JP4252460B2

JP4252460B2 - Skin preparation for external use

Info

Publication number: JP4252460B2
Application number: JP2003570864A
Authority: JP
Inventors: 浩一郎徳丸; 實隆白畑
Original assignee: NIHON KEFIR CO., LTD.
Current assignee: NIHON KEFIR CO., LTD.
Priority date: 2002-02-28
Filing date: 2003-02-28
Publication date: 2009-04-08
Anticipated expiration: 2023-02-28
Also published as: WO2003072119A1; JPWO2003072119A1; CN1638784A; CN100551348C; AU2003211453A1; KR20040111367A; KR100992101B1

Description

技術分野
本発明は、ケフィア・グレインから得られる乳発酵産物を含有する皮膚外用剤に関する。より詳細には、本発明は、ケフィア・グレインによる乳発酵産物であるケフィア及び／又はケフィアホエーを含有する皮膚外用剤に関する。本発明の皮膚外用剤は、優れた細胞賦活作用、皮膚老化防止作用、美白作用、メラニン生成阻害能などを有する化粧料そ、頭皮頭髪用組成物、皮膚洗浄剤組成物、皮膚疾患治療用組成物等として極めて有用である。
背景技術
皮膚の活性は加齢等の内的環境のみならず、紫外線や各種の刺激等の外的環境からの影響も大きく受け、肌荒れ、皺、シミ、くすみ、その他のトラブルを起こしがちである。これらのトラブルの改善に、様々な皮膚活性化成分についての検討がなされてきた。中でも細胞賦活成分や美白成分については多くの研究が行われている。細胞賦活成分は、細胞の分裂を促し、新陳代謝を高め、身体を健全な状態に維持する効果を呈する。また、該成分は、皮膚においては表皮の角質細胞が活性化することにより、古い角質を剥離し、ターンオーバーと呼ばれる角化の過程を整え、肌を健康で美しい状態に改善する。
ケフィア（ｋｅｆｉｒ）は、コーカサス地方の伝統的な乳発酵産物であり、ケフィア・グレインと呼ばれる種菌（ケフィア粒菌とも呼ばれる。）をスターターにして獣乳を発酵させて得られたヨーグルト状の飲料であった。このようなヨーグルト状の乳発酵産物の透明な液状部分を特にケフィアホエーと称する。ケフィアは水分をほとんど除いた乾燥状のものであってもよく、また水分を比較的多量に含むゲル状のものであってもよい。乾燥状のケフィアの製造方法としては特開昭６２−８３８４２号などに記載されており、またケフィアホエーの製造方法としては特開平２−２１９５３８号などに記載されている。本明細書では、これらの文献の記載をすべて取り込む。
さらに、最近ではケフィアの健康食品としてだけではなく、その優れた保健効果に着目して医薬用途への応用についての研究も盛んになってきている（特開平５−３２００６９号公報、特開平６−２１１６６８号公報、特開平９−３７７１１号公報、特開平９−１９１８５２号公報など）。これらの研究及び開発の多くは、ケフィアを含有した食品や医薬品を経口摂取することを目的としたものであった。
しかし、優れた効能にもかかわらず、元来、ケフィアは発酵乳飲料であり、独特の臭いとｐＨ特性（約４．２０〜４．４０）などのため、経口摂取製品以外の用途、例えば皮膚外用剤、特に使用感が重視される化粧料などへの利用は、通常のヨーグルト製品と比べても困難なことであった。
一方、健康の概念は多様性を増し、精神及び身体のみならず、従来であれば美容の領域であった肌などの外見的な部分も含んだものとなってきている。このような広義の健康を保つために、即効性が期待される医薬品に加え、作用が穏やかでも安全性が高く日常生活に容易に取り入れることができる種々の製品が望まれている。
発明の開示
本発明者らは、こうした実情を鑑み、伝統的に健康を増強する食品として用いられてきたケフィア・グレインから得られた乳発酵産物の安全性、熱安定性と皮膚に対する細胞賦活作用などの効能に着目し、上記の欠点を克服して該乳発酵産物の特性を活かした本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物、及び製薬的又は化粧学的に許容される担体を含有してなる皮膚外用剤組成物に関する。また、本発明は、さらに活性酸素除去成分、抗酸化成分、抗炎症成分、紫外線防止成分及び保湿成分よりなる群から選ばれる成分の一種又は二種以上を含有する化粧料組成物、頭皮頭髪用組成物、皮膚洗浄剤組成物などの皮膚外用剤組成物に関する。さらに、本発明は該乳発酵産物を含有してなる細胞賦活剤、皮膚老化防止剤、美白剤、又はメラニン生成阻害剤に関する。
また、本発明は、ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物の有効量を、皮膚に適用することにより、皮膚の細胞を賦活し、皮膚老化を防止し、皮膚のメラミン生合成を阻害し、及び／又は皮膚を美白する方法に関する。本発明のこの方法の好ましい例としては、皮膚を化粧又は洗浄するための方法、頭皮及び／又は頭髪の化粧又は洗浄のための方法、皮膚疾患の患者の皮膚を治療するための方法などがある。
さらに、本発明は、ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物の、皮膚外用剤組成物を製造するための使用に関する。
発明を実施するための最良の形態
本発明で用いられるケフィア・グレインから得られた乳発酵産物は、ケフィア・グレインという種菌で、乳酸と酵母など少なくとも５〜６種類の働きが併合している粒状の菌により、獣乳、豆乳及び脱脂粉乳等を発酵させて得られる。ケフィア・グレインを牛乳や山羊乳などの獣乳、豆乳、及び脱脂粉乳等の中に入れておくと乳酸菌による乳酸発酵と酵母によるアルコール発酵の両方が行われる。ケフィア・グレインによる乳発酵産物は、乳酸菌だけが発酵するヨーグルトと異なり、酵母の出す炭酸ガスにより、酸味と、かすかなアルコール風味に加え若干の刺激ある風味を呈する。また、該乳発酵産物には、乳糖、ペプチド、アミノ酸、乳酸、ビタミン、ミネラルなどの栄養分が豊富であり、身体に優れた効能をもたらしている。
本発明で用いられる乳発酵産物は、通常の獣乳を発酵させて得られるものでよい。獣乳としては、例えば牛、馬、羊、山羊、水牛などの乳が挙げられる。これらの獣乳から発酵産物を製造する方法は、特に限定されたものではなく、通常の牛乳を原料としてケフィア・グレインにより発酵させて製造する方法、東欧で行われている馬乳を用いて製造する方法などを採用することができるが、牛乳を原料としてケフィア・グレインにより発酵させて得られた乳発酵産物が特に好ましく用いられる（特開昭６２−８３８４２号公報参照）。
また、通常の豆乳や脱脂粉乳等を用いて、ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物を製造することも可能である。
本発明のケフィア及びケフィアホエーは、上記した乳発酵産物のヨーグルト状のもの又はその乾燥成分をケフィアと称し、ヨーグルト状から得られる透明な液状の成分をケフィアホエーと称する。本発明で用いられるケフィア・グレインから得られた乳発酵産物の好ましい例としては、ケフィア又はケフィアホエーのどちらでもよく、また、両者の混合物であってもよい。
本発明で用いられるケフィア・グレインから得られた乳発酵産物の１種であるケフィアは、保湿効果を始めとし、紫外線防御効果、メラニン生成の抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活作用などの様々な有用性を示す。熱に対しても安定性を示し、フィルター除菌などが可能なため、安定した皮膚外用剤、特に化粧料原料としての可能性を有する。但し、独特の酵母発酵臭、乳酸発酵臭を持ち、ｐＨが４．２０〜４．４０となっているため、他の化粧料原料や化粧料担体との配合により、心地よい使用感及びケフィア本来の効果効能を発揮すると考えられる。
本発明で用いられるケフィアは、ヨーグルト状、あるいは該ヨーグルト状のものを凍結乾燥等で乾燥処理を施して得られる粉末状、又は該粉末状ケフィアをさらに加工成形した顆粒状のものであってよい。また、これらを水、緩衝液、アルコール類、油脂類等を用いて加工した液状のものであってもよい。
上記ケフィアを皮膚外用剤に用いる場合には、外用剤全重量中に０．０１〜３．００重量％を含有させることが好ましく、特に１．００〜３．００重量％を含有させることが好ましい。
また、本発明で用いられるケフィアホエーは、前記した乳発酵産物のうちのヨーグルト状のものから得られる透明な液状の成分であり、乳清とも言われ、乳糖、ペプチド、アミノ酸、乳酸、ビタミン、ミネラルなどの栄養分に富んでおり、原乳の栄養分の約半分を含有するとされている。ケフィアホエーのうち、固形分は約６％で、残りが水分である。ケフィアホエーには、Ｌ−乳酸が通常のヨーグルトよりも多く含まれており、乳酸菌による抗菌作用が注目されている。また、ケフィアホエーは肌の角質細胞内にあるＮＭＦ（天然保湿因子）に構造が似ているため、皮膚の水分を保ち、ｐＨを理想的な弱酸性に整えることもわかっている。さらに、保湿効果に優れているとともに抗アレルギー作用もあり、皮膚を外部からの刺激や雑菌から守るともいわれている。
だが、こうした特性にもかかわらず、ケフィアホエーは従来、廃材として取り扱われることがほとんどで、有効利用について検討されたのはごく最近になってからである。
本発明で用いられるケフィア・グレインによる乳発酵産物であるケフィアホエーは、上記ケフィアと同様に保湿効果を始めとし、紫外線防御効果、メラニン生成の抑制効果、活性酸素消去効果、細胞賦活作用など様々な有用性を示す。熱に対しても安定性を示し、フィルター除菌などが可能なため、安定した化粧料原料としての可能性を持つ。但し、独特の酵母発酵臭、乳酸発酵臭を持ち、ｐＨが４．２０〜４．４０となっているため、他の化粧料原料や化粧料担体との配合により、心地よい使用感を提供することができ、本来の効果効能を発揮することができる。
上記ケフィアホエーを皮膚外用剤に用いる場合には、外用剤全重量中に０．０１〜３．００重量％を含有させることが好ましく、特に０．０１〜３．００重量％を含有させることが好ましい。
上記ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物は、ケフィアであれ、ケフィアホエーであれ、上述したように、細胞賦活作用を有することから細胞賦活剤としての使用が可能であり、また、該作用及び紫外線防御効果、メラニン生成の抑制効果、活性酸素消去効果とも併せて、皮膚老化防止剤、美白剤としての使用も可能であり、当然のことながらメラニン阻害剤としての使用も可能である。
本発明の皮膚外用剤組成物は、医薬用に用いる場合には、ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物及び製薬上許容される担体を含有してなる組成物であり、化粧料や洗浄剤用に用いられる場合いは、ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物及び化粧学的に許容される担体を含有してなる組成物である。本発明の皮膚外用剤組成物は、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の化粧品、医薬部外品及び医薬品等の皮膚外用剤に用いられる他の任意の成分、例えば、活性酸素除去成分、抗酸化成分、抗炎症成分、紫外線防止成分及び保湿成分よりなる群から選ばれる成分の一種又は二種以上を含有することもできる。
本発明の皮膚外用剤組成物は、各種の担体、例えば、ワセリンやマイクロクリスタリンワックス等の炭化水素類、ホホバ油や鯨蝋等のエステル類、牛脂やオリーブ油等のトリグリセライド類、ステアリン酸やオレイン酸等の脂肪酸、グリセリンや１，３−ブタンジオール等の多価アルコール類、油分、湿潤剤、界面活性剤、防腐剤、香料、水、アルコール、その他の基剤、増粘剤等を必要に応じて、適宜配合して、常法により製造することができる。
