JP3980952B2

JP3980952B2 - Enteric fat absorption inhibitor containing plant extract and food containing the same

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Publication number: JP3980952B2
Application number: JP2002199815A
Authority: JP
Inventors: 博司下田; 智恵吉野; 直樹笠島
Original assignee: Morishita Jintan Co Ltd
Current assignee: Morishita Jintan Co Ltd
Priority date: 2002-04-12
Filing date: 2002-07-09
Publication date: 2007-09-26
Anticipated expiration: 2022-07-09
Also published as: JP2004002254A; AU2003236084A1; WO2003086436A1; TW200401645A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、対象の胃液分泌を予め抑制する必要を伴わずに、奏効部位である十二指腸で優れた膵リパーゼ阻害作用および脂肪吸収抑制作用を発揮する、肥満や高脂血症の治療または予防に有効な腸溶性の脂肪吸収抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
肥満は、運動不足や過食など生活習慣の乱れ、遺伝的素因、そして基礎代謝の低下が原因と考えられており、さらに近年では、脂肪細胞から分泌されるレプチンの食欲制御機能が肥満と密接に関与していることも明らかになっている。過度の肥満は、糖尿病や心血管症(動脈硬化、脳卒中)などの生活習慣病を引き起こす要因ともなり得ることから、早期に速やかに治療する必要がある。
【０００３】
肥満の解消または治療策としては、1. 食欲を抑制すること、2.栄養素（特に脂肪）の吸収を抑制すること、3. 熱産生を増加させること、4. 脂質やタンパクの代謝を改善すること、そして5. 中枢の体重制御機構を調節することが挙げられ、それぞれ広範な研究が成されている。このうち、1.と2.に分類される肥満治療薬のみが臨床適用されているが、副作用が多く、安全性が未だ確立されていないため、世界的にも長期使用できる薬物は少ない。日本では、現在のところ1.に分類される食欲抑制剤マジンドール(mazindol)のみが承認されている。
【０００４】
これに対し、治療薬以外に前記2.の機能を発現するものが開発されている。例えば、食材中に前記2.の機能を有する成分を含有させたものは、最近の肥満者の増加やダイエット志向の上昇に伴い、注目されている。これは、治療薬のように処方箋を必要としないため、副作用ができるだけ少ないことが求められるが、容易に入手できるため、日常生活において摂取できるという利点を有する。
【０００５】
前記2.の機能を有する成分としては、健康食品などに最近多用されているカニの甲羅由来のキチン・キトサンや魚類の軟骨由来のコンドロイチン硫酸などが挙げられる。これらはいずれも、膵リパーゼ阻害活性能を有するため、摂取された脂肪が酵素加水分解されず、結果として腸管からの脂肪吸収が抑制される。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの成分は、その脂肪吸収抑制能は弱いために、日常の食生活において多量に摂取する必要があった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、少量の摂取で膵リパーゼの働きを抑制し、脂肪吸収抑制作用を発現し得る植物由来で安全な脂肪吸収抑制剤について研究を重ねた結果、セイジまたはローズマリーの葉から採取した抽出物がインビトロにおいて優れた膵リパーゼ阻害作用を示すという知見を得た。
この知見に基づいて、オリーブ油を投与したマウスにおいてインヴィボで前記抽出物の脂肪吸収抑制作用について試験した結果、経口投与の場合は脂肪吸収抑制作用はほとんど認められなかったが、マウスの十二指腸内に直接投与するか、あるいは胃液分泌抑制剤を用いてマウスの胃液の分泌を予め抑制した後で与えると、脂肪吸収抑制作用を発現することが判明した。
しかしながら、十二指腸への直接投与は日常生活において容易に行えるものではなく、他方、胃液分泌抑制剤や制酸剤および酸中和剤などとの併用は、それらが脂肪以外の栄養素の消化にも影響を与えることがあり、そして副作用の発生も危惧されるため、日常の食生活において常用するのは好ましくない。
【０００８】
これに対し、本発明者らは、セイジまたはローズマリーからの抽出物を配合する脂肪吸収抑制剤に腸溶化を施すことで、対象の胃液を変化させずとも十二指腸に抽出エキスを到達させることを確認した。
従って、本発明は、セイジおよび／またはローズマリーからの抽出エキスを含有する腸溶性の脂肪吸収抑制剤を提供する。本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、錠剤、顆粒剤、散剤またはカプセル剤の形態であってよい。
さらに、本発明は、前記腸溶性の脂肪吸収抑制剤を含有する食品も提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
抽出エキス
本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、セイジおよび／またはローズマリーからの抽出エキスを含有する。
本発明で用いるセイジからの抽出エキスは、セイジ、すなわちシソ科植物Salvia officinalis（ヤクヨウサルビア）の生葉または乾燥葉を、水または適当な有機溶媒、あるいはこれらを組み合わせた溶液で抽出後、濃縮して得られるものである。セイジは、肉料理の香辛料として広く知られるとともに、ヨーロッパでは、下痢止め、胃カタル、腸カタルの治療に民間で使用されてきた。また、現在でも、胃腸薬（Enterosanol^Ｒ）に配合されていることから、消化器系に対する安全性も高いと考えられる。
【００１０】
抽出に使用される抽出溶媒としては、エタノール、メタノール等の低級アルコール、酢酸エチル等の低級エステル、およびこれらと水との混合物が挙げられる。中でも、人が摂取するものであることから、エタノール単独または水との混合物（いわゆる含水エタノール）を使用するのが好ましい。特にエタノールと水との比率が30％以上のエタノール／水混合物または100％エタノールを使用するのが最も有効である。
従って、後述する実施例では、セイジおよび／またはローズマリーの葉からの抽出において、100％メタノールを使用しているが、これに代えて、30％以上のエタノール／水混合物または100％エタノールを用いることも当然可能である。実際に、30％またはそれ以上のエタノールを含むエタノール／水混合物による抽出物およびこれから単離された有効成分を用いたin vitroおよびin vivo試験において、100％メタノール抽出物と同様の優れた脂肪吸収抑制効果および膵リパーゼ阻害活性を示すことを確認している。
【００１１】
セイジは、常温（15℃〜30℃）での浸漬により抽出を行うと、セイジに含まれている揮発油（ツジョン）や精油（ピネン、シネオール、ボルネオール）が多量にエキス中に混入し、これらが腸粘膜を刺激して生体に悪影響を及ぼす恐れがある。そのため、70℃〜100℃で加熱抽出することが好ましい。
溶媒量や抽出時間は、植物体が葉であることから、植物体１ｇに対して溶媒を5〜20mL加え、上記温度で1〜3時間抽出するのが好ましい。
また、別の抽出方法として、超臨界二酸化炭素抽出を採用することで、前記溶媒抽出と比較して有効成分含量が多くかつ安全性の高い抽出エキスを製造することができる。抽出方法は、文献（例えば、Bauman D.ら、Acta. Alimentaria、28巻、１号、第15〜28頁、1999年）記載の方法に従えばよい。詳細に説明すると、先ず、セイジの葉を抽出槽に入れ、圧力10〜25ＭＰａ（好ましくは25ＭＰａ）、温度40〜100℃（好ましくは100℃）の条件下で20〜100分間（好ましくは20〜60分間）抽出を行う。この条件下で有害成分ツジョンを含む精油分画はほぼ抽出除去される。次に残渣について、圧力35ＭＰａ以上（好ましくは47.5ＭＰａ）、温度40〜100℃（好ましくは100℃）の条件下で20〜100分間（好ましくは20〜60分間）抽出を行い、有効成分としてカルノジックアシッドを含むジテルペン分画が高含量の抽出エキスが得られる。このとき、抽出収率を上げるため、必要に応じてエタノールなどのエントレーナーを使用することもできる。
【００１２】
本発明では、ローズマリー、すなわちシソ科植物Rosmarinus officinalis Linne(Labiatae)（マンネンロウ）の生葉または乾燥葉から得られる抽出エキスも使用され得る。ローズマリーは、セイジと同様に料理用香辛料として使用される以外に、精油の一種であるロスマリン油を含有することから、駆風剤や健胃剤にも用いられている。さらに保存剤または抗酸化剤としての用途も公知である。
【００１３】
抽出は、セイジについての前述の説明と同様の手順で行うことができる。すなわち、ローズマリーの生葉または乾燥葉１ｇに対して溶媒を5〜20mL加え、上記温度で1〜3時間抽出するのが好ましい。
【００１４】
本発明で使用されるセイジまたはローズマリーからの抽出エキスは、上記の手順により得られる水または溶媒抽出物および超臨界二酸化炭素抽出物、前記抽出物を当該分野において公知の減圧乾固またはスプレードライなどの方法で抽出溶媒を除去して得られる固形分、および更にこれらを単離精製して得られる画分を包含する。
【００１５】
本発明において好ましい単離精製手順および条件については、以降の実施例１および３において詳細に説明するように、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィーおよび分取ＨＰＬＣ等を組み合わせ、好適な条件下において、溶離剤（例えば、水、またはヘキサン、酢酸エチル、クロロホルム、メタノールおよびn-ブタノールなどの各種有機溶媒、またはこれらの混合物）を用いて行ってよいが、特にこれらに限定されるものではない。
【００１６】
前記セイジまたはローズマリーからの抽出物からの単離精製によって分離される画分には、数種のジテルペン類およびトリテルペン類が包含されている。特に、これらのうち、以下の式で表されるジテルペン類のカルノジック・アシッドが本発明の目的である脂肪吸収抑制に最も有効な成分であることが、今回初めて判明した。
【化２】

