JP3913082B2 - 分析方法、分離方法、ミキサ、及び分析装置 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、液体クロマトグラフィを利用した分析方法及び分離方法、並びにこれらに用いるミキサ及び分析装置に関し、さらに詳しくは、溶離液の組成を変化させて分析等を行うグラジエント型の分析方法、分離方法等に関する。
【０００２】
【従来の技術】
液体クロマトグラフィを用いた分析方法に、溶離液の組成を経時的に変化させて成分分離及び成分分析を行うグラジエント分析と呼ばれるものがある。このようなグラジエント分析では、移動層を構成する溶離液の組成を経時的に変化させることにより、試料中の目的とする成分を迅速かつ確実に分離・定量することができる。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
しかし、グラジエント分析を用いても、特定の被検対象については、ピーク形状が非常に悪くなり、或いはピーク形状の経時変化も起こって、精密な分析が困難になる場合があった。
【０００４】
具体的に説明すると、例えばある標準物質の類縁物質についてグラジエント分析を行う場合において、類縁物質を溶かす試料溶媒がアセトニトリルであるものとする。また、類縁物質を分離するための溶離液の基底状態が殆ど水であって溶離液中のアセトニトリルの量を漸次増加させるものとする。この場合、試料注入時の移動層の組成が殆ど水となる。このため、分離カラムの入口側に試料を注入すると、試料溶媒は、あたかも移動層のように振舞うこととなり、分離カラム中でアセトニトリルのバンドを形成しつつ移動する。この結果、分離カラムの入口付近に濃縮されるべき試料溶質がアセトニトリル・バンドに押し出され、試料の分離すなわち類縁物質の構成成分のピーク検出が困難となる。
【０００５】
そこで、本発明は、試料溶媒が分離カラム中で移動層のように振舞うことを防止して、類縁物質等を構成する近接するピークを有する成分を正確に分離、検出することができる分析方法及び分離方法を提供することを目的とする。
【０００６】
また、本発明は、近接するピークを正確に分離、検出することができるグラジエント型の液体クロマトグラフィの分析方法等に用いるミキサや分析装置を提供することを目的とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】
上記課題を解決するため、本発明に係る分析方法は、液体クロマトグラフィを利用することにより、溶離液の組成を変化させつつ試料の成分を分析する分析方法であって、溶離液への試料の注入に際して、前記試料を前記溶離液に拡散させる工程と、前記溶離液に前記試料を拡散させた混合液を分離カラムの一端に充填する工程と、前記分離カラムの一端に溶離液を供給しつつ当該分離カラムの他端から吐出された溶出液の成分を逐次検出する工程とを備える。
【０００８】
上記分析方法では、試料を分離カラムの一端に充填する前に、試料を基底状態の溶離液に拡散させるので、このような拡散によって得た混合液は、分離カラムの入口部に安定した状態で充填される。よって、従来のように試料溶媒が分離カラム中で移動層のように振舞うことを簡単に防止でき、グラジエント型の液体クロマトグラフィを用いた分析において、近接するピークを有する成分を正確に分離、検出することができる。
【０００９】
また、上記分析方法の具体的な態様では、前記試料を前記溶離液に拡散させる工程で、流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体を用いて前記試料と前記溶離液とを混合する。この場合、簡単な構造の管状体によって試料を溶離液に拡散させつつ適宜撹拌することができる。
【００１０】
