JP2004002254A

JP2004002254A - Enteric fat absorption inhibitor containing plant extract, and food containing the same

Info

Publication number: JP2004002254A
Application number: JP2002199815A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Shimoda; 下田　博司; Chie Yoshino; 吉野　智恵; Naoki Kasashima; 笠島　直樹
Original assignee: Morishita Jintan Co Ltd
Current assignee: Morishita Jintan Co Ltd
Priority date: 2002-04-12
Filing date: 2002-07-09
Publication date: 2004-01-08
Anticipated expiration: 2022-07-09
Also published as: TW200401645A; AU2003236084A1; JP3980952B2; WO2003086436A1

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a safe enteric fat absorption inhibitor which can daily easily and finely be taken, can inhibit the absorption of fat into the bodies, and is originated from plants, and to provide a food containing the fat absorption inhibitor. <P>SOLUTION: This enteric fat absorption inhibitor contains the extracts of Salvia officinalis and/or Rosmarinus officinalis Linne (Labiatae). <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、対象の胃液分泌を予め抑制する必要を伴わずに、奏効部位である十二指腸で優れた膵リパーゼ阻害作用および脂肪吸収抑制作用を発揮する、肥満や高脂血症の治療または予防に有効な腸溶性の脂肪吸収抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
肥満は、運動不足や過食など生活習慣の乱れ、遺伝的素因、そして基礎代謝の低下が原因と考えられており、さらに近年では、脂肪細胞から分泌されるレプチンの食欲制御機能が肥満と密接に関与していることも明らかになっている。過度の肥満は、糖尿病や心血管症（動脈硬化、脳卒中）などの生活習慣病を引き起こす要因ともなり得ることから、早期に速やかに治療する必要がある。
【０００３】
肥満の解消または治療策としては、１．食欲を抑制すること、２．栄養素（特に脂肪）の吸収を抑制すること、３．熱産生を増加させること、４．脂質やタンパクの代謝を改善すること、そして５．中枢の体重制御機構を調節することが挙げられ、それぞれ広範な研究が成されている。このうち、１．と２．に分類される肥満治療薬のみが臨床適用されているが、副作用が多く、安全性が未だ確立されていないため、世界的にも長期使用できる薬物は少ない。日本では、現在のところ１．に分類される食欲抑制剤マジンドール（ｍａｚｉｎｄｏｌ）のみが承認されている。
【０００４】
これに対し、治療薬以外に前記２．の機能を発現するものが開発されている。例えば、食材中に前記２．の機能を有する成分を含有させたものは、最近の肥満者の増加やダイエット志向の上昇に伴い、注目されている。これは、治療薬のように処方箋を必要としないため、副作用ができるだけ少ないことが求められるが、容易に入手できるため、日常生活において摂取できるという利点を有する。
【０００５】
前記２．の機能を有する成分としては、健康食品などに最近多用されているカニの甲羅由来のキチン・キトサンや魚類の軟骨由来のコンドロイチン硫酸などが挙げられる。これらはいずれも、膵リパーゼ阻害活性能を有するため、摂取された脂肪が酵素加水分解されず、結果として腸管からの脂肪吸収が抑制される。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、これらの成分は、その脂肪吸収抑制能は弱いために、日常の食生活において多量に摂取する必要があった。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、少量の摂取で膵リパーゼの働きを抑制し、脂肪吸収抑制作用を発現し得る植物由来で安全な脂肪吸収抑制剤について研究を重ねた結果、セイジまたはローズマリーの葉から採取した抽出物がインビトロにおいて優れた膵リパーゼ阻害作用を示すという知見を得た。
この知見に基づいて、オリーブ油を投与したマウスにおいてインヴィボで前記抽出物の脂肪吸収抑制作用について試験した結果、経口投与の場合は脂肪吸収抑制作用はほとんど認められなかったが、マウスの十二指腸内に直接投与するか、あるいは胃液分泌抑制剤を用いてマウスの胃液の分泌を予め抑制した後で与えると、脂肪吸収抑制作用を発現することが判明した。
しかしながら、十二指腸への直接投与は日常生活において容易に行えるものではなく、他方、胃液分泌抑制剤や制酸剤および酸中和剤などとの併用は、それらが脂肪以外の栄養素の消化にも影響を与えることがあり、そして副作用の発生も危惧されるため、日常の食生活において常用するのは好ましくない。
【０００８】
これに対し、本発明者らは、セイジまたはローズマリーからの抽出物を配合する脂肪吸収抑制剤に腸溶化を施すことで、対象の胃液を変化させずとも十二指腸に抽出エキスを到達させることを確認した。
従って、本発明は、セイジおよび／またはローズマリーからの抽出エキスを含有する腸溶性の脂肪吸収抑制剤を提供する。本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、錠剤、顆粒剤、散剤またはカプセル剤の形態であってよい。
さらに、本発明は、前記腸溶性の脂肪吸収抑制剤を含有する食品も提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
抽出エキス
本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、セイジおよび／またはローズマリーからの抽出エキスを含有する。
本発明で用いるセイジからの抽出エキスは、セイジ、すなわちシソ科植物Ｓａｌｖｉａ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ（ヤクヨウサルビア）の生葉または乾燥葉を、水または適当な有機溶媒、あるいはこれらを組み合わせた溶液で抽出後、濃縮して得られるものである。セイジは、肉料理の香辛料として広く知られるとともに、ヨーロッパでは、下痢止め、胃カタル、腸カタルの治療に民間で使用されてきた。また、現在でも、胃腸薬（Ｅｎｔｅｒｏｓａｎｏｌ^Ｒ）に配合されていることから、消化器系に対する安全性も高いと考えられる。
【００１０】
抽出に使用される抽出溶媒としては、エタノール、メタノール等の低級アルコール、酢酸エチル等の低級エステル、およびこれらと水との混合物が挙げられる。中でも、人が摂取するものであることから、エタノール単独または水との混合物（いわゆる含水エタノール）を使用するのが好ましい。特にエタノールと水との比率が３０％以上のエタノール／水混合物または１００％エタノールを使用するのが最も有効である。
従って、後述する実施例では、セイジおよび／またはローズマリーの葉からの抽出において、１００％メタノールを使用しているが、これに代えて、３０％以上のエタノール／水混合物または１００％エタノールを用いることも当然可能である。実際に、３０％またはそれ以上のエタノールを含むエタノール／水混合物による抽出物およびこれから単離された有効成分を用いたｉｎ　ｖｉｔｒｏおよびｉｎ　ｖｉｖｏ試験において、１００％メタノール抽出物と同様の優れた脂肪吸収抑制効果および膵リパーゼ阻害活性を示すことを確認している。
【００１１】
セイジは、常温（１５℃〜３０℃）での浸漬により抽出を行うと、セイジに含まれている揮発油（ツジョン）や精油（ピネン、シネオール、ボルネオール）が多量にエキス中に混入し、これらが腸粘膜を刺激して生体に悪影響を及ぼす恐れがある。そのため、７０℃〜１００℃で加熱抽出することが好ましい。
溶媒量や抽出時間は、植物体が葉であることから、植物体１ｇに対して溶媒を５〜２０ｍＬ加え、上記温度で１〜３時間抽出するのが好ましい。
また、別の抽出方法として、超臨界二酸化炭素抽出を採用することで、前記溶媒抽出と比較して有効成分含量が多くかつ安全性の高い抽出エキスを製造することができる。抽出方法は、文献（例えば、Ｂａｕｍａｎ　Ｄ．ら、Ａｃｔａ．　Ａｌｉｍｅｎｔａｒｉａ、２８巻、１号、第１５〜２８頁、１９９９年）記載の方法に従えばよい。詳細に説明すると、先ず、セイジの葉を抽出槽に入れ、圧力１０〜２５ＭＰａ（好ましくは２５ＭＰａ）、温度４０〜１００℃（好ましくは１００℃）の条件下で２０〜１００分間（好ましくは２０〜６０分間）抽出を行う。この条件下で有害成分ツジョンを含む精油分画はほぼ抽出除去される。次に残渣について、圧力３５ＭＰａ以上（好ましくは４７．５ＭＰａ）、温度４０〜１００℃（好ましくは１００℃）の条件下で２０〜１００分間（好ましくは２０〜６０分間）抽出を行い、有効成分としてカルノジックアシッドを含むジテルペン分画が高含量の抽出エキスが得られる。このとき、抽出収率を上げるため、必要に応じてエタノールなどのエントレーナーを使用することもできる。
【００１２】
本発明では、ローズマリー、すなわちシソ科植物Ｒｏｓｍａｒｉｎｕｓ　ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ　Ｌｉｎｎｅ（Ｌａｂｉａｔａｅ）（マンネンロウ）の生葉または乾燥葉から得られる抽出エキスも使用され得る。ローズマリーは、セイジと同様に料理用香辛料として使用される以外に、精油の一種であるロスマリン油を含有することから、駆風剤や健胃剤にも用いられている。さらに保存剤または抗酸化剤としての用途も公知である。
【００１３】
抽出は、セイジについての前述の説明と同様の手順で行うことができる。すなわち、ローズマリーの生葉または乾燥葉１ｇに対して溶媒を５〜２０ｍＬ加え、上記温度で１〜３時間抽出するのが好ましい。
【００１４】
本発明で使用されるセイジまたはローズマリーからの抽出エキスは、上記の手順により得られる水または溶媒抽出物および超臨界二酸化炭素抽出物、前記抽出物を当該分野において公知の減圧乾固またはスプレードライなどの方法で抽出溶媒を除去して得られる固形分、および更にこれらを単離精製して得られる画分を包含する。
【００１５】
本発明において好ましい単離精製手順および条件については、以降の実施例１および３において詳細に説明するように、例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィーおよび分取ＨＰＬＣ等を組み合わせ、好適な条件下において、溶離剤（例えば、水、またはヘキサン、酢酸エチル、クロロホルム、メタノールおよびｎ−ブタノールなどの各種有機溶媒、またはこれらの混合物）を用いて行ってよいが、特にこれらに限定されるものではない。
【００１６】
前記セイジまたはローズマリーからの抽出物からの単離精製によって分離される画分には、数種のジテルペン類およびトリテルペン類が包含されている。特に、これらのうち、以下の式で表されるジテルペン類のカルノジック・アシッドが本発明の目的である脂肪吸収抑制に最も有効な成分であることが、今回初めて判明した。
【化２】

