ、セシウム塩を真空下で乾燥させて、白色の粉末を得た。この誘導体、Ｃｓ₂ＣＯ₃（２．５ｇ、７．６mmol）及び無水ＤＭＦ（１００mL）を、不活性雰囲気下、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。４−（５−ブロモペンチルチオ）−７−（トリフルオロメチル）キノリン（２５）（５．８ｇ、１５．３mmol）を加え、反応混合物を９０℃で２時間撹拌した。ＤＭＦを蒸発させた後、反応混合物をＨ₂Ｏ２００mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２×３００mL）で抽出した。有機層をブライン（２×３０mL）で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９．５：０．５〜９５：５）により精製して、蒸発させた後、純粋な固体（４．３ｇ、収率５５％）を得た。化合物をＥｔＯＨ（１５０mL）に溶解し、ＥｔＯＨ中の１M ＨＣｌ（３３mL、３３．０mmol）を加え、反応混合物を２０℃で０．５時間撹拌した。ＥｔＯＨを蒸発させた後、三塩酸塩を真空下で乾燥させ、エタノール（５０mL）中で沈殿させ、濾過した後、５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩 EHT 9241（３．６ｇ、収率３８％）を、白色の粉末として得た。

実施例４１の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ０８７２及びＥＨＴ８５６０の調製

実施例４２：
５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン−三塩酸塩（EHT 0872）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート EHT 2580（０．８ｇ、１．４mmol）及びＥｔＯＨ（１０mL）を、磁気撹拌機を備えた１００mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＥｔＯＨ中の無水２M ＨＣｌ（７．２mL、１４mmol）を、５０℃で滴加した。反応混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させた。ＥｔＯＨ（１０mL）を加え、次に蒸発させた。この操作を３回行った。ＥｔＯＨを蒸発させた後、三塩酸塩を真空下で乾燥させて、ＥｔＯＨ（２０mL）中で結晶化させ、５日間そして濾過した後、５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩 EHT 0872（４００mg、収率５０％）を、白色の粉末として得た。

実施例４２の化合物の構造を下記に示す：

実施例４３：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 8560）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート EHT 9358（７．０ｇ、１１．５mmol）及びＥｔＯＨ（６０mL）を、磁気撹拌機を備えた２５０mLの丸底フラスコに仕込んだ。ＥｔＯＨ中の無水１M ＨＣｌ（６０mL、６０mmol）を、５０℃で滴加した。反応混合物を室温で３時間撹拌した。反応混合物を真空下で蒸発させた。ＥｔＯＨ（３０mL）を加え、次に蒸発させた。この操作を３回行った。ＥｔＯＨを蒸発させた後、三塩酸塩を真空下で乾燥させて、ＥｔＯＨ（２００mL）中で結晶化させ、濾過した後、５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩 EHT 8560（４．５ｇ、収率６３％）を、白色の粉末として得た。

実施例４３の化合物の構造を下記に示す：

ＥＨＴ３９８０、ＥＨＴ５７４３、ＥＨＴ０７８５、ＥＨＴ０５６６、ＥＨＴ８３６６、ＥＨＴ３６６４及びＥＨＴ４４９５の調製

一般手順：
方法Ｃ（ＣＨＣｌ₃中）：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8560の遊離塩基）（０．１５ｇ、０．３mmol）を、磁気撹拌機を備えた１０mLの丸底フラスコに仕込んだ。無水ＣＨＣｌ₃（３mL）及びトリエチルアミン（１２５μL、０．９mmol）を順次加えた。０℃で３０分後、ＣＨＣｌ₃（２００μL）中の試薬（０．３５mmol）をゆっくりと滴加した。反応混合物を室温で１５時間撹拌した。反応混合物をブライン１０mLに注ぎ、ＣＨ₂Ｃｌ₂（５０mL）で抽出した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、濾過し、蒸発乾固した。粗化合物を、カラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂；ＣＨ₂Ｃｌ₂：ＭｅＯＨ＝９９：１〜９５：５）により精製して、溶媒を蒸発させた後、所望の化合物を得た。

実施例４４：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−アセチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3980）。
化合物を、方法Ｃに従ってアセチルクロリド（２８mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、標記化合物を真空下で乾燥させて、EHT 3980（１５０mg、収率９０％）を白色の固体として得た。

実施例４４の化合物の構造を下記に示す：

実施例４５：
４−（（５−（５−（７−トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 5743）
化合物を、方法Ｃに従ってジエチルカルバミルクロリド（４８mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、標記化合物を真空下で乾燥させて、EHT 5743（１８０mg、収率９８％）を白色の固体として得た。

実施例４５の化合物の構造を下記に示す：

実施例４６：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−ピバロイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0785）
化合物を、方法Ｃに従ってトリメチルアセチルクロリド（４２mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、標記化合物を真空下で乾燥させて、EHT 0785（１００mg、収率５６％）を白色の固体として得た。

実施例４６の化合物の構造を下記に示す：

実施例４７：
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジ−イソプロピルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 0566）
化合物を、方法Ｃに従ってジイソプロピルカルバモイルクロリド（５８mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、標記化合物を真空下で乾燥させて、EHT 0566（１２０mg、収率６３％）を淡色の油状物として得た。

実施例４７の化合物の構造を下記に示す：

実施例４８：
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8366）
化合物を、方法Ｃに従ってメシルクロリド（４２mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、化合物を真空下で乾燥させて、EHT 8366（８０mg、収率４５％）を白色の固体として得た。

実施例４８の化合物の構造を下記に示す：

実施例４９：
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 3664）
化合物を、方法Ｃに従ってｔｅｒｔ−ブチルイソシアナート（３６mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、標記化合物を真空下で乾燥させて、EHT 3664（１３０mg、収率７１％）を白色の固体として得た。

実施例４９の化合物の構造を下記に示す：

実施例５０：
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−メチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 4495）
化合物を、方法Ｃに従ってメチルカルバミルクロリド（３５mg、０．３５mmol）を使用して調製した。精製した後、標記化合物を真空下で乾燥させて、EHT 4495（１００mg、収率５９％）を淡色の油状物として得た。

