JP4488950B2 - マクロホモプシスガム高産生菌選別方法、及び高産生菌を用いたマクロホモプシスガムの製造方法 - Google Patents
マクロホモプシスガム高産生菌選別方法、及び高産生菌を用いたマクロホモプシスガムの製造方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP4488950B2 JP4488950B2 JP2005125758A JP2005125758A JP4488950B2 JP 4488950 B2 JP4488950 B2 JP 4488950B2 JP 2005125758 A JP2005125758 A JP 2005125758A JP 2005125758 A JP2005125758 A JP 2005125758A JP 4488950 B2 JP4488950 B2 JP 4488950B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture
- glucan
- cells
- macrohomopsis
- weight
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Description
これらのうちジゾフェラン以外のβ-グルカンはいずれも食品添加物として使用が認められているものであり(非特許文献2〜3)、例えばマクロホモプシスガムについては、増粘安定剤としての用途のほか、コレステロール抑制剤としての用途も知られている(特許文献2)。
「天然・生体高分子材料の新展開」シーエムシー出版 p84〜89、p146〜147 「第三版 既存添加物 自主規格」平成14年11月 日本食品添加物協会 p120 「第三版 既存添加物 自主規格」平成14年11月 日本食品添加物協会p263
項1.マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する、菌糸が絡み合って形成された菌体群をほどく方法であって、当該菌体を含む溶液をホモジナイズし、得られた菌体懸濁液を希釈する方法。
(a) マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を含む溶液をホモジナイズして菌体懸濁液を調製する工程(ホモジナイズ工程)、
(b) 上記工程で得られる菌体懸濁液の一部を採取して、所定容量(x mL)あたり一菌体(一菌糸)が含まれるような割合で希釈して希釈懸濁液を調製する工程(希釈工程)
(c) 上記希釈懸濁液から試料x mLを複数検体採取して、それぞれ培地に植菌して、培養する工程(培養工程)
(d) (c)で得られる複数の培養物から、β-グルカン産生量の多い培養物を選択する工程(セレクション工程)、
(e) (d)で選択した培養物またはそれを種菌として再度培養して得られた培養物を、マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を含む溶液に用いて、(a)〜(d)の工程を更にn回(n=0または1以上の正数)繰り返す工程、
(f) n+1回目(n=0または1以上の正数)の(d)工程で選択されたβ-グルカン産生量の多い培養物を取得する工程。
項3-1.培養に用いる菌体(種菌)として、選別された分岐の少ない長い糸状の菌体を用いる項3記載の方法。
項3-2.培養に用いる菌体(種菌)として、分岐の多い短い糸状から分別された分岐の少ない長い糸状の菌体を用いる項3記載の方法。
項3-3.培養に用いる種菌として、分岐の少ない長い糸状の菌体の培養物を用いる項3記載の方法。
項4.上記分岐の少ない長い糸状の菌体が、項2に記載する方法で選別または単離されたものであるか、または形状観察によって選別または単離されたものである項3記載のマクロホモプシスガムの製造方法。
(a)主鎖D-グルコピラノシル残基がすべてβ-1,3結合し、当該主鎖のD-グルコピラノシル残基4つに対して1つの割合で、当該残基の6位に側鎖としてD-グルコピラノシル残基1つがβ-1,6結合してなる中性多糖、
(b)重量分率平均分子量が10万〜1000万Daのもの。
前述するように、本発明者らの研究によって、マクロホモプシスには、分岐の少ない長い糸状の菌体(分岐の少ない長糸状菌)と、分岐の多い短い糸状の菌体(分岐の多い短糸状菌)の2種類あり、前者はβ-グルカンの産生能が高く(優性菌)、後者はβ-グルカンの産生能が低く(劣性菌)、β-グルカンの産生能において明確に異なる性質を有することがわかった。このため、マクロホモプシスを用いてβ-グルカンを収量よく生産するためには、マクロホモプシスの菌体の中から、分岐の少ない長い糸状の菌体(分岐の少ない長糸状菌)を選択し、それを種菌として使用することが必要である。この観点から、本発明は、少なくとも2種類の菌体が混在するマクロホモプシスの菌体群の中から、分岐の少ない長糸状菌を選別または単離する方法を提供する。
(a) マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を含む溶液をホモジナイズして菌体懸濁液を調製する工程(ホモジナイズ工程)、
(b) 上記工程で得られる菌体懸濁液の一部を採取して、所定容量(x mL)あたり一菌体(一菌糸)が含まれるような割合で希釈して希釈懸濁液を調製する工程(希釈工程)
(c) 上記希釈懸濁液から試料x mLを複数検体採取して、それぞれ培地に植菌して、培養する工程(培養工程)
(d) (c)で得られる複数の培養物から、β-グルカン産生量の多い培養物を選択する工程(セレクション工程)、
