JP3882027B2 - ２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンｄ誘導体及びその合成中間体 - Google Patents
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Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体、その合成中間体及び前記誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤に関する。さらに詳しくは、慢性腎不全、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症等のカルシウム代謝の欠陥症、乾癬等の皮膚疾患、骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍等の細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体、その合成中間体及び前記誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、ビタミンＤの研究の進展に伴い、各種の１α−ヒドロキシビタミンＤ誘導体が医薬品として開発されてきており、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ3 や、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 がすでに臨床的に骨粗鬆症治療薬として用いられている。
しかしながら、これらの化合物は、血中カルシウムの上昇作用等の副作用を呈することから、かかる副作用の少ないビタミンＤ誘導体の研究が近年、活発に行われてきている。前記ビタミンＤ誘導体として、例えば、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 、２４−エピビタミンＤ2 等が骨粗鬆症治療薬として検討されており、また、２２−オキサ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 等が副甲状腺機能亢進症治療薬として検討されている。
本発明者らは、カルシウムの代謝改善剤に有用な化合物として、２０−エピ−２２−メチルビタミンＤ誘導体をすでに開発している（特開平６−２５１５５号公報）。しかしながら、前記ビタミンＤ受容体結合活性は極めて高いという優れた性質を有するが、その反面、血中カルシウム上昇作用は高い。したがって、疾患を治療する立場から、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、かつ安全性に優れたビタミンＤ誘導体の開発が望まれているのが実状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、ビタミンＤ受容体結合活性が高く、血中カルシウム上昇作用がさほど高くなく、安全性により優れたビタミンＤ誘導体、その合成中間体及び前記誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明の要旨は、
（１） 式（Ｉ）：
【０００５】
【化４】
【０００６】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基を示す）
で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体、
（２） 式（II）：
【０００７】
【化５】
【０００８】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基、Ｒ4 はメチル基、ヒドロキシメチル基、ハロゲノメチル基、有機スルホニルオキシメチル基又はアルコキシカルボニル基を示す）
で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体、並びに
（３） 式（Ｉ）：
【０００９】
【化６】
【００１０】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基を示す）
で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤
に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明者らは、２０−エピビタミンＤ誘導体の置換基の影響について詳細に検討を行ったところ、２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体が高いビタミンＤ受容体結合活性を有するとともに、副作用が小さいことを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。
【００１２】
本発明の２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、前記したように、式（Ｉ）：
【００１３】
【化７】
【００１４】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基を示す）
で表される化合物である。
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 が表す水酸基の保護基としては、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、ベンゾイル基等のアシル基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基；トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、フェニルジメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基等の有機シリル基；メトキシメチル基、１−エトキシエチル基、メトキシエトキシメチル基等のアルコキシメチル基；２−テトラヒドロフラニル基、２−テトラヒドロピラニル基等のオキサシクロアルキル基等を挙げることができる。
【００１６】
式（Ｉ）で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、新規化合物であり、公知化合物である式（Ｖ）：
【００１７】
【化８】
【００１８】
（式中、Ｒ1 及びＲ2 は前記と同じ）
で表されるプレグナ−５，７−ジエン−２０−カルバルデヒド誘導体を出発原料とし、式：
【００１９】
【化９】
【００２０】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は前記と同じ、Ｒ41はアルコキシカルボニル基、Ｒ42はヒドロキシメチル基、Ｒ43は有機スルホニルオキシメチル基又はハロゲノメチル基及びＲ44はメチル基を示す）
で表されるスキームにしたがって合成することができる。
【００２１】
前記スキームにしたがって得られる式（Ｉ）で表される化合物の合成中間体である式（II−１）、式（II−２）、式（II−３）及び式（II−４）に代表される式（II）：
【００２２】
【化１０】
【００２３】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は前記と同じ、Ｒ4 はメチル基、ヒドロキシメチル基、有機スルホニルオキシメチル基、ハノゲノメチル基又はアルコキシカルボニル基を示す）
で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体は、いずれも新規化合物である。
【００２４】
式（II）において、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は、いずれも式（Ｉ）におけるＲ1 、Ｒ2 及びＲ3 と同様であればよい。
【００２５】
また、式（II）において、Ｒ4 が表す有機スルホニルオキシメチル基としては、例えば、メタンスルホニルオキシメチル基、ベンゼンスルホニルオキシメチル基、トルエンスルホニルオキシメチル基等を挙げることができる。また、式（Ｉ）において、Ｒ4 が表すアルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基等を挙げることができる。
【００２６】
前記スキームの各工程について、以下に詳しく説明する。
【００２７】
式（Ｖ）で表されるプレグナ−５，７−ジエン−２０−カルバルデヒド誘導体は、例えば、国際公開第８８／０７５４５号パンフレット（１９８８）及び特開平７−１８８２８１号公報等に記載されている方法にしたがって合成することができる。
【００２８】
▲１▼第１工程
前記プレグナ−５，７−ジエン−２０−カルバルデヒド誘導体と水酸基を保護した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノンとを常法によりアルドール縮合させ、脱水することにより、式（IV）で表される不飽和ケトンが得られる。
【００２９】
▲２▼第２工程
前記（IV）で表される不飽和ケトンを、常法に従い、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素亜鉛等の還元剤で還元し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、式(III）で表される不飽和アルコールが得られる。
【００３０】
前記反応で得られる式(III）で表される不飽和アルコールには、２４位の水酸基がＳの立体配置をとる不飽和アルコール（以下、Ｓ−不飽和アルコールという）とＲの立体配置をとる不飽和アルコール（以下、Ｒ−不飽和アルコールという）が含まれる。前記式(III）で表される不飽和アルコールの立体異性体の混合物から、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの分離手段を用いて両者を分離することによりＳ−不飽和アルコールとＲ−不飽和アルコールとをそれぞれ単離することができる。
【００３１】
また、以下の製造工程には、前記不飽和アルコールとしては、前記Ｓ−不飽和アルコール及びＲ−不飽和アルコールの混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００３２】
▲３▼第３工程
前記式(III）で表される不飽和アルコールを、プロピオン酸、ステアリン酸、安息香酸等の酸触媒の存在下で、常法によりオルト酢酸トリエチル、オルト酢酸トリメチル、オルト酢酸トリプロピル、オルト酢酸トリブチル等のオルト酢酸エステルと反応させて、転位反応を進行させることにより、式（II−１）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００３３】
前記反応は、立体特異的に進行する。即ち、前記Ｓ−不飽和アルコールからは、２２位がＳの立体配置をとる式（II−１）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−１）という）が得られ、Ｒ−不飽和アルコールからは、２２位がＲの立体配置をとる化合物（以下、Ｒ−（II−１）という）が得られる。
【００３４】
また、前記不飽和アルコールとして、Ｓ−不飽和アルコールとＲ−不飽和アルコールの混合物を用いた場合には、前記のように式（II−１）で表される化合物の立体異性体の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程で説明したのと同様の方法により、Ｓ−（II−１）とＲ−（II−１）とをそれぞれ単離することができる。
【００３５】
また、以下の製造工程には、前記式（II−１）で表される化合物としては、Ｓ−（II−１）及びＲ−（II−１）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００３６】
▲４▼第４工程
前記式（II−１）で表される化合物を、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素リチウム等の還元剤で還元することにより、式（II−２）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００３７】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−１）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−１）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（II−２）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−２）という）、また前記Ｒ−（II−１）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（II−２）で表される化合物（以下、Ｒ−（II−２）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００３８】
また、前記反応に前記式（II−１）で表される化合物として、Ｓ−（II−１）とＲ−（II−１）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（II−２）とＲ−（II−２）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（II−２）とＲ−（II−２）とをそれぞれ単離することができる。
【００３９】
また、以下の製造工程には、前記式（II−２）で表される化合物としては、Ｓ−（II−２）及びＲ−（II−２）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００４０】
▲５▼第５工程
前記式（II−２）で表される化合物を、メタンスルホニルクロライド、ベンゼンスルホニルクロライド、ｐ−トルエンスルホニルクロライド等の有機スルホニルハライドとピリジン、トリエチルアミン等の塩基の存在下で反応させることにより、式（II−３）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４１】
また、他の製造方法としては、前記式（II−２）で表される化合物を、ＴＨＦ中でトリフェニルホスフィン及びイミダゾールの存在下でヨウ素、トリフェニルホスフィン−四臭化炭素等のハロゲン化剤と反応させることにより、式（II−３）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４２】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−２）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−２）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（II−３）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−３）という）、また前記Ｒ−（II−２）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（II−３）で表される化合物（以下、Ｒ−（II−３）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００４３】
また、前記反応に前記式（II−２）で表される化合物として、Ｓ−（II−２）とＲ−（II−２）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（II−３）とＲ−（II−３）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（II−３）とＲ−（II−３）とをそれぞれ単離することができる。
【００４４】
また、以下の製造工程には、前記式（II−３）で表される化合物としては、Ｓ−（II−３）及びＲ−（II−３）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００４５】
▲６▼第６工程
前記式（II−３）で表される化合物において、Ｒ43として有機スルホニルオキシメチル基を有する化合物の場合、該有機スルホニルオキシメチル基を有する化合物を水素化リチウムアルミニウム、水素化トリエチルホウ素リチウム等の還元剤で還元することにより、式（II−４）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４６】
また、式（II−３）で表される化合物において、Ｒ43としてハロゲノメチル基を有する化合物の場合には、該ハロゲノメチル基を有する化合物を、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化トリエチルホウ素リチウム等の還元剤で還元することにより、式（II−４）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４７】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−３）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−３）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（II−４）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−４）という）、また前記Ｒ−（II−３）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（II−４）で表される化合物（以下、Ｒ−（II−４）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００４８】
また、前記反応に前記式（II−３）で表される化合物として、Ｓ−（II−３）とＲ−（II−３）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（II−４）とＲ−（II−４）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（II−４）とＲ−（II−４）とをそれぞれ単離することができる。
【００４９】
また、以下の製造工程には、前記式（II−４）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体としては、Ｓ−（II−４）及びＲ−（II−４）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００５０】
▲７▼第７工程
前記式（II−４）で表される化合物を、常法に従い、光異性化、熱異性化することにより、式（Ｉ）で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体を得ることができる。
【００５１】
また、前記反応を行なう際に、前記式（II−４）で表される化合物を、メタノール、エタノール等のアルコール及び／又は水の存在下にｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、カンファースルホン酸等の酸触媒を用いて、２５位の水酸基の保護基であるＲ3 を脱保護したものを用いることができる。
【００５２】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−４）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−４）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（Ｉ）で表される化合物（以下、Ｓ−（Ｉ）という）、また前記Ｒ−（II−４）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（Ｉ）で表される化合物（以下、Ｒ−（Ｉ）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００５３】