実施例５０の化合物の構造を下記に示す：

実施例５１：
薬理学
この実施例は、化合物の生物学的活性を説明するために使用される種々のアッセイ条件を開示している。

材料及び方法
１．対照化合物
一連のインビトロ試験は、種々の化合物をスクリーニングし、それらの抗増殖性、抗腫瘍性及び抗血管形成能を評価した。ＣＡＩ（カルボキサミドトリアゾール；Ｌ６５１５８２、Merck Institute for Therapeutic Research）、パクリタキセル（Paclitaxel）（タキソール；Bristol Myers Squibb）、２−メトキシエストラジオール（２Ｍｅ、パンゼン（登録商標）；EntreMed）及びＳＵ−６６６８（Sugen）を、陽性コントロールとして含めた。

対照ＣＡＩは、元来、コクシジウム制止剤（米国特許第４，５９０，２０１号）として開発された化合物である。ＣＡＩは、非電位依存性及び電位依存性カルシウム経路の双方の合成阻害剤であることが、ＮＣＩにより、その後に示されている。それは、１〜１０μMの濃度で、いくつかのヒト腫瘍細胞系において、インビトロでの、腫瘍細胞運動性、接着性、転移能、及び成長の阻害を示した。ＣＡＩは、また、いくつかのヒト内皮細胞の増殖、移動及び接着を阻害することが示された。また、ラットの大動脈環におけるマトリゲル（matrigel）上のＨＵＶＥＣ血管形成及び微細血管生成の遅延の双方の阻害が示された。最後に、１０〜２０μM濃度でのニワトリ絨毛尿膜アッセイにおける血管形成のインビボ阻害も示された。

対照２ＭＥは、インビボでの腫瘍成長及び血管形成の双方を阻害することが示されているエストラジオールの内因性代謝物である。しかしながら、その抗血管形成活性に加えて、２−ＭＥは、活発に増殖している細胞においてアポトーシスを誘起し、広範囲のヒト癌細胞培養物に対して、一般的で非特異的な抗増殖性効果を示す。それはまた、マウスにおいて限定的な経口生体利用性を有し、投与に続いて、迅速に消滅する。第Ｉ相及び第ＩＩ相腫瘍学試験において、経口的に投与された２ＭＥは、乳癌、前立腺癌、及び多発性骨髄腫の患者において、抗癌活性を示し、十分に許容された。現在、２ＭＥは、乳癌について第Ｉ相臨床試験中であり、血液癌多発性骨髄腫について第ＩＩ相試験中である。２ＭＥの眼のインプラントでの前臨床モデルにおける結果は、それは加齢性黄斑変性症（ＡＲＭＤ）の新生血管形成を阻害するということを示している。

対照ＳＵ６６６８は、種々の癌（卵巣癌、前立腺癌及び脳の癌）の処置用に開発された受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫｓ）の選択的阻害剤である。ＳＵ６６６８は、新血管の形成に伴う、血管内皮（ＶＥＧＦ）、血小板由来（ＰＤＧＦ）及び線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）の受容体への結合を経由して、腫瘍成長及び転移に必要な血管形成を阻害する。前臨床腫瘍モデルにおいて、ＳＵ６６６８は、対象受容体リン酸化を完全に阻害し、血管形成阻害を通して腫瘍縮小を誘起する。経口製剤は、２０００年に第ＩＩ／ＩＩＩ相臨床試験中であった。それ以降、進展は全く報告されていない。

２．インビトロアッセイ
ａ．アクチン細胞骨格に対する化合物の影響の研究
静止Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３細胞：５％ＦＣＳ培地（特別な弱いＦＣＳ）中のカバースリップ上に、細胞を高密度で接種する。細胞が静止状態になったとき（６〜１０日間の培養後）、培地を取り除き（穴中に数μＬ残る）、血清非含有培地に置き換える。細胞をインキュベーター中に一晩置く。理想的には、細胞は、もし存在するならば、少数のアクチンストレスファイバーと周囲の皮質アクチンの薄い帯を有するであろう。

試験化合物での細胞の処理：静止細胞を３０分間、種々の濃度の化合物で処理する。細胞を、引き続き、試験化合物＋誘導物質（以下のパラグラフ参照）の混合物で処理する。処理後、免疫蛍光検査を行うことができる。

スモールＧタンパク質の種々の誘導物質での細胞の処理：細胞骨格に衝撃を与えて、スモールＧタンパク質経路を特異的に活性化することができる（Takaiら、Physiol. Rev., 2001）。膜捲縮の形成を制御するＲａｃ経路は、ＰＤＧＦ、インシュリン、ボンベシン（Bombesin）（Ridleyら、Cell, 1992, Nobesら、J. Cell Sci, 1995）及び浸透圧ストレス（DiCianoら、Am J Physiol Cell Physiol, 2002）で活性化することができる。Ｒｈｏ信号伝達経路は、ＬＰＡで顕著に活性化することができる（Ridley及びHall, Cell, 1992）。

免疫蛍光検査
− 固定と浸透化：培地を培養穴から吸出し、固定用緩衝液（ＢＲＢ８０：８０mM KPipes ｐH６．８、２mM ＭｇＣｌ₂、５mM ＥＧＴＡ、３％パラホルムアルデヒド）で置き換えた。細胞を室温で、２ｘ１０分間インキュベートする。固定用緩衝液を除去し、浸透化緩衝液（ＰＢＳ、２％ＢＳＡ、０．１Ｘサポニン）で置き換える。プレートを室温で１時間又は４℃で１６時間インキュベートする。

− 標識化：固定し、浸透化した細胞を、浸透化緩衝液中に希釈した抗チューブリン一次抗体（Yol 1/34; Abcys）と共に１時間インキュベートする。続いて、浸透化緩衝液で５回洗浄する。カバースリップを、ヤギ抗ラットＦＩＴＣ二次（Jackson Immunoresearch）抗体及び線維状アクチンに結合するファロイジン（phalloidin）−ＴＲＩＴＣ（Sigma）と共に、３０分〜１時間、インキュベートする。続いて、浸透化緩衝液で５回洗浄する。次いで、カバースリップを、Immuno-Fluore（ICN）マウント溶液で顕微鏡スライド上に固定する。マウント物を３７℃で１時間乾燥させる。

− 化合物の効力の定量：細胞の合計数を顕微鏡下に計測する（少なくとも三つの異なる視野、例えば１００〜２００細胞の間）。所定の形態的特徴を有する細胞の数を評価する。次いで、所定の形態的特徴を有する細胞の百分率を算出する。