本発明の皮膚外用剤組成物に含有される活性酸素除去成分としては、スーパーオキサイドディスムターゼ（ＳＯＤ）、マンニトール、カロテノイド類、アスタキサンチン、ルチン及びその誘導体、ピリルビン、コレステロール、トリプトファン、ヒスチジン、クエルセチン、クエルシトリン、カテキン及びその誘導体、没食子酸及びその誘導体、グルタチオン及びその誘導体、オウゴン抽出物、イチョウ抽出物、ケイケットウ抽出物、サンザシ抽出物、マイカイカ抽出物、ユキノシタ抽出物、メリッサ抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ボタンピ抽出物、パセリ抽出物、トルメンチラ抽出物、羅漢果抽出物、ヤシャジツ抽出物、ジコッピ抽出物、ステビア抽出物並びにエイジツ抽出物よりなる群から選ばれる一種または二種以上が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤組成物に含有される抗酸化成分としては、マンニトール、ルチン及びその誘導体、クエルセチン、リン脂質、ピリドキシン類、フラボノイド類、ポリフェノール化合物、イチョウ抽出物、ユキノシタ抽出物、ビタミンＡ類及びそれらの誘導体、ビタミンＢ類及びそれらの誘導体、ビタミンＣ類及びそれらの誘導体、ビタミンＤ類及びそれらの誘導体、ビタミンＥ類及びそれらの誘導体、ジブチルヒドロキシトルエン並びにブチルヒドロキシアニソールよりなる群から選ばれる一種または二種以上が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤組成物に含有される抗炎症成分としては、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、メフェナム酸及びその誘導体、フェニルブタゾン及びその誘導体、インドメタシン及びその誘導体、イブプロフェン及びその誘導体、ケトプロフェン及びその誘導体、アラントイン及びその誘導体、グアイアズレン及びその誘導体、ε−アミノカプロン酸、ジクロフェナクナトリウム、トラネキサム酸及びその誘導体、アシタバ抽出物、アルニカ抽出物、アロエ抽出物、イブキトラノオ抽出物、ウコン抽出物、オトギリソウ抽出物、オウバク抽出物、カミツレ抽出物、カンゾウ抽出物、キンギンカ抽出物、クレソン抽出物、コンフリー抽出物、ゴカヒ抽出物、サルビア抽出物、シコン抽出物、シソ抽出物、シラカバ抽出物、チャ抽出物、トウキンセンカ抽出物、ニワトコ抽出物、ホオウ抽出物、ムクロジ抽出物、ヨモギ抽出物、ユーカリ抽出物、トウキ抽出物並びにレンゲソウ抽出物、よりなる群から選ばれる一種または二種以上が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤組成物に含有される紫外線防止成分としては、パラアミノ安息香酸（ＰＡＢＡ）、ＰＡＢＡエチル、ＰＡＢＡグリセリル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡアミル、Ｎ，Ｎ−ジメチルＰＡＢＡ−２−エチルヘキシル、サリチル酸−２−エチルヘキシル、サリチル酸エチレングリコール、サリチル酸ホモメンチル、４−メトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル、４−メトキシケイ皮酸エトキシエチル、４−メトキシケイ皮酸カリウム、４−５−ジイソプロピルケイ皮酸メチル、ジパラメトキシケイ皮酸モノ−２−エチルヘキサン酸グリセリル、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノンスルホン酸ナトリウム、２，２’−ジヒドロキシ−４，４’−ジメトキシベンゾフェノン、２，２’−ジヒドロキシ−４，４’−ジメトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸ナトリウム、２−４−ジヒドロキシベンゾフェノン、２，２’，４，４’−テトラヒドロキシベンゾフェノン、２−（２−ヒドロキシ−５−メチルフェニル）−ベンゾトリアゾール、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、４−ｔ−ブチル−４’−メトキシ−ジベンゾイルメタン、酸化チタン、酸化亜鉛、酸化鉄、酸化セリウム並びに酸化ジルコニウムよりなる群から選ばれる一種または二種以上が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤組成物に含有される保湿成分としては、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン及びケラタン硫酸から選ばれるムコ多糖類及びそれらの誘導体；コラーゲン、エラスチン、フィブロネクチン、ケラチンから選ばれるタンパク質及びそれらの誘導体並びに加水分解物；グリシン、アラニン、バリン、イソロイシン、セリン、スレオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アスパラギン、グルタミン、リジン、ヒドロキシリジン、アルギニン、システィン、シスチン、メチオニン、フェニルアラニン、チロシン、プロリン、ヒドロキシプロリン、テアニン、オルチニン、シトルリン、ピロリドンカルボン酸から選ばれるアミノ酸及びそれらの誘導体；ソルビトールエリスリトール、マルトース、マルチトール、キシリトール、キシロース、トレハロース、イノシトール、グルコース、ペンタエリスリトール、果糖、蔗糖及びそのエステル、デキストリン及びその誘導体から選ばれる糖類；ムチン、Ｄ−パンテノール及びその誘導体、尿素、リン脂質、糖脂質並びにセラミド、深層水、ハチミツ、黒砂糖抽出物、アロエ抽出物、海藻抽出物、マルメロ抽出物、ハマメリス抽出物、ヘチマ抽出物、ゼニアオイ抽出物、リンゴ抽出物、グレープフルーツ抽出物、プルーン抽出物、ライム抽出物、ユズ抽出物、ボダイジュ抽出物、キイチゴ抽出物、クララ抽出物、モッカ抽出物、小麦胚芽抽出物、インチンコウ抽出物、シラユリ抽出物、ホップ抽出物、ペパーミント抽出物、ドクダミ抽出物、シャクヤク抽出物、ヨクイニン抽出物、ラベンダー抽出物、カラスムギ抽出物、ブッチャーズブルーム抽出物、アルテア抽出物、ブクリョウ抽出物、イラクサ抽出物、ウイキョウ抽出物、キウイ抽出物、キュウリ抽出物、ブドウ抽出物、サボテン抽出物、ジオウ抽出物、スギナ抽出物、センキュウ抽出物、ソウハクヒ抽出物、タチジャコウソウ抽出物、マロニエ抽出物、モモ抽出物、バラ抽出物、アンズ抽出物、トウモロコシ抽出物、ショウガ抽出物、レモン抽出物、オレンジ抽出物、イチゴ抽出物、ゲンチアナ抽出物、ウスベニアオイ抽出物、サイシン抽出物、ゴボウ抽出物、ハウチマメ抽出物、イナゴマメ抽出物、キヅタ抽出物、マツ抽出物、ヤグルマソウ抽出物、ワレモコウ抽出物、オノニス抽出物、ゲンチアナ抽出物、アマチャ抽出物、フクタンポポ抽出物、クインスシード抽出物並びにグリセリン、１，３−ブチレングリコールよりなる群から選ばれる一種または二種以上が挙げられる。
本発明の皮膚外用剤組成物には、さらに、他の美白作用を有する成分及び細胞賦活作用を有する成分を適宜配合することもできる。
上記美白作用を有する成分としては、ビタミンＣ及びその誘導体並びにそれらの塩、胎盤抽出物、甘草抽出物、ヨクイニン抽出物、アスパラガス抽出物、エイジツ抽出物、キイチゴ抽出物、クジン抽出物、ケイケットウ抽出物、ゴカヒ抽出物、コメヌカ抽出物、小麦胚芽抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、シラユリ抽出物、シャクヤク抽出物、大豆抽出物、緑茶、紅茶、ウーロン茶等の茶抽出物、糖蜜抽出物、ビャクレン抽出物、ブナの芽抽出物、ブドウ抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ抽出物、モッカ抽出物及び羅漢果抽出物、オウゴン抽出物、海藻抽出物等が挙げられる。
また、上記細胞賦活作用を有する成分としては、ビタミンＡおよびその誘導体、クエン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、グリコール酸、コハク酸、セリン、グルタミン酸、ヒドロキシプロリン、テアニン、ピロリドンカルボン酸、酵母抽出物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物、醗酵代謝抽出物等が挙げられる。これらの細胞賦活剤のうち、特に好ましいものとしては、ビタミンＡおよびその誘導体、クエン酸、乳酸、リンゴ酸、セリン、ピロリドンカルボン酸が挙げられる。
また、本発明の皮膚外用剤組成物は、外皮に適用される化粧料、頭皮頭髪用組成物、皮膚洗浄剤組成物、医薬品、医薬部外品等に広く適用することが可能であり、その剤型も、皮膚に適用できるものであればいずれでもよく、溶液系、化粧水などの可溶化系、乳液及びクリームなどの乳化系、粉末分散系、水−油二層系、水−油−粉末三層系、分散液、軟膏、ゲル、エアゾール等、従来の皮膚外用剤に用いられている任意の剤型が適用される。これらを調製するにあたっては、使用する成分の種類及び分量は、常法に従って当業者が適宜定め得る範囲で調整することが可能である。
また、本発明の皮膚外用剤組成物の使用形態も任意であり、例えば化粧水、乳液、クリーム、パック等のフェーシャル化粧料やファンデーションの他、ファンデーション、おしろい、口紅、リップクリーム、その他のメーキャップ化粧料、特殊用途化粧料、身体用化粧料、日焼け止め又は日焼けケア用化粧料、頭皮及び毛髪用化粧料、芳香化粧料、洗顔料、頭髪用（頭皮用及び毛髪用）化粧料、身体用洗浄剤、頭髪用（頭皮用及び毛髪用）洗浄剤、髭剃り用化粧料、浴用化粧料等に用いることができる。
なお、本発明の皮膚外用剤が上記の剤型および使用形態に採り得る形態は、上記に限定されるものではない。
実施例
以下、試験例及び実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明はこれらにより何ら限定されるものではない。
ケフィア・グレインによる乳発酵産物が有する細胞に対する各種効果を調べるために、下記の試験を行った。各試験のために、まずサンプルの調製を行った。乳発酵産物ケフィアの固形物を遠心して沈殿物を除いた後に、０．４５μｍのフィルターに通し、ミニカラムＮＡＰ−２５にかけ、分子量５０００以上を素通り画分とし、５０００以下をＦｒ．１、２、３及び４に分画した。
試験例１：ケフィアの細胞賦活試験（１）
ＤＮＡは、ＤＮＡ複製エラー及び組み換えにより常にミスマッチ変異を抱えている。このミスマッチ変異を修復するミスマッチ修復遺伝子（ｈＭＬＨ１、ｈＰＭＳ１、ｈＰＭＳ２、ｈＭＳＨ２、ｈＭＳＨ３、ｈＭＳＨ６）が知られている。これらのミスマッチ修復遺伝子が変異を起こすとゲノムが不安定化し、細胞が癌化する危険がある。
分子量５０００以上とＦｒ．３のサンプルをヒト悪性黒色種細胞株ＨＩＶ−Ｉに添加して１５時間培養した。ミスマッチ修復遺伝子であるｈＭＬＨ１、ｈＰＭＳ１、ｈＰＭＳ２のｍＲＮＡの発現量をＲＴ−ＰＣＲ法によって解析したところ、添加した細胞では発現量の増加が確認された。結果を第１図〜第４図に示す。
試験例２：ケフィアの細胞賦活試験（２）
試験例１で調製したＦｒ．３をヒト悪性黒色種細胞株ＨＩＶ−Ｉに添加して１５時間培養したミスマッチ修復遺伝子の１つｈＭＬＨ１の蛋白の発現量をウェスタンブロッティング法によって解析したところ、ケフィアを添加した細胞では発現量の増加が確認された。結果を第５図及び第６図に示す。
試験例３：ケフィアのＰＣＮＡ増加試験
ＰＣＮＡ（増殖細胞核抗原：ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇｃｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉｇｅｎ）は、細胞増殖や修復に大きく関わる分子であり、ＰＣＮＡを欠損する細胞には修復機能に重大な欠陥があることが知られている。
Ｆｒ．３をヒト悪性黒色種細胞株ＨＩＶ−Ｉに添加して１５時間培養した。ＰＣＮＡの蛋白の発現量をウェスタンブロッティング法によって解析したところ、ケフィアを添加した細胞では発現量の増加が確認された。結果を第７図及び第８図に示す。
試験例４：ミスマッチ修復遺伝子ｈＭＬＨ１の発現増強試験
（１）Ｆｒ．３、３ｍｌを陰イオン交換樹脂カラムであるＤＥＡＥ、３ｍｌにかけ、吸着した物質をＮａＣｌで溶出し、脱塩してヒト悪性黒色種細胞株ＨＩＶ−Ｉに添加して１５時間培養したところ、ミスマッチ修復遺伝子ｈＭＬＨ１のｍＲＮＡの発現量を増強する効果がＲＴ−ＰＣＲ法によって確認された。溶出の手順は以下のとおり。

