JP4499414B2 - 免疫系に関する疾病を治療するためのcrmpファミリーのタンパク質の使用 - Google Patents
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Description
TOAD−64(Minturnなど., 1995, J Neurosci 15:6757−6766)、DRP (ジヒドロピリミジナーゼ関連タンパク質, Hamajima など, 1996, Gene 180:157-163), C-22 (Quach など, 1997, Mol Brain Res. 46:329−332) 又はULIP (Unc-33-様タンパク質, Byk など, 1998, Eur J Biochem 254: 14-24, 及び 国際特許出願 WO 98/37192号),としても知られているCRMPは、これまでは神経系に特有であるものと認識されてきた、細胞内シグナル化分子である。 これらのタンパク質は特に神経単位の発達と軸索の成長の制御に関与していると説明されてきた。
このファミリーのある一部のタンパク質は、ヒト神経変性障害に関連している。アルツハイマー病では神経原繊維プラークと共に高レベルのリン酸化されたCRMP2が観察される (Yoshida など, 1998, J Biol Chem 273: 9761-9768)。
神経変性障害である腫瘍随伴性神経学的症候群(PNSs) においては、患者はCRMPを認識する自己抗体(抗-CV2抗体)進行せしめる(Honnoratなど, 1999. Rur U Meurosci 11: 4226-4232)。
さらに、Yuなど,(Annals of Neurology , 2001, 49 (2):146-154 )は、肺ガン及び胸腺腫の症例における抗-CRMP5神経性自己抗体の存在を報告する。
最後に、以下の例で明らかになるように、それらのタンパク質の存在は、胚形成期から胸腺上皮細胞において特徴づけられた。この未発達の上皮細胞におけるCRMPの発見は、胸腺中の細胞内シグナル化タンパク質の希な例の一つである。
したがって、この新しいデータの全てが、リンパ球の増殖、死滅、成熟及び教育に結びつくシグナル化経路におけるCRMPの介在を証明しており、そして、従って、免疫応答の調節へのそれらの関与を証明している。
今までの、特に治療に関する限り、CRMPが中枢神経系(CNS)の病理の治療のための潜在的な標的物として考えられるだけであったことからは、これらの観察は予測できないものであった。
そのような場合、この発明は、免疫系の機能不全、及び特にT細胞の増殖についての病理の治療、予後及び/又は診断のための標的物としてのCRMPの使用に明確に関連する。
それは、より詳細に述べると、細胞のアポトーシス、増殖又は移動を調節するような方法で、1又はそれ以上のCRMPの発現又は活性を調節することに関連する。
CRMPの変性、例えばCRMP2のリン酸化反応の修飾は、超増殖又は細胞死という結果を招きやすい。
最後に、CRMPの過剰発現の制御は、HTLV−1感染又はFas突然変異の場合のように、“超”−増殖性にされたリンパ球の増殖を抑えるためには決定的であるように見える。この阻害は、さらに自己決定因子(自動活性成分)を認識するTリンパ球が関わる自己免疫工程、及びこれらのTリンパ球によるCNSの進入に関係するCNSへの攻撃(HTLV-1 に関連したTSP/HAM、麻疹に関連した脳炎、多発性硬化症)を改善するように見える。
病理学的プリオンタンパク質(PrP)の効果を阻止するためには、CRMP活性を阻止することも有効である。
別の実施態様として、本発明は、免疫系の機能不全に関連した病理の治療を目的とした医薬組成物を生成するために、前記タンパク質をヌクレオチド種による方法でコードする配列と特異的にハイブリダイズできるアンチセンス配列、及び前記タンパク質に対して向けられた抗体の使用に関する。
本発明は、さらに、免疫系の機能不全に関する病理の予防及び/又は治療の方法にも関し、ここで前記方法は、このタイプの治療を必要とする患者に、CRMPの発現又は活性を調節する治療上有効な量の剤を医薬的に許容できるキャリアーと共に投与することを含んで成る。
標的化された病理:
本発明によれば、治療又は診断の観点から、標的化された病理は免疫系の機能不全、及び、特に免疫系の細胞、より特定にはT細胞の増殖の機能不全に関するものである。