カルノジック・アシッドは、例えばセイジの場合は、以降の実施例１および３に説明しているように、セイジからメタノール抽出物を調製し、これからの酢酸エチル画分をシリカゲルクロマトグラフィーにより分取し、その後ＯＤＳカラムクロマトグラフィーおよび分取ＨＰＬＣによる単離精製を経て得られる。
【００１７】
（脂肪吸収抑制剤）
本発明は、膵リパーゼの働きを抑制して脂肪吸収抑制作用を発現するセイジまたはローズマリーからの抽出エキス、特にカルノジック・アシッドを含有する抽出エキスを含有する脂肪吸収抑制剤であって、腸溶化が施されたカプセル、顆粒または錠剤（レペタブも含む）である。
【００１８】
カプセル剤の製造方法としては、内容物に前記抽出エキスを用いる以外は、従来公知のソフトカプセルの製造法に従えばよい。そのような製造法としては、カプセル皮膜シートを用いて、ロータリー式充填機で内容物を封入し、カプセル製剤を成型する方法、又は滴下法により、シームレスカプセルを製造する方法が挙げられる。
【００１９】
また、顆粒剤については、公知の各種湿式、乾式などの造粒法が適用でき、適当な結合剤、賦形剤とともに成型する。錠剤については、前述の方法で製したセイジエキスを含有する顆粒あるいはセイジエキスそのものに、適当な結合剤、賦形剤、崩壊剤および必要に応じて滑沢剤を添加し、公知の打錠法により製することができる。
【００２０】
本発明の脂肪吸収抑制剤に腸溶性を付与するには、脂肪吸収抑制剤の表面を腸溶性コーティングで被覆することが挙げられる。あるいは脂肪吸収抑制剤がカプセル剤や打錠剤である場合は、脂肪吸収抑制剤の組成中に腸溶化剤を配合したり、ゼラチンやデンプンなどの皮膜材料に腸溶化剤を配合したものを用いて脂肪吸収抑制剤組成をカプセル充填することも可能である。
【００２１】
腸溶性コーティング剤としては、メタクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレートなどのセルロース類、シェラックなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような腸溶性コーティング剤は、公知の方法により、脂肪吸収抑制剤表面にコーティングすることができる。
他方、前記腸溶化剤の例としては、ペクチン、アルギン酸、セルロース類（例えば、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレートなど）、メタクリル酸コポリマーなどが挙げられる。
【００２２】
本発明の脂肪吸収抑制剤の摂取は、食事前または食事中に行うのが好ましい。本発明の脂肪吸収抑制剤に含有される抽出エキスとして、セイジまたはローズマリーからの水および／または溶媒抽出物を使用する場合は、通常、成人１回当たり10〜500mg、好ましくは20〜200mgを、１日３回食事時に摂取する。
本発明では、抽出エキスとして、前記水および／または溶媒抽出物からの単離精製画分を使用することも可能である。その場合の摂取量は、通常、成人１回当たり１〜100mg、好ましくは５〜20mgを、１日３回食事時に摂取する。
前記摂取量は、当然、年齢や脂肪分の摂取量等に依存して適宜増減されてよい。
【００２３】
本発明の脂肪吸収抑制剤の摂取量は、従来公知の天然起源物質、例えば、キチン・キトサンと比較すると、20分の１〜２分の１程度の量で使用され得る。
【００２４】
（腸溶性の脂肪吸収抑制剤を含有する食品）
本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、通常の飲食物中に添加して、日常的に摂取することができ、特に、加工食肉や油脂などの脂肪分を含む食品に配合するのが好ましい。従って、本発明では、このような腸溶性の脂肪吸収抑制剤を含有する食品も提供する。
本発明の食品は、日常的に摂取することが可能であるため、脂肪吸収抑制効果が期待でき、保健用食品として有用である。
【００２５】
このような飲食物における前記抽出エキスの添加量は、対象食品の種類に応じ、食品本来の味を損なわない範囲で添加すれば良く、通常対象食品に対し、0.1〜10重量％の範囲内で添加すれば良い。
【００２６】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１セイジメタノール抽出物および各種溶媒画分の調製
アルバニア産の乾燥セイジの葉（420ｇ）を細切し、10Lのメタノールを加えて70℃で3時間抽出を行った。濾過後、残渣に再びメタノール10Lを加え、更に3時間抽出後、2回の抽出で得られた濾液を集め、減圧濃縮・乾燥してメタノール抽出物を得た。得られメタノール抽出物の収率は30.4％であった。
メタノール抽出物の一部（91ｇ）を水1.8Lに分散させ、酢酸エチル（1.8L）で3回分配操作を行った。得られた酢酸エチル画分を減圧濃縮・乾燥して酢酸エチル画分（48.4ｇ、収率：15.8％）を得た。
次に、分離された水層にn-ブタノール（1.8L）を加え、酢酸エチル層を得たときと同様の操作を行って、n-ブタノール画分（10.3ｇ、収率：3.4％）を得た。残りの水層は減圧濃縮・凍結乾燥操作を行い、水画分（33.4ｇ、11.0％）を得た。
【００２７】
実施例２セイジのメタノール抽出物および各種溶媒画分の膵リパーゼ阻害試験
リパーゼ阻害試験は、ブタ膵臓由来リパーゼ（シグマ社）およびリパーゼキットS（大日本製薬）を用いて行った。先ず、実施例１で得たセイジのメタノール抽出物および各種溶媒画分（これらを合わせて、以降、抽出エキスという）について、ジメチルスルフォキシドで終濃度の20倍濃度の希釈系列をそれぞれ調製した。各抽出エキスについて、試験管に発色液（390μL）、前記希釈系列（各25μL）、キット付属の緩衝液で40μg/mLに調製したリパーゼ液（25μL）およびエステラーゼ阻害剤（10μL）を加えたものを準備し、これをそれぞれ30℃で30分間反応させた。反応停止液（1mL）を加えた後、405nmにおける吸光度を測定し、以下の式から酵素阻害率を算出した。
【００２８】
【数１】