また、上記分析方法の別の具体的な態様では、前記管状体が、流路の断面形状が細長くなっている複数のネック部を流路に沿って周期的に有するとともに、隣接するネック部の断面長手方向を流路の延びる方向の回りに所定角度単位で回転させている。この場合、試料と溶離液とを効率よく混合することができる。
【００１１】
また、上記分析方法の別の具体的な態様では、前記所定角度が、６０゜である。この場合、試料と溶離液とをさらに効率よく混合してより均一に攪拌することができるので、近接するピークを有する成分の分離・検出能を高めることができる。
【００１２】
また、上記分析方法の別の具体的な態様では、前記管状体が、円形断面の流路を有する直管を軸方向に沿った周期的な位置で押しつぶすように変形させることによって形成される。この場合、ミキサを簡単な構造で作製も容易なものとすることができる。
【００１３】
また、上記分析方法の別の具体的な態様では、試料を注入した前記溶離液を、所定長以上の延長管に通した後に、前記管状体に供給する。この場合、試料と溶離液とをさらに効率よく混合し攪拌することができ、近接するピークを有する成分の分離・検出能を高めることができる。
【００１４】
また、上記分析方法の別の具体的な態様では、試料を注入した前記溶離液を、前記管状体に供給した後に、所定長以上の延長管に通す。この場合も、試料と溶離液とをさらに効率よく混合し攪拌することができ、近接するピークを有する成分の分離・検出能を高めることができる。
【００１５】
また、本発明に係る分離方法は、液体クロマトグラフィを利用することにより、溶離液の組成を変化させつつ試料を成分に分離する分離方法であって、溶離液への試料の注入に際して、前記試料を前記溶離液に拡散させる工程と、前記溶離液に前記試料を拡散させた混合液を分離カラムの一端に充填する工程と、前記分離カラムの一端に溶離液を供給しつつ当該分離カラムの他端から溶出液を吐出させる工程とを備える。
【００１６】
上記分離方法でも、試料を分離カラムの一端に充填する前に溶離液に拡散させるので、このような拡散によって得た混合液は、分離カラムの入口部に安定した状態で充填され、近接するピークを有する成分を正確に分離、検出することができる。
【００１７】
また、本発明に係るミキサは、液体クロマトグラフィ用の溶離液に試料を注入するための注入装置側に連結される入口部と、流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体と、溶離液を通過させつつ試料を成分に応じて分離するための分離カラム側に連結される出口部とを備える。
【００１８】
上記ミキサでは、入口部と出口部との間に配置される管状体が流路の断面形状が流路に沿って変化するので、試料を分離カラムの一端に充填する前に溶離液と試料とを適宜混合・撹拌することができる。このような撹拌によって得た混合液は、分離カラムの入口部に安定した状態で充填されるので、グラジエント型の液体クロマトグラフィを用いた分析において、近接するピークを有する成分を正確に分離、検出することができる。
【００１９】
また、上記ミキサの具体的な態様では、前記管状体が、流路の断面形状が細長くなっている複数のネック部を流路に沿って周期的に有するとともに、隣接するネック部の断面長手方向を流路の延びる方向の回りに所定角度単位で回転させている。この場合、試料と溶離液とを効率よく混合することができる。
【００２０】
また、本発明に係る分析装置は、液体クロマトグラフィ用の溶離液に試料を注入する注入装置と、前記注入装置の出口側に接続されるとともに、前記試料を前記溶離液に拡散させる拡散手段と、前記拡散手段の出口側に接続され、前記溶離液とともに一端に充填した試料を前記溶離液を通過させつつ成分に応じて分離する分離カラムと、当該分離カラムの他端から吐出された溶出液の成分を逐次検出する検出手段とを備える。
【００２１】