ｂ．細胞培養及び細胞生存性アッセイ
細胞生存性に対する化合物の効力を決定するために、修正を伴って、Carmichaelら（1996）により記述されたように、ミクロ培養テトラゾリウムアッセイ（ＭＴＴ）を行った。４つのヒト腫瘍細胞系、つまりＨＣＴ１１６大腸腺癌、Ｈ４６０肺癌、ＭＣＦ−７及びＭＤＡ−ＭＢ−２３１乳癌細胞系、ＤＬＤ１大腸直腸腺癌、ＨｅＬａ腺癌、ＨｅｐＧ２肝細胞癌。３つの不死化されているが、非腫瘍形成性の細胞系、つまりＮＩＨ３Ｔ３マウス線維芽細胞（American Type Culture Collection）及び推奨に従ってヒト微小血管系内皮細胞系ＨＭＥＣ１（National Center for Infectious Diseases）と共に培養された、一次肝細胞（Biopredic international）。簡潔に述べると、細胞は、薬物添加前に、４８穴プレート中で２４時間、接種された。細胞は、穴中でＤＭＳＯの最終濃度を１％に調整して、ＤＭＳＯ中に溶解された０〜２００μM（１１濃度）の化合物で処理した。処理後、１６時間、及び３日間又は６日間に、０．５mg／ml ＭＴＴ（Sigma）を培地に加え、細胞を、ホルマザン結晶の１００％ＤＭＳＯへの溶解前に、３７℃で１〜５時間インキュベートした。分光光度計を用いて、吸光度を５５０nmの波長で測定した。データを、GraphPad Prismソフト（GraphPad Software, Inc.）を用いて解析し、用量反応曲線からＩＣ₅₀（５０％の細胞死に導く用量）を算出した。

ｃ．軟寒天中での足場非依存性細胞生育アッセイ
腫瘍細胞が足場なしで成長する能力に対する１つの化合物の効力を評価するために、ＨＣＴ１１６細胞を軟寒天中で接種した。全細胞集団にわたって薬物の効力を平均化するミクロプレートアッセイとは対照的に、クローン化（clonogenic）アッセイは、細胞毒性剤（すなわち、コロニーの数を減少させる）と細胞成長抑止剤（すなわち、コロニーの数を減少させずに、コロニーのサイズを減少させる；Murphy M.J.ら、1996）とを区別する可能性を提供する。

簡潔に述べると、５ｘ１０³ＨＣＴ１１６細胞を、０．３％の軟寒天（Difco）及び種々の濃度の化合物（０〜３０μMの範囲で８つの濃度）を含む完全培地３００μl中に再懸濁した。次いで、細胞を、０．５％の軟寒天と上層と同じ濃度の化合物を含む培地の固形化層上に注いだ。細胞を、各穴の写真を位相差顕微鏡（Nikon）及びデジタルカメラ（Nikon Coolpix 990）を用いて撮る前に、３７℃で７日間インキュベートした。続いて、写真を、クローンのサイズと数を決定できる、ＮＩＨからの無料の画像解析ソフト（ImageJ）を用いて解析した。

データを、GraphPad Prismソフトを用いて解析し、用量反応曲線からＩＣ₅₀（クローンのサイズと数の５０％減少に導く用量）を算出した。

ｄ．移動アッセイ
創傷治癒アッセイ
このアッセイは、Nobes & Hall (J. Cell Biol., 1999) により記述されている。
− ＲＥＦ細胞の調製：ＲＥＦ細胞は、１５〜１８Ｅ１４胚から調製される。簡潔に述べると、胚から、頭部、尾部及び内臓を除去する。胴体のみを保持し、小さな四角形にスライスし、洗浄し、３７℃で２０分間、トリプシン−ＥＤＴＡで処理し、培地に再懸濁し、数を数え、プレート化する。２４時間後、細胞をトリプシン処理し、冷却瓶中で凍結する。創傷治癒アッセイの４８時間前に、細胞をカバースリップ上に載せる。実験の日に、細胞を試験化合物又はＤＭＳＯのみで処理する。３０分後、小さなピペットチップを用いて、カバースリップの中心をこする。細胞を洗浄し、化合物又はＤＭＳＯを含む新鮮な培地を加える。
− 経時的顕微鏡検査：パラフィルムでシールした、こすられたカバースリップと処理培地を含む皿を、ビデオカメラとコンピューターに接続された温度自動調節顕微鏡（３７℃）下に置く。顕微鏡画像を５分毎に撮り、OpenLabソフトを用いて記録した。アッセイが終了したとき（４〜２４時間後）、写真と動画を、Metamorpheソフトを用いて解析する。写真は較正（μmに変換されたピクセル）し、覆われた速度と全移動量は、動画上で７〜１０個の単細胞を追跡後に算出した。それについて、一つの細胞上で一つの点を選択し、この点を各々の動画上で追跡した。各々の点の位置を記録した。データをエクセルに変換し、平均移動量と平均速度を算出した。
− 免疫蛍光検査：別法として、３０分の処理と引っかきの後、更に４時間、インキュベーター中でインキュベートを行い、細胞の形態を免疫蛍光検査法で研究することができる。
− 固定と浸透化：培地を培養穴から吸出し、洗浄し、次いで固定した。細胞を室温で、２ｘ１０分間インキュベートする。固定用緩衝液を除去し、浸透化緩衝液で置き換える。プレートを室温で１時間又は４℃で１６時間インキュベートする。
− 標識化：固定し、浸透化した細胞を、浸透化緩衝液中に希釈した抗チューブリン一次抗体と共に１時間インキュベートする。続いて、浸透化緩衝液で５回洗浄する。カバースリップを、ヤギ抗ラットＦＩＴＣ二次抗体及び線維状アクチンに結合するファロイジン−ＴＲＩＴＣと共に、３０分〜１時間、インキュベートする。続いて、浸透化緩衝液で５回洗浄する。次いで、カバースリップを、Immuno-Fluoreマウント溶液で顕微鏡スライド上に固定する。マウント物を３７℃で１時間乾燥させる。