上記式中、O.D._{ｓａｍｐｌｅ}は各種濃度の抽出エキスの酵素処理後の吸光度を、O.D._{ｓａｍｐｌｅ} _{ｂｌａｎｋ}は各種濃度の抽出エキスの酵素未添加時の吸光度を、O.D._{ｃｏｎｔｒｏｌ}は抽出エキス未添加でかつ酵素処理時の吸光度を、さらにO.D._{ｃｏｔｒｏｌ} _{ｂｌａｎｋ}は抽出エキスも酵素も未添加時の吸光度をそれぞれ表す。
【００２９】
抽出エキスの50％膵リパーゼ活性阻害濃度（IC₅₀）は、グラフ横軸に前記抽出エキス濃度をとり、縦軸に抑制率をプロットすることで求めた。実験結果を図１に示す。
【００３０】
図１の結果より、セイジのメタノール抽出物は、リパーゼ阻害活性（IC₅₀：94μg/mL）を有することが分かった。また、セイジのメタノール抽出物のリパーゼ阻害活性に有効な成分は、それから分離された酢酸エチル画分（IC₅₀：64μg/mL）に主に含有されているものと推定された。
【００３１】
実施例３セイジのメタノール抽出エキスからの単離精製
実施例２でリパーゼ阻害活性が集約していることが示された酢酸エチル画分について、有効成分の単離精製を行った。
前記酢酸エチル画分（20.1ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（600ｇ）に付し、ヘキサン：酢酸エチル（10：1）→（3：1）→（1：1）→クロロホルム：メタノール（10：1）→メタノールの順で順次溶出して、フラクション1（4.22ｇ）、フラクション2（4.25ｇ）、フラクション3（3.3ｇ）およびフラクション4（7.86ｇ）を得た。これらのフラクションについて、実施例2の方法を用いて100μg/mLにおける膵リパーゼ阻害率を測定したところ、それぞれ、43.4、96.0、92.6および67.7％であった。
【００３２】
膵リパーゼ阻害率が高かったフラクション2および3をそれぞれ、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー[220ｇ、水：メタノール（4：6）→（3：7）→（2：8）→（1：9）→クロロホルム：メタノール：水（6：4：1）]および分取ＨＰＬＣ[ODS、溶媒 75％メタノール]により順次精製を行った。
【００３３】
単離された成分は、^１Ｈおよび^１３ＣＮＭＲ分析法、質量分光法、赤外分光光度法および紫外−可視分光光度法により確認したところ、カルノソール（下記式中、(1)で表されるもの、植物体からの収率：0.24％）、カルノジック・アシッド（同、(2)、0.29％）、7-メトキシロズマノール（同、(3)、0.081％）、ロイレアノイック・アシッド（同、(4)、0.011％）、ロズマノール（同、(5)、0.006％）、イソロズマノール（同、(6)、0.027％）およびオレアノール酸（同、(7)、0.47％）であった。
【００３４】
【化３】

【００３５】
実施例４セイジのメタノール抽出エキスからの各単離成分のリパーゼ阻害作用
実施例３で得た各単離成分について、実施例２の方法を用いてリパーゼ阻害活性を検討した。結果を図２に示す。
図２に示すように、ジテルペンのカルノソール（1）が、最も強いリパーゼ阻害活性（IC₅₀：4μg/mL）を示し、カルノジック・アシッド（2)、7-メトキシロズマノール（3)、ロイレアノイック・アシッド（4）にもそれぞれ阻害活性（IC₅₀：14、33および50μg/mL）が認められた。さらに、トリテルペンのオレアノール酸(7)にも弱いながらリパーゼ阻害活性を有することが判明した。
なお、ロズマノール（5)、イソロズマノール（6）については、酸化によると思われる分解が著しくリパーゼ阻害活性の測定はできなかった。
【００３６】
実施例５セイジのメタノール抽出物および各単離成分の脂肪吸収抑制作用
実施例１で得たセイジのメタノール抽出物および実施例３で得られた成分（ここでは、カルノソール(1)、カルノジック・アシッド(2)、7-メトキシロズマノール（3)およびオレアノール酸(7)の４種について）の脂肪吸収抑制作用をそれぞれ、オリーブ油負荷マウスへの経口投与または十二指腸投与による血中トリグリセライド濃度の変化を測定することで評価した。
（経口投与）メタノール抽出物または各単離成分を5％アラビアゴムと共に水に懸濁して水懸濁液を調製した。20〜24時間絶食したddY系雄性マウスに、水懸濁液を体重１kgあたり5mLの割合でそれぞれ経口投与した。30分後にオリーブ油を体重１kgあたり５mLの割合で経口投与し、その2時間後に眼窩静脈より採血を行って血中トリグリセライド濃度を測定した。
（十二指腸投与）前記の経口投与実験系とは別のマウスを用いて、十二指腸内に直接投与した場合の脂肪吸収抑制作用を調べた。マウスをエーテル麻酔下で開腹し、前記水懸濁液をそれぞれ体重１kgあたり５mLの割合で十二指腸内に直接投与した。切開部を縫合した後、十二指腸内投与から30分後にオリーブ油を体重１kgあたり５mLの割合で経口投与した。2時間後の血中トリグリセライド濃度を測定した。
セイジのメタノール抽出物（投与量：250または500mg/kg）についての経口投与および十二指腸内投与実験系の結果を合わせて表１に、そして実施例３で得られた４種の成分（ここでは、カルノソール(1)、カルノジック・アシッド(2)、7-メトキシロズマノール（3)およびオレアノール酸(7)）についての各結果を表２〜３にそれぞれ示す。
【００３７】
【表１】