カルノジック・アシッドは、例えばセイジの場合は、以降の実施例１および３に説明しているように、セイジからメタノール抽出物を調製し、これからの酢酸エチル画分をシリカゲルクロマトグラフィーにより分取し、その後ＯＤＳカラムクロマトグラフィーおよび分取ＨＰＬＣによる単離精製を経て得られる。
【００１７】
（脂肪吸収抑制剤）
本発明は、膵リパーゼの働きを抑制して脂肪吸収抑制作用を発現するセイジまたはローズマリーからの抽出エキス、特にカルノジック・アシッドを含有する抽出エキスを含有する脂肪吸収抑制剤であって、腸溶化が施されたカプセル、顆粒または錠剤（レペタブも含む）である。
【００１８】
カプセル剤の製造方法としては、内容物に前記抽出エキスを用いる以外は、従来公知のソフトカプセルの製造法に従えばよい。そのような製造法としては、カプセル皮膜シートを用いて、ロータリー式充填機で内容物を封入し、カプセル製剤を成型する方法、又は滴下法により、シームレスカプセルを製造する方法が挙げられる。
【００１９】
また、顆粒剤については、公知の各種湿式、乾式などの造粒法が適用でき、適当な結合剤、賦形剤とともに成型する。錠剤については、前述の方法で製したセイジエキスを含有する顆粒あるいはセイジエキスそのものに、適当な結合剤、賦形剤、崩壊剤および必要に応じて滑沢剤を添加し、公知の打錠法により製することができる。
【００２０】
本発明の脂肪吸収抑制剤に腸溶性を付与するには、脂肪吸収抑制剤の表面を腸溶性コーティングで被覆することが挙げられる。あるいは脂肪吸収抑制剤がカプセル剤や打錠剤である場合は、脂肪吸収抑制剤の組成中に腸溶化剤を配合したり、ゼラチンやデンプンなどの皮膜材料に腸溶化剤を配合したものを用いて脂肪吸収抑制剤組成をカプセル充填することも可能である。
【００２１】
腸溶性コーティング剤としては、メタクリル酸コポリマー、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、ヒドロキシプロピルメチルセルロースアセテートサクシネート、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレートなどのセルロース類、シェラックなどが挙げられるが、これらに限定されるものではない。このような腸溶性コーティング剤は、公知の方法により、脂肪吸収抑制剤表面にコーティングすることができる。
他方、前記腸溶化剤の例としては、ペクチン、アルギン酸、セルロース類（例えば、カルボキシメチルセルロース、セルロースアセテートフタレートなど）、メタクリル酸コポリマーなどが挙げられる。
【００２２】
本発明の脂肪吸収抑制剤の摂取は、食事前または食事中に行うのが好ましい。本発明の脂肪吸収抑制剤に含有される抽出エキスとして、セイジまたはローズマリーからの水および／または溶媒抽出物を使用する場合は、通常、成人１回当たり１０〜５００ｍｇ、好ましくは２０〜２００ｍｇを、１日３回食事時に摂取する。
本発明では、抽出エキスとして、前記水および／または溶媒抽出物からの単離精製画分を使用することも可能である。その場合の摂取量は、通常、成人１回当たり１〜１００ｍｇ、好ましくは５〜２０ｍｇを、１日３回食事時に摂取する。
前記摂取量は、当然、年齢や脂肪分の摂取量等に依存して適宜増減されてよい。
【００２３】
本発明の脂肪吸収抑制剤の摂取量は、従来公知の天然起源物質、例えば、キチン・キトサンと比較すると、２０分の１〜２分の１程度の量で使用され得る。
【００２４】
（腸溶性の脂肪吸収抑制剤を含有する食品）
本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、通常の飲食物中に添加して、日常的に摂取することができ、特に、加工食肉や油脂などの脂肪分を含む食品に配合するのが好ましい。従って、本発明では、このような腸溶性の脂肪吸収抑制剤を含有する食品も提供する。
本発明の食品は、日常的に摂取することが可能であるため、脂肪吸収抑制効果が期待でき、保健用食品として有用である。
【００２５】
このような飲食物における前記抽出エキスの添加量は、対象食品の種類に応じ、食品本来の味を損なわない範囲で添加すれば良く、通常対象食品に対し、０．１〜１０重量％の範囲内で添加すれば良い。
【００２６】
【実施例】
次に、実施例を挙げて本発明をさらに説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
実施例１　セイジメタノール抽出物および各種溶媒画分の調製
アルバニア産の乾燥セイジの葉（４２０ｇ）を細切し、１０Ｌのメタノールを加えて７０℃で３時間抽出を行った。濾過後、残渣に再びメタノール１０Ｌを加え、更に３時間抽出後、２回の抽出で得られた濾液を集め、減圧濃縮・乾燥してメタノール抽出物を得た。得られメタノール抽出物の収率は３０．４％であった。
メタノール抽出物の一部（９１ｇ）を水１．８Ｌに分散させ、酢酸エチル（１．８Ｌ）で３回分配操作を行った。得られた酢酸エチル画分を減圧濃縮・乾燥して酢酸エチル画分（４８．４ｇ、収率：１５．８％）を得た。
次に、分離された水層にｎ−ブタノール（１．８Ｌ）を加え、酢酸エチル層を得たときと同様の操作を行って、ｎ−ブタノール画分（１０．３ｇ、収率：３．４％）を得た。残りの水層は減圧濃縮・凍結乾燥操作を行い、水画分（３３．４ｇ、１１．０％）を得た。
【００２７】
実施例２　セイジのメタノール抽出物および各種溶媒画分の膵リパーゼ阻害試験
リパーゼ阻害試験は、ブタ膵臓由来リパーゼ（シグマ社）およびリパーゼキットＳ（大日本製薬）を用いて行った。先ず、実施例１で得たセイジのメタノール抽出物および各種溶媒画分（これらを合わせて、以降、抽出エキスという）について、ジメチルスルフォキシドで終濃度の２０倍濃度の希釈系列をそれぞれ調製した。各抽出エキスについて、試験管に発色液（３９０μＬ）、前記希釈系列（各２５μＬ）、キット付属の緩衝液で４０μｇ／ｍＬに調製したリパーゼ液（２５μＬ）およびエステラーゼ阻害剤（１０μＬ）を加えたものを準備し、これをそれぞれ３０℃で３０分間反応させた。反応停止液（１ｍＬ）を加えた後、４０５ｎｍにおける吸光度を測定し、以下の式から酵素阻害率を算出した。
【００２８】
【数１】