ボイデンチャンバーでの移動アッセイ
悪性細胞の本質的な特徴は、移動して、宿主組織に侵入し、且つ転移を生じる能力である。腫瘍細胞の移動する能力に影響を与える一つの化合物の能力を評価するために、高度に侵入性の腫瘍細胞ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、内皮細胞ＨＭＥＣ１又は線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３を用いて、移動アッセイを行った。このアッセイは、Falcon HTS Fluoroblockインサートを用いて行った。ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；化学誘引物質として使用される）を含む培養培地をプレート穴に加え、ＦＢＳを有さず、０．１％ＢＳＡを有する培地中に再懸濁した２ｘ１０⁴〜７．５ｘ１０⁴細胞を各々のインサート穴に加えた。目的の化合物を上部及び下部チャンバーの双方中の培地に加えた。プレートを３７℃で１６時間インキュベートした。インキュベーションに続いて、培地を上部チャンバーから除去し、全インサートプレートを、０．１％ＢＳＡを含む培地中のCalcein-AM（登録商標）４μg／mlを含む第二の２４穴プレートに移した。プレートを３７℃で１時間インキュベートし、ハンクス緩衝生理食塩水（Hanks Buffered Saline、ＨＢＳＳ）ですすいだ。蛍光データを、４８５nmの励起波長（Ｅｘ）及び５１７nmの発光波長（Ｅｍ）で、Fluoroskan Ascent FL蛍光プレートリーダーを用いて収集した。マトリゲル層及び膜を通して通過したそれらの標識化細胞のみが検出された。データを、GraphPad Prismソフト（GraphPad Software, Inc.）を用いて解析し、ＩＭ50（細胞移動の５０％阻害が見られる用量）を算出した。

ｅ．細管形成アッセイ
内皮細胞管形成アッセイ又は管新生アッセイは、付着、移動及び管構造への分化等の血管形成プロセスの最終段階の数を正確に反映することが広く認められている、インビトロアッセイである。このモデルにおいて、内皮細胞は、再構築された基底膜成分（マトリゲル）の単層上で培養され、数時間で、毛細管様の構造を形成する。したがって、この系は、細胞外マトリックス上での内皮細胞形態形成の阻害をモニターすることによる、抗血管形成剤を迅速にスクリーニングための、有用で強力なツールである。

ＨＭＥＣ−１細胞系は、１５％ＦＢＳ、１０ng／ml組換えヒト上皮細胞成長因子（Invitrogen）及び１μg／mlヒドロコルチゾンを補足したＭＣＤＢ−１３１培地（Sigma）中で培養される。細胞を、７０〜８０％密集まで培養する。９６穴プレートは、マトリゲル（登録商標）基底膜マトリックス（Becton Dickinson）でコーティングした。２ｘ１０⁴ＨＭＥＣ−１細胞を、各々の穴に接種した。試験化合物又は対照化合物をＤＭＳＯ中で希釈し、コーティングしたプレートに加えた。プレートは、次いで、３７℃、５％ＣＯ₂雰囲気で６〜８時間インキュベートして、細管形成させた。その後、細胞を１．２５μg／mlのカルセインＡＭと共に、３７℃、５％ＣＯ₂で１５分間インキュベートした。各穴の写真を、蛍光顕微鏡及びデジタルカメラ（Nikon Coolpix 990）を用いて撮った。画像を、細管形成／崩壊を代表する２つのパラメーター、管の長さの合計及び接合の数の数量化を可能とする、AngioSysソフト（TCS Cellworks）を用いて解析した。データを、GraphPad Prismソフトを用いて解析し、ＩＴ₅₀（管新生の５０％阻害に導く用量）を算出した。

３．インビボアッセイ
インビボゼブラフィッシュ血管形成モデル：このアッセイは、血管形成に影響を与える小分子をスクリーニングする、生きた有効な全動物モデルである（Serbedzijaら、Angiogenesis, 1999）。この研究は、Phylonix Pharmaceutical, Cambridge, MA, USAに業務委託した。

薬物処理：ゼブラフィッシュの体節間脈管（ＩＳＶ）は、血管形成性の管として良く認められており、それらは顕微鏡を用いて、容易に観察される。２０hpf段階までに、主要な血管性脈管（背部大動脈及び尾部静脈）は発達している。受精後４８時間（hpf）までに、ＩＳＶは、背部大動脈及び尾部静脈から伸び出ることにより、形成された。したがって、２０hpfが出発点として使用され、４８hpfが薬物処理の終点として使用された。２０hpf段階のゼブラフィッシュ胚を、１穴あたり２０胚で、６穴プレート中、２８℃で２８時間、化合物溶液と共にインキュベートした。１％ＤＭＳＯ及び５μMフラボピリドールで処理した胚を、陰性及び陽性コントロールとして、それぞれ使用した。

顕微鏡検査：すべての光学顕微鏡検査は、デジタルスポットカメラ（Diagnostic Instruments Inc.）を備えたＺＥＩＳＳＳｔｅｍｉ２０００−Ｃ立体顕微鏡（Zeiss）を用いて行った。画像を、更に、Adobe Photoshop 7.0（Adobe）を用いて、更に処理し、解析した。

全マウントＥＡＰ染色：胚を、４％ＰＦＡ中、室温で２時間固定し、標準的手順に従って１００％エタノール中で脱水した。次いで、胚を、再水和し、ブロックし、ＮＢＴ／ＢＣＩＰで染色した。洗浄後、胚を顕微鏡検査により検討した。

抗血管形成効力の定量：抗血管形成効力を定量するために、５つの良く発達した尾孔の周囲に位置する主要なＩＳＶを選択し、形態計測的解析〔面積（ピクセル）Ｘ信号強度〕を、Adobe Photoshopを用いて行った。各条件毎に、１０個の胚を検査し、１０個の画像の平均値を、ＥＸＣＥＬソフトプログラム（Microsoft Corporation）を用いて算出した。阻害効力を算出するために、薬物処理された胚における５つのＩＳＶ中の信号（Ｓ）の平均値を、ＤＭＳＯコントロール胚におけるＳの平均値で割って、以下の式を用いて、％阻害として算出した。

４．毒性アッセイ
＊エームス試験スクリーニング
この研究の目的は、サルモネラ・チフィムリウム（Salmonella Typhimurium）（ＴＡ９８及びＴＡ１００株）における復帰突然変異を誘起する、試験物の潜在活性を評価することであった。細菌の復帰突然変異試験では、１個又は数個のＤＮＡ塩基対の置換、付加又は欠失により点変異を引き起こす物質を同定することができる。変異性物質は、非復帰物では不可能な、ヒスチジン制限培地中で生育してコロニーを形成できるようになる、ヒスチジン欠損株における復帰を誘起することができる。この試験は、ラット肝臓代謝系（Ｓ９ｍｉｘ）の存在下及び不在下に行われる。３つの公知の突然変異誘発物質が、試験系の感度をチェックするために使用される：アジ化ナトリウム、２−ニトロフルオレン及び２−アントラミン。