【００３８】
【表２】

【００３９】
【表３】

各値は、7匹の平均値と標準誤差で示した。^＊＊は、オリーブ油投与群との有意差：ｐ＜0.01を表す。
【００４０】
表１の結果から、セイジのメタノール抽出物を経口投与した場合は、血中トリグリセライド上昇抑制作用が全く認められなかったが、十二指腸内投与により血中トリグリセライド上昇抑制作用が発現することが分かる。すなわち、セイジのメタノール抽出物は、胃内において膵リパーゼ活性を消失することが明らかになった。
【００４１】
表２の結果は、実施例４において最も強い膵リパーゼ阻害活性を示したカルノソール（1）が、経口投与および十二指腸内投与のいずれの場合もトリグリセライド上昇抑制作用（すなわち脂肪吸収抑制作用）を発現しないことと、カルノジック・アシッド（2）が、経口投与において用量依存的なトリグリセライド上昇抑制作用を示し、そしてその作用が十二指腸内投与では更に増強されることを示している。そして表３からは、7-メトキシロズマノール（3）やオレアノール酸（7）が、経口投与および十二指腸内投与のいずれの場合もトリグリセライド上昇抑制作用を発現しないことが分かった。
【００４２】
以上の結果より、実施例２で確認したセイジのメタノール抽出物のリパーゼ阻害作用には、カルノジック・アシッド（2）の脂肪吸収抑制作用が強く関与しており、その作用は胃内で不活性化されることが判明した。
【００４３】
実施例６胃液分泌抑制薬を前投与したオリーブ油負荷マウスにおけるカルノジック・アシッド投与による血中トリグリセライド上昇抑制作用
実施例５の結果より、リパーゼ阻害作用に有効な単離成分であるカルノジック・アシッド（実施例３の式中、(2)で表されるもの；以下(2)とのみ記す）の脂肪吸収抑制能が胃内で不活性化されたことについて、胃液による脂肪吸収抑制能への影響を更に詳しく調べた。
手順は以下の通りである。
(i)24時間絶食したddY系雄性マウスに、5％アラビアゴムと胃液分泌抑制剤・シメチジン（150mg/kg）を共に水に懸濁した水懸濁液を体重１kgあたり５mLの割合で経口投与し、
(ii)30分後、5％アラビアゴムとカルノジック・アシッド（(2)、100mg/kg）を共に水に懸濁して成る水懸濁液を、体重１kgあたり５mLの割合で経口投与し、
(iii)更に30分後、オリーブ油を体重１kgあたり５mLの割合で経口投与した。
(iv)(iii)から2時間後、眼窩静脈より採血を行って血中トリグリセライド濃度を測定した。
結果を図３に示す。
【００４４】
図３中、
カラム1は、未処置群〔工程(iv)のみを行った系〕を、
カラム2は、オリーブ油投与群〔すなわち工程(iii)〜(iv)のみ行った系〕を、
カラム3は、カルノジック・アシッド（(2)、100mg/kg）+オリーブ油投与群〔工程(i)以外、すなわち(ii)〜(iv)の系〕を、
カラム4は、シメチジン+オリーブ油投与群〔工程(ii)以外の、(i)および(iii)〜(iv)を行った系〕を、および
カラム5は、シメチジン+カルノジック・アシッド（(2)、100mg/kg）+オリーブ油投与群〔(i)〜(iv)全工程〕
をそれぞれ示す。各カラムはマウス７匹の平均値と標準誤差で示した。
図３中、*は、オリーブ油投与群（カラム2）との有意差：ｐ＜0.05を、そして**は、有意差：ｐ＜0.01をそれぞれ表している。
【００４５】
シメチジンを用いて胃液分泌を予め抑制した後にカルノジック・アシッド（2）が投与されたマウス（カラム5）の血中トリグリセライド濃度は、胃液分泌抑制剤を添加せずにカルノジック・アシッド（2）を単独で投与したマウス（カラム3）よりも低下した。これより、脂肪吸収抑制作用を有していたカルノジック・アシッド（2）は、胃液により活性を消失することが判明した。
【００４６】
確認のため、実施例１で得られたセイジのメタノール抽出エキスについても同様の評価を行った。結果を図４に示す。
図４中、
カラム1は、未処置群〔工程(iv)のみを行った系〕を、
カラム2は、オリーブ油投与群〔すなわち工程(iii)〜(iv)のみ行った系〕を、
カラム3は、セイジのメタノール抽出エキス（500mg/kg）+オリーブ油投与群〔工程(i)以外、すなわち(ii)〜(iv)の系〕を、
カラム4は、シメチジン+オリーブ油投与群〔工程(ii)以外の、(i)および(iii)〜(iv)を行った系〕を、および
カラム5は、シメチジン+セイジのメタノール抽出エキス（500mg/kg）+オリーブ油投与群〔(i)〜(iv)全工程〕
をそれぞれ示す。各カラムはマウス７匹の平均値と標準誤差で示した。
また、図４中、**は、オリーブ油投与群（カラム2）との有意差：p<0.01を表す。
【００４７】
図４のカラム3と5との比較より、カルノジック・アシッド（2）を含有するセイジのメタノール抽出エキスにおいても、シメチジンで胃液分泌を予め抑制することで、脂肪吸収抑制作用が増強することが分かる。
【００４８】
実施例７セイジ超臨界二酸化炭素抽出物の作製
セイジの乾燥葉100ｇを抽出槽に仕込み、圧力25ＭＰａ、100℃の臨界二酸化炭素を供給して60分間抽出を行った。続いて、残渣を圧力47.5ＭＰａ、100℃の条件下で60分間抽出を行って、セイジ超臨界二酸化炭素抽出物を得た（７ｇ）。
【００４９】
実施例８セイジ超臨界二酸化炭素抽出物の脂肪吸収抑制作用
実施例７で得たセイジ超臨界二酸化炭素抽出物の脂肪吸収抑制作用を、実施例５と同様の手法により調べた。結果を表４に示す。
【表４】

各値は、7匹の平均値と標準誤差で示した。**は、オリーブ油投与群との有意差：ｐ＜0.01を表す。
【００５０】
この結果から、セイジの超臨界二酸化炭素抽出物は、非常に強い脂肪吸収抑制作用を有することが明らかとなった。
【００５１】
製剤例１（セイジのメタノール抽出物含有腸溶性カプセル製剤の作製）
下記表４に示す組成および重量比を用い、以下の手順に従ってセイジのメタノール抽出物（粉末）を含有する腸溶性カプセル製剤を製造した。セイジのメタノール抽出物（粉末）は、実施例１で得た乾燥固形物をミルやブレンダーを用いて粉砕したものである。
【表５】