上記式中、Ｏ．Ｄ．_{ｓａｍｐｌｅ}は各種濃度の抽出エキスの酵素処理後の吸光度を、Ｏ．Ｄ．_{ｓａｍｐｌｅ}　_{ｂｌａｎｋ}は各種濃度の抽出エキスの酵素未添加時の吸光度を、Ｏ．Ｄ．_{ｃｏｎｔｒｏｌ}は抽出エキス未添加でかつ酵素処理時の吸光度を、さらにＯ．Ｄ．_{ｃｏｔｒｏｌ}　_{ｂｌａｎｋ}は抽出エキスも酵素も未添加時の吸光度をそれぞれ表す。
【００２９】
抽出エキスの５０％膵リパーゼ活性阻害濃度（ＩＣ_５０）は、グラフ横軸に前記抽出エキス濃度をとり、縦軸に抑制率をプロットすることで求めた。実験結果を図１に示す。
【００３０】
図１の結果より、セイジのメタノール抽出物は、リパーゼ阻害活性（ＩＣ_５０：９４μｇ／ｍＬ）を有することが分かった。また、セイジのメタノール抽出物のリパーゼ阻害活性に有効な成分は、それから分離された酢酸エチル画分（ＩＣ_５０：６４μｇ／ｍＬ）に主に含有されているものと推定された。
【００３１】
実施例３　セイジのメタノール抽出エキスからの単離精製
実施例２でリパーゼ阻害活性が集約していることが示された酢酸エチル画分について、有効成分の単離精製を行った。
前記酢酸エチル画分（２０．１ｇ）をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６００ｇ）に付し、ヘキサン：酢酸エチル（１０：１）→（３：１）→（１：１）→クロロホルム：メタノール（１０：１）→メタノールの順で順次溶出して、フラクション１（４．２２ｇ）、フラクション２（４．２５ｇ）、フラクション３（３．３ｇ）およびフラクション４（７．８６ｇ）を得た。これらのフラクションについて、実施例２の方法を用いて１００μｇ／ｍＬにおける膵リパーゼ阻害率を測定したところ、それぞれ、４３．４、９６．０、９２．６および６７．７％であった。
【００３２】
膵リパーゼ阻害率が高かったフラクション２および３をそれぞれ、逆相ＯＤＳカラムクロマトグラフィー［２２０ｇ、水：メタノール（４：６）→（３：７）→（２：８）→（１：９）→クロロホルム：メタノール：水（６：４：１）］および分取ＨＰＬＣ［ＯＤＳ、溶媒　７５％メタノール］により順次精製を行った。
【００３３】
単離された成分は、^１Ｈおよび^１３Ｃ　ＮＭＲ分析法、質量分光法、赤外分光光度法および紫外−可視分光光度法により確認したところ、カルノソール（下記式中、（１）で表されるもの、植物体からの収率：０．２４％）、カルノジック・アシッド（同、（２）、０．２９％）、７−メトキシロズマノール（同、（３）、０．０８１％）、ロイレアノイック・アシッド（同、（４）、０．０１１％）、ロズマノール（同、（５）、０．００６％）、イソロズマノール（同、（６）、０．０２７％）およびオレアノール酸（同、（７）、０．４７％）であった。
【００３４】
【化３】

【００３５】
実施例４　セイジのメタノール抽出エキスからの各単離成分のリパーゼ阻害作用
実施例３で得た各単離成分について、実施例２の方法を用いてリパーゼ阻害活性を検討した。結果を図２に示す。
図２に示すように、ジテルペンのカルノソール（１）が、最も強いリパーゼ阻害活性（ＩＣ_５０：４μｇ／ｍＬ）を示し、カルノジック・アシッド（２）、７−メトキシロズマノール（３）、ロイレアノイック・アシッド（４）にもそれぞれ阻害活性（ＩＣ_５０：１４、３３および５０μｇ／ｍＬ）が認められた。さらに、トリテルペンのオレアノール酸（７）にも弱いながらリパーゼ阻害活性を有することが判明した。
なお、ロズマノール（５）、イソロズマノール（６）については、酸化によると思われる分解が著しくリパーゼ阻害活性の測定はできなかった。
【００３６】
実施例５　セイジのメタノール抽出物および各単離成分の脂肪吸収抑制作用
実施例１で得たセイジのメタノール抽出物および実施例３で得られた成分（ここでは、カルノソール（１）、カルノジック・アシッド（２）、７−メトキシロズマノール（３）およびオレアノール酸（７）の４種について）の脂肪吸収抑制作用をそれぞれ、オリーブ油負荷マウスへの経口投与または十二指腸投与による血中トリグリセライド濃度の変化を測定することで評価した。
（経口投与）メタノール抽出物または各単離成分を５％アラビアゴムと共に水に懸濁して水懸濁液を調製した。２０〜２４時間絶食したｄｄＹ系雄性マウスに、水懸濁液を体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合でそれぞれ経口投与した。３０分後にオリーブ油を体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合で経口投与し、その２時間後に眼窩静脈より採血を行って血中トリグリセライド濃度を測定した。
（十二指腸投与）前記の経口投与実験系とは別のマウスを用いて、十二指腸内に直接投与した場合の脂肪吸収抑制作用を調べた。マウスをエーテル麻酔下で開腹し、前記水懸濁液をそれぞれ体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合で十二指腸内に直接投与した。切開部を縫合した後、十二指腸内投与から３０分後にオリーブ油を体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合で経口投与した。２時間後の血中トリグリセライド濃度を測定した。
セイジのメタノール抽出物（投与量：２５０または５００ｍｇ／ｋｇ）についての経口投与および十二指腸内投与実験系の結果を合わせて表１に、そして実施例３で得られた４種の成分（ここでは、カルノソール（１）、カルノジック・アシッド（２）、７−メトキシロズマノール（３）およびオレアノール酸（７））についての各結果を表２〜３にそれぞれ示す。
【００３７】
【表１】