プレートあたりの投与レベルは、１０〜５０００μgであった。予備毒性試験が行われて、変異原性試験それ自体がその後に続く。

＊ラットにおけるインビボでの上昇及び繰り返し投与毒性研究のスクリーニングは、以下のスケジュールで、化合物あたり３匹のラットについて行った：
ａ．１日目〜３日目：１日あたり経口で１０mg／kg、
ｂ．４日目〜６日目：１日あたり経口で５０mg／kg、
ｃ．７日目〜９日目：１日あたり経口で３００mg／kg。

臨床的兆候、体重、食物消費、及び血液パラメーターを追跡調査した。

結果
１．インビトロアッセイ
ａ．アクチン細胞骨格に対する化合物の影響の研究
静止Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３細胞を用いる２セットの実験において、Ｒａｃは、化合物ＥＨＴ１８６４及びＥＨＴ９２４１で前処理したのち、インシュリン、ボンベシンで、あるいは浸透圧ショックにより誘起された。浸透圧ショック後に得られた結果を、図１に示す。毒性がでない用量のＥＨＴ１８６４及びＥＨＴ９２４１での静止Ｓｗｉｓｓ３Ｔ３細胞の前処理は、用量依存的に、浸透圧ショック後にＲａｃにより誘起される捲縮の形成を防止する。第一に、各細胞はより少ない捲縮を示し、これらの捲縮ではアクチンがより少ない（蛍光標識の減少）ことが観察された。第二に、捲縮を示す細胞の総数は、処理により減少した（左下のグラフ参照）。これらの結果は、捲縮形成がインシュリン及びボンベシンにより誘起される同様の実験により確認された（データは示されていない）。他の系（ＲＥＦ細胞）において、創傷後のラメリポジウム／捲縮形成の用量依存的阻害が、双方の化合物での処理で観察された。

結論として、ＥＨＴ１８６４及びＥＨＴ９２４１は、Ｒａｃにより制御される細胞骨格構造の形成に影響を与える。

ｂ．細胞生存性アッセイ（ＭＴＴ）
細胞生存性に対するそれらの影響を研究するために、４７を超える試験化合物と５つの対照化合物を、ＭＴＴで、数多くの細胞系において試験した。細胞生存性は、種々の処理期間ののち、且つ様々な条件で査定した：１０％（表１２、１４及び１５）又は０．５％（表１３、６日間処理）ウシ胎仔血清（ＦＢＳ）中、１６時間（表１５）、３日間（表１４）及び６日間（表１２）。化合物は、対照化合物ＣＡＩ及び２ＭＥのそれらと極めて匹敵する活性を示す。最良の化合物は、タキソールのそれより約１００倍低い活性を示す。ＳＵ−６６６８は、全ての細胞において、低い毒性を示した。

１０％ＦＢＳ中ＭＴＴ６日間（表１２；図２−Ａ）
化合物は、３種の腫瘍細胞系（ＨＣＴ１１６、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１及びＭＣＦ７）及び２種の非腫瘍細胞系（内皮細胞ＨＭＥＣ１及び線維芽細胞ＮＩＨ３Ｔ３）中で試験された。

ＨＣＴ１１６細胞（倍化時間約２４時間；０．３＜ＩＣ₅₀＜２００μM）において、２４個の化合物が、４μMより低いＩＣ₅₀を有した（各々のカテゴリーにおいて、全ての化合物は、それらの活性に従って、最高から最低へと仕分けされる）：
− ９個の化合物がＯＴＨＰ保護を示す：ＥＨＴ８８８３、ＥＨＴ５８８１、ＥＨＴ９３７６、ＥＨＴ１００６、ＥＨＴ６２７１、ＥＨＴ９１４０、ＥＨＴ６０６０、ＥＨＴ３７８８及びＥＨＴ１５９３、
− ９個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位にピペラジノ基を示す：ＥＨＴ５７４３、ＥＨＴ９３５８、ＥＨＴ０５６６、ＥＨＴ０７８５、ＥＨＴ３９８０、ＥＨＴ４４９５、ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ９２４１、
− ５個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位にモルホリノ基を示す：ＥＨＴ５４３０、ＥＨＴ２７２５、ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ２２７２及びＥＨＴ２２１８、
− １個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位にピペリジノ基を示す：ＥＨＴ９３１７、
− １個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位に塩素原子を示す：ＥＨＴ１４９４。

ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞（倍化時間３６〜４８時間；ＩＣ₅₀ ２．３μMから）において、９個の化合物が、９μMより低いＩＣ₅₀を有した：
− ピペラジノ誘導体：ＥＨＴ９３５８、ＥＨＴ８５６０、ＥＨＴ７３６５、ＥＨＴ９２４１、ＥＨＴ３６６４、ＥＨＴ０７８５及びＥＨＴ５７４３、
− モルホリノ誘導体：ＥＨＴ２２１８及びＥＨＴ１８６４。

ＨＭＥＣ１細胞（倍化時間４８〜７２時間；１．８＜ＩＣ₅₀＜２００μM）において、１４個の化合物が、１０μMより低いＩＣ₅₀を有した：
− ６個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位にＯＴＨＰ保護を示す：ＥＨＴ３７８８、ＥＨＴ８８８３、ＥＨＴ９３７６、ＥＨＴ６２７１、ＥＨＴ１００６及びＥＨＴ４７４５、
− ７個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位にピペラジノ基を示す：ＥＨＴ０５６６、ＥＨＴ８５６０、ＥＨＴ５７４３、ＥＨＴ９２４１、ＥＨＴ７３６５、ＥＨＴ０７８５及びＥＨＴ３６６４。化合物ＥＨＴ５７４３とＥＨＴ０７８５の活性のみ、ＨＭＥＣ１とＨＣＴ１１６細胞において、有意な相違がある（それぞれ、２０倍及び５倍の相違）。
− １個の化合物がコウジ酸部分のＲ₁位に塩素原子を示す：ＥＨＴ１４９４。