上記分析装置では、試料を分離カラムの一端に充填する前に拡散手段が試料を溶離液に拡散させるので、このような拡散によって得た混合液は、分離カラムの入口部に安定した状態で充填され、近接するピークを有する成分を正確に分離、検出することができる。
【００２２】
また、上記ミキサの具体的な態様では、前記拡散手段が、流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体を有する。この場合、簡単な構造の管状体によって試料を溶離液に拡散させつつ適宜撹拌することができる。
【００２３】
【発明の実施の形態】
〔第１実施形態〕
図１は、本発明の第１実施形態に係る分析方法を実施するための分析装置を概念的に説明するブロック図である。
【００２４】
図示の分析装置１０は、グラジエント型の高速液体クロマトグラフィの装置であり、溶離液の組成を経時的に変化させて成分分離及び成分分析を行うことができる。この分析装置１０は、複数の異なる溶媒Ａ、Ｂを所望の比率で混合して溶離液ＳＳを生成する溶離液供給装置２１と、溶離液供給装置２１の出口側に接続されて溶離液ＳＳに分析対象である試料ＳＡを注入する試料注入装置２３と、試料注入装置２３の出口側に接続されて試料ＳＡと溶離液ＳＳとを補助的に混合する補助ミキサ２５と、補助ミキサ２５の出口側に接続されて試料ＳＡと所定量の溶離液ＳＳとをより均一に混合するミキサ２７と、ミキサ２７を経た溶離液ＳＳ及び試料ＳＡの混合液Ｍが一端２９ａから注入される分離カラム２９とを備える。さらに、分析装置１０は、分離カラム２９の他端２９ｂに配管を介して接続されて試料ＳＡから分離された各成分の蛍光や吸光を検出するディテクタ部３１と、ディテクタ部３１で検出した蛍光や吸光に対応する信号を解析して分離成分の濃度等を計測する演算処理部３３と、ディテクタ部３１を経た溶出液Ｓを収容するタンク３５とを備える。
【００２５】
溶離液供給装置２１は、溶媒Ａ、Ｂの供給源や圧送用のポンプを有しており、溶媒Ａ、Ｂを所望の比率で混合した溶離液ＳＳを高圧で出射する。また、溶離液供給装置２１は、溶媒Ａ、Ｂの混合比を適宜変更することができ、試料ＳＡを分離カラム２９に充填した後に分離カラム２９に供給する溶離液ＳＳの組成比を連続的或いは段階的に変更することができる。これにより、試料ＳＡのグラジエント分析が可能になる。なお、溶媒Ａ、Ｂは、例えば水やアセトニトリル等の有機溶媒とすることができる。
【００２６】
試料注入装置２３は、溶離液供給装置２１から供給される溶離液ＳＳに試料ＳＡを所望量だけ注入する。溶離液ＳＳに注入する試料ＳＡの量は、他の測定条件等を考慮して適宜適宜変更することができる。なお、試料ＳＡは、分析対象である物質（被検対象）をアセトニトリル等の試料溶媒に溶かしたものである。
【００２７】
補助ミキサ２５は、流路を延長するための延長管であり、試料注入装置２３から供給される溶離液ＳＳと試料ＳＡとを混合してある程度均一化する。この補助ミキサ２５は、内径０．２５ｍｍ程度で２５０ｍｍ〜１５００ｍｍ程度の長さを有するＳＵＳ製の管を螺旋状に形成したものであり、管内で液体を通過させる過程において、この液体すなわち溶離液ＳＳ中で試料ＳＡを徐々に拡散させつつ混合することができる。
【００２８】
ミキサ２７は、流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体からなり、管状体内に形成される乱流によって所定量の溶離液ＳＳ中における試料ＳＡの均一な混合を達成し、ほぼ均一な組成の混合液Ｍを分離カラム２９の一端２９ａに供給する。なお、ミキサ２７は、補助ミキサ２５とともに拡散手段を構成する。
【００２９】