【００３８】
【表２】

【００３９】
【表３】

各値は、７匹の平均値と標準誤差で示した。^＊＊は、オリーブ油投与群との有意差：ｐ＜０．０１を表す。
【００４０】
表１の結果から、セイジのメタノール抽出物を経口投与した場合は、血中トリグリセライド上昇抑制作用が全く認められなかったが、十二指腸内投与により血中トリグリセライド上昇抑制作用が発現することが分かる。すなわち、セイジのメタノール抽出物は、胃内において膵リパーゼ活性を消失することが明らかになった。
【００４１】
表２の結果は、実施例４において最も強い膵リパーゼ阻害活性を示したカルノソール（１）が、経口投与および十二指腸内投与のいずれの場合もトリグリセライド上昇抑制作用（すなわち脂肪吸収抑制作用）を発現しないことと、カルノジック・アシッド（２）が、経口投与において用量依存的なトリグリセライド上昇抑制作用を示し、そしてその作用が十二指腸内投与では更に増強されることを示している。そして表３からは、７−メトキシロズマノール（３）やオレアノール酸（７）が、経口投与および十二指腸内投与のいずれの場合もトリグリセライド上昇抑制作用を発現しないことが分かった。
【００４２】
以上の結果より、実施例２で確認したセイジのメタノール抽出物のリパーゼ阻害作用には、カルノジック・アシッド（２）の脂肪吸収抑制作用が強く関与しており、その作用は胃内で不活性化されることが判明した。
【００４３】
実施例６　胃液分泌抑制薬を前投与したオリーブ油負荷マウスにおけるカルノジック・アシッド投与による血中トリグリセライド上昇抑制作用
実施例５の結果より、リパーゼ阻害作用に有効な単離成分であるカルノジック・アシッド（実施例３の式中、（２）で表されるもの；以下（２）とのみ記す）の脂肪吸収抑制能が胃内で不活性化されたことについて、胃液による脂肪吸収抑制能への影響を更に詳しく調べた。
手順は以下の通りである。
（ｉ）２４時間絶食したｄｄＹ系雄性マウスに、５％アラビアゴムと胃液分泌抑制剤・シメチジン（１５０ｍｇ／ｋｇ）を共に水に懸濁した水懸濁液を体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合で経口投与し、
（ｉｉ）３０分後、５％アラビアゴムとカルノジック・アシッド（（２）、１００ｍｇ／ｋｇ）を共に水に懸濁して成る水懸濁液を、体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合で経口投与し、
（ｉｉｉ）更に３０分後、オリーブ油を体重１ｋｇあたり５ｍＬの割合で経口投与した。
（ｉｖ）（ｉｉｉ）から２時間後、眼窩静脈より採血を行って血中トリグリセライド濃度を測定した。
結果を図３に示す。
【００４４】
図３中、
カラム１は、未処置群〔工程（ｉｖ）のみを行った系〕を、
カラム２は、オリーブ油投与群〔すなわち工程（ｉｉｉ）〜（ｉｖ）のみ行った系〕を、
カラム３は、カルノジック・アシッド（（２）、１００ｍｇ／ｋｇ）＋オリーブ油投与群〔工程（ｉ）以外、すなわち（ｉｉ）〜（ｉｖ）の系〕を、
カラム４は、シメチジン＋オリーブ油投与群〔工程（ｉｉ）以外の、（ｉ）および（ｉｉｉ）〜（ｉｖ）を行った系〕を、およびカラム５は、シメチジン＋カルノジック・アシッド（（２）、１００ｍｇ／ｋｇ）＋オリーブ油投与群〔（ｉ）〜（ｉｖ）全工程〕
をそれぞれ示す。各カラムはマウス７匹の平均値と標準誤差で示した。
図３中、＊は、オリーブ油投与群（カラム２）との有意差：ｐ＜０．０５を、そして＊＊は、有意差：ｐ＜０．０１をそれぞれ表している。
【００４５】
シメチジンを用いて胃液分泌を予め抑制した後にカルノジック・アシッド（２）が投与されたマウス（カラム５）の血中トリグリセライド濃度は、胃液分泌抑制剤を添加せずにカルノジック・アシッド（２）を単独で投与したマウス（カラム３）よりも低下した。これより、脂肪吸収抑制作用を有していたカルノジック・アシッド（２）は、胃液により活性を消失することが判明した。
【００４６】
確認のため、実施例１で得られたセイジのメタノール抽出エキスについても同様の評価を行った。結果を図４に示す。
図４中、
カラム１は、未処置群〔工程（ｉｖ）のみを行った系〕を、
カラム２は、オリーブ油投与群〔すなわち工程（ｉｉｉ）〜（ｉｖ）のみ行った系〕を、
カラム３は、セイジのメタノール抽出エキス（５００ｍｇ／ｋｇ）＋オリーブ油投与群〔工程（ｉ）以外、すなわち（ｉｉ）〜（ｉｖ）の系〕を、
カラム４は、シメチジン＋オリーブ油投与群〔工程（ｉｉ）以外の、（ｉ）および（ｉｉｉ）〜（ｉｖ）を行った系〕を、およびカラム５は、シメチジン＋セイジのメタノール抽出エキス（５００ｍｇ／ｋｇ）＋オリーブ油投与群〔（ｉ）〜（ｉｖ）全工程〕
をそれぞれ示す。各カラムはマウス７匹の平均値と標準誤差で示した。
また、図４中、＊＊は、オリーブ油投与群（カラム２）との有意差：ｐ＜０．０１を表す。
【００４７】
図４のカラム３と５との比較より、カルノジック・アシッド（２）を含有するセイジのメタノール抽出エキスにおいても、シメチジンで胃液分泌を予め抑制することで、脂肪吸収抑制作用が増強することが分かる。
【００４８】
実施例７　セイジ超臨界二酸化炭素抽出物の作製
セイジの乾燥葉１００ｇを抽出槽に仕込み、圧力２５ＭＰａ、１００℃の臨界二酸化炭素を供給して６０分間抽出を行った。続いて、残渣を圧力４７．５ＭＰａ、１００℃の条件下で６０分間抽出を行って、セイジ超臨界二酸化炭素抽出物を得た（７ｇ）。
【００４９】
実施例８　セイジ超臨界二酸化炭素抽出物の脂肪吸収抑制作用
実施例７で得たセイジ超臨界二酸化炭素抽出物の脂肪吸収抑制作用を、実施例５と同様の手法により調べた。結果を表４に示す。
【表４】

各値は、７匹の平均値と標準誤差で示した。＊＊は、オリーブ油投与群との有意差：ｐ＜０．０１を表す。
【００５０】
この結果から、セイジの超臨界二酸化炭素抽出物は、非常に強い脂肪吸収抑制作用を有することが明らかとなった。
【００５１】
製剤例１（セイジのメタノール抽出物含有腸溶性カプセル製剤の作製）
下記表４に示す組成および重量比を用い、以下の手順に従ってセイジのメタノール抽出物（粉末）を含有する腸溶性カプセル製剤を製造した。セイジのメタノール抽出物（粉末）は、実施例１で得た乾燥固形物をミルやブレンダーを用いて粉砕したものである。
【表５】