モルホリノ化合物ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ２２１８、ＥＨＴ２２７２、ＥＨＴ２７２５及びＥＨＴ５４３０は、ＨＣＴ１１６細胞に比べて、ＨＭＥＣ１細胞において有意に異なる活性を示す（５倍〜１３倍）。それらの化合物が、ＨＣＴ１１６細胞において最も活性である。反対に、ピペリジノ誘導体ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ９２４１は、試験した種々の細胞系に対して、より不均一な活性を示す。

このＭＴＴスクリーニングはまた、他の最適部分の定義を可能にした：
− 炭素数５個の非拘束性直鎖リンカー
− ７−トリフルオロメチル−キノリン−４−チオール環

２つの種類の化合物が、さらなる分析のために、留め置かれた：「非選択性」ピペラジノ誘導体ＥＨＴ８５６０とＥＨＴ９２４１及び「選択性」モルホリノ誘導体ＥＨＴ１８６４とＥＨＴ２７２５。

０．５％ＦＢＳ中ＭＴＴ６日間（表１３）
これらの実験は、アッセイの増殖成分を排除し、細胞生存性のみに対する化合物の効力をチェックするために行われた。７個の化合物のみが、これらの条件下にＭＴＴで、試験された。ＩＣ₅₀における大きな差異は、１０％と０．５％ＦＢＳ培養条件の間で観察されなかった。ほんの１〜２倍の差異が観察されたのみであり、化合物は細胞増殖にというよりはむしろ、おそらくは、細胞生き残りに作用することを示していた。

１０％ＦＢＳ中ＭＴＴ３日間（表１４；図２−Ｂ）
４個の化合物が、腫瘍性大腸細胞系（ＤＬＤ１とＨＣＴ１１６）、乳癌細胞系（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１とＭＣＦ７）において、３日間で、ＭＴＴで試験された。それらは、対照化合物５−フルオロウラシルの活性と非常に近い活性を有することが示された。６日のＭＴＴで観察されたように、ピペラジン誘導体は、モルホリノ誘導体よりも、試験された種々の細胞系に対して、より均一な活性を示す。

１０％ＦＢＳ中ＭＴＴ１６時間（表１５）
４個の化合物が、大腸腫瘍性（ＨＣＴ１１６）、乳腫瘍（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）、線維芽細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）及び肝細胞（腫瘍性ＨｅｐＧ２と１次肝細胞）において、１６時間で、ＭＴＴで試験された。興味深いことに、腫瘍性肝細胞と一次肝細胞から得られた応答の間に、大きな差異は観察されなかった。

ｃ．足場非依存性生育アッセイ
ＨＣＴ１１６細胞が足場非依存的に生育する能力に対する化合物の効力を研究するために、細胞を、種々の濃度の化合物の存在下に軟寒天中で生育させた。これらの実験は、１）クローンサイズに影響を及ぼすことにおける、それらの潜在能力に従って化合物をランク付けすること、及び２）それらの作用様式（細胞毒性と細胞抑止性）を査定すること、を可能とした。

ＥＨＴ９３７６、ＥＨＴ９０１４、ＥＨＴ３７８８及びＥＨＴ１５９３はすべて、マイクロモルの範囲で、足場から非依存的に生育するＨＣＴ１１６の能力に影響を与える。最高の効力を示した化合物は、ＥＨＴ９３７６であった。最低の効力を示した化合物は、ＥＨＴ１５９３であった。ＥＨＴ９３７６のＩＣ₅₀は、対照化合物ＣＡＩについて算出されたＩＣ₅₀（それぞれ、５．４±１．２μM対５．８±１．０μM）と非常に類似している（図３−Ｂ）。

発明者らの実験において、ＣＡＩは、クローンの数に比べて、クローンサイズに優先的に影響を与えることが示された（図３−Ａ）。このことは、ＣＡＩが細胞抑止性化合物として記述されている文献と符合する（Wasilenkoら、1996）。同様に、試験された本発明の最良の化合物は、クローンサイズに優先的に影響を与える。

結論として、本発明に記載された化合物は、細胞抑止性の作用様式を有する。

ｄ．移動アッセイ
細胞移動に影響を与える、化合物の能力を直接的に査定するために、二つの手法が使用された：創傷治癒及びボイデンチャンバー移動アッセイ。化合物は、抗移動性化合物として文献中で記述されている、対照化合物ＣＡＩ（Kohn ECら、1990; Rust WLら、2000）及び他の対照化合物２ＭＥとＳＵ−６６６８と並行して、ボイデン移動アッセイで試験された。結果を図５に示す。

創傷治癒アッセイ：全ての実験は、毒性の出ない用量で試験された。経時的顕微鏡検査を、８時間行った（５分毎に、写真１枚）。得られた動画は、解析され、細胞の速度とそれらが覆われた全移動量を査定するために、細胞は写真から写真へと追跡された。定量は、図４−Ａのグラフ中に示す。この実験から、１０μM ＥＨＴ９２４１は、ＲＥＦ細胞の移動を３６％減少させ、３０μM ＥＨＴ１８６４は、約４８％の移動（速度及び覆われた全移動量）を減少させることが示される。

ボイデンチャンバー中での移動アッセイ：種々の細胞系が、このアッセイに使用された：腫瘍性（ＭＤＡ−ＭＢ−２３１）、内皮細胞（ＨＭＥＣ１）及び線維芽細胞（ＮＩＨ３Ｔ３）細胞系。１１個の試験化合物と２個の対照化合物について行われ、化学誘引物質としてＦＢＳを用いた実験で得られた結果が、図４−Ｂにまとめられている。これらの実験は、試験された大部分の化合物が、低いマイクロモル範囲で、種々の細胞系の移動に影響を与えることを示している。

ＨＭＥＣ１細胞においては、最高の活性を示す化合物は、ＯＴＨＰ化合物ＥＨＴ３７８８及びＥＨＴ９３７６である。それらには、モルホリノ誘導体ＥＨＴ１８６４（ＩＣ₅₀＝７．８±１．７μM）、及びピペラジノ誘導体ＥＨＴ９２４１（ＩＣ₅₀＝９．１±１．４μM）、及びＥＨＴ８５６０（ＩＣ₅₀＝９．５±０．３μM）が続く。

