JP4426457B2 - 分取法として電気泳動を実施するための装置および方法 - Google Patents
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Description
少なくとも4つの要素から成る分離チャンバーを使用することによって、電解質含有溶液中に溶解または分散した物質を膜電気泳動させる方法であって、
該分離チャンバーは、希釈側コンパートメント、濃縮側コンパートメント、陰極としての電極を備えた陰極コンパートメント、および陽極としての電極を備えた陽極コンパートメントを有しており、
陰極コンパートメントと陽極コンパートメントとが、多孔質膜、特に限外濾過膜または精密濾過膜によって相互に分けられており、
電極フラッシュ溶液(または電極洗浄溶液)で電極をフラッシュ(または洗浄)し、
希釈側コンパートメントを連続的に通るように希釈側液(または希釈側に用いられる流体)を通過させ、また
濃縮側コンパートメントを連続的に通るように濃縮側液(または濃縮側に用いられる流体)を通過させる、
方法であって、
陰極と陽極との間で形成された電場によって、希釈側液中に溶解または分散した少なくとも1種類の物質を希釈側コンパートメントから濃縮側コンパートメントへと電気泳動により移動させ、また
希釈側コンパートメントと濃縮側コンパートメントとの間の圧力差を少なくとも3kPaとなるように設定することを特徴とする方法
を提供する。
少なくとも4つの要素から成る分離チャンバー、希釈側液のための入口ラインおよび出口ライン、濃縮側液のための入口ラインおよび出口ライン、電極フラッシュ溶液のためのオプションとしての入口ラインおよび出口ライン、ならびに圧力を制御するデバイスを有して成る膜電気泳動を実施するための装置であって、
該分離チャンバーは、希釈側コンパートメント、濃縮側コンパートメント、陰極としての電極を備えた陰極コンパートメント、陽極としての電極を備えた陽極コンパートメントを少なくとも有し、
個々のコンパートメントが、多孔質膜、特に限外濾過膜および精密濾過膜によって相互に分けられており、また
該圧力を制御するデバイスによって、希釈側コンパートメントと濃縮側コンパートメントとの間の圧力差が少なくとも3kPaとなるように設定される、装置
を提供する。
第1の態様: 少なくとも4つの要素から成る分離チャンバー(7)を使用することによって、電解質含有溶液中に溶解または分散した物質を電気泳動させる方法であって、
該分離チャンバー(7)は、希釈側コンパートメント(16)、濃縮側コンパートメント(17)、陰極(19)としての電極を備えた陰極コンパートメント(18)、および陽極(20)としての電極を備えた陽極コンパートメント(21)を有しており、
個々のコンパートメントが、多孔質膜、特に限外濾過膜または精密濾過膜(14,15)によって相互に分けられており、
電極フラッシュ溶液で電極(19、20)をフラッシュし、
希釈側コンパートメント(16)を連続的に通るように希釈側液を通過させ、また
濃縮側コンパートメント(17)を連続的に通るように濃縮側液を通過させる
方法であって、
陰極(19)と陽極(20)との間で形成された電場によって、希釈側液中に溶解または分散した少なくとも1種類の物質を希釈側コンパートメント(16)から濃縮側コンパートメント(17)へと電気泳動により移動させ、また
希釈側コンパートメント(16)と濃縮側コンパートメント(17)との間の圧力差を少なくとも3kPaとなるように設定する
ことを特徴とする方法。
第2の態様: 上記第1の態様において、濃縮側コンパートメント(17)と希釈側コンパートメント(16)との間を相互に分けている分離膜(15)を通過する液体流れが実質的に抑制されるように、希釈側コンパートメント(16)と濃縮側コンパートメント(17)との間の圧力差を設定することを特徴とする方法。
第3の態様: 上記第1または2の態様において、複数の希釈側コンパートメント(16a,16b,・・・)および濃縮側コンパートメント(17a,17b,・・・)から構成される分離チャンバー(7a)であって、
希釈側コンパートメント(16a,16b,・・・)と濃縮側コンパートメント(17a,17b,・・・)とが、陽極コンパートメント(21)と陰極コンパートメント(18)との間にて交互に配置されており、また、限外濾過膜または精密濾過膜(14,15)によって相互に分けられており、更に、並列および/または直列に組み合わされて操作される分離チャンバー(7a)において、本発明の方法を実施することを特徴とする方法。