対照（ｃｏｎｒｏｌ）から得られた値を１としたときの、各サンプルの相対値は次のようになる。第１０図にグラフにして示した。

（２）Ｆｒ．３、３ｍｌを陽イオン交換樹脂カラムであるＤＥＡＥ、３ｍｌにかけ、吸着した物質をＮａＣｌで溶出し、脱塩してヒト悪性黒色種細胞株ＨＩＶ−Ｉに添加して１５時間培養したところ、ミスマッチ修復遺伝子ｈＭＬＨ１のｍＲＮＡの発現量を増強する効果がＲＴ−ＰＣＲ法によって確認された。溶出の手順は以下のとおり。

対照（ｃｏｎｒｏｌ）から得られた値を１としたときの、各サンプルの相対値は次のようになる。第１２図にグラフにして示した。

（３）Ｆｒ．３を疎水性カラムに替え、吸着した物質をＮａＣｌで溶出し、脱塩してヒト悪性黒色種細胞株ＨＩＶ−Ｉに添加して１５時間培養したところ、ミスマッチ修復遺伝子ｈＭＬＨ１のｍＲＮＡの発現量を増強する効果がＲＴ−ＰＣＲ法によって確認された。溶出の手順は以下のとおり。

対照（ｃｏｎｒｏｌ）から得られた値を１としたときの、各サンプルの相対値は次のようになる。第１４図にグラフにして示した。

試験例５：ケフィアホエーのメラニン生成阻害能試験
ケフィア発酵液由来のケフィアホエーが持つ抗酸化作用がヒトメラノーマであるＳＫ−ＭＥＬのメラニン生成に与える影響について実験を行った。ケフィアホエーは培養細胞の系で用いるという観点から中和後に浸透圧を０．３００ｏｓｍｏｌ／ｋｇに調製したサンプルを用いた。
＜実験方法＞
ＳＫ−ＭＥＬを４×１０^５ｃｅｌｌｓ／ｍｌの細胞密度で５ｍｌｄｉｓｈに播種し２４時間培養した。前培養後、培地成分に対して、０％（コントロール）、０．１％、１％のケフィアホエーを含む培地に交換して更に２４時間培養した。細胞はトリプシン処理によって回収し、全ての条件について総細胞数が３×１０^６ｃｅｌｌｓとなるように希釈を行い、これを１．５ｍｌ容のチューブに回収した。これを遠心分離（５０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）し、細胞のペレットに１ＭＮａＯＨ４００μｌを加えて、１００℃で１０分間煮沸した。溶解物を充分に混和させ、１条件につき１００μｌずつ３点を９６ｗｅｌｌプレートにのせ、プレートリーダーで４０５ｎｍの吸光度を測定し、メラニン量を決定した。
＜結果＞
結果を表４及び第１５図に示す。この結果から、ケフィアホエーを添加した培地でメラノーマを培養すると、明らかにメラニンの生成を抑えることがわかった。