さらに正確に述べると、それらの病理は次のものを包含する:
−ウイルス感染、例えばヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、Epstein-Barrウイルス、HTLV-1(すなわち、HTLV-1レトロウイルスによる感染に関連した神経炎症性疾患、熱帯痙攣性不全対麻痺、又はHTLV-1-TSP/HAMに関連したミエロパシー)による感染、又はHIVウイルス(神経-AIDSとも呼ばれるAIDSウイルス)による感染。より一般には、Tリンパ球によりCNSへの浸潤をもたらすウイルス感染(麻疹に関係する脳炎、等)が標的化される。
−プリオン病。
Fas及びFasL突然変異に関連した免疫不全疾患及びリンパ球の活性と関連した神経炎症性疾患も標的化される。
自己免疫病理の例として、特にリウマチ性関節炎、重症筋無力症、エリテマトーデス、喘息、多発性硬化症、又は免疫認識及び細胞自体又は組織が標的物に関わり、そして1又はそれ以上の炎症応答をもたらすいずれかの免疫疾患を包含する。多発性硬化症は、自己免疫疾患の中でもっとも一般的なものである。
さらに一般には、本発明は、脱髄性神経炎症性疾患の治療又は診断にも関する。
本発明の好ましい実施態様によれば、患者はヒト、好ましくは成人であるが、しかし本発明の治療法はまた哺乳類又は脊椎動物にも適用できる。
本発明によれば、CRMPの活性又は発現を調節することが所望される。この調節は直接的又は間接的なものである。
CRMP活性の直接的調節は、タンパク質自体の活性及び/又は発現に直接作用することにより行われる調節である。CRMP活性を直接調節することができる剤はアゴニスト又はアンタゴニストのいずれかであり、そしてまた、それぞれ“直接的活性体”又は “間接的インヒビター”として示される。
特定の態様によれば、そのようなアゴニスト又はアンタゴニストは、シグナル化カスケードで通常CRMPの上流又は下流で直接作用する内因性分子とCRMPとの相互作用を調節できる。これは例えばCRMPセマフォリン、CRMP-プレキシン、 CRMP-キナーゼ又は他方では、CRMP−(細胞骨格のタンパク質)の相互作用であり得る。
2種の同種又は異種のCRMP間の相互作用の変化が、CRMP活性の調節のもう1つの例である。“同種”タンパク質間の相互作用とは、例えば少なくとも2つの同一のタイプのCRMP 、例えばCRMP2−CRMP2ホモ二量体間の相互作用を示す。
“異種”CRMP間の相互作用とは、例えば少なくとも2種の異なるCRMP 、例えばCRMP2−CRMP5ヘテロ二量体間の相互作用を示す。
本発明によれば、及び特にことわらない限り、用語“剤”又は“試験化合物”とは、1又はそれ以上の構造的に明らかにされている分子、例えばポリペプチド、オリゴヌクレオチド、又は内因性又は外因性の無機又は有機分子を示す。それらの試薬はまた、定義されていない化合物、例えば細胞又は組織の抽出物、又は動植物を起源とした生物学的液体のでもあり得る。
この種の化合物の例としては、例えばCRMPを細胞内シグナル化分子として使用する、特にCRMPの生物学的パートナーとして作用することが分子が包含される。
本発明ではCRMPは、特に、CRMP1、CRMP2、CRMP3、CRMP4及びCRMP5であると考える。
本発明は図8に示される、ヒトタンパク質CRMP1、CRMP2、CRMP3、CRMP4及びCRMP5のアミノ酸配列から選択された少なくとも一つのCRMPの使用に関する。
−タンパク質CRMP1は、特に、図8に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、及びまたポリペプチドフラグメント又は対応する誘導体のすべてを示し;
−タンパク質CRMP2は、特に、図8に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、及びまたポリペプチドフラグメント又は対応する誘導体のすべてを示し;
−タンパク質CRMP4は、特に、図8に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、及びまたポリペプチドフラグメント又は対応する誘導体のすべてを示し;
−タンパク質CRMP5は、特に、図8に示されるアミノ酸配列を含むタンパク質、及びまたポリペプチドフラグメント又は対応する誘導体のすべてを示す。