また、前記反応に前記式（II−４）で表される化合物として、Ｓ−（II−４）とＲ−（II−４）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（Ｉ）とＲ−（Ｉ）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（Ｉ）とＲ−（Ｉ）とをそれぞれ単離することができる。
【００５４】
このようにして得られた式（Ｉ）で表される化合物の反応混合物からの単離・精製は、一般に有機化合物を反応混合物から単離・精製する際に用いられている方法と同様の方法によって行うことができる。例えば、反応混合物を濃縮することにより粗生成物を得、得られた粗生成物を必要に応じて再結晶、クロマトグラフィー等に付することによって行うことができる。
【００５５】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物は、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体に対して高い結合活性を示し、しかもビタミンＤ結合タンパクとの親和性が低く、高い分化誘導能を有することから、乾癬等の皮膚疾患、骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍等の細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である。また、低カルシウム、低ビタミンＤ食ラットに対する投与においても血中カルシウムの上昇作用が弱く、急性毒性試験においても低毒性であったことから、副作用の少ない、骨粗鬆症、副甲状腺機能亢進症、慢性腎不全、骨軟化症等のカルシウム代謝の欠陥症の治療薬として有用である。このように本発明の化合物は、カルシウム代謝改善剤として有用である。
【００５６】
また、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とする本発明のカルシウム代謝改善剤は、適当な剤型の医薬組成物として経口または非経口的に投与することができる。本発明の化合物の投与量は、患者の年齢、体重、症状、投与ルートなどによって異なるが、医者の診断に応じて適宜決定される。
【００５７】
本発明のカルシウム代謝改善剤は、有効成分である式（Ｉ）で表される化合物の有効量と、薬理学的に許容される担体または賦形剤とを含有する組成物であってもよい。このような組成物は、経口または非経口投与に適する剤型として提供される。
【００５８】
即ち、経口投与のための組成物の剤型としては、例えば、固体または液体の剤型、具体的には錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。このような組成物は、公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられている担体または賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどがあげられる。
【００５９】
非経口投与のための組成物を、例えば、注射剤として用いる場合、公知の方法に従い、通常、注射剤に用いられている無菌の水性ないしは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって該注射剤を調製することができる。注射用の水性液としては、生理食塩水、ブドウ糖などや、その他の補助液を含む等張液などがあげられ、これらは、適当な溶解補助剤などと併用してもよい。
【００６０】
かくして得られる本発明のカルシウム代謝改善剤には、式（Ｉ）で表わされる化合物を配合することによって好ましくない相互作用を生じないかぎり、他の活性成分が含有されていてもよい。
【００６１】
【実施例】
次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００６２】
製造例１〔水酸基を保護した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノンの製造〕
【００６３】
【化１１】
【００６４】
０℃に冷却した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノン５．４７ｇ（４２．０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン２９ｍｌ（０．１６８ｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍｌ）溶液にメチルクロロメチルエーテル１０．２ｍｌ（０．１２６ｍｏｌ）を加え、室温で５時間１０分間攪拌した後、水５ｍｌを加え、ジクロロメタンで３回抽出した。有機層を水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、水酸基をメトキシメチル基で保護した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノン５．３１ｇを得た（収率７３％）。
【００６５】
製造例２〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン（IV）の製造〕（第１工程）
【００６６】
【化１２】
【００６７】
−７８℃に冷却したジイソプロピルアミン６４３μｌ（４．５９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液にｎ−ブチルリチウムの１．６Ｍヘキサン溶液２．１５ｍｌを滴下し、１５分間攪拌してリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）溶液を調製した。−７８℃に冷却した製造例１で得られた５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノン６００ｍｇ（３．４４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液にＬＤＡ溶液を滴下し、１５分間攪拌し、エノラート溶液を調製した。−７８℃に冷却した（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２０−メチルプレグナ−５，７−ジエン−２２−オン（Ｖ）４７７．７ｍｇ（１．１６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）溶液にエノラート溶液を滴下し、−７８℃で１時間攪拌した後、−２０℃で１時間、０℃で２時間攪拌した。反応溶液に飽和塩化アンモニウム水溶液２ｍｌを加え、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を水で３回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン（IV）２９２ｍｇを得た（収率４１％）。なお、この化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５８（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．９８（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．０１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−２１），１．２４（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ3 ）2 Ｃ），１．３９−１．９７（ｍ），２．２４−２．５９（ｍ），２．６３（ＡＢｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−２５），２．７０（ｂｄ，１Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＣＨ3 Ｏ），３．７７と３．７８（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＣＨ3 Ｏ），４．６９（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 ），４．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．８９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３７と５．６８( ｍ，各１Ｈ，Ｈ−６とＨ−７），６．０６（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，Ｈ−２３），６．７４（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，９．８Ｈｚ，Ｈ−２２）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．２，１３．１，１４．３，１５．９，２０．４，２２．７，２６．２，２７．２，２７．６，３１．８，３５．５，３７．７，３８．０，３８．７，４０．５，４１．２，４１．９，４３．２，５２．７，５４．２，５４．６，５４．８，５５．１，６０．２，７２．２，７６．０，７８．４，９１．０，１１５．４，１２２．１，１２８．５，１３２．２，１３３．８，１４１．１，１５５．０，１７２．９
ＭＳ ｍ／ｚ：
５５４（６９，Ｍ−ＭｅＯＨ），４７８（７７），４０２（７９），２７８（５０），１７８（７９）
【００６８】
製造例３〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オールの製造〕（第２工程）
【００６９】
【化１３】
【００７０】
０℃に冷却した製造例２で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン（IV）４５４ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）のピリジン（０．６ｍｌ）、エタノール（２．４ｍｌ）の混合溶液に塩化セリウム７水和物３７６ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム４０．０ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応液に塩化セリウム７水和物２７６ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム２８．６ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）を加え、４０分間攪拌した。さらに、塩化セリウム７水和物１４４．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム２４．９ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）を加え、２５分間攪拌した後、反応溶液を酢酸エチルで希釈し、１％塩酸を加え中和した。酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水で３回洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール(III）４００ｍｇを得た（収率８８％、Ｓ体／Ｒ体＝７２／２８）。上記の反応操作を繰り返して得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール(III）１．１４ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、（２４Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール（Ｓ体）１２６．３ｍｇと（２４Ｒ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール（Ｒ体）２０．２ｍｇ（Ｓ体が混入、Ｓ体／Ｒ体＝２２／７８）およびＳ体とＲ体の混合物８３４．３ｍｇ（Ｓ体／Ｒ体＝５８／４２）を得た。それぞれの物理化学的性質は、下記のとおりであった。
【００７１】
Ｓ体
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６０（ｓ，Ｈ−１８），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（ｓ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，（ＣＨ3 ）2 Ｃ），３．３７（ｓ，メトキシメチル基のＣＨ3 Ｏ），３．７７と３．８０（ｓ，メトキシカルボニル基のＣＨ3 Ｏ），４．０４（ｂｄ，ヒドロキシル基に隣接する＞ＣＨ），４．７１（ｓ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 ），４．８１（ｂｓ，Ｈ−１），４．８９（Ｈ−３），５．３７−５．４２（ｍ，Ｈ−６又はＨ−７，Ｈ−２２），５．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．３，９．０Ｈｚ，Ｈ−２３），５．６８（ｍ，Ｈ−６又はＨ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．１，１５．９，２０．３，２０．５，２２．９，２６．３，２６．４，２８．１，３１．８，３５．５，３７．４．３７．７，３８．８，３９．８，４１．２，４２．８，５４．５，５４．６，５４．８，５５．２，５５．４，７２．２，７３．１，７３．４，７６．１，７８．４，９０．９，１１５．５，１２２．１，１３０．６，１３８．０，１４１．０，１５５．０．
ＭＳ ｍ／ｚ：
５８６（０．６，Ｍ−ＭｅＯＨ），４８０（２６），４０４（１００），３８６（２６），２５１（４６），１２５（８３）
【００７２】
Ｒ体
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５９（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．９５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．０７−１．１９（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．０９（ｍ），２．３３−２．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），２．４２−２．４８（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），３．３７（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７７と３．７８（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＯＣＨ3 ），４．０４（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，Ｈ−２４），４．７１（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），４．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．８５−４．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３６−５．４２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６とＨ−２３），５．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，８．９Ｈｚ，Ｈ−２２），５．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５，２．２Ｈｚ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
５５６（２．４，Ｍ−ＭＯＭＯＨ），４８０（８．０），４０４，２４９（１２），１２５（１００）
【００７３】
実施例１〔（２２Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（Ｓ−（II−１））の製造〕（第３工程）
【００７４】
【化１４】
【００７５】
製造例３で得られた（２４Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール（Ｓ体）４１．０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）及びオルト酢酸トリエチル３６５μｌ（１．９９ｍｍｏｌ）のトルエン（０．５ｍｌ）溶液に、プロピオン酸トルエン溶液２５μｌ（プロピオン酸含有量：０．００３３ｍｍｏｌ）を加え、５時間１０分間加熱還流した。得られた反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した後、ベンゼンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（Ｓ−（II−１））１６．９ｍｇを得た（収率３７％、Ｓ体／Ｒ体＝９８／２）。なお、得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６３（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７６（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２４（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，エチルエステルのＣＨ3 ），１．２７−２．１３（ｍ），２．２８−２．５３（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２２ａ），２．７０−２．７４（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），３．３６（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７８と３．８０（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＯＣＨ3 ），４．１１（ｄＡＢｑ，Ｊ＝１２．７，７．１Ｈｚ，エチルエステルのＯＣＨ2 ），４．７０（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），４．８４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．８６−４．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３４−５．４１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２３，Ｈ−２４とＨ−６），５．６８（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
６５６（０．８，Ｍ−ＭｅＯＨ），６２６（３．４），５５０（３１），４７４（１００），４０４（６１），３８６（４７），２７９（５３），２４９（８８），２０９（４９），１５５（３０），１２５（４７）
【００７６】
実施例２〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１））の製造〕（第３工程）
【００７７】
【化１５】
【００７８】
