JP4237375B2 - 虚血性疾患の処置又は予防に用いる医薬組成物 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ナトリウム利尿ペプチド受容体に作用し、細胞内ｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質を有効成分として含有する、細胞の虚血性壊死により生じる梗塞領域を縮小させるための医薬組成物に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
近年、社会の高齢化に伴い虚血性疾患が大きな問題になっている。特に循環器疾患である心臓疾患のうち心臓血管障害により生じる心筋梗塞は、冠状動脈の閉塞または急激な血流減少により心筋細胞の虚血性壊死を生じて心機能低下をもたらす生死にかかわる重篤な疾患である。心筋梗塞の直接的原因は、冠状動脈硬化や冠状動脈内の血栓形成による心筋への血流減少又は停止である。結果的に急性又は慢性の心機能不全が惹起される。
【０００３】
虚血性心疾患の治療においては、閉塞した冠状動脈を血管内挿入バルーンにより拡張させたり、ステントを血管内に挿入することにより血流を確保したり、血管内に生じた血栓を血栓溶解剤により溶解除去する方法が採用されている。このような治療においては、冠状動脈内に血流が再開されるに伴いＣａ過負荷やフリーラジカルが発生し、細胞の壊死領域が広がることが知られているが、このような虚血再灌流障害の発生を予防するのは困難であり、有効な治療方法が定まっていないのが現状である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、ナトリウム利尿ペプチド受容体に作用し、細胞内ｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質を有効成分として含有する、細胞の虚血性壊死により生じる梗塞領域を縮小させるための医薬組成物を提供する。詳しくは虚血性疾患の処置における虚血再灌流障害を抑制するための医薬組成物を提供する。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
ナトリウム利尿ペプチドであるｈＡＮＰは、利尿作用及び血管平滑筋細胞において弛緩作用のセカンドメッセンジャーと考えられているｃＧＭＰの産生を亢進して血管（例えば、冠動脈）の弛緩を惹起することにより血圧降下作用を有するため心不全の症状を軽減する対症療法剤として使用されている。
【０００６】
本発明者らは、更にナトリウム利尿ペプチドの特性について研究を行ったところ、当該ペプチドが、虚血再灌流を伴う急性心筋梗塞モデルにおいて生じる梗塞領域を縮小させうることを初めて見いだし本発明を完成した。
【０００７】
即ち、本発明は、ナトリウム利尿ペプチド受容体に作用し、細胞内ｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質であって、梗塞領域を縮小させる作用を有する物質を有効成分とする心筋梗塞等の虚血性疾患の処置又は予防に用いる医薬組成物に関する。なお、本発明において梗塞領域を縮小するとは梗塞領域の拡大を抑制することを意味する。
【０００８】
また、本発明は、ナトリウム利尿ペプチド受容体に作用し、細胞内ｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質であって、梗塞領域を縮小させる作用を有する物質を、虚血再灌流障害を抑制するために虚血性疾患患者に投与することからなる虚血性疾患の処置又は予防方法に関する。
【０００９】
ある物質が本発明に係る虚血性疾患の処置又は予防に用いる医薬組成物の有効成分となりうるか否かは、公知の方法、例えば、Minamitake, Y. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 172, 971-978 (1990); Furuya, M., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 170, 201-208 (1990); Furuya, M., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 177, 927-931 (1991); 日高寿範ら,日薬理誌, 101,309-325 (1993)等に記載される方法、を用いて調べることが出来る。
【００１０】
本発明に係る医薬組成物の有効成分として、好ましいものはナトリウム利尿ペプチドであり、その中でも、心房性ナトリウム利尿ペプチド（ＡＮＰ）および脳性利尿ペプチド（ＢＮＰ）が好ましく、最も好ましいのはＡＮＰである。
【００１１】