ＮＩＨ３Ｔ３細胞においては、最良化合物は、ピペラジノ誘導体ＥＨＴ９２４１（ＩＣ₅₀＝４．７±０．６μM）、ＥＨＴ７３６５（ＩＣ₅₀＝６．１±１．１μM）及びＥＨＴ８５６０（ＩＣ₅₀＝１０±０．６μM）であり、モルホリノ誘導体ＥＨＴ７１６８（ＩＣ₅₀＝１６．４±３．４μM）及びＥＨＴ１８６４（ＩＣ₅₀＝２０．４±３．５μM）が続く。

ＭＤＡ−ＭＢ−２３１細胞においては、最良化合物は、ＥＨＴ９２４１（ＩＣ₅₀＝２．７±１．０μM）、ＥＨＴ７３６５（ＩＣ₅₀＝３．９±０．８μM）及びＥＨＴ８５６０（ＩＣ₅₀＝４．５±２．４μM）であり、モルホリノ誘導体ＥＨＴ１８６４（ＩＣ₅₀＝５．１±１．９μM）が続く。

１６時間でのＭＴＴデータ（表１５）は、試験された細胞系に応じて、ＩＣ₅₀が３〜２５倍高いことを示しているので、観察された効力は、化合物の毒性のみに起因するとすることはできない。

結論として、細胞移動の阻害に対して、ピペラジノ誘導体は、モルホリノ誘導体よりも、より効力があると思われる。また、最良の化合物は、強力な抗転移性化合物として文献中に記載されているＣＡＩよりも低い濃度で移動に影響を及ぼす（Wuら、Clin. Cancer Res., 1997; Wasilenkoら、Int. J. Cancer, 1996; Kohn & Liotta, J. Natl. Cancer Instit., 1990; Rustら、Anal. Biochem., 2000）。

本発明に係る化合物は、このように、強力な抗移動性化合物であり、このことは、Ｒａｃで制御されたラメリポジウム及び捲縮の形成を阻害するそれらの能力により、説明することができる。

ｅ．細管形成アッセイ
上記のように、本発明の化合物及びＣＡＩは、非常に近い抗癌特性（細胞増殖、移動、足場非依存性細胞生育）を有する。興味深いことに、ＣＡＩは、抗癌性及び抗血管形成性化合物であるとして、文献中に記述されている（Bauer KSら、2000; Krueger EA & Figg WD, 2001）。本化合物が同様に、抗血管形成特性をＣＡＩと共有するか否かを見るために、ＨＭＥＣ１細胞上での細管新生アッセイを、３３個の試験化合物を用いて行った。

マトリゲル上にプレート化すると、ＨＭＥＣ１細胞は、培地と溶媒ＤＭＳＯのみの存在下に管様の構造を形成する。対照的に、培養培地中に化合物を添加すると、マトリゲル誘起ネットワーク形成の用量依存的阻害が引き起こされた。管の全長及び接合の数の双方（細管形成プロセスの代表的なものである２つのパラメーター）に対するＩＴ₅₀は、GraphPad Prismを用いて全ての試験化合物について算出された。接合の数に対して得られたＩＴ₅₀を示すグラフは、図５に示されている。管の全長に対して得られたＩＴ₅₀は、非常に良く似ていた（データは示されていない）。

５個の最も活性な化合物を以下に示した（最活性からより低活性へ）。

ＥＨＴ８５６０（ＩＣ₅₀＝１７．０±３．６μM）、ＥＨＴ９１４０、ＥＨＴ６０６０、ＥＨＴ３７８８、ＥＨＴ５８８１、ＥＨＴ９２４１（ＩＣ₅₀＝２６．０±８．７μM）。これらの化合物は、対照化合物ＣＡＩより、５〜８倍活性が高い。最も活性の高い化合物は、ピペラジノ誘導体ＥＨＴ８５６０である。最も活性なモルホリノ誘導体は、ＥＨＴ２２１８（ＩＣ₅₀＝３０．８μM）であり、ＣＡＩより４倍活性が高いＥＨＴ１８６４（ＩＣ₅₀＝３４．９±３．５μM）がこれに続く。

最良の化合物は、２ＭＥと同一の範囲で活性であるが、それらは、細管形成プロセスに異なる形で影響を与えるようである。２ＭＥは、処理中に細胞の完全性に影響を与えるようであり、試験化合物は、単に、細管の形成に影響を及ぼす。アッセイにおいて、ＳＵ−６６６８は、低活性であることが示され、これは、アッセイがＶＥＧＦ及びＦＧＦのない条件で行われたという事実により説明することができる。

内皮細胞は単に数時間処理されたのみであり、化合物はＭＴＴを通してＨＭＥＣ１細胞生存性に対して中程度の効力を有するのみであった（表１２〜１５参照）ことから、細管形成の阻害が、化合物の毒性に起因するとすることはできない。

ｆ．インビトロ薬理学の結論
ＴＨＰ化合物は、これらの化合物が生体利用性に乏しく、インビボで極めて不安定であると考えられるため、完全な特性決定として保持されなかった。最も興味深い薬理学的及び生体利用性プロフィールを示した化合物は、ピペラジン誘導体（ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ９２４１；「非選択的」化合物）、ピペラジン誘導体ＥＨＴ５７４３（ＨＣＴ１１６細胞において、非常に「選択的」で、最高活性の化合物）及びモルホリン化合物ＥＨＴ１８６４であった。

これらの結果は、したがって、本発明の化合物、特にピペラジン誘導体ＥＨＴ５７４３、ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ９２４１並びにモルホリン誘導体ＥＨＴ１８６４の、腫瘍細胞生存性、移動に影響を与え、且つ細管（管様構造）の形成を阻害する能力を例証する。

２．インビボゼブラフィッシュアッセイ
試験された化合物は、ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ９２４１、２ＭＥ及びＣＡＩである。５μMフラボピリドールを内部陽性対照（internal positive control）として使用した。画像解析ソフトを用いた、処理された及び非処理のゼブラフィッシュ胚の形態計測学的解析は、種々の化合物による体節間脈管形成の阻害の定量を可能とした（図６参照）。ＥＨＴ１８６４は、ゼブラフィッシュ胚において、用量依存的な抗血管形成活性を有し、この活性は、公知の抗血管形成性化合物２ＭＥ及びフラボピリドールの活性に匹敵する。興味深いことに、ＥＨＴ１８６４は、対照化合物フラボピリドール及びＳＵ−５４１６（示されていない）よりも、非常に低毒性であるようである。ＥＨＴ９２４１は抗血管形成活性を示すが（４０％の最大阻害）、ＥＨＴ１８６４（最大阻害７７％）よりも、かなり低活性である。栄養培地中で化合物が析出するため、ＣＡＩについて得られたデータは、確定的なものではない。