図２は、ミキサ２７の外観を説明する斜視図であり、図３は、図２のミキサ２７の寸法例を説明する図である。また、図４は、図２及び図３に示すミキサ２７の縦断面構造を説明する図である。このミキサ２７は、内径１ｍｍ程度のＳＵＳ製の管を加工したものであり、補助ミキサ２５に連結される入口部２７ａと、内部の流路ＦＰの断面形状が流路ＦＰの方向に沿って変化する管状体からなるミキサ本体２７ｂと、分離カラム２９側に連結される出口部２７ｃとからなり、総容量５０μｌ程度である。このうち入口部２７ａと出口部２７ｃは、円形断面の流路を有するが、ミキサ本体２７ｂは、スリット状の細長い流路断面を有するネック部ＮＰを等間隔で形成した構造となっており、隣接するネック部ＮＰは、流路断面の長手方向が互いに直交する方向に延びるようになされている。つまり、ミキサ本体２７ｂ中における流路ＦＰの断面は、矩形になっており、その縦横の寸法比が周期的に増減を繰り返すとともに、長手方向が周期的に切り換る。具体的作製例では、ミキサ本体２７ｂの長さを２１ｍｍとし、断面形状の変化の周期を６ｍｍとしているので、直交するネック部ＮＰは、８箇所に形成されておりそれらの間隔は３ｍｍとなっている。
【００３０】
図５は、ミキサ本体２７ｂの内部における混合・撹拌を説明する図である。ミキサ本体２７ｂの内部では、所定量の溶離液ＳＳと試料ＳＡとからなる液体Ｌが細長い断面形状を直交する方向に周期的に変化させつつ流動する。このため、ミキサ本体２７ｂ内部では液体Ｌに複雑な圧力が作用して乱流が形成され、液体Ｌに含まれる溶離液ＳＳと試料ＳＡとを効率よく均一に混合することができる。
【００３１】
図１に戻って、分離カラム２９は、管状の部材からなり、内部に試料分離用の固定相としてシリカゲル等を封入している。なお、分離カラム２９の周囲には温度調節調節用のヒータ（不図示）等が配置されており、分離カラム２９内部の温度を一定に保つことができる。
【００３２】
また、ディテクタ部３１は、検出手段として、分離カラム２９の他端２９ｂから吐出される溶出液Ｓが通過するガラス管路等を備える。このディテクタ部３１では、これを通過する溶出液Ｓに紫外光を照射して蛍光を検出したり、赤外線の吸光度を検出するといった光学的な手法で分離された成分の検出が行われる。
【００３３】
演算処理部３３は、ディテクタ部３１から出力される蛍光や吸光度に対応する信号に適当な処理を施して、溶出液Ｓに含まれる分離成分の濃度やこれに対応する数値をリテンションタイムとの相関として記録、表示する。
【００３４】
タンク３５は、ディテクタ部３１で分析を終了した溶出液Ｓを回収するためのものであり、リテンションタイムを考慮してタンク３５を切り換えれば、溶出液Ｓを成分ごとに精密に分離することもできる。
【００３５】
以下、図１に示す分析装置１０の動作について説明する。まず、溶離液供給装置２１を動作させて、グラジエント分析における基底状態に対応する溶離液ＳＳを一定流量で試料注入装置２３、さらには分離カラム２９に導入する。例えば溶媒Ａ、Ｂが水及びアセトニトリルである場合、基底状態の溶離液ＳＳは水が主要な成分となる。
【００３６】
この後、適当なタイミングで試料注入装置２３を介して溶離液ＳＳに試料ＳＡを所望量（例えば２μｌ）だけ注入する。ここで、試料ＳＡは、例えばアセトニトリルのみからなる試料溶媒に被検対象を溶かし込むことによって調整されたものである。このように、試料ＳＡをアセトニトリルのみからなる試料溶媒で調整するのは、試料ＳＡに含まれる被検対象が水によって分解作用を受けやすい場合を考慮したものであり、特定種類の被検対象については、その分析条件が試料ＳＡの調整方法、試料注入量等に関して基準書に詳細に規定されていて、これらを簡単に変更できないからである。
【００３７】
以上のような注入により、試料ＳＡが溶離液ＳＳに送り出されて補助ミキサ２５やミキサ２７を通過する。補助ミキサ２５を通過する際に、注入された試料ＳＡは、周囲の溶離液ＳＳに徐々に拡散し緩やかな混合が行われる。次に、ミキサ２７を通通過する際に、試料ＳＡは、特にミキサ本体２７ｂで溶離液ＳＳと十分に混合され、ほぼ均一な混合液Ｍが得られる。ここで、混合液Ｍは、例えばアセトニトリルのみからなる試料溶媒に被検対象を溶かし込むことによって得た試料ＳＡと、ほぼ水からなる溶離液ＳＳとを混合して得たものであり、上記のような補助ミキサ２５及びミキサ２７を用いることにより、被検対象を例えば水：アセトニトリル＝１：１の溶媒に溶かした場合に近い状態とすることができる。