i)少なくとも70%、好ましくは80% さらに好ましくは90%以上、ヒトCRMP配列に類似する配列(図8に示されたような);
ii)相同核酸配列によりコードされる配列、すなわち緊縮ハイブリダイゼーション条件下で、ヒトCRMPをコードする配列とハイブリダイズする核酸配列、又はその相補的配列。
図5においては、リン酸化されたCRMP2の特定な形の存在が、対照のリンパ球(Jurkat)と比較して、HTLV1レトロウイルスにより感染された超増殖性Tリンパ球(C91PL)において、特異的抗体を用いてウエスタンブロットにより明らかにされている。
CRMPは、個々に又は混合物として、免疫系の機能不全の予防又は治療に使用され得る、医薬組成物内の医薬的に許容されるビークルにも関係する。
本発明はまた、タンパク質CRMP1、CRMP2、CRMP3、CRMP4及びCRMP5の一つをコードする単離された核酸の任意の配列、又はヌクレオチドフラグメント、又は遺伝コードの縮重か又は少なくとも一つのヌクレオチドの変異、欠失又は挿入により配列の一つから誘導された配列の使用にも関し、ここで前記誘導された配列とは、問題のタンパク質の生物活性と実質的に同一である生物活性有する。
i)ヒトCRMPをコードする配列と少なくとも70%、好ましくは80%、さらに好ましくは90%類似する配列(図8に示されたような)、又は
ii)緊縮ハイブリダイゼーション条件下で、ヒトCRMPをコードする配列又はその相補的配列とハイブリダイズする配列。
30以上の塩基からなる配列に関しては、Tmは次の関係式により定義される:Tm= 81.5+ 0.41 (% G + C) +16.6 Log (カチオン濃度) − 0.63 (% ホルムアミド) − (600/塩基の数) (Sambrook et al, 1989)。長さが30未満の塩基からなる配列に関しては、Tmは次の関係式により定義される:Tm = 4 (G + C) + 2 (A + T)。
前述の用語“類似する配列”とは、比較されたヌクレオチドの間で完全な類似性又は同一性の他に、類似性があると言える程度の完全ではなく類似性を言及する。核酸配列での類似性についてこの研究は、例えばプリン類とピリミジン類との間を区別する。
CRMPをコードする核酸は特に、医薬組成物内の医薬的に許容されるキャリアーとともに、遺伝子治療に使われる。
抗-CRMP1、CRMP2、CRMP3、CRMP4、及び/又は抗-CRMP5アンチセンス配列は、問題のCRMPの発現を遮断したい場合に好まれて使われる。
タンパク質CRMP1、CRMP2、CRMP3、CRMP4又はCRMP5をコードするヌクレオチド配列は、遺伝子治療に用いられる、メッセンジャーRNAを含む核酸配列と特異的にハイブリダイズできるアンチセンス配列を生成するために使われる。
それゆえに本発明はまた、上記の識別されたCRMPの生成を少なくとも部分的に阻害することのできるアンチセンス配列の用法にも言及する。
これらの配列は遺伝子治療に用いられる医薬組成物に配合され得る。
本発明はまた、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体、又はそれらのフラグメント、タンパク質CRMP1、CRMP2、CRMP3、CRMP4又はCRMP5から選択されたCRMPから得られたキメラ抗体又は免疫接合抗体、及びCRMPの生物活性ポリペプチドの誘導体又はCRMPのフラグメントの用法についても述べる。
その抗体は問題とするCRMPの発現を遮断するために使われる。
ポリクローナル抗体は、例に記載したプロトコールに従って得られる。しかしながら、それらの抗体は従来法を用いても得られる。
ポリクローナル抗体は、一般的な操作手順に従って、ポリペプチドに対して免疫化された動物の血清から得られる。
それらの抗体を生成するために使用される配列の例は、特に図8に示される配列を包含する:
- ペプチド3 (CMRP2) : 配列番号23
- ペプチド4 (CMRP2): 配列番号24
- ペプチド7 (CMRP4) : 配列番号25
- ペプチド8 (CRMP3) : 配列番号26
- ペプチド5 (CRMP5) :配列番号27
- ペプチド(CRMP2 C-末端) :配列番号28。
さらに、抗-ペプチド9(CRMP2 C-末端)はタンパク質CRMP2の一部分として特異的であり、それはある病理学環境で切断される。