試験例６頭皮頭髪改善作用の試験
健常人２０名（男性１２名、女性８名）に乳発酵産物ケフィアを含んだ頭髪料を１ヶ月間試してもらった。毎日洗髪後、かゆいところを中心に地肌、髪の毛両方共に塗布して、毛髪のつや、頭皮のふけ、抜け毛、かゆみについて試験した。
結果は次の通りであった。

この結果、ケフィアを含有する頭髪料が、毛髪のつやを良くし、ふけを減らし、抜け毛を減らし、かゆみを防止できる頭皮頭髪用組成物として有効なことが判明した。
試験例７乳発酵産物ケフィアを含有したジェル（商品名：ケフラン）を使用してもらった結果は次の通りであった。
（１）２６才女性：今までほとんどの化粧水などは使う時に手にとり、指のアトピーの傷に付いた時、とびあがる程痛いので今回妹に勧められた時もまた痛いだろうなと心配していたんですが、全く痛くなくて、もちろん顔にも痛くなかったので、これから安心をして使っていけると思います。
（２）３４才女性：２人目の子供を出産した後、アトピーになってしまい、肌がとても敏感になりました。年齢的にもマイルドな使い心地のものでは物足りなくなり何か良いものを探していたところに購入し使っております。とても良いです。
（３）２３才女性：私はアトピー肌の為、なかなか自分に合った基礎化粧が見つからず、悩んでいましたけど、ケフランを使ってから肌の調子が非常に良くなりました。
（４）４５才女性：私は、日光過敏症で、顔等はメイクや帽子等で日射しをさえ切れますが手の甲、腕は時々太陽にあててしまうと夕方頃よりトリ肌のようになり猛烈なかゆみにおそわれるのですが、気付いた時早め早めにケフランを塗っておくと回復が早く、ひどいかゆみも楽になります。
実施例１：クリーム
＜配合成分（重量％）＞
（１）ポリオキシエチレン（４０Ｅ．Ｏ．）モノステアレート２．００
（２）グリセリンモノステアレート（自己乳化型）５．００
（３）ステアリン酸５．００
（４）ベヘニルアルコール０．５０
（５）スクワラン１５．００
（６）イソオクタン酸セチル５．００
（７）防腐剤適量
（８）１，３−ブチレングリコール５．００
（９）ケフィア濾過液１．００
（１０）納豆エキス１．００
（１１）ダイズエキス０．２０
（１２）ユキノシタエキス０．１０
（１３）キュウリエキス０．１０
（１４）カンゾウエキス０．１０
（１５）グリチルリチン酸ジカリウム０．０５
（１６）クワエキス０．０５
（１７）オウゴンエキス０．０５
（１８）ケラチン加水分解液１．００
（１９）香料適量
（２０）精製水残量
＜調製法＞
上記成分（１）〜（７）を７０℃にて加熱溶解する。次に、（８）、（２０）の一部を７０℃に加熱して、最初の溶解物に加えて、冷却しながら成分（９）〜（１８）、（１９）及び（２０）の残部を加え、クリームを得た。
実施例２：ローション
＜配合成分（重量％）＞
（１）グリセリン５．００
（２）１，３−ブチレングリコール６．５０
（３）ポリオキシエチレン（２０モル）ソルビタンモノラウリン酸エステル１．２０
（４）エチルアルコール８．００
（５）ケフィア濾過液１．００
（６）納豆エキス１．００
（７）防腐剤・抗酸化剤適量
（８）香料適量
（９）精製水残余
＜調製法＞
まず、上記成分（３）、（４）、（７）及び（８）を混合溶解し、次に、（１）、（２）、（５）、（６）及び（９）を混合溶解した。これらの混合溶解物を、さらに混合して均一にし、ローションを得た。
実施例３：乳液
＜配合成分（重量％）＞
（１）ステアリン酸１．５０
（２）セチルアルコール０．５０
（３）蜜ロウ２．００
（４）ポリオキシエチレン（２０モル）モノオレイン酸エステル１．００
（５）グリセリンモノステアリン酸エステル１．００
（６）エタノール１０．００
（７）アルブチン２０．００
（８）亜硫酸水素ナトリウム０．０３
（９）プロピレングリコール５．００
（１０）ケフィア濾過液１．００
（１１）納豆エキス１．００
（１２）ダイズエキス０．２０
（１３）ユキノシタエキス０．１０
（１４）キュウリエキス０．１０
（１５）カンゾウエキス０．１０
（１６）グリチルリチン酸ジカリウム０．０５
（１７）クワエキス０．０５
（１８）オウゴンエキス０．０５
（１９）香料適量
（２０）防腐剤・抗酸化剤適量
（２１）精製水残余
＜調製法＞
上記成分（２１）に（７）、（９）および（１０）〜（１８）を加え、加熱溶解して７０℃に保ち、これを水相とした。また、（６）に（１９）を加えて溶解して、これをアルコール相とした。一方、（１）〜（５）、（８）および（２０）を混合し、加熱融解して７０℃に保ち、これを油相とした。水相に油相を加え予備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した。これを撹拌しながらアルコール相を加えた。その後撹拌しながら３０℃まで冷却し、乳液を得た。
実施例４：ジェル剤
＜配合成分（重量％）＞
（１）１，３−ブチレングリコール５．００
（２）トレハロース液３．００
（３）ケフィア濾過液１．００
（４）納豆エキス１．００
（５）海藻エキス１．００
（６）尿素０．８０
（７）カルボキシビニルポリマー０．８０
（８）グリセリン０．５０
（９）リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウム０．５０
（１０）水酸化カリウム０．５０
（１１）フェノキシエタノール０．３０
（１２）カルボキシメチルセルロースナトリウム０．２０
（１３）ダイズエキス０．２０
（１４）ユキノシタエキス０．１０
（１５）キュウリエキス０．１０
（１６）カンゾウエキス０．１０
（１７）グリチルリチン酸ジカリウム０．０５
（１８）クワエキス０．０５
（１９）オウゴンエキス０．０５
（２０）精製水８４．７５
＜調製法＞
上記成分（２０）に（３）〜（８）、（１３）〜（１９）を均一に溶解して、これを水相とした。一方、（１）、（２）、（９）および（１１）を溶解し、これを水相に添加した。次いで、（１０）および（１２）で中和および増粘して、ジェルを得た。
実施例５：ピールオフ型パック
＜配合成分（重量％）＞
（１）９５％エタノール１０．００
（２）ポリオキシエチレン（１５モル）オレイルアルコールエーテル２．００
（３）防腐剤・抗酸化剤適量
（４）香料適量
（５）ホエイ１．００
（６）海藻エキス１．００
（７）グリチルリチン酸ジカリウム０．０５
（８）ポリビニルアルコール１２．００
（９）グリセリン３．００
（１０）ポリエチレングリコール１．００
（１１）精製水残余
＜調製法＞
８０℃にて上記成分（５）〜（１１）により水相を調製し、５０℃に冷却する。次いで、（１）〜（４）を室温で調製してアルコール相とし、水相に添加後、均一に混合し、放冷して、パック剤を得た。
実施例６：リキッドファンデーション
＜配合成分（重量％）＞
（１）ラノリン７．００
（２）流動パラフィン５．００
（３）ステアリン酸２．００
（４）セタノール１．００
（５）パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル３．００
（６）グリセリン５．００
（７）トリエタノールアミン１．００
（８）カルボキシメチルセルロース０．７０
（９）精製水残量
（１０）酸化チタン８．００
（１１）微粒子酸化チタン２．００
（１２）酸化亜鉛５．００
（１３）マイカ１５．００
（１４）タルク６．００
（１５）着色顔料６．００
（１６）ケフィア濾過液０．５０
（１７）クワエキス０．０５
（１８）オウゴンエキス０．０５
（１９）香料適量
＜調製法＞
まず、上記成分（１）〜（５）を混合溶解する。これに、（１０）〜（１５）を加え、均一に混合し、７０℃に保つ。次に（６）〜（９）を均一に溶解し、７０℃に保ち、先の溶解混合物に添加して、均一に乳化する。
これを冷却後、成分（１６）〜（１９）を添加してリキッドファンデーションを得た。
本発明に係る皮膚外用剤についての官能試験
ケフィア・グレインによる乳発酵産物を含有した皮膚外用剤を、女性２０名に３ヶ月間、朝晩の洗顔後、顔全体に使用して、医師の立ち会いの下、その有効性を試験した。
Ｉ．肌の乾燥
１．著効１１名
２．有効６名
３．不変５名
４．悪化０名
ＩＩ．シミへの有効性
１．著効６名
２．有効９名
３．不変４名
４．悪化１名
ＩＩＩ．肌のはり
１．著効３名
２．有効８名
３．不変８名
４．悪化１名
上記の試験より明らかなように、本発明による皮膚外用剤は、安全で肌の乾燥、シミ、はりに有効であり、皮膚の細胞活性を高めることがわかる。
産業上の利用可能性
ケフィア・グレインから得られた乳発酵産物は、保湿効果を始めとし、紫外線防御効果、メラニン生成の抑制効果、活性酸素消去効果など様々な有用性を示す。熱に対しても安定性を示し、フィルター除菌などが可能なため、安定した皮膚外用剤、特に化粧料原料としての可能性を有する。但し、独特の酵母発酵臭、乳酸発酵臭を持ち、ｐＨが４．２０〜４．４０となっているため、他の化粧料原料との適当な配合により、心地よい使用感及びケフィア・グレインによる乳発酵産物本来の効果効能を発揮すると考えられる。
【図面の簡単な説明】
第１図は、試験例１の結果を示す図面に代わる写真である。
第２図は、試験例１の結果を示すグラフである（ｈＭＬＨ１）。
第３図は、試験例１の結果を示すグラフである（ｈＰＭＳ１）。
第４図は、試験例１の結果を示すグラフである（ｈＰＭＳ２）。
第５図は、試験例２の結果を示す図面に代わる写真である。
第６図は、試験例２の結果を示すグラフである（ｈＭＬＨ１）。
第７図は、試験例３の結果を示す図面に代わる写真である。
第８図は、試験例３の結果を示すグラフである。
第９図は、試験例４（１）の結果を示す図面に代わる写真である。
第１０図は、試験例４（１）の結果を示すグラフである。
第１１図は、試験例４（２）の結果を示す図面に代わる写真である。
第１２図は、試験例４（２）の結果を示すグラフである。
第１３図は、試験例４（３）の結果を示す図面に代わる写真である。
第１４図は、試験例４（３）の結果を示すグラフである。
第１５図は、試験例５の結果を示すグラフである。 Technical field
The present invention relates to an external preparation for skin containing a fermented milk product obtained from kefir grains. More specifically, the present invention relates to a skin external preparation containing kefir and / or kefir whey, which is a milk fermentation product of kefir grains. The external preparation for skin of the present invention is a cosmetic, anti-scalp composition, skin cleansing composition, composition for treating skin diseases, which has an excellent cell activation effect, skin aging prevention effect, whitening effect, melanin production inhibiting ability, etc. It is extremely useful as a product.
Background art
Skin activity is greatly influenced not only by the internal environment such as aging but also by the external environment such as ultraviolet rays and various stimuli, and it tends to cause rough skin, wrinkles, spots, dullness, and other troubles. Various skin activating components have been studied for improving these problems. In particular, many studies have been conducted on cell activation components and whitening components. The cell activation component promotes cell division, enhances metabolism, and exhibits an effect of maintaining the body in a healthy state. Moreover, in the skin, when the keratinocytes of the epidermis are activated in the skin, the old keratin is exfoliated, and the keratinization process called turnover is arranged to improve the skin into a healthy and beautiful state.
Kefir is a traditional milk fermentation product from the Caucasus region. It is a yogurt-like beverage obtained by fermenting animal milk using a starter called kefir grain (also called kefir granule) as a starter. there were. Such a transparent liquid portion of the yogurt-like milk fermentation product is particularly called kefir whey. The kefir may be in a dry form from which most of the water has been removed, or in a gel form containing a relatively large amount of water. A method for producing dry kefir is described in JP-A-62-83842, and a method for producing kefir whey is described in JP-A-2-219538. In this specification, all the descriptions of these documents are taken in.
Furthermore, recently, not only as a kefir health food, but also in research on application to pharmaceutical use, focusing on its excellent health effect (JP-A-5-320069 and JP-A-6-66). No. 211668, JP-A-9-37711, JP-A-9-191852, etc.). Many of these studies and developments were aimed at orally ingesting kefir-containing foods and medicines.
However, despite its excellent efficacy, kefir is originally a fermented milk drink, and due to its unique odor and pH characteristics (about 4.20-4.40) etc. It has been difficult to apply to external preparations, especially cosmetics where the feeling of use is important, compared to ordinary yogurt products.
On the other hand, the concept of health has increased in diversity, and has included not only the spirit and body, but also external parts such as skin, which has conventionally been a beauty area. In order to maintain such a broad sense of health, in addition to pharmaceuticals that are expected to have immediate effects, various products that are mild in action but high in safety and can be easily incorporated into daily life are desired.
Disclosure of the invention
In view of such circumstances, the present inventors have considered the safety, heat stability, and cell activation effect on skin of a fermented milk product obtained from kefir grains that have been traditionally used as foods for enhancing health. In view of the above, the present invention has been completed by overcoming the above drawbacks and utilizing the characteristics of the fermented milk product.
That is, the present invention relates to a skin external preparation composition comprising a fermented milk product obtained from kefir grains and a pharmaceutically or cosmetically acceptable carrier. The present invention further provides a cosmetic composition containing one or more components selected from the group consisting of an active oxygen removing component, an antioxidant component, an anti-inflammatory component, an ultraviolet ray preventing component and a moisturizing component, for scalp and hair. The present invention relates to an external preparation composition for skin such as a composition and a skin cleansing composition. Furthermore, the present invention relates to a cell activator, a skin antiaging agent, a whitening agent, or a melanin production inhibitor containing the fermented milk product.
In addition, the present invention applies an effective amount of a fermented milk product obtained from kefir grains to the skin to activate skin cells, prevent skin aging, inhibit skin melamine biosynthesis, And / or a method of whitening the skin. Preferred examples of this method of the invention include a method for makeup or cleansing the skin, a method for makeup or cleansing the scalp and / or hair, a method for treating the skin of patients with skin diseases, etc. .