【００５２】
先ず、セイジのメタノール抽出物（粉末）を40℃の条件下で硬化油脂（パーム硬化油脂）中に懸濁し、カプセル内容物を調製した。別途、ゼラチン、グリセリン及びペクチンを混合してカプセル外皮膜液を調製した。次に、カプセル製造機において、同心三重ノズルの最内側ノズルからカプセル内容物を、中間ノズルからカプセル内皮膜形成物質として硬化油脂を、そして最外側ノズルからカプセル外皮膜液を、流下する冷却された液状油中にそれぞれ同時に吐出することで三重構造のシームレスカプセルを連続的に製造した。得られたシームレスカプセルの粒径は、１ｍｍから８ｍｍまで自由に調整が可能であった。
【００５３】
得られたシームレスカプセルの腸溶性可否については、日本薬局方記載の崩壊試験法により試験した。結果として、前記シームレスカプセルは、第１液（ｐＨ1.2）中では２時間以内に崩壊せず、次に第２液（ｐＨ6.8）中では60分以内に崩壊したことにより、腸溶性であることを確認した。
【００５４】
製剤例２（ローズマリーのメタノール抽出物含有腸溶性カプセル製剤の作製）
セイジの代わりにローズマリーを用いたこと以外は、実施例１の手順に従って、ローズマリーのメタノール抽出物を調製した。得られたメタノール抽出物の乾燥固形物をミルやブレンダーを用いて粉砕し、これを上記表４中のセイジのメタノール抽出物粉末の代わりに同量用い、製剤例１と同様の手順に従って、ローズマリーのメタノール抽出物（粉末）を含有する腸溶性カプセル製剤を製造した。得られたカプセルを、製剤例１と同様に、日本薬局方の崩壊試験に準拠して試験し、腸溶性であることを確認した。
【００５５】
【発明の効果】
本発明によれば、植物（セイジおよびローズマリー）由来の抽出エキスを含有する製剤に腸溶化技術を適用することで、少量の摂取で膵リパーゼ阻害活性を有効に発現させることができる。
本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、食事前または食事時に摂取することで、摂取された脂肪が膵リパーゼによる酵素加水分解作用を受け難くし、その結果腸管からの吸収脂肪量を減少させ得る。そのため、脂肪分の多い食事を摂取しても、脂肪分の体内への吸収を抑制でき、肥満、動脈硬化、高血圧、心筋梗塞、脳梗塞、糖尿病等の生活習慣病の予防や治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例２で試験したセイジからのメタノール抽出エキスに関する50％膵リパーゼ活性阻害濃度（IC₅₀）を表すグラフである。
【図２】本発明の実施例４で試験したセイジのメタノール抽出エキスからの各単離成分のリパーゼ阻害作用を表すグラフである。
【図３】本発明の実施例６で試験した、胃液分泌抑制薬を前投与したオリーブ油負荷マウスにおけるカルノジック・アシッド（2）投与による血中トリグリセライド上昇抑制作用を表すグラフである。
【図４】本発明の実施例６で試験した、胃液分泌抑制薬を前投与したオリーブ油負荷マウスにおける実施例１で得られたセイジのメタノール抽出エキス投与による血中トリグリセライド上昇抑制作用を表すグラフである。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention is effective for the treatment or prevention of obesity and hyperlipidemia, which exhibits an excellent pancreatic lipase inhibitory action and fat absorption inhibitory action in the duodenum, which is an effective site, without the need to suppress the gastric juice secretion of the subject in advance. The present invention relates to an effective enteric fat absorption inhibitor.
[0002]
[Prior art]
Obesity is thought to be caused by lifestyle disturbances such as lack of exercise and overeating, genetic predisposition, and a decrease in basal metabolism.In recent years, the appetite control function of leptin secreted from fat cells is closely related to obesity. It is also clear that they are involved. Excessive obesity can cause lifestyle-related diseases such as diabetes and cardiovascular disease (arteriosclerosis, stroke), and therefore needs to be treated promptly and promptly.
[0003]
The obesity can be resolved or treated by: 1. suppressing appetite, 2. suppressing absorption of nutrients (especially fat), 3. increasing heat production, 4. improving lipid and protein metabolism. And 5. Controlling central weight control mechanisms, each of which has been extensively studied. Of these, only the anti-obesity drugs classified as 1. and 2. have been clinically applied. However, there are few drugs that can be used for a long period of time globally because they have many side effects and safety has not yet been established. In Japan, only the appetite suppressant mazindol, which is classified as 1., is currently approved.
[0004]
On the other hand, those that express the function of 2. above have been developed in addition to therapeutic drugs. For example, food containing ingredients having the above function 2 has attracted attention with the recent increase in obesity and dietary orientation. This does not require a prescription like a therapeutic drug, so it is required to have as few side effects as possible. However, since it is easily available, it has the advantage that it can be taken in daily life.
[0005]
Examples of the component having the above function 2 include chitin / chitosan derived from crab shell and chondroitin sulfate derived from fish cartilage, which are frequently used in health foods. Since these all have pancreatic lipase inhibitory activity ability, the ingested fat is not enzymatically hydrolyzed, and as a result, fat absorption from the intestinal tract is suppressed.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
However, since these ingredients have weak ability to suppress fat absorption, they have to be taken in large amounts in daily eating habits.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
As a result of repeated research on a plant-derived safe fat absorption inhibitor that can suppress the action of pancreatic lipase and exhibit a fat absorption inhibitory effect by ingesting a small amount, the present inventors have collected from sage or rosemary leaves. It was found that the extracted extract exhibits an excellent pancreatic lipase inhibitory action in vitro.
Based on this finding, the results of a test on the fat absorption inhibitory effect of the extract in vivo in mice administered olive oil showed that fat absorption inhibitory action was hardly observed in the case of oral administration, but directly into the duodenum of the mouse. It was found that when administered, or after the secretion of gastric juice in mice was previously suppressed using a gastric secretion inhibitor, it exerted a fat absorption inhibitory effect.
However, direct administration to the duodenum is not easy in daily life. On the other hand, combined use with gastric secretion inhibitors, antacids and acid neutralizers also affects the digestion of nutrients other than fat. It is not preferable to use it regularly in daily eating habits.
[0008]
In contrast, the present inventors entericize a fat absorption inhibitor that contains an extract from sage or rosemary, so that the extract can reach the duodenum without changing the target gastric juice. confirmed.
Accordingly, the present invention provides an enteric fat absorption inhibitor containing an extract from sage and / or rosemary. The enteric fat absorption inhibitor of the present invention may be in the form of a tablet, granule, powder or capsule.
Furthermore, the present invention also provides a food containing the enteric fat absorption inhibitor.
[0009]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
Extract
The enteric fat absorption inhibitor of the present invention contains an extract from sage and / or rosemary.
The extract extracted from sage used in the present invention is extracted from sage, that is, fresh leaves or dried leaves of Lamiaceae plant Salvia officinalis with water, a suitable organic solvent, or a combination thereof, and then concentrated. Is obtained. Sage is widely known as a spice for meat dishes and in Europe it has been used by the private sector to prevent diarrhea, stomach cattle and intestinal catarrh. Even now, gastrointestinal drugs (Enterosanol)^R) Is considered highly safe for the digestive system.
[0010]
Examples of the extraction solvent used for extraction include lower alcohols such as ethanol and methanol, lower esters such as ethyl acetate, and a mixture of these with water. Among them, it is preferable to use ethanol alone or a mixture with water (so-called hydrous ethanol) because it is ingested by humans. In particular, it is most effective to use an ethanol / water mixture having a ratio of ethanol to water of 30% or more or 100% ethanol.
Therefore, in the examples described below, 100% methanol is used for extraction from sage and / or rosemary leaves, but instead of this, 30% or more ethanol / water mixture or 100% ethanol is used. Of course it is also possible. In fact, excellent fat absorption similar to 100% methanol extract in in vitro and in vivo tests with extracts from ethanol / water mixtures containing 30% or more ethanol and active ingredients isolated therefrom It has been confirmed that it exhibits a suppressive effect and pancreatic lipase inhibitory activity.
[0011]
When sage is extracted by immersion at room temperature (15 ° C to 30 ° C), a large amount of volatile oil (tujon) and essential oil (pinene, cineol, borneol) contained in sage are mixed in the extract. May irritate the intestinal mucosa and adversely affect the body. Therefore, it is preferable to heat extract at 70-100 degreeC.
Regarding the amount of solvent and the extraction time, since the plant body is a leaf, it is preferable to add 5 to 20 mL of solvent to 1 g of the plant body and extract at the above temperature for 1 to 3 hours.
Further, by employing supercritical carbon dioxide extraction as another extraction method, an extract having a high active ingredient content and high safety can be produced as compared with the solvent extraction. The extraction method may follow the method described in the literature (for example, Bauman D. et al., Acta. Alimentaria, Vol. 28, No. 1, pp. 15-28, 1999). In detail, first, sage leaves are placed in an extraction tank, and the pressure is 10 to 25 MPa (preferably 25 MPa), and the temperature is 40 to 100 ° C. (preferably 100 ° C.) for 20 to 100 minutes (preferably 20 to Extract for 60 minutes. Under this condition, the essential oil fraction containing the harmful component Tsujon is almost extracted and removed. Next, the residue is extracted under conditions of a pressure of 35 MPa or more (preferably 47.5 MPa) and a temperature of 40 to 100 ° C. (preferably 100 ° C.) for 20 to 100 minutes (preferably 20 to 60 minutes). An extract having a high content of diterpene fraction containing diacid is obtained. At this time, an entrainer such as ethanol can be used as necessary to increase the extraction yield.
[0012]
In the present invention, it is also possible to use an extract obtained from rosemary, that is, a fresh leaf or a dried leaf of Lamiaceae plant Rosmarinus officinalis Linne (Labiatae) (mannenrou). Rosemary is used as a spice for cooking as well as sage, and also contains rosmarin oil, which is a kind of essential oil. Furthermore, its use as a preservative or antioxidant is also known.
[0013]
The extraction can be performed in the same procedure as described above for sage. That is, it is preferable to add 5 to 20 mL of a solvent to 1 g of fresh rosemary leaves or dry leaves and extract at the above temperature for 1 to 3 hours.
[0014]
The extract extracted from sage or rosemary used in the present invention is a water or solvent extract obtained by the above procedure and a supercritical carbon dioxide extract, and the extract is subjected to vacuum drying or spray drying known in the art. The solid content obtained by removing the extraction solvent by such a method, and the fraction obtained by further isolating and purifying these are included.
[0015]
Preferred isolation and purification procedures and conditions in the present invention are preferably combined with, for example, silica gel column chromatography, reverse phase ODS column chromatography, preparative HPLC, etc., as described in detail in Examples 1 and 3 below. Under various conditions, eluent (eg, water or various organic solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform, methanol and n-butanol, or a mixture thereof) may be used. It is not a thing.
[0016]
The fractions separated by isolation and purification from the sage or rosemary extract include several diterpenes and triterpenes. In particular, among these, it has been found for the first time that the carnosic acid diterpene represented by the following formula is the most effective component for fat absorption suppression, which is the object of the present invention.
[Chemical 2]