製造例３で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール５１．６ｍｇ（０．０８３ｍｍｏｌ、Ｓ体／Ｒ体＝２２／７８）、オルト酢酸トリエチル４６０μｌ（２．５１ｍｍｏｌ）のトルエン（０．５ｍｌ）溶液に、プロピオン酸トルエン溶液３１μｌ（プロピオン酸含有量：０．００４２ｍｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。反応液を室温に戻した後、炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。ベンゼンで抽出し、有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）１８．５ｍｇを得た（収率３２％、Ｓ体／Ｒ体＝２７／７３）。得られた化合物の物理化学的性質は、以下のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−２１），１．０２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，エトキシカルボニル基のＣＨ3 ），１．２７−２．５４（ｍ），２．７０−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．８６（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ，メトキシメトキシ基のＯＣＨ3 ），３．７７と３．７９（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＯＣＨ3 ），４．６９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．７９−７．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３３−５．４６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−２３とＨ−２４），５．６８（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
５．６４，１２．２，１４．２，１６．３，２０．８，２２．９，２６．３，２６．８，２７．３，３３．０，３８．０，３８．６，３９．７，４０．０，４１．８，４２．３，４３．３，４７．０，５２．１，５４．４，５５．１，６５．５，７２．９，７６．０，９１．０，１１５．３，１２２．０，１３１．６，１３２．２，１３６．０，１４１．０
ＭＳ ｍ／ｚ：
６５６（０．８，Ｍ−ＭｅＯＨ），６２６（２．７，Ｍ−ＭＯＭＯＨ），５５０（２９），４７４（１００）
【００７９】
実施例３〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）の製造〕（第３工程）
【００８０】
【化１６】
【００８１】
製造例３で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール(III）５０６．３ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ、Ｓ体／Ｒ体＝５８／４２）をトルエン４ｍｌに溶解し、オルト酢酸トリエチル４．５ｍｌ（２４．５ｍｍｏｌ）、プロピオン酸トルエン溶液３０μｌ（プロピオン酸含有量：０．００４１ｍｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。室温に戻した後、炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、ベンゼンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）３６１．１ｍｇを得た（収率６４％、Ｓ体／Ｒ体＝７３／２７）。
【００８２】
実施例４〔２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（II−２）の製造〕（第４工程）
【００８３】
【化１７】
【００８４】
−２０℃に冷却した、実施例３で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）１１８．５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ、Ｓ体／Ｒ体＝７３／２７）のジクロロメタン１ｍｌ溶液に、１Ｍ 水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）／ヘキサン溶液２．０ｍｌを滴下して３５分間攪拌したのち、さらに１Ｍ ＤＩＢＡＬ／ヘキサン溶液１ｍｌを滴下し、２０分間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液２ｍｌを加え、０℃で２０分間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、希塩酸を加え、反応液のｐＨを３〜４（酸性）とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−２））６０．０ｍｇ（収率６６％）及び（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−２））２３．３ｍｇ（収率２６％）を得た。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
【００８５】
Ｓ−（II−２）
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．６７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６，２７），１．２５−２．５５（ｍ），３．３７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3 ），３．５８−３．６７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2 ＯＨ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．７１（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2 Ｏ），５．３３−５．４４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−２２とＨ−２３），５．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．６，１３．４，１６．２，２０．９，２２．７，２６．２，２６．９，２７．６，３６．７，３７．４，３８．０，３９．０，３９．４，４０．０，４１．２，４２．０，４２．３，４３．４，５２．８，５４．３，５５．１，６１．６，６５．４，７２．８，７６．１，９１．０，１１５．２，１２２．１，１３０．２，１３２．３，１３５．９，１４１．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
５３０（２．７，Ｍ+ ），４９８（９．９，Ｍ−ＭｅＯＨ），４６８（４８，Ｍ−ＭＯＭＯＨ），４５０（７２），４３２（４６），２６７（１００）
【００８６】
Ｒ−（II−２）
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．８０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２１（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２３−２．７３（ｍ），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3 ），３．４６−３．６３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2 ＯＨ），３．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．６８（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2 Ｏ），５．３４（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−６），５．３８と５．３９（ｓ，２Ｈ，Ｈ−２２とＨ−２３），５．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１１．９，１３．７，１６．２，２０．８，２２．６，２６．３，２７．２，３７．７，３８．３，４１．０，４１．４，４１．８，４２．６，５２．３，５５．１，７３．７，７６．０，９１．０，１１４．９，１２２．０，１３０．６，１３３．６，１３６．３，１４１．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
５３０（３．０，Ｍ+ ），４９８（９．８），４６８（４３），４５０（４８），４３２（８．９），３９４（１５），２６７（１００）
【００８７】
実施例５〔（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−（２−（４−メチルベンゼンスルホニルオキシ）エチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−３））の製造〕（第５工程）
【００８８】
【化１８】
【００８９】
０℃に冷却した実施例４で得られた（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−２））１２．９ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）のピリジン０．２５ｍｌ溶液に塩化ｐ−トルエンスルホニル７．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）を加え、１５５分間攪拌した。反応液に塩化ｐ−トルエンスルホニル６．５ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）を加え、５時間攪拌した後、塩化ｐ−トルエンスルホニル７．２ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）を加え、一夜放置した。塩化ｐ−トルエンスルホニルをさらに５．３ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）加え、２時間３０分間攪拌した。反応溶液に水２ｍｌを加え、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を水で３回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−（２−（４−メチルベンゼンスルホニルオキシ）エチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−３））６．３ｍｇを得た（収率３８％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５７（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９６（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２７−２．４０（ｍ），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 −Ｐｈ），２．４５−２．５２（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），３．９６−４．０８（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３とＣＨ2 ＯＴｓ），４．７１（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），５．１７−５．２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２２とＨ−２３），５．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６），５．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７），７．３３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ），７．７８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．５，１３．２，１６．３，２２．７，２６．３，２６．９，２７．５，３２．８，３８．６，３８．８，３９．３，４０．０，４０．４，４１．９，４２．３，４３．４，５２．７，５４．３，５５．１，６５．５，６９．２，７２．９，９１．０，１１５．３，１２２．１，１２７．９，１２８．４，１２９．８，１３３．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
６８４（１．２，Ｍ+ ），６７２（７．５），６４２（６．２），５７２（１１），５４０（１００），５１０（６４）
【００９０】
実施例６〔（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−４））の製造〕（第６工程）
【００９１】
【化１９】
【００９２】
水素化リチウムアルミニウム１．０ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．１ｍｌ）溶液を１５分間、加熱還流した。室温に戻した水素化リチウムアルミニウムのテトラヒドロフラン溶液に実施例５で得られた（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−（２−（４−メチルベンゼンスルホニルオキシ）エチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−３））６．３ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．２ｍｌ）溶液を加え、６５分間、加熱還流した。反応液を室温まで戻した後、水素化リチウムアルミニウム７．０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、さらに３０分間、加熱還流した。反応液を０℃に冷却し、水０．５ｍｌとテトラヒドロフラン０．５ｍｌの混合液を加えた。反応液に１Ｎ−塩酸及び酢酸エチルを加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水で３回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−４））２．１ｍｇを得た（収率４４％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６１（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．５６（ｍ），３．３７（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．７２（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），５．２５−５．３９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−２２とＨ−２３），５．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
５１４（２．５，Ｍ+ ），４９６（５），４８２（８．１），４６４（１２），４５２（７２），４３４（１００）
【００９３】
実施例７〔（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−（２−ヨードエチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−３））の製造〕（第５工程）
【００９４】
【化２０】
【００９５】
０℃に冷却した実施例４で得られた（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−２））１９．８ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン１９．５ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）及びイミダゾール７．１ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．４ｍｌ）溶液にヨウ素１４．２ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応混合物に酢酸エチル１ｍｌ、水１ｍｌを加え酢酸エチルで抽出した。有機層をチオ硫酸ナトリウム水溶液、水でそれぞれ洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−（２−ヨードエチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−３））１３．３ｍｇを得た（収率５６％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６３（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．８０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２６−１．８４（ｍ），１．９１−２．１８（ｍ，７Ｈ），２．２４−３．７８（ｍ，２Ｈ），２．５１−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．７１−２．７６（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＨ2 Ｉ），３．２２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５，４．３Ｈｚ，ＣＨ2 Ｉ），３．３７（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ3 ），３．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．７１（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2 Ｏ），５．２６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１５．２，８．８Ｈｚ，Ｈ−２３），５．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，Ｈ−６），５．４８（ｄｔ，Ｊ＝１５．１，５．５Ｈｚ，Ｈ−２４），５．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６，２．６Ｈｚ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．０，１２．６，１３．９，１６．２，２０．８，２０．９，２２．９，２７．３，２９．３，３８．１，３８．５，３８．６，４０．０，４０．５，４２．３，４３．６，４７．０，５２．２，５４．６，６５．５，７２．９，１１５．２，１２２．１，１３０．５，１３４．４，１３５．８，１４１．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
６４０（５．８，Ｍ+ ），５７８（５９），５６０（１００），５０４（４１），２６７（６４）
【００９６】
実施例８〔（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−４））の製造〕（第６工程）
【００９７】
【化２１】
【００９８】