Further, the present invention relates to the use of a fermented milk product obtained from kefir grains for producing a skin external preparation composition.
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The fermented milk product obtained from kefir grains used in the present invention is an inoculum called kefir grains, which is an animal milk, soy milk, and soy milk by granular fungi in which at least 5 to 6 functions such as lactic acid and yeast are combined. It is obtained by fermenting skim milk powder or the like. When kefir grains are placed in animal milk such as cow milk or goat milk, soy milk, skim milk powder, etc., both lactic acid fermentation by lactic acid bacteria and alcohol fermentation by yeast are performed. Unlike yogurt, where only lactic acid bacteria are fermented, the fermented milk product of kefir grains exhibits a slightly irritating flavor in addition to the acidity and faint alcohol flavor due to the carbon dioxide produced by the yeast. In addition, the fermented milk product is rich in nutrients such as lactose, peptides, amino acids, lactic acid, vitamins, and minerals, and has an excellent effect on the body.
The fermented milk product used in the present invention may be obtained by fermenting ordinary animal milk. Examples of animal milk include milk from cows, horses, sheep, goats, buffalos and the like. The method for producing fermented products from these animal milks is not particularly limited, and is produced by fermenting kefir grains using ordinary milk as raw material, and using horse milk used in Eastern Europe. A fermented milk product obtained by fermenting with kefir grains using milk as a raw material is particularly preferably used (see JP-A-62-83842).
It is also possible to produce a fermented milk product obtained from kefir grains using ordinary soy milk or skim milk powder.
In the kefir and kefir whey of the present invention, the yogurt-like product of the above-mentioned milk fermented product or its dried component is referred to as kefir, and the transparent liquid component obtained from the yogurt is referred to as kefir whey. Preferable examples of the fermented milk product obtained from kefir grains used in the present invention may be kefir or kefir whey, or a mixture of both.
Kefir, one of the fermented milk products obtained from kefir grains used in the present invention, has various effects such as moisturizing effect, UV protection effect, melanin production suppression effect, active oxygen scavenging effect, cell activation effect, etc. It shows usefulness. Since it exhibits stability against heat and can be sterilized with a filter, it has the potential as a stable external preparation for skin, particularly as a cosmetic raw material. However, since it has a unique yeast fermentation odor and lactic acid fermentation odor and has a pH of 4.20 to 4.40, it can be combined with other cosmetic ingredients and cosmetic carriers to provide a comfortable feeling of use and the original kefir. It is considered that the effect is demonstrated.
The kefir used in the present invention may be yoghurt, or powder obtained by subjecting the yoghurt to a drying treatment such as freeze-drying, or a granulated product obtained by further processing and molding the powdered kefir. . Moreover, the liquid thing which processed these using water, buffer solution, alcohol, fats and oils, etc. may be used.
When using the above kefir as a skin external preparation, it is preferable to contain 0.01 to 3.00% by weight, particularly preferably 1.00 to 3.00% by weight in the total weight of the external preparation. .
The kefir whey used in the present invention is a transparent liquid component obtained from the yogurt-like product of the aforementioned milk fermentation products, also called whey, and lactose, peptides, amino acids, lactic acid, vitamins, It is rich in nutrients such as minerals, and is said to contain about half of the nutrients of raw milk. Of the kefir whey, the solid content is about 6% and the rest is moisture. Kefir whey contains more L-lactic acid than ordinary yogurt, and is attracting attention for its antibacterial action due to lactic acid bacteria. It is also known that kefir whey has a similar structure to NMF (natural moisturizing factor) in the skin's keratinocytes, so that it maintains the moisture of the skin and adjusts the pH to an ideal weak acidity. Furthermore, it has an excellent moisturizing effect and anti-allergic action, and is said to protect the skin from external irritation and bacteria.
However, in spite of these characteristics, kefir whey has been traditionally treated as waste material, and it has only recently been studied for effective use.
Kefir whey, which is a fermented milk product of kefir grains used in the present invention, has a moisturizing effect as well as the above kefir, various effects such as UV protection effect, melanin production suppression effect, active oxygen scavenging effect, cell activation effect, etc. Demonstrate usefulness. It is stable against heat and can be sterilized with a filter, so it has the potential as a stable cosmetic ingredient. However, because it has a unique yeast fermentation odor and lactic acid fermentation odor, and has a pH of 4.20 to 4.40, it provides a comfortable feeling of use by blending with other cosmetic ingredients and cosmetic carriers. And can demonstrate the original effect.
When the above kefir whey is used as a skin external preparation, it is preferable to contain 0.01 to 3.00% by weight, particularly 0.01 to 3.00% by weight in the total weight of the external preparation. preferable.
The fermented milk product obtained from the kefir grains can be used as a cell activator because it has a cell activating action as described above, whether it is kefir or kefir whey. It can be used as a skin aging inhibitor and a whitening agent in combination with an ultraviolet protective effect, a melanin production suppressing effect, and an active oxygen scavenging effect, and of course, can also be used as a melanin inhibitor.
The skin external preparation composition of the present invention is a composition comprising a fermented milk product obtained from kefir grains and a pharmaceutically acceptable carrier for use in medicine, and is a cosmetic or cleansing agent. When used for the purpose, it is a composition comprising a fermented milk product obtained from kefir grains and a cosmetically acceptable carrier. The skin external preparation composition of the present invention is within the range that does not impair the effects of the present invention, and other optional components used for skin external preparations such as normal cosmetics, quasi drugs and pharmaceuticals, for example, removal of active oxygen One or more components selected from the group consisting of a component, an antioxidant component, an anti-inflammatory component, an ultraviolet ray preventing component, and a moisturizing component can also be contained.
The skin external preparation composition of the present invention comprises various carriers, for example, hydrocarbons such as petrolatum and microcrystalline wax, esters such as jojoba oil and spermaceti, triglycerides such as beef tallow and olive oil, stearic acid and oleic acid. Fatty acids such as glycerin and 1,3-butanediol, oils, wetting agents, surfactants, preservatives, fragrances, water, alcohol, other bases, thickeners, etc. as necessary Thus, it can be appropriately blended and manufactured by a conventional method.
The active oxygen removing component contained in the composition for external use of skin of the present invention includes superoxide dismutase (SOD), mannitol, carotenoids, astaxanthin, rutin and derivatives thereof, pyrilvin, cholesterol, tryptophan, histidine, quercetin, quercitrin , Catechin and derivatives thereof, gallic acid and derivatives thereof, glutathione and derivatives thereof, green gon extract, ginkgo biloba extract, caquette extract, hawthorn extract, mica squid extract, saxifrage extract, melissa extract, gennoshoco extract, button pin Examples thereof include one or more selected from the group consisting of an extract, a parsley extract, a tormentilla extract, a rahan fruit extract, a yashajitsu extract, a dicoppi extract, a stevia extract and an age extract.
Antioxidant components contained in the external preparation for skin of the present invention include mannitol, rutin and derivatives thereof, quercetin, phospholipids, pyridoxines, flavonoids, polyphenol compounds, ginkgo biloba extract, saxifrage extract, vitamin A And their derivatives, vitamin Bs and their derivatives, vitamin Cs and their derivatives, vitamin Ds and their derivatives, vitamin Es and their derivatives, dibutylhydroxytoluene and butylhydroxyanisole 1 type or 2 types or more are mentioned.
Anti-inflammatory components contained in the skin external preparation composition of the present invention include glycyrrhizic acid and its derivatives, glycyrrhetinic acid and its derivatives, mefenamic acid and its derivatives, phenylbutazone and its derivatives, indomethacin and its derivatives, ibuprofen and Derivatives thereof, ketoprofen and derivatives thereof, allantoin and derivatives thereof, guaiazulene and derivatives thereof, ε-aminocaproic acid, diclofenac sodium, tranexamic acid and derivatives thereof, ashitaba extract, arnica extract, aloe extract, ibukitorano extract, turmeric Extract, Hypericum extract, Prunus extract, Chamomile extract, Licorice extract, Kingfish extract, Watercress extract, Comfrey extract, Carp extract, Salvia extract, Pichi extract, Perilla extract, Perilla extract One or two selected from the group consisting of hippopotamus extract, tea extract, ginseng extract, elderberry extract, cinnamon extract, mugwort extract, mugwort extract, eucalyptus extract, toki extract and forsythia extract More than species.