For example, in the case of Sage, Carnosic Acid prepared a methanol extract from Sage as described in Examples 1 and 3 below, and fractionated the ethyl acetate fraction from this by silica gel chromatography. Thereafter, it is obtained through isolation and purification by ODS column chromatography and preparative HPLC.
[0017]
(Fat absorption inhibitor)
The present invention is a fat absorption inhibitor containing an extract from sage or rosemary that suppresses the action of pancreatic lipase and exhibits a fat absorption inhibitory action, in particular, an extract containing carnosic acid, which is enteric Are capsules, granules or tablets (including repetabs).
[0018]
As a method for producing capsules, a conventionally known method for producing soft capsules may be used except that the extract is used as the contents. Examples of such a production method include a method of encapsulating contents with a rotary filling machine using a capsule film sheet and molding a capsule preparation, or a method of producing seamless capsules by a dropping method.
[0019]
As for the granules, various known wet and dry granulation methods can be applied, and they are molded together with appropriate binders and excipients. For tablets, add a suitable binder, excipient, disintegrant and, if necessary, a lubricant to granules containing the sage extract produced by the above method or sage extract itself. Can be manufactured.
[0020]
In order to impart enteric properties to the fat absorption inhibitor of the present invention, the surface of the fat absorption inhibitor may be coated with an enteric coating. Alternatively, when the fat absorption inhibitor is a capsule or a tablet, use an enteric agent in the composition of the fat absorption inhibitor, or a film material such as gelatin or starch that contains an enteric agent. It is also possible to encapsulate the fat absorption inhibitor composition.
[0021]
Examples of enteric coating agents include, but are not limited to, methacrylic acid copolymer, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, hydroxypropylmethylcellulose acetate succinate, carboxymethylcellulose, celluloses such as cellulose acetate phthalate, shellac, and the like. Such an enteric coating agent can be coated on the surface of the fat absorption inhibitor by a known method.
On the other hand, examples of the enteric agent include pectin, alginic acid, celluloses (for example, carboxymethyl cellulose, cellulose acetate phthalate, etc.), methacrylic acid copolymer, and the like.
[0022]
The intake of the fat absorption inhibitor of the present invention is preferably performed before or during a meal. When using the water and / or solvent extract from sage or rosemary as the extract contained in the fat absorption inhibitor of the present invention, usually 10 to 500 mg, preferably 20 to 200 mg per adult is used. Take three times a day at mealtime.
In the present invention, it is also possible to use an isolated and purified fraction from the water and / or solvent extract as an extract. In this case, the intake is usually 1 to 100 mg, preferably 5 to 20 mg per adult, at a meal three times a day.
Of course, the intake may be appropriately increased or decreased depending on age, intake of fat, and the like.
[0023]
The intake of the fat absorption inhibitor of the present invention can be used in an amount of about 1/20 to 1/2 of that of a conventionally known natural source material such as chitin / chitosan.
[0024]
(Food containing enteric fat absorption inhibitor)
The enteric fat absorption inhibitor of the present invention can be added to normal foods and can be ingested on a daily basis, and is particularly preferably blended with foods containing fat such as processed meat and fats and oils. . Therefore, the present invention also provides a food containing such an enteric fat absorption inhibitor.
Since the food of the present invention can be taken on a daily basis, it can be expected to have an effect of suppressing fat absorption, and is useful as a health food.
[0025]
The added amount of the extract in such foods and drinks may be added in a range that does not impair the original taste of the food, depending on the type of the target food, and is usually within a range of 0.1 to 10% by weight with respect to the target food. What is necessary is just to add.
[0026]
【Example】
EXAMPLES Next, although an Example is given and this invention is further demonstrated, this invention is not limited to these Examples.
Example 1 Preparation of sage methanol extract and various solvent fractions
Albania dried sage leaves (420 g) were chopped, 10 L of methanol was added, and extraction was performed at 70 ° C. for 3 hours. After filtration, 10 L of methanol was added again to the residue, and after further extraction for 3 hours, the filtrate obtained by the extraction twice was collected, concentrated under reduced pressure, and dried to obtain a methanol extract. The yield of the methanol extract obtained was 30.4%.
A part (91 g) of the methanol extract was dispersed in 1.8 L of water and subjected to a partitioning operation three times with ethyl acetate (1.8 L). The obtained ethyl acetate fraction was concentrated under reduced pressure and dried to obtain an ethyl acetate fraction (48.4 g, yield: 15.8%).
Next, n-butanol (1.8 L) was added to the separated aqueous layer, and the same operation as in the case of obtaining the ethyl acetate layer was performed to obtain an n-butanol fraction (10.3 g, yield: 3.4%). Obtained. The remaining aqueous layer was concentrated under reduced pressure and freeze-dried to obtain a water fraction (33.4 g, 11.0%).
[0027]
Example 2 Pancreatic lipase inhibition test of sage methanol extract and various solvent fractions
The lipase inhibition test was performed using porcine pancreatic lipase (Sigma) and lipase kit S (Dainippon Pharmaceutical). First, with respect to the sage methanol extract obtained in Example 1 and various solvent fractions (these were combined and hereinafter referred to as an extract extract), a dilution series having a concentration 20 times the final concentration was prepared with dimethyl sulfoxide. . For each extract, the color solution (390 μL), the dilution series (25 μL each), the lipase solution (25 μL) prepared to 40 μg / mL with the buffer provided with the kit, and the esterase inhibitor (10 μL) were added to the test tube. And each was reacted at 30 ° C. for 30 minutes. After adding a reaction stop solution (1 mL), the absorbance at 405 nm was measured, and the enzyme inhibition rate was calculated from the following formula.
[0028]
[Expression 1]