抗-ペプチドはCRMP5に特有であり、したがって、CRMP5を他のCRMPから有利に識別することを可能としている。
抗体は、キメラ抗体、ヒト適応させた抗体、又はFabフラグメント及びF(ab’)2フラグメントであり得る。、それらはまた、免疫複合体又はラベルされた抗体の形で存在することができる。
抗-CRMP抗体は、免疫系の機能障害の予防又は治療に使用することができる医薬組成物における医薬的に許容されるキャリアーと共に使用され得る。それらはまた、診断のツールとしても使用され得る。
CRMPの作用を阻害することができそして、より特定には2つの前記タンパク質間の相互作用、又は前記タンパク質の一つとその天然の生物学的パートナーとの相互作用のいずれかを阻害することができる、合成又は自然に由来する化合物又はその混合物を用いて、シグナル化カスケードにおいて干渉することも考えられる。
本発明はまた、自己免疫疾患又は神経炎症性疾患、リンパ腫瘍又は白血病に罹患した患者から得た生物学的抽出物におけるCRMPの少なくとも1つの生物学的パートナーを検出し、同定し、そして/又は分析するための診断のツールとしてのCRMPの用法についても述べる。
おそらくPrPタンパク質によるリンパ球中のCRMPの発現の調節は、免疫系からの中枢神経系への病原情報の伝達のレベルで縮重過程において存在する。この発明の観点は以下の例4によって実証される。
CRMPの生物学的パートナーとして、PrPタンパク質はまた、CRMPの活性を調節するための有益な標的物でもある。
そのような場合、この発明のもう1つの観点は、少なくとも1つのCRMPを標的化することができ、そして/又は少なくとも1つのCRMP及び/又はCRMP二量体とPrPプリオンタンパク質との相互作用を阻害することができる、合成又は天然起源の活性成分、化合物又は化合物の混合物を含んで成る医薬組成物に関する。
本発明の観点においては、より特定には、化合物又は化合物の混合物は、問題の2種のタンパク質間の相互作用を遮断することによって作用する。いわゆるアプタマー化合物は、この目的に特に適している。それらは、高い親和性及び特異性で他の分子と結合する能力を持った分子である。このタイプの化合物の例としては、特にペプチドアプタマーが包含される。
CRMPに関する活性を刺激するか又は抑制する性質を持つ化合物は、試験される化合物がCRMPに接して置かれて、そして2種のタンパク質間の相互作用が決定されるスクリーニング法を用いて選択され得る。
本発明での医薬組成物の最適な投与方法、投与量及びガレヌス製剤形態は、患者にふさわしい治療を確立するときに、一般に考慮に入れられる年齢、患者の体重、患者の健康時の全身状態、治療に対する耐性、記録された副作用などのような診断基準に従って決定され得る。
好ましくは、本発明の医薬組成物は、全身投与することが好ましく、好ましくは静脈内に、筋肉内に、皮膚内に又は経口で投与することが好ましい。
一般に、約0.1μgから約1mgの範囲で異なる、治療上又は予防的に有効なCRMPの量が、ヒト成人に投与され得る。
本発明の核酸構造体が微粒子にも適用されるならば、前記微粒子は“遺伝子銃”技術によって、皮膚内に又は表皮内に注入される(WO 94/24263)。
本発明の核酸構造体は特に、非経口のような、任意の従来の投与経路によって投与されてよい。投与経路の選択は特に、選択された製剤に依存する。
本発明はまた、免疫系の機能不全に関する生体外での病理学の予後及び/又は診断についての方法に関し、ここで前記方法は免疫系の細胞中で明らかにされた事実により成り立っている。すなわち、対照のリンパ球に比べて患者から得られた(例えば、血液又は脳からの)、リンパ球、樹状細胞及び単球でのCRMPの異常発現又は異常局在が見られる事実である。
従って、Tリンパ球の機能不全と関係する任意の病理学は、上述したように、診断される。
− T白血病及び(T)リンパ腫(T);
−ウイルス感染、例えばヘルペスウィルス、麻疹ウィルス、Epstein-Barrウィルス、HTLV-1及びHIV;
−プリオン病;及び
−神経炎症性脱髄性疾患。
第1の態様においては、本発明は、免疫系の機能不全に関連した病理学、又は免疫系の機能不全に関連した病理学が発病するための素因の生体外での診断方法に関し、ここで前記方法は以下の段階から成る:
−前記転写体を増幅する段階;
−前記増幅された生成物を検出し、そして定量化する段階;