ＡＮＰとしては、２８個のアミノ酸よりなるヒト由来ＡＮＰ（human atrial natriuretic peptide; ｈＡＮＰ、Kangawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 118, p131, 1984)（配列番号：１）やラット由来ＡＮＰ (Kangawa et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 121, p585, 1984)（配列番号：２）を用いることができるが、本発明に係る有効成分のペプチドとしては、ＡＮＰのリング構造（Ｃｙｓに基づくジスルフィド結合の形成）およびリング構造に続くＣ末端部を有するペプチドであればよい。そのようなペプチドとしてはＡＮＰの７−２８位のアミノ酸残基を有するペプチド（配列番号：３）が挙げられる。更にカエル由来のＡＮＰ（配列番号：５）も挙げることができるが、上記のうちでも特にヒト由来ＡＮＰ（hANP）が好ましい。
【００１２】
ＢＮＰとしては、上記ＡＮＰと同様にジスルフィド結合の形成を伴う３２個のアミノ酸よりなるヒトＢＮＰ (Sudoh et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 159, p1420, 1989)（配列番号：４）等が挙げられる。ブタＢＮＰ（配列番号：６）、ラットＢＮＰ（配列番号：７）等ヒト以外のＢＮＰも種々知られており、同様に使用できる。更にニワトリＢＮＰ（配列番号：８）も挙げられる。
【００１３】
ＣＮＰとしては、上記ＡＮＰ及びＢＮＰと同様にジスルフィド結合の形成を伴う２２個のアミノ酸よりなるブタ由来ＣＮＰ（Sudoh et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol. 168, p863, 1990)（配列番号：９。ヒト及びラットも同じアミノ酸配列を有する）やニワトリ由来ＣＮＰ (Arimura et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol.174, p142, 1991)（配列番号：１０）、又はカエル由来ＣＮＰ (Yoshihara et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., Vol.173, p591, 1990)（配列番号：１１）等を挙げることができる。
【００１４】
更に、公知のナトリウム利尿ペプチド（例えば上記ヒト由来ＡＮＰ;ｈＡＮＰ）のアミノ酸配列に基づき、当業者であれば適宜公知の方法により、当該配列中のアミノ酸残基に欠失、置換、付加、挿入等の修飾及び／又は化学的修飾を施すことが可能であり、得られた化合物がＡＮＰの受容体に作用し、ｃＧＭＰ産生を亢進する活性を有する化合物であることを確認することができる。従って、そのような活性を有する誘導体は本発明の有効成分に含まれる。更に、本発明に係る物質としては、ナトリウム利尿ペプチド受容体に作用し、細胞内ｃＧＭＰ産生を亢進し得る物質であれば上記ペプチドに限定されるものではなく、非ペプチドの化合物であってもよい。
【００１５】
本発明に係る医薬組成物の有効成分は、遊離型であっても、その医薬的に許容し得る塩であってもよい。無機酸との塩としては、例えば塩酸、硫酸、リン酸との塩が挙げられ、あるいは有機酸との塩としては、例えばギ酸、酢酸、酪酸、コハク酸、クエン酸等との酸付加塩として用いることができる。塩は、ナトリウム、カリウム、リチウム、カルシウム等の金属塩、有機塩基による塩の形態であってもよい。
【００１６】
有効成分は、公知の薬理学的に許容し得る担体、賦形剤、希釈剤等と混合して医薬に一般に使用されている投与方法、例えば、経口投与方法、又は静脈内投与、筋肉内投与もしくは皮下投与等の非経口投与方法によって投与するのが好ましい。本発明の医薬組成物は、例えば、有効成分を生理学的に許容される担体、香味剤、賦形剤、安定剤等と、適宜混和することにより製造することができる。錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤などの経口投与用の固形剤を製造する場合、添加剤として、例えば、(1) 乳糖、デンプンまたは結晶セルロースなどの賦形剤、(2) ヒドロキシプロピルセルロースやポリビニルピロリドンのような結合剤、(3) デンプン、クロスカルメロースナトリウムのような崩壊剤、(4) マクロゴールやクエン酸トリエチルのような可塑剤、(5) ステアリン酸マグネシウムやタルクのような滑沢剤、(6) ヒドロキシプロピルメチルセルロース、オイドラギットなどのコーティング基剤、(7) 白糖やマンニトールのような矯味剤の他、矯臭剤、着色剤などを用いることができる。
【００１７】
また、注射剤、点眼剤または経鼻剤を製造する場合は、添加剤として、(1) 塩ナトリウム、Ｄ−マンニトール、Ｄ−ソルビトールなど等張化剤、(2) 塩酸、クエン酸などのｐＨ調整剤、(3) クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、ホウ酸などの緩衝剤、(4) 塩酸プロカインなど無痛化剤の他、安定化剤や界面活性剤を添加することができる。また有効成分の安定性などを考慮して、用時溶解または用時懸濁して使用する製剤とするか、または液剤とするかを選択することができる。
【００１８】