第4の態様: 上記第1〜3の態様のいずれかにおいて、希釈側液、濃縮側液および電極フラッシュ溶液、または、それらのいずれか1つを、相互に独立して温度制御し、好ましくは冷却することを特徴とする方法。
第5の態様: 上記第1〜4の態様のいずれかにおいて、 膜は、1〜1000nmの孔サイズを有していることを特徴とする方法。
第6の態様: 上記第5の態様において、膜は、セルロースエステル、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリエーテル、ポリエーテルスルホン、ポリプロピレン、ポリスルホン、ポリビニルアルコール、ポリフッ化ビニリデン、または、酸化アルミニウム、酸化シリコン、酸化チタン、酸化ジルコニウム及びそのような酸化物の混合セラミックスのうちの1種類から成ることを特徴とする方法。
第7の態様: 上記第1〜6の態様のいずれかにおいて、電極フラッシュ溶液によって、陽極コンパートメント(21)および陰極コンパートメント(18)を相互に独立にフラッシュすることを特徴とする方法。
第8の態様: 上記第1〜7の態様のいずれかにおいて、希釈側溶液、濃縮側溶液および電極フラッシュ溶液に用いられる電解質には、弱酸および弱塩基の組合せ、弱酸および強塩基の組合せ、または、強酸および弱塩基の組合せが含まれることを特徴とする方法。
第9の態様: 上記第8の態様において、電解質は、ホウ酸、リン酸、N-2-(アセトアミド)-2-アミノエタンスルホン酸、N-2-(アセトアミド)イミノ二酢酸、アラニン、2-アミノ-2-メチル-1,3-プロパンジオール、アンモニア、N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)-2-アミノエタンスルホン酸、N,N-ビス(2-ヒドロキシエチル)グリシン、2,2-ビス(ヒドロキシエチル)-イミノトリス(ヒドリキシメチル)メタン、2-(シクロヘキシルアミノ)エタンスルホン酸、酢酸、グリシン、グリシルグリシン、2-[4-(2-ヒドロキシエチル)-1-ピペラジニル]エタンスルホン酸、3-[4-[2-ヒドロキシエチル]-1-ピペラジニル]プロパンスルホン酸、ヒスチジン、イミダゾール、乳酸、2-モルフォリノエタンスルホン酸、2-モルフォリノプロパンスルホン酸、ピペラジン-1,4-ビス(2-エタンスルホン酸)、N-[トリス(ヒドリキシメチル)-メチル]-2-アミノエタンスルホン酸、N-[トリス(ヒドリキシメチル)-メチル]グリシン、トリエタノールアミン、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタン、クエン酸のうちの1種類の化合物またはそれ以上の種類の化合物を含んでいることを特徴とする方法。
第10の態様: 上記第1〜9の態様のいずれかにおいて、膜表面に対する電流密度は、10〜1000A/m 2 であり、好ましくは10〜500A/m 2 であることを特徴とする方法。
第11の態様: 上記第1〜10の態様のいずれかにおいて、希釈側溶液の導電率は、0.1mS/cm〜40mS/cmであり、好ましくは0.1〜10mS/cmであることを特徴とする方法。
第12の態様: 上記第1〜11の態様のいずれかにおいて、希釈側溶液の導電率は、分離の間で低下することを特徴とする方法。
第13の態様: 上記第1〜12の態様のいずれかにおいて、特に、精密濾過、限外濾過、ナノ濾過または逆浸透等の液体透過と組み合わせることによって、分離の最終段階にて希釈側溶液を再濃縮して、希釈側コンパートメント(16)に戻すことを特徴とする方法。
第14の態様: 上記第1〜13の態様のいずれかにおいて、タンパク質、ペプチド、DNA、RNA、オリゴヌクレオチド、オリゴ糖、多糖類、ウィルス、ウィルス成分、細胞、細胞成分、エナンチオマーおよびジアステレオマーのうちの1種類の物質またはそれ以上の種類の物質を処理することを特徴とする方法。
第15の態様: 少なくとも4つの要素から成る分離チャンバー(7)、希釈側液のための入口ライン(22)および出口ライン(23)、濃縮側液のための入口ライン(24)および出口ライン(25)、電極フラッシュ溶液のためのオプションとしての入口ライン(26)および出口ライン(27)、ならびに、圧力を制御するデバイス(8;10)および(9;11)を有して成る膜電気泳動を実施するための装置であって、