In the above formula, O.D._sampleShows the absorbance of the extract of various concentrations after enzyme treatment, O.D._sample _blankIndicates the absorbance of the extract of various concentrations when no enzyme is added, O.D._controlShows the absorbance at the time of enzyme treatment with no extract added, and O.D._control _blankRepresents the absorbance when no extract or enzyme is added.
[0029]
50% pancreatic lipase activity inhibitory concentration (IC₅₀) Was obtained by plotting the extract extract concentration on the horizontal axis and plotting the inhibition rate on the vertical axis. The experimental results are shown in FIG.
[0030]
From the results shown in FIG. 1, the sage methanol extract was found to have lipase inhibitory activity (IC₅₀: 94 μg / mL). In addition, an effective component for lipase inhibitory activity of sage methanol extract is the ethyl acetate fraction (IC₅₀: 64 μg / mL).
[0031]
Example 3 Isolation and purification from sage methanol extract
The active ingredient was isolated and purified from the ethyl acetate fraction which was shown to have lipase inhibitory activity in Example 2.
The ethyl acetate fraction (20.1 g) was subjected to silica gel column chromatography (600 g), and hexane: ethyl acetate (10: 1) → (3: 1) → (1: 1) → chloroform: methanol (10: 1). ) → Methanol was eluted in this order to obtain Fraction 1 (4.22 g), Fraction 2 (4.25 g), Fraction 3 (3.3 g) and Fraction 4 (7.86 g). About these fractions, when the pancreatic lipase inhibition rate at 100 μg / mL was measured using the method of Example 2, they were 43.4, 96.0, 92.6 and 67.7%, respectively.
[0032]

Fractions

2 and 3 with high pancreatic lipase inhibition rate were obtained by reverse phase ODS column chromatography [220 g, water: methanol (4: 6) → (3: 7) → (2: 8) → (1: 9) → Purification was carried out sequentially by chloroform: methanol: water (6: 4: 1)] and preparative HPLC [ODS, solvent 75% methanol].
[0033]
The isolated components are¹H and¹³When confirmed by C NMR analysis, mass spectrometry, infrared spectrophotometry and ultraviolet-visible spectrophotometry, carnosol (in the following formula, one represented by (1), yield from plant: 0.24% ), Carnosic Acid (same, (2), 0.29%), 7-methoxy rosmanol (same, (3), 0.081%), Roileanoic Acid (same, (4), 0.011%), Rosmanol (same, (5), 0.006%), isolozmanol (same, (6), 0.027%) and oleanolic acid (same, (7), 0.47%).
[0034]
[Chemical 3]

[0035]
Example 4 Lipase inhibitory action of each isolated component from sage methanol extract
About each isolated component obtained in Example 3, the lipase inhibitory activity was examined using the method of Example 2. The results are shown in FIG.
As shown in FIG. 2, the diterpene carnosol (1) has the strongest lipase inhibitory activity (IC₅₀: 4 μg / mL) and also inhibits carnosic acid (2), 7-methoxy rosmanol (3), and leureanoic acid (4).₅₀: 14, 33, and 50 μg / mL). Furthermore, it was found to have a lipase inhibitory activity although it is weak against triterpene oleanolic acid (7).
In addition, about rosmanol (5) and isolozumanol (6), decomposition | disassembly considered to be due to oxidation was remarkable and the lipase inhibitory activity was not able to be measured.
[0036]
Example 5 Fat absorption inhibitory action of sage methanol extract and each isolated component
The methanol extract of sage obtained in Example 1 and the components obtained in Example 3 (here, carnosol (1), carnosic acid (2), 7-methoxy rosmanol (3) and oleanolic acid (7) The fat absorption inhibitory action of each of the four types was evaluated by measuring changes in blood triglyceride concentration by oral administration or duodenum administration to olive oil-loaded mice.
(Oral administration) A methanol suspension or each isolated component was suspended in water together with 5% gum arabic to prepare an aqueous suspension. A water suspension was orally administered to ddY male mice fasted for 20 to 24 hours at a rate of 5 mL / kg body weight. Thirty minutes later, olive oil was orally administered at a rate of 5 mL per kg of body weight. Two hours later, blood was collected from the orbital vein to measure the blood triglyceride concentration.
(Duodenum administration) The fat absorption inhibitory effect when administered directly into the duodenum was examined using a mouse different from the above oral administration experimental system. Mice were laparotomized under ether anesthesia and the aqueous suspension was administered directly into the duodenum at a rate of 5 mL / kg body weight. After the incision was sutured, olive oil was orally administered at a rate of 5 mL / kg body weight 30 minutes after intraduodenal administration. The blood triglyceride concentration after 2 hours was measured.
The combined oral and duodenal experimental system results for sage methanol extract (dose: 250 or 500 mg / kg) are shown in Table 1 and the four components obtained in Example 3 (here, Each result about carnosol (1), carnosic acid (2), 7-methoxy rosmanol (3) and oleanolic acid (7)) is shown in Tables 2-3, respectively.
[0037]
[Table 1]

[0038]
[Table 2]

[0039]
[Table 3]

