JP4502317B2 - 未分化細胞を選別する方法およびその利用 - Google Patents
未分化細胞を選別する方法およびその利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4502317B2 JP4502317B2 JP2004093665A JP2004093665A JP4502317B2 JP 4502317 B2 JP4502317 B2 JP 4502317B2 JP 2004093665 A JP2004093665 A JP 2004093665A JP 2004093665 A JP2004093665 A JP 2004093665A JP 4502317 B2 JP4502317 B2 JP 4502317B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- mouse
- pecam
- ssea
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 217
- 108010069381 Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 78
- 102000037602 Platelet Endothelial Cell Adhesion Molecule-1 Human genes 0.000 claims description 78
- LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N (2s,4s,5r,6r)-5-acetamido-2-{[(2s,3r,4s,5s,6r)-2-{[(2r,3r,4r,5r)-5-acetamido-1,2-dihydroxy-6-oxo-4-{[(2s,3s,4r,5s,6s)-3,4,5-trihydroxy-6-methyloxan-2-yl]oxy}hexan-3-yl]oxy}-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy}-4-hydroxy-6-[(1r,2r)-1,2,3-trihydrox Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@H]([C@@H](NC(C)=O)C=O)[C@@H]([C@H](O)CO)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@]2(O[C@H]([C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)C2)[C@H](O)[C@H](O)CO)C(O)=O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 LAQPKDLYOBZWBT-NYLDSJSYSA-N 0.000 claims description 54
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims description 45
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 43
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 7
- 210000004340 zona pellucida Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims 2
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims 2
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 claims 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 32
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 23
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 15
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 14
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 101150086694 SLC22A3 gene Proteins 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 210000003981 ectoderm Anatomy 0.000 description 9
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 8
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 8
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 101710160107 Outer membrane protein A Proteins 0.000 description 6
- 210000001900 endoderm Anatomy 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 5-bromo-4-chloro-3-indolyl beta-D-galactoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C(Cl)=C12 OPIFSICVWOWJMJ-AEOCFKNESA-N 0.000 description 5
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 5
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 5
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 5
- 101710150336 Protein Rex Proteins 0.000 description 4
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 description 4
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 4
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 4
- 238000012137 double-staining Methods 0.000 description 4
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001654 germ layer Anatomy 0.000 description 3
- 101150000808 hand1 gene Proteins 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 3
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 102000005606 Activins Human genes 0.000 description 2
- 108010059616 Activins Proteins 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 101150003028 Hprt1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010043276 Teratoma Diseases 0.000 description 2
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 2
- 108010076089 accutase Proteins 0.000 description 2
- 239000000488 activin Substances 0.000 description 2
- 230000004931 aggregating effect Effects 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 108700037326 eHAND helix-loop-helix Proteins 0.000 description 2
- 210000002242 embryoid body Anatomy 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 101150003286 gata4 gene Proteins 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 210000003716 mesoderm Anatomy 0.000 description 2
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- PYHRZPFZZDCOPH-QXGOIDDHSA-N (S)-amphetamine sulfate Chemical compound [H+].[H+].[O-]S([O-])(=O)=O.C[C@H](N)CC1=CC=CC=C1.C[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 PYHRZPFZZDCOPH-QXGOIDDHSA-N 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- -1 Brachyury Proteins 0.000 description 1