【００５２】
先ず、セイジのメタノール抽出物（粉末）を４０℃の条件下で硬化油脂（パーム硬化油脂）中に懸濁し、カプセル内容物を調製した。別途、ゼラチン、グリセリン及びペクチンを混合してカプセル外皮膜液を調製した。次に、カプセル製造機において、同心三重ノズルの最内側ノズルからカプセル内容物を、中間ノズルからカプセル内皮膜形成物質として硬化油脂を、そして最外側ノズルからカプセル外皮膜液を、流下する冷却された液状油中にそれぞれ同時に吐出することで三重構造のシームレスカプセルを連続的に製造した。得られたシームレスカプセルの粒径は、１ｍｍから８ｍｍまで自由に調整が可能であった。
【００５３】
得られたシームレスカプセルの腸溶性可否については、日本薬局方記載の崩壊試験法により試験した。結果として、前記シームレスカプセルは、第１液（ｐＨ１．２）中では２時間以内に崩壊せず、次に第２液（ｐＨ６．８）中では６０分以内に崩壊したことにより、腸溶性であることを確認した。
【００５４】
製剤例２（ローズマリーのメタノール抽出物含有腸溶性カプセル製剤の作製）
セイジの代わりにローズマリーを用いたこと以外は、実施例１の手順に従って、ローズマリーのメタノール抽出物を調製した。得られたメタノール抽出物の乾燥固形物をミルやブレンダーを用いて粉砕し、これを上記表４中のセイジのメタノール抽出物粉末の代わりに同量用い、製剤例１と同様の手順に従って、ローズマリーのメタノール抽出物（粉末）を含有する腸溶性カプセル製剤を製造した。得られたカプセルを、製剤例１と同様に、日本薬局方の崩壊試験に準拠して試験し、腸溶性であることを確認した。
【００５５】
【発明の効果】
本発明によれば、植物（セイジおよびローズマリー）由来の抽出エキスを含有する製剤に腸溶化技術を適用することで、少量の摂取で膵リパーゼ阻害活性を有効に発現させることができる。
本発明の腸溶性の脂肪吸収抑制剤は、食事前または食事時に摂取することで、摂取された脂肪が膵リパーゼによる酵素加水分解作用を受け難くし、その結果腸管からの吸収脂肪量を減少させ得る。そのため、脂肪分の多い食事を摂取しても、脂肪分の体内への吸収を抑制でき、肥満、動脈硬化、高血圧、心筋梗塞、脳梗塞、糖尿病等の生活習慣病の予防や治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の実施例２で試験したセイジからのメタノール抽出エキスに関する５０％膵リパーゼ活性阻害濃度（ＩＣ_５０）を表すグラフである。
【図２】本発明の実施例４で試験したセイジのメタノール抽出エキスからの各単離成分のリパーゼ阻害作用を表すグラフである。
【図３】本発明の実施例６で試験した、胃液分泌抑制薬を前投与したオリーブ油負荷マウスにおけるカルノジック・アシッド（２）投与による血中トリグリセライド上昇抑制作用を表すグラフである。
【図４】本発明の実施例６で試験した、胃液分泌抑制薬を前投与したオリーブ油負荷マウスにおける実施例１で得られたセイジのメタノール抽出エキス投与による血中トリグリセライド上昇抑制作用を表すグラフである。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention exhibits excellent pancreatic lipase inhibitory action and fat absorption inhibitory action in the duodenum, which is the site of response, without the need to previously suppress gastric secretion of the subject, for the treatment or prevention of obesity or hyperlipidemia. It relates to an effective enteric fat absorption inhibitor.
[0002]
[Prior art]
Obesity is thought to be caused by lifestyle disorders such as lack of exercise and overeating, a genetic predisposition, and a decrease in basal metabolism.In recent years, the appetite-controlling function of leptin secreted from fat cells has been closely linked to obesity. It is clear that they are involved. Excessive obesity needs to be treated promptly and promptly because it can cause lifestyle-related diseases such as diabetes and cardiovascular disease (arteriosclerosis, stroke).
[0003]
To eliminate or treat obesity: 1. suppressing appetite; 2. suppressing the absorption of nutrients (particularly fats); 3. increase thermogenesis; 4. Improve lipid and protein metabolism; Regulating central weight control mechanisms, each of which has been extensively studied. Among them, 1. And 2. Although only obesity remedies are classified for clinical use, they have few side effects worldwide because they have many side effects and their safety has not yet been established. Currently in Japan, 1. Only the appetite suppressant mazindol, which is classified as
[0004]
On the other hand, in addition to the therapeutic agent, the above-mentioned 2. Those exhibiting the function of have been developed. For example, 2. Those containing a component having the function of (1) have attracted attention with the recent increase in obese people and the increase in diet consciousness. Although this does not require a prescription unlike a therapeutic drug, it is required to have as few side effects as possible, but has the advantage that it is easily available and can be taken in daily life.
[0005]
2. Examples of the component having the above function include chitin and chitosan derived from crab shells and chondroitin sulfate derived from cartilage of fish, which are frequently used in health foods and the like. Since all of them have a pancreatic lipase inhibitory activity, the ingested fat is not enzymatically hydrolyzed, and as a result, fat absorption from the intestinal tract is suppressed.
[0006]
[Problems to be solved by the invention]
However, since these components have a weak ability to suppress fat absorption, they need to be ingested in a large amount in a daily diet.
[0007]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have conducted studies on a plant-derived safe fat absorption inhibitor capable of suppressing the action of pancreatic lipase with a small amount of ingestion and capable of exhibiting a fat absorption suppressing action, and as a result, collected from sage or rosemary leaves. It has been found that the obtained extract shows an excellent pancreatic lipase inhibitory action in vitro.
Based on this finding, as a result of in vivo tests on the fat absorption inhibitory effect of the extract in mice to which olive oil was administered, almost no fat absorption inhibitory effect was observed in the case of oral administration, but it was directly injected into the duodenum of the mouse. It was found that when administered or given after the secretion of gastric juice from mice was previously suppressed using a gastric juice secretion inhibitor, a fat absorption inhibitory action was exhibited.
However, direct administration to the duodenum is not easy to perform in daily life, while concomitant use with gastric secretion inhibitors, antacids, and acid neutralizers also affects the digestion of nutrients other than fat. And may cause side effects, so it is not preferable to use it regularly in daily eating habits.
[0008]
On the other hand, the present inventors have proposed that enteric solubilization of a fat absorption inhibitor containing an extract from sage or rosemary allows the extract to reach the duodenum without changing the gastric juice of the subject. confirmed.
Accordingly, the present invention provides an enteric fat absorption inhibitor containing an extract of sage and / or rosemary. The enteric fat absorption inhibitor of the present invention may be in the form of tablets, granules, powders or capsules.
Further, the present invention also provides a food containing the enteric fat absorption inhibitor.
[0009]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
Extract extract
The enteric fat absorption inhibitor of the present invention contains an extract from sage and / or rosemary.
The extract from sage used in the present invention is obtained by extracting sage, that is, the fresh or dried leaf of the Lamiaceae plant, Salvia ク officinalis, with water or a suitable organic solvent, or a solution obtained by combining them. It can be obtained by: Sage is widely known as a spice in meat dishes, and has been used folk in Europe for antidiarrheal, stomach and intestinal catarrh. In addition, even today, gastrointestinal drugs (Enterosanol)^R) Is considered highly safe for the digestive system.
[0010]
Examples of the extraction solvent used for the extraction include lower alcohols such as ethanol and methanol, lower esters such as ethyl acetate, and mixtures of these with water. Above all, it is preferable to use ethanol alone or a mixture with water (so-called hydrous ethanol) because it is taken by humans. In particular, it is most effective to use an ethanol / water mixture having a ratio of ethanol to water of 30% or more or 100% ethanol.
Therefore, in the examples described below, 100% methanol is used for extraction from sage and / or rosemary leaves, but instead, a 30% or more ethanol / water mixture or 100% ethanol is used. Of course it is also possible. In fact, in in vitro and in vivo tests with extracts and active ingredients isolated from ethanol / water mixtures containing 30% or more ethanol, the same excellent fat absorption as 100% methanol extracts It has been confirmed that it exhibits an inhibitory effect and pancreatic lipase inhibitory activity.
[0011]
When sage is extracted by immersion at room temperature (15 ° C to 30 ° C), volatile oil (tsujon) and essential oils (pinene, cineole, borneol) contained in sage are mixed in the extract in large amounts. May irritate the intestinal mucosa and adversely affect the living body. Therefore, it is preferable to perform heat extraction at 70 ° C to 100 ° C.
As for the amount of the solvent and the extraction time, since the plant is a leaf, it is preferable to add 5 to 20 mL of the solvent to 1 g of the plant and extract at the above temperature for 1 to 3 hours.
Further, by employing supercritical carbon dioxide extraction as another extraction method, it is possible to produce an extract having a high active ingredient content and high safety compared to the solvent extraction. The extraction method may be in accordance with the method described in the literature (for example, Bauman D. et al., Acta. Alimentaria, Vol. 28, No. 1, pp. 15-28, 1999). More specifically, first, sage leaves are put into an extraction tank, and the pressure is 10 to 25 MPa (preferably 25 MPa) and the temperature is 40 to 100 ° C. (preferably 100 ° C.) for 20 to 100 minutes (preferably 20 to 100 ° C.). Extraction (60 minutes). Under these conditions, the essential oil fraction containing the harmful component tsujon is almost extracted and removed. Next, the residue is subjected to extraction at a pressure of 35 MPa or more (preferably 47.5 MPa) at a temperature of 40 to 100 ° C. (preferably 100 ° C.) for 20 to 100 minutes (preferably 20 to 60 minutes), and as an active ingredient An extract having a high content of a diterpene fraction containing carnosic acid can be obtained. At this time, an entrainer such as ethanol can be used as needed to increase the extraction yield.
[0012]
In the present invention, an extract obtained from fresh or dried leaves of rosemary, that is, Rosmarinus officinalis ｉｎ Linne (Labiatae) (mannan wax), may also be used. Rosemary is used not only as a spice for cooking like sage but also as a carminative and stomachic because it contains rosmarin oil, a kind of essential oil. Furthermore, their use as preservatives or antioxidants is also known.
[0013]
Extraction can be performed in the same manner as described above for sage. That is, it is preferable to add 5 to 20 mL of a solvent to 1 g of fresh or dried rosemary leaves and extract at the above temperature for 1 to 3 hours.
[0014]
The extract from sage or rosemary used in the present invention may be a water or solvent extract and a supercritical carbon dioxide extract obtained by the above-described procedure, and the extract is dried under reduced pressure or spray-dried as known in the art. And the like, and the solid content obtained by removing the extraction solvent by such a method, and the fraction obtained by further isolating and purifying these.
[0015]
As described in detail in Examples 1 and 3 below, preferred isolation and purification procedures and conditions in the present invention are, for example, a combination of silica gel column chromatography, reverse phase ODS column chromatography, and preparative HPLC, and the like. Under various conditions, using an eluent (for example, water or various organic solvents such as hexane, ethyl acetate, chloroform, methanol and n-butanol, or a mixture thereof), but is not particularly limited thereto. Not something.
[0016]
The fraction separated by isolation and purification from the extract from sage or rosemary contains several diterpenes and triterpenes. In particular, among these, it has now been found for the first time that carnogic acid, a diterpene represented by the following formula, is the most effective component for suppressing fat absorption, which is the object of the present invention.
Embedded image