該分離チャンバー(7)は、希釈側コンパートメント(16)、濃縮側コンパートメント(17)、陰極(19)としての電極を備えた陰極コンパートメント(18)、陽極(20)としての電極を備えた陽極コンパートメント(21)を少なくとも有し、
個々のコンパートメント(16,17,18,21)が、多孔質膜(14,15)、特に限外濾過膜および精密濾過膜(14,15)によって相互に分けられており、また
該圧力を制御するデバイス(8;10)および(9;11)によって、希釈側コンパートメント(16)と濃縮側コンパートメント(17)との間の圧力差が少なくとも3kPaとなるように設定される、装置。
第16の態様: 上記第15の態様において、分離チャンバー(7)は、複数の希釈側コンパートメント(16a,16b・・・)と濃縮側コンパートメント(17a,17b・・・)とに分けられていることを特徴とする装置。
第17の態様: 上記第15または16の態様において、複数の希釈側コンパートメント(16a,16b,・・・)と濃縮側コンパートメント(17a,17b,・・・)とが、陽極コンパートメント(21)と陰極コンパートメント(18)との間において交互に配置され、また、多孔質制限膜(14)および分離膜(15a)によって相互に分けられており、更に、好ましくは並列および/または直列に接続されていることを特徴とする装置。
第18の態様: 上記第15〜17の態様のいずれかにおいて、希釈側循環路(1;4;22;23)に設けられた希釈側液用の入口ライン(22)および出口ライン(23)、
濃縮側循環路(2;5;24;25)に設けられた濃縮側液用の入口ライン(24)および出口ライン(25)、ならびに
電極フラッシュ循環路(3;6;26;27)に設けられた電極フラッシュ溶液用のオプションとしての入口ライン(26)および出口ライン(27)
を有することを特徴とする装置。
第19の態様: 上記第15〜18の態様のいずれかにおいて、希釈側循環路、濃縮側循環路および電極フラッシュ循環路、ならびに、
特に、該希釈側循環路、該濃縮側循環路および該電極フラッシュ循環路のうちのいずれか1つまたは全てに設けられた熱交換機
を有することを特徴とする装置。
第20の態様: 上記第15〜19の態様のいずれかにおいて、1〜1000nmの孔サイズを有する多孔質膜が設けられており、好ましくは、該多孔質膜が有機材料、無機材料またはそれらの混合物から形成されていることを特徴とする装置。
第21の態様: 上記第15〜20の態様のいずれかにおいて、前記膜が、セルロースエステル、ポリアクリロニトリル、ポリアミド、ポリエーテル、ポリエーテルスルホン、ポリプロピレン、ポリスルホン、ポリビニルアルコール、ポリフッ化ビニリデン、または、酸化アルミニウム、酸化シリコン、酸化チタン、酸化ジルコニウム及びそのような酸化物の混合セラミックスから成る群から選択される材料から成ることを特徴とする装置。
第22の態様: 上記第18〜21の態様のいずれかにおいて、電極フラッシュ溶液用の循環路には、陽極フラッシュ循環路と陰極フラッシュ循環路とが別個に設けられていることを特徴とする装置。
以下で説明する実施例に用いた装置(図1)は、温度制御可能な希釈側リザーバー1、温度制御可能な濃縮側リザーバー2および温度制御可能な電極バッファー用リザーバー3から構成されている。希釈側液は、ポンプ4が用いられることによって、入口ライン22およびリターン・ライン23を循環しており、電気泳動モジュール7を流れるようになっている。濃縮側液は、ポンプ5が用いられることによって、入口ライン24およびリターン・ライン25を循環しており、電気泳動モジュール7を流れるようになっている。電極バッファーは、ポンプ6が用いられることによって、入口ライン26およびリターン・ライン27を循環しており、電気泳動モジュール7を流れるようになっている。入口ライン12,13を介して窒素が供給される希釈側ベッセルおよび濃縮側ベッセルのガス空間の圧力は、圧力レギュレーター8,9によって制御されている。そして、そのような圧力レギュレーターは、レベル・センサー10,11によって制御されている。
図1に示す装置、および、図2に示すモジュール7aは、ヒト血清アルブミン(HSA)とヒト免疫グロブリンG(IgG)とを分離するのに用いた。モジュール7aは、膜ユニットの有効膜表面積が36cm2となるように変更された電気透析モジュール(電気透析モジュールED136;フーマ−テック社(FuMA−Tech GmbH))である。