- 238000011749 CBA mouse Methods 0.000 description 1
- 102000004266 Collagen Type IV Human genes 0.000 description 1
- 108010042086 Collagen Type IV Proteins 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 108010000912 Egg Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000002322 Egg Proteins Human genes 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 101710126211 POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 1
- 101710187830 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Proteins 0.000 description 1
- 102100033733 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 1B Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004952 blastocoel Anatomy 0.000 description 1
- 210000004703 blastocyst inner cell mass Anatomy 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 101150067309 bmp4 gene Proteins 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 230000021164 cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004681 ovum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 1
- 230000009278 visceral effect Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
(1) 未分化細胞を細胞表面抗原に対する抗体により染色し、その染色の有無により該未分化細胞を選別する、未分化細胞の選別方法。
(2) 細胞表面抗原がPECAM-1、SSEA-1、SSEA-3およびSSEA-4からなる群より選択される、(1)に記載の方法。
(3) 未分化細胞が哺乳動物由来の胚性幹細胞(ES細胞)または生殖幹細胞(EG細胞)である、(1)に記載の方法。
(4) 未分化細胞が遺伝子組換体である、(1)に記載の方法。
(5) PECAM-1、SSEA-1、SSEA-3およびSSEA-4からなる群より選択される細胞表面抗原のうち、少なくともPECAM-1が陽性の未分化細胞を分取する、(1)に記載の方法。
(6) PECAM-1およびSSEA-1が陽性の未分化細胞を分取する、(5)に記載の方法。
(7) PECAM-1、SSEA-3およびSSEA-4が陽性の未分化細胞を分取する、(5)に記載の方法。
(8) (5)から(7)のいずれかに記載の方法により分取された未分化細胞。
(9) (8)に記載の未分化細胞の、受精胚への注入または受精胚との凝集により構築されるキメラ胚。
(10) (8)に記載の未分化細胞の、染色体を除去した未受精胚への注入または該未受精胚との融合により構築される核移植胚。
(11) (8)に記載の未分化細胞を、体外培養あるいは生体内移植により分化誘導することにより構築される分化組織複合体。
(12) (10)に記載の核移植胚が移植された仮腹動物。
(13) (12)に記載の仮腹動物から取得される胎子、産子またはそれらの子孫。
ES細胞(ROSA26xCBAF1系マウス胚盤胞由来)とEG(TM1)細胞はフィーダー細胞(STO)上で培養し、培地には20%KSR添加ES培地を用いた。EC(F9)細胞はゼラチンコートディッシュ上で2-ME、NEAA添加高グルコースDME培地で培養した。細胞をAccutase (Innovative Cell Technologies)で分散し、PE標識抗PECAM-1抗体(40ng/106 cells, Pharmingen)および抗SSEA-1抗体(200ng/106 cells, Kyowa Medex)で染色した。FITC標識2次抗体(抗マウスIgM, 100ng/106 cells, Pharmingen)で染色後、フローサイトメトリーによる解析を行った。
ソーティングした細胞より全RNAを精製し、DNase処理後、常法によりcDNAを合成した。定量的PCRにはLightCycler(Roche社)を用いた。最初に増幅が認められたサイクル数をもとに、PECAM-1+SSEA-1-の値を100とし、Hprtの値で補正した相対値を示した。これにより、PECAM-1-SSEA-1-、PECAM-1+SSEA-1-およびPECAM-1+SSEA-1+の各ポピュレーション間で、分化を制御・反映する遺伝子の発現に差があるかを調べた(図2)。
ZHBTc4は20%FCS添加ES培地を用い、ゼラチンコートディッシュで常法に従って培養した。Dox(1mg/ml)を添加後、12時間おきに48時間後まで細胞を経時的に回収し、フローサイトメトリーによってPECAM-1の発現量を調べた。さらに全RNAを採取し、定量的RT-PCRによって遺伝子発現の経時変化を調べた。誘導前の発現量を100とし、Hprtで補正した値を示した。フローサイトメトリー及び定量的RT-PCRの条件は実施例1および2と同様である。
ホスト胚にはICRマウスの8細胞期胚 (2.5d.p.c.)を用いた。注入後、10%FCS添加M16培地で培養し、18あるいは36時間後に0.2% NP-40,0.1% glutaraldehyde-PBSで固定してX-gal染色に供した。一部の胚はレシピエントマウス(ICR)の子宮に移植し、4日後(6.0-7.0d.p.c.)に胚を回収してx-gal染色を行った(ES細胞注入後、36時間目の胚のX-gal染色像を図4に示す)。
6.0-7.0日胚におけるES由来細胞の寄与率および寄与部位を調べた。その結果、PECAM-1+SSEA-1+の細胞は、β-gal陽性細胞が検出されたすべての胚(16.7%)において原始外胚葉への分化が認められ、そのほとんどを占有していた(iv,v)。一方、PECAM-1-/+SSEA-1-の細胞はβ-gal陽性となる胚が少なく、発生が進む過程で細胞が脱落している可能性が示唆された。原始外胚葉に分化した1例でも占有率が低く、また、臓側内胚葉(viceral endoderm)や壁側内胚葉(pariental endoderm)など、原始外胚葉以外の組織への分化が認められた。6.0および7.0日マウス胚の組織の模式図を図5に、移植後4日目に回収した胚のX-gal染色像を図6に、β-gal陽性細胞の出現頻度を表2に示す。
ES細胞の応用を考える上で、キメラ個体の形成効率の向上は大きなメリットとなる。そこで実際に分画濃縮したPECAM-1+SSEA-1+細胞を用いてキメラ個体を作出し、その効率を調べた。
Claims (12)
- 以下の工程を含む、マウスのキメラ胚を製造する方法:
(a)PECAM-1 + 及びSSEA-1 + のES細胞、PECAM-1 + 及びSSEA-1 − のES細胞、並びにPECAM-1 − 及びSSEA-1 − のES細胞を含むマウスES細胞の集団を得る工程;
(b)工程(a)のES細胞の集団を選別して、PECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞の分画を得る工程;
(c)工程(b)のPECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞を、マウスの胚に導入し、該胚を発育させる工程;及び
(d)工程(c)の発育した胚からキメラ胚を選択する工程。 - 工程(c)におけるPECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞のマウスの胚への導入が、該ES細胞のマウスの胚への注入による、請求項1に記載の製造方法。
- 工程(c)におけるPECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞のマウスの胚への導入が、該ES細胞と透明帯を除去したマウスの胚との凝集による、請求項1に記載の製造方法。
- マウスES細胞が、C57BL/6マウス由来である請求項1乃至3のいずれか一項に記載の製造方法。
- マウスES細胞が、TT2株である請求項1乃至4のいずれか一項に記載の製造方法。
- マウスの胚が、ICRマウス由来の胚である請求項1乃至5のいずれか一項に記載の製造方法。
- 以下の工程を含む、キメラマウスを製造する方法:
(a)PECAM-1 + 及びSSEA-1 + のES細胞、PECAM-1 + 及びSSEA-1 − のES細胞、並びにPECAM-1 − 及びSSEA-1 − のES細胞を含むマウスES細胞の集団を得る工程;