Carnogic Acid, for example, in the case of sage, a methanol extract was prepared from sage, and the ethyl acetate fraction therefrom was separated by silica gel chromatography, as described in Examples 1 and 3 below. Thereafter, it is obtained through ODS column chromatography and isolation and purification by preparative HPLC.
[0017]
(Fat absorption inhibitor)
The present invention is a fat absorption inhibitor containing an extract from sage or rosemary, which expresses a fat absorption suppressing effect by suppressing the action of pancreatic lipase, particularly an extract containing carnogic acid, , Granules or tablets (including Repetab).
[0018]
A method for producing a capsule may be in accordance with a conventionally known method for producing a soft capsule, except that the above-mentioned extract is used as the content. Examples of such a production method include a method of encapsulating the contents with a rotary filling machine using a capsule film sheet and molding a capsule preparation, or a method of producing a seamless capsule by a dropping method.
[0019]
As for the granules, various known granulation methods such as a wet method and a dry method can be applied, and the granules are molded together with a suitable binder and excipient. For tablets, a suitable binder, excipient, disintegrant and, if necessary, a lubricant are added to the granules containing sage extract or the sage extract itself prepared by the method described above, and a known tableting method is used. Can be manufactured.
[0020]
In order to impart enteric properties to the fat absorption inhibitor of the present invention, the surface of the fat absorption inhibitor may be coated with an enteric coating. Alternatively, when the fat absorption inhibitor is a capsule or a tablet, an enteric agent is added to the composition of the fat absorption inhibitor, or a film material such as gelatin or starch mixed with the enteric agent is used. It is also possible to encapsulate the fat absorption inhibitor composition.
[0021]
Enteric coating agents include, but are not limited to, celluloses such as methacrylic acid copolymer, hydroxypropylmethylcellulose phthalate, hydroxypropylmethylcellulose acetate succinate, carboxymethylcellulose, cellulose acetate phthalate, and shellac. Such an enteric coating agent can be coated on the fat absorption inhibitor surface by a known method.
On the other hand, examples of the enteric agent include pectin, alginic acid, celluloses (for example, carboxymethylcellulose, cellulose acetate phthalate and the like), methacrylic acid copolymer and the like.
[0022]
It is preferable to take the fat absorption inhibitor of the present invention before or during a meal. When a water and / or solvent extract from sage or rosemary is used as the extract contained in the fat absorption inhibitor of the present invention, it is usually used in an amount of 10 to 500 mg, preferably 20 to 200 mg per adult. Take 3 times a day with meals.
In the present invention, it is also possible to use an isolated and purified fraction from the water and / or solvent extract as an extract. In such a case, the adult usually takes 1 to 100 mg, preferably 5 to 20 mg per adult, three times a day at meal time.
The intake may be appropriately increased or decreased depending on the age, the intake of fat, and the like.
[0023]
The intake amount of the fat absorption inhibitor of the present invention can be used in an amount of about 1/2 to 1/2 of that of conventionally known natural sources, for example, chitin / chitosan.
[0024]
(Food containing enteric fat absorption inhibitor)
The enteric fat absorption inhibitor of the present invention can be added to ordinary foods and drinks and taken daily, and is particularly preferably incorporated into processed meats and foods containing fats such as oils and fats. . Therefore, the present invention also provides a food containing such an enteric fat absorption inhibitor.
Since the food of the present invention can be taken on a daily basis, it can be expected to have an effect of suppressing fat absorption and is useful as a health food.
[0025]
The amount of the extract to be added in such foods and drinks may be added within a range that does not impair the original taste of the food, depending on the type of the target food, and is usually in the range of 0.1 to 10% by weight based on the target food. It may be added within.
[0026]
【Example】
Next, the present invention will be further described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
Example 1 Preparation of sage methanol extract and various solvent fractions
Leaves (420 g) of dried Albania sage were cut into small pieces, and 10 L of methanol was added thereto, followed by extraction at 70 ° C. for 3 hours. After filtration, 10 L of methanol was added to the residue again, and the mixture was extracted for further 3 hours. The filtrate obtained by the two extractions was collected, concentrated and dried under reduced pressure to obtain a methanol extract. The yield of the resulting methanol extract was 30.4%.
A portion (91 g) of the methanol extract was dispersed in 1.8 L of water, and the mixture was partitioned three times with ethyl acetate (1.8 L). The obtained ethyl acetate fraction was concentrated and dried under reduced pressure to obtain an ethyl acetate fraction (48.4 g, yield: 15.8%).
Next, n-butanol (1.8 L) was added to the separated aqueous layer, and the same operation as when the ethyl acetate layer was obtained was performed to obtain an n-butanol fraction (10.3 g, yield: 3.80 g). 4%). The remaining aqueous layer was concentrated under reduced pressure and lyophilized to obtain a water fraction (33.4 g, 11.0%).
[0027]
Example 2 Pancreatic lipase inhibition test of methanol extract of sage and various solvent fractions
The lipase inhibition test was carried out using lipase derived from pig pancreas (Sigma) and lipase kit S (Dainippon Pharmaceutical). First, with respect to the methanol extract of sage obtained in Example 1 and various solvent fractions (together, hereinafter referred to as an extract), a dilution series having a 20-fold final concentration with dimethyl sulfoxide was prepared. . For each extracted extract, a test tube was added with a coloring solution (390 μL), the dilution series (25 μL for each), a lipase solution (25 μL) prepared to 40 μg / mL with a buffer supplied with the kit, and an esterase inhibitor (10 μL). Was prepared and reacted at 30 ° C. for 30 minutes. After adding the reaction stop solution (1 mL), the absorbance at 405 nm was measured, and the enzyme inhibition rate was calculated from the following equation.
[0028]
(Equation 1)