ここで、病理学の指標となっている正常対照と対比してCRMPの転写比率の調節は免疫系の機能不全又はそのような病理学を進行する機能不全の素因と関係している。
第2の態様においては、本発明は抗-CRMP抗体を用いることで、患者のリンパ球のサンプル中のCRMP発現の比率及び/又は活性を検出又は測定することによる、免疫系の機能不全に関連した病理又は免疫系の機能不全に関連した病理が発病するための素因の生体外での診断方法に関する。この方法は、CRMPと、1つの前記抗体又は複数の前記抗体との間で特定の免疫複合体を形成することができる条件下で、CRMPに対して向けられた少なくとも1つの抗体と前記サンプルとを接触させ、そして形成される特定の免疫複合体及び/又は抗体によるCRMPの活性の阻害を検出することから成る。
1.細胞及び細胞培養物:
SI細胞:Tリンパ球は、系統の確立されたリンパ球(IL-2に依存しない)又は成長にIL-2の存在を必要とする一次培養物中のリンパ球のいずれかである。これらのリンパ球は、リンパ球系統の場合ではいわゆるSVF(10%)、そしてTリンパ球の一次培養の場合ではAB型のヒト血清(SAB10%)とIL-2が補充された塩類培地が入った懸濁液中で培養される(37℃、5%CO2)。さらに、末梢血リンパ球(PBL)は対照とした患者又は被験者の血液から新鮮に単離されており、フィコール勾配により分離され、単球/マクロファージの付着段階の後に回収された。
すべてのRNAの単離:この実験は、RNアーゼによるRNAの変性を避けるために4℃で体系的に行われる。RNAzolの溶液が添加される(106個の細胞当たり2ml)、細胞培養物又は新鮮に単離されたリンパ球からRNAが抽出される。RNAzolはフェノール及びグアニジウムイソチオシアネートを含み、細胞を溶解する。相はクロロホルム(2mlのRNAzol当たり400μl)を使用して分離される。均質化(渦巻き)の後、5分間静置させる。サンプルは遠心分離器にセットして静置させ(5分)、次に、4℃で30分間12,000rpmで遠心分離された。水相(測定された量)中に存在するRNAは、最初に、同定された量のイソプロパノール(4℃で15分)を加えて沈殿させられ、その後、遠心分離される(4℃、12,000rpmで15分間)。
抗−ペプチド抗体: 5つのCRMPのいくつかの特定の抗−ペプチドポリクローナル抗体は、他のCRMPについて非相同領域に位置している免疫抗原の選択後に調製され、ウサギに注射された。与えられたCRMPについての各血清の特異性は組み換え型のCRMPにおけるウエスタンブロット法により確認された。免疫処置前に採取した、これらのウサギの各々の血清(前−免疫血清)はHela細胞を形成した又は感染されたEcoli.tranesで得られた組み換えタンパク質のウエスタンブロットで陰性であり、対照として使用される。使用するための最適の希釈溶液はあらかじめウエスタンブロット法又は免疫細胞化学によって決定される。
mRNA(GAPDHに関する):
最初の評価は対応するmRNAの滴定により行われた。結果は、図1に詳細に示され、下の表2に要約される。
結果は図2の中で示されている。
Tリンパ球及び神経細胞に分布している多量のイソフォームを検知する抗−CRMP1、2及び4が示される。
抗 CRMP2抗体は、“設備と方法”の序文の項目3で記述したプロトコールによってあらかじめ準備され分離された。
結果は図3で示される。
−CRMP2の所在は本質的に、対照となる被験者又はHIV−1に感染した被験者から単離されたリンパ球(PBL)中の細胞質であり;それはまた、HTLV-1に感染した患者又は免疫不全の患者(Fas欠損)のPBL中の核にも存在し;
−CRMP2は、IL2の中で培養された対照の患者におけるよりも、患者のリンパ球においてより発現され、そして従って予備活性化される。
同様に、核が濃縮された細胞分画のウエスタンブロットにより、超増殖したTリンパ球中でこの同じ抗体によって認識されるタンパク質の核の存在が確認された。
タンパク質はそれぞれの抗体によって特性が決定された。
分析された細胞は、正常なヒト胎児の胸腺、及び成人患者の中の肥大した胸腺中の細胞である。
対照として、同じ免疫組織化学は、生後6週間の胎児のヒト胸腺上で行われた。胸腺は低温保持装置中で急速冷凍されフラグメント化された(15μm)。フラグメントはアセトンに15分間浸し固定される。免疫組織化学は、脳上でと同じ条件の下で行われる。