実施例７で得られた（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−（２−ヨードエチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−３））２０．７ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（０．４ｍｌ）溶液に水素化ホウ素ナトリウム４．１ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、１時間４０分間攪拌した。反応液に水素化ホウ素ナトリウム２．２ｍｇ（０．０５８ｍｍｏｌ）を更に加え、１時間攪拌した。反応混合物に水１ｍｌを加え、酢酸エチルで抽出した。水層に食塩水０．５ｍｌを加え、さらに酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水で５回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−４））１２．１ｍｇを得た（収率７３％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．１６（ｍ），２．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ），２．５１−２．５６（ｍ，１Ｈ），２．６９−２．７３（ｍ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０２−４．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３０−５．４５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−２３とＨ−２４），５．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６，２．１Ｈｚ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
５１４（３．８，Ｍ+ ），４８２（１４），４６５（１２），４５２（７６），４３４（１００）
【００９９】
実施例９〔（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｓ−（Ｉ））の製造〕（第７工程）
【０１００】
【化２２】
【０１０１】
実施例６で得られた（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−４））５．９ｍｇ（０．００３３ｍｍｏｌ）の９５％エタノール０．２ｍｌ溶液にｐ−トルエンスルホン酸１水和物６．７ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を加え、１５分間加熱還流した。反応溶液をトリエチルアミンで中和した後、溶媒を減圧留去した。残渣に酢酸エチル１ｍｌ及び水１ｍｌを加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β，２５−トリオール（Ｓ−プロビタミンＤ）３．４ｍｇを得た（収率６３％）。なお、得られたＳ−プロビタミンＤの物理化学的性質は、以下のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２７−２．７０（ｍ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．２８−５．４２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−２２とＨ−２３），５．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
４７０（１９，Ｍ+ ），４５２（１００），４３４（４２），２９７（２６），２７９（３６），２２７（２６），１３７（３５）
ＵＶ（λｍａｘ，９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２９４，２８２，２７１，２６２，２０４
【０１０２】
【化２３】
【０１０３】
次いで、氷水で冷却したＳ−プロビタミンＤ３．１６６ｍｇ（６．７３×１０-3ｍｍｏｌ）のベンゼン１５０ｍｌ、エタノール２０ｍｌの混合溶液にアルゴンガスを１５分間バブリングし、溶存酵素を除去した。１００Ｗ高圧水銀ランプをｖｙｃｏｌ ｆｉｌｔｅｒを通して３分間照射した。反応溶液を濃縮し、セファデックスＬＨ−２０（クロロホルム：ヘキサン：メタノール＝７０：３０：０．７、以下も同様）で精製し、（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ3 （Ｓ−プレビタミンＤ）１．２５５ｍｇ（ＵＶ（λｍａｘ）：２５８ｎｍ）を得た。これを遮光下室温で２週間放置した後、溶媒を留去し、セファデックスＬＨ−２０で精製し、（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｓ−（Ｉ））０．８４ｍｇを得た。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５３（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），１．２４と１．２５（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．３４（ｍ），２．６０（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），２．８４（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ），４．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６，４．３Ｈｚ，Ｈ−１），５．００（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１９），５．２８−５．４２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２３，Ｈ−２４とＨ−１９），６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｈ−７），６．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，Ｈ−６）
ＭＳ ｍ／ｚ：
４５２（４５，Ｍ−ＭｅＯＨ），４３７（４７），４１６（２８），３６８（３５），２３６（７８），１３７（５８），９７（７７）
ＵＶ（λｍａｘ，９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２６３
【０１０４】
実施例１０〔（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｒ−（Ｉ））の製造〕（第７工程）
【０１０５】
【化２４】
【０１０６】
実施例８で得られた（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−４））８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）の９５％エタノール（０．３ｍｌ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物６．８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）を加え、１５分間加熱還流した。反応液を室温に戻し、トリエチルアミンで中和した後、エタノールを留去した。残渣を酢酸エチル、食塩水に溶解し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β，２５−トリオール（Ｒ−プロビタミンＤ）６．６ｍｇを得た（収率９０％）。なお、得られたＲ−プロビタミンＤの物理化学的性質は、以下のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．１６（ｍ），２．３１−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．５１−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．７１（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０４−４．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３１−５．４５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−２３とＨ−２４），５．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２．３）
ＵＶ（λｍａｘ，９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２９３，２８２，２７１
【０１０７】
【化２５】
【０１０８】
次いで、氷水で冷却したＲ−プロビタミンＤ１６．８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）のベンゼン１５０ｍｌ、エタノール２０ｍｌ混合溶液に、アルゴンガスを２０分間バブリングし、溶存酵素を除去し、実施例９と同様にして、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ3 （Ｒ−プレビタミンＤ）７．３１ｍｇを得た。これを９５％エタノール１ｍｌに溶解し、遮光下室温で２週間放置した。溶媒を留去し、セファデックスＬＨ−２０で精製し、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｒ−（Ｉ））３．９７ｍｇを得た（収率２４％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），１．０９−１．１８（ｍ），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２６−１．７７（ｍ），１．８９−２．１３（ｍ，８Ｈ），２．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，６．６Ｈｚ），２．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，３．３Ｈｚ），２．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．１，３．８Ｈｚ），４．２１−４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４，４．３Ｈｚ，Ｈ−１），５．００（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１９），５．２８−５．４４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１９，Ｈ−２３とＨ−２４），６．０２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６又はＨ−７），６．３８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６又はＨ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．２，１２．６，１４．１，２１．１，２２．２，２３．６，２６．６，２７．８，２９．１，２９．３，３９．６，４０．２，４２．８，４３．６，４５．３，４６．０，４７．３，５２．８，５６．２，６６．８，７０．８，７１．１，１１１．８，１１７．０，１２５．０，１３０．５，１３４．３，１４７．６
ＭＳ ｍ／ｚ：
４７０（１５，Ｍ+ ），４５２（１００），４１６（４４），２９７（３４），２７９（３８），１３４（５９），９５（４５）
ＵＶλｍａｘ（９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２６４
【０１０９】
試験例１〔ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体との結合性試験〕
実施例９で得られた（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ａ）及び実施例１０で得られた（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ｂ）のウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体との結合能を測定した。
【０１１０】
即ち、化合物Ｉ−Ａ、化合物Ｉ−Ｂの段階的希釈溶液（２、４、８、１６、３２、６３、１２５、２５０、５００、５０００ｐｇ／５０μｌエタノール溶液）の各々に、ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体（（株）ヤマサ製）溶液（５００μｌリン酸緩衝液）を添加し、撹拌した後、室温で１時間プレインキュベイションした。各々にトリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （４．８５ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）１０６７２ｄｐｍ／５０μｌエタノール溶液を加え、撹拌し、４℃で一夜放置した後、ＤＣＣ（デキストランコーテッドチャコール）懸濁液（（株）ヤマサ製）を加え、攪拌し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と結合していない試料（遊離型）を吸着させた。
【０１１１】
反応混合物を遠心分離（３０００ｒｐｍ）することにより、ＤＣＣを分離し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と結合している試料（結合型）を遊離型から分離（ＢＦ分離）した。上清５００μｌを採り、シンチレーションカウンターにて放射活性を測定し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体に結合しているトリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 の割合を求めて、トリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 の５０％が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と結合する時の被験化合物の濃度（ＥＤ50値）を求めた。
【０１１２】
対照化合物として、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 を用いて同様の試験を行い、該化合物のＥＤ50値を求め、これを１とした時の被験化合物の結合活性（相対活性）を求めた。その結果を表１に示す。
【０１１３】
【表１】
【０１１４】
なお、表１中の対照化合物、化合物Ｉ−Ａ及び化合物Ｉ−Ｂは、以下の化合物を示す。
対照化合物：１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
化合物Ｉ−Ａ：（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
化合物Ｉ−Ｂ：（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
【０１１５】
表１に示された結果から、化合物Ｉ−Ａ及び化合物Ｉ−Ｂは、表１に示された結果から、いずれもウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と高い結合活性を有することがわかる。また、ラットを用いた血中カルシウム上昇作用も弱い。
【０１１６】
以上の結果から、本発明の２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、血中カルシウム上昇作用がさほど高くなく、安全性により優れるという優れた性質を有することがわかる。
【０１１７】
試験例２〔一過性の遺伝子導入法を用いた遺伝子転写活性評価〕
実施例９で得られた（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ａ）及び実施例１０で得られた（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ｂ）の一過性の遺伝子導入法を用いた遺伝子転写活性を測定した。
【０１１８】
一過的な遺伝子導入は、以下のとおりに行った。即ち、サルＣＶ−１ ｃｅｌｌｓ／ｇａｌ−ｈＶＤＲ細胞を培地（培地条件：ＤＭＤＭ１０％ＦＢＳ）で培養し（培養条件：３７℃、５％ＣＯ2 ）、各ウェル毎にリン酸カルシウム法を用いて下記プラスミドのトランスフェクションを行った。各ウェルあたりに使用したＤＮＡ量としては、ｐＣＭＸ−ＧＡＬ−ＶＤＲ（酵母ＧＡＬ４蛋白質のＤＮＡ結合ドメインとヒトＶＤＲのリガンド結合ドメインのキメラ蛋白質の発現ベクター）３０ｎｇ、ｐＧＡＬ４−ＴＫ−ＬＵＣ（ＧＡＬ４蛋白質の結合サイトを持つルシフェラーゼレポーター遺伝子を含有するプラスミド）１５０ｎｇ、ｐＣＭＸ−βＧＡＬ（トランスフェクション効率補正用のβ−ガラクトシダーゼ発現プラスミド）３５０ｎｇ及びｐＧＥＭ４（ＤＮＡ量を補正するためのキャリアプラスミド）２２０ｎｇを用いた。
【０１１９】
リン酸カルシウムとの共沈殿とした前記ＤＮＡを前記細胞に加え、６時間培養後、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回細胞を洗浄して、沈殿を除去した。沈殿に新鮮な培地を加える際に、段階的希釈濃度（１０-7、１０-8、１０-9、１０-10 、１０-11 Ｍ）を有する化合物Ｉ−Ａ、化合物Ｉ−Ｂ又は対照として１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 を加え、３６時間培養した後、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＬＹＳＩＳ ｂｕｆｆｅｒで溶解させ、これを１００μｌの細胞抽出液とした。このうち２０μｌを用いてルシフェラーゼ活性を蛍光法により測定し、また、５０μｌを用いてＯＮＰＧ（ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトプラノシド）による発色反応を指標として、β−ガラクトシダーゼ活性を測定した。各ウェル毎に得られたルシフェラーゼ活性をβ−ガラクトシダーゼ活性で補正した。この結果を表２に示す。
【０１２０】
【表２】
【０１２１】
表２に示された結果から、一過性の遺伝子導入法を用いた遺伝子転写活性に関して、特に化合物Ｉ−Ｂは対照化合物の５０倍という強い活性を有することがわかる。
【０１２２】
【発明の効果】
本発明の式（Ｉ）で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、かつ安全性に優れたものであるので、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症等のカルシウム代謝の欠陥症、乾癬等の皮膚疾患及び骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍等の細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療に有用なカルシウム代謝改善剤として好適に使用しうるものである。
【発明の属する技術分野】