(e) (d)で選択した培養物またはそれを種菌として再度培養して得られた培養物を、マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を含む溶液に用いて、(a)〜(d)の工程を更にn回(n=0または1以上の正数)繰り返す工程、
(f) n+1回目(n=0または1以上の正数)の(d)工程で選択されたβ-グルカン産生量の多い培養物を取得する工程。
(f) n+1回目(n=1以上の正数)の(d)工程で選択されたβ-グルカン産生量の多い培養物を取得する工程。
本発明は、マクロホモプシス属に属する微生物(マクロホモプシス)を用いて、高い収量にマクロホモプシスガムを製造する方法に関する。
[参考例]
神奈川県小田原市の土壌より分離。
San-Ei-1株の肉眼的および顕微鏡的観察に基づく各種培地上における培養の特徴は下記の通りである。
San-Ei-1株の25℃での生育形態を調べた。
生育は比較的速く、培養二日目には菌糸の伸長が見られた。培養5日目には、白色の綿毛様の菌糸増殖が盛んであった。菌糸が全体に密に増殖する。12日目頃には、コロニーは5.5cm位になり、コロニー中心部の裏面は黄褐色化する。3週間目頃から、コロニー中心よりやや周辺部で菌糸が盛り上がりはじめた。
生育は比較的速く、菌糸は白色綿毛様である。コロニー中心部は、菌糸は余り増殖性が活発でなく、周辺部で非常に活発で、菌糸が密になり、ドーナツ様になる。更に、そこから菌糸が伸長し、ドーナツ周辺にやや疎菌糸帯を形成し、その先端周辺部に密菌糸帯を形成していく。そしてまたその疎菌糸帯も密になり、更に大きなドーナツ様コロニーとなる。12日目頃には、コロニーは6.5〜7.5cm位になる。コロニー中心部の裏面が黄褐色化する。3週間目位には、コロニー中心部への菌糸増殖が進み、全体的に菌糸が覆われた状態になる。その後、コロニー中心部よりやや周辺部で、暗緑色様に着色しつつ、菌糸の盛り上がりが起こってきた。
(1-1)および(1-2)に比較し、初期の白色綿毛様の菌糸体増殖が遅い。しかし、コロニーの拡大は速い。5日目頃からコロニー中心部より周辺部に向かい、疎・密菌糸帯の繰り返し紋様が観察される。12日目頃には、コロニーが8.5cmとなる。3週間目位には、そのまんだら紋様が全体的に菌糸で覆われるような形で薄れていく。
生育は極めて速く、ポテトデキストロース寒天培地と同様に菌糸は白色綿毛様の菌糸体増殖をする。分生子果形成に適しており、分生子果の着生成熟ともに速く盛ん。分生子果は寒天中にわずかに埋没して形成される。1%mert extraを添加して培養すると紫色に着色する。
コーンミル培地とほぼ同じ挙動である。
(2)顕微鏡下での形態
コーンミルなどの寒天培地上での菌糸は白色綿毛様であり、寒天に潜るようにして増殖し、分岐をもち、隔膜がある。寒天培地上で形成される分生子果は、こげ茶で球形であり、開口部を持っている。開口部の孔口は単一で、まるく中心にある。分生子果柄だは無職で分岐し、基部でのみ隔膜がみられ、円筒状の形態をしている。分生子形成細胞は、全割、不定形である。分生子は無色で隔膜のない紡錘形をしている。分生子の先端は鈍角、後端は裁断状である。
(3)生育pH
pH3.5〜9で生育できるが、pH2.5以下では生育できない。生育の最適pHは5〜8である。
(4)生育温度
10〜40℃の温度域で生育するが、5℃以下または45℃以上では生育できない。35〜40℃での生育は、28℃での生育と同程度に速い。白色菌糸体の形成が主体で、分生子果の形成、成熟には28℃以下のほうが適している。生育および分生子果の形成の最適温度は20〜30℃である。
図1に、San-Ei-1株の形状を示す。これからわかるように、マクロホモプシスは複数の菌体の菌糸が絡まった状態で存在する。
上記で得られた(a)分岐の少ない長糸状菌体(以下、単に「長糸状菌体」という)と、(b)分岐の多い短糸状菌体(以下、単に「短糸状菌体」という)について、β-グルカン産生能を評価して、両者を比較した。
結果を表1に示す。
(1)マクロホモプシス(San-Ei-1株)を含有する溶液(1.2 mLの菌液と0.8 mLのグリセロールの混合溶液)2mlを、栄養培地(グルコース5重量%、脱脂綿実粉0.3重量%、KH2PO4 0.1重量%、及びMgSO4・7H2O 0.3重量%を含有する水性培地、pH7)100mLに植菌して、25℃で4日間、振盪培養した。
このように、β-グルカン産生能が高い優性菌(分岐の少ない長糸状菌体)と、β-グルカン生産能が極めて低い劣性菌(分岐の多い短糸状菌体)との選別は、菌糸の形状を顕微鏡にて確認しながら採取することによって行うことができる。しかしながら、この作業は非常に技術を要する作業であり、汎用的ではない。また菌糸を観察し採取するのに時間がかかり作業中に雑菌が混入する可能性が高い。
装置:高速液体クロマトグラフィー(日本分光株式会社製)
カラム: TSKgel GMPWXL (東ソー株式会社製)
カラム温度:25℃
移動相:50mM NaNO3+4mM NaN3
流速:0.5ml/min
注入量:100μl
試料濃度:0.5 mg/mL
前処理:0.45μmのメンブランフィルターでろ過。
装置:多角度光散乱検出器DAWN-DSP (Wyatt 製) 、示差屈折検出器(日本分光株式会社製)
検出温度:25℃。
Claims (3)
- マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する、菌糸が絡み合って形成された菌体群をほどく方法であって、当該菌体を1〜30重量%の割合で含む溶液を6000〜15000rpmの回転数でホモジナイズし、得られた菌体懸濁液を100〜10000倍に希釈する方法。