【００３８】
ミキサ２７を出射した混合液Ｍは、その後試料注入装置２３から圧送される溶離液ＳＳに押し出されて分離カラム２９の一端２９ａに導入される。これにより、試料ＳＡの分離カラム２９への充填が完了する。
【００３９】
その後も、溶離液供給装置２１からの溶離液ＳＳを分離カラム２９に供給しつづけることにより、分離カラム２９の一端２９ａに充填された混合液Ｍすなわち試料ＳＡが成分ごとに徐々に分離しつつ分離カラム２９の他端２９ｂに移動する。このような移動により、試料ＳＡが分離カラム２９中で成分ごとのバンドに分離され、特定の標準物質やその類縁物質等の精密な分離が可能になる。この際、溶離液ＳＳは、グラジエント分析のために徐々にその組成を変化させる。例えば、溶離液ＳＳ中の水の濃度を低下させアセトニトリルの濃度を増加させる。これにより、試料ＳＡの分離条件をある程度の任意性をもって制御することができるので、迅速で高精度の測定結果を得ることができる。すなわち、被検対象である溶質の極性差が大きい場合に、当初水が多い分離液で分離カラム２９に保持されにくい極性の高い化合物を分離し、その後次第にアセトニトリルの比率を増加させて比較的極性の低い化合物を分離することができる。
【００４０】
なお、上記の補助ミキサ２５及びミキサ２７による拡散・希釈が過剰な場合、分離カラム２９の一端２９ａに充填される試料ＳＡの濃度が希釈されだけでなく、混合液Ｍとして広いバンドを有することになるので、分離カラム２９による分離ピークのバンド幅が広がって、成分分離の精度が却って低下する場合もある。そこで、補助ミキサ２５及びミキサ２７の寸法及び形状を調節して、これらによる拡散、希釈が過剰にならない範囲で、試料ＳＡと溶離液ＳＳの混合を行う。
【００４１】
一方、上記の補助ミキサ２５及びミキサ２７による拡散・希釈が全くない場合、基底状態にあって水に近い組成の溶離液ＳＳで安定している分離カラム２９に、アセトニトリル等の有機溶媒のみにて調整した試料ＳＡが充填されることになる。この場合、分離カラム２９の一端２９ａに充填された試料ＳＡは、あたかも移動相すなわち溶離液ＳＳのように振舞う。つまり、本来は分離カラム２９の一端２９ａに濃縮されるべき溶質すなわち被検物質がアセトニトリル等の有機溶媒のバンドとともに分離カラム２９中で押し出されるように移動して各成分の溶出が早まって、特にリテンションタイムの短い成分を含有する被検対象（例えば特定種類の標準物質の類縁物質等）の分離が困難になる。
【００４２】
これに対し、上記実施形態のような補助ミキサ２５及びミキサ２７を分離カラム２９の一端２９ａに近接して配置した場合、試料ＳＡから極性の低い成分を分離する際に得られる各ピーク形状の鋭さが改善され、ピーク形状の再現性も高まる。従来、試料ＳＡはなるべく高濃度のバンドにして分離カラム２９に充填することが望ましいと考えられていたが、本実施形態のようにミキサ２７等を用いて試料ＳＡのバンドを強制的に一定範囲でブロードにすることで、却って測定精度や分離精度が高まる場合があることが判明した。
〔第２実施形態〕
以下、第２実施形態に係る分析方法等を実施するための分析装置について説明する。第２実施形態の分析方法等は、第１実施形態の分析方法等で用いるミキサ２７を変更したものであり、ここでは、改良したミキサについてのみ説明する。
【００４３】
図６は、ミキサ１２７の外観を説明する斜視図であり、図７は、図６のミキサ１２７の寸法例を説明する図である。
【００４４】