Examples of the ultraviolet ray preventing component contained in the external preparation for skin of the present invention include paraaminobenzoic acid (PABA), PABA ethyl, PABA glyceryl, N, N-dimethyl PABA amyl, N, N-dimethyl PABA-2-ethylhexyl, 2-ethylhexyl salicylate, ethylene glycol salicylate, homomenthyl salicylate, 2-methoxyhexyl 4-methoxycinnamate, ethoxyethyl 4-methoxycinnamate, potassium 4-methoxycinnamate, methyl 4-5-diisopropylcinnamate Glyceryl di-2-methoxycinnamate mono-2-ethylhexanoate, 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone, 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone sulfonic acid, sodium 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone sulfonate, 2, 2 -Dihydroxy-4,4'-dimethoxybenzophenone, 2,2'-dihydroxy-4,4'-dimethoxybenzophenone-5-sulfonic acid sodium salt, 2-4-dihydroxybenzophenone, 2,2 ', 4,4'-tetra Hydroxybenzophenone, 2- (2-hydroxy-5-methylphenyl) -benzotriazole, urocanic acid, ethyl urocanate, 4-t-butyl-4′-methoxy-dibenzoylmethane, titanium oxide, zinc oxide, iron oxide, One type or two or more types selected from the group consisting of cerium oxide and zirconium oxide may be mentioned.
The moisturizing component contained in the skin external preparation composition of the present invention includes mucopolysaccharides selected from hyaluronic acid, chondroitin sulfate, dermatan sulfate, heparan sulfate, heparin and keratan sulfate; and their derivatives; collagen, elastin, fibronectin, Proteins selected from keratin and their derivatives and hydrolysates; glycine, alanine, valine, isoleucine, serine, threonine, aspartic acid, glutamic acid, asparagine, glutamine, lysine, hydroxylysine, arginine, cystine, cystine, methionine, phenylalanine, Amino acids selected from tyrosine, proline, hydroxyproline, theanine, ortinin, citrulline, pyrrolidone carboxylic acid and their derivatives; sorbitol erythritol, mal Sugar, maltitol, xylitol, xylose, trehalose, inositol, glucose, pentaerythritol, fructose, sucrose and esters thereof, dextrin and derivatives thereof; mucin, D-pantenol and derivatives thereof, urea, phospholipid, Glycolipids and ceramides, deep water, honey, brown sugar extract, aloe extract, seaweed extract, quince extract, hamamelis extract, loofah extract, mallow extract, apple extract, grapefruit extract, prune extract Lime extract, Yuzu extract, Bodaiju extract, Raspberry extract, Clara extract, Mokka extract, Wheat germ extract, Inchinkou extract, Shirayuri extract, Hop extract, Peppermint extract, Dokudami extract, Peonies extract, Yokuinin extract, La Extract, oat extract, butcher's bloom extract, altea extract, bukkake extract, nettle extract, fennel extract, kiwi extract, cucumber extract, grape extract, cactus extract, sorghum extract, sugi na Extract, Senkyu extract, Sakuhakuhi extract, Ginger extract, Maronnier extract, Peach extract, Rose extract, Apricot extract, Corn extract, Ginger extract, Lemon extract, Orange extract, Strawberry extract , Gentiana extract, Usenia oyster extract, Saisin extract, Burdock extract, Hauchi bean extract, Carob bean extract, Ivy extract, Pine extract, Cornflower extract, Walnut extract, Ononis extract, Gentian extract, Amateur extract, fukudanpopo extract, quince seed extract One or two or more selected from the group consisting of a product, glycerin and 1,3-butylene glycol can be mentioned.
In the external preparation for skin of the present invention, other components having a whitening effect and components having a cell activating effect can be appropriately blended.
As the above-mentioned components having a whitening action, vitamin C and its derivatives and salts thereof, placenta extract, licorice extract, yokuinin extract, asparagus extract, age extract, raspberry extract, cucumber extract, keiketto extract , Gokahi extract, Rice bran extract, Wheat germ extract, Saisin extract, Hawthorn extract, Shirayuri extract, Peonies extract, Soy extract, Green tea, black tea, tea extract such as oolong tea, molasses extract, Examples include a beechlen extract, a beech bud extract, a grape extract, a hop extract, a micaika extract, a mokka extract and a rahan fruit extract, an ogon extract, and a seaweed extract.
In addition, as the above-mentioned components having cell activation activity, vitamin A and its derivatives, citric acid, lactic acid, tartaric acid, malic acid, glycolic acid, succinic acid, serine, glutamic acid, hydroxyproline, theanine, pyrrolidone carboxylic acid, yeast extract Lactic acid bacteria extract, bifidobacteria extract, fermentation metabolic extract and the like. Among these cell activators, vitamin A and its derivatives, citric acid, lactic acid, malic acid, serine, and pyrrolidone carboxylic acid are particularly preferable.
Further, the skin external preparation composition of the present invention can be widely applied to cosmetics, scalp and hair compositions, skin cleansing compositions, pharmaceuticals, quasi-drugs and the like applied to the outer skin. The dosage form may be any as long as it can be applied to the skin, such as a solution system, a solubilizing system such as skin lotion, an emulsifying system such as emulsion and cream, a powder dispersion system, a water-oil two-layer system, a water-oil- Arbitrary dosage forms used in conventional external preparations for skin, such as a powder three-layer system, a dispersion, an ointment, a gel, and an aerosol, are applied. In preparing these, the types and amounts of the components used can be adjusted within a range that can be appropriately determined by those skilled in the art according to conventional methods.
The use form of the skin external preparation composition of the present invention is also arbitrary. For example, in addition to facial cosmetics and foundations such as skin lotions, emulsions, creams, packs, etc., foundations, funny, lipsticks, lip balms, and other makeup makeup. Cosmetics, special-use cosmetics, body cosmetics, sunscreen or sun-care cosmetics, scalp and hair cosmetics, aromatic cosmetics, face wash, scalp (for scalp and hair) cosmetics, body wash It can be used for agents for hair, scalp (for scalp and hair), shaving cosmetics, bath cosmetics, and the like.
In addition, the form which the skin external preparation of this invention can take in said dosage form and usage form is not limited above.
Example
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to test examples and examples, but the present invention is not limited thereto.
In order to examine various effects on the cells of the fermented milk product of kefir grains, the following tests were performed. Samples were first prepared for each test. The solid product of the fermented milk product kefir was centrifuged to remove the precipitate, passed through a 0.45 μm filter, passed through a minicolumn NAP-25, a molecular weight of 5000 or more was passed through, and 5000 or less was Fr. Fractionated into 1, 2, 3 and 4.
Test Example 1: Kefir cell activation test (1)
DNA always has mismatch mutations due to DNA replication errors and recombination. Mismatch repair genes (hMLH1, hPMS1, hPMS2, hMSH2, hMSH3, hMSH6) that repair this mismatch mutation are known. When these mismatch repair genes are mutated, the genome becomes unstable and there is a risk that the cells will become cancerous.
A molecular weight of 5000 or more and Fr. Three samples were added to human malignant melanoma cell line HIV-I and cultured for 15 hours. When the expression levels of mRNA of the mismatch repair genes hMLH1, hPMS1, and hPMS2 were analyzed by the RT-PCR method, an increase in the expression level was confirmed in the added cells. The results are shown in FIGS.
Test Example 2: Kefir cell activation test (2)
Fr. When the expression level of hMLH1, one of the mismatch repair genes cultured in human malignant melanoma cell line HIV-I for 15 hours, was analyzed by Western blotting, the expression level increased in cells to which kefir was added. Was confirmed. The results are shown in FIGS. 5 and 6.
Test Example 3: Kefir PCNA increase test
PCNA (proliferating cell nuclear antigen) is a molecule that is greatly involved in cell proliferation and repair, and it is known that cells lacking PCNA have a serious defect in repair function.
Fr. 3 was added to human malignant melanoma cell line HIV-I and cultured for 15 hours. When the expression level of PCNA protein was analyzed by Western blotting, an increase in the expression level was confirmed in cells to which kefir was added. The results are shown in FIGS. 7 and 8.
Test Example 4: Expression enhancement test of mismatch repair gene hMLH1
(1) Fr. 3, 3 ml was applied to DEAE, 3 ml of anion exchange resin column, the adsorbed substance was eluted with NaCl, desalted and added to human malignant melanoma cell line HIV-I and cultured for 15 hours. The effect of enhancing the expression level of the gene hMLH1 mRNA was confirmed by the RT-PCR method. The elution procedure is as follows.