本発明は、２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体、その合成中間体及び前記誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤に関する。さらに詳しくは、慢性腎不全、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症等のカルシウム代謝の欠陥症、乾癬等の皮膚疾患、骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍等の細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体、その合成中間体及び前記誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、ビタミンＤの研究の進展に伴い、各種の１α−ヒドロキシビタミンＤ誘導体が医薬品として開発されてきており、例えば、１α−ヒドロキシビタミンＤ3 や、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 がすでに臨床的に骨粗鬆症治療薬として用いられている。
しかしながら、これらの化合物は、血中カルシウムの上昇作用等の副作用を呈することから、かかる副作用の少ないビタミンＤ誘導体の研究が近年、活発に行われてきている。前記ビタミンＤ誘導体として、例えば、２４，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 、２４−エピビタミンＤ2 等が骨粗鬆症治療薬として検討されており、また、２２−オキサ−１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 等が副甲状腺機能亢進症治療薬として検討されている。
本発明者らは、カルシウムの代謝改善剤に有用な化合物として、２０−エピ−２２−メチルビタミンＤ誘導体をすでに開発している（特開平６−２５１５５号公報）。しかしながら、前記ビタミンＤ受容体結合活性は極めて高いという優れた性質を有するが、その反面、血中カルシウム上昇作用は高い。したがって、疾患を治療する立場から、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、かつ安全性に優れたビタミンＤ誘導体の開発が望まれているのが実状である。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、前記従来技術に鑑みてなされたものであり、ビタミンＤ受容体結合活性が高く、血中カルシウム上昇作用がさほど高くなく、安全性により優れたビタミンＤ誘導体、その合成中間体及び前記誘導体を有効成分として含有するカルシウム代謝改善剤を提供することを目的とする。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
即ち、本発明の要旨は、
（１） 式（Ｉ）：
【０００５】
【化４】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基を示す）
で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体、
（２） 式（II）：
【０００７】
【化５】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基、Ｒ4 はメチル基、ヒドロキシメチル基、ハロゲノメチル基、有機スルホニルオキシメチル基又はアルコキシカルボニル基を示す）
で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体、並びに
（３） 式（Ｉ）：
【０００９】
【化６】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基を示す）
で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤
に関する。
【００１１】
【発明の実施の形態】
本発明者らは、２０−エピビタミンＤ誘導体の置換基の影響について詳細に検討を行ったところ、２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体が高いビタミンＤ受容体結合活性を有するとともに、副作用が小さいことを見出した。本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。
【００１２】
本発明の２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、前記したように、式（Ｉ）：
【００１３】
【化７】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 はそれぞれ水素原子又は水酸基の保護基を示す）
で表される化合物である。
【００１５】
式（Ｉ）において、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 が表す水酸基の保護基としては、例えば、アセチル基、プロピオニル基、ブチリル基、イソブチリル基、ピバロイル基、ヘキサノイル基、ベンゾイル基等のアシル基；メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、アリルオキシカルボニル基、ｔ−ブトキシカルボニル基、ベンジルオキシカルボニル基等のアルコキシカルボニル基；トリエチルシリル基、ｔ−ブチルジメチルシリル基、フェニルジメチルシリル基、トリイソプロピルシリル基等の有機シリル基；メトキシメチル基、１−エトキシエチル基、メトキシエトキシメチル基等のアルコキシメチル基；２−テトラヒドロフラニル基、２−テトラヒドロピラニル基等のオキサシクロアルキル基等を挙げることができる。
【００１６】
式（Ｉ）で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、新規化合物であり、公知化合物である式（Ｖ）：
【００１７】
【化８】
（式中、Ｒ1 及びＲ2 は前記と同じ）
で表されるプレグナ−５，７−ジエン−２０−カルバルデヒド誘導体を出発原料とし、式：
【００１９】
【化９】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は前記と同じ、Ｒ41はアルコキシカルボニル基、Ｒ42はヒドロキシメチル基、Ｒ43は有機スルホニルオキシメチル基又はハロゲノメチル基及びＲ44はメチル基を示す）
で表されるスキームにしたがって合成することができる。
【００２１】
前記スキームにしたがって得られる式（Ｉ）で表される化合物の合成中間体である式（II−１）、式（II−２）、式（II−３）及び式（II−４）に代表される式（II）：
【００２２】
【化１０】
（式中、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は前記と同じ、Ｒ4 はメチル基、ヒドロキシメチル基、有機スルホニルオキシメチル基、ハノゲノメチル基又はアルコキシカルボニル基を示す）
で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体は、いずれも新規化合物である。
【００２４】
式（II）において、Ｒ1 、Ｒ2 及びＲ3 は、いずれも式（Ｉ）におけるＲ1 、Ｒ2 及びＲ3 と同様であればよい。
【００２５】
また、式（II）において、Ｒ4 が表す有機スルホニルオキシメチル基としては、例えば、メタンスルホニルオキシメチル基、ベンゼンスルホニルオキシメチル基、トルエンスルホニルオキシメチル基等を挙げることができる。また、式（Ｉ）において、Ｒ4 が表すアルコキシカルボニル基としては、例えば、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基等を挙げることができる。
【００２６】
前記スキームの各工程について、以下に詳しく説明する。
【００２７】
式（Ｖ）で表されるプレグナ−５，７−ジエン−２０−カルバルデヒド誘導体は、例えば、国際公開第８８／０７５４５号パンフレット（１９８８）及び特開平７−１８８２８１号公報等に記載されている方法にしたがって合成することができる。
【００２８】
▲１▼第１工程
前記プレグナ−５，７−ジエン−２０−カルバルデヒド誘導体と水酸基を保護した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノンとを常法によりアルドール縮合させ、脱水することにより、式（IV）で表される不飽和ケトンが得られる。
【００２９】
▲２▼第２工程
前記（IV）で表される不飽和ケトンを、常法に従い、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素亜鉛等の還元剤で還元し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、式(III）で表される不飽和アルコールが得られる。
【００３０】
前記反応で得られる式(III）で表される不飽和アルコールには、２４位の水酸基がＳの立体配置をとる不飽和アルコール（以下、Ｓ−不飽和アルコールという）とＲの立体配置をとる不飽和アルコール（以下、Ｒ−不飽和アルコールという）が含まれる。前記式(III）で表される不飽和アルコールの立体異性体の混合物から、シリカゲルカラムクロマトグラフィーなどの分離手段を用いて両者を分離することによりＳ−不飽和アルコールとＲ−不飽和アルコールとをそれぞれ単離することができる。
【００３１】
また、以下の製造工程には、前記不飽和アルコールとしては、前記Ｓ−不飽和アルコール及びＲ−不飽和アルコールの混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００３２】
▲３▼第３工程
前記式(III）で表される不飽和アルコールを、プロピオン酸、ステアリン酸、安息香酸等の酸触媒の存在下で、常法によりオルト酢酸トリエチル、オルト酢酸トリメチル、オルト酢酸トリプロピル、オルト酢酸トリブチル等のオルト酢酸エステルと反応させて、転位反応を進行させることにより、式（II−１）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００３３】
前記反応は、立体特異的に進行する。即ち、前記Ｓ−不飽和アルコールからは、２２位がＳの立体配置をとる式（II−１）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−１）という）が得られ、Ｒ−不飽和アルコールからは、２２位がＲの立体配置をとる化合物（以下、Ｒ−（II−１）という）が得られる。
【００３４】
また、前記不飽和アルコールとして、Ｓ−不飽和アルコールとＲ−不飽和アルコールの混合物を用いた場合には、前記のように式（II−１）で表される化合物の立体異性体の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程で説明したのと同様の方法により、Ｓ−（II−１）とＲ−（II−１）とをそれぞれ単離することができる。
【００３５】
また、以下の製造工程には、前記式（II−１）で表される化合物としては、Ｓ−（II−１）及びＲ−（II−１）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００３６】
▲４▼第４工程
前記式（II−１）で表される化合物を、水素化ジイソブチルアルミニウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化ホウ素リチウム等の還元剤で還元することにより、式（II−２）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００３７】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−１）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−１）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（II−２）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−２）という）、また前記Ｒ−（II−１）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（II−２）で表される化合物（以下、Ｒ−（II−２）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００３８】
また、前記反応に前記式（II−１）で表される化合物として、Ｓ−（II−１）とＲ−（II−１）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（II−２）とＲ−（II−２）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（II−２）とＲ−（II−２）とをそれぞれ単離することができる。
【００３９】
また、以下の製造工程には、前記式（II−２）で表される化合物としては、Ｓ−（II−２）及びＲ−（II−２）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００４０】
▲５▼第５工程
前記式（II−２）で表される化合物を、メタンスルホニルクロライド、ベンゼンスルホニルクロライド、ｐ−トルエンスルホニルクロライド等の有機スルホニルハライドとピリジン、トリエチルアミン等の塩基の存在下で反応させることにより、式（II−３）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４１】
また、他の製造方法としては、前記式（II−２）で表される化合物を、ＴＨＦ中でトリフェニルホスフィン及びイミダゾールの存在下でヨウ素、トリフェニルホスフィン−四臭化炭素等のハロゲン化剤と反応させることにより、式（II−３）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４２】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−２）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−２）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（II−３）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−３）という）、また前記Ｒ−（II−２）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（II−３）で表される化合物（以下、Ｒ−（II−３）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００４３】
また、前記反応に前記式（II−２）で表される化合物として、Ｓ−（II−２）とＲ−（II−２）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（II−３）とＲ−（II−３）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（II−３）とＲ−（II−３）とをそれぞれ単離することができる。
【００４４】
また、以下の製造工程には、前記式（II−３）で表される化合物としては、Ｓ−（II−３）及びＲ−（II−３）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００４５】
▲６▼第６工程
前記式（II−３）で表される化合物において、Ｒ43として有機スルホニルオキシメチル基を有する化合物の場合、該有機スルホニルオキシメチル基を有する化合物を水素化リチウムアルミニウム、水素化トリエチルホウ素リチウム等の還元剤で還元することにより、式（II−４）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４６】
また、式（II−３）で表される化合物において、Ｒ43としてハロゲノメチル基を有する化合物の場合には、該ハロゲノメチル基を有する化合物を、水素化ホウ素ナトリウム、水素化リチウムアルミニウム、水素化トリエチルホウ素リチウム等の還元剤で還元することにより、式（II−４）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体が得られる。
【００４７】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−３）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−３）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（II−４）で表される化合物（以下、Ｓ−（II−４）という）、また前記Ｒ−（II−３）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（II−４）で表される化合物（以下、Ｒ−（II−４）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００４８】
また、前記反応に前記式（II−３）で表される化合物として、Ｓ−（II−３）とＲ−（II−３）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（II−４）とＲ−（II−４）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（II−４）とＲ−（II−４）とをそれぞれ単離することができる。
【００４９】
また、以下の製造工程には、前記式（II−４）で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体としては、Ｓ−（II−４）及びＲ−（II−４）の混合物又はそれぞれを単独で用いることができる。
【００５０】
▲７▼第７工程
前記式（II−４）で表される化合物を、常法に従い、光異性化、熱異性化することにより、式（Ｉ）で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体を得ることができる。
【００５１】
また、前記反応を行なう際に、前記式（II−４）で表される化合物を、メタノール、エタノール等のアルコール及び／又は水の存在下にｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、カンファースルホン酸等の酸触媒を用いて、２５位の水酸基の保護基であるＲ3 を脱保護したものを用いることができる。
【００５２】
前記反応においては、２２位の立体化学は変化しない。即ち、式（II−４）で表される化合物として、前記Ｓ−（II−４）を用いた場合には、２２位がＳの立体配置をとる式（Ｉ）で表される化合物（以下、Ｓ−（Ｉ）という）、また前記Ｒ−（II−４）を用いた場合には、２２位がＲの立体配置をとる式（Ｉ）で表される化合物（以下、Ｒ−（Ｉ）という）とをそれぞれ得ることができる。
【００５３】
また、前記反応に前記式（II−４）で表される化合物として、Ｓ−（II−４）とＲ−（II−４）の混合物を用いた場合には、前記のようにＳ−（Ｉ）とＲ−（Ｉ）の混合物が得られる。該混合物からは、第２工程と同様の方法により、Ｓ−（Ｉ）とＲ−（Ｉ）とをそれぞれ単離することができる。
【００５４】
このようにして得られた式（Ｉ）で表される化合物の反応混合物からの単離・精製は、一般に有機化合物を反応混合物から単離・精製する際に用いられている方法と同様の方法によって行うことができる。例えば、反応混合物を濃縮することにより粗生成物を得、得られた粗生成物を必要に応じて再結晶、クロマトグラフィー等に付することによって行うことができる。
【００５５】
本発明の式（Ｉ）で表される化合物は、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体に対して高い結合活性を示し、しかもビタミンＤ結合タンパクとの親和性が低く、高い分化誘導能を有することから、乾癬等の皮膚疾患、骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍等の細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療薬として有用である。また、低カルシウム、低ビタミンＤ食ラットに対する投与においても血中カルシウムの上昇作用が弱く、急性毒性試験においても低毒性であったことから、副作用の少ない、骨粗鬆症、副甲状腺機能亢進症、慢性腎不全、骨軟化症等のカルシウム代謝の欠陥症の治療薬として有用である。このように本発明の化合物は、カルシウム代謝改善剤として有用である。