このミキサ１２７も、内径１ｍｍ程度のＳＵＳ製の管を加工したものであり、図１の補助ミキサ２５に連結される入口部１２７ａと、内部の流路ＦＰの断面形状が流路ＦＰの方向に沿って変化するミキサ本体１２７ｂと、分離カラム２９側に連結される出口部１２７ｃとからなる。このうち入口部１２７ａと出口部１２７ｃは、円形断面の流路を有するが、ミキサ本体２７ｂは、スリット状の細長い流路断面を有する６つのネック部ＮＰ1〜ＮＰ6を等間隔で形成した構造となっており、隣接する一対のネック部ＮＰ1及びＮＰ2（ＮＰ2及びＮＰ3、ＮＰ3及びＮＰ4、…）は、流路断面の長手方向が６０°ずれた方向に延びるように形成されている。この結果、ミキサ本体１２７ｂ中における流路断面は、その矩形状の縦横の寸法比が増減を繰り返し、その断面長手方向が６０°ずつ周期的に切り換る。具体的作製例では、ミキサ本体１２７ｂの長さを１５ｍｍとし、隣接するネック部ＮＰの間隔を２．５ｍｍとした。
【００４５】
図８は、ミキサ本体１２７ｂを流路に沿った軸方向から見た形状を説明する図である。ネック部ＮＰ2は、ネック部ＮＰ1に対して時計方向に６０°回転して形成されており、ネック部ＮＰ3は、ネック部ＮＰ2に対して時計方向に６０°回転して形成される。この結果、ミキサ本体１２７ｂ内部の流路中ＣＨでは、を試料ＳＡと溶離液ＳＳとを含む液体が旋回するように断面形状を変化させながら流動することになり、試料ＳＡと所定量の溶離液ＳＳとを効率よく均一に混合することができる。なお、実験的には、流路断面の長手方向の角度ずれの単位を６０°とすることで、溶離液ＳＳと試料ＳＡの混合効率を高めることができ高い均一性が得られることが分かった。すなわち、隣接する断面長手方向の角度ずれを第１実施形態のように９０°とする場合から徐々に減少させて効果を試したが、角度ずれを６０°とした場合に、分析において最もシャープなピークが得られた。
【００４６】
以下、具体的な実施例について説明する。分析装置１０としては、図１に示すような構造のものを用いた。ただし、分離カラム２９の一端２９ａ側には、第１実施形態のミキサ２７でなく第２実施形態で説明したミキサ１２７を用いた。
【００４７】
図９〜１４は、ある標準物質の類縁物質の分析における補助ミキサ２５やミキサ１２７の効果を説明するグラフである。図９は、補助ミキサ２５やミキサ１２７を特に設けない比較例であり、横軸はリテンションタイム（ｍｉｎ）を示し、縦軸は強度を示す。この場合、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は２５０ｍｍとなっている。図１０は、ミキサ１２７を設けた実施例の場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は２５０ｍｍとなっている。この場合、図９の比較例よりもピークがシャープになり、微小なピークが現れる。また、図１１は、補助ミキサ２５のみを設けた場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は１０００ｍｍとなっている。この場合、図９の比較例よりもピークがシャープになる。図１２は、補助ミキサ２５及びミキサ１２７を設けた場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は１０００ｍｍとなっている。この場合、図１１の場合よりもさらにピークがシャープになり、微小なピークが現れる。図１３は、長めの補助ミキサ２５のみを設けた場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は１５００ｍｍとなっている。この場合、図１１の比較例よりもさらにピークがシャープになる。図１４は、長めの補助ミキサ２５及びミキサ１２７を設けた場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は１５００ｍｍとなっている。この場合、図１３の場合よりもさらにピークがシャープになり、微小なピークが現れる。上記実施例では、溶媒Ａとして１０％アセトニトリル水溶液にＴＦＡを０．００５％添加したものを用い、溶媒ＢとしてアセトニトリルにＴＦＡを０．００５％添加したものを用いた。また、分離カラム２９に供給する溶離液ＳＳの流量を１．０ｍｌ／ｍｉｎとし、分離カラム２９の温度を４０℃とし、試料ＳＡの注入量を２０μｌとした。また、溶出液Ｓの検出には、２４０ｎｍの紫外吸収を用いた。