３．毒性アッセイ
ａ．エームス試験のスクリーニング
４個の化合物、すなわち、ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ２７２５、ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ９２４１を、エームス試験のスクリーニングで試験した。これらの試験条件下で、それらの試験物は、サルモネラ・チフィムリウムＴＡ９８及びＴＡ１００株において、Ｓ９ｍｉｘが存在してもしなくても、全く突然変異原性を示さなかった。

ｂ．毒性試験のスクリーニング
３個の化合物、すなわち、ＥＨＴ１８６４、ＥＨＴ８５６０及びＥＨＴ９２４１を、試験した。全体として、３個の化合物は、３００mg／kg／日までは、耐性はかなり良好であった。研究中に死亡は発生しなかった。３個の化合物について、最小の臨床的兆候が観察された。平均体重損失は、全ての群において、３００mg／kg／日で指摘された。いくつかの限定的な生物学的な変化（血液学及び血液生化学）が指摘された。

アクチン細胞骨格への化合物効果の検討を示す。６日及び３日処理後の、最良化合物のＭＴＴアッセイの結果を示す。軟寒天中での足場非依存性生育アッセイ；クローンサイズ及び数に対して得られた典型的な用量反応曲線を示す。軟寒天中での足場非依存性生育アッセイ；各化合物について算出されたＩＣ５０を示す棒グラフである。創傷治癒アッセイの結果を示す。ボイデンチャンバー移動アッセイの結果を示す。管新生アッセイ（接合の数）の結果を示す。インビボゼブラフィッシュ血管形成アッセイの結果；用量反応曲線を示す。インビボゼブラフィッシュ血管形成アッセイの結果；体節間管形成の５０％及び最大阻害を示す。

Claims

２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−ピラン−４−オン（EHT 3788）
５−〔５−（６−フルオロ−２−メチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1593）
５−〔５−（６−フルオロ−２−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1074）
５−〔５−（７−プロピル−キノリン−８−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5810）
５−〔５−（ベンゾ〔ｂ〕チオフェン−７−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6060）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9376）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔４−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ブトキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4745）
２−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシメチル）−５−〔６−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ヘキシルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6271）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン塩酸塩（EHT 1302）
２−ヒドロキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5909）
２−メトキシメトキシメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2168）
２−クロロメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1494）
２−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7365）
２−モルホリン−４−イルメチル−５−〔５−（７−トリフルオロメチル−キノリン−４−イルスルファニル）−ペンチルオキシ〕−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7168）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（フルオロメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8817）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9317）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（チオモルホリノ−メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5430）
２−（（ジエチルアミノ）メチル）−５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 7370）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3726）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4063）
４−〔５−（６−モルホリン−４−イルメチル−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8935）
５−（５−（キナゾリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピロリジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5317）
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5847）
５−（５−（８−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 4687）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3411）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0079）
５−（５−（６−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1426）
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 8791）
４−〔５−（６−（４−メチル−ピペラジン−１−イルメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−ペンチルオキシ〕−７−トリフルオロメチル−キノリン−３−カルボン酸エチルエステル（EHT 2725）
５−（（４−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 2218）
５−（（２−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 9069）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−アセチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 3980）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジエチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 5743）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−（ピバロイル）ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0785）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ，Ｎ−ジ−イロプロピルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 0566）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルスルホニルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8366）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−ｔｅｒｔ−ブチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 3664）
４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）−Ｎ−メチルピペラジン−１−カルボキサミド（EHT 4495）
５−（６−（モルホリノメチル）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−３−イルオキシ）−Ｎ−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イル）ペンタンアミド（EHT 6037）
５−（２−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0371）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 1864）
５−（（３−（（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）メチル）フェニル）メトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン二塩酸塩（EHT 0434）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 9358）
ｔｅｒｔ−ブチル４−（（５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−４−オキソ−４Ｈ−ピラン−２−イル）メチル）ピペラジン−１−カルボキシラート（EHT 2580）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（４−メチルピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 9241）
５−（５−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン三塩酸塩（EHT 8560）
５−（５−（７−クロロキノリン−４−イルオキシ）ペンチルオキシ）−２−（（ピペラジン−１−イル）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 0872）
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）エトキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 5575）
５−（８−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）オクチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 1006）
５−（７−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルチオ）ヘプチルオキシ）−２−（（テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）メチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 8883）
５−（２−（７−（トリフルオロメチル）キノリン−４−イルオキシ）エトキシ）−２−（モルホリノメチル）−４Ｈ−ピラン−４−オン（EHT 6892）
よりなる群から選択される、化合物。
ＥＨＴ９２４１、その遊離塩基ＥＨＴ７３６５、ＥＨＴ８５６０、ＥＨＴ１８６４、その遊離塩基ＥＨＴ７１６８又はＥＨＴ５７４３である、請求項１に記載の化合物。
請求項１〜２のいずれか一項に記載の少なくとも一つの化合物及び薬学的に許容しうるビヒクル又は支持体を含む、医薬組成物。
異常細胞増殖に伴う疾患又は無秩序な血管形成に伴う疾患の処置に対する、請求項３に記載の組成物。
癌、再狭窄、関節炎、糖尿病、眼性疾患、網膜症の処置に対する、請求項４に記載の組成物。
固形腫瘍又はリンパ腫の処置に対する、請求項３〜５のうちの一項に記載の組成物。
癌が、前立腺癌、卵巣癌、膵臓癌、肺癌、乳癌、肝臓癌、頭部及び頚部癌、大腸癌、膀胱癌、非ホジキンリンパ腫癌、白血病及び黒色腫より選択されるものである、請求項５に記載の組成物。
癌細胞増殖を減少させるための、請求項３に記載の組成物。
対象者における転移性癌を処置するための、請求項３に記載の組成物。
糖尿病性網膜症、網膜変性症、又は加齢性黄斑変性症（ＡＲＭＤ）を処置するための、請求項３に記載の組成物。
関節炎を処置するための、請求項３に記載の組成物。
白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性骨髄性白血病、急性骨髄性白血病を処置するための、請求項３に記載の組成物。