【００５６】
また、式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とする本発明のカルシウム代謝改善剤は、適当な剤型の医薬組成物として経口または非経口的に投与することができる。本発明の化合物の投与量は、患者の年齢、体重、症状、投与ルートなどによって異なるが、医者の診断に応じて適宜決定される。
【００５７】
本発明のカルシウム代謝改善剤は、有効成分である式（Ｉ）で表される化合物の有効量と、薬理学的に許容される担体または賦形剤とを含有する組成物であってもよい。このような組成物は、経口または非経口投与に適する剤型として提供される。
【００５８】
即ち、経口投与のための組成物の剤型としては、例えば、固体または液体の剤型、具体的には錠剤、丸剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤などがあげられる。このような組成物は、公知の方法によって製造され、製剤分野において通常用いられている担体または賦形剤を含有するものである。例えば、錠剤用の担体、賦形剤としては、乳糖、でんぷん、蔗糖、ステアリン酸マグネシウムなどがあげられる。
【００５９】
非経口投与のための組成物を、例えば、注射剤として用いる場合、公知の方法に従い、通常、注射剤に用いられている無菌の水性ないしは油性液に溶解、懸濁または乳化することによって該注射剤を調製することができる。注射用の水性液としては、生理食塩水、ブドウ糖などや、その他の補助液を含む等張液などがあげられ、これらは、適当な溶解補助剤などと併用してもよい。
【００６０】
かくして得られる本発明のカルシウム代謝改善剤には、式（Ｉ）で表わされる化合物を配合することによって好ましくない相互作用を生じないかぎり、他の活性成分が含有されていてもよい。
【００６１】
【実施例】
次に、本発明を実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。
【００６２】
製造例１〔水酸基を保護した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノンの製造〕
【００６３】
【化１１】
０℃に冷却した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノン５．４７ｇ（４２．０ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン２９ｍｌ（０．１６８ｍｏｌ）のジクロロメタン（３０ｍｌ）溶液にメチルクロロメチルエーテル１０．２ｍｌ（０．１２６ｍｏｌ）を加え、室温で５時間１０分間攪拌した後、水５ｍｌを加え、ジクロロメタンで３回抽出した。有機層を水で３回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、水酸基をメトキシメチル基で保護した５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノン５．３１ｇを得た（収率７３％）。
【００６５】
製造例２〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン（IV）の製造〕（第１工程）
【００６６】
【化１２】
−７８℃に冷却したジイソプロピルアミン６４３μｌ（４．５９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液にｎ−ブチルリチウムの１．６Ｍヘキサン溶液２．１５ｍｌを滴下し、１５分間攪拌してリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）溶液を調製した。−７８℃に冷却した製造例１で得られた５−ヒドロキシ−５−メチル−２−ヘキサノン６００ｍｇ（３．４４ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１ｍｌ）溶液にＬＤＡ溶液を滴下し、１５分間攪拌し、エノラート溶液を調製した。−７８℃に冷却した（２０Ｒ）−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２０−メチルプレグナ−５，７−ジエン−２２−オン（Ｖ）４７７．７ｍｇ（１．１６ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．５ｍｌ）溶液にエノラート溶液を滴下し、−７８℃で１時間攪拌した後、−２０℃で１時間、０℃で２時間攪拌した。反応溶液に飽和塩化アンモニウム水溶液２ｍｌを加え、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を水で３回洗浄した後、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン（IV）２９２ｍｇを得た（収率４１％）。なお、この化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５８（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．９８（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．０１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−２１），１．２４（ｓ，６Ｈ，（ＣＨ3 ）2 Ｃ），１．３９−１．９７（ｍ），２．２４−２．５９（ｍ），２．６３（ＡＢｑ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，Ｈ−２５），２．７０（ｂｄ，１Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＣＨ3 Ｏ），３．７７と３．７８（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＣＨ3 Ｏ），４．６９（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 ），４．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．８９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３７と５．６８( ｍ，各１Ｈ，Ｈ−６とＨ−７），６．０６（ｄ，Ｊ＝１５．９Ｈｚ，Ｈ−２３），６．７４（ｄｄ，Ｊ＝１５．８，９．８Ｈｚ，Ｈ−２２）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．２，１３．１，１４．３，１５．９，２０．４，２２．７，２６．２，２７．２，２７．６，３１．８，３５．５，３７．７，３８．０，３８．７，４０．５，４１．２，４１．９，４３．２，５２．７，５４．２，５４．６，５４．８，５５．１，６０．２，７２．２，７６．０，７８．４，９１．０，１１５．４，１２２．１，１２８．５，１３２．２，１３３．８，１４１．１，１５５．０，１７２．９
ＭＳ ｍ／ｚ：
５５４（６９，Ｍ−ＭｅＯＨ），４７８（７７），４０２（７９），２７８（５０），１７８（７９）
【００６８】
製造例３〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オールの製造〕（第２工程）
【００６９】
【化１３】
０℃に冷却した製造例２で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オン（IV）４５４ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）のピリジン（０．６ｍｌ）、エタノール（２．４ｍｌ）の混合溶液に塩化セリウム７水和物３７６ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム４０．０ｍｇ（１．００ｍｍｏｌ）を加えた。室温で１時間攪拌した後、反応液に塩化セリウム７水和物２７６ｍｇ（０．７４ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム２８．６ｍｇ（０．７５ｍｍｏｌ）を加え、４０分間攪拌した。さらに、塩化セリウム７水和物１４４．０ｍｇ（０．３８ｍｍｏｌ）、水素化ホウ素ナトリウム２４．９ｍｇ（０．６６ｍｍｏｌ）を加え、２５分間攪拌した後、反応溶液を酢酸エチルで希釈し、１％塩酸を加え中和した。酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水で３回洗浄した後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール(III）４００ｍｇを得た（収率８８％、Ｓ体／Ｒ体＝７２／２８）。上記の反応操作を繰り返して得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール(III）１．１４ｇをシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製することにより、（２４Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール（Ｓ体）１２６．３ｍｇと（２４Ｒ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール（Ｒ体）２０．２ｍｇ（Ｓ体が混入、Ｓ体／Ｒ体＝２２／７８）およびＳ体とＲ体の混合物８３４．３ｍｇ（Ｓ体／Ｒ体＝５８／４２）を得た。それぞれの物理化学的性質は、下記のとおりであった。
【００７１】
Ｓ体
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６０（ｓ，Ｈ−１８），０．９４（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（ｓ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，（ＣＨ3 ）2 Ｃ），３．３７（ｓ，メトキシメチル基のＣＨ3 Ｏ），３．７７と３．８０（ｓ，メトキシカルボニル基のＣＨ3 Ｏ），４．０４（ｂｄ，ヒドロキシル基に隣接する＞ＣＨ），４．７１（ｓ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 ），４．８１（ｂｓ，Ｈ−１），４．８９（Ｈ−３），５．３７−５．４２（ｍ，Ｈ−６又はＨ−７，Ｈ−２２），５．５３（ｄｄ，Ｊ＝１５．３，９．０Ｈｚ，Ｈ−２３），５．６８（ｍ，Ｈ−６又はＨ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．１，１５．９，２０．３，２０．５，２２．９，２６．３，２６．４，２８．１，３１．８，３５．５，３７．４．３７．７，３８．８，３９．８，４１．２，４２．８，５４．５，５４．６，５４．８，５５．２，５５．４，７２．２，７３．１，７３．４，７６．１，７８．４，９０．９，１１５．５，１２２．１，１３０．６，１３８．０，１４１．０，１５５．０．
ＭＳ ｍ／ｚ：
５８６（０．６，Ｍ−ＭｅＯＨ），４８０（２６），４０４（１００），３８６（２６），２５１（４６），１２５（８３）
【００７２】
Ｒ体
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５９（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．９５（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９８（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．０７−１．１９（ｍ，１Ｈ），１．２３（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．０９（ｍ），２．３３−２．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），２．４２−２．４８（ｍ，２Ｈ），２．７０−２．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），３．３７（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７７と３．７８（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＯＣＨ3 ），４．０４（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，Ｈ−２４），４．７１（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），４．８１（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．８５−４．９２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３６−５．４２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−６とＨ−２３），５．５４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，８．９Ｈｚ，Ｈ−２２），５．６８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５，２．２Ｈｚ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
５５６（２．４，Ｍ−ＭＯＭＯＨ），４８０（８．０），４０４，２４９（１２），１２５（１００）
【００７３】
実施例１〔（２２Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（Ｓ−（II−１））の製造〕（第３工程）
【００７４】
【化１４】
製造例３で得られた（２４Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール（Ｓ体）４１．０ｍｇ（０．０６６ｍｍｏｌ）及びオルト酢酸トリエチル３６５μｌ（１．９９ｍｍｏｌ）のトルエン（０．５ｍｌ）溶液に、プロピオン酸トルエン溶液２５μｌ（プロピオン酸含有量：０．００３３ｍｍｏｌ）を加え、５時間１０分間加熱還流した。得られた反応液を炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した後、ベンゼンで抽出した。有機層を水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（Ｓ−（II−１））１６．９ｍｇを得た（収率３７％、Ｓ体／Ｒ体＝９８／２）。なお、得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６３（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７６（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２４（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，エチルエステルのＣＨ3 ），１．２７−２．１３（ｍ），２．２８−２．５３（ｍ，４Ｈ，Ｈ−２２ａ），２．７０−２．７４（ｍ，１Ｈ），２．９２−２．９４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−４），３．３６（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７８と３．８０（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＯＣＨ3 ），４．１１（ｄＡＢｑ，Ｊ＝１２．７，７．１Ｈｚ，エチルエステルのＯＣＨ2 ），４．７０（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），４．８４（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．８６−４．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３４−５．４１（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２３，Ｈ−２４とＨ−６），５．６８（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
６５６（０．８，Ｍ−ＭｅＯＨ），６２６（３．４），５５０（３１），４７４（１００），４０４（６１），３８６（４７），２７９（５３），２４９（８８），２０９（４９），１５５（３０），１２５（４７）
【００７６】
実施例２〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１））の製造〕（第３工程）
【００７７】
【化１５】
製造例３で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール５１．６ｍｇ（０．０８３ｍｍｏｌ、Ｓ体／Ｒ体＝２２／７８）、オルト酢酸トリエチル４６０μｌ（２．５１ｍｍｏｌ）のトルエン（０．５ｍｌ）溶液に、プロピオン酸トルエン溶液３１μｌ（プロピオン酸含有量：０．００４２ｍｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。反応液を室温に戻した後、炭酸水素ナトリウム水溶液で中和した。ベンゼンで抽出し、有機層を水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）１８．５ｍｇを得た（収率３２％、Ｓ体／Ｒ体＝２７／７３）。得られた化合物の物理化学的性質は、以下のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−２１），１．０２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，エトキシカルボニル基のＣＨ3 ），１．２７−２．５４（ｍ），２．７０−２．７５（ｍ，１Ｈ），２．８１−２．８６（ｍ，１Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ，メトキシメトキシ基のＯＣＨ3 ），３．７７と３．７９（ｓ，各３Ｈ，メトキシカルボニル基のＯＣＨ3 ），４．６９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．７９−７．９３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３３−５．４６（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−２３とＨ−２４），５．６８（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
５．６４，１２．２，１４．２，１６．３，２０．８，２２．９，２６．３，２６．８，２７．３，３３．０，３８．０，３８．６，３９．７，４０．０，４１．８，４２．３，４３．３，４７．０，５２．１，５４．４，５５．１，６５．５，７２．９，７６．０，９１．０，１１５．３，１２２．０，１３１．６，１３２．２，１３６．０，１４１．０
ＭＳ ｍ／ｚ：
６５６（０．８，Ｍ−ＭｅＯＨ），６２６（２．７，Ｍ−ＭＯＭＯＨ），５５０（２９），４７４（１００）
【００７９】
実施例３〔２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）の製造〕（第３工程）
【００８０】
【化１６】