【００４８】
以上をまとめると、ミキサ１２７を設けることによって、メインピーク（リテンションタイム１９．４９６ｍｉｎ）に対し、相対リテンションタイム０．９８ｍｉｎにおけるピーク形状の分離及び改善が達成されていることが分かる。また、上記メインピークの面積値は、ミキサ１２７の装着の有無に関わらずほぼ等しいが、ピークの高さがミキサ１２７を装着することによって約１．５倍となり、ピーク形状がシャープ化することが分かる。その他のピークに関しても、ミキサ１２７を装着することによってピーク形状がシャープになっており、補助ミキサ２５の付加によってピークの高さがさらに増加している。
【００４９】
図１６、１７は、参考のため、図９〜１４に示す類縁物質に対応する標準物質の分析を説明するグラフである。図１６は、補助ミキサ２５のみを設けた場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は１５００ｍｍとなっている。図１７は、補助ミキサ２５及びミキサ１２７を設けた場合であり、試料注入装置２３から分離カラム２９の一端２９ａまでの配管長は１５００ｍｍとなっている。
【００５０】
以上実施形態に即して本発明を説明したが、本発明は上記実施形態に限定されるものではない。例えば、ミキサ２７、１２７の形状や寸法は、用途に応じて適宜変更することができる。特にネック部ＮＰの間隔やずれ角を一定とする必要はなく、例えば不規則な間隔でネック部ＮＰを配置し、或いはずれ角を９０°や６０°に限らずランダムに設定することも可能である。
【００５１】
また、上記実施形態では、試料ＳＡをアセトニトリルで調整した場合について説明したが、他の溶媒で調整した試料であっても、溶離液ＳＳと親和性があれば上記実施形態と同様の効果が得られる。同様に、溶離液ＳＳの種類やグラジエント分析における組成変更のレートも目的や用途に応じて適宜変更することができる。
【００５２】
【発明の効果】
以上の説明から明らかなように、本発明に係る分析方法や分離方法等によれば、試料を分離カラムの一端に充填する前に溶離液に拡散させることになるので、このような拡散によって得た混合液は、分離カラムの入口部に安定した状態で充填され、近接するピークを有する成分を正確に分離、検出することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】第１実施形態に係る分析方法を実施するための分析装置を概念的に説明するブロック図である。
【図２】ミキサの外観を説明する斜視図である。
【図３】図２のミキサの寸法例を説明する図である。
【図４】図２及び図３に示すミキサの縦断面構造を説明する図である。
【図５】ミキサ内部における撹拌を説明する図である。
【図６】ミキサの外観を説明する斜視図である。
【図７】図２のミキサの寸法例を説明する図である。
【図８】ミキサの流路を説明する図である。
【図９】補助ミキサやミキサの効果を説明するグラフである。
【図１０】補助ミキサやミキサの効果を説明するグラフである。
【図１１】補助ミキサやミキサの効果を説明するグラフである。
【図１２】補助ミキサやミキサの効果を説明するグラフである。
【図１３】補助ミキサやミキサの効果を説明するグラフである。
【図１４】補助ミキサやミキサの効果を説明するグラフである。
【図１５】標準物質の分析を説明するグラフである。
【図１６】標準物質の分析を説明するグラフである。
【符号の説明】
１０ 分析装置