In the above formula, O. D._sampleIndicates the absorbance of the extracted extract at various concentrations after the enzyme treatment, and D._sample _blankIndicates the absorbance of various concentrations of the extracted extract when no enzyme was added, and D._controlIndicates the absorbance at the time of the enzyme treatment without addition of the extract extract and the O.D. D._control _blankRepresents the absorbance when neither the extract nor the enzyme is added.
[0029]
50% Pancreatic Lipase Activity Inhibitory Concentration of Extract (IC₅₀) Was determined by plotting the extract concentration on the horizontal axis of the graph and plotting the inhibition rate on the vertical axis. The experimental results are shown in FIG.
[0030]
From the results shown in FIG. 1, the methanol extract of sage showed a lipase inhibitory activity (IC₅₀: 94 μg / mL). The component effective for the lipase inhibitory activity of the methanol extract of sage was the ethyl acetate fraction (IC₅₀: 64 μg / mL).
[0031]
Example 3 Isolation and purification of sage from methanol extract
The active ingredient was isolated and purified from the ethyl acetate fraction, which was shown to have concentrated lipase inhibitory activity in Example 2.
The ethyl acetate fraction (20.1 g) was subjected to silica gel column chromatography (600 g), and hexane: ethyl acetate (10: 1) → (3: 1) → (1: 1) → chloroform: methanol (10:10). Elution was performed in the order of 1) → methanol to obtain fraction 1 (4.22 g), fraction 2 (4.25 g), fraction 3 (3.3 g), and fraction 4 (7.86 g). For these fractions, the pancreatic lipase inhibition rate at 100 μg / mL was measured using the method of Example 2 and found to be 43.4, 96.0, 92.6, and 67.7%, respectively.
[0032]

Fractions

2 and 3 having high pancreatic lipase inhibition rates were respectively subjected to reverse-phase ODS column chromatography [220 g, water: methanol (4: 6) → (3: 7) → (2: 8) → (1: 9) → Chloroform: methanol: water (6: 4: 1)] and preparative HPLC [ODS, solvent: 75% methanol].
[0033]
The isolated components are¹H and¹³C ノ NMR analysis, mass spectroscopy, infrared spectroscopy and ultraviolet-visible spectroscopy confirmed that carnosol (in the following formula, represented by (1), yield from plant: 0. 24%), carnosic acid (same, (2), 0.29%), 7-methoxy rosmanol (same, (3), 0.081%), and loureanoic acid (same, (4), 0.1%). 011%), rosmanol ((5), 0.006%), isolozmanol ((6), 0.027%) and oleanolic acid ((7), 0.47%).
[0034]
Embedded image

[0035]
Example 4 Lipase inhibitory effect of each isolated component from methanol extract of sage
The lipase inhibitory activity of each of the isolated components obtained in Example 3 was examined using the method of Example 2. FIG. 2 shows the results.
As shown in FIG. 2, the diterpene carnosol (1) showed the strongest lipase inhibitory activity (IC₅₀: 4 μg / mL), and inhibited carnosic acid (2), 7-methoxy rosmanol (3), and leureanoic acid (4), respectively.₅₀: 14, 33 and 50 μg / mL). Furthermore, it was found that the terpene has a lipase inhibitory activity, albeit weakly, against the triterpene oleanolic acid (7).
In addition, rosmanol (5) and isolozmanol (6) were significantly degraded due to oxidation, and the lipase inhibitory activity could not be measured.
[0036]
Example 5 Inhibition of fat absorption by methanol extract of sage and isolated components
The methanol extract of sage obtained in Example 1 and the components obtained in Example 3 (here, carnosol (1), carnosic acid (2), 7-methoxy rosmanol (3) and oleanolic acid (7) Were evaluated by measuring the change in blood triglyceride concentration due to oral administration or duodenal administration to olive oil-loaded mice.
(Oral administration) An aqueous suspension was prepared by suspending the methanol extract or each isolated component together with 5% gum arabic in water. The aqueous suspension was orally administered to ddY male mice fasted for 20 to 24 hours at a rate of 5 mL per kg of body weight. Thirty minutes later, olive oil was orally administered at a rate of 5 mL per kg of body weight, and two hours later, blood was collected from the orbital vein to measure the blood triglyceride concentration.
(Dduodenal administration) Using another mouse different from the above-mentioned oral administration experimental system, the effect of suppressing fat absorption when directly administered into the duodenum was examined. The mouse was laparotomized under ether anesthesia, and the aqueous suspension was directly administered into the duodenum at a rate of 5 mL per kg of body weight. After suturing the incision, 30 minutes after the intraduodenal administration, olive oil was orally administered at a rate of 5 mL per kg of body weight. Two hours later, the blood triglyceride concentration was measured.
The results of the oral and intraduodenal administration experimental systems for the methanol extract of sage (dose: 250 or 500 mg / kg) are combined in Table 1 and the four components obtained in Example 3 (here, The results for carnosol (1), carnosic acid (2), 7-methoxyrosmanol (3) and oleanolic acid (7) are shown in Tables 2 and 3, respectively.
[0037]
[Table 1]

[0038]
[Table 2]

[0039]
[Table 3]