Each value was expressed as an average value of 7 animals and a standard error.^**Represents a significant difference from the olive oil administration group: p <0.01.
[0040]
From the results in Table 1, it was found that when the sage methanol extract was orally administered, no blood triglyceride elevation-inhibiting action was observed, but the blood triglyceride elevation-inhibiting action was exhibited by intraduodenal administration. That is, it has been clarified that the sage methanol extract loses pancreatic lipase activity in the stomach.
[0041]
The results in Table 2 show that carnosol (1), which showed the strongest pancreatic lipase inhibitory activity in Example 4, did not exhibit triglyceride elevation inhibitory action (ie, fat absorption inhibitory action) in both oral administration and intraduodenal administration. In addition, carnosic acid (2) shows a dose-dependent inhibitory effect on triglyceride elevation in oral administration, and the effect is further enhanced in intraduodenal administration. From Table 3, it was found that 7-methoxy rosmanol (3) and oleanolic acid (7) did not exhibit a triglyceride elevation inhibitory effect in both oral administration and intraduodenal administration.
[0042]
From the above results, the lipase inhibitory action of the sage methanol extract confirmed in Example 2 is strongly related to the fat absorption inhibitory action of carnosic acid (2), which is inactivated in the stomach. Turned out to be.
[0043]
Example 6 Inhibition of blood triglyceride elevation by carnosic acid administration in olive oil-loaded mice pre-administered with gastric secretion inhibitor
From the results of Example 5, suppression of fat absorption of carnosic acid (represented by (2) in the formula of Example 3; hereinafter referred to only as (2)), which is an isolated component effective for lipase inhibitory action The ability of gastric juice to affect the ability to suppress fat absorption was examined in more detail.
The procedure is as follows.
(i) ddY male mice fasted for 24 hours, 5% gum arabic and gastric juice secretion inhibitor cimetidine (150mg / kg) suspended together in water were orally administered at a rate of 5mL / kg body weight And
(ii) 30 minutes later, an aqueous suspension comprising 5% gum arabic and carnosic acid ((2), 100 mg / kg) suspended in water was orally administered at a rate of 5 mL per kg of body weight.
(iii) 30 minutes later, olive oil was orally administered at a rate of 5 mL per kg of body weight.
(iv) Two hours after (iii), blood was collected from the orbital vein and the blood triglyceride concentration was measured.
The results are shown in FIG.
[0044]
In FIG.
Column 1 is an untreated group (system in which only step (iv) was performed),
Column 2 is an olive oil administration group (that is, a system in which only steps (iii) to (iv) were performed),
Column 3 is a carnosic acid ((2), 100 mg / kg) + olive oil administration group (other than step (i), that is, the system of (ii) to (iv)),
Column 4 represents a cimetidine + olive oil administration group (systems subjected to (i) and (iii) to (iv) other than step (ii)), and
Column 5 is cimetidine + carnosic acid ((2), 100 mg / kg) + olive oil administration group [(i) to (iv) all steps]
Respectively. Each column represents the average value and standard error of 7 mice.
In FIG. 3, * represents a significant difference from the olive oil administration group (column 2): p <0.05, and ** represents a significant difference: p <0.01.
[0045]
The blood triglyceride concentration in mice (column 5) administered with carnosic acid (2) after suppression of gastric secretion with cimetidine in advance was determined by adding carnosic acid (2) alone without the addition of gastric secretion inhibitor. It was lower than that of mice administered in (column 3). Thus, it was found that Carnosic Acid (2), which had a fat absorption inhibitory action, lost its activity by gastric juice.
[0046]
For confirmation, the same evaluation was performed on the sage methanol extract obtained in Example 1. The results are shown in FIG.
In FIG.
Column 1 is an untreated group (system in which only step (iv) was performed),
Column 2 is an olive oil administration group (that is, a system in which only steps (iii) to (iv) were performed),
Column 3 is a sage methanol extract (500 mg / kg) + olive oil administration group (other than step (i), ie, systems (ii) to (iv)),
Column 4 represents a cimetidine + olive oil administration group (systems subjected to (i) and (iii) to (iv) other than step (ii)), and
Column 5 is cimetidine + sage methanol extract (500 mg / kg) + olive oil administration group ((i) to (iv) all steps)
Respectively. Each column represents the average value and standard error of 7 mice.
In FIG. 4, ** represents a significant difference from the olive oil administration group (column 2): p <0.01.
[0047]
From the comparison between

columns

3 and 5 in FIG. 4, it can be seen that also in the sage methanol extract containing carnosic acid (2), by suppressing gastric juice secretion with cimetidine in advance, the fat absorption inhibitory action is enhanced. .
[0048]
Example 7 Preparation of Sage Supercritical Carbon Dioxide Extract
100 g of dried leaves of sage were charged into an extraction tank, and extraction was performed for 60 minutes by supplying critical carbon dioxide at a pressure of 25 MPa and 100 ° C. Subsequently, the residue was extracted for 60 minutes under conditions of a pressure of 47.5 MPa and 100 ° C. to obtain a sage supercritical carbon dioxide extract (7 g).
[0049]
Example 8 Fat absorption inhibitory action of sage supercritical carbon dioxide extract
The fat absorption inhibitory action of the sage supercritical carbon dioxide extract obtained in Example 7 was examined by the same method as in Example 5. The results are shown in Table 4.
[Table 4]

Each value was expressed as an average value of 7 animals and a standard error. ** represents a significant difference from the olive oil administration group: p <0.01.
[0050]
From this result, it became clear that the supercritical carbon dioxide extract of sage has a very strong fat absorption inhibitory action.
[0051]
Formulation Example 1 (Preparation of Enteric Capsule Formulation Containing Sage Methanol Extract)
Using the composition and weight ratio shown in Table 4 below, an enteric capsule preparation containing a sage methanol extract (powder) was produced according to the following procedure. The sage methanol extract (powder) is obtained by pulverizing the dry solid obtained in Example 1 using a mill or blender.
[Table 5]

[0052]
First, a sage methanol extract (powder) was suspended in a hardened fat (palm hardened fat) under a condition of 40 ° C. to prepare a capsule content. Separately, gelatin, glycerin and pectin were mixed to prepare a capsule outer membrane solution. Next, in the capsule manufacturing machine, the capsule contents were cooled down from the innermost nozzle of the concentric triple nozzle, the hardened oil and fat as the inner capsule film-forming substance from the intermediate nozzle, and the outer capsule liquid from the outermost nozzle. A triple-structured seamless capsule was continuously produced by discharging each liquid oil simultaneously. The particle size of the obtained seamless capsule could be freely adjusted from 1 mm to 8 mm.
[0053]
Whether the obtained seamless capsules were enteric or not was tested by the disintegration test method described in the Japanese Pharmacopoeia. As a result, the seamless capsule does not disintegrate within 2 hours in the first liquid (pH 1.2) and then disintegrates within 60 minutes in the second liquid (pH 6.8). I confirmed that there was.
[0054]
Formulation Example 2 (Production of Enteric Capsule Formulation Containing Rosemary Methanol Extract)
A methanolic extract of rosemary was prepared according to the procedure of Example 1 except that rosemary was used instead of sage. The obtained dried solid product of methanol extract was pulverized using a mill or blender, and this was used in the same amount instead of the sage methanol extract powder in Table 4 above. An enteric capsule formulation containing Marie's methanol extract (powder) was prepared. The obtained capsules were tested according to the Japanese Pharmacopoeia disintegration test in the same manner as in Preparation Example 1 and confirmed to be enteric.
[0055]
【The invention's effect】
According to the present invention, pancreatic lipase inhibitory activity can be effectively expressed with a small amount of ingestion by applying an enteric technique to a preparation containing an extract derived from plants (sage and rosemary).
The enteric fat absorption inhibitor of the present invention is ingested before or during a meal to make the ingested fat less susceptible to enzymatic hydrolysis by pancreatic lipase, thereby reducing the amount of fat absorbed from the intestinal tract. obtain. Therefore, even if you eat a diet high in fat, absorption of fat into the body can be suppressed, and it is useful for the prevention and treatment of lifestyle-related diseases such as obesity, arteriosclerosis, hypertension, myocardial infarction, cerebral infarction, and diabetes. is there.
[Brief description of the drawings]
1 is a 50% pancreatic lipase activity inhibitory concentration (IC) for a methanol extract from sage tested in Example 2 of the present invention.₅₀).
FIG. 2 is a graph showing the lipase inhibitory action of each isolated component from a sage methanol extract extracted in Example 4 of the present invention.
FIG. 3 is a graph showing the blood triglyceride elevation inhibitory effect of carnosic acid (2) administration in olive oil-loaded mice pre-administered with a gastric secretion inhibitor tested in Example 6 of the present invention.
FIG. 4 is a graph showing the blood triglyceride elevation inhibitory effect obtained by administration of a sage methanol extract obtained in Example 1 in olive oil-loaded mice pre-administered with a gastric secretion inhibitor tested in Example 6 of the present invention. is there.

Claims

Carnosic acid represented by the following formula:

An enteric fat absorption inhibitor containing

The enteric fat absorption inhibitor according to claim 1, which is in the form of a tablet, granule or capsule.