この分析は、胚形成期で正常な胸腺上皮細胞中でのCRMP2及びCRMPの発現を明らかにする。この発現は正常な成体では消失して、腫瘍の病理(胸腺肥大)の場合には誘発される。
牛のPrPタンパク質とヒトCRMP5タンパク質との間の相互作用は接合よる2-ハイブリッド試験によって特性決定された。
これらの種々の菌株は相互作用マトリックスを作るために接合される。
このマトリックスはおとり及びえじきの発現、二倍体の接合完了体の選択、及び相互作用表現型(リポーター遺伝子lacZが転写される時β-ガラクトシダーゼ活性が観察され、青色を示す)の表示を可能にする指示薬培地(Ura-, His-, Trp-, galactose/X-gal)で複製された。
図7は得られた結果を示す。
PrP:ウシのPrPタンパク質(AA 22-237)、
PrP: 様々な突然変異が依然として測定されるウシのPrPタンパク質(AA 22-237)、
PrPtr:配列の途中で切断されたウシのPrPタンパク質(コドンの位置は依然として決定される) (AA-22-?)、
MAX:負の相互作用を制御する、
CRMP 5:完全な人間のCRMP 5タンパク質、
BAXATM:負の相互作用を制御する。
方法:
Tリンパ球(Jurkat)の移動は、CRMP2の種々の形態をコードするプラスミドのトランスフェクション又は非トランスフェクションの後に評定される:様々な形態とはCRMP2に関連したgfb、CRMP2に関連してそしてCRMP2が突然変異したcmyc 、Delta381CRMP-2(TyrKin部位、SH3結合部位及びチューブリン・ヘテロダイマーに付着する部位を含んでいるアミノ酸381から572の欠損)である(Fukata など. Nat Cell Biol, 2002, Aug. 4(8) :583-91)。トランスフェクションは、ウエスタンブロットによる移動前及び移動後に、細胞中のGFP及びcmycの検出によって確認される。
CRMP/ビメンチン結合は、免疫沈降及びウエスタンブロット(IP vimentin Wester CRMP)及び移動した又は移動しないTリンパ球細胞の同時免疫検出により可覚化される(共焦点顕微鏡を用いる)。
Jurkats中でのgfp CRMP2又はcrnyc CRMP2の過剰発現は6時間及び18時間で移動した細胞数を増加させる(図9及び10)。
Delta381 CRMP2の突然変異 (TyrKin及びチューブリン結合を含んでいる部位)は移動を増幅しており、このことは移動におけるこの範囲の役割を示唆している(図11)。
CRMP2は、ビメンチン(細胞骨格タンパク質)のパートナーであり、CRMP2の細胞骨格について再分類を促すものである。
この発明は以下の提示された例および図面に制限されるものではない。
Claims (5)
- 免疫系の機能不全に関する病理の生体外検査方法であって、ここで、免疫系の機能不全に関する病理がT白血病及びウイルス感染から選択され、当該ウイルス感染がHTLV-1及びHIVから選択され、
(a)患者から採取された免疫系の細胞におけるCRMPの発現レベル、所在又はリン酸化を評価し;そして
(b)健康体から採取された免疫系の対照細胞における前記CRMPの発現レベル、所在又はリン酸化と比較し、ここで前記免疫系の細胞がリンパ球であり、そしてCRMPがCRMP2である;
工程を含んでなる方法。 - −患者のリンパ球から得られたmRNAを含む生物試料を、CRMPをコードする遺伝子の転写物の全部又は部分の増幅を可能にするオリゴヌクレオチドと接触せしめ;
−前記転写物を増幅し;そして
−増幅産物を検出及び定量する;
工程を更に含む、請求項1に記載の方法。 - リンパ球におけるCRMPの発現レベル、位置又はリン酸化が、CRMPに対する少なくとも1つの抗体とリンパ球の試料とを、当該CRMPと当該抗体との間で特異的免疫複合体の形成を可能にする条件下で接触せしめ、そして形成される特異的免疫複合体及び/又は前記抗体によるCRMP活性の阻害を検出することにより評価される、請求項1に記載の方法。
- 前記CRMPの増加した発現、変更された位置又は変更されたリン酸化を、当該CRMPに対する抗体により検出する、請求項1に記載の方法。
- 前記CRMPに対する抗体が、配列番号:24又は配列番号:28のペプチドに対する抗体である、請求項4に記載の方法。
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