(b)工程(a)のES細胞の集団を選別して、PECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞の分画を得る工程;
(c)工程(b)のPECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞を、マウスの胚に導入し、該胚を発育させる工程;
(d)工程(c)の発育した胚を、仮腹マウスの子宮に移植する工程;及び
(e)仮腹マウスからの産子からキメラマウスを選択する工程。 - 工程(c)におけるPECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞のマウスの胚への導入が、該ES細胞のマウスの胚への注入による、請求項7に記載の製造方法。
- 工程(c)におけるPECAM-1 + 及びSSEA-1 + のマウスES細胞のマウスの胚への導入が、該ES細胞と透明帯を除去したマウスの胚との凝集による、請求項7に記載の製造方法。
- マウスES細胞が、C57BL/6マウス由来である請求項7乃至9のいずれか一項に記載の製造方法。
- マウスES細胞が、TT2株である請求項7乃至10のいずれか一項に記載の製造方法。
- マウスの胚が、ICRマウス由来の胚である請求項7乃至11のいずれか一項に記載の製造方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2004093665A JP4502317B2 (ja) | 2003-03-28 | 2004-03-26 | 未分化細胞を選別する方法およびその利用 |
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2003092465 | 2003-03-28 | ||
JP2004093665A JP4502317B2 (ja) | 2003-03-28 | 2004-03-26 | 未分化細胞を選別する方法およびその利用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004313184A JP2004313184A (ja) | 2004-11-11 |
JP4502317B2 true JP4502317B2 (ja) | 2010-07-14 |
Family
ID=33478552
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004093665A Expired - Fee Related JP4502317B2 (ja) | 2003-03-28 | 2004-03-26 | 未分化細胞を選別する方法およびその利用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4502317B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007116836A1 (ja) * | 2006-04-03 | 2007-10-18 | Stem Cell Sciences Kk | 前腸細胞の検出方法及び分離方法 |
KR101408936B1 (ko) * | 2012-01-31 | 2014-06-19 | 중앙대학교 산학협력단 | 돼지의 미분화 정원줄기세포의 표면 마커 |
US11293870B2 (en) | 2013-03-29 | 2022-04-05 | Mie University | Vital stain |
CN106460028B (zh) | 2014-05-01 | 2020-03-10 | 株式会社岛津制作所 | 细胞的分化状态的评价方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5843780A (en) * | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
-
2004
- 2004-03-26 JP JP2004093665A patent/JP4502317B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5843780A (en) * | 1995-01-20 | 1998-12-01 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Primate embryonic stem cells |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2004313184A (ja) | 2004-11-11 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Das et al. | Generation of human endothelium in pig embryos deficient in ETV2 | |
Le Bin et al. | Oct4 is required for lineage priming in the developing inner cell mass of the mouse blastocyst | |
JP4862119B2 (ja) | ラット胚性幹細胞 | |
JP5807862B2 (ja) | ラット胚性幹細胞を用いたキメララットの作製法 | |
US11844336B2 (en) | Method for producing chimeric animal | |
JP2002536012A (ja) | 鳥類の多能性胚性生殖細胞株 | |
JP2020043864A (ja) | 幹細胞を用いた異種間胚胞キメラ動物の作製法 | |
Sukoyan et al. | Establishment of new murine embryonic stem cell lines for the generation of mouse models of human genetic diseases | |
EP1779724A1 (en) | Construction of chimera using es cells | |
JP4502317B2 (ja) | 未分化細胞を選別する方法およびその利用 | |
WO2004094627A1 (en) | Method for improving germline transmission efficiency of avian primordial germ cells | |
US11441125B2 (en) | Method for reestablishment of pluripotent stem cells | |
US20070292836A1 (en) | Methods for sorting undifferentiated cells and uses thereof | |
Heo et al. | Production of somatic chimera chicks by injection of bone marrow cells into recipient blastoderms | |
US20070204357A1 (en) | Process for producing normal parenchymal cells, tissues or organs by bioincubator | |
WO2015152146A1 (ja) | 1倍体胚性幹細胞の培養方法 | |
JP2009159878A (ja) | 非ヒトes動物の新規作成方法 | |
Geens | Strategies for fertility preservation and restoration in the male | |
Soszyńska et al. | Exposure of chimaeric embryos to exogenous FGF4 leads to the production of pure ESC-derived mice | |
Maatman et al. | Aggregation of embryos and embryonic stem cells | |
WO2005040361A1 (ja) | 幹細胞の簡易調製法およびそれに使用するフィーダー細胞 | |
Hall et al. | Nuclear transfer and its applications in regenerative medicine | |
Meek | Experimental approaches to establish rat embryonic stem cells |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070123 |
|
RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20080107 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100127 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100324 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100414 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100416 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130430 Year of fee payment: 3 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |