JP3723023B2 - 逆転写酵素阻害活性を有する化合物および逆転写酵素阻害剤 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、逆転写酵素阻害活性を有する化合物および該化合物を含有する逆転写酵素阻害剤に関する。より詳細には、本発明は、逆転写酵素阻害活性を有するウルシオール系化合物および該化合物を含有する逆転写酵素阻害剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年、後天性免疫不全症候群（ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｓｙｎｄｒｏｍｅ，ＡＩＤＳ）やヒト成人Ｔ細胞白血病（ｈｕｍａｎａｄｕｌｔ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ，ＨＡＬＴ）が世界的に広まり、これらの予防法や治療法の確立が急務とされている。
後天性免疫不全症候群はヒト免疫不全ウィルス（ｈｕｍａｎ ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ ｖｉｒｕｓ，ＨＩＶ）によって発症し、ヒト成人Ｔ細胞白血病はヒトＴ細胞白血病ウィルス（ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｌｅｕｋｅｍｉａ ｖｉｒｕｓ）によって発症することが知られている。これらのウィルスは、ＲＮＡをＤＮＡに変換する逆転写酵素を有することを特徴とするレトロウィルスである。
このため、これらのレトロウィルスに存在する逆転写酵素の活性を阻害することによって、ウィルスによるＡＩＤＳ等の発症を防止する研究が種々なされてきた。その結果、今日までに、逆転写酵素阻害活性を有するさまざまな物質が開発されている。例えば、アジドチミジン、ジデオキシシチジン、ジデオキシノシンが逆転写酵素阻害活性を有するＡＩＤＳ治療薬として認可されている。しかしながら、これらの治療薬は製造コストが高く、副作用が強いという問題がある。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明は、逆転写酵素阻害活性を有する新規化合物を見出すことによって、低毒性で作用が強い逆転写酵素阻害剤を提供することを解決すべき課題とした。また、本発明は、該化合物の誘導体を見出すことによって、多様な逆転写酵素阻害剤を提供することも解決すべき課題とした。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、天然物由来のウルシオール系化合物の中に強力な逆転写酵素阻害活性を有する化合物があることを見出し、本発明を提供するに至った。
すなわち、本発明は、下記一般式（１）で表される化合物を提供する。
【化６】

（上式において、Ｒは下記式（３ａ）または（３ｂ）で表される構造を有する。）
【化７】

【０００６】
本発明は、一般式（１）で表される化合物を含有する逆転写酵素阻害剤および機能性食品も提供する。
【０００７】
【発明の実施の態様】
以下において、本発明の一般式（１）で表される化合物および逆転写酵素阻害剤について詳細に説明する。
【００１１】
Ｒは、上記式（３ａ）および（３ｂ）で表される構造を有する。
式（３ａ）の幾何異性体の中では、−（ＣＨ＝ＣＨ）₃−の３つの二重結合が順にＥ，Ｅ，Ｚである化合物とＥ，Ｚ，Ｚである化合物が好ましく、特に後者の化合物が好ましい。また、式（３ｂ）の幾何異性体の中では、−（ＣＨ＝ＣＨ）₃−の３つの二重結合が順にＥ，Ｚ、Ｅである化合物とＥ，Ｅ，Ｚである化合物が好ましく、特に後者の化合物が好ましい。
【００１３】
一般式（１）で表される本発明の化合物の製造方法は特に制限されない。したがって、天然物から抽出などの手段により取得したものであってもよいし、当業者に公知の合成法を組み合わせて合成したものであってもよい。また、天然物から抽出した成分を公知の合成法により変換して一般式（１）で表される化合物を得てもよい。いずれの方法により取得した化合物であっても、一般式（１）で表される構造を有する限り本発明の範囲に包含される。
【００１４】
一般式（１）で表される化合物を天然物から取得する場合は、ウルシの抽出物を利用することが有効である。ウルシの中にはウルシオールと呼ばれる３−アルキルカテコール類が含まれていることが知られているが、これらの３−アルキルカテコール類を取得してヒドロキシ基を導入することにより一般式（１）の化合物を得ることができる。また、ウルシの中には、一般式（１）で表される化合物自体も含まれていることが本発明者らによって初めて見出されたため、ウルシから抽出して精製するだけで一般式（１）で表される化合物を取得することもできる。この方法により一般式（１）で表される化合物を取得する方法は、後述する実施例の記載から把握しうる。
【００１５】
一般式（１）で表される化合物は、高い逆転写酵素阻害活性を有する。また、高い活性を有していながら、毒性が低いという特徴も有する。このため、一般式（１）で表される化合物は逆転写酵素阻害剤の活性成分として極めて有用である。本発明は、このような観点から一般式（１）で表される化合物を含有する逆転写酵素阻害剤も提供する。
【００１６】
本発明の逆転写酵素阻害剤は、ＨＩＶなどのレトロウィルスが関与する疾患の治療や予防に有効に用いることができる。また、本発明の逆転写酵素阻害剤は、レトロウィルス感染後の発病を抑制または遅延するための医薬として用いることもできる。さらに、本発明の逆転写酵素阻害剤は、これらの作用を目的とした機能性食品として使用することもできる。
【００１７】
本発明の逆転写酵素阻害剤の形態は特に制限されず、医薬として用いる場合には経口的または非経口的に投与することが可能である。例えば、直腸投与、鼻内投与、頬側投与、舌下投与、膣内投与、筋肉内投与、皮下投与、静脈内投与を行なうことが可能である。中でも、本発明の逆転写酵素阻害剤は、経口投与、皮下投与または経皮投与するのが好ましい。
【００１８】
経口投与に適した製剤として、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤などを挙げることができ、非経口投与に適した製剤として、注射剤、点滴剤、坐剤、吸入剤、経皮吸収剤、経粘膜吸収剤、貼付剤などを挙げることができる。注射剤は、静脈注射、筋肉注射、皮下注射、点滴などのいずれに用いるものであってもよい。本発明の逆転写酵素阻害剤は、特に経口用製剤、注射剤、貼付剤のいずれかであるのが好ましい。
【００１９】
本発明の逆転写酵素阻害剤には、必要に応じて薬理学的および製剤学的に許容しうる添加物を添加することができる。例えば、乳糖、Ｄ−マンニトール、トウモロコシデンプン、結晶セルロース等の賦形剤；カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤または崩壊補助剤；ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の結合剤；タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤；ポリエチレングリコール等の基剤；白糖、酸化チタン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース等のコーティング剤；食塩、ブドウ糖、グリセリン等の等張化剤；色素；希釈剤；溶解剤または溶解補助剤；ｐＨ調節剤；安定化剤；噴射剤；粘着剤；湿潤剤などを使用することができる。
【００２０】
これらの添加剤を適宜組み合わせて使用することによって、本発明の逆転写酵素阻害剤にさまざまな付加的機能を持たせることができる。例えば、必要に応じて活性成分が徐放されるように設計することができる。また、体内の必要な個所において活性成分が集中的に放出されるように設計することもできる。このような徐放性製剤やドラッグデリバリーシステムは、周知の方法にしたがって設計のうえ製造することができる。
さらに、本発明の逆転写酵素阻害剤には、本発明の活性成分以外の逆転写酵素阻害活性物質を組み合わせて使用することもできる。
【００２１】
本発明の逆転写酵素阻害剤の投与量は、治療または予防の目的、患者の性別、体重、年齢、疾患の種類や程度、剤型、投与経路、投与回数などの種々の条件に応じて適宜決定する。例えば、経口投与する場合には、活性成分を０．０１〜１，０００ｍｇ／ｋｇ体重／日で、一日一回から数回に分けて投与することができるが、この範囲に限定されるものではない。
本発明の活性成分は、各種食品に含ませて機能性食品にすることもできる。例えば、紅茶、清涼飲料水、ジュース、あめ、澱粉質食品、各種加工食品等に活性成分を約０．１〜９９重量％の範囲内で含有させることができる。
【００２２】
【実施例】
以下に実施例および試験例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する。以下の実施例に示す材料、試薬、割合、操作等は、本発明の精神から逸脱しない限り適宜変更することができる。したがって、本発明の範囲は以下に示す具体例に制限されるものではない。
【００２３】
（実施例）
ウルシ（Rhus verniciflua）を粉末状にして室温のジエチルエーテル中に１２時間浸漬した。その後、ろ過してウルシを除去し、ろ液を蒸留して抽出物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー（溶出液はヘキサン：酢酸エチル＝２：３）によって、ＴＬＣ（シリカゲル６０Ｆ₂₅₄、ヘキサン：酢酸エチル＝２：３）でＲｆ＝０．４３〜０．６８の成分を収集した。収集した成分を、さらにシリカゲルクロマトグラフィー（溶出液はヘキサン：酢酸エチル＝４：１）によって精製し、ＴＬＣ（シリカゲル６０Ｆ₂₅₄、ヘキサン：酢酸エチル＝２：３）でＲｆ＝０．５１の成分を収集した。収集した成分を、ＨＰＬＣ（ＰＥＧＡＳＩＬ−ＯＤＳ、溶出液は４８％ＣＨ₃ＣＮ＋０．０５％酢酸、流速１．０ｍｌ／ｍｉｎ）でさらに精製し、溶出時間２８分（Ｕ−１）、溶出時間３０分（Ｕ−２）、溶出時間３３分（Ｕ−３）、溶出時間３５分（Ｕ−４）の４種類を分取した。それぞれを２８％アンモニア水でｐＨ７に中和し、溶媒を留去することにより４種類の精製物を得た。
【００２４】
Ｕ−１の精製物として得られた結晶の機器分析を行った結果、図１に示すＬＣ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、Ｄ₃Ｏ）が得られた。また、Ｕ−２の精製物として得られた結晶の機器分析を行った結果、図２に示す¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤ₃Ｃｌ）と、図３に示す¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤ₃Ｃｌ）が得られた。また、結晶（Ｎａ塩）のＬＣ−ＭＳでは３５３にピークが観測され、該結晶をアセチル化した化合物のＬＣ−ＭＳでは４１９にピークが観測された。また、Ｕ−３、Ｕ−４の精製物として得られた結晶の機器分析を行った結果、Ｕ−３については図４に示すＬＣ ¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、Ｄ₃Ｏ）、Ｕ−４については図５に示す¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（３００ＭＨｚ、ＣＤ₃Ｃｌ）が得られた。
これらをはじめとする分析結果から、Ｕ−１、Ｕ−２、Ｕ−３、Ｕ−４の精製物として得られた結晶は、以下で表される構造を有することが判明した。
【００２５】
【化１３】

【００２６】
（試験例）
実施例で得られた４種類の精製物と対照用としてエピガロカテキンガレートを試料として、以下の手順で逆転写酵素阻害活性試験を行った。
種々の濃度の試料溶液３０μｌに、反応用混合液１０μｌ（０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液ｐＨ８．０、０．０１ＭＤＴＴ、０．１Ｍ塩化カリウム、０．００６Ｍ塩化マグネシウム、２μｇ／ｍｌＰｏｌｙ（Ａ）ｐ（ｄＴ）₁₅、０．３７μＭ３Ｈ−ｄＴＴＰ、１０μＭｄＴＴＰ、グリセロール／水＝２５／１６）、０．００１Ｕ／ｍｌのＨＩＶ−１逆転写酵素液１０μｌ、緩衝液（５０ｍＭトリス−塩酸ｐＨ８．０、１０ｍＭＤＴＴ、２００ｍＭ塩化カリウム、５０ｖ／ｖ％グリセロール）１０μｌを添加して全量を５０μｌとした。攪拌して遠心分離した後、３７℃で３０分間インキュベートした。その後、氷冷しながらＥＤＴＡ２０μｌを添加し、攪拌して遠心分離した。反応液５０μｌをイオン交換セルロースフィルターにスポットし、乾燥後に５％リン酸水素二ナトリウム（８回）、水（２回）、エタノール（２回）、ジエチルエーテル（２回）で洗浄した。イオン交換セルロースフィルターをシンチレーターに入れて、液体シンチレーションカウンターによって測定した。
反応液における試料濃度を０．０１〜１００μｇ／ｍｌの範囲で変化させて、阻害率が５０％のときの濃度をＩＣ５０とした。各試料のＩＣ５０は以下の表に示すとおりであった。また、Ｕ−１からＵ−４の各試料の毒性はいずれも低いことが確認された。
【００２７】
【表１】

【００２８】
【発明の効果】
一般式（１）で表される化合物は低毒性で優れた逆転写酵素阻害活性を示す。このため、一般式（１）で表される化合物を含有する本発明の逆転写酵素阻害剤は、ＡＩＤＳなどのレトロウィルスが関与する疾患の予防および治療に有用である。
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例の試料（Ｕ−１の精製物）のＬＣ ¹Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図２】 実施例の試料（Ｕ−２の精製物）の¹Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図３】 実施例の試料（Ｕ−２の精製物）の¹³Ｃ ＮＭＲスペクトルである。
【図４】 実施例の試料（Ｕ−３の精製物）のＬＣ ¹Ｈ ＮＭＲスペクトルである。
【図５】 実施例の試料（Ｕ−４の精製物）の¹Ｈ ＮＭＲスペクトルである。

Claims (6)

1. 下記一般式（１）で表される化合物。
   

   

   （上式において、Ｒは下記式（３ａ）または（３ｂ）で表される構造を有する。）
   

   
2. 下記のいずれかの構造を有する化合物。
   

   
3. 請求項１に記載の化合物を少なくとも１種類含有することを特徴とする逆転写酵素阻害剤。
4. 請求項２に記載の化合物を少なくとも１種類含有することを特徴とする逆転写酵素阻害剤。
5. 請求項１に記載の化合物を少なくとも１種類含有することを特徴とする機能性食品。
6. 請求項２に記載の化合物を少なくとも１種類含有することを特徴とする機能性食品。

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