The relative value of each sample when the value obtained from the control is 1 is as follows. The graph is shown in FIG.

(2) Fr. 3, 3 ml was applied to DEAE, 3 ml of cation exchange resin column, the adsorbed substance was eluted with NaCl, desalted, added to human malignant melanoma cell line HIV-I and cultured for 15 hours. The effect of enhancing the expression level of the gene hMLH1 mRNA was confirmed by the RT-PCR method. The elution procedure is as follows.

The relative value of each sample when the value obtained from the control is 1 is as follows. FIG. 12 is a graph.

(3) Fr. 3 was replaced with a hydrophobic column, the adsorbed substance was eluted with NaCl, desalted and added to the human malignant melanoma cell line HIV-I and cultured for 15 hours. The expression level of the mismatch repair gene hMLH1 mRNA was The enhancing effect was confirmed by RT-PCR method. The elution procedure is as follows.

Test Example 5: Kefir whey's ability to inhibit melanin production
Experiments were conducted on the effect of the antioxidant effect of kefir whey derived from kefir fermentation broth on the melanin production of SK-MEL, which is a human melanoma. Kefir whey used was a sample prepared by neutralizing the osmotic pressure to 0.300 osmol / kg after neutralization from the viewpoint of use in a cultured cell system.
<Experiment method>
SK-MEL 4 × 10⁵The cells were seeded at a cell density of cells / ml in a 5 ml dish and cultured for 24 hours. After the preculture, the medium was replaced with a medium containing 0% (control), 0.1%, and 1% kefir whey, and further cultured for 24 hours. Cells are harvested by trypsinization and the total cell count is 3 × 10 3 for all conditions.⁶The cells were diluted so as to become cells and collected in a 1.5 ml tube. This was centrifuged (5000 rpm, 10 min), 400 μl of 1M NaOH was added to the cell pellet and boiled at 100 ° C. for 10 minutes. The lysate was thoroughly mixed, and 100 μl per condition was placed on 3 points on a 96-well plate, the absorbance at 405 nm was measured with a plate reader, and the amount of melanin was determined.
<Result>
The results are shown in Table 4 and FIG. From this result, it was found that when melanoma was cultured in a medium supplemented with kefir whey, the production of melanin was clearly suppressed.

Test Example 6 Scalp hair improvement test
Twenty healthy persons (12 men and 8 women) tried hair hair containing a fermented milk product kefir for a month. After washing the hair every day, both the skin and the hair were applied mainly in the itchy area and tested for hair gloss, scalp dandruff, hair loss and itching.
The results were as follows.