２１ 溶離液供給装置
２３ 試料注入装置
２５ 補助ミキサ
２７,１２７ ミキサ
２７ａ 入口部
２７ｂ ミキサ本体
２７ｃ 出口部
２９ 分離カラム
２９ａ 一端
２９ｂ 他端
３１ ディテクタ部
３３ 演算処理部
３５ タンク
Ａ,Ｂ 溶媒
Ｍ 混合液
ＮＰ ネック部
Ｓ 溶出液
ＳＡ 試料
ＳＳ 溶離液

Claims (12)

1. 液体クロマトグラフィを利用することにより、溶離液の組成を変化させつつ試料の成分を分析する分析方法であって、
   溶離液への試料の注入に際して、前記試料を前記溶離液に拡散させる工程と、
   前記溶離液に前記試料を拡散させた混合液を分離カラムの一端に充填する工程と、
   前記分離カラムの一端に溶離液を供給しつつ当該分離カラムの他端から吐出された溶出液の成分を逐次検出する工程と
   を備える分析方法。
2. 前記試料を前記溶離液に拡散させる工程で、流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体を用いて前記試料と前記溶離液とを混合することを特徴とする請求項１記載の分析方法。
3. 前記管状体は、流路の断面形状が細長くなっている複数のネック部を流路に沿って周期的に有するとともに、隣接するネック部の断面長手方向を流路の延びる方向の回りに所定角度単位で回転させていることを特徴とする請求項２記載の分析方法。
4. 前記所定角度は、６０゜であることを特徴とする請求項３記載の分析方法。
5. 前記管状体は、円形断面の流路を有する直管を軸方向に沿った周期的な位置で押しつぶすように変形させることによって形成されることを特徴とする請求項２から請求項４のいずれか記載の分析方法。
6. 試料を注入した前記溶離液を、所定長以上の延長管に通した後に、前記管状体に供給することを特徴とする請求項２から請求項５のいずれか記載の分析方法。
7. 試料を注入した前記溶離液を、前記管状体に供給した後に、所定長以上の延長管に通すことを特徴とする請求項２から請求項５のいずれか記載の分析方法。
8. 液体クロマトグラフィを利用することにより、溶離液の組成を変化させつつ試料を成分に分離する分離方法であって、
   溶離液への試料の注入に際して、前記試料を前記溶離液に拡散させる工程と、
   前記溶離液に前記試料を拡散させた混合液を分離カラムの一端に充填する工程と、
   前記分離カラムの一端に溶離液を供給しつつ当該分離カラムの他端から溶出液を吐出させる工程と
   を備える分離方法。
9. 液体クロマトグラフィ用の溶離液に試料を注入するための注入装置側に連結される入口部と、
   流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体と、
   溶離液を通過させつつ試料を成分に応じて分離するための分離カラム側に連結される出口部と
   を備えるミキサ。
10. 前記管状体は、流路の断面形状が細長くなっている複数のネック部を流路に沿って周期的に有するとともに、隣接するネック部の断面長手方向を流路の延びる方向の回りに所定角度単位で回転させていることを特徴とする請求項９記載のミキサ。
11. 液体クロマトグラフィ用の溶離液に試料を注入する注入装置と、
    前記注入装置の出口側に接続されるとともに、前記試料を前記溶離液に拡散させる拡散手段と、
    前記拡散手段の出口側に接続され、前記溶離液とともに一端に充填した試料を前記溶離液を通過させつつ成分に応じて分離する分離カラムと、
    当該分離カラムの他端から吐出された溶出液の成分を逐次検出する検出手段と
    を備える分析装置。
12. 前記拡散手段は、流路の断面形状が流路に沿って変化する管状体を有することを特徴とする請求項１１記載の分析装置。

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