製造例３で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２２−トリエン−２４−オール(III）５０６．３ｍｇ（０．８２ｍｍｏｌ、Ｓ体／Ｒ体＝５８／４２）をトルエン４ｍｌに溶解し、オルト酢酸トリエチル４．５ｍｌ（２４．５ｍｍｏｌ）、プロピオン酸トルエン溶液３０μｌ（プロピオン酸含有量：０．００４１ｍｍｏｌ）を加え、３時間加熱還流した。室温に戻した後、炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、ベンゼンで抽出した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥し、溶媒を留去した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）３６１．１ｍｇを得た（収率６４％、Ｓ体／Ｒ体＝７３／２７）。
【００８２】
実施例４〔２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（II−２）の製造〕（第４工程）
【００８３】
【化１７】
−２０℃に冷却した、実施例３で得られた２０−エピ−１α，３β−ビス（メトキシカルボニルオキシ）−２２−エトキシカルボニルメチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン（II−１）１１８．５ｍｇ（０．１７ｍｍｏｌ、Ｓ体／Ｒ体＝７３／２７）のジクロロメタン１ｍｌ溶液に、１Ｍ 水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）／ヘキサン溶液２．０ｍｌを滴下して３５分間攪拌したのち、さらに１Ｍ ＤＩＢＡＬ／ヘキサン溶液１ｍｌを滴下し、２０分間攪拌した。反応液に飽和塩化アンモニウム水溶液２ｍｌを加え、０℃で２０分間攪拌した。反応液を酢酸エチルで希釈した後、希塩酸を加え、反応液のｐＨを３〜４（酸性）とし、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−２））６０．０ｍｇ（収率６６％）及び（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−２））２３．３ｍｇ（収率２６％）を得た。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
【００８５】
Ｓ−（II−２）
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．６７（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６，２７），１．２５−２．５５（ｍ），３．３７（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3 ），３．５８−３．６７（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2 ＯＨ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．７１（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2 Ｏ），５．３３−５．４４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−２２とＨ−２３），５．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．６，１３．４，１６．２，２０．９，２２．７，２６．２，２６．９，２７．６，３６．７，３７．４，３８．０，３９．０，３９．４，４０．０，４１．２，４２．０，４２．３，４３．４，５２．８，５４．３，５５．１，６１．６，６５．４，７２．８，７６．１，９１．０，１１５．２，１２２．１，１３０．２，１３２．３，１３５．９，１４１．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
５３０（２．７，Ｍ+ ），４９８（９．９，Ｍ−ＭｅＯＨ），４６８（４８，Ｍ−ＭＯＭＯＨ），４５０（７２），４３２（４６），２６７（１００）
【００８６】
Ｒ−（II−２）
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．８０（ｄ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２１（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２３−２．７３（ｍ），３．３６（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ3 ），３．４６−３．６３（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2 ＯＨ），３．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．２０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．６８（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2 Ｏ），５．３４（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ−６），５．３８と５．３９（ｓ，２Ｈ，Ｈ−２２とＨ−２３），５．６０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１１．９，１３．７，１６．２，２０．８，２２．６，２６．３，２７．２，３７．７，３８．３，４１．０，４１．４，４１．８，４２．６，５２．３，５５．１，７３．７，７６．０，９１．０，１１４．９，１２２．０，１３０．６，１３３．６，１３６．３，１４１．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
５３０（３．０，Ｍ+ ），４９８（９．８），４６８（４３），４５０（４８），４３２（８．９），３９４（１５），２６７（１００）
【００８７】
実施例５〔（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−（２−（４−メチルベンゼンスルホニルオキシ）エチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−３））の製造〕（第５工程）
【００８８】
【化１８】
０℃に冷却した実施例４で得られた（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−２））１２．９ｍｇ（０．０２４ｍｍｏｌ）のピリジン０．２５ｍｌ溶液に塩化ｐ−トルエンスルホニル７．０ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）を加え、１５５分間攪拌した。反応液に塩化ｐ−トルエンスルホニル６．５ｍｇ（０．０３４ｍｍｏｌ）を加え、５時間攪拌した後、塩化ｐ−トルエンスルホニル７．２ｍｇ（０．０３８ｍｍｏｌ）を加え、一夜放置した。塩化ｐ−トルエンスルホニルをさらに５．３ｍｇ（０．０２７ｍｍｏｌ）加え、２時間３０分間攪拌した。反応溶液に水２ｍｌを加え、酢酸エチルで３回抽出した。有機層を水で３回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−（２−（４−メチルベンゼンスルホニルオキシ）エチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−３））６．３ｍｇを得た（収率３８％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５７（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７３（ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９６（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２７−２．４０（ｍ），２．４５（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3 −Ｐｈ），２．４５−２．５２（ｍ，２Ｈ），３．３７（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），３．９６−４．０８（ｍ，３Ｈ，Ｈ−３とＣＨ2 ＯＴｓ），４．７１（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），５．１７−５．２２（ｍ，２Ｈ，Ｈ−２２とＨ−２３），５．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６），５．７２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７），７．３３（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ），７．７８（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｐｈ−Ｈ）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．５，１３．２，１６．３，２２．７，２６．３，２６．９，２７．５，３２．８，３８．６，３８．８，３９．３，４０．０，４０．４，４１．９，４２．３，４３．４，５２．７，５４．３，５５．１，６５．５，６９．２，７２．９，９１．０，１１５．３，１２２．１，１２７．９，１２８．４，１２９．８，１３３．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
６８４（１．２，Ｍ+ ），６７２（７．５），６４２（６．２），５７２（１１），５４０（１００），５１０（６４）
【００９０】
実施例６〔（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−４））の製造〕（第６工程）
【００９１】
【化１９】
水素化リチウムアルミニウム１．０ｍｇ（０．０２８ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．１ｍｌ）溶液を１５分間、加熱還流した。室温に戻した水素化リチウムアルミニウムのテトラヒドロフラン溶液に実施例５で得られた（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−（２−（４−メチルベンゼンスルホニルオキシ）エチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−３））６．３ｍｇ（０．００９ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．２ｍｌ）溶液を加え、６５分間、加熱還流した。反応液を室温まで戻した後、水素化リチウムアルミニウム７．０ｍｇ（０．１８ｍｍｏｌ）を加え、さらに３０分間、加熱還流した。反応液を０℃に冷却し、水０．５ｍｌとテトラヒドロフラン０．５ｍｌの混合液を加えた。反応液に１Ｎ−塩酸及び酢酸エチルを加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水で３回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−４））２．１ｍｇを得た（収率４４％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６１（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７５（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２３（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．５６（ｍ），３．３７（ｓ，３Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ3 ），３．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．７２（ｓ，２Ｈ，メトキシメチル基のＯＣＨ2 Ｏ），５．２５−５．３９（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−２２とＨ−２３），５．７４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
５１４（２．５，Ｍ+ ），４９６（５），４８２（８．１），４６４（１２），４５２（７２），４３４（１００）
【００９３】
実施例７〔（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−（２−ヨードエチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−３））の製造〕（第５工程）
【００９４】
【化２０】
０℃に冷却した実施例４で得られた（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−ヒドロキシエチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−２））１９．８ｍｇ（０．０３７ｍｍｏｌ）、トリフェニルホスフィン１９．５ｍｇ（０．７３ｍｍｏｌ）及びイミダゾール７．１ｍｇ（０．１０ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（０．４ｍｌ）溶液にヨウ素１４．２ｍｇ（０．０５５ｍｍｏｌ）を加え、１時間攪拌した。反応混合物に酢酸エチル１ｍｌ、水１ｍｌを加え酢酸エチルで抽出した。有機層をチオ硫酸ナトリウム水溶液、水でそれぞれ洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−（２−ヨードエチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−３））１３．３ｍｇを得た（収率５６％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６３（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．８０（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，Ｈ−２１），０．９５（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２６−１．８４（ｍ），１．９１−２．１８（ｍ，７Ｈ），２．２４−３．７８（ｍ，２Ｈ），２．５１−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．７１−２．７６（ｍ，１Ｈ），２．９５（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＨ2 Ｉ），３．２２（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．５，４．３Ｈｚ，ＣＨ2 Ｉ），３．３７（ｓ，３Ｈ，−ＯＣＨ3 ），３．７８（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．７１（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ2 Ｏ），５．２６（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１５．２，８．８Ｈｚ，Ｈ−２３），５．５８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６，２．８Ｈｚ，Ｈ−６），５．４８（ｄｔ，Ｊ＝１５．１，５．５Ｈｚ，Ｈ−２４），５．７８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６，２．６Ｈｚ，Ｈ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．０，１２．６，１３．９，１６．２，２０．８，２０．９，２２．９，２７．３，２９．３，３８．１，３８．５，３８．６，４０．０，４０．５，４２．３，４３．６，４７．０，５２．２，５４．６，６５．５，７２．９，１１５．２，１２２．１，１３０．５，１３４．４，１３５．８，１４１．３
ＭＳ ｍ／ｚ：
６４０（５．８，Ｍ+ ），５７８（５９），５６０（１００），５０４（４１），２６７（６４）
【００９６】
実施例８〔（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−４））の製造〕（第６工程）
【００９７】
【化２１】
実施例７で得られた（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−（２−ヨードエチル）−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−３））２０．７ｍｇ（０．０３２ｍｍｏｌ）のジメチルスルホキシド（０．４ｍｌ）溶液に水素化ホウ素ナトリウム４．１ｍｇ（０．１１ｍｍｏｌ）を加え、１時間４０分間攪拌した。反応液に水素化ホウ素ナトリウム２．２ｍｇ（０．０５８ｍｍｏｌ）を更に加え、１時間攪拌した。反応混合物に水１ｍｌを加え、酢酸エチルで抽出した。水層に食塩水０．５ｍｌを加え、さらに酢酸エチルで抽出した。得られた有機層を水で５回洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−４））１２．１ｍｇを得た（収率７３％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．１６（ｍ），２．３４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１３．３Ｈｚ），２．５１−２．５６（ｍ，１Ｈ），２．６９−２．７３（ｍ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０２−４．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３０−５．４５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−２３とＨ−２４），５．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．６，２．１Ｈｚ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
５１４（３．８，Ｍ+ ），４８２（１４），４６５（１２），４５２（７６），４３４（１００）
【００９９】
実施例９〔（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｓ−（Ｉ））の製造〕（第７工程）
【０１００】
【化２２】
実施例６で得られた（２２Ｓ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｓ−（II−４））５．９ｍｇ（０．００３３ｍｍｏｌ）の９５％エタノール０．２ｍｌ溶液にｐ−トルエンスルホン酸１水和物６．７ｍｇ（０．０３５ｍｍｏｌ）を加え、１５分間加熱還流した。反応溶液をトリエチルアミンで中和した後、溶媒を減圧留去した。残渣に酢酸エチル１ｍｌ及び水１ｍｌを加え、酢酸エチルで３回抽出し、有機層を水で２回洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β，２５−トリオール（Ｓ−プロビタミンＤ）３．４ｍｇを得た（収率６３％）。なお、得られたＳ−プロビタミンＤの物理化学的性質は、以下のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６２（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７４（ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８４（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２７−２．７０（ｍ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．２８−５．４２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−７，Ｈ−２２とＨ−２３），５．７３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）