軟膏剤、パップ剤といった外用剤の製造には、(1) 流動パラフィン、ワセリン、親水軟膏などの基剤、(2) ポリソルベート８０、トラガントなどの乳化剤、(3) 安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸プロピルなどの保存剤、(4) 塩酸プロカインなど無痛化剤の他、安定化剤や界面活性剤を添加することができる。
【００１９】
有効成分がナトリウム利尿ペプチドの場合、経口投与では消化管内で分解を受けるため、この投与方法は一般的には効果的ではないが、消化管内で分解を受けにくい製剤、例えば活性成分であるペプチドをリポソーム中に包容したマイクロカプセル剤として経口投与することも可能である。また、直腸、舌下などの消化管以外の粘膜から吸収せしめる投与方法も可能である。この場合は座剤、舌下錠といった形態で投与することができる。
【００２０】
本発明の医薬組成物の投与量は、心筋梗塞患者又は心筋梗塞を起こすと予想される患者の年齢、体重、症状の程度および投与経路などによっても異なるが、有効成分がナトリウム利尿ペプチドの場合、持続静脈内投与においては0.01μg／kg／min〜0.2μg／kg／minの範囲で投与することができ、0.025μg ／kg／min〜0.1μg／kg／minで投与するのが好ましい。
【００２１】
【実施例】
以下の実施例により、ナトリウム利尿ペプチドであるｈＡＮＰが、虚血再灌流を伴う急性心筋梗塞モデルにおいて生じる心筋梗塞領域を縮小することを示す。
方法
体重１４−２３kgのビーグル成犬１２頭をペントバルビタールナトリウムで麻酔開胸し、ｈＡＮＰ（０．１μg ／kg／分）を左冠動脈前下行枝（ＬＡＤ）内に１０分間持続投与（i.c.投与）した後、ＬＡＤを９０分後に再灌流するまで完全に閉塞して虚血状態にした。再灌流の１０分前から１時間にわたり、再度ｈＡＮＰ（０．１μg ／kg／分）をＬＡＤ内に持続投与した。６時間の再灌流後、エバンスブルー染色によって梗塞危険領域を評価し、ＴＴＣ染色によって梗塞領域を評価した（Ａ群：５頭）。また、虚血８０分時に、心内膜側副血流量をマイクロスフェア法により測定した。
【００２２】
ｈＡＮＰの代わりに生理食塩水をＬＡＤ内に投与した群を対照群（Ｂ群：７頭）として設けた。
【００２３】
実験のプロトコールを図１に示す。図中、ＣＰＰは冠灌流圧(coronary perfusion pressure)を示し、試験開始前にはＬＡＤ内を血液が流れており、その後９０分間血流を途絶させ、再度血流を再開し３６０分目に試験を終了したことを示している。
【００２４】
また、本発明に係るｈＡＮＰの効果に対する虚血中の心内膜側副血流量、平均血圧及び心拍数の関与の有無を調べるために、それらの事項についても測定した。
結果
（１） 各試験群の左心室の心筋梗塞危険領域の大きさを図２に示す。試験群の間では心筋梗塞危険領域の大きさに有意差はなかった。
【００２５】
（２） 虚血再灌流を伴う急性心筋梗塞モデルにおいて、ｈＡＮＰ投与により心筋梗塞領域は縮小した。即ち、図３に示すとおり、対照群（Ｂ群）の心筋梗塞領域は、心筋梗塞危険領域の４１±３％であるのに対して、ｈＡＮＰ投与群（Ａ群）では２１±５％と有意に縮小した（図３）。
【００２６】
（３）各群間において、虚血中の心内膜側副血流量に差がないことを確認した。また、各群における心拍数及び平均血圧の変動を、試験開始５分後 、１０分後、虚血開始から９０分後及び再灌流開始から３６０分後 の各時点で測定した結果、ｈＡＮＰ投与により平均血圧、心拍数に変化が生じないことも確認した。
【００２７】
上記の事実から、ナトリウム利尿ペプチドの投与により虚血性疾患の処置における虚血再灌流障害が抑制されることが確認され、これにより心筋梗塞領域の縮小効果はナトリウム利尿ペプチドの心筋梗塞領域を縮小させる作用によるものであることが確認された。
【００２８】
【配列表】

【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例の急性心筋梗塞モデルを説明する図である。虚血再灌流の様子及び１）生理食塩水投与群（Ｂ群）、２）ｈＡＮＰ投与群（Ａ群）における投与の様式が示されている。
【図２】 図１の急性心筋梗塞モデルにおける各群の心筋梗塞危険領域を示す図である。
【図３】 各群の心筋梗塞危険領域に対する心筋梗塞領域の割合（％）を示す図である。

Claims (4)

1. ナトリウム利尿ペプチド又はその塩を有効成分とする、虚血性心疾患の処置における虚血再灌流により生じる梗塞の領域を縮小させるための医薬組成物。
2. ナトリウム利尿ペプチド又はその塩を有効成分とする、虚血性心疾患の処置において閉塞した冠状動脈内に血流が再開されるに伴い生じる梗塞領域の縮小のための医薬組成物。
3. 虚血性心疾患が心筋梗塞である場合の請求項１又は２記載の医薬組成物。
4. ナトリウム利尿ペプチドが心房性ナトリウム利尿ペプチドであることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載の医薬組成物。

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