As a result, it has been found that the hair preparation containing kefir is effective as a scalp hair composition that improves hair gloss, reduces dandruff, reduces hair loss, and prevents itching.
Test Example 7 The results of having used a gel (trade name: Keflan) containing a fermented milk product kefir were as follows.
(1) 26-year-old woman: I'm worried that most of my skin lotion will take it when I use it, and it will hurt so much that it will hurt when it touches my finger's atopic wound. I didn't hurt at all, and of course my face didn't hurt, so I think I can use it with peace of mind.
(2) 34-year-old woman: After giving birth to the second child, I became atopic and my skin became very sensitive. I bought it and used it where I was looking for something good with something that is mild in terms of age and not comfortable to use. very good.
(3) 23-year-old woman: I was struggling because I couldn't find the basic makeup that suits me for my atopy skin, but after using Keflan, my skin tone became very good.
(4) 45-year-old woman: I am sensitive to sunlight and my face is cut off even with sunlight with makeup and a hat, but the back of my hand and arms sometimes become more like bird skin than in the evening when exposed to the sun. It's easy to get rid of itching, but when you notice it, you can apply Keflan as soon as you know it, so you can recover quickly and it will be easier.
Example 1: Cream
<Contained ingredients (wt%)>
(1) Polyoxyethylene (40E.O.) monostearate 2.00
(2) Glycerol monostearate (self-emulsifying type) 5.00
(3) Stearic acid 5.00
(4) Behenyl alcohol 0.50
(5) Squalane 15.00
(6) Cetyl isooctanoate 5.00
(7) Preservative appropriate amount
(8) 1,3-butylene glycol 5.00
(9) Kefir filtrate 1.00
(10) Natto extract 1.00
(11) Soybean extract 0.20
(12) Yukinoshita extract 0.10
(13) Cucumber extract 0.10
(14) Daylily extract 0.10
(15) Dipotassium glycyrrhizinate 0.05
(16) Mulberry extract 0.05
(17) Ogon Extract 0.05
(18) Keratin hydrolyzate 1.00
(19) Fragrance proper amount
(20) Residual amount of purified water
<Preparation method>
The above components (1) to (7) are dissolved by heating at 70 ° C. Next, a part of (8), (20) is heated to 70 ° C., added to the first melt, and the remainder of components (9)-(18), (19) and (20) while cooling Was added to obtain a cream.
Example 2: Lotion
<Contained ingredients (wt%)>
(1) Glycerin 5.00
(2) 1,3-butylene glycol 6.50
(3) Polyoxyethylene (20 mol) sorbitan monolaurate 1.20
(4) Ethyl alcohol 8.00
(5) Kefir filtrate 1.00
(6) Natto extract 1.00
(7) Preservatives and antioxidants
(8) Perfume appropriate amount
(9) Purified water residue
<Preparation method>
First, the components (3), (4), (7) and (8) were mixed and dissolved, and then (1), (2), (5), (6) and (9) were mixed and dissolved. . These mixed lysates were further mixed and homogenized to obtain a lotion.
Example 3: Latex
<Contained ingredients (wt%)>
(1) Stearic acid 1.50
(2) Cetyl alcohol 0.50
(3) Beeswax 2.00
(4) Polyoxyethylene (20 mol) monooleate 1.00
(5) Glycerin monostearate 1.00
(6) Ethanol 10.00
(7) Arbutin 20.00
(8) Sodium bisulfite 0.03
(9) Propylene glycol 5.00
(10) Kefir filtrate 1.00
(11) Natto extract 1.00
(12) Soybean extract 0.20
(13) Yukinoshita extract 0.10
(14) Cucumber extract 0.10
(15) Daylily extract 0.10
(16) Dipotassium glycyrrhizinate 0.05
(17) Mulberry extract 0.05
(18) Ogon extract 0.05
(19) Fragrance proper amount
(20) Preservatives and antioxidants
(21) Residue of purified water
<Preparation method>
(7), (9) and (10) to (18) were added to the component (21), dissolved by heating and kept at 70 ° C., and this was used as an aqueous phase. Further, (19) was added to (6) and dissolved to obtain an alcohol phase. On the other hand, (1) to (5), (8) and (20) were mixed, heated and melted, and kept at 70 ° C. to obtain an oil phase. The oil phase was added to the aqueous phase for preliminary emulsification, and the mixture was uniformly emulsified with a homomixer. The alcohol phase was added while stirring. Thereafter, the mixture was cooled to 30 ° C. with stirring to obtain an emulsion.
Example 4: Gel agent
<Contained ingredients (wt%)>
(1) 1,3-butylene glycol 5.00
(2) Trehalose solution 3.00
(3) Kefir filtrate 1.00
(4) Natto extract 1.00
(5) Seaweed extract 1.00
(6) Urea 0.80
(7) Carboxyvinyl polymer 0.80
(8) Glycerin 0.50
(9) L-ascorbyl magnesium phosphate 0.50
(10) Potassium hydroxide 0.50
(11) Phenoxyethanol 0.30
(12) Sodium carboxymethyl cellulose 0.20
(13) Soybean extract 0.20
(14) Yukinoshita extract 0.10
(15) Cucumber extract 0.10
(16) Daylily extract 0.10
(17) Dipotassium glycyrrhizinate 0.05
(18) Mulberry extract 0.05
(19) Ogon Extract 0.05
(20) Purified water 84.75
<Preparation method>
(3) to (8) and (13) to (19) were uniformly dissolved in the component (20) to obtain an aqueous phase. On the other hand, (1), (2), (9) and (11) were dissolved and added to the aqueous phase. Subsequently, the gel was obtained by neutralizing and thickening with (10) and (12).
Example 5: Peel-off type pack
<Contained ingredients (wt%)>
(1) 95% ethanol 10.00
(2) Polyoxyethylene (15 mol) oleyl alcohol ether 2.00
(3) Preservatives and antioxidants
(4) Perfume appropriate amount
(5) Whey 1.00
(6) Seaweed extract 1.00
(7) Dipotassium glycyrrhizinate 0.05
(8) Polyvinyl alcohol 12.00
(9) Glycerin 3.00
(10) Polyethylene glycol 1.00
(11) Purified water residue
<Preparation method>
An aqueous phase is prepared from the above components (5) to (11) at 80 ° C. and cooled to 50 ° C. Next, (1) to (4) were prepared at room temperature to form an alcohol phase, added to the aqueous phase, and then uniformly mixed and allowed to cool to obtain a pack agent.
Example 6: Liquid foundation
<Contained ingredients (wt%)>
(1) Lanolin 7.00
(2) Liquid paraffin 5.00
(3) Stearic acid 2.00
(4) Cetanol 1.00
(5) Paramethoxycinnamic acid-2-ethylhexyl 3.00
(6) Glycerin 5.00
(7) Triethanolamine 1.00
(8) Carboxymethylcellulose 0.70
(9) Residual amount of purified water
(10) Titanium oxide 8.00
(11) Fine particle titanium oxide 2.00
(12) Zinc oxide 5.00
(13) Mica 15.00
(14) Talc 6.00
(15) Coloring pigment 6.00
(16) Kefir filtrate 0.50
(17) Mulberry extract 0.05
(18) Ogon extract 0.05
(19) Fragrance proper amount
<Preparation method>
First, the components (1) to (5) are mixed and dissolved. (10)-(15) is added to this, and it mixes uniformly, and keeps at 70 degreeC. Next, (6) to (9) are uniformly dissolved, kept at 70 ° C., added to the previous dissolution mixture, and uniformly emulsified.
After cooling this, components (16) to (19) were added to obtain a liquid foundation.
Sensory test for external preparation for skin according to the present invention
A skin external preparation containing a fermented milk product of kefir grain was used for 20 women for 3 months after face washing in the morning and evening, and the whole face was tested for effectiveness in the presence of a doctor.
I. Dry skin
1. 11 people
2. Valid 6 people
3. 5 people unchanged
4). 0 people
II. Effectiveness for stains
1. 6 people
2. Effective 9
3. 4 people unchanged
4). 1 worse
III. Skin beam
1. 3 people
2. Valid 8 people
3. 8 people unchanged
4). 1 worse
As is clear from the above test, it can be seen that the external preparation for skin according to the present invention is safe and effective for dry skin, spots, and abscissions, and increases the cellular activity of the skin.
Industrial applicability
The fermented milk product obtained from kefir grains exhibits various usefulness such as a moisturizing effect, an ultraviolet protection effect, an inhibitory effect on melanin production, and an active oxygen scavenging effect. Since it exhibits stability against heat and can be sterilized with a filter, it has the potential as a stable external preparation for skin, particularly as a cosmetic raw material. However, since it has a unique yeast fermentation odor and lactic acid fermentation odor, and has a pH of 4.20 to 4.40, it can be comfortably used and milk with kefir grains by appropriate blending with other cosmetic ingredients. It is thought that the original effect of fermented products is demonstrated.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a photograph replacing a drawing showing the results of Test Example 1.
FIG. 2 is a graph showing the results of Test Example 1 (hMLH1).
FIG. 3 is a graph showing the results of Test Example 1 (hPMS1).
FIG. 4 is a graph showing the results of Test Example 1 (hPMS2).
FIG. 5 is a photograph replacing a drawing showing the results of Test Example 2.
FIG. 6 is a graph showing the results of Test Example 2 (hMLH1).
FIG. 7 is a photograph replacing a drawing showing the results of Test Example 3.
FIG. 8 is a graph showing the results of Test Example 3.
FIG. 9 is a photograph replacing a drawing showing the results of Test Example 4 (1).
FIG. 10 is a graph showing the results of Test Example 4 (1).
FIG. 11 is a photograph replacing a drawing showing the results of Test Example 4 (2).
FIG. 12 is a graph showing the results of Test Example 4 (2).
FIG. 13 is a photograph replacing a drawing showing the results of Test Example 4 (3).
FIG. 14 is a graph showing the results of Test Example 4 (3).
FIG. 15 is a graph showing the results of Test Example 5.

Claims

A method for producing a fraction for a skin external preparation composition by passing kefir whey, which is a liquid component of a fermented milk product obtained from kefir grains, through a filter and fractionating a molecular weight of 5000 or less with a column.

The method according to claim 1, wherein the fraction for external preparation for skin composition is a fraction for enhancing the repair function of DNA mismatch mutation.

A fraction produced from kefir whey, which is a liquid component of a fermented milk product obtained from kefir grains by the method according to claim 1 or 2,
A fraction that passes through a 0.45 μm filter, has a molecular weight of 5000 or less, has a pH of 4.20 to 4.40, is adsorbed on an anion exchange resin column, and is eluted with NaCl.

A skin external preparation composition comprising the fraction according to claim 3 and a pharmaceutically or cosmetically acceptable carrier.

Furthermore, the skin external preparation composition of Claim 4 containing the 1 type (s) or 2 or more types of components chosen from the group which consists of an active oxygen removal component, an antioxidant component, an anti-inflammatory component, an ultraviolet-ray prevention component, and a moisturizing component.

The skin external preparation composition according to claim 4 or 5, wherein the fraction according to claim 3 is 0.01 to 3.00% by weight of the whole composition.

The skin external preparation composition according to any one of claims 4 to 6, wherein the skin external preparation composition is in the form of a liquid, emulsion, gel, cream, paste, or sheet.

The skin external preparation composition according to any one of claims 4 to 7, wherein the skin external preparation composition is a cosmetic composition.

The skin external preparation composition according to claim 8, wherein the cosmetic composition is a body cosmetic composition.

The skin external preparation composition according to claim 9, wherein the body cosmetic composition is a skin cleansing composition.

The skin external preparation composition according to any one of claims 4 to 7, wherein the skin external preparation composition is a composition for scalp and hair.

A cell activator comprising the fraction according to claim 3.

A skin aging inhibitor comprising the fraction according to claim 3.

A skin lightening agent comprising the fraction according to claim 3.

A melanin production inhibitor comprising the fraction according to claim 3.