ＭＳ ｍ／ｚ：
４７０（１９，Ｍ+ ），４５２（１００），４３４（４２），２９７（２６），２７９（３６），２２７（２６），１３７（３５）
ＵＶ（λｍａｘ，９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２９４，２８２，２７１，２６２，２０４
【０１０２】
【化２３】
次いで、氷水で冷却したＳ−プロビタミンＤ３．１６６ｍｇ（６．７３×１０-3ｍｍｏｌ）のベンゼン１５０ｍｌ、エタノール２０ｍｌの混合溶液にアルゴンガスを１５分間バブリングし、溶存酵素を除去した。１００Ｗ高圧水銀ランプをｖｙｃｏｌ ｆｉｌｔｅｒを通して３分間照射した。反応溶液を濃縮し、セファデックスＬＨ−２０（クロロホルム：ヘキサン：メタノール＝７０：３０：０．７、以下も同様）で精製し、（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ3 （Ｓ−プレビタミンＤ）１．２５５ｍｇ（ＵＶ（λｍａｘ）：２５８ｎｍ）を得た。これを遮光下室温で２週間放置した後、溶媒を留去し、セファデックスＬＨ−２０で精製し、（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｓ−（Ｉ））０．８４ｍｇを得た。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５３（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７４（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８３（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），１．２４と１．２５（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．３４（ｍ），２．６０（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２Ｈｚ），２．８４（ｂｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ），４．２２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．６，４．３Ｈｚ，Ｈ−１），５．００（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１９），５．２８−５．４２（ｍ，３Ｈ，Ｈ−２３，Ｈ−２４とＨ−１９），６．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ，Ｈ−７），６．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，Ｈ−６）
ＭＳ ｍ／ｚ：
４５２（４５，Ｍ−ＭｅＯＨ），４３７（４７），４１６（２８），３６８（３５），２３６（７８），１３７（５８），９７（７７）
ＵＶ（λｍａｘ，９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２６３
【０１０４】
実施例１０〔（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｒ−（Ｉ））の製造〕（第７工程）
【０１０５】
【化２４】
実施例８で得られた（２２Ｒ）−２０−エピ−２２−エチル−２５−メトキシメトキシ−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β−ジオール（Ｒ−（II−４））８ｍｇ（０．０１５ｍｍｏｌ）の９５％エタノール（０．３ｍｌ）溶液に、ｐ−トルエンスルホン酸１水和物６．８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）を加え、１５分間加熱還流した。反応液を室温に戻し、トリエチルアミンで中和した後、エタノールを留去した。残渣を酢酸エチル、食塩水に溶解し、酢酸エチルで抽出した。有機層を食塩水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２４，２４−ジホモコレスタ−５，７，２３−トリエン−１α，３β，２５−トリオール（Ｒ−プロビタミンＤ）６．６ｍｇを得た（収率９０％）。なお、得られたＲ−プロビタミンＤの物理化学的性質は、以下のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．６４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７７（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８０（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），０．９５（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１９），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２５−２．１６（ｍ），２．３１−２．３７（ｍ，１Ｈ），２．５１−２．５７（ｍ，１Ｈ），２．７０−２．７１（ｍ，１Ｈ），３．７７（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１），４．０４−４．１０（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），５．３１−５．４５（ｍ，３Ｈ，Ｈ−６，Ｈ−２３とＨ−２４），５．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，２．３）
ＵＶ（λｍａｘ，９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２９３，２８２，２７１
【０１０７】
【化２５】
次いで、氷水で冷却したＲ−プロビタミンＤ１６．８ｍｇ（０．０３６ｍｍｏｌ）のベンゼン１５０ｍｌ、エタノール２０ｍｌ混合溶液に、アルゴンガスを２０分間バブリングし、溶存酵素を除去し、実施例９と同様にして、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシプレビタミンＤ3 （Ｒ−プレビタミンＤ）７．３１ｍｇを得た。これを９５％エタノール１ｍｌに溶解し、遮光下室温で２週間放置した。溶媒を留去し、セファデックスＬＨ−２０で精製し、（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （Ｒ−（Ｉ））３．９７ｍｇを得た（収率２４％）。得られた化合物の物理化学的性質は、下記のとおりであった。
1 Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
０．５４（ｓ，３Ｈ，Ｈ−１８），０．７６（ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，Ｈ−２１），０．８１（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，エチル基のＣＨ3 ），１．０９−１．１８（ｍ），１．２２（ｓ，６Ｈ，Ｈ−２６とＨ−２７），１．２６−１．７７（ｍ），１．８９−２．１３（ｍ，８Ｈ），２．３１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，６．６Ｈｚ），２．６０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，３．３Ｈｚ），２．８３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．１，３．８Ｈｚ），４．２１−４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−３），４．２３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．４，４．３Ｈｚ，Ｈ−１），５．００（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１９），５．２８−５．４４（ｍ，３Ｈ，Ｈ−１９，Ｈ−２３とＨ−２４），６．０２（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６又はＨ−７），６．３８（ｄ，１Ｈ，Ｈ−６又はＨ−７）
13Ｃ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ） δ：
１２．２，１２．６，１４．１，２１．１，２２．２，２３．６，２６．６，２７．８，２９．１，２９．３，３９．６，４０．２，４２．８，４３．６，４５．３，４６．０，４７．３，５２．８，５６．２，６６．８，７０．８，７１．１，１１１．８，１１７．０，１２５．０，１３０．５，１３４．３，１４７．６
ＭＳ ｍ／ｚ：
４７０（１５，Ｍ+ ），４５２（１００），４１６（４４），２９７（３４），２７９（３８），１３４（５９），９５（４５）
ＵＶλｍａｘ（９５％ＥｔＯＨ，ｎｍ）：
２６４
【０１０９】
試験例１〔ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体との結合性試験〕
実施例９で得られた（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ａ）及び実施例１０で得られた（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ｂ）のウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体との結合能を測定した。
【０１１０】
即ち、化合物Ｉ−Ａ、化合物Ｉ−Ｂの段階的希釈溶液（２、４、８、１６、３２、６３、１２５、２５０、５００、５０００ｐｇ／５０μｌエタノール溶液）の各々に、ウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体（（株）ヤマサ製）溶液（５００μｌリン酸緩衝液）を添加し、撹拌した後、室温で１時間プレインキュベイションした。各々にトリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （４．８５ＴＢｑ／ｍｍｏｌ）１０６７２ｄｐｍ／５０μｌエタノール溶液を加え、撹拌し、４℃で一夜放置した後、ＤＣＣ（デキストランコーテッドチャコール）懸濁液（（株）ヤマサ製）を加え、攪拌し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と結合していない試料（遊離型）を吸着させた。
【０１１１】
反応混合物を遠心分離（３０００ｒｐｍ）することにより、ＤＣＣを分離し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と結合している試料（結合型）を遊離型から分離（ＢＦ分離）した。上清５００μｌを採り、シンチレーションカウンターにて放射活性を測定し、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体に結合しているトリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 の割合を求めて、トリチウムラベルした１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 の５０％が１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と結合する時の被験化合物の濃度（ＥＤ50値）を求めた。
【０１１２】
対照化合物として、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 を用いて同様の試験を行い、該化合物のＥＤ50値を求め、これを１とした時の被験化合物の結合活性（相対活性）を求めた。その結果を表１に示す。
【０１１３】
【表１】
なお、表１中の対照化合物、化合物Ｉ−Ａ及び化合物Ｉ−Ｂは、以下の化合物を示す。
対照化合物：１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
化合物Ｉ−Ａ：（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
化合物Ｉ−Ｂ：（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3
【０１１５】
表１に示された結果から、化合物Ｉ−Ａ及び化合物Ｉ−Ｂは、表１に示された結果から、いずれもウシ胸腺１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 受容体と高い結合活性を有することがわかる。また、ラットを用いた血中カルシウム上昇作用も弱い。
【０１１６】
以上の結果から、本発明の２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、血中カルシウム上昇作用がさほど高くなく、安全性により優れるという優れた性質を有することがわかる。
【０１１７】
試験例２〔一過性の遺伝子導入法を用いた遺伝子転写活性評価〕
実施例９で得られた（２０Ｓ，２２Ｓ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ａ）及び実施例１０で得られた（２０Ｓ，２２Ｒ）−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモ−１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 （化合物Ｉ−Ｂ）の一過性の遺伝子導入法を用いた遺伝子転写活性を測定した。
【０１１８】
一過的な遺伝子導入は、以下のとおりに行った。即ち、サルＣＶ−１ ｃｅｌｌｓ／ｇａｌ−ｈＶＤＲ細胞を培地（培地条件：ＤＭＤＭ１０％ＦＢＳ）で培養し（培養条件：３７℃、５％ＣＯ2 ）、各ウェル毎にリン酸カルシウム法を用いて下記プラスミドのトランスフェクションを行った。各ウェルあたりに使用したＤＮＡ量としては、ｐＣＭＸ−ＧＡＬ−ＶＤＲ（酵母ＧＡＬ４蛋白質のＤＮＡ結合ドメインとヒトＶＤＲのリガンド結合ドメインのキメラ蛋白質の発現ベクター）３０ｎｇ、ｐＧＡＬ４−ＴＫ−ＬＵＣ（ＧＡＬ４蛋白質の結合サイトを持つルシフェラーゼレポーター遺伝子を含有するプラスミド）１５０ｎｇ、ｐＣＭＸ−βＧＡＬ（トランスフェクション効率補正用のβ−ガラクトシダーゼ発現プラスミド）３５０ｎｇ及びｐＧＥＭ４（ＤＮＡ量を補正するためのキャリアプラスミド）２２０ｎｇを用いた。
【０１１９】
リン酸カルシウムとの共沈殿とした前記ＤＮＡを前記細胞に加え、６時間培養後、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）で２回細胞を洗浄して、沈殿を除去した。沈殿に新鮮な培地を加える際に、段階的希釈濃度（１０-7、１０-8、１０-9、１０-10 、１０-11 Ｍ）を有する化合物Ｉ−Ａ、化合物Ｉ−Ｂ又は対照として１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3 を加え、３６時間培養した後、細胞をＰＢＳで洗浄し、ＬＹＳＩＳ ｂｕｆｆｅｒで溶解させ、これを１００μｌの細胞抽出液とした。このうち２０μｌを用いてルシフェラーゼ活性を蛍光法により測定し、また、５０μｌを用いてＯＮＰＧ（ｏ−ニトロフェニル−β−Ｄ−ガラクトプラノシド）による発色反応を指標として、β−ガラクトシダーゼ活性を測定した。各ウェル毎に得られたルシフェラーゼ活性をβ−ガラクトシダーゼ活性で補正した。この結果を表２に示す。
【０１２０】
【表２】
表２に示された結果から、一過性の遺伝子導入法を用いた遺伝子転写活性に関して、特に化合物Ｉ−Ｂは対照化合物の５０倍という強い活性を有することがわかる。
【０１２２】
【発明の効果】
本発明の式（Ｉ）で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体は、高いビタミンＤ受容体結合活性を有し、かつ安全性に優れたものであるので、副甲状腺機能低下症、副甲状腺機能亢進症、骨軟化症、骨粗鬆症等のカルシウム代謝の欠陥症、乾癬等の皮膚疾患及び骨髄性白血病、乳ガンに代表される悪性腫瘍等の細胞分化機能に異常をきたした疾患の治療に有用なカルシウム代謝改善剤として好適に使用しうるものである。
Claims (3)
- 式（Ｉ）：
で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体。 - 式（II）：
で表される２０−エピ−２２−置換メチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモプロビタミンＤ誘導体。 - 式（Ｉ）：
で表される２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンＤ誘導体を有効成分として含有してなるカルシウム代謝改善剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06956398A JP3882027B2 (ja) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | ２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンｄ誘導体及びその合成中間体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06956398A JP3882027B2 (ja) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | ２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンｄ誘導体及びその合成中間体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11246520A JPH11246520A (ja) | 1999-09-14 |
| JP3882027B2 true JP3882027B2 (ja) | 2007-02-14 |
Family
ID=13406367
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06956398A Expired - Lifetime JP3882027B2 (ja) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | ２０−エピ−２２−エチル−２３，２４−デヒドロ−２４，２４−ジホモビタミンｄ誘導体及びその合成中間体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3882027B2 (ja) |
-
1998
- 1998-03-03 JP JP06956398A patent/JP3882027B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH11246520A (ja) | 1999-09-14 |
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