1a)加圧により希釈側リザーバーの体積を制御することによって電気浸透流の調整を行う電気泳動
1b)電気浸透流の調整を行わない電気泳動
c:希釈側液中のアルブミン濃度 [g/L]
t:時間 [t]
V:希釈側液の体積 [L]
A:分離膜の有効面積 [m2]
k:速度定数 [L/(hm2)]
である。
c/c0:残留分の割合 [−]
である。
m :希釈側液中のアルブミン質量 [g]
m0 :実験開始時の希釈側液中のアルブミン質量 [g]
m/m0 :質量に基づく残留分の割合 [−]
keff :有効速度定数 [L/(hm2)]
Ψ :選択性 [−]
m/m0(HSA) :希釈側液中のHSAの質量に基づく残留分の割合[−]
m/m0(IgG) :希釈側液中のIgGの質量に基づく残留分の割合[−]
図1に示す装置、および、図2に示すモジュール7aは、ヒト血清アルブミンとヘモグロビンとを分離するのに用いた。モジュール7aは、膜ユニットの有効膜表面積が36cm2となるように変更された電気透析モジュール(実施例1の場合と同様のモジュール)である。
Claims (2)
- 少なくとも4つの要素から成る分離チャンバー(7)を使用することによって、電解質含有溶液中に溶解または分散した物質を電気泳動させる方法であって、
該分離チャンバー(7)は、希釈側コンパートメント(16)および濃縮側コンパートメント(17)の組を複数個、陰極(19)としての電極を備えた陰極コンパートメント(18)、ならびに陽極(20)としての電極を備えた陽極コンパートメント(21)を有しており、
各組の希釈側コンパートメントおよび濃縮側コンパートメントが、限外濾過膜または精密濾過膜(15)によって相互に分けられており、
陰極コンパートメントおよび陽極コンパートメントが、希釈側および濃縮側コンパートメントの組から、制限膜によって分けられており、希釈側および濃縮側コンパートメントの組は制限膜によって他の該組から分けられており、
また、該分離チャンバー(7)は、電極コンパートメント(18、21)を循環する、電極すすぎ溶液を有し、
希釈側コンパートメント(16)を連続的に通るように希釈側液を通過させ、また
濃縮側コンパートメント(17)を連続的に通るように濃縮側液を通過させる
方法であって、
陰極(19)と陽極(20)との間で形成された電場によって、希釈側液中に溶解または分散した少なくとも1種類の物質を希釈側コンパートメント(16)から濃縮側コンパートメント(17)へと電気泳動により移動させ、また
希釈側および濃縮側コンパートメントの各組において、希釈側コンパートメント(16)と濃縮側コンパートメント(17)との間の圧力差を少なくとも3kPaとなるように設定する
ことを特徴とする方法。 - 少なくとも4つの要素から成る分離チャンバー(7)、希釈側液のための入口ライン(22)および出口ライン(23)、濃縮側液のための入口ライン(24)および出口ライン(25)、電極すすぎ溶液のためのオプションとしての入口ライン(26)および出口ライン(27)、ならびに、圧力を制御するシステム(8;10)および(9;11)を有して成る膜電気泳動を実施するための装置であって、
該分離チャンバー(7)は、希釈側コンパートメント(16)および濃縮側コンパートメント(17)の組を複数個、陰極(19)としての電極を備えた陰極コンパートメント(18)、陽極(20)としての電極を備えた陽極コンパートメント(21)を少なくとも有し、
各組の希釈側コンパートメントおよび濃縮側コンパートメントが、限外濾過膜または精密濾過膜(15)によって相互に分けられており、
陰極コンパートメントおよび陽極コンパートメントが、希釈側および濃縮側コンパートメントの組から制限膜によって分けられており、希釈側および濃縮側コンパートメントの組が、他の該組から制限膜によって分けられており、また
該圧力を制御するシステム(8;10)および(9;11)が、希釈側コンパートメント(16)と濃縮側コンパートメント(17)との間で少なくとも3kPaの圧力差を生じさせるものであり、
該制限膜が、該限外濾過膜または該精密濾過膜よりも実質的に低いカットオフ点を有する、装置。
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