Each value was shown by the average value of seven animals and standard error.^**Represents a significant difference from the olive oil administration group: p <0.01.
[0040]
From the results in Table 1, it was found that when the methanol extract of sage was orally administered, no blood triglyceride increase inhibitory action was observed, but intraduodenal administration exhibited a blood triglyceride increase inhibitory action. That is, it was revealed that the methanol extract of sage lost pancreatic lipase activity in the stomach.
[0041]
The results in Table 2 show that carnosol (1), which exhibited the strongest pancreatic lipase inhibitory activity in Example 4, did not exhibit a triglyceride elevation inhibitory effect (ie, a fat absorption inhibitory effect) in both oral and intraduodenal administration. This indicates that carnosic acid (2) shows a dose-dependent inhibitory effect on triglyceride elevation in oral administration, and that the action is further enhanced by intraduodenal administration. And from Table 3, it was found that 7-methoxy rosmanol (3) and oleanolic acid (7) did not exhibit the triglyceride increase inhibitory effect in both cases of oral administration and intraduodenal administration.
[0042]
From the above results, the lipase inhibitory action of the methanol extract of sage confirmed in Example 2 is strongly related to the fat absorption inhibitory action of carnosic acid (2), and the action is inactivated in the stomach. It turned out to be.
[0043]
Example 6 Inhibition of increase in blood triglyceride by administration of carnogic acid in olive oil-loaded mice pre-administered with a gastric secretion inhibitor
From the results of Example 5, the suppression of fat absorption of carnosic acid (which is represented by (2) in the formula of Example 3; hereinafter, referred to only as (2)), which is an isolated component effective for lipase inhibitory action, is shown. The effect of gastric juice on inactivation of fat absorption by gastric juice was examined in more detail in regard to the fact that noh was inactivated in the stomach.
The procedure is as follows.
(I) To a ddY male mouse fasted for 24 hours, an aqueous suspension containing both 5% gum arabic and a gastric secretion inhibitor / cimetidine (150 mg / kg) suspended in water was orally administered at a rate of 5 mL / kg body weight. And
(Ii) After 30 minutes, an aqueous suspension of 5% gum arabic and carnosic acid ((2), 100 mg / kg) both suspended in water is orally administered at a rate of 5 mL per kg of body weight,
(Iii) After further 30 minutes, olive oil was orally administered at a rate of 5 mL / kg body weight.
(Iv) Two hours after (iii), blood was collected from the orbital vein to measure the blood triglyceride concentration.
The results are shown in FIG.
[0044]
In FIG.
Column 1 contains an untreated group [system in which only step (iv) was performed]
Column 2 contains an olive oil administration group [that is, a system in which only steps (iii) to (iv) were performed]
Column 3 contains a carnosic acid ((2), 100 mg / kg) + olive oil administration group [other than step (i), ie, the system of (ii) to (iv)],
Column 4 is a group administered with cimetidine + olive oil [systems (i) and (iii) to (iv) other than step (ii)], and column 5 is a group administered with cimetidine + carnogic acid ((2), 100 mg / kg) + olive oil administration group [(i) to (iv) all steps]
Are respectively shown. Each column is represented by the average value of seven mice and the standard error.
In FIG. 3, * represents a significant difference from the olive oil administration group (column 2): p <0.05, and ** represents a significant difference: p <0.01.
[0045]
The blood triglyceride concentration of the mice (column 5) to which carnosic acid (2) was administered after the gastric secretion was previously suppressed using cimetidine was determined by using carnosic acid (2) alone without adding a gastric secretion inhibitor. Was lower than that of the mice administered with (column 3). From this, it was found that carnosic acid (2), which had an effect of suppressing fat absorption, lost its activity by gastric juice.
[0046]
For confirmation, the same evaluation was performed on the methanol extract of sage obtained in Example 1. FIG. 4 shows the results.
In FIG.
Column 1 contains an untreated group [system in which only step (iv) was performed]
Column 2 contains an olive oil administration group [that is, a system in which only steps (iii) to (iv) were performed]
Column 3 contains a sage methanol extract (500 mg / kg) + olive oil administration group [other than step (i), ie, (ii) to (iv)].
Column 4 shows cimetidine + olive oil administration group [systems (i) and (iii) to (iv) other than step (ii)], and column 5 shows cimetidine + sage methanol extract (500 mg / kg) + olive oil administration group [(i) to (iv) all steps]
Are respectively shown. Each column is represented by the average value of seven mice and the standard error.
In FIG. 4, ** indicates a significant difference from the olive oil administration group (column 2): p <0.01.
[0047]
From the comparison between

columns

3 and 5 in FIG. 4, it can be seen that in the methanol extract of sage containing carnosic acid (2), the suppression of gastric juice secretion by cimetidine in advance enhances the effect of suppressing fat absorption. .
[0048]
Example 7 Preparation of Sage Supercritical Carbon Dioxide Extract
100 g of dried sage leaves were charged into an extraction tank, and critical carbon dioxide at a pressure of 25 MPa and 100 ° C. was supplied to perform extraction for 60 minutes. Subsequently, the residue was subjected to extraction under the conditions of a pressure of 47.5 MPa and 100 ° C. for 60 minutes to obtain a sage supercritical carbon dioxide extract (7 g).
[0049]
Example 8 Inhibition of fat absorption by sage supercritical carbon dioxide extract
The fat absorption suppression effect of the sage supercritical carbon dioxide extract obtained in Example 7 was examined by the same method as in Example 5. Table 4 shows the results.
[Table 4]

Each value was shown by the average value of seven animals and standard error. ** represents a significant difference from the olive oil administration group: p <0.01.
[0050]
From this result, it was revealed that the supercritical carbon dioxide extract of sage has a very strong action of suppressing fat absorption.
[0051]
Formulation Example 1 (Preparation of enteric-coated capsule formulation containing methanol extract of sage)
Using the compositions and weight ratios shown in Table 4 below, enteric capsule preparations containing a methanol extract (powder) of sage were produced according to the following procedure. The methanol extract (powder) of sage was obtained by crushing the dried solid obtained in Example 1 using a mill or a blender.
[Table 5]

[0052]
First, a methanol extract (powder) of sage was suspended in hardened fat (hardened palm oil) at 40 ° C. to prepare capsule contents. Separately, gelatin, glycerin and pectin were mixed to prepare a capsule outer coating solution. Next, in the capsule manufacturing machine, the contents of the capsule were cooled down from the innermost nozzle of the concentric triple nozzle, the hardened oil and fat as the capsule inner film-forming substance from the intermediate nozzle, and the outer capsule liquid from the outermost nozzle. A triple-layer seamless capsule was continuously manufactured by simultaneously discharging the liquid into the liquid oil. The particle size of the obtained seamless capsule could be freely adjusted from 1 mm to 8 mm.
[0053]
The enteric solubility of the obtained seamless capsule was tested by the disintegration test method described in the Japanese Pharmacopoeia. As a result, the seamless capsule did not disintegrate within 2 hours in the first liquid (pH 1.2) and then disintegrated within 60 minutes in the second liquid (pH 6.8), resulting in an enteric coating. I confirmed that there is.
[0054]
Formulation Example 2 (Preparation of enteric coated capsule formulation containing rosemary methanol extract)
A methanol extract of rosemary was prepared according to the procedure of Example 1, except that rosemary was used instead of sage. The dry solid of the obtained methanol extract was pulverized using a mill or a blender, and the same amount was used in place of the sage methanol extract powder in Table 4 above. An enteric capsule formulation containing a methanolic extract of Marie (powder) was prepared. The obtained capsule was tested according to the disintegration test of the Japanese Pharmacopoeia in the same manner as in Preparation Example 1, and it was confirmed that the capsule was enteric.
[0055]
【The invention's effect】
ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, a pancreatic lipase inhibitory activity can be effectively expressed by ingestion of a small amount by applying an enteric-solution technique to the formulation containing the extract extract derived from a plant (sage and rosemary).
The enteric fat absorption inhibitor of the present invention, when taken before or during a meal, makes the ingested fat less susceptible to enzymatic hydrolysis by pancreatic lipase, thereby reducing the amount of fat absorbed from the intestinal tract. obtain. Therefore, even if a high-fat diet is consumed, absorption of fat into the body can be suppressed, and it is useful for prevention and treatment of lifestyle-related diseases such as obesity, arteriosclerosis, hypertension, myocardial infarction, cerebral infarction, and diabetes. is there.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows the concentration of 50% inhibition of pancreatic lipase activity (IC) for a methanol extract from sage tested in Example 2 of the present invention.₅₀4) is a graph showing an example.
FIG. 2 is a graph showing the lipase inhibitory effect of each isolated component from a methanol extract of sage tested in Example 4 of the present invention.
FIG. 3 is a graph showing the inhibitory effect of carnogic acid (2) administration on blood triglyceride elevation in olive oil-loaded mice pre-administered with a gastric secretion inhibitor tested in Example 6 of the present invention.
FIG. 4 is a graph showing the effect of suppressing the increase in blood triglyceride by administration of the methanol extract of sage obtained in Example 1 in olive oil-loaded mice pre-administered with a gastric secretion inhibitor tested in Example 6 of the present invention. is there.

Claims

An enteric fat absorption inhibitor containing an extract of sage and / or rosemary.

The enteric fat absorption inhibitor according to claim 1, which is in the form of a tablet, granule or capsule.

3. The enteric fat absorption inhibitor according to claim 1, wherein the extract contains carnosic acid represented by the following formula.

A food containing the enteric fat absorption inhibitor according to claim 1.