- 下記の工程を有する、マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体群から、β-グルカン高産生菌を選別または単離する方法:
(a) マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を1〜30重量%の割合で含む溶液を6000〜15000rpmの回転数でホモジナイズして菌体懸濁液を調製する工程、
(b) 上記工程で得られる菌体懸濁液の一部を採取して、所定容量(x mL)あたり一菌体(一菌糸)が含まれるように100〜10000倍に希釈して希釈懸濁液を調製する工程、
(c) 上記希釈懸濁液から試料x mLを複数検体採取して、それぞれ培地に植菌して、培養する工程、
(d) (c)で得られる複数の培養物から、β-グルカン産生量の多い培養物を選択する工程、(e) (d)で選択した培養物またはそれを種菌として再度培養して得られた培養物を、マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を含む溶液に用いて、(a)〜(d)の工程を更にn回(n=0または1以上の正数)繰り返す工程、
(f) n+1回目(n=0または1以上の正数)の(d)工程で選択されたβ-グルカン産生量の多い培養物を取得する工程。 - マクロホモプシス(Macrophomopsis)属に属する菌体を培地で通気培養し、培養物中に産生されたβ-グルカンを採取する工程を有するマクロホモプシスガムの製造方法であって、上記培養に用いる菌体(種菌)として、請求項2に記載する方法で選別されたβ-グルカン高産生菌を用いることを特徴とする方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005125758A JP4488950B2 (ja) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | マクロホモプシスガム高産生菌選別方法、及び高産生菌を用いたマクロホモプシスガムの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2005125758A JP4488950B2 (ja) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | マクロホモプシスガム高産生菌選別方法、及び高産生菌を用いたマクロホモプシスガムの製造方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2006296349A JP2006296349A (ja) | 2006-11-02 |
JP4488950B2 true JP4488950B2 (ja) | 2010-06-23 |
Family
ID=37465214
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2005125758A Active JP4488950B2 (ja) | 2005-04-22 | 2005-04-22 | マクロホモプシスガム高産生菌選別方法、及び高産生菌を用いたマクロホモプシスガムの製造方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP4488950B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112076209A (zh) * | 2019-06-14 | 2020-12-15 | 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 | 一种β-葡聚糖组合物及其用途 |
-
2005
- 2005-04-22 JP JP2005125758A patent/JP4488950B2/ja active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP2006296349A (ja) | 2006-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
DE60131752T2 (de) | Bacillus subtilis var. chungkookjang zur herstellung von poly-gamma-glutaminsäure mit hohem molekulargewicht | |
JP3089269B2 (ja) | 網状セルロース | |
EP2360238B1 (en) | A yellow pigments generation deficient sphingomonas strain and its application in the production of gellan gum | |
KR20150114479A (ko) | 박테리아 셀룰로오스 및 이것을 생산하는 세균 | |
Panigrahi et al. | Screening, isolation and quantification of PHB-producing soil bacteria | |
CN107686822A (zh) | 一种发酵产低色素黄原胶的方法 | |
JP4488950B2 (ja) | マクロホモプシスガム高産生菌選別方法、及び高産生菌を用いたマクロホモプシスガムの製造方法 | |
Nierzwicki-Bauer et al. | Occurrence and ultrastructural characterization of bacteria in association with and isolated from Azolla caroliniana | |
Qian et al. | Isolation and characterization of a xanthan‐degrading Microbacterium sp. strain XT11 from garden soil | |
US9139861B2 (en) | Culture substrate comprising cellulose gel, solid medium using same, and cellulase activity assay method using medium | |
Manirujjaman et al. | Isolation and characterization of feather degrading bacteria from poultry waste | |
JP2002262898A (ja) | 水溶性セルロースエーテルを用いたセルロース生産菌のスクリーニング方法、バクテリアセルロース、及びバクテリアセルロースの製造方法 | |
Krishnaveni et al. | Chitinase production from seafood wastes by plant pathogen Bionectria CBNR BKRR sps and its application in bioremediation studies | |
Jamilah | Isolation and identification of exopolysaccharide-producing endophytic fungi from leaf midribs of oil palm | |
CN113046249A (zh) | 一株蜡蚧轮枝菌ll-01及其生防应用 | |
JP4425174B2 (ja) | マクロホモプシスガムの製造方法 | |
CN111690567A (zh) | 一种海带白化病致病菌 | |
Yurnaliza et al. | Screening of endophytic fungi from oil palm (Elaeis guineensis) in producing exopolysaccharides | |
Kayar et al. | Preparation of chitosan with high antibacterial efficiency from penicillium crustosum TZ18 | |
KR100523528B1 (ko) | 키티나아제를 생산하는 신규한 셀룰로모나스 gm13 속 균주 | |
Al-Rumaidh et al. | The Impact of Using Date Juice as a Carbon Source on Curdlan Produced by a Local Isolate of Agrobacterium leguminum | |
JP4969178B2 (ja) | マクロホモプシスガムの製造方法 | |
Rajendran et al. | Biocompatible nanofiber from exopolysaccharide produced by moderately halophilic Paenibacillus alvei | |
Patel et al. | Production and partial purification of pectinase from Streptomyces chartreusis | |
CN116333911B (zh) | 一株溶藻弧菌及其应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20061225 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20091014 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20091209 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100120 |
|
A521 | Written amendment |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100212 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20100310 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20100330 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130409 Year of fee payment: 3 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 4488950 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20130409 Year of fee payment: 3 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20140409 Year